JP4894119B2

JP4894119B2 - Fatty acid-containing liposome dispersion

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Publication number: JP4894119B2
Application number: JP2001292889A
Authority: JP
Inventors: 直也前川; 善郎中野
Original assignee: NOF Corp
Current assignee: NOF Corp
Priority date: 2001-09-26
Filing date: 2001-09-26
Publication date: 2012-03-14
Anticipated expiration: 2021-09-26
Also published as: JP2003095926A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、溶剤を全く使用せずに製造した、脂肪酸を含有するリポソーム分散液、ならびにその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
リポソームは、脂質二分子膜からなり、その内部に水層を有する閉鎖小胞体であり、脂質二分子膜内に油溶性物質を含有させることもできる。リポソームは、同一分子内に親水性と疎水性基とを有する両親媒性の物質を水に懸濁することによって形成されるべシクルである。
【０００３】
リポソームは、広くバイオサイエンスの基礎および応用の分野で利用および検討されている。前者の例としては、生体膜モデルとしての脂質の物性や膜の透過性研究、脂質と膜タンパク質との相互作用や膜面上で起こる諸反応の解析などが挙げられる。後者の例としては、医薬品、化粧品などの分野に広く用いられており、例えば、薬物キャリアや遺伝子キャリアとして、抗ガン剤、血管造影剤、化粧品などのドラッグデリバリーシステムへの応用が注目されている。特に薬剤の新しい投与方法に関わるものとして、近年最も注目を集めているものの一つである。薬剤キャリアとしてリポソームを使う場合の特色は、主に次の二点である：
（１）生体膜に大量に存在するリン脂質、コレステロールなどを主成分とするため、毒性が少なく異物として働く可能性が少ない；および
（２）水溶性薬物は内水相に、脂溶性薬物は二分子膜内に取り込まれるため、脂溶性、水溶性いずれの薬物もカプセル化できる。
【０００４】
リポソーム分散液の製造方法としては、超音波分散法、溶液法などが知られている。このうち、最も一般的なものが超音波分散法である。これはフラスコなどの容器の表面に脂質の薄膜を作り、これに水性担体に溶解させた薬物を加え、超音波をかけることにより、薄膜をこの水性担体中に分散させる製造方法である。しかし、この方法では超音波分散時に発熱し、薬物の分解あるいは失活が起こることが避けられない。
【０００５】
溶液法は、脂質を一旦グリセリン、プロピレングリコールなどの多価アルコールに溶かし込み、これに生理食塩水などの水性担体に溶解させた薬物を徐々に加えてリポソームを作成する方法である。この方法では、加熱工程は脂質をアルコールに溶かし込む際の脂質を溶解する工程のみであり、直接薬物に熱を与えないという長所があるが、得られたリポソームの粒子径が大きく、かつ粒子の大きさのバラツキも大きいという欠点があった。
【０００６】
不飽和脂肪酸を含有しないリポソーム分散液を製造する方法としては、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジーVol.13、238頁(1965)、特開昭６０−１５５１０９号公報、特開昭６１−５０１８９７号公報、および特開平２−１２９１１９号公報に記載の方法が知られている。
【０００７】
不飽和脂肪酸を含有するリポソーム分散液の製造方法としては、特公昭６３−５４６８４号公報、特公平１−１７３７９号公報、特開平１−１８０２４５号公報、特開平１−２３３２１９号公報、および特開平４−５４１３２号公報に記載の方法が知られている。しかし、これらの方法では、リポソーム分散液の製造に溶剤を使用しなければならないため、脱溶剤の設備が必要となり、また脱溶剤を行っても、試料がペースト状となるため、溶剤の除去には限界がある。
【０００８】
これら以外にも、いくつかの方法が報告されている。特開昭６２−９５１３４号公報に記載の方法は、リン脂質とリン脂質に対して１〜１５重量％の親水性非イオン界面活性剤とを同時に水に分散させることを特徴とするリポソームの製造法である。しかし、該方法では、リポソームの製造にヘキサンを使用して均一溶解させるかもしくは８０℃にて攪拌する必要があるため、残存溶剤や不飽和脂肪酸の劣化が心配される。
【０００９】
特開平７−２８５８２７号公報には、リン脂質を用いて脂質二分子膜を調製し、高級脂肪酸を添加して複合化し、この複合化脂質二分子膜をリポソームの形態とする方法が記載されている。しかし、該方法では温度を８０〜９０℃に攪拌しながら加温溶解し、そこに高級脂肪酸を添加して含有させなければならず、この条件では不飽和脂肪酸の劣化が考えられる。しかも、リポソーム分散夜中に１０重量％しか不飽和脂肪酸を含有することができない。
【００１０】
また、特開昭６３−１１９８４７号公報には、アシルグリセロールおよび／または高級脂肪酸の少量に溶解した膜成分物質および膜構造の中へ包含させるべき物質と、膜で囲まれた小胞内部の空間に包含させるべき物質を含有するｐＨ４〜１０の水性溶液の少量とを混合し、温度１５〜６５℃、窒素ガス雰囲気下で乳化して、生成する安定なエマルジョンに大容量の水性溶液を上記ｐＨを保つようにさらに加えて攪拌することにより、リポソームを調製する方法が記載されている。しかし、該方法では高級脂肪酸の少量にリン脂質を溶解するため、リン脂質が少量しか溶解しない。高級脂肪酸の量やリン脂質の量について具体的な記載がなく、またアシルグリセロールを使用することにより、天然に存在する組成に近づけるといった容易に類推できる手法である。
【００１１】
特開平４−２０８２１６号公報には、リポソーム膜構成物質を、その良溶媒である多価アルコールに溶解し、次いで貧溶媒である別の多価アルコールを添加し、充分に混合することによりリポソーム膜構成物質とそれらの多価アルコールから成るラメラ液晶を形成させ、次に、これに水もしくはリポソーム膜構成物質に応じて選択された適宜の物質の水溶液を、ラメラ液晶が壊れないように緩徐に滴下しながら練り込むことにより膨潤したラメラ液晶を形成させ、次いで上記の水または水溶液を連続的に滴下することを特徴とする微細なリポソームの調製法が記載されている。しかし、水溶液を緩徐に滴下したり、連続的に滴下する必要があり、生産性の面から工業的な大量生産には適していない。
【００１２】
特表平４−５０３８０７号公報には、糖タンパク質、クエン酸塩緩衝液、アルキレングリコールを含有させることにより、リポソーム分散液を製造する方法が記載されている。しかし、該方法では、糖タンパク質、クエン酸塩緩衝液、アルキレングリコールを含有させる必要があり、工業的には極めて不利である。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
以上、述べてきたように、従来知られているリポソーム分散夜の製造方法では、溶剤を使用せずに、リポソーム分散液中で不飽和脂肪酸をリン脂質に対して１０重量％以上含有させることができなかった。そのため、溶剤を全く使用せずに製造された、リン脂質と不飽和脂肪酸とをリポソーム中に含有するリポソーム分散液の開発が望まれている。
【００１４】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明は、溶剤を全く使用せずに、脂肪酸をリン脂質に対して１０重量％以上リポソーム膜中に含有するリポソーム分散液を提供することを目的とする。
【００１５】
本発明者らは、簡易な操作で脂肪酸を含有させたリポソーム分散液を製造し得る方法を開発すべく鋭意研究を重ねるうち、リン脂質、グリセリン、水およびリン脂質に対してある一定の範囲の重量となるようにリゾリン脂質を均一に分散し、この分散液に脂肪酸を均一に分散させ、リポソーム化を行うことにより、簡易な操作で脂肪酸をリポソーム膜中に含有させたリポソーム分散夜を得られるという事実を見出した。
【００１６】
すなわち、本発明は、（ａ）水１００重量部、グリセリン０．２〜１６重量部、リン脂質、およびリゾリン脂質を混合して分散させる工程、（ｂ）次いで炭素数８〜２２の脂肪酸を分散させて粗分散液を得る工程、および（ｃ）該得られた粗分散液にリポソーム化処理を施す工程、によって得られる脂肪酸含有リポソーム分散液を提供し、ここで、該リン脂質、該リゾリン脂質、および該炭素数８〜２２の脂肪酸からなる混合脂質の合計量は１〜３５重量部であり、該混合脂質中の該リン脂質と該リゾリン脂質との重量比は８：１〜２００：１であり、そして該混合脂質中の該炭素数８〜２２の脂肪酸は１０〜３５重量％の範囲である。このリポソーム分散液は、無溶剤系で製造されるため、残存溶剤を含まず、さらに溶剤除去時の加熱による不飽和脂肪酸の劣化もない。
【００１７】
炭素数８〜２２の脂肪酸の量が、混合脂質に対して３５重量％を超えると、炭素数８〜２２の脂肪酸をリポソーム分散液中に含有できず、不溶物が生成する。
【００１８】
リゾリン脂質の量が、リン脂質に対して１／２００より少ないと炭素数８〜２２の脂肪酸をリポソーム分散液中に含有できず、不溶物が生成し、１／８を超えると、リポソームの凝集、粒径拡大が起こり、経時安定性が悪くなる。
【００１９】
さらに、グリセリンの量が水１００重量部に対して１６重量部より多くてもまたは０．２重量部より少なくても、炭素数８〜２２の脂肪酸をリポソーム分散液中に含有できず、不溶物が生成する。本発明はかかる知見に基づき完成されたものである。
【００２０】
したがって、本発明はまた、脂肪酸を含有させたリポソーム分散液の製造方法に関し、該方法は、（ａ）水１００重量部、グリセリン０．２〜１６重量部、リン脂質、およびリゾリン脂質を混合して分散させる工程、（ｂ）次いで炭素数８〜２２の脂肪酸を分散させて粗分散液を得る工程、および（ｃ）該得られた粗分散液にリポソーム化処理を施す工程、を含み、該リン脂質、該リゾリン脂質、および該炭素数８〜２２の脂肪酸からなる混合脂質の合計量は１〜３５重量部であり、該混合脂質中の該リン脂質と該リゾリン脂質との重量比は８：１〜２００：１であり、そして該混合脂質中の該炭素数８〜２２の脂肪酸は１０〜３５重量％の範囲である。
【００２１】
本発明の方法によれば、リポソーム膜中に１０重量％以上炭素数８〜２２の脂肪酸を含有させた、溶剤を含まないリポソーム分散液を、無溶剤系で容易に製造し得る。したがって本発明の方法は極めて有利な方法である。
【００２２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２３】
本発明のリポソーム分散液を製造するにあたって、まず、水、グリセリン、リン脂質、およびリゾリン脂質を混合して分散させる。混合および分散は、どのような方法を用いてもよいが、例えば、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌することによって行われ得る。上記４成分は、水とグリセリンとを混合した後に、リン脂質およびリゾリン脂質を加えて分散させてもよいし、あるいは４成分を同時に混合してもよい。リン脂質とリゾリン脂質とは、別々に分散させてもよいし、予め混合したものを分散させてもよい。
【００２４】
グリセリンは、水１００重量部に対して０．２〜１６重量部を混合される。このとき、最終的に得られるリポソーム分散夜中のグリセリンの配合量は、０．２〜１０重量％である。好ましくは０．５〜５重量％、より好ましくは１〜３重量％である。
【００２５】
リン脂質およびリゾリン脂質の量は、以下に述べる炭素数８〜２２の脂肪酸と合わせた混合脂質の量として１〜３５重量部である。混合脂質の配合量が、１重量部より少ないと、リポソーム分散液の保存安定性が悪く、３５重量部より多いと、リポソーム分散液が均一に分散しない。
【００２６】
本発明においてリン脂質とは、分子内にリン酸基とアシル基および／またはアルキル基からなる疎水基を２個以上とを有するものをいい、例えば、以下の化合物が挙げられるが、これらに限定されない：ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、スフィンゴミエリン（ＳＰＭ）、カルジオリピン、大豆レシチン、コーンレシチン、綿実油レシチン、卵黄レシチンなどの天然レシチン；これらの水素添加レシチン；およびこれらのリン脂質にポリエチレングリコールやアミノグリカン類を導入したリン脂質誘導体など。あるいは、これらのリン脂質の１種または２種以上の混合物などが挙げられる。これらのうち、大豆レシチン、卵黄レシチン、水素添加大豆レシチン、および水素添加卵黄レシチンが好ましい。
【００２７】
最終的に得られるリポソーム分散液中のリン脂質の配合量は、１〜２０重量％であり、好ましくは２〜１０重量％、より好ましくは２〜６重量％である。配合量が２０重量％を超えるときはリポソーム分散液の安定性が低下する。
【００２８】
本発明に用いられるリゾリン脂質とは、上記リン脂質のグリセロールの１位または２位のいずれか１つの脂肪酸が切れて生じたものであり、例えば、以下の化合物が挙げられるが、これらに限定されない：リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、大豆リゾレシチン、コーンリゾレシチン、綿実油リゾレシチン、卵黄リゾレシチンなどの天然リゾレシチン；および水素添加リゾレシチンなど。あるいは、これらのリゾリン脂質の１種または２種以上の混合物などが挙げられる。
【００２９】
最終的に得られるリポソーム分散夜中のリゾリン脂質の配合量は、０．１〜０．５重量％であり、好ましくは０．１５〜０．４重量％である。配合量が０．１重量％より少ないとリポソーム粗分散液が均一に分散せず、０．５重量％より多いとリポソームの粒径が大きくなり、リポソーム分散液の安定性が低下する。
【００３０】
次に、上記分散液に、さらに炭素数８〜２２の脂肪酸を分散させる。ここでのも分散も、上記と同様に行われ得る。
【００３１】
本発明に用いられる脂肪酸は、炭素数８〜２２の飽和脂肪酸または不飽和脂肪酸であり、例えば、以下の化合物が挙げられるが、これらに限定されない：カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデシル酸、ラウリン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデカン酸、アラキン酸、ヘンエイコサン酸、べへン酸などの直鎖飽和カルボン酸；および２−ラウロレイン酸、リンデル酸、トウハク酸、５−ラウロレイン酸、１１−ラウロレイン酸、ツズ酸、５−ミリストレイン酸、ミリストレイン酸、２−パルミトレイン酸、７−パルミトレイン酸、ｃｉｓ−９−パルミトレイン酸、ｔｒａｎｓ−９−パルミトレイン酸、ペトロセリン酸、ペトロセエライジン酸、ｃｉｓ−７−オクタデセン酸、ｔｒａｎｓ−７−オクタデセン酸、ｃｉｓ−８−オクタデセン酸、ｔｒａｎｓ−８−オクタデセン酸、オレイン酸、エライジン酸、バセニン酸、ゴンドイン酸、ｔｒａｎｓ−ゴンドイン酸、エルシン酸、ブラシン酸、リノール酸、リノエライジン酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、リノレン酸、リノレンエライジン酸、プソイドエレオステアリン酸、α−パリナリン酸、β−パリナリン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などの直鎖不飽和カルボン酸。好ましくは、生体内に含まれており、生理機能を有する、リノール酸、オレイン酸、エイコサぺンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸である。
【００３２】
最終的に得られるリポソーム分散夜中の脂肪酸の配合量は、０．０２〜５重量％であり、好ましくは０．０５〜３重量％、より好ましくは０．１〜２重量％である。配合量が５重量％を超えると、リポソーム分散液の安定性が低下する。
【００３３】
リポソームを形成する混合脂質中のリン脂質と脂肪酸との重量比は、８：１〜２００：１であり、好ましくは１０：１〜１００：１である。
【００３４】
リポソームを形成する混合脂質中のリン脂質と脂肪酸との重量比は、９：１〜２：１の範囲が良く、特に３：１〜２：１の重量比においてリポソーム分散液が安定化する。
【００３５】
さらに、混合脂質中の脂肪酸の配合量は、１０〜３５重量％であり、好ましくは、１５〜２５重量％である。
【００３６】
上記のように、本発明においては、リポソーム膜を構成する混合脂質を、リン脂質およびリゾリン脂質を分散した後、さらに脂肪酸を分散させることが好ましい。この順で分散させることによって、脂肪酸を混合脂質に対して１０重量％以上、リポソーム膜中に含有させることができる。
【００３７】
また、本発明のリポソーム分散液には、必要に応じて防腐剤、酸化防止剤などを、本発明のリポソーム分散液の安定性を損なわない範囲で適宜配合することができる。これらの薬剤は、どの段階で配合されてもよいが、好ましくは、脂肪酸と同時に分散され得る。
【００３８】
本発明に用いられる酸化防止剤としては、特に限定されないが、ビタミンＥおよびその誘導体、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸エステルなどが挙げられ、ビタミンＥが好ましい。これらの酸化防止剤は、１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。リポソーム分散夜中の酸化防止剤の配合量は、０．００２〜０．５重量％であり、好ましくは０．０１〜０．２重量％である。配合量が０．００２重量％より少ないとリポソーム分散夜の酸化安定性が低下し、０．５重量％より多いと、リポソーム分散夜の安定性が低下する。
【００３９】
上記脂質含有粗分散液に、リポソーム化処理を施すことによって、リポソーム分散液を得る。
【００４０】
本発明において「リポソーム化」とは、リポソーム分散液を調製することをいい、通常リポソーム化に用いられる装置を使用することにより行う。本発明において、リポソーム化の方法としては、例えば、以下の方法が挙げられる：（１）分散液を１５０ＭＰａ以上の圧力下でジェット流として噴射し、噴射口に対して配置された壁面に該ジェット流を衝突させて、該分散液を上記ジェット流の方向と実質的に対向する方向に反転させることによってリポソーム化を行う方法、（２）増圧ポンプにより圧力波形がフラットで定圧に加圧された試料を、超高圧でチャンバー内に入れ、細管部を高速通過させる際に強力な剪断力を受けさせ、さらに合流部で加速された流体どうしが正面から衝突することにより強い衝撃を受けさせ、拡大部で圧力降下により強力なキャビテーションを受けさせることによって、リポソーム化を行う方法（マイクロフルイダイザー）、（３）真空乳化機を用いてリポソーム化を行う方法、（４）高圧ホモミキサーを用いてリポソーム化を行う方法、（５）超音波乳化機を用いてリポソーム化を行う方法。本発明においては、特に（１）および（２）の方法が好ましい。（１）の方法で使用する装置は、超高速ジェット流乳化機であり、例えば、市販の微粒子化装置であるＢ．Ｅ．Ｅ．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＬｔｄ．製のＤｅＢＥＥ２０００が好ましい。（２）の方法で使用する装置としては、市販の微粒子化装置であるみづほ工業株式会社製のマイクロフルイダイザーが好ましい。これらの装置により、脂質含有粗分散液を処理することにより、リポソーム分散液を製造することができる。
【００４１】
【実施例】
以下、実施例に基づき本発明を更に詳しく説明するが、特にここに挙げた製造方法だけに限定されるものではない。
【００４２】
なお、粒子径の測定は下記の条件で行った。
粒度分布分析装置：ＮＩＣＯＭＰＭｏｄｅｌ３７０（ＰａｃｉｆｉｃＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）
測定モード：ＳｏｌｉｄＰａｒｔｉｃｌｅｓ（個数換算）
積算時間：１０分以上
Ｒｅｓｉｄｕａｌ：２．０以下
【００４３】
（製造例１）
精製水９４ｇに、グリセリン２ｇ、未水添大豆レシチン４ｇ、およびリゾレシチン０．１ｇを加えて混合および分散させ、さらにリノール酸１ｇおよびビタミンＥ０．１ｇを添加し、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液に、ＤｅＢＥＥ２０００にて、圧力２００００ｐｓｉで５回微粒子化処理を施し、リポソーム化した。その結果、平均粒子径が１５０ｎｍのリノール酸２０重量％含有リポソーム分散液を得た。
【００４４】
（製造例２）
精製水９４ｇに、グリセリン２ｇ、未水添大豆レシチン４ｇ、およびリゾレシチン０．３ｇを加えて混合および分散させ、さらにオレイン酸２ｇおよびビタミンＥ０．０２ｇを添加し、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液を、マイクロフルイダイザーにて、圧力７５０ｋｇ／ｃｍでリポソーム化した。その結果、平均粒子径が１７０ｎｍのオレイン酸３１．７重量％含有リポソーム分散液を得た。
【００４５】
（製造例３）
精製水９４ｇに、グリセリン２ｇ、未水添大豆レシチン４ｇ、およびリゾレシチン０．５ｇを加えて混合および分散させ、さらにエイコサペンタエン酸１．５ｇおよびビタミンＥ０．０５ｇを添加し、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液を、真空乳化機にて、攪拌速度８０００ｒｐｍ、温度６０℃、高真空下（１ｍｍＨｇ）１時間、リポソーム化した。その結果、平均粒子径が１７０ｎｍのエイコサぺンタエン酸２５重量％含有リポソーム分散液を得た。
【００４６】
（製造例４）
精製水９４ｇに、グリセリン２ｇ、未水添大豆レシチン４ｇ、およびリゾレシチン０．２ｇを加えて混合および分散させ、さらにα−リノレン酸０．５ｇおよびビタミンＥ０．２ｇを添加し、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液に、ＤｅＢＥＥ２０００にて、圧力２００００ｐｓｉで５回微粒子化処理を施し、リポソーム化した。その結果、平均粒子径が１９０ｎｍのα−リノレン酸１１重量％含有リポソーム分散液を得た。
【００４７】
（比較例１）
精製水９４ｇに、未水添大豆レシチン４ｇおよびグリセリン２ｇを加えて分散させ、さらにリノール酸１ｇおよびビタミンＥ０．１ｇを添加し、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液には不溶物が存在した。この脂質含有粗分散液をＤｅＢＥＥ２０００にて、圧力２００００ｐｓｉで５回微粒子化処理を施した。得られた分散液には、沈殿物および浮遊物が認められたことから、リポソーム分散液が完全にはできていないものと判断された。
【００４８】
（比較例２）
精製水９４ｇに、未水添大豆レシチン４ｇ、リゾレシチン０．６ｇ、およびグリセリン２ｇを加えて分散させ、さらにリノール酸１ｇおよびビタミンＥ０．１ｇを添加し、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液に、ＤｅＢＥＥ２０００にて、圧力２００００ｐｓｉで５回微粒子化処理を施し、２００ｎｍ以下の粒子径を有するリノール酸含有リポソーム分散液を得た。しかし、このリポソーム溶液を室温で２週間放置すると、粒径が１２００ｎｍとなり、リポソームが凝集していた。
【００４９】
（比較例３）
精製水９４ｇに、未水添大豆レシチン４ｇおよびグリセリン２ｇを加えて分散させ、さらにオレイン酸１ｇおよびビタミンＥ０．１ｇを添加し、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液には不溶物が存在した。この脂質含有粗分散液に、マイクロフルイダイザーにて、圧力７５０ｋｇ／ｃｍで乳化処理を施した。得られた分散液には、沈殿物および浮遊物が認められたことから、リポソーム分散液が完全にはできていないものと判断された。
【００５０】
（比較例４）
精製水９４ｇに、未水添大豆レシチン４ｇおよびグリセリン２ｇを加えて分散させ、さらにエイコサペンタエン酸１ｇおよびビタミンＥ０．１ｇを添加し、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液には不溶物が存在した。この脂質含有粗分散液に、真空乳化機にて、攪拌速度８０００ｒｐｍ、温度６０℃、高真空下（１ｍｍＨｇ）１時間、攪拌処理を施し、１５００ｎｍの粒子径を有する脂質含有分散液が得られた。リポソーム分散液が完全にはできていないものと判断された。
【００５１】
（比較例５）
精製水９４ｇに、グリセリン２ｇ、未水添大豆レシチン４ｇ、リゾレシチン０．１ｇ、リノール酸１ｇ、およびビタミンＥ０．１ｇを添加し、ポリトロンを用い２００００ｒｐｍで１０分間攪拌し、脂質含有粗分散液を調製した。この脂質含有粗分散液には不溶物が存在した。この脂質含有粗分散液をＤｅＢＥＥ２０００にて、圧力２００００ｐｓｉで５回微粒子化処理を施した。得られた分散液には、沈殿物および浮遊物が認められたことから、リポソーム分散液が完全にはできていないものと判断された。
【００５２】
【発明の効果】
本発明により、脂肪酸を含有させたリポソーム分散液を容易な方法で得ることができる。本発明のリポソーム分散液は、溶剤が含まれないため、医薬品分野、化粧品分野での利用に適している。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a liposomal dispersion containing a fatty acid produced without using any solvent, and a method for producing the same.
[0002]
[Prior art]
The liposome is a closed endoplasmic reticulum composed of a lipid bilayer membrane having an aqueous layer therein, and an oil-soluble substance can also be contained in the lipid bilayer membrane. Liposomes are vesicles formed by suspending an amphiphilic substance having hydrophilic and hydrophobic groups in the same molecule in water.
[0003]
Liposomes are widely used and studied in the fields of bioscience basics and applications. Examples of the former include physical properties of lipid as a biological membrane model and permeability of membrane, analysis of interaction between lipid and membrane protein, and various reactions occurring on the membrane surface. Examples of the latter are widely used in fields such as pharmaceuticals and cosmetics. For example, as drug carriers and gene carriers, application to drug delivery systems such as anticancer agents, angiographic agents, and cosmetics has attracted attention. . In particular, it is one of the most attracting attention in recent years as a method related to new administration methods of drugs. There are two main features when using liposomes as drug carriers:
(1) Mainly composed of phospholipids, cholesterol, etc. present in large quantities in biological membranes, so it is less toxic and less likely to work as a foreign substance; and (2) Water-soluble drugs are in the inner aqueous phase, and fat-soluble drugs are Since it is incorporated into the bilayer membrane, it can encapsulate both fat-soluble and water-soluble drugs.
[0004]
As a method for producing a liposome dispersion, an ultrasonic dispersion method, a solution method and the like are known. Of these, the most common is the ultrasonic dispersion method. This is a manufacturing method in which a thin film of lipid is formed on the surface of a container such as a flask, a drug dissolved in an aqueous carrier is added thereto, and ultrasonic waves are applied to disperse the thin film in the aqueous carrier. However, this method inevitably generates heat during ultrasonic dispersion and causes degradation or inactivation of the drug.
[0005]
The solution method is a method in which a lipid is once dissolved in a polyhydric alcohol such as glycerin or propylene glycol, and then a drug dissolved in an aqueous carrier such as physiological saline is gradually added to prepare liposomes. In this method, the heating step is only a step of dissolving the lipid when the lipid is dissolved in alcohol, and there is an advantage that heat is not directly applied to the drug. However, the particle size of the obtained liposome is large, and the particle size is reduced. There was a drawback that the variation in size was large.
[0006]
As a method for producing a liposome dispersion containing no unsaturated fatty acid, Journal of Molecular Biology Vol. 13, page 238 (1965), JP-A-60-155109, JP-A-61-501897 The methods described in Japanese Patent Laid-Open No. 2-129119 and Japanese Patent Laid-Open No. 2-129119 are known.
[0007]
As a method for producing a liposome dispersion containing an unsaturated fatty acid, JP-B-63-54684, JP-B-1-17379, JP-A-1-180245, JP-A-1-233219, and JP-A-1-233219 are disclosed. A method described in Japanese Patent Publication No. 4-54132 is known. However, in these methods, a solvent must be used for the production of the liposome dispersion, so that a solvent removal facility is required, and even if the solvent removal is performed, the sample becomes a paste, so that the solvent can be removed. There are limits.
[0008]
In addition to these, several methods have been reported. In the method described in JP-A-62-95134, a liposome is produced by simultaneously dispersing phospholipid and 1 to 15% by weight of a hydrophilic nonionic surfactant with respect to the phospholipid in water. Is the law. However, in this method, since it is necessary to use hexane for the liposome production to be uniformly dissolved or stirred at 80 ° C., there is a concern about deterioration of the residual solvent and unsaturated fatty acid.
[0009]
Japanese Patent Application Laid-Open No. 7-285827 describes a method of preparing a lipid bilayer using phospholipids, adding a higher fatty acid to form a complex, and making the complex lipid bilayer into a liposome form. Yes. However, in this method, the temperature must be dissolved while stirring at 80 to 90 ° C., and a higher fatty acid must be added and contained therein. Under these conditions, deterioration of the unsaturated fatty acid can be considered. Moreover, only 10% by weight of unsaturated fatty acids can be contained during the night of liposome dispersion.
[0010]
JP-A-63-119847 discloses a membrane component substance dissolved in a small amount of acylglycerol and / or a higher fatty acid, a substance to be included in the membrane structure, and a space inside the vesicle surrounded by the membrane. Is mixed with a small amount of an aqueous solution having a pH of 4 to 10 containing a substance to be included in the mixture, emulsified in a nitrogen gas atmosphere at a temperature of 15 to 65 ° C., and a large volume of the aqueous solution is added to the above-mentioned stable emulsion. A method for preparing liposomes by further adding and stirring so as to maintain the temperature is described. However, in this method, since phospholipid is dissolved in a small amount of higher fatty acid, only a small amount of phospholipid is dissolved. There is no specific description about the amount of higher fatty acids and the amount of phospholipids, and it is a technique that can be easily analogized by using acylglycerol to bring it closer to a naturally occurring composition.
[0011]
In JP-A-4-208216, a liposome membrane is prepared by dissolving a liposome membrane-constituting substance in a polyhydric alcohol that is a good solvent, and then adding another polyhydric alcohol that is a poor solvent and mixing them thoroughly. A lamellar liquid crystal composed of the constituent substances and their polyhydric alcohols is formed, and then water or an aqueous solution of an appropriate substance selected according to the liposome membrane constituent substances is slowly added dropwise so that the lamellar liquid crystals are not broken. A method for preparing fine liposomes is described, in which a swollen lamellar liquid crystal is formed by kneading while mixing, and then the above water or aqueous solution is continuously dropped. However, it is necessary to drop the aqueous solution slowly or continuously, which is not suitable for industrial mass production from the viewpoint of productivity.
[0012]
JP-T-4-503807 describes a method for producing a liposome dispersion by containing glycoprotein, citrate buffer, and alkylene glycol. However, in this method, it is necessary to contain glycoprotein, citrate buffer, and alkylene glycol, which is extremely disadvantageous industrially.
[0013]
[Problems to be solved by the invention]
As described above, in the conventionally known method for producing a liposome dispersion night, an unsaturated fatty acid is contained in the liposome dispersion liquid in an amount of 10% by weight or more based on the phospholipid without using a solvent. could not. Therefore, it is desired to develop a liposome dispersion containing phospholipid and unsaturated fatty acid produced in a liposome without using any solvent.
[0014]
[Means for Solving the Problems]
Therefore, an object of the present invention is to provide a liposome dispersion containing a fatty acid in a liposome membrane in an amount of 10% by weight or more based on phospholipid without using any solvent.
[0015]
As the inventors of the present invention have intensively studied to develop a method capable of producing a liposome dispersion containing fatty acids by a simple operation, a certain range of phospholipids, glycerin, water and phospholipids has been obtained. By dispersing lysophospholipid uniformly so that the weight is increased, and dispersing the fatty acid uniformly in this dispersion, and making it into a liposome, a liposome-dispersed night in which the fatty acid is contained in the liposome membrane can be obtained by a simple operation. I found the fact that.
[0016]
That is, the present invention includes (a) a step of mixing and dispersing 100 parts by weight of water, 0.2 to 16 parts by weight of glycerin, phospholipid, and lysophospholipid, and (b) dispersing a fatty acid having 8 to 22 carbon atoms. To obtain a crude dispersion, and (c) subjecting the obtained crude dispersion to a liposomal treatment, a fatty acid-containing liposome dispersion obtained, wherein the phospholipid, lysophospholipid And the total amount of the mixed lipid composed of the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms is 1 to 35 parts by weight, and the weight ratio of the phospholipid to the lysophospholipid in the mixed lipid is 8: 1 to 200: 1. , and the and the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms in the mixed lipid is in the range of 10 to 35 wt%. Since this liposome dispersion is produced in a solvent-free system, it does not contain residual solvent, and there is no degradation of unsaturated fatty acids due to heating during solvent removal.
[0017]
When the amount of the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms exceeds 35% by weight with respect to the mixed lipid, the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms cannot be contained in the liposome dispersion liquid and an insoluble matter is generated.
[0018]
When the amount of lysophospholipid is less than 1/200 of the phospholipid, fatty acids having 8 to 22 carbon atoms cannot be contained in the liposome dispersion, and insoluble matter is formed. , Particle size expansion occurs, and the stability over time deteriorates.
[0019]
Furthermore, even if the amount of glycerin is more than 16 parts by weight or less than 0.2 parts by weight with respect to 100 parts by weight of water, a fatty acid having 8 to 22 carbon atoms cannot be contained in the liposome dispersion liquid and is insoluble. Produces. The present invention has been completed based on such findings.
[0020]
Therefore, the present invention also relates to a method for producing a liposome dispersion containing a fatty acid, which comprises (a) mixing 100 parts by weight of water, 0.2 to 16 parts by weight of glycerin, phospholipid, and lysophospholipid. And (b) dispersing a fatty acid having 8 to 22 carbon atoms to obtain a coarse dispersion, and (c) subjecting the obtained coarse dispersion to a liposome treatment, The total amount of the mixed lipid consisting of phospholipid, the lysophospholipid, and the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms is 1 to 35 parts by weight, and the weight ratio of the phospholipid to the lysophospholipid in the mixed lipid is 8 : 1 to 200: 1, and the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms in the mixed lipid is in the range of 10 to 35 wt%.
[0021]
According to the method of the present invention, a solvent-free liposome dispersion containing 10% by weight or more of a fatty acid having 8 to 22 carbon atoms in the liposome membrane can be easily produced in a solvent-free system. Therefore, the method of the present invention is a very advantageous method.
[0022]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
[0023]
In producing the liposome dispersion of the present invention, first, water, glycerin, phospholipid, and lysophospholipid are mixed and dispersed. Any method may be used for mixing and dispersing, and for example, the mixing and dispersion may be performed by stirring for 10 minutes at 20000 rpm using a polytron. The above four components may be dispersed by adding phospholipid and lysophospholipid after mixing water and glycerin, or may be mixed simultaneously. The phospholipid and lysophospholipid may be dispersed separately, or those previously mixed may be dispersed.
[0024]
Glycerin is mixed in an amount of 0.2 to 16 parts by weight with respect to 100 parts by weight of water. At this time, the blending amount of glycerin in the liposome dispersion night finally obtained is 0.2 to 10% by weight. Preferably it is 0.5-5 weight%, More preferably, it is 1-3 weight%.
[0025]
The amount of phospholipid and lysophospholipid is 1 to 35 parts by weight as the amount of mixed lipid combined with the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms described below. When the blended amount of the mixed lipid is less than 1 part by weight, the storage stability of the liposome dispersion is poor, and when it is more than 35 parts by weight, the liposome dispersion is not uniformly dispersed.
[0026]
In the present invention, the phospholipid means one having a phosphoric acid group and two or more hydrophobic groups composed of an acyl group and / or an alkyl group in the molecule. Examples thereof include, but are not limited to, the following compounds: Not: phosphatidylcholine (PC), phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylserine (PS), phosphatidylinositol (PI), phosphatidylglycerol (PG), phosphatidic acid (PA), sphingomyelin (SPM), cardiolipin, soy lecithin, corn Natural lecithins such as lecithin, cottonseed oil lecithin, egg yolk lecithin; these hydrogenated lecithins; and phospholipid derivatives obtained by introducing polyethylene glycol or aminoglycans into these phospholipids. Alternatively, one or a mixture of two or more of these phospholipids can be used. Of these, soybean lecithin, egg yolk lecithin, hydrogenated soybean lecithin, and hydrogenated egg yolk lecithin are preferred.
[0027]
The amount of phospholipid in the finally obtained liposome dispersion is 1 to 20% by weight, preferably 2 to 10% by weight, more preferably 2 to 6% by weight. When the blending amount exceeds 20% by weight, the stability of the liposome dispersion is lowered.
[0028]
The lysophospholipid used in the present invention is produced by cutting off any one fatty acid at the 1-position or 2-position of glycerol of the phospholipid, and examples thereof include, but are not limited to, the following compounds: : Lysophosphatidylcholine (LPC), lysophosphatidylethanolamine (LPE), lysophosphatidylserine (LPS), lysophosphatidylinositol (LPI), lysophosphatidylglycerol (LPG), lysophosphatidic acid (LPA), soybean lysolecithin, corn lysolecithin, cottonseed oil Natural lysolecithin such as lysolecithin, egg yolk lysolecithin; and hydrogenated lysolecithin. Alternatively, one or a mixture of two or more of these lysophospholipids can be mentioned.
[0029]
The final amount of the lysophospholipid blended in the liposome-dispersed night is 0.1 to 0.5% by weight, preferably 0.15 to 0.4% by weight. When the blending amount is less than 0.1% by weight, the liposome coarse dispersion is not uniformly dispersed. When the blending amount is more than 0.5% by weight, the liposome particle size is increased, and the stability of the liposome dispersion is lowered.
[0030]
Next, a C8-22 fatty acid is further disperse | distributed to the said dispersion liquid. Here, the dispersion can be performed in the same manner as described above.
[0031]
The fatty acid used in the present invention is a saturated or unsaturated fatty acid having 8 to 22 carbon atoms, and examples thereof include, but are not limited to, the following compounds: caprylic acid, pelargonic acid, capric acid, undecyl acid, Linear saturated carboxylic acids such as lauric acid, tridecanoic acid, myristic acid, pentadecanoic acid, palmitic acid, margaric acid, stearic acid, nonadecanoic acid, arachidic acid, heneicosanoic acid, behenic acid; , Succinic acid, 5-laurolenic acid, 11-laurolenic acid, tuzuic acid, 5-myristoleic acid, myristoleic acid, 2-palmitoleic acid, 7-palmitoleic acid, cis-9-palmitoleic acid, trans-9-palmitolein Acid, petroselinic acid, petroseleidic acid, cis-7-o Tadecenoic acid, trans-7-octadecenoic acid, cis-8-octadecenoic acid, trans-8-octadecenoic acid, oleic acid, elaidic acid, bassenic acid, gondoic acid, trans-gondoic acid, erucic acid, brush acid, linoleic acid, Linoleic acid, α-eleostearic acid, β-eleostearic acid, linolenic acid, linolenic elaidic acid, pseudoeleostearic acid, α-parinaric acid, β-parinaric acid, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, docosahexaene Linear unsaturated carboxylic acids such as acids. Preferred are linoleic acid, oleic acid, eicosapentaenoic acid, and docosahexaenoic acid that are contained in the living body and have physiological functions.
[0032]
The amount of fatty acid blended in the finally obtained liposome-dispersed night is 0.02 to 5% by weight, preferably 0.05 to 3% by weight, more preferably 0.1 to 2% by weight. If the blending amount exceeds 5% by weight, the stability of the liposome dispersion is lowered.
[0033]
The weight ratio of phospholipid and fatty acid in the mixed lipid forming the liposome is 8: 1 to 200: 1, preferably 10: 1 to 100: 1.
[0034]
The weight ratio of the phospholipid to the fatty acid in the mixed lipid forming the liposome is preferably in the range of 9: 1 to 2: 1. In particular, the liposome dispersion is stabilized at a weight ratio of 3: 1 to 2: 1.
[0035]
Furthermore, the compounding quantity of the fatty acid in mixed lipid is 10 to 35 weight%, Preferably it is 15 to 25 weight%.
[0036]
As described above, in the present invention, it is preferable to further disperse the fatty acid after dispersing the phospholipid and lysophospholipid in the mixed lipid constituting the liposome membrane. By dispersing in this order, the fatty acid can be contained in the liposome membrane in an amount of 10% by weight or more based on the mixed lipid.
[0037]
Moreover, antiseptic | preservative, antioxidant, etc. can be suitably mix | blended with the liposome dispersion liquid of this invention in the range which does not impair the stability of the liposome dispersion liquid of this invention as needed. These agents may be formulated at any stage, but preferably can be dispersed simultaneously with the fatty acid.
[0038]
Although it does not specifically limit as an antioxidant used for this invention, Vitamin E and its derivative (s), dibutylhydroxytoluene, butylhydroxyanisole, a gallic acid ester etc. are mentioned, Vitamin E is preferable. These antioxidants can be used alone or in combination of two or more. The blending amount of the antioxidant during the night of liposome dispersion is 0.002 to 0.5% by weight, preferably 0.01 to 0.2% by weight. If the blending amount is less than 0.002% by weight, the oxidative stability at night of liposome dispersion is lowered, and if it is more than 0.5% by weight, the stability at night of liposome dispersion is lowered.
[0039]
A liposome dispersion is obtained by subjecting the lipid-containing coarse dispersion to a liposome treatment.
[0040]
In the present invention, “liposomeization” refers to the preparation of a liposome dispersion, which is usually performed by using an apparatus used for liposome formation. In the present invention, examples of the method of liposome formation include the following methods: (1) The dispersion is jetted as a jet stream under a pressure of 150 MPa or more, and the jet is applied to the wall surface arranged with respect to the jet nozzle. (2) A method in which the dispersion is reversed by reversing the dispersion in a direction substantially opposite to the direction of the jet flow, and (2) a pressure waveform is flattened to a constant pressure by a pressure increasing pump. The sample was placed in the chamber under ultra high pressure, subjected to a strong shearing force when passing through the narrow tube part at a high speed, and further subjected to a strong impact by collision of fluids accelerated at the confluence from the front, Method of making liposomes by receiving strong cavitation due to pressure drop in the enlarged part (microfluidizer), (3) Using a vacuum emulsifier Method of performing liposome of, (4) a method of performing liposome using a high pressure homomixer, a method of performing liposome with (5) an ultrasonic emulsifier. In the present invention, the methods (1) and (2) are particularly preferable. The apparatus used in the method (1) is an ultra-high speed jet flow emulsifier, for example, B. which is a commercially available micronizer. E. E. International Ltd. DeBEE2000 made by the company is preferred. As the apparatus used in the method (2), a microfluidizer manufactured by Mizuho Kogyo Co., Ltd., which is a commercially available micronizer, is preferable. By treating the lipid-containing coarse dispersion with these devices, a liposome dispersion can be produced.
[0041]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated in more detail based on an Example, it is not limited only to the manufacturing method specifically mentioned here.
[0042]
The particle size was measured under the following conditions.
Particle size distribution analyzer: NICOMP Model 370 (Pacific Scientific)
Measurement mode: Solid Particles (number conversion)
Integration time: 10 minutes or more Residual: 2.0 or less
(Production Example 1)
To 94 g of purified water, add 2 g of glycerin, 4 g of unhydrogenated soybean lecithin, and 0.1 g of lysolecithin, mix and disperse, add 1 g of linoleic acid and 0.1 g of vitamin E, and stir at 20000 rpm for 10 minutes using Polytron. A lipid-containing crude dispersion was prepared. The lipid-containing crude dispersion was subjected to microparticulation treatment 5 times with DeBEE 2000 at a pressure of 20000 psi to form liposomes. As a result, a liposome dispersion containing 20% by weight of linoleic acid having an average particle size of 150 nm was obtained.
[0044]
(Production Example 2)
2 g of glycerin, 4 g of unhydrogenated soybean lecithin, and 0.3 g of lysolecithin are added to 94 g of purified water, mixed and dispersed, and 2 g of oleic acid and 0.02 g of vitamin E are added, followed by stirring at 20000 rpm for 10 minutes using polytron. A lipid-containing crude dispersion was prepared. This lipid-containing crude dispersion was made into a liposome using a microfluidizer at a pressure of 750 kg / cm. As a result, a liposome dispersion containing 31.7% by weight of oleic acid having an average particle size of 170 nm was obtained.
[0045]
(Production Example 3)
To 94 g of purified water, 2 g of glycerin, 4 g of unhydrogenated soybean lecithin and 0.5 g of lysolecithin are added and mixed and dispersed. Further, 1.5 g of eicosapentaenoic acid and 0.05 g of vitamin E are added, and 10 g at 20000 rpm using polytron. The mixture was stirred for a minute to prepare a lipid-containing crude dispersion. This lipid-containing crude dispersion was made into liposomes with a vacuum emulsifier at a stirring speed of 8000 rpm, a temperature of 60 ° C., and high vacuum (1 mmHg) for 1 hour. As a result, a liposome dispersion containing 25% by weight of eicosapentaenoic acid having an average particle size of 170 nm was obtained.
[0046]
(Production Example 4)
Add 2 g of glycerin, 4 g of unhydrogenated soybean lecithin and 0.2 g of lysolecithin to 94 g of purified water, mix and disperse, add 0.5 g of α-linolenic acid and 0.2 g of vitamin E, and use Polytron at 20000 rpm. The mixture was stirred for 10 minutes to prepare a lipid-containing crude dispersion. The lipid-containing crude dispersion was subjected to microparticulation treatment 5 times with DeBEE 2000 at a pressure of 20000 psi to form liposomes. As a result, a liposome dispersion containing 11% by weight of α-linolenic acid having an average particle size of 190 nm was obtained.
[0047]
(Comparative Example 1)
Add 4 g of unhydrogenated soybean lecithin and 2 g of glycerin to 94 g of purified water, disperse, add 1 g of linoleic acid and 0.1 g of vitamin E, and stir at 20000 rpm for 10 minutes using polytron to prepare a lipid-containing crude dispersion. did. Insoluble matters were present in the lipid-containing crude dispersion. This lipid-containing crude dispersion was subjected to micronization treatment 5 times with DeBEE 2000 at a pressure of 20000 psi. Since precipitates and suspended matters were observed in the obtained dispersion, it was judged that the liposome dispersion was not completely formed.
[0048]
(Comparative Example 2)
To 94 g of purified water, 4 g of unhydrogenated soybean lecithin, 0.6 g of lysolecithin and 2 g of glycerin are added and dispersed. Further, 1 g of linoleic acid and 0.1 g of vitamin E are added, and the mixture is stirred at 20000 rpm for 10 minutes using a polytron. A crude dispersion containing was prepared. This lipid-containing crude dispersion was subjected to micronization treatment at DeBEE 2000 at a pressure of 20000 psi for 5 times to obtain a linoleic acid-containing liposome dispersion having a particle size of 200 nm or less. However, when this liposome solution was allowed to stand at room temperature for 2 weeks, the particle size was 1200 nm, and the liposomes were aggregated.
[0049]
(Comparative Example 3)
Add 4 g of unhydrogenated soybean lecithin and 2 g of glycerin to 94 g of purified water, disperse, add 1 g of oleic acid and 0.1 g of vitamin E, and stir at 20000 rpm for 10 minutes using polytron to prepare a lipid-containing crude dispersion. did. Insoluble matters were present in the lipid-containing crude dispersion. This lipid-containing crude dispersion was emulsified with a microfluidizer at a pressure of 750 kg / cm. Since precipitates and suspended matters were observed in the obtained dispersion, it was judged that the liposome dispersion was not completely formed.
[0050]
(Comparative Example 4)
4 g of unhydrogenated soybean lecithin and 2 g of glycerin are added to 94 g of purified water and dispersed. Further, 1 g of eicosapentaenoic acid and 0.1 g of vitamin E are added, and the mixture is stirred at 20000 rpm for 10 minutes using a polytron. Prepared. Insoluble matters were present in the lipid-containing crude dispersion. This lipid-containing crude dispersion was subjected to a stirring process in a vacuum emulsifier with a stirring speed of 8000 rpm, a temperature of 60 ° C., and a high vacuum (1 mmHg) for 1 hour, to obtain a lipid-containing dispersion having a particle diameter of 1500 nm. . It was judged that the liposome dispersion was not completely formed.
[0051]
(Comparative Example 5)
Prepare 2 g of glycerin, 4 g of unhydrogenated soybean lecithin, 0.1 g of lysolecithin, 1 g of linoleic acid, and 0.1 g of vitamin E to 94 g of purified water, and stir at 20000 rpm for 10 minutes using polytron to prepare a lipid-containing crude dispersion. did. Insoluble matters were present in the lipid-containing crude dispersion. This lipid-containing crude dispersion was subjected to micronization treatment 5 times with DeBEE 2000 at a pressure of 20000 psi. Since precipitates and suspended matters were observed in the obtained dispersion, it was judged that the liposome dispersion was not completely formed.
[0052]
【Effect of the invention】
According to the present invention, a liposome dispersion containing a fatty acid can be obtained by an easy method. Since the liposome dispersion liquid of the present invention does not contain a solvent, it is suitable for use in the pharmaceutical field and cosmetic field.

Claims

(A) a step of mixing and dispersing 100 parts by weight of water, 0.2 to 16 parts by weight of glycerin, phospholipid, and lysophospholipid; (b) then dispersing a fatty acid having 8 to 22 carbon atoms to obtain a coarse dispersion A fatty acid-containing liposome dispersion obtained by a step of obtaining, and (c) a step of subjecting the obtained coarse dispersion to a liposome,
The total amount of the mixed lipid composed of the phospholipid, the lysophospholipid, and the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms is 1 to 35 parts by weight,
The weight ratio of the phospholipid and the lysophospholipids of the mixed lipid 8: 1 to 200: 1, and in the range the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms in the mixed lipid of 10 to 35 wt% is there,
Fatty acid-containing liposome dispersion.

(A) a step of mixing and dispersing 100 parts by weight of water, 0.2 to 16 parts by weight of glycerin, phospholipid, and lysophospholipid; (b) then dispersing a fatty acid having 8 to 22 carbon atoms to obtain a coarse dispersion A method for producing a fatty acid-containing liposome dispersion, comprising the steps of: and (c) subjecting the obtained crude dispersion to a liposome treatment,
The total amount of the mixed lipid composed of the phospholipid, the lysophospholipid, and the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms is 1 to 35 parts by weight,
The weight ratio of the phospholipid and the lysophospholipids of the mixed lipid 8: 1 to 200: 1, and in the range the fatty acid having 8 to 22 carbon atoms in the mixed lipid of 10 to 35 wt% is there,
Method.