JP4764888B2 - グルコース利用を刺激する化合物および使用方法 - Google Patents

Description

優先権の情報
本願は、２００５年２月２３日に出願された米国一部継続出願番号１１／０６４，７１３からの優先権を主張する。

発明の分野
本発明は、心筋細胞においてグルコース酸化速度を刺激する新規化合物に関する。本発明はまた、グルコース酸化を刺激できる化合物を含む薬学的組成物、心筋細胞においてグルコース酸化速度を高める方法および心筋虚血の治療方法に関する。

発明の背景
心筋虚血は、狭心症、急性心筋梗塞または心臓手術の間という環境において生じる、一般的な臨床病理である。心筋虚血は、その合併症が西欧社会における死亡および罹患の主要な原因である大きな臨床上の問題である。

虚血の間および虚血後の双方でグルコース酸化を刺激することが、虚血心に利益をもたらし得るということが報告されている。Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １２８：１９７−２０５，１９９９、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２７５：Ｈ１５３３−４１，１９９８、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １２２５：１９１−９，１９９４、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３４：７３５−４１，１９９３、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７０：１７５１３−２０，１９９５、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １３０１：６７−７５，１９９６、Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ８０：１１Ａ−１６Ａ，１９９７、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ８８：１７５−９，１９８９、Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ６５：３７８−８７，１９８９、Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ６６：５４６−５３，１９９０、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２５９：Ｈ１０７９−８５，１９９０、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２６１：Ｈ１０５３−９，１９９１、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２８０：Ｈ１７６２−９．，２００１、Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ３６：１３７８−８５．，２０００。

心臓は、収縮筋の高いエネルギー需要に応じるために、一定で、かつ、豊富な自由エネルギー担体、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の供給を実現しなくてはならない。このエネルギーは、種々の炭素基質、例えば、グルコースなどの炭水化物の代謝によって産生される。脂肪酸の代謝が、心臓のためのエネルギーのその他の主要な供給源である。

心臓におけるグルコース代謝は、２つの重要な経路、すわわち、解糖およびグルコース酸化からなる。

虚血（例えば、狭心症、心筋梗塞または心臓手術によって引き起こされるもの）の間、血漿における循環脂肪酸のレベルが劇的に高まり得ることがわかっている。Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ １２８：６１−７，１９９４。結果として、心臓は、虚血および再潅流の間、高レベルの脂肪酸にさらされ、このことが、酸化基質として、グルコースを上回る脂肪酸の優先的使用をもたらす。この、ＡＴＰの主要な供給源としての脂肪酸への過度の依存が、脂肪酸誘導性虚血性障害の一因となることがさらに報告されている。この知見が、心臓を脂肪酸誘導性虚血性障害から保護するために、基質利用を切り替えてグルコースに戻すことに向けられた多数のアプローチの口火となった。Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３１：３３６−４４．，１９９８、Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ １３４：８４１−５５．，１９９７、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２７３：Ｈ２１７０−７．，１９９７，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｄｒｕｇｓ Ｔｈｅｒ １４：６１５−２３．，２０００、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ３９：３８１−９２．，１９９８，Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ １３９：Ｓ１１５−９．，２０００、Ｃｏｒｏｎ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓ １２：Ｓ８−１１．，２００１、Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ８２：１４Ｋ−１７Ｋ．，１９９８、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １７２：１３７−４７，１９９７、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９５：３１３−５．，１９９７、Ｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３０：６３９−４５．，１９９８、Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ８２：４２Ｋ− ４９Ｋ．，１９９８、Ｃｏｒｏｎ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓ １２：Ｓ２９−３３．，２００１、Ｃｏｒｏｎ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓ １２：Ｓ３−７．，２００１、Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ３８：１５１５−２１．，１９９７。心筋エネルギー代謝を操作するために用いられる現在のアプローチは、グルコース代謝を直接的または間接的（すなわち、脂肪酸代謝を阻害すること）のいずれかで刺激することに関係している。

高い脂肪酸酸化速度はグルコース酸化を著しく減少させるので、グルコース酸化の増大への１つのアプローチは、脂肪酸酸化を阻害することである。これは虚血の間および虚血後の双方で有効であることが証明されており、この薬理学的アプローチは臨床用途がわかり始めている。脂肪酸酸化を阻害するよう設計された、いくつかの薬理学的物質が最近開発されたが、直接β酸化阻害剤、トリメタジジンが最初の広く用いられた抗狭心症薬であり、これはエネルギー代謝の最適化によるものであり得る作用機序を有している（非特許文献１）。

トリメタジジンは、心臓において、主として、脂肪酸酸化を阻害し、それによって、グルコース酸化を刺激することによって作用すると報告されている。

脂肪酸からグルコース酸化にエネルギー代謝を切り替えると報告されている第２の臨床上有効な物質として、ラノラジンがある。この物質は、脂肪酸酸化の阻害に続発してグルコース酸化を刺激すると報告されている（非特許文献２）。

また、虚血の間および虚血後の機械的機能に対する脂肪酸の有害な作用は、グルコース酸化を直接高める物質によって弱めることができる。多数の実験的研究によって、虚血後（脂肪酸の支出時）にジクロロアセテート（ＤＣＡ）を用いることによるグルコース酸化の刺激が、虚血心に利益をもたらし得ると報告されている。非特許文献３。ＤＣＡはグルコース酸化を刺激するよう設計された有効な化合物であるが、生物学的半減期が短い。
Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．８６：５８０−８，２０００ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ９３：１３５−４２．，１９９６ Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ １３４：８４１−５５，１９９７

したがって、新しい種類の化合物を開発し、グルコース酸化を刺激でき、長い生物学的寿命を有し、心筋虚血の治療または予防において有効である化合物を同定する必要がある。

発明の要旨
一態様では、本発明は次式（Ｉ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを対象とする

［式中、
（ａ）ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲン、必要に応じて置換されるアリール、必要に応じて置換されるアラルキルまたは必要に応じて置換されるアラルケニルであり、
（ｂ）ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
（ｃ）ｐは０〜４の整数であり、
（ｄ）ｍは１または２であり、
（ｅ）ＹはＯ、ＳまたはＮＲであり、
（ｆ）ｍが１である場合で、ｐが０であり、ＹがＯであり、かつ、ｎが０でない場合は、Ｚは（シクロ）アルキカルボニル（ａｌｋｙｃａｒｂｏｎｙｌ）であり、または、ｍが１である場合で、ｐが０であり、ＹがＯであり、かつ、ｎが０である場合は、Ｚは複素環アルキルであり、
（ｇ）ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
（ｈ）ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
（ｉ）ＺはＨ、アルキル、複素環アルキル、シクロアルキル、アリールまたは必要に応じて置換されるＣ_１〜Ｃ_６アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合には、Ｒは

であり、またはＸがＮＲである場合には、ＲおよびＺはＮと一緒になって窒素含有複素環式環を形成し得、
（ｊ）Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
（ｋ）Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
（ｌ）Ｒ^３およびＲ^４は、独立に、Ｈ、アルキルもしくはアリールであるか、または、ＸがＣＲ^３Ｒ^４である場合には、Ｒ^３およびＲ^４は炭素原子と一緒になって、複素環式環を形成し得、
（ｍ）ｎは１〜１０の整数である］。

代替の好ましい一態様では、本発明は、次式（ＩＩＳ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを対象とする：

［式中、（ａ）ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲン、必要に応じて置換されるアリール、必要に応じて置換されるアラルキルまたは必要に応じて置換されるアラルケニルであり、（ｂ）ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、（ｃ）ｐは１〜４の整数である］。いずれか特定の作用機序によって拘束されたいとは思わないが、式（ＩＩＳ）の化合物は、インビボでＣｏＡでエステル化されると考えられる。

一実施形態によれば、次式（ＩＩＩａ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグが提供される

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲンまたはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ＣｙｃがＣ_４シクロアルキルである場合は、ｐは０〜３の整数であり、ＣｙｃがＣ_３シクロアルキルである場合は、ｐは０〜２の整数であり、
ＹはＮＲであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
ＺはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたは（シクロ）アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合は、Ｒは

であり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

代替実施形態によれば、次式（ＩＩＩｂ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグが提供される

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲンまたはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ＣｙｃがＣ_４シクロアルキルである場合は、ｐは０〜３の整数であり、ＣｙｃがＣ_３シクロアルキルである場合は、ｐは０〜２の整数であり、
ＹはＮＲであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
ＲはＨ、アルキルまたはアリールであり、
ＺはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたは（シクロ）アルキルカルボニルであり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

さらなる実施形態では、次式（ＩＩＩｃ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグが提供される

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲンまたはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ＣｙｃがＣ_４シクロアルキルである場合は、ｐは０〜３の整数であり、ＣｙｃがＣ_３シクロアルキルである場合は、ｐは０〜２の整数であり、
ＹはＯ、ＳまたはＮＲであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
Ｚは（シクロ）アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合は、Ｒは

であり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

もう１つの実施形態は、次式（ＩＩＩｄ）によって表される化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを提供する

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲンまたはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ＣｙｃがＣ_４シクロアルキルである場合は、ｐは０〜３の整数であり、ＣｙｃがＣ_３シクロアルキルである場合は、ｐは０〜２の整数であり、
ＹはＯであり、
ＸはＮＲであり、
ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
ＺはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたは（シクロ）アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合は、Ｒは

であり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

さらなる実施形態は、次式（ＩＩＩｅ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを対象とする

［式中、
Ｗはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ｐは１であり、
ＹはＯ、ＳまたはＮＲであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
ＺはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたは（シクロ）アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合は、Ｒは

であり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

一態様によれば、本発明はさらに、温血動物の心筋またはその他の種類の細胞、組織または器官、特に高グルコース代謝できるもの（例えば、心臓およびその他の筋肉）におけるグルコース利用を増大させるか、または改善する方法を対象とする。本方法は、細胞、組織または器官を、次式（ＩＩＳ）によって表される、置換または非置換シクロプロパンカルボン酸もしくはシクロブタンカルボチオ酸

［式中、Ｗ、Ｃｙｃおよびｐは式（ＩＩＳ）に関連して定義されるとおりである］または式（Ｉ）のシクロプロパンカルボン酸もしくはシクロブタンカルボン酸誘導体または式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）のいずれかで処理するステップを含む。

代替態様によれば、本発明はまた、式（ＩＩＳ）、式（Ｉ）または式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）のいずれかの化合物と、適した薬剤担体、賦形剤もしくは増量剤とを含む薬学的組成物を対象とする。

さらなる態様によれば、本発明は、細胞グルコース利用を増大させることによって効果的に治療できる生理学的状態または障害を治療する方法を対象とする。一実施形態によれば、このような方法は、このような治療を必要とする患者に、式（ＩＩＳ）の置換または非置換シクロプロパンカルボン酸もしくはシクロブタンカルボチオ酸または式（Ｉ）および式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）のいずれかのシクロプロパンカルボン酸もしくはシクロブタンカルボン酸誘導体を含む薬学的組成物の有効量を投与するステップを含む。

本発明はさらに、本発明の薬学的組成物を含むキットを対象とする。

本発明の方法は、温血動物被験体、例えば、哺乳類、例えば、ヒト、霊長類などを治療するために適用できる。

さらなる実施形態は、詳細な説明から、また特許請求の範囲から明らかとなる。
定義
本発明に従って、また、本明細書において、以下の用語は、別に明記されない限り、以下の意味を有するよう定義される。

用語「アルケニル」とは、少なくとも１つの二重結合を有する不飽和脂肪族基を指す。

用語「アルキル」とは、直鎖、分岐鎖および環状（例えば、シクロアルキルおよび多環式アルキル）基を含む飽和脂肪族基を指す。

用語「アルコキシ」および「アルコキシル」とは、式、Ｒ−Ｏ−（式中、Ｒはアルキル基である）を有する基を指す。

用語「アルコキシカルボニル」とは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ（式中、Ｒはアルキルである）を指す。

用語「アラルケニル」とは、アリール基で置換されたアルケニル基を指す。アルケニル基は２〜約６個の炭素原子を有することが好ましい。

用語「アラルキル」とは、アリール基で置換されたアルキル基を指す。適したアラルキル基としては、ベンジル、フェネチルなどが挙げられ、そのすべては必要に応じて置換される。アルキル基は１〜約６個の炭素原子を有することが好ましい。

用語「アリール」とは、共役π電子系を有する少なくとも１つの環を有する芳香族基を指し、これとしては、炭素環式アリール、複素環式アリールおよびビアリール基が挙げられ、そのすべては必要に応じて、置換され得る。

用語「アリールオキシ」とは、式、Ｒ−Ｏ−（式中、Ｒはアリール基である）を有する基を指す。

用語「アラルコキシ」とは、式、Ｒ−Ｏ−（式中、Ｒはアラルキル基である）を有する基を指す。

「ビアリール」とは、フェニル環の接着点にオルト、メタまたはパラで、本明細書において定義される炭素環式または複素環式アリールによって置換されたフェニルを指す。

「ブライン」とは、塩化ナトリウムの飽和水溶液を指す。

「炭素環式アリール」とは、芳香環上の環原子が炭素原子である芳香族基を指す。炭素環式アリール基としては、単環式炭素環式アリール基およびナフチル基が挙げられ、そのすべては必要に応じて置換される。適した炭素環式アリール基としては、フェニルおよびナフチルが挙げられる。適した置換炭素環式アリール基としては、１個〜２個の置換基によって置換されたインデンおよびフェニルが挙げられ、このようなものとしては、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルコキシカルボニル、ハロゲン、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、ニトロおよびシアノが有利である。置換ナフチルとは、上記の式（Ｉ）に関連して定義されるＹ１、Ｙ２および／またはＹ３によって置換された、ナフチル、より好ましくは、１−または２−ナフチルを指す。

「シクロアルケニル」とは、環状アルケニル基を指す。適したシクロアルケニル基としては、例えば、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルが挙げられる。

「シクロアルキル」とは、少なくとも１個の環を有する環状アルキル基を指し、これとしては多環式基、例えば、縮合環環状アルキル基および架橋シクロアルキル基が挙げられる。適したシクロアルキル基としては、例えば、シクロヘキシル、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘプチルおよびアダマンチルが挙げられる。

「シクロヘキシルメチル」とは、ＣＨ_２と結合しているシクロヘキシル基を指す。

「ジオール」とは、少なくとも２個のヒドロキシ（−ＯＨ）官能基を有する化学種を指す。ジオールは３個以上のヒドロキシ基を含み得る。「隣接ジオール」とは、例えば、ピナンジオール中に見られる、２個のヒドロキシ基が隣接する炭素上にあるものである。

「縮合炭素環式」とは、芳香環および非芳香環の両方を有する多環式縮合炭素環式環を指す。適した縮合炭素環式環としては、フルオレニル、テトラリンなどが挙げられる。

「縮合炭素環式アルキル」とは、縮合炭素環式環部分で置換されたアルキル基を指し、芳香環および非芳香環の両方を含む多環式縮合炭素環式環が好ましい。適した縮合炭素環式アルキル基としては、フルオレニルメチルなどが挙げられる。

用語「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す。

「へテロアラルケニル」とは、ヘテロアリールで置換されたアルケニル基を指し、これとしては、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ」，４９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９６８，Ｒ．Ｃ．Ｗｅａｓｔ，ｅｄｉｔｏｒ； Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｕｂｂｅｒ Ｃｏ．，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨに記載される複素環式系のものが挙げられる。特に、Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｃ、Ｒｕｌｅｓ ｆｏｒ Ｎａｍｉｎｇ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｂ．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ参照のこと。アルケニル基は２〜約６個の炭素原子を有することが好ましい。

「へテロアラルキル」とは、ピコリルなどのヘテロアリールで置換されたアルキル基を指し、これとしては、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ」，４９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９６８，Ｒ．Ｃ．Ｗｅａｓｔ，ｅｄｉｔｏｒ； Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｕｂｂｅｒ Ｃｏ．，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨに記載される複素環式系のものが挙げられる。特に、Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｃ，Ｒｕｌｅｓ ｆｏｒ Ｎａｍｉｎｇ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｂ．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ参照のこと。アルキル基は１〜約６個の炭素原子を有することが好ましい。

「ヘテロアリール」とは、１〜１４個の炭素原子を有し、環原子の残りがヘテロ原子である芳香族基を指し、これとしては、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ」，４９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９６８，Ｒ．Ｃ．Ｗｅａｓｔ，ｅｄｉｔｏｒ； Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｕｂｂｅｒ Ｃｏ．，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨに記載される複素環式系のものが挙げられる。特に、Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｃ，Ｒｕｌｅｓ ｆｏｒ Ｎａｍｉｎｇ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｂ．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ参照のこと。適したヘテロ原子としては、酸素、窒素およびＳ（Ｏ）ｉ（ここで、ｉは０、１または２である）が挙げられ、適した複素環式アリールとしては、フラニル、チエニル、ピリジル、ピロリル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリルなどが挙げられる。

「複素環」または「複素環式」とは、ヘテロアリールおよびヘテルシクロ（ｈｅｔｅｒｃｙｃｌｏ）基の両方を指す。

「複素環アルキル」とは、複素環基で置換されたアルキル基を指す。

「複素環式オキシ」とは、基−ＯＲ（式中、Ｒは複素環基である）を指す。

「ヘテロシクロ」とは、炭素、窒素、酸素および／または硫黄原子を含む還元された複素環式環系を指し、これとしては、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ」，４９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９６８，Ｒ．Ｃ．Ｗｅａｓｔ，ｅｄｉｔｏｒ； Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｕｂｂｅｒ Ｃｏ．，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨに記載される複素環式系のものが挙げられる。特に、Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｃ，Ｒｕｌｅｓ ｆｏｒ Ｎａｍｉｎｇ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｂ．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ参照のこと。

「ヘテロシクロアルキル」とは、ヘテロシクロ基で置換されたアルキル基を指し、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ」，４９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９６８，Ｒ．Ｃ．Ｗｅａｓｔ，ｅｄｉｔｏｒ； Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｕｂｂｅｒ Ｃｏ．，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨに記載される複素環式系のものが挙げられる。特に、Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｃ，Ｒｕｌｅｓ ｆｏｒ Ｎａｍｉｎｇ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｂ．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ参照のこと。アルキル基は約１〜約６個の炭素原子を有することが好ましい。

有機ラジカルまたは基と関連して本明細書において記載される用語「低級」とは、１〜最大５個（５個を含む）の炭素原子、好ましくは、最大４個（４個を含む）の炭素原子を含むようなラジカルまたは基を定義し、１個または２個の炭素原子が有利である。このようなラジカルまたは基は直鎖であっても分岐鎖であってもよい。

「薬学的に受容可能な塩」としては、本発明の化合物と有機酸または無機酸とを組み合わせることから導かれる本発明の化合物の塩が挙げられる。実際には、塩の形の使用は塩基の形の使用に相当する。本発明の化合物は、遊離塩基および塩の形の双方で有用であり、両方の形とも本発明の範囲内にあると考えられる。

発明の詳細な説明
一態様では、本発明は、グルコース利用を増大させる治療方法およびグルコース利用の増大によって恩恵を受ける症状を改善する治療方法における特定の化合物の使用を対象とする。温血動物の細胞、組織または器官においてグルコース利用を増大させる方法であって、前記細胞、組織または器官を、本明細書に示される式によって表される少なくとも１種の化合物のグルコース利用を増大させる有効量で処理するステップを含む方法が含まれる。グルコース利用を増大させることによって治療可能な生理学的状態または障害を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、本明細書に記載される少なくとも１種の化合物を含む薬学的組成物のグルコース利用を増大させるのに有効な量を投与するステップを含む方法も含まれる。このような化合物としては、式（Ｉ）、（ＩＩＳ）、ＩＩＩおよび（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）によって表される化合物が挙げられる。

いずれか特定の作用機序に拘束されようとは思わないが、本発明者らは、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ（ＰＤＨＫ）の阻害剤としての活性を有する化合物がグルコース酸化の刺激において有益な活性を示すことを観察した。本発明者らは、作動している心臓モデルにおいてエネルギー代謝を直接測定する方法を用いることにより、本明細書に記載される化合物（例えば、表１、２Ａおよび２Ｂに記載されるものおよびＭＭ００１およびＭＭ０１３）を、そのグルコース酸化を刺激する能力についてスクリーニングした。ＭＭ００１およびＭＭ０１３の構造および分子量を以下に表す。

本発明者らは、正の対照としてＤＣＡを３ｍＭという濃度で用いた。本発明者らは、１００μＭでグルコース酸化を刺激する化合物を同定できた。本発明者らは、続いて、これらの化合物の効力を調べるために濃度曲線を作製した。データは図６に示されている。

このアプローチを用いて、無傷の心臓におけるグルコース酸化の刺激で本明細書に記載される化合物の有効性を試験した。ＭＭ００１はシクロプロパンカルボン酸であり、本発明者らが、心臓におけるグルコース酸化の刺激因子として同定した。ＭＭ０１３は本発明者らがグルコース酸化を刺激すると実証した化合物である。

ＭＭ００１およびＭＭ０１３の濃度曲線は、それぞれ、図７および図８に示されている。

本発明者らは、グルコース酸化の刺激における活性が、実際に、ＰＤＨＫの阻害における活性と関連していたかどうかを調べるために、グルコース酸化刺激活性を有すると同定した化合物（ＭＭ００１）を、インビトロ ＰＤＨＫアッセイに付した。ＰＤＨＫ活性は実施例Ｃに記載されるように測定した。

本発明者らの最初の結果から、試験した化合物はインビトロでＰＤＨＫを直接阻害しないことが実証された。しかし、本発明者らは、エキソビボ心臓においてはＰＤＨＫ活性が阻害されるということを証明する証拠を有していた（図９）。

本明細書に記載される化合物は、ＰＤＨＫの阻害においてプロドラッグ機構によって作用するということ、すなわち、インビボに投与された場合に、本化合物が細胞内修飾を受け、ＰＤＨＫを阻害する生成物が生じるということが考えられる。（図１１参照のこと）したがって、本明細書に記載される化合物がプロドラッグとして作用するということが考えられる。本発明者らは、これを実証するために、化合物のうち１種（ＭＭ００１）を、細胞内で修飾されると考えられる方法で修飾した。この化合物（ＭＭ０５３）は以下に表されている。

ＭＭ０５３は、インビトロ ＰＤＨＫアッセイにおいて試験すると、活性であったがＰＤＨＫ活性を阻害した。

したがって、ＭＭ０５３は、ＰＤＨＫを直接阻害する化合物（ＭＭ００１）の活性型であると思われる（図１０参照のこと）。グルコース酸化を刺激する、本明細書に記載される化合物は、インビボで同様に修飾され得、対応するＣｏＡエステルのプロドラッグであり得ると考えられる。

一態様によれば、グルコース酸化の刺激において活性である式（ＩＩＩ）の化合物が提供される。特に、式（ＩＩＩ）によって表される化合物は、以下またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグである

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲンまたはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ＣｙｃがＣ_４シクロアルキルである場合は、ｐは０〜３の整数であり、ＣｙｃがＣ_３シクロアルキルである場合は、ｐは０〜２の整数であり、
ＹはＯ、ＳまたはＮＲであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
ＺはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたは（シクロ）アルキルカルボニルまたは

であり、ＸがＮＲである場合は、Ｒが

であり、
ＲはＨ、アルキルまたはアリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

式（ＩＩＩ）の特定の化合物は、式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）によって表される。

一態様によれば、本発明は、シクロプロパンカルボン酸またはシクロブタンカルボン酸の誘導体である新規化合物を提供する。これらの化合物は、心筋細胞およびその他の種類の細胞においてグルコース酸化刺激活性を示す。本発明の化合物は、次式（Ｉ）またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグによって表される

［式中、
（ａ）ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲン、必要に応じて置換されるアリール、必要に応じて置換されるアラルキルまたは必要に応じて置換されるアラルケニルであり、
（ｂ）ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
（ｃ）ｐは０〜４の整数であり、
（ｄ）ｍは１または２であり、
（ｅ）ＹはＯ、ＳまたはＮＲであり、
（ｆ）ｍが１である場合で、ｐが０であり、ＹがＯであり、かつ、ｎが０でない場合は、Ｚは（シクロ）アルキカルボニル（ａｌｋｙｃａｒｂｏｎｙｌ）であり、または、ｍが１である場合で、ｐが０であり、ＹがＯであり、かつ、ｎが０である場合は、Ｚは複素環アルキルであり、
（ｇ）ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
（ｈ）ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
（ｉ）ＺはＨ、アルキル、複素環アルキル、シクロアルキル、アリールまたは必要に応じて置換されるＣ_１〜Ｃ_６アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合には、Ｒは

であり、またはＸがＮＲである場合には、ＲおよびＺはＮと一緒になって窒素含有複素環式環を形成し得、
（ｊ）Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
（ｋ）Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
（ｌ）Ｒ^３およびＲ^４は、独立に、Ｈ、アルキルもしくはアリールであるか、または、ＸがＣＲ^３Ｒ^４である場合には、Ｒ^３およびＲ^４は炭素原子と一緒になって、複素環式環を形成し得、
（ｍ）ｎは１〜１０の整数である］。

代替態様によれば、本発明は次式（ＩＩＳ）によって表される本発明の新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを提供する

［式中、（ａ）ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲン、必要に応じて置換されるアリール、必要に応じて置換されるアラルキルまたは必要に応じて置換されるアラルケニルであり、（ｂ）ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、（ｃ）ｐは１〜４の整数である］。

一実施形態によれば、次式（ＩＩＩａ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグが提供される

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲンまたはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ＣｙｃがＣ_４シクロアルキルである場合はｐは０〜３の整数であり、ＣｙｃがＣ_３シクロアルキルである場合は、ｐは０〜２の整数であり、
ＹはＮＲであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり
ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
ＺはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたは（シクロ）アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合は、Ｒは

であり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

代替実施形態によれば、次式（ＩＩＩｂ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグが提供される

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲンまたはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ＣｙｃがＣ_４シクロアルキルである場合は、ｐは０〜３の整数であり、ＣｙｃがＣ_３シクロアルキルである場合は、ｐは０〜２の整数であり、
ＹはＮＲであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
ＲはＨ、アルキルまたはアリールであり、
ＺはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたは（シクロ）アルキルカルボニルであり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

さらなる実施形態では、次式（ＩＩＩｃ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグが提供される

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲンまたはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ＣｙｃがＣ_４シクロアルキルである場合は、ｐは０〜３の整数であり、ＣｙｃがＣ_３シクロアルキルである場合は、ｐは０〜２の整数であり、
ＹはＯ、ＳまたはＮＲであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
Ｚは（シクロ）アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合は、Ｒは

であり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

もう１つの実施形態は、次式（ＩＩＩｄ）によって表される化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを提供する

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲンまたはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ＣｙｃがＣ_４シクロアルキルである場合は、ｐは０〜３の整数であり、ＣｙｃがＣ_３シクロアルキルである場合は、ｐは０〜２の整数であり、
ＹはＯであり、
ＸはＮＲであり、
ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
ＺはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたは（シクロ）アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合は、Ｒは

であり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

さらなる実施形態は、次式（ＩＩＩｅ）によって表される新規化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを対象とする

［式中、
Ｗはアリールであり、
ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、
ｐは１であり、
ＹはＯ、ＳまたはＮＲであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＲまたはＣＲ^３Ｒ^４であり、
ＲはＨ、アルキル、アリールまたは

（式中、ｉは２〜４の整数である）
であり、
ＺはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリールまたは（シクロ）アルキルカルボニルまたは

であり、
ＸがＮＲである場合は、Ｒは

であり、
Ｒ^１はＨ、アルキルまたはアリールであり、
Ｒ^２はＨ、アルキル、アリールまたは＝Ｏであり、
Ｒ^３およびＲ^４は独立に、Ｈ、アルキルまたはアリールであり、
ｎは１〜１０の整数である］。

本発明の特定の化合物は、以下の反応スキームに従って、適当に置換されたまたは非置換のシクロプロパンカルボニルクロリドまたはシクロブタンカルボニルクロリドから調製できることが好都合である

［式中、Ｗ、Ｃｙｃおよびｐは、式（Ｉ）に関連して定義される通りであり、ＹはＯであり、その結果、Ｒ’ＹＨはアルコールであり、かつ、Ｒ’は

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｘおよびｎは式（Ｉ）に関連して定義される通りであり、ＺはＨ、アルキル（例えば、シクロアルキル）、アリールまたはアルキカルボニル（ａｌｋｙｃａｒｂｏｎｙｌ）である）である］。

式（Ｉ）の、または式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）のその他の化合物、例えば、表１Ａ、２Ａおよび２Ｂに表されるものは、実施例１〜２７において記載されるものと同様の方法によって、また適当な出発物質を用いて調製できる。

適した溶媒としては、不活性有機溶媒、例えば、ジクロロメタンが挙げられ、また適した塩基触媒としては、トリエチルアミンおよびピリジンが挙げられる。

反応条件は、出発物質および所望の最終生成物に応じて変えられる。反応条件の最適化は、当業者には明らかである。

本発明はさらに、ヒトおよび動物の心筋およびその他の細胞、組織または器官においてグルコース酸化の速度を増大させ、グルコース利用を改善する方法を提供する。式（ＩＩＳ）によって、式（Ｉ）および式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）のいずれかによって表される、特定の置換シクロプロパンカルボチオ酸およびシクロブタンカルボチオ酸誘導体および特定の置換または非置換シクロプロパンカルボン酸およびシクロブタンカルボン酸誘導体が、温血動物、例えば、ヒトの心筋およびその他の種類の細胞、組織または器官においてグルコース利用を増大させることができるということを発見した。

次式（ＩＩＳ）の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグは以下の構造を有する

［式中、
ＷはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、ハロゲン、必要に応じて置換されるアリール、必要に応じて置換されるアラルキルまたは必要に応じて置換されるアラルケニルであり、ＣｙｃはＣ_３またはＣ_４シクロアルキルであり、ｐは１〜４の整数である］。

一実施形態によれば、本発明の方法は、動物の細胞、組織または器官を、グルコース利用を刺激するのに有効な量の、式（Ｉ）、式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）のいずれかまたは式（ＩＩＳ）によって表される、少なくとも１種の化合物で処理するステップを含む。式（Ｉ）、式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）または式（ＩＩＳ）の化合物は、薬学的組成物を投与する従来の手段、例えば、動物への式（Ｉ）、式（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）または式（ＩＩＳ）の化合物の経口投与、注射または注入などによって細胞、組織または器官に送達できる。

本発明はさらに、その活性成分として、式（Ｉ）、（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）または（ＩＩＳ）の少なくとも１種の化合物またはその薬学的に受容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを含む薬学的組成物を提供する。式（Ｉ）、（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）または（ＩＩＳ）の２種以上の化合物、それらの種々の混合物および組合せを含む薬学的組成物も、本発明の範囲内にあると考慮される。

薬学的組成物または製剤としては、製薬の技術分野において従来用いられている組成物および薬剤が挙げられ、経口投与、静脈内投与、筋内投与、動脈内投与、頭蓋内投与および／または腔内投与と適合する担体および賦形剤を含み得る。適した薬学的組成物および／または製剤はさらに、コロイド分散系または脂質製剤（例えば、陽イオン脂質または陰イオン脂質）、ミセル、マイクロビーズからなる場合がある。

記載したように、本発明の薬学的組成物は、製薬上許容され、かつ、生理学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含み得る。適した担体、希釈剤および賦形剤の例としては、薬剤投与に適合した、溶媒（水性または非水性）、溶液、エマルション、分散媒、被膜、等張剤および吸収促進または遅延剤、ならびに当技術分野で公知のその他のよく用いられる担体が挙げられる。

薬学的組成物はまた、組成物を迅速な分解または身体からの排除から保護するための担体を含む場合があり、したがって、制御放出製剤、例えば、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含み得る。例えば、時間遅延物質、例えば、単独のまたはワックスと組合せた、モノステアリン酸グリセリルまたはステアリン酸グリセリルを使用できる。

薬学的組成物は、特定の投与経路に適合するよう製剤できる。経口投与には、組成物を賦形剤と組み合せ、錠剤、丸剤またはカプセル剤、例えば、ゼラチンカプセルの形で用いることができる。経口製剤には、製薬上適合する結合剤、および／またはアジュバント物質を含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル剤などは、以下の成分または類似化合物のうちのいずれかを含み得る：結合剤、例えば、微晶質セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチン、賦形剤、例えば、デンプンまたはラクトース、崩壊剤、例えば、アルギン酸、プリモゲルまたはコーンスターチ、滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはステロート（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）、磨砕剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素または矯味剤または甘味剤。

非経口、皮内または皮下投与用の薬学的組成物は、滅菌希釈液、例えば、水、生理食塩水溶液、硬化油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶剤、抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン、抗酸化物質、例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム、キレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸、緩衝液、例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩および張度を調節するための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースを含み得る。

注射用薬学的組成物は、滅菌注射用溶液または分散物の即時調製のための滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散物と滅菌散剤とを含む。静脈内投与には、適した担体としては、生理食塩水、静菌水、クレモフォアＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。抗菌剤および抗真菌剤としては、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸およびチメロサールが挙げられる。組成物中には、等張剤、例えば、糖、マニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムが含まれ得る。吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによって、注射用組成物の吸収を延長することができる。

薬剤製剤は、投与を容易にし、投与量を均一にするために投与単位形にパッケージングできる。本明細書において投与単位形とは、治療される被験体のための単位投与量として適した物理的に分離した単位を指し、各単位は、薬剤担体または賦形剤と共同して所望の治療効果を生じるよう算出された所定量の活性化合物を含む。

本組成物は、所望の成果に適合する経路であればいずれによって投与してもよい。したがって、投与経路としては、経口（例えば、経口摂取または吸入）、腹腔内、皮内、皮下、静脈内、動脈内、腔内、頭蓋内および非経口が挙げられる。本組成物はまた、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系を用いて投与できる。

薬剤製剤をはじめとする組成物はさらに、粒子またはポリマー物質、例えば、ポリエステル、ポリアミン酸、ヒドロゲル、ポリビニルピロリドン、エチレン−ビニルアセテート、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、硫酸プロタミンまたはラクチド／グリコリド共重合体、ポリラクチド／グリコリド共重合体またはエチレンビニルアセテート共重合体を含み得る。シクロプロパンカルボン酸、シクロプロパンカルボン酸ならびにそれらの誘導体および修飾形を、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセルもしくはポリ（メチルメタクロレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｒｏｌａｔｅ）マイクロカプセルを用いて、マイクロカプセル中に、またはコロイド薬物送達システム中に封入できる。

細胞、組織または器官ターゲッティングが望まれる場合には、もちろん、注射または注入などによって本発明の組成物を標的細胞、器官または組織に送達できる。ターゲッティングは、本発明の方法の実施における注射または注入によって達成できる。また、ターゲッティングは、細胞上に存在する細胞表面タンパク質と結合するタンパク質（例えば、受容体またはマトリックスタンパク質）または細胞種の集団を用いることによっても達成できる。例えば、細胞表面タンパク質と結合する抗体または抗体断片（例えば、Ｆａｂ領域）を、送達システムに含め、細胞、組織または器官ターゲッティングを容易にすることができる。特定の細胞表面タンパク質と結合するウイルスコートタンパク質をターゲッティングに用いることができる。例えば、公知の細胞表面タンパク質結合特異性を有する、天然に存在する、または合成（例えば、組換え）レトロウイルスエンベロープタンパク質を、リポソーム中に用い、シクロプロパンカルボン酸、シクロプロパンカルボン酸ならびにそれらの誘導体および修飾形を、標的細胞、組織または器官に細胞質内送達することができる。したがって、送達ビヒクル、例えば、コロイド分散系を、タンパク質コートを有するよう作製し、シクロプロパンカルボン酸、シクロプロパンカルボン酸ならびにそれらの誘導体および修飾形のターゲッティングまたは細胞質内送達を容易にすることができる。

本発明はさらに、患者の細胞、組織または器官におけるグルコース利用を増大させることまたは改善することによって治療可能な、種々の生理学的状態または障害の予防的および治療的処置を必要とする患者に、式（Ｉ）、（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）および（ＩＩＳ）によって表される、置換または非置換シクロプロパンカルボン酸、シクロプロパンカルボン酸およびシクロブタンカルボン酸誘導体化合物を含む薬学的組成物の有効量を投与することによって、このような処置を行う方法を提供する。

本発明の方法で治療され得る障害または状態としては、例えば、虚血／再潅流損傷、心筋梗塞後、狭心症、心不全、心筋症、末梢血管疾患、糖尿病および乳酸アシドーシスまたは心臓手術（例えば、開心術、バイパス手術、心臓移植）に伴って起こる症状または副作用が挙げられる。

本発明の方法は、式（Ｉ）、（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）および（ＩＩＳ）によって表される、置換または非置換シクロプロパンカルボン酸、シクロプロパンカルボン酸およびシクロブタンカルボン酸誘導体化合物の有効量を含む薬学的組成物を、単回１日用量で投与するステップを含むか、または総１日投与量を、分割用量で１日数回投与してもよい。さらに、本薬学的組成物は単回用量としてまたは一定期間かけて投与してもよい。

本発明の方法で治療され得る患者としては、すべての公知の哺乳類種、例えば、非ヒト霊長類（サル、テナガザル、チンパンジー、オラウータン、マカク）、コンパニオンアニマル（イヌおよびネコ）、家畜（ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）、実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）およびヒトが挙げられる。

本発明の薬学的組成物を利用する投与計画は、治療される生理学的状態の種類、患者の年齢、体重、性別、治療される状態の重篤度、投与経路および薬学的組成物中に含まれる特定の化合物などの種々の因子に基づいて選択する。当業者の医師または獣医ならば、指定の生理学的状態を予防するまたは治療するための薬学的組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。

１日投与量は、広い範囲にわたって変わることができ、式（Ｉ）、（ＩＩＳ）および（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）のいずれかによって表される、置換シクロプロパンカルボチオ酸もしくはシクロブタンカルボチオ酸、または置換または非置換シクロプロパンカルボン酸もしくはシクロブタンカルボン酸誘導体化合物から選択される活性化合物の量が、温血動物の細胞、組織または器官においてグルコース利用を増大させるのに、また脂肪酸誘導性虚血性障害を軽減または予防するという所望の効果を達成するのに十分であるようなものであり得る。

本発明は、適したセットにパッケージングされた、式（Ｉ）、（ＩＩＩａ）〜（ＩＩＩｅ）および式（ＩＩＳ）によって表される、置換または非置換シクロプロパンカルボン酸またはシクロブタンカルボン酸、シクロプロパンカルボン酸またはシクロブタンカルボン酸、置換シクロプロパンカルボチオ酸またはシクロブタンカルボチオ酸ならびにそれらの誘導体および修飾形、例えば、薬剤製剤を含むキットを提供する。キットは、通常、その中に、インビトロ、インビボまたはエキソビボにおいて構成要素を使用するための使用説明書を含む、ラベルまたは添付文書を含む。

用語「パッケージング材料」とは、キットの構成要素、例えば、シクロプロパンカルボン酸、シクロプロパンカルボン酸またはその誘導体もしくは修飾形を収容している物理的構造を指す。パッケージング材料は、構成要素を無菌的に維持でき、このような目的によく用いられる材料（例えば、紙、ダンボール、ガラス、プラスチック、アルミホイル、アンプルなど）からなるものであり得る。ラベルまたは添付文書としては、例えば、本発明の方法を実施するための適当な書面の使用説明書を挙げることができる。

したがって、本発明のキットはさらに、本発明の方法においてキット構成要素を用いるための使用説明書を含み得る。使用説明書は本明細書に記載される本発明の方法のいずれかを実施するための使用説明書を含み得る。したがって、例えば、キットは、容器、パックまたはディスペンサー中の薬剤製剤中にシクロプロパンカルボン酸、シクロプロパンカルボン酸またはその誘導体もしくは修飾形を、ヒト被験体に投与するための使用説明書とともに含み得る。使用説明書はさらに、満足のいく臨床エンドポイントの指標または起こり得る何らかの有害な症状、またはヒトにおいて使用するために食品医薬品局によって定められた何らかのさらなる情報を含み得る。

キットは、インビトロ、エキソビボまたはインビボグルコース利用を増大させるまたは改善するための使用説明書を含み得る。その他の実施形態では、キットは、不十分なまたは非効率的なグルコース利用に伴って起こる障害を治療するための使用説明書を含む。一態様では、使用説明書は、虚血／再潅流損傷、心筋梗塞後、狭心症、心不全、心筋症、末梢血管疾患、糖尿病および乳酸アシドーシスを有するか、有する危険のある被験体を治療するための使用説明書を含む。もう１つの態様では、使用説明書は、心臓手術（例えば、開心術、バイパス手術、心臓移植および血管形成術）を有するか、有する危険のある被験体を治療するための使用説明書を含む。

使用説明書は「印刷物」上、例えば、キット内の紙またはボール紙上、キットまたはパッケージング材料に貼られた、またはキットの構成要素を含有するバイアルもしくはチューブに取り付けられたラベル上にある場合もある。使用説明書はさらに、コンピューターによって読み取り可能な媒体、例えば、ディスク（フロッピー（登録商標）ディスケットまたはハードディスク）、光学ＣＤ、例えば、ＣＤ−またはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭ、磁気テープ、電子記憶媒体、例えば、ＲＡＭおよびＲＯＭならびにこれらのハイブリッド、例えば、磁気／光学記憶媒体上に含まれる場合もある。

キットはさらに、緩衝剤、防腐剤または分解防止剤を含み得る。キットの各構成要素は個々の容器内に入れることができ、種々の容器のすべては単一のパッケージ内にあり得る。

本発明を、以下の実施例においてさらに示すが、これでは、特に断りのない限り、すべての部、パーセンテージおよび割合は当量においてであり、すべての温度は℃であり、すべての圧力は大気圧である。

実施例１
シクロプロパンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの調製

１０ｍｌ丸底フラスコに、トリエチレングリコールモノメチルエーテル（１．１当量、５．２６ｍｍｏｌ、０．８４ｍｌ）およびトリエチルアミン（１．１当量、５．２６ｍｍｏｌ、０．７３ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（３ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、シクロプロパンカルボニルクロリド（４．７８ｍｍｏｌ、０．５ｇ、０．４３ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら、一定に撹拌しながら、滴下法で加えた。

しばらくすると黄色を帯びた橙色の固体が観察された。０℃で１時間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、５％重炭酸ナトリウム（２×５ｍｌ）、１：１塩酸（２×５ｍｌ）で、次いで、ブライン（５ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン層を水層から分離し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色の液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーおよび真空蒸留（ｂ．ｐ．＝１４４℃、３．０ｍｍＨｇ）による精製によって、純粋生成物が無色の液体（５２７．０ｍｇ、４８％）として得られた。

得られた化合物は、^１Ｈおよび^１３Ｃ ＮＭＲ、ＩＲおよび質量分析によって特性決定した。

実施例２
シクロブタノイルグリシン（シクロブタンカルボニル−アミノ）−酢酸）の調整

ジクロロメタン（５ｍｌ）中に、メチルエステルグリシンヒドロクロリド（１当量、２．３９ｍｍｏｌ、３００ｍｇ）およびピリジン（２当量、４．７８ｍｍｏｌ、０．３９ｍｌ）を懸濁し、続いて、ＤＭＡＰ（１．５当量、２１８．５ｍｇ）を一度に加えた。この反応混合物を室温で３０分間撹拌した。３０分後、シクロブタンカルボニルクロリド（２当量、４．７７ｍｍｏｌ、０．５４ｍｌ）をゆっくりと加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を真空蒸発させ、残渣を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を乾燥させ、濃縮乾固した。得られた粗物質をフラッシュクロマトグラフィーによって精製すると、純粋な化合物Ａ（３５８ｍｇ、８７％）が得られた。

ＴＨＦ（６ｍｌ）中、Ａの溶液に、水酸化リチウム（１．１当量、２．３ｍｍｏｌ、２．３ｍｌ、１Ｍ）を室温で加え、反応混合物を１．５時間撹拌した。次いで、反応混合物を真空濃縮し、２Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ＝３に酸性化した。次いで、粗生成物を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル／ヘキサン混合物を用いる再結晶化によって精製した。再結晶化後に得られた生成物を、フラッシュクロマトグラフィーおよび再度の再結晶化によってさらに精製すると、標題化合物Ｂが白色固体（１９６ｍｇ、５９％）として得られた。

得られた化合物は、^１Ｈおよび^１３Ｃ ＮＭＲ、ＩＲおよび質量分析によって特性決定した。

実施例３
シクロブタンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの調製

２５ｍｌ丸底フラスコに、トリエチレングリコールモノメチルエーテル（１．１当量、４．６４ｍｍｏｌ、０．７４ｍｌ）およびトリエチルアミン（１．１当量、４．６４ｍｍｏｌ、０．６５ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（３ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、シクロブタンカルボニルクロリド（４．２２ｍｍｏｌ、０．５ｇ、０．４８ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら、一定に撹拌しながら、滴下法で加えた（激しい反応）。

しばらくすると淡紅色の溶液が観察された。適切な撹拌を維持するために、さらに４ｍｌのジクロロメタンを加えた（反応混合物は粘度が高くなった）。０℃で１時間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、５％重炭酸ナトリウム（２×５ｍｌ）、１：１塩酸（２×５ｍｌ）で、次いで、ブライン（５ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン層を水層から分離し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色を帯びた淡紅色の液体として得られた。この液体をフラッシュクロマトグラフィーおよび真空蒸留（ｂ．ｐ．＝１８９℃、３．０ｍｍのＨｇ）によって精製すると、純粋生成物が無色の液体（６７９．６ｍｇ、６５．３４％）として得られた。

生成物は、^１Ｈおよび^１３Ｃ ＮＭＲ、ＩＲおよび質量分析によって特性決定した。

実施例４、６〜１４、１８および１９
特定のシクロプロパンカルボン酸およびシクロブタンカルボン酸誘導体の調製のための一般手順

［式中、Ｗ、Ｃｙｃおよびｐは式（Ｉ）について定義の通りであり、ＹはＯであり、その結果、Ｒ’−ＹＨはアルコールであり、Ｒ’は

であり、
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｘおよびｎは式（Ｉ）に関連して定義され、ＺはＨ、アルキル（例えば、シクロアルキル）、アリールまたはアルキルカルボニルである）］。適した塩基としては、トリエチルアミンまたはピリジンが挙げられる。適した溶媒としては、ジクロロメタンまたはその他の不活性有機溶媒が挙げられる。

実施例１および実施例３に記載される手順に従い、適当な出発アルコールおよびシクロアルキルシクロプロパンカルボン酸クロリド物質を用い（トリエチレングリコールモノメチルエーテルの代わりに適当な出発アルコールを用いた）、記載したシクロプロパンカルボン酸およびシクロブタンカルボン酸誘導体をそれぞれ調製した（表Ｉ参照のこと）。調製した化合物、シクロアルキルカルボニルクロリドおよびそれらの調製に用いたアルコール出発物質およびそれらの分子量は表１に要約されている。

化合物は、^１Ｈ ＮＭＲ、^１３Ｃ ＮＭＲ、ＩＲおよび質量分析によって特性決定した。

実施例５
シクロプロパノイルアラニンの調製

２当量の代わりに２．５当量のピリジンを用い、シクロブタンカルボニルクロリドの代わりにシクロプロパンカルボニルクロリドを用い、メチルエステルグリシンヒドロクロリドの代わりにメチルエステルアラニンヒドロクロリドを用いた以外は実施例２の手順に従った。

精製した化合物Ｂ（３２１ｍｇ、８７％）は、^１Ｈおよび^１３Ｃ ＮＭＲ、ＩＲおよび質量分析によって特性決定した。

実施例１５
シクロプロパンカルボン酸２−エトキシ−エチルエステルの調製

２５ｍｌ丸底フラスコに、２−エトキシ−エタノール（１．１当量、５．２６ｍｍｏｌ、０．４７ｇ、０．５１ｍｌ）およびピリジン（１．１当量、５．２６ｍｍｏｌ、０．４２ｇ、０．４３ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（６ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、シクロプロパンカルボニルクロリド（４．７８ｍｍｏｌ、０．５ｇ、０．４３ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら、一定に撹拌しながら、滴下法で加えた。

しばらくすると橙−黄色の溶液が観察された。０℃で１時間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、５％重炭酸ナトリウム（２×５ｍｌ）、１：１塩酸（２×５ｍｌ）で、次いで、ブライン（５ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン層を水層から分離し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色を帯びた橙色の液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーおよび真空蒸留（ｂ．ｐ．＝４３℃、２．８ｍｍのＨｇ）による精製によって、純粋生成物が無色の液体（５１５．８ｍｇ、５５．４％）として得られた。

特性決定はＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって行った。

実施例１６
シクロブタンカルボン酸２−エトキシ−エチルエステルの調製

２５ｍｌ丸底フラスコに、２−エトキシ−エタノール（１．１当量、４．６４ｍｍｏｌ、０．４２ｇ、０．４５ｍｌ）およびトリエチルアミン（１．１当量、４．６４ｍｍｏｌ、０．４７ｇ、０．６５ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（６ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、シクロブタンカルボニルクロリド（４．２２ｍｍｏｌ、０．５ｇ、０．４８ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら、一定に撹拌しながら、滴下法で加えた。

しばらくすると橙−黄色の溶液が観察された。０℃で１時間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、５％重炭酸ナトリウム（２×５ｍｌ）、１：１塩酸（２×５ｍｌ）で、次いで、ブライン（５ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン層を水層から分離し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色の液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーおよび真空蒸留（ｂ．ｐ．＝４８℃、２．８ｍｍのＨｇ）によって精製を試みると、純粋生成物が無色の液体（４２１．３ｍｇ、５７．７％）として得られた。

特性決定は、ＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって行った。

実施例１７
シクロプロパンカルボン酸２−イソプロポキシ−エチルエステルの調製

２５ｍｌ丸底フラスコに、２−イソプロポキシ−エタノール（ｌ．ｌ当量、５．２６ｍｍｏｌ ０．５５ｇ、０．６１ｍｌ）およびピリジン（１．１当量、５．２６ｍｍｏｌ、０．４２ｇ、０．４３ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（６ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、シクロプロパンカルボニルクロリド（４．７８ｍｍｏｌ、０．５ｇ、０．４３ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら、一定に撹拌しながら、滴下法で加えた。

しばらくすると橙−黄色の溶液が観察された。適切な撹拌を維持するために、さらに２ｍｌのジクロロメタンを加えた（反応混合物は粘度が高くなった）。０℃で１時間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、５％重炭酸ナトリウム（２×５ｍｌ）、１：１塩酸（２×５ｍｌ）で、次いで、ブライン（５ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン層を水層から分離し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色を帯びた橙色の液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーおよび真空蒸留（ｂ．ｐ．＝３３℃、２．９ｍｍのＨｇ）による精製によって、純粋生成物が無色の液体（６３０．２ｍｇ、７６．４０％）として得られた。

得られた化合物の特性決定は、^１Ｈおよび^１３Ｃ ＮＭＲ、ＩＲおよび質量分析によって行った。

実施例２０
シクロブタンカルボン酸，２−（２−シクロブタンカルボニルオキシ−エトキシ）−エチルエステルの調製

１０ｍｌ丸底フラスコに、ジエチレングリコール（０．５当量、１ｍｍｏｌ、０．１１ｇ）およびピリジン（２．２当量、２．２ｍｍｏｌ、０．１７４ｇ、０．１８ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（４ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、シクロブタンカルボニルクロリド（２．０ｍｍｏｌ、０．２４ｇ、０．２３ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら、一定に撹拌しながら、滴下法で加えた。

しばらくすると白色の粘性の高い懸濁液が観察された。０℃で１時間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、５％重炭酸ナトリウム（２×５ｍｌ）、１：１塩酸（２×５ｍｌ）で、次いで、ブライン（５ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン層を水層から分離し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色を帯びた液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーおよび真空蒸留（ｂ．ｐ．＝１１３℃、２．８ｍｍのＨｇ）による精製によって、純粋生成物が無色の液体（１３０．０ｍｇ、４６．４２％）として得られた。

特性決定は、ＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって行った。

実施例２１
シクロプロパンカルボン酸，２−［２−（２−シクロプロパンカルボニルオキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの調製

１０ｍｌ丸底フラスコに、トリエチレングリコール（１．６ｍｍｏｌ、０．２４ｇ）およびピリジン（２．２当量、３．５２ｍｍｏｌ、０．２８ｇ、０．２８ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（５ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、シクロプロパンカルボニルクロリド（３．４ｍｍｏｌ、０．３６ｇ、０．３１ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら、一定に撹拌しながら、滴下法で加えた。

しばらくすると白色の粘性の高い懸濁液が観察された。０℃で１時間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、５％重炭酸ナトリウム（２×５ｍｌ）、１：１塩酸（２×５ｍｌ）で、次いで、ブライン（５ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン層を水層から分離し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色を帯びた液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーおよび真空蒸留（ｂ．ｐ．＝１２７℃、２．８ｍｍのＨｇ）による精製によって、純粋生成物が無色の液体（２３４．５ｍｇ、５０．９７％）として得られた。

特性決定はＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって行った。

実施例２２
シクロブタンカルボン酸，２−［２−（２−シクロブタンカルボニルオキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの調製

以下の量のこれらの試薬を用い、実施例２１に記載の手順に従った：トリエチレングリコール（１．６ｍｍｏｌ、０．２４ｇ）、ピリジン（２．２当量、３．５２ｍｍｏｌ、０．２８ｇ、０．２８ｍｌ）およびシクロブタンカルボニルクロリド（３．４ｍｍｏｌ、０．４０ｇ、０．３９ｍｌ）。

化合物は、ＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって特性決定した。

実施例２３
シクロプロパンカルボン酸，２−［｛２−［ビス（２−シクロプロパンカルボニルオキシ−エチル）−アミノ］−エチル｝−（２−シクロプロパンカルボニルオキシ−エチル）−アミノ］エチルエステルの調製

２５ｍｌ丸底フラスコに、ジアミンテトラ−オール（１当量、４．２３ｍｍｏｌ、１．０ｇ）、ピリジン（１．０当量、４．２３ｍｍｏｌ、０．３３ｇ、０．３４ｍｌ）およびトリエチルアミン（５．０当量、０．０２１ｍｏｌ、２．１２ｇ、２．９０ｍｌ）の溶液を入れ、トルエン（１０ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、シクロプロパンカルボニルクロリド（０．０１９ｍｍｏｌ、１．９８ｇ、１．７２ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら、激しく撹拌しながら、一度に加えた。

しばらくすると黄色を帯びた白色の粘性の高い懸濁液が観察された。０℃で１５分間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出した。酢酸エチル層をブライン（１×２０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色を帯びた液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーによる精製によって、純粋生成物が無色の液体（９００．０ｍｇ、４２．０％）として得られた。

特性決定はＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって行った。

実施例２４
シクロプロパンカルボン酸（２−イソプロポキシ−エチル）−アミドの調製

１０ｍｌ丸底フラスコに、アミノエーテル（１．１当量、５．２６ｍｍｏｌ、０．５４ｇ、０．６４ｍｌ）、ピリジン（０．５当量、２．３９ｍｍｏｌ、０．１９ｇ、０．１９ｍｌ）、トリエチルアミン（１．１当量、５．２６ｍｍｏｌ、０．５３ｇ、０．７３ｍｌ）の溶液を入れ、ジクロロメタン（６ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、シクロプロパンカルボニルクロリド（４．７８ｍｍｏｌ、０．５ｇ、０．４３ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら滴下法で加えた。

しばらくすると白色の沈殿が観察された。０℃で３０分間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、水（１×１０ｍｌ）、ブライン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が無色の液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーおよび真空蒸留（ｂ．ｐ．＝１０６℃、１．４ｍｍのＨｇ）による精製によって、純粋生成物が無色の液体（４９３．８ｍｇ、６０．２２％）として得られた。

特性決定はＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって行った。

実施例２５
（＋）−トランス−２−フェニル−シクロプロパンカルボン酸２−イソプロポキシ−エチルエステルの調製

１０ｍｌ丸底フラスコに、２−イソプロポキシ−エタノール（１．１当量、３．０４ｍｍｏｌ、０．３２ｇ、０．３５ｍｌ）、ピリジン（０．５当量、１．３８ｍｍｏｌ、０．１１ｇ、０．１１ｍｌ）、トリエチルアミン（１．１当量、３．０４ｍｍｏｌ、０．３１ｇ、０．４３ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（６ ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、（±）−トランス−２−フェニル−シクロプロパンカルボニルクロリド（２．７６ｍｍｏｌ、０．５ｇ、０．４３ｍｌ）を、温度を０℃に維持しながら滴下法で加えた。

しばらくすると白色の沈殿が観察された。０℃で３０分間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、５％重炭酸ナトリウム（２×５ｍｌ）、１：１塩酸（２×５ｍｌ）で、次いで、ブライン（５ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン層を水層から分離し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色を帯びた液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーによる精製によって、純粋生成物が無色の液体（４５０．０ｍｇ、６５．０％）として得られた。上記化合物はラセミ化合物であることがキラルＨＰＬＣ（キラルセルＯＪカラム）ヘキサン中２％イソプロパノールによって決定された。ＵＶ λ_ｍａχ＝２７８ｎｍ（フロー＝１ｍｌ／分）。

特性決定はＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって行った。

実施例２６
（±）−トランス−２−フェニル−シクロプロパンカルボン酸２の調製

この化合物は、実施例２５に記載される手順を用い、以下の試薬を用いて調製した：２−エトキシ−エタノール（１．１当量、３．０５ｍｍｏｌ、０．２７ｇ、０．３０ｍｌ）ピリジン（０．５当量、１．３９ｍｍｏｌ、０．１１ｇ、０．１１ｍｌ）、トリエチルアミン（１．１当量、３．０５ｍｍｏｌ、０．３１ｇ、０．４３ｍｌ）および（±）−トランス−２−フェニル−シクロプロパンカルボニルクロリド（２．７７ｍｍｏｌ、０．５ｇ、０．４３ｍｌ）。

この化合物は、ＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって特性決定した。

実施例２７
１−フェニル−シクロプロパンカルボン酸２−エトキシ−エチルエステルの調製

塩化チオニル（１０当量、０．０３１ｍｏｌ、３．６８ｇ、２．３ｍｌ）に、１−フェニル−シクロプロパンカルボン酸（０．５ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を溶解し、８０℃で１．５時間還流した。次いで、ロータリーエバポレーターで過剰の塩化チオニルを蒸発させると、暗黄色を帯びた液体（１−フェニル−シクロプロパンカルボニルクロリドＡ）が得られ、次いで、これをアルゴン下０℃に冷却した。

２５ｍｌ丸底フラスコに、２−エトキシ−エタノール（１．１当量、３．４１ｍｍｏｌ、０．３１ｇ、０．３３ ｍｌ）およびピリジン（１．２当量、３．４１ｍｍｏｌ、０．２７ｇ、０．２８ｍｌ）を入れ、ジクロロメタン（１０ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、Ａを、温度を０℃に維持しながら滴下法で加えた。０℃で３０分間撹拌を続けた。反応を薄層クロマトグラフィーによってモニターし、次いで、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。次いで、この混合物を分液漏斗に移し、５％重炭酸ナトリウム（２×５ｍｌ）、１：１塩酸（２×５ｍｌ）で、次いで、ブライン（５ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン層を水層から分離し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空蒸発させると、標題生成物が淡黄色を帯びた液体として得られた。フラッシュクロマトグラフィーおよび真空蒸留（ｂ．ｐ．＝９３℃、２．４ｍｍのＨｇ）による精製によって、純粋生成物が無色の液体（４３７．７ｍｇ、６０．６２％）として得られた。

特性決定はＮＭＲ（^１Ｈおよび^１３Ｃ）、ＩＲおよび質量分析によって行った。

注記：
実施例１〜２７の化合物については、フラッシュクロマトグラフィーに用いた溶媒系は、特に断りのない限り、酢酸エチル／ヘキサンとした。

表２Ｂの化合物は、当業者の範囲内の方法を用いて、例えば、実施例１〜２７に、また本発明の詳細な説明に記載されるものと同様および／または類似の方法を用い、また適当な出発物質を用いて調製できる。

実施例Ａ
未処理心臓およびシクロプロパンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルで処理した心筋細胞におけるグルコース酸化刺激
参照によりその全開示内容が本明細書に組み込まれるＪ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．１９９３； ２６４：１３５−１４４に記載されるように、ラット心臓を、単離された作動している心臓の６０分間の好気的灌流のためにカニューレ処置した。

雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（０．３〜０．３５ｋｇ）に、ペントバルビタールナトリウム（６０ｍｇ／ｋｇ ＩＰ）を用いて麻酔し、心臓を迅速に摘出し、大動脈をカニューレ処置し、３７℃で逆行性灌流を、静水圧６０ｍｍＨｇで開始した。心臓の過剰な組織を取り除き、次いで、肺動脈および左心房への開口部をカニューレ処置した。１５分Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流した後、Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆリザーバーからの大動脈流入ラインをクランプし、左心房流入ラインを開くことによって心臓を作動モードに切り替えた。灌流液を人工肺から左心房に、一定前負荷圧１１ｍｍＨｇで送達した。灌流液は、自発的に拍動している心臓からコンプライアンスチャンバー（１ｍｌの空気を含む）中に、また大動脈流出ライン中に排出された。後負荷は静水圧８０ｍｍＨｇで設定した。すべての作動している心臓を、カルシウム２．５ｍｍｏｌ／Ｌ、グルコース５．５ｍｍｏｌ／Ｌ、３％ウシ血清アルブミン（脂肪酸を含まない、熱ショックによる最初の分画、Ｓｉｇｍａ）を含有するＫｒｅｂｓ’−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ溶液を用い、および１．２ｍｍｏｌ／Ｌパルミテートを用いて灌流した。全開示内容が参照により本明細書に組み込まれるＪ Ｂｉｏ Ｃｈｅｍ．１９９２； ２６７：３８２５−３８３１に記載されるように、パルミテートはアルブミンと結合した。

灌流液を再循環させ、９５％Ｏ_２および５％ＣＯ_２を含む混合物でバブリングすることによってｐＨを７．４に調整した。

すべての灌流において自発的に鼓動する心臓を用いた。心拍数および大動脈圧は、大動脈流出ラインに連結したＢｉｏｐａｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．の血圧トランスデューサーで測定した。心拍出量および大動脈流は、それぞれ、前負荷および後負荷ラインにおいて、Ｔｒａｎｓｏｎｉｃ Ｔ２０６超音波フロープローブで測定した。冠血流は、心拍出量と大動脈流間の差異として算出した。心仕事量は、収縮期圧と心拍出量の積として算出した。
グルコース酸化の測定：グルコース酸化は、Ｓａｄｄｉｋ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏ Ｃｈｅｍ．１９９２； ２６７：３８２５−３８３１に論じられた手順に従って、心臓を［Ｕ−^１４Ｃ］グルコースを用い、灌流することによって同時に測定した。この参照文献の全開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。全心筋^１４ＣＯ_２生成は、６０分の好気性期間から１０分間隔で調べた。グルコース酸化速度は、Ｂａｒｂｏｕｒ ＲＬ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９８４； １９２３：６５０３−６０６２に記載のとおり、^１４ＣＯ_２生成の定量的測定によって調べた。この参照文献の全開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。対照群の^１４ＣＯ_２生成を、シクロプロパンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルで処理した群の^１４ＣＯ_２生成と比較した。結果は図１および表２Ａに示されている。

実施例Ｂ
（１）未処理の心臓およびシクロブタンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルで処理した心筋細胞におけるグルコース酸化刺激
シクロプロパンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの代わりに、１μＭ、１０μＭ、１００μＭおよび１０００μＭ量のシクロブタンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルを緩衝液に加えた以外は、実施例Ａの手順に従った。結果は図２および表２Ａに示されている。

（２）未処理の心臓およびシクロプロパンカルボン酸，２−イソプロポキシエチルエステルで処理した心筋細胞におけるグルコース酸化刺激
シクロプロパンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの代わりに、１μＭ、１０μＭ、１００μＭおよび１０００μＭ量のシクロプロパンカルボン酸，２−イソプロポキシ−エチルエステルを緩衝液に加えた以外は実施例Ａの手順に従った。結果は図３および表２Ａに示されている。

（３）未処理心臓および種々のシクロプロパンカルボン酸およびシクロブタンカルボン酸誘導体で処理した心筋細胞におけるグルコース酸化刺激
シクロプロパンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの代わりに、１００μＭまたは１０００μＭという量の、種々のシクロブタンカルボン酸誘導体、シクロプロパンカルボン酸誘導体およびシクロブタンカルボン酸を緩衝液に加えた以外は、実施例Ａの手順に従った。結果は表２Ａおよび表２Ｂに示されている。

（４）未処理の心臓およびシクロプロパンカルボン酸で処理した心筋細胞におけるグルコース酸化刺激
シクロプロパンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの代わりに、０．００１μＭ、０．０１μＭ、０１μＭ、１μＭ、１０μＭおよび１００μＭという量、シクロブタンカルボン酸を緩衝液に加えた以外は実施例Ａの手順にしたがった。 結果は図４に示されている。

ピルビン酸デヒドロゲナーゼ キナーゼ（ＰＤＨＫ）阻害アッセイ
このアッセイは、Ｊａｃｋｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３３４：２０３−７１１（１９９８）の方法に基づいている。ピルビン酸がアセチルＣｏＡに変換される場合に形成されるＮＡＤＨ（＠３４０ｎｍ）を測定するピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）アッセイの適応である。ＰＤＨＫ活性は、ＰＤＨＫのＡＴＰ活性化後に残存するＰＤＨ活性量として測定し、次いで、ＰＤＨを不活化する。ピルビン酸デヒドロゲナーゼ酵素複合体（ＰＤＣ）はＳｉｇｍａから購入する。内在するピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ（ＰＤＫ）活性を含む。

１）ＰＤＣは緩衝液Ａ（４０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．２、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、３０ｍＭ ＫＣｌ。１．５ｍＭ ＭｇＣ１２、０．２５ｍＭ アセチルＣｏＡ，、０．０５ｍＭ ＮＡＤＨ、２ｍＭジチオトレイトール、１０ｍＭ ＮａＦ）中、３７℃で４０分間プレインキュベートする。このステップにより総ＰＤＨ活性が高まる。

２）５４．５μｌのＰＤＫ反応溶液（１．８×緩衝液Ａ、５５μＭ ＡＤＰ＋１００μＭ ＡＴＰ、±薬物）に４５．５μｌのプレインキュベートした酵素（ステップ１）を加えることによってＰＤＫ反応を開始する。反応は３７℃で３分間実施し、次いで、１０μｌの停止溶液（５５ｍＭ ＡＤＰ、５５ｍＭ ピルビン酸）を加えることによって停止する。

３）次いで、９０μｌの緩衝液Ｂ（１２０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、０．６１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．７３ｍＭ ＭｇＣ１２、２．２ｍＭコカルボキシラーゼ、１１ｍＭ β−メルカプトエタノール、２．２ｍＭ ＮＡＤ、２．２ｍＭ ピルビン酸、１．１ｍＭ補酵素Ａ）を加え、３４０ｎｍで２分間動力学的に読み取ることによってＰＤＨ活性をアッセイする。

４）薬物阻害レベルを、１００％キナーゼ活性を有すると考えられる対照反応（薬物を加えていない）と比較する。
（ａ）ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼアッセイ溶液
緩衝液Ａ（１０×）
・４０ｍｌ １Ｍ ＭＯＰＳ
・１ｍｌの０．５Ｍ ＥＤＴＡ
・１０ｍｌの３Ｍ ＫＣｌ
・１０ｍｌの１５０ｍｌ ＭｇＣ１２
・１０ｍｌの２００ｍＭ ＤＴＴ
この緩衝液は４℃で作製し維持する。アッセイの当日、１ｍｌの２．５ｍＭアセチルＣｏＡに７．１ｍｌの緩衝液Ａ（１０×）を加える。１ｍｌの０．５ｍＭ ＮＡＤＨおよび０．９ｍｌの水を加えて緩衝液Ａ（１×）とする。

新しく作製した溶液：
・２．５ｍＭ アセチルＣｏＡ
・０．５ｍＭ ＮＡＤＨ
・５５０ｍＭ ＡＤＰ
・１ｍＭ ＡＴＰ
・２２ｍＭ コカルボキシラーゼ
・２２ｍＭ ＮＡＤ
・１１ｍＭ 補酵素Ａ
（ｂ）ＰＤＫ反応溶液

（）は、総ＰＤＨ活性を調べるために用いたキナーゼ陰性反応の容積を示す。

（ｃ）ＰＤＫ停止溶液

本発明のいくつかの実施形態が記載されている。それにかかわらず、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく種々の改変を行うことができるということは理解されるであろう。

対照と比較した、示された濃度のシクロプロパンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステル（ＭＭ０５４）での、単離され灌流された作動しているラット心臓モデルにおけるグルコース酸化を表すグラフである。 対照と比較した、示された濃度のシクロブタンカルボン酸，２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル−エステル（ＭＭ０５６）での、単離され灌流された作動しているラット心臓モデルにおけるグルコース酸化を表すグラフである。 対照と比較した、漸増濃度のシクロプロパンカルボン酸，２−イソプロポキシ−エチルエステル（ＭＭ０７０）での、単離され灌流された作動しているラット心臓モデルにおけるグルコース酸化を表すグラフである。 対照と比較した、漸増濃度のシクロプロパンカルボン酸（ＭＭ００ｌ）での、単離され灌流された作動しているラット心臓モデルにおけるグルコース酸化を表すグラフである。 対照と比較した、示された濃度のジクロロアセテート（ＤＣＡ）、化合物１５（ＭＭ０６８）、化合物４１（ＭＭ０９４）および化合物４５（ＭＭ０９８）での、単離され灌流された作動しているラット心臓モデルにおけるグルコース酸化を表すグラフである。 対照と比較した、示された濃度のＤＣＡ、シクロプロパンカルボン酸（ＭＭ００１）およびシクロブタンカルボン酸（ＭＭ０１３）での、単離され灌流されたラット心臓モデルにおけるグルコース酸化を表すグラフである。 対照と比較した、シクロプロパンカルボン酸（ＭＭ００１）の濃度の、単離され灌流されたラット心臓モデルにおけるグルコース酸化を表すグラフである。 対照と比較した、漸増濃度のシクロブタンカルボン酸（ＭＭ０１３）の、単離され灌流されたラット心臓モデルにおけるグルコース酸化を表すグラフである。 実施例Ｃに記載されるＰＤＨＫアッセイを用いて、対照のパーセントとして、１ｍＭのＤＣＡまたはシクロプロパンカルボン酸（ＭＭ００１）でのピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ（ＰＤＨＫ）活性を表すグラフである。 実施例Ｃに記載されるＰＤＨＫアッセイを用いて、対照のパーセントとして、１ｍＭのＤＣＡ、シクロプロパンカルボン酸（ＭＭ００１）またはシクロプロパンカルボン酸のＣｏＡエステル（ＭＭ０５３）でのＰＤＨＫ活性を表すグラフである。 対応するＣｏＡエステル（ＭＭ０５３）を生じるシクロプロパンカルボン酸（ＭＭ００１）の細胞内活性化機構の概略を表す図である。

Claims (1)

1. 温血動物から得られた細胞、組織または器官においてピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ（ＰＤＨＫ）を阻害するためのインビトロの方法であって、該細胞、組織または器官を、補酵素Ａによって修飾されてＣｏＡエステルを形成するＣ _３ またはＣ _４ シクロアルキル化合物で処理する工程を包含し、該化合物が、シクロプロパンカルボン酸またはシクロブタンカルボン酸あるいはその薬学的に受容可能な塩である、方法。

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