JP4885448B2 - 放射性医薬品製剤（ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ） - Google Patents

Description

本願は，２００２年５月３日に出願された米国特許出願第６０／３７７４５４号の一部継続出願である。

本発明は，放射性核種キレート剤を含む放射性医薬品製剤（formulations for radiopharmaceuticals）に関する。

ターゲットされた（targeted）放射性医薬品は，診断対象の画像を改善し，また，治療用の放射性同位体を人体内の部位に選択的に結合あるいは局在化させることにより，対象の部位に伝達する。様々な診断や治療の処置のために，金属放射性核種に結合し，かつ，ターゲティング分子に連結されるキレート剤が，様々な成功の度合いで使用されてきた。このようなキレート剤は，しばしば，４つ以上のドナー原子を取り込んだ部分を有している。かかるドナー原子は，高い親和力を有する放射性核種結合に好適な５員環あるいは６員環を形成する。画像診断剤（diagnostic
imaging agents）に使用される典型的な金属放射性核種は，下記金属の様々な塩化物，酸化物または窒化物中に，^99mTc，⁶⁴Cu，⁶⁷Cu，⁹⁷Ru，¹⁰⁹Pd，¹⁹⁸Au，¹⁹⁹Au，¹¹¹Inを含む。放射線治療の処置に使用される典型的な金属放射性核種は，下記金属の様々な塩化物，酸化物または窒化物中に，¹⁸⁶Re，¹⁸⁸Re，¹¹¹In，¹⁶⁶Ho，¹⁰⁵Rh，¹⁴⁹Pm，¹⁵³Sm，¹⁷⁷Lu，⁹⁰Y，²⁰³Pb，²¹²Pb，および²¹²Biを含む。複数のタイプの分子は，ターゲッティング分子として使用されてきた。かかるターゲティング分子は，モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体およびこれらの断片，タンパク質およびペプチド，特に細胞表面のレセプタに特異的に結合可能なもの（一般にレセプタ結合リガンド（receptor-binding
ligands）と呼ばれる）を含んでいる。ペプチドや，タンパク質に基づくターゲティング剤（targeting agents）を標識化（labeling）するとき，キレート剤も理想的にはペプチドに基づくものであるので，キレート剤とターゲティング分子との複合体（conjugate）は，ペプチド合成技術を用いて合成され得る。例えば，米国特許第５，６６２，８８５号明細書，同第５，７８０，００６号明細書および同第５，９７６，４９５号明細書（これらの文献は，それぞれ，引用により本明細書にそのまま取り込まれている）には，金属放射性核種と結合させるキレート剤が開示されている。かかるキレート剤は，診断対象や治療対象の人体の部位に局在化可能なターゲティング剤に結合され得る。また，このキレート剤は，例えば，^99mTcや^186/188Reのオキソイオン，ジオキソイオンおよびニトリドイオンに結合可能なN₃S立体配置を有するように構造上設計されたペプチド類似体（peptide
analogs）である。さらに，Tcや他の診断用放射性核種および治療用放射性核種の同位体をキレート化するペプチド核が知られている；この研究のほとんどは，NH₂CHRCOOH型の天然アミノ酸由来のペプチドを使用することに着目されてきた。

診断画像における多くの利点にもかかわらず，この分野においては，日常的に，多くの障害に遭遇する。重要な問題の一つは，ターゲットされた放射性医薬品の製造のために有用な製剤の開発である。しばしば遭遇する一つの問題は，所望の複合物の高い収率を保証するために，多くの製剤が，ターゲットされた製剤の製造のための反応において，高濃度のキレート配位子（chelating ligand）を必要とするということである。この製剤は，有意な量の“遊離”キレート配位子を用いる放射性医薬品の製造を提供する。上記キレート配位子は，放射性金属に対してキレート化されてこなかった。多くの処置にとって，この“遊離”リガンドは好ましくない。それゆえ，この遊離リガンドは，さらなる使用の前に，高圧液体クロマトグラフィ（High
Pressure Liquid Chromatography:HPLC）のようなクロマトグラフィ技術に利用する標識化されたリガンドから分離されなければならない。例えば，作用薬（agonist）のようなキレート剤に付着されるターゲティング分子が存在する場合，および上記ターゲティング分子がターゲットレセプタに結合するときに生物学的活性を示す場合において，この分離はしばしば必要である。このような生物学的活性は，診断用の化合物において，また治療用の化合物においても好ましくない。さらに，放射性核種と複合物を形成していないレセプタ結合リガンドは，ターゲットレセプタで，放射性核種と複合物を形成しているリガンドと競争させてもよい。その結果，放射性核種複合物のターゲティングおよび診断上または治療上の特徴が不十分なものとなる。

図１に示された構造を有するターゲットされた放射性医薬品が例として示されている。この複合体の製造に使用されるリガンド（またはターゲットされたキレート配位子）に結合している複合体を形成していないレセプタ（uncomplexed receptor）は，トリペプチドであるN₃Sキレート剤[(N−(Me₂)-Gly-Ser-Cys(Acm))を含む。このキレート剤は，Tc(V)Oと複合物を形成し，その形成工程において，アセトアミドメチル（Acm）保護基を失う。そのキレート剤の配列（sequence）は，Gly-アミノ吉草酸のリンカ（linker）を介して，オクタペプチドターゲティング分子であるボンベシン由来のpGlu-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂のＮ末端に連結される。それから形成されるこのリガンドとTc複合体の双方は，高い親和力をもってガストリン放出ペプチド（Gastrin
Releasing Peptide:GRP）レセプタと結合することで知られる作用薬である。これは，米国特許第６，２００，５４６号明細書に開示されており，本明細書に引用により全体として取り込まれている。この化合物，例えば，Van
de Wieleら著のEuropean Journal of Nuclear Medicine,Vol27,No.11,2000年，p.1694（本明細書に引用により全体として取り込まれている）に記載されている化合物を使用して行われる臨床研究は，以下のプロトタイプ４−バイアルキットを使用して行われる。２−バイアルのそれぞれに対して，１００μｇのリガンドを含むバイアルは，それぞれ，０．１ｍＬの塩化スズ（２ｍＭ），０．１ｍＬのグルコン酸ナトリウム（６０ｍＭ），０．３ｍＬの０．９％塩化ナトリウム水溶液中の１８５０〜２０３５ＭＢｑ（５０〜５５ｍＣｉ）の^99mTcO₄ ^-，および０．５ｍＬの塩化ナトリウム水溶液に添加される。沸騰したオイルバス中で３５分経過後，蓄えられた反応混合物は，ＨＰＬＣ系に注入され，標識化されていないペプチドから標識化されたペプチドを分離するために精製され，その後，末端の殺菌が行われる。このような放射性合成（radiosynthesis）からの全般的な収率は３０％以下（〜３０％）で，精製後の放射化学純度（ＲＣＰ）は９０％超を有している。精製された化合物は，２時間までなら４℃で保存され得る。このような方法は，たとえその化合物の潜在的な臨床の有用性の最初の証拠を提供するのに有用であったとしても，商業的に実行することができない。なぜならば，このような方法は，４−バイアルの凍結したキットを使用し，注入前に余分なリガンドを除去するために，予備のＨＰＬＣ（すなわち，一般的に核医学に利用できない分析手段）が必要となるからである。そして，上記方法は，末端の殺菌を除いては，殺菌された生成物を提供しないからである。さらに，上記方法は，患者に投薬するために，１００ｍＣｉ超の^99mTcO₄ ^-を使用し，溶離剤の発生装置を２時間または２時間未満の時間使用することを必要とし，精製された生成物は，分離後２時間しか使用することができない。

特に，ＨＰＬＣ精製を必要とすることなく，臨床的に使用され得る（例えば，直接注入され得る）本発明の放射性医薬品および他のレセプタが結合しターゲットされた（receptor-binding targeted）放射性医薬品の製造のための製剤を有することは，非常に有利である。本発明は，この必要性および従来における他の問題に取り組んでいる。

本発明による放射性医薬品製剤は，画像診断及び／又は放射線治療に有用であることを特徴とする。ある側面においては，本発明による放射性医薬品製剤は，下記化学式１の構造を有するターゲットされた（targeted）キレート配位子を含むことを特徴とする。

・・・（化学式１）

ここで，上記化学式１において，Ｒ^１およびＲ^２は，互いに無関係に，水素または直鎖型もしくは分岐型である飽和もしくは不飽和の炭素数１〜４のアルキル鎖であってもよい。この場合に，該アルキル鎖は，Ｎ，ＯおよびＳからなる群より選択される１または２のヘテロ原子により選択的に置換され（interrupted），かつ，ハロゲン，ヒドロキシル基，アミノ基，カルボキシル基，炭素数１〜４のアルキル基，アリール基およびＣ（Ｏ）Ｚ基からなる群より選択される少なくとも１の置換基により選択的に置換される。

一方，Ｒ^１およびＲ^２は，互いに共同して，ハロゲン，ヒドロキシル基，アミノ基，カルボキシル基，炭素数１〜４のアルキル基，アリール基およびＣ（Ｏ）Ｚ基からなる群より選択される少なくとも１の置換基により選択的に置換された，飽和または不飽和である５員〜８員の複素環を形成してもよい。

また，Ｒ^３は，水素，−ＣＨ_２ＯＨ，−Ｃ_２Ｈ_４ＯＨまたはｔ−ブチル基である。

また，Ｌは，選択的な連結基であり，Ｚは，ターゲティング分子である。

好ましくは，上記放射性医薬品組成物は，Ｒ^１とＲ^２がともにメチルである組成物を含む。より好ましくは，上記放射性医薬品組成物は，Ｒ^１とＲ^２がともにメチルでありＺがボンベシン類似体である組成物を含み，最も好ましくは，ボンベシン類似体は，引用により全体として本明細書に取り入れられた米国特許第６，２００，５４６号明細書で開示されているような作用薬である。

ターゲットされた放射性医薬品を調製するための多くの従来の組成物とは異なり，本発明の放射性医薬品製剤は，少量のキレート剤とターゲティング分子との複合体（例えば，化学式１で表される化合物）を利用する。実際，好ましい実施形態においては，約２〜約１０μｇのターゲットされた化学式１のキレート配位子を含む本発明の放射性医薬品製剤が提供される。それゆえ，本発明の放射性医薬品製剤によれば，例えば生物学的活性を有するペプチドの投与の結果生ずる不必要な生物学的活性あるいは生理学的な影響という危険を軽減することができる。

本発明の放射性医薬品製剤は，本明細書で詳細に記載される成分（例えば，還元剤，交換リガンド，安定剤，可溶化剤，希釈剤など）をさらに含んでいてもよい。好ましい実施形態において，本発明の製剤は，化合物１，SnCl₂・2H₂O，グルコン酸（ナトリウム塩），ゲンチシン酸（ナトリウム塩），エタノール，および選択的にヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン，または薬剤的に受容可能なこれらの塩を含む。

本発明はまた，本発明の放射性医薬品製剤を含むターゲットされた放射性医薬品の製造のためのキット（kits）を含む。好ましいキットは，複合体を形成していないターゲットされたキレート配位子，還元剤，交換リガンド，安定剤，１またはそれ以上のバイアル（vials）中の可溶化剤，および分離バイアル中の希釈剤を含む。本発明の特に好適なキットは，２つのバイアルを含む。第１のバイアルは，化合物１，SnCl₂・2H₂O，グルコン酸（ナトリウム塩），ゲンチシン酸（ナトリウム塩），および選択的にヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリンを含む。第２のバイアルは，エタノール，および選択的に水及び／又は規定濃度の（normal）生理食塩水を含む。

好適な実施形態において，本発明の放射性医薬品製剤は，再構成（reconstitution）後１５分以内に９０％以上の放射化学純度（RCP）値を有する。別の好適な実施形態において，本発明の放射性医薬品製剤は，再構成後６時間経過時に９０％以上の放射化学純度値を有する。本発明の製剤から製造される放射性医薬品は，あらゆる精製をすることなく，患者（subject）に直接注入されてもよい。さらに，このような放射性医薬品は，室温で製造されてもよい。

本発明の放射性医薬品製剤は，従来の製剤を超える重要な利点を有している。これらの製剤は，従来技術による製剤よりもターゲットされたキレート剤の含量が非常に少ない。実際，本発明の製剤におけるターゲットされたキレート剤の含量は，希釈剤１ｍＬ当たり１０μｇ以下である。好ましくは，本発明の放射性医薬品製剤は，ターゲットされたキレート剤を希釈剤１ｍＬ当たり５μｇ以下含む。最も好ましくは，本発明の放射性医薬品製剤は，希釈剤１ｍＬ当たり約４μｇのターゲットされたキレート剤を含む。このとき，再構成物の総体積は，約０．５ｍＬ〜約１ｍＬであり，最も好ましくは，１．０ｍＬである。特に，本発明は，いかなる精製をすることなく，製造され，患者に投与され得る放射性医薬品組成物を提供する。さらに，本発明の放射性医薬品組成物は，製造（すなわち，再構成）後約１５分経過後に，９０％以上の放射化学純度（ＲＣＰ）を有する。本発明の最も好ましい放射性医薬品組成物は，製造後約６時間経過時においても，９０％以上のＲＣＰを有する。

本発明の放射性医薬品組成物を再構成するのに使用される希釈剤は，水，規定濃度の生理食塩水及び／又はエタノールの任意の組み合わせである。好ましくは，上記希釈剤は，水と規定濃度の生理食塩水とエタノールとの混合物であり，このとき，エタノールの濃度範囲は約２０％〜約４０％（ｖ／ｖ）であり，最も好ましくは約３０％である。再構成後の本発明の製剤のｐＨは，２．８〜４．０であり，最も好ましくは，ｐＨが約３．０である。

本発明の放射性医薬品は，（酸化状態の）放射性核種を還元状態の放射性核種に還元することが可能な還元剤を用いる反応により製造されてもよい。ここで，還元状態の放射性核種は，例えば，スズ源，水素化ホウ素ナトリウム，Cu(I)塩，ホルムアミジンスルフィン酸などのようなリガンドに配位することができる。好ましい還元剤は，例えば，塩化スズ，フッ化スズ，スズの酒石酸塩などのようなスズの塩である。このうち最も好ましいものは，塩化スズ（SnCl₂・2H₂O）である。還元剤は，約２０〜約６０μｇ／ｍＬ，最も好ましくは，約４０μｇ／ｍＬの濃度で含まれる。

本発明の製剤は，好ましくは，マルトース，アスコルビン酸，ゲンチシン酸，または薬剤的に受容可能なこれらの酸の塩から選択される１またはそれ以上の安定剤を含む。このうち最も好ましいものは，ゲンチシン酸のナトリウム塩である。この試薬は，好ましくは，約１０〜約２５ｍｇ／ｍＬ，最も好ましくは，２０ｍｇ／ｍＬの濃度で含まれる。

本発明の製剤には，所望のターゲットされたキレート配位子にキレート化するまでの間，一部還元された酸化状態にあるTcの安定化を補助するために，好ましくは，交換リガンドが含まれる。このような交換リガンドは，例えば，ゲンチシン酸，グルコン酸塩，またはグルコヘプトン酸塩，または薬理学的に受容可能なこれらの化合物の塩を含むことができる。このうち最も好ましいものは，グルコン酸ナトリウムである。交換リガンドは，約１〜約３ｍｇ／ｍＬ，最も好ましくは，１．３ｍｇ／ｍＬの濃度で含まれる。

本発明の製剤には，バイアルから放射活性の回復の改善を補助するために，選択的に界面活性剤が含まれる。このような界面活性剤は，非イオン性，カチオン性，アニオン性，および双性イオン性の界面活性剤を含むことができる。双性イオン性の界面活性剤としては，例えば，ドデシル硫酸ナトリウム，Ｎ−ドデシルスライン（sulaine），Tween80（商標），臭化セチルトリメチルアンモニウム，シクロ−ｎ−メチル−β−Ｄ−マロサイド（malloside）およびｎ−ヘキシル−β−Ｄ−グルコピラノシドがある。非イオン性界面活性剤として特に好ましいものは，シクロ−ｎ−メチル−β−Ｄ−マロサイドおよびｎ−ヘキシル−β−Ｄ−グルコピラノシドがある。界面活性剤は，約５〜１００ｍｇ／ｍＬ，特に好ましくは約１００ｍｇ／ｍＬの範囲の量で含まれる。

画像診断剤に使用される典型的な金属放射性核種は，下記金属の様々な塩化物，酸化物または窒化物中に，^99mTc，⁶⁴Cu，⁶⁷Cu，⁹⁷Ru，¹⁰⁹Pd，¹⁹⁸Au，¹⁹⁹Au，¹¹¹Inを含む。放射線治療の処置に使用される典型的な金属放射性核種は，下記金属の様々な塩化物，酸化物または窒化物中に，¹⁸⁶Re，¹⁸⁸Re，¹¹¹In，¹⁶⁶Ho，¹⁰⁵Rh，¹⁴⁹Pm，¹⁵³Sm，¹⁷⁷Lu，⁹⁰Y，²⁰³Pb，²¹²Pb，²¹²Biおよび放射活性のアクチニド，さらに放射活性のランタニドを含む。本発明に係る放射性医薬品の製造に使用される好適な放射性同位体は，テクネチウムやレニウム（例えば，⁹⁴Tc，^99mTc，¹⁸⁶Re，¹⁸⁸Re）の同位体である。最も好ましくは，使用される同位体は，過テクネチウム酸塩，^99mTcO₄ ^-としての^99mTcである。約５〜約１００ｍＣｉの^99mTc，最も好ましくは，約２０〜約４０ｍＣｉの^99mTcが加えられ得る。

本発明の放射性医薬品製剤は，室温〜１００℃の間の任意の温度で放射性同位体を用いて再構成される放射性医薬品を製造するために使用され得る。室温で製造される場合には，最適な反応時間は，約１０〜約６０分であり，より好ましくは約１５〜３０分であり，最も好ましくは約１５分である。１００℃に加熱して製造される場合には，所望の複合体（９０％超のＲＣＰを有するもの）の最適な収率は，キットが約５分〜約３０分，最も好ましくは約５分〜約１５分間加熱される場合に得られる。

本発明の製剤においては，例えばシクロデキストリン（例えば，α−，β−もしくはγ−シクロデキストリン，またはヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン）のような可溶化剤を選択的に含めてもよい。γ−シクロデキストリンが好ましく，ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリンが最も好ましい。シクロデキストリンの濃度は，約０．１〜約１０ｍｇ／ｍＬ，好ましくは約２．５〜約５ｍｇ／ｍＬである。

図１に示したように，本発明の放射性医薬品は，２つまたは３つの（分子内の）領域を有する。具体的には，放射性金属キレート化部分またはキレート化核（cherating core），リンカまたは連結基（存在する場合）およびレセプタ結合部位またはターゲティング分子である。リンカが存在するとしないとにかかわらず，キレート化部分とターゲティング分子はともに，キレート配位子として言及される場合もある。本発明の放射性医薬品製剤を製造するために好ましいリガンドである化合物１は，以下の構造を有している。

・・・（化合物１）

化合物１のトリフルオロ酢酸塩および酢酸塩の合成は，実施例１に記載されている。実施例２には，^99mTcとの複合体が形成された化合物１の製造について記載されている。実施例３では，このキレート核の構造を修飾すること（modifying）により，キレート核，すなわちリガンドのNMe₂-Gly-Ser-Cys部分の影響が検討されている。特に，化合物２〜４は，キレート化核のＲＣＰに与える影響を検討するための実験の一部として合成されている。

・・・（化合物２）

・・・（化合物３）

・・・（化合物４）

実施例３に記載され，表３に示された結果は，化合物１を含む放射性医薬品製剤は，化合物２〜４を含む製剤と比較して優れたＲＣＰ（すなわち，９０％超）を示すということを立証している。

実施例４には，本発明の放射性医薬品製剤の製造のためのキット，および化合物１のテクネチウム複合体を製造するために上記キットを使用する一実施形態について記載されている。実施例５〜１２には，希釈剤のエタノールよりもむしろ界面活性剤を使用した放射性医薬品化合物の合成および比較試験について記載されている。

（ターゲティング分子）
レセプタまたは与えられたターゲット細胞群と結合している他の受容性部分と，特異的に結合または反応により結合もしくは複合物を形成するあらゆる分子は，本発明の放射性医薬品製剤におけるターゲティング分子として使用され得る。この細胞反応性分子（cell reactive molecule）は，結合または局在化されようとする細胞郡と結合，複合化または反応する任意の分子であり得る。ここで，金属放射性核種キレート化部分（metal
radionuclide chelation moiety）は，連結基を介して上記細胞反応性分子と選択的に連結される。細胞反応性分子は，該分子が反応する特定のターゲット細胞群に放射性医薬品を伝達するように作用する。ターゲティング分子は，例えば，ステロイド，炭水化物，レクチンまたは小さなペプチド結合を有しない分子のように，ペプチド結合を有していなくてもよい。ターゲティング分子はまた，例えば，モノクローナル抗体，ポリクローナル抗体またはこれらの断片のような抗体であってもよい。好ましくは，ターゲティング分子は，ペプチド，ペプチドの模倣物（peptide
mimetic）またはペプトイド（peptoid）である。最も好ましくは，ターゲティング分子はペプチドである。ターゲティング分子として有用なペプチドは，ボンベシン，ガストリン，ガストリン放出ペプチド，トランスフェリン，上皮成長因子（ＥＧＦ），血小板由来成長因子，ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βのような腫瘍化成長因子（ＴＧＦ），未知成長因子（ＶＧＦ），インスリン，インスリン様成長因子ＩおよびＩＩ，ウロテンシンＩＩペプチドおよびその類似体，ＮＰ−Ｙペプチド，オクトレオチド，デプレオチド（depreotide），ヴァプレオチド（vapreotide），血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ），コレシストキニン（ＣＣＫ），インスリン様成長因子（ＩＧＦ），血管形成において上方制御されたＶＥＧＦレセプタ（例えば，ＫＤＲ，ＮＰ−１など）のようなペプチドターゲティングレセプタ，ＲＧＤ含有ペプチド，メラノサイと刺激ホルモン（ＭＳＨ），ニューロテンシン，カルシトニン，抗腫瘍性抗体の相補性決定領域由来のペプチド，グルタチオン，ＹＩＧＳＲ（例えば，P483Hのような，血小板因子−４（PF-4）のヘパリン結合領域やリジン豊富な配列を含む，白血球結合活性ペプチド（leukocyte-avid
peptide），心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ），β−アミロイドペプチド，δ−オピオイド拮抗剤（例えば，ITIPP(psi)），アネキシン−Ｖ，エンドセリン，IL-1/IL-1ra，IL-2，IL-6，IL-8，ロイコトリエンＢ４（LTB4），走化性ペプチド（例えば，Ｎ−ホルミル−メチオニル−ロイシル−フェニルアラニン−リジン（fMLFK），GP
IIb/IIIaレセプタ拮抗剤（例えば，DMP444），上皮成長因子，ヒト好中球エラスターゼ阻害剤（EPI-HNE-2，HNE2，およびHNE4），プラスミン阻害剤，抗菌性ペプチド，アプチサイド（apticide）（P280），P274，トロンボスポンジンレセプタ（TP-1300のような類似体を含む），ビチスタチン（bitistatin），脳下垂体アデニルシクラーゼＩ型レセプタ（ＰＡＣ１），ならびに上記ペプチドの類似体および保存的な置換を含む。

好ましい実施形態において，本発明の放射性医薬品製剤に使用されるターゲティング分子は，生物学的に活性なペプチドである。本発明の最も好ましい実施形態は，ガストリン放出ペプチドレセプタ（GRP-r），および特に例えば米国特許第６，２００，５４６号明細書に開示されたような作用薬であるボンベシン類似体に結合しているペプチドを含む。このようなペプチドの例は，表１に示されている。他のボンベシン類似体，断片または模倣型ペプチド（peptidemimetics）もまた，ターゲティング分子として使用されてもよい。例えば，Nac-BBN[7-14]は，ナノモル結合親和力を保持し，かつ，生物学的活性を誘発する最低限の断片として認識されてきた。しかしながら，ボンベシン７−１４アミノ酸の結合領域（例えば，L-Gly¹¹にとってのD-Ala¹¹，あるいはL-Trp⁸にとってのD-Trp⁸）中には２，３の特異的なアミノ酸置換体がある。かかる結合領域は，結合親和力を低下させることなく，あるいは作用薬から拮抗薬に化合物を変更することなく，形成されうる。例えば，BBN-14の位置でのメチオニン（Met）の存在は，この残留物の除去が一般的に拮抗薬的特性を与える間は，一般的に，作用薬的特性を与えるであろう［R.Cambleら著，Life
Science(1989年)45(17)，p.1521〜7］。

さらに，可溶化基やリンカがボンベシンの７−１４アミノ酸残留物のＮ末端に付着されてキレート化する際に，多様な官能性に対する耐性がある。ボンベシンやボンベシン類似体は，本発明の放射性医薬品組成物において，生物学的活性ペプチドとして使用される場合には，放射性医薬品は，ＧＲＰレセプタを表現する組織，特にガン細胞に対して，ターゲットされていてもよい。

（連結基）
「スペーサ」，「スペーサ基」，「リンカ」，および「連結基」の用語は，ターゲティング分子のターゲティング機能あるいは金属キレート剤の金属複合化機能の双方に悪影響を与えない限り，ターゲティング分子を金属キレート剤に結合させるのに役立つ化学的基を言及するために，ここでは同じ意味で用いられている。好適なスペーサ基は，ペプチド（すなわち，ともに結合されたアミノ酸）単独を含み，また，ペプチド結合を有しない基（例えば，炭化水素基）またはアミノ酸配列とペプチド結合を有しないスペーサとの混合物をも含む。純粋なペプチドスペーサは，一連のアミノ酸（例えば，ジグリシン，トリグリシン，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ，Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙなど）からなる。ポリマー鎖中のＢＢＮ結合部分のＮ末端残留物と金属キレート剤との間の原子の総数は，１２個以下である。

スペーサはまた，炭化水素鎖（すなわち，−Ｒ_１−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｒ_２−）を含む。ここで，ｎは０〜１０であり，好ましくは，３〜１０である。Ｒ_１は，リガンドを共有結合で結合させるための部位として使用され得る，または金属キレート剤もしくは金属複合化剤を作用させ得る基（例えば，Ｈ_２Ｎ−，ＨＳ−，−ＣＯＯＨ）の誘導体である。Ｒ_２は，リガンド（キレート剤）を複合化させるための方法のＮ末端のＮＨ_２基に共有結合させるために使用されるか，または本明細書に記載されている生体分子の金属キレート化を好ましくさせるための基である。これらの方法のうち一つあるいはそれ以上の方法は，複合化されていないリガンド（キレート剤）とスペーサ基をキレート化する放射性金属とを結合させるため，またはターゲティング分子にスペーサ基を連結させるために使用されてもよい。これらの方法は，酸無水物，アルデヒド，アリールイソチオシアネート，活性化エステルまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミドの構造を含む。好ましい連結基は，−Ｇｌｙ−５−アミノ吉草酸−である。本発明に使用されるのに好適なさらなるリンカは，２００３年１月１３日に出願され，本願と同時係属中の米国特許出願第６０／４３９，７２２号，および２００３年１月１３日に出願され，本願と同時係属中の米国特許出願第１０／３４１，５７７号に開示されている。

（実施例１：化合物１の固相ペプチド合成）

・・・（反応式１）

化合物１は，固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を使用して，そのＴＦＡ塩および酢酸塩として製造される。その手順は以下に記載されている。特に断らない限り，すべての物質は，Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入され，追加の精製を行わずに使用された。

（化合物１のＴＦＡ塩の合成）
上記反応式１に示したように，化合物の合成は，ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で，結合アミドノバゲル樹脂（rink-amide Novagel resin）上のＨＯＢｔ／ＤＩＣ活性化を使用して行われた。Ｆｍｏｃジプロテクションは，ＤＭＦ中で２０％のピペリジンを用いて行われた。樹脂は，使用前にＤＭＦ中で１時間膨張させた。すべての結合は，末端のＮ，Ｎ−ジメチルグリシン結合（以下に示す）を除いては，２時間持続した。ニンヒドリン試験は，反応の完了を決定するために利用された。

典型的な結合サイクルは，以下に示したとおりである。すなわち，１．１３ｍｍｏｌの膨張させた樹脂（０．６ｍｍｏｌ／ｇ，Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製）を含む５０ｍＬのＳＰＰＳ反応容器に，ＤＭＦ（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）中の４．５２ｍｍｏｌのＦｍｏｃアミノ酸，４．５２ｍｍｏｌのＨＯＢＴ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製），および４．５２ｍｍｏｌのＤＩＣを添加した。ＤＭＦの総体積は，２０ｍＬであった。次に，反応混合物を２時間撹拌した後，樹脂を濾過し，ＤＭＦ（３０ｍＬで３回）で洗浄した。ニンヒドリン試験は，結合の完了を確認するために行われた。次に，ＤＭＦ（２０ｍＬ）の２０％ピペリジン溶液を樹脂に添加し，１０分間撹拌した。その後，樹脂を濾過し，このピペリジン処理を繰り返した。最後に，次の結合サイクルの調整中に樹脂をＤＭＦ（３０ｍＬで３回）で洗浄した。

最後の結合サイクルで，ＨＡＴＵ／ＤＩＥＡ活性化を使用して，Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシンが結合された。すなわち，ＤＭＦ中のＮ，Ｎ−ジメチルグリシン（４．５２ｍｍｏｌ）の懸濁液に，ＤＭＦ中の４．５２ｍｍｏｌのＨＡＴＵ（Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）および９．０４ｍｍｏｌのＤＩＥＡの溶液を添加した。次に，樹脂に清浄な容器を添加し，１６時間撹拌した。次の合成で，樹脂をＤＭＦ（３０ｍＬで３回）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬで３回）を用いて洗浄した。次いで，容器を通して窒素を１５分間吹き付けることにより，樹脂を乾燥させた。次に，３０ｍＬの試薬Ｂ（ＴＦＡ／フェノール／水／トリイソプロピルシラン／メチルスルフィド＝８６ｍＬ／５ｇ／５ｍＬ／２ｍｌ／２ｍＬ）を加え，４時間撹拌した。次いで，樹脂を濾過し，濾液を蒸発させて，ペースト状にした。未精製のペプチドをジエチルエーテルで沈殿させ，エーテルで２回洗浄した。乾燥後，１．２ｇの粗精製物が得られた。得られたペプチドは，Ｓｈｉｍａｚｕ社製のＨＰＬＣシステムおよびＹＭＣ Ｃ−１８調製用カラムを用いて生成された。粗生成物を１５％ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）に溶解させ，カラムに添加した。ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）は４分間で１５％から１９％にまで増加し，さらに次の６０分間で１９％から４９％にまで増加した。フラクションが併用され，凍結乾燥された。全部で８４０ｍｇの純粋な物質が得られた。

（化合物１の酢酸塩の合成）
化合物１のＴＦＡ塩（０．５ＭのＨＯＡｃ２０ｍＬ中に１１０ｍｇ）を，３０ｍＬのＡＧ１Ｘ２イオン交換樹脂カラム（酢酸塩の形態，Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）に添加した。一定の伝導性が得られるまで，樹脂を水で予備洗浄した。次に，０．５ＭのＨＯＡｃを用いて，１２ｍＬ／ｍｉｎの流速で化合物１のＴＦＡ塩を溶出させた。所望のフラクションが併用され，凍結乾燥された。その物質が継続して空気中の露出されないように注意した。その結果，９０ｍｇの化合物１の酢酸塩が得られた。

（実施例２：^９９ｍＴｃとの複合体が形成された化合物1の製造のための製剤）
実施例１に記載されたようにして合成された化合物１のＴＦＡ塩の溶液を，０．０５Ｎの塩酸または０．１％のＴＦＡ中で０．０８ｍｇ／ｍＬの濃度となるように調製された。ｐＨ３のゲンチシン酸の溶液をゲンチシン酸を溶解させ，ナトリウム塩を１００ｍｇ／ｍＬの濃度となるように加えることにより調製した。ｐＨは，塩酸（１Ｎ）を用いて２．９〜３．０に調整した。窒素をパージした塩酸（１Ｎ）にＳｎＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏを溶解させることにより，塩化スズ溶液（２０ｍｇ／ｍＬ）を調整した。グルコン酸スズ溶液を２０μＬの塩化スズ溶液を１ｍＬのグルコン酸ナトリウム溶液に添加することにより，調製した。ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を，水にＨＰ−γ−ＣＤを溶解させることにより，調整した。これらの溶液の調製に使用されるすべての溶媒は，窒素でパージされたものであった。

化合物１の^９９ｍＴｃ複合体を製造するために，１３００μＬのエタノール，５０μＬのリガンド溶液（４μｇの化合物１），２００μＬのゲンチシン酸溶液（２０ｍｇ），５０μＬのＨＰ−γ−ＣＤ溶液（２．５ｍｇ），１００μＬのグルコン酸スズ溶液（４０μｇのＳｎＣｌ_２）および^９９ｍＴｃＯ_４ ⁻（〜４０ｍＣｉ）を加えた。最終的な体積を１ｍＬにするために水を加え，１００℃に加熱して，１５〜２０分間反応を行った。

（実施例３：キレート化核のＲＣＰに与える影響）
以下の実験は，キレート化核のＲＣＰに対する影響を検討するために行った。化合物１のＴＦＡ塩は，実施例１に記載されたように合成された。表２に示された化合物は，実施例１に示された合成法と類似の固相ペプチド合成により製造された。

化合物１〜４の溶液は，０．０５Ｎ塩酸中で０．０８ｍｇ／ｍＬの濃度となるように調製された。

^９９ｍＴｃ複合体を製造するために，５０μｇのリガンド溶液（４μｇの化合物１〜４），３００μｇのエタノール，２５０μｇのゲンチシン酸溶液（２０ｍｇ），５０μｇの１ＳｎＣｌ_２：３４グルコン酸（４０μｇのＳｎＣｌ_２），および^９９ｍＴｃＯ_４ ⁻（〜４０ｍＣｉ）を加えた。最終的な体積を１ｍＬにするために水を加え，室温で１５分間反応を行った。実施例２に記載したように，ＲＣＰのために溶液を分析した。その結果を表３に示した。

それぞれの実験は複数回行われ，その平均が表３に示されている。

（実施例４：ＴｃＯＭｅ２Ｎ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−５−ａｍｉｎｏｖａｒｅｌｏｙｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ_２製造用キット）
本実施例は，本発明の放射性医薬品の製造に使用される２つの要素キットについて記載されている。表４にまとめたように，キットは２つのバイアルを含む。しかしながら，バイアル２の内容はキットともに供給されないことが必要である。

（凍結乾燥された製剤における界面活性剤の使用）
上述した^９９ｍＴｃ化合物１の合成に寄与する製剤は，３０％（３００μｌ）のエタノールを含む。エタノールは，バイアルからの^９９ｍＴｃ複合体の回復を改善するのに有用である。

下記の２つの非イオン性界面活性剤がこの目的のために試験された。

（実施例５：^９９ｍＴｃ化合物１の合成（エタノールまたは界面活性剤を添加せず））

本実施例は，エタノールまたは界面活性剤が添加されていない場合には，バイアルからの^９９ｍＴｃ化合物１の回復が低いということを示している。

（実施例６：３００μｇのエタノールを添加した^９９ｍＴｃ化合物１の合成（界面活性剤は添加せず））

本実施例は，本製剤中の一部の水をエタノールに置換することにより，バイアルからの^９９ｍＴｃ化合物１の回復が改善され得るということを示している。

（実施例７：１０ｍｇのシクロヘキシル−ｎ−メチル−β−Ｄ−マルトシドを添加した^９９ｍＴｃ化合物１の合成）

本実施例は，マルトシドを添加しない場合（実施例５）に得られる収率と比較して，^９９ｍＴｃ化合物１の収率はマルトシドの添加により影響を受けないということを示している。

（実施例８：１５ｍｇのシクロヘキシル−ｎ−メチル−β−Ｄ−マルトシドを添加した^９９ｍＴｃ化合物１の合成）

本実施例は，実施例５で使用された条件に関しては，バイアルにシクロヘキシル−ｎ−メチル−β−Ｄ−マルトシドを添加することにより，ＲＣＰに不利な影響を与えることなく，バイアルからの^９９ｍＴｃ化合物１の回復が改善され得る，ということを示している。

（実施例９：５０ｍｇのシクロヘキシル−ｎ−メチル−β−Ｄ−マルトシドを添加した^９９ｍＴｃ化合物１の合成）

本実施例は，実施例５で使用された条件に関しては，バイアルにシクロヘキシル−ｎ−メチル−β−Ｄ−マルトシドを添加することにより，ＲＣＰに不利な影響を与えることなく，バイアルからの^９９ｍＴｃ化合物１の回復が改善され得ること，および，その回復は，５０ｍｇの界面活性剤を使用することにより，１５ｍｇの界面活性剤を使用した場合と比べて改善された，ということを示している。

（実施例１０；１００ｍｇのシクロヘキシル−ｎ−メチル−β−Ｄ−マルトシドを添加した^９９ｍＴｃ化合物１の合成）
その結果，ＲＣＰは９０％であった。放射性コロイドの割合は０．５％であった。

（実施例１１：１０ｍｇのｎ−ヘキシル−β−Ｄ−グルコピラノシドを添加した^９９ｍＴｃ化合物１の合成）

本実施例は，実施例５で使用された条件に関しては，バイアルにｎ−ヘキシル−β−Ｄ−グルコピラノシドを添加することにより，ＲＣＰに不利な影響を与えることなく，バイアルからの^９９ｍＴｃ化合物１の回復が改善され得る，ということを示している。

（実施例１２：５０ｍｇのｎ−ヘキシル−β−Ｄ−グルコピラノシドを添加した^９９ｍＴｃ化合物２の合成）

代表的なクロマトグラムを以下に示した。

（まとめ）
以下の表に示したように，これらの界面活性剤を使用して得られた回復性は，エタノールが使用された場合と非常に類似している。さらに，ｎ−ヘキシル−β−Ｄ−グルコピラノシドを用いて得られたＲＣＰは，エタノールを使用した場合に匹敵するものであった。

図１は，本発明の製剤で使用される好適なターゲットされたキレート配位子である，化合物１の^99mTc複合体の化学構造を示している。

配列表

Claims (31)

1. 下記化学式１ａで表される化合物と；
   スズ塩を含む還元剤と；
   交換リガンドと；
   安定剤と；
   希釈剤と；
   放射性核種と；
   を含む，放射性医薬品組成物。
   ・・・（化学式１ａ）
   前記化学式１ａにおいて，Ｌは，ペプチド単独，炭化水素基を含むペプチド結合を有しない基，または，アミノ酸配列とペプチド結合を有しない基との混合物のうちから選択される連結基であり；
   Ｚは，ターゲティング分子であり，
   前記化学式１ａで表される化合物は，前記希釈剤１ｍＬ当たり１０μｇ以下含まれる。
2. 下記化学式１ａで表される化合物と；
   スズ塩を含む還元剤と；
   交換リガンドと；
   安定剤と；
   を含む，放射性医薬品製造（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）用組成物
   ・・・（化学式１ａ）
   前記化学式１ａにおいて，Ｌは，ペプチド単独，炭化水素基を含むペプチド結合を有しない基，または，アミノ酸配列とペプチド結合を有しない基との混合物のうちから選択される連結基であり；
   Ｚは，ターゲティング分子であり，
   前記化学式１ａで表される化合物は，生成される放射性医薬品中に，希釈剤１ｍＬ当たり１０μｇ以下の量で含まれる。
3. 前記Ｚは，ボンベシン，ボンベシン７−１４アミノ酸の結合領域（ＢＢＮ［７−１４］），Ｌ−Ｇｌｙ^１１に置換されたＤ−Ａｌａ^１１が結合されたＢＢＮ［７−１４］，Ｌ−Ｔｒｐ^８に置換されたＤ−Ｔｒｐ^８が結合されたＢＢＮ［７−１４］，アリテシン（Ａｌｙｔｅｓｉｎ），Ｈ−ＧＲＰ，リトリン（Ｌｉｔｏｒｉｎ），ラナテンシン（Ｒａｎａｔｅｎｓｉｎ），ヒトのニューロメディンＢ（Ｈｕｍａｎ ｎｅｕｒｏｍｅｄｉｎ Ｂ）およびフィロリトリン（Ｐｈｙｌｌｏｌｉｔｏｒｉｎ）からなる群より選択されるボンベシン類似体であることを特徴とする，請求項１または２に記載の組成物。
4. 前記Ｚは，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７からなる群より選択されることを特徴とする，請求項３に記載の組成物。
5. 下記化学式２で表される化合物と；
   スズ塩を含む還元剤と；
   交換リガンドと；
   安定剤と；
   希釈剤と；
   放射性核種と；
   を含み，
   前記化学式２で表される化合物は，前記希釈剤１ｍＬ当たり１０μｇ以下含まれる，放射性医薬品組成物。
   ・・・（化学式２）
6. 下記化学式２で表される化合物と；
   還元剤と；
   交換リガンドと；
   安定剤と；
   を含み，
   前記化学式２で表される化合物は，生成される放射性医薬品中に，希釈剤１ｍＬ当たり１０μｇ以下の量で含まれる，放射性医薬品製造（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）用組成物
   ・・・（化学式２）
7. 前記還元剤は，塩化スズであることを特徴とする，請求項１，２，５または６に記載の組成物。
8. 前記交換リガンドは，グルコン酸，ゲンチシン酸およびグルコヘプトネート（ｇｌｕｃｏｈｅｐｔｏｎａｔｅ）からなる群より選択されることを特徴とする，請求項１，２，５または６に記載の組成物。
9. 前記交換リガンドは，グルコン酸であることを特徴とする，請求項８に記載の組成物。
10. 前記安定剤は，ゲンチシン酸，マルトースおよびアスコルビン酸からなる群より選択されることを特徴とする，請求項１，２，５または６のいずれか１項に記載の組成物。
11. 前記安定剤は，ゲンチシン酸である，請求項１０に記載の組成物。
12. 可溶化剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｒ）をさらに含むことを特徴とする，請求項１，２，５または６のいずれか１項に記載の組成物。
13. 前記可溶化剤は，シクロデキストリンであることを特徴とする，請求項１２に記載の組成物。
14. 前記可溶化剤は，ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリンであることを特徴とする，請求項１３に記載の組成物。
15. 前記希釈剤は，エタノール，水および生理食塩水からなる群より選択されることを特徴とする，請求項１または５のいずれか１項に記載の組成物。
16. 前記希釈剤は，エタノールであることを特徴とする，請求項１５に記載の組成物。
17. 下記化学式２で表される化合物と；
    塩化スズと；
    グルコン酸と；
    ゲンチシン酸と；
    エタノールと；
    放射性核種と；
    を含み，
    前記化学式２で表される化合物は，前記希釈剤１ｍＬ当たり１０μｇ以下含まれる，放射性医薬品組成物。
    ・・・（化学式２）
18. 下記化学式２で表される化合物と；
    塩化スズと；
    グルコン酸と；
    ゲンチシン酸と；
    を含み，
    前記化学式２で表される化合物は，生成される放射性医薬品中に，希釈剤１ｍＬ当たり１０μｇ以下の量で含まれる，放射性医薬品製造（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）用組成物
    ・・・（化学式２）
19. ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリンをさらに含むことを特徴とする，請求項１７または１８に記載の組成物。
20. 前記化学式１ａで表される化合物の含有量は，希釈剤１ｍＬ当たり５μｇ以下であることを特徴とする，請求項１に記載の組成物。
21. 前記化学式２で表される化合物の含有量は，希釈剤１ｍＬ当たり５μｇ以下であることを特徴とする，請求項５または１７に記載の組成物。
22. 前記放射性医薬品は，精製することなく，調製され，患者に投与されることが可能であることを特徴とする，請求項１，５または１７に記載の組成物。
23. 前記組成物のＲＣＰは，精製後１５分間経過時に９０％以上であることを特徴とする，請求項１，５または１７に記載の組成物。
24. 前記化学式１ａで表される化合物は，生成される放射性医薬品中に，希釈剤１ｍＬ当たり５μｇ以下の量で含まれることを特徴とする，請求項２に記載の組成物。
25. 前記化学式２で表される化合物は，生成される放射性医薬品中に，希釈剤１ｍＬ当たり５μｇ以下の量で含まれることを特徴とする，請求項６または１８に記載の組成物。
26. 前記生成される放射性医薬品は，精製することなく，調製され，患者に投与されることが可能であることを特徴とする，請求項２，６または１８に記載の組成物。
27. 前記生成される放射性医薬品のＲＣＰは，精製後１５分間経過時に９０％以上であることを特徴とする，請求項２，６または１８に記載の組成物。
28. 非イオン性界面活性剤をさらに含むことを特徴とする，請求項１，２，５，６，１７または１８に記載の組成物。
29. 非イオン性界面活性剤をさらに含み，凍結乾燥された状態であることを特徴とする，請求項２，６または１８に記載の組成物。
30. 分離型容器（ａ ｓｅｐａｒａｔｅ ｃｏｎｔａｉｎｅｒ）に選択的に収容された（ｃｏｎｔａｉｎｅｄ）希釈剤をさらに含むことを特徴とする，請求項２，６または１８に記載の組成物。
31. 前記界面活性剤は，シクロヘキシル−ｎ−メチル−β−Ｄ−マルトシドまたはｎ−へキシル−β−Ｄ−グルコピラノシドであることを特徴とする，請求項２８に記載の組成物。