JP4694786B2 - 乳房、前立腺および卵巣の癌の予測のための、Shcタンパク質に関連する方法および組成物 - Google Patents
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Description
(a)前記腫瘍からの細胞の第一サンプルを前記チロシンキナーゼ阻害物質と、前記サンプルにおいてチロシンリン酸化Shcの形成が可能であろう条件下で(前記チロシンキナーゼ阻害物質の非存在下において)、接触させることと;
(b)前記サンプルに存在するチロシンリン酸化Shcの量を決定することと;および
(c)工程(b)で決定されたチロシンリン酸化Shcの量と前記腫瘍からの細胞の第二サンプル(前記チロシンキナーゼ阻害物質と接触していない)に存在するチロシンリン酸化Shcの量とを比較することと(ここで、前記第二サンプルに存在するチロシンリン酸化Shcの量が前記第一と比較して多いことが、前記腫瘍を前記チロシンキナーゼ阻害物質で良好に治療できるとの尤度を示す)、を含む方法。
「攻撃的(Aggressive)」は、腫瘍に関して、被験者において再発する素因(predisposition)を有することを意味する。「攻撃的」は、腫瘍細胞に関して、係る細胞が再発する素因を有する腫瘍に由来する細胞であることを意味する。
(a)前記腫瘍からの細胞の第一サンプルを前記チロシンキナーゼ阻害物質と、前記サンプルにおいてチロシンリン酸化Shcの形成が可能であろう条件下で(前記チロシンキナーゼ阻害物質の非存在下において)、接触させることと;
(b)前記サンプルに存在するチロシンリン酸化Shcの量を決定することと;および
(c)工程(b)で決定されたチロシンリン酸化Shcの量と前記腫瘍からの細胞の第二サンプル(前記チロシンキナーゼ阻害物質と接触していない)に存在するチロシンリン酸化Shcの量とを比較することと(ここで、前記第二サンプルに存在するチロシンリン酸化Shcの量が前記第一と比較して多いことが、前記腫瘍を前記チロシンキナーゼ阻害物質で良好に治療できるとの尤度を示す)、を含む方法。
材料および方法
ロジャーウイリアムス癌センターデータベースおよび腫瘍登録所(tumor registry)の12年にわたる臨床転帰(clinical outcome)の遡及研究(少なくとも5年追跡を含む)において、疾病の再発に関連した10%の死亡率がステージ1乳癌(n=212 患者)と診断された患者において観察された。従って、攻撃的な、早期段階の乳癌を低浸潤性(less invasive)の病変(lesions)と識別し得る分子マーカーの必要性は明白であり、次に外科的およびアジュバントの治療オプションへと導かれる。98の保存された(archival)、ホルマリン固定された診断上の乳房腫瘍バイオプシー(ステージ0からステージ4の患者)における、リン酸化Shc(PY−Shc:活性化された、アダプタタンパク質、チロシンキナーゼ シグナル伝達および腫瘍形成を促進する)およびp66−Shc(Shcアイソフォーム、このシグナルカスケードを阻害する)の免疫組織化学的な染色により、正の直線的な相関がPY−Shcのp66−Shcに対する染色強度と患者ステージとの間に認められた(r=0.4;p<0.0001);高いPY−shc/低いp66−Shcが診断時の進歩した(advanced)疾病ステージに対応している。PY−Shcのp66−Shcに対する比率を、ステージ1の乳癌(breast cancer)患者の原発性腫瘍において分析し、次に患者の転帰(5yr追跡)を遡及的に比較した場合、疾患の再発(0.66±0.03;n=30)がない患者からランダムに選択した腫瘍に対する比率は、疾患が再発した患者と比較して有意に低かった(0.90±0.07;n=8)(p<0.005)。PY−Shcのp66−Shcに対する比率が、生存可能な予後マーカーとして、攻撃的な初期ステージの乳癌を同定するために利用し得ることを、これらの研究は示唆している。
PY[317]−Shcに対するウサギ抗体:ニュージーランド・ホワイトラビットをN−アセチル化チロシンリン酸化Shcペプチド(N−acetylated tyrosine−phosphorylated Shc peptide)で免疫した
既知の方法(given direction)にしたがって、リサーチジェネティックス(Huntsville, Alabama)がN−アセチル−LeuPheAspAspProSer([P]Tyr)ValAsnValGlnAsnLeuCys(ヒトShcアミノ酸311から323に対応し、付加されたシステインC−末端をキャリアタンパク質であるキーホールリンペットヘモシニアン(KLH)とのマレイミド・カップリングを促進するために有している)。ペプチド−KLHをフロイントアジュバントに乳化させ、全体で0.1mgのペプチドをニュージーランド・ホワイトラビットの複数の背側領域に注射した。ウサギを2週のインターバルで再免疫し、各免疫の後に1週間飼育し、そして10週後に終了した。抗体を、Shcホスホペプチドにおける免疫特異的なアフィニティークロマトグラフィーにより精製し(共有結合によりウルトラリンクヨードアセチルマトリックス(ピアス)に連結させた、製造者の指示に従って実施した)、0.23MグリシンHcl緩衝剤(pH2.8)で溶出し、1/10容積の1M TRIS(シグマ, St. Louis)、pH9.0でpHを中和した。
リサーチジェネティックス(Research Genetics)と契約して親水性のペプチド、SerGlySerThrProProGluGluLeuProSerProSer AlaSerSerLeuが合成された、このペプチドはp66 Shc1−110 CH2ドメインに由来する。このペプチドは、キャリアタンパク質(KLH)に連結され、これを使用してニュージーランド・ホワイトラビットを免疫した、この免疫は標準の10週の免疫化/チャレンジ・プロトコール(上記で詳細に説明したとおりの)を使用して実施された。10週間で採取した抗血清を、免疫ペプチドに対する反応性に関して試験した(固相ELISAにおいて)。ウサギ#405からの抗血清を、免疫ペプチドと反応させた(約1/5000の力価)。ペプチド特異的な抗体をウサギ#405抗血清から親和性精製した、この際に免疫ペプチド(共有結合性にウルトラリンクヨードアセチルマトリックス(ピアス)に付着させた、製造者の指示にしたがって行った)を用い、0.23MグリシンHcl緩衝剤(pH2.8)で溶出して、1/10容積の1M TRIS(シグマ, St. Louis)、pH9.0中でpHを中和した。精製抗体を、ヒト組換え型GST−p66 Shc CH2ドメイン〔GSTおよびp66 Shcの最初の110アミノ酸(これらのアミノ酸はp52 Shcアイソフォームと比較してp66 Shcにおいてユニークである)から構成された融合タンパク質〕を認識する能力に関して試験した。ヒト組換え型Gst−p66 Shc1−110 細菌性の発現ベクターを、Prof.Pelicci(Milan, イタリア)から入手した。我々は、このタンパク質を、大腸菌で発現させ、グルタチオン親和性マトリックスを用いて親和性精製した。SDS PAGE分析およびクーマシーブルー染色によって、精製タンパク質が3つの主要なバンドからなることが示され、融合タンパク質の予想された分子量付近のバンドに、より早く移動するバンド、より遅く移動するマイナーバンド群を伴っていた。GSTに対する抗体での免疫ブロットは、全てのバンドがGSTを含有することを示した。ウサギ#405は、最も早く移動した種以外の全てと反応した(データ示さず)。このことは、最も早く移動したバンドはGSTのみ(またはGSTおよびp66CH2の小さい領域であって、免疫化に使用されたp66エピトープを含有しないもの)を含有することを意味していると解釈された。他のバンド(予想された分子サイズ付近の)は、インタクトな(intact)GST−p66 Shc CH2融合タンパク質および本タンパク質のタンパク分解性の断片(clips)であると思われ、最高の分子量を有するタンパク質は、まず確実にGST混合性のジスルフィド反応により生じた、GST−p66Shc CH2およびそのタンパク分解性断片の二量体である(未発表の観察)。従って、小さいCH2ペプチドに対して産生された抗血清は全CH2ドメインを認識するのみならず、これをイムノブロット上で実施することが可能で、相対的に特異的であるように思われる(それはGSTのみのバンドと反応しない)。
発現され、精製され、そして品質を調節されたグルタチオン−S−トランスフェラーゼ(Gst)−p66 Shc CH2融合タンパク質(上記を参照されたい)を使用して、10 BALB/cマウスを免疫した(50 gを40 1のTitermax(Cytrex), アジュバント中に)。何回かのブースト後に2匹のマウスは高い力価の抗体を産生し、これらの抗体は、ELISAによりCH2 ドメインを認識し、乳房細胞の洗剤抽出物からのp66 Shcを特異的に免疫沈降して免疫ブロットし、p66 Shcを特異的に乳癌の免疫組織化学的な分析において認識した。少なくとも1月の休養後、これらのマウスのうち1匹をday−4に40μgの可溶性GST−CH2(アジュバントなし)で免疫し、また他のマウスをday−3に40μgの可溶性GST−CH2を静脈内注射して免疫した。次にday 0に、前記マウスを安楽死(二酸化炭素吸入により)させ、彼らの脾臓を無菌的に摘出し、脾臓細胞を回収し、X8−653骨髄腫融合パートナーと融合させた、この際、ハイブリドーマ・キット(StemCell Technologies)を用いて製造者の指示に従って実施した。day 1に、細胞を10、100mmの組織培養プレートに播種した(このプレートはメチルセルロース含有培地にアミノプテリン選択薬を含有させたものを含んでいる)。12日後、各プレートは約400個のクローンを含んでいた。
HBL−100細胞(アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション[ATCC], Rockville, MD)は、非腫瘍化のヒト乳房上皮細胞株であり、高レベルのEGFレセプターを発現する。HBL−100/wt Shc 26およびHBL−100/dn Shc 17は、それぞれ野生型p52Shc−GSTまたはドミナントネガティブ変異体p52ShcY317F−GSTの何れかのcDNA(構成的なEF1αプロモータにより駆動される発現を伴う)を保持するpEBGベクターでのリポフェクタミン・プラス(Lipofectamine− Plus)トランスフェクションの後にG418で選択圧をかけて得られた[方法の詳細に関しては、42を参照されたい]。SKBR3細胞(ATCC)およびMDA−MB−453細胞(ATCC)は、形質転換した上皮細胞株であり、EGF受容体ファミリーのErbB2メンバーを過剰発現するヒト乳癌に由来し、それゆえに構成的にチロシンリン酸化したShcを有している。SKBR3は、非常に少量のp66 Shc、並びに正常な量のp52およびP46 Shcを発現しており;MDA−MB−453はp66 Shcアイソフォームを発現していない。これらの細胞株の全ては、10%ウシ胎児血清(ギブコ)、およびpen/strep 1X 抗生物質(ギブコ)を添加したIMDM(ギブコ)中で、37℃、5%二酸化炭素、加湿した大気中で培養された。
イミュンロン(Immunlon)IIマイクロタイターウェルを、PY−Shcまたはp66Shc CH2ペプチド(1μg/50μll)でPBS中でコートし、1%BSA(PBS中で)でブロックし、次に各々試験するウサギ抗体またはモノクローナル抗体と、ホースラディッシュペルオキシダーゼをウサギ免疫グロブリンに対するロバ抗体(または必要に応じて、ウサギ抗マウス免疫グロブリンに)に連結した抱合体と、そして最終的に色素生産性HRP基質であるO−フェニレンジアミン(O−phenylenediamine)と逐次インキュベーションした。ABS 450nmをモニターした。
細胞を、EGF(100ng/mlで10または20min)で指摘のとおりに刺激するか又は刺激せず、次に1%Triton X−100で緩衝剤(プロテアーゼ、キナーゼおよびホスファターゼ阻害物質を含有している)中で抽出した[38]。
細胞をチャンバースライドに播種し、約60−65%コンフルエンスに達するまでインキュベーションした。細胞を、いくつかのチャンバーをEGF(100ng/mlで20min)で刺激する前に、フェノールレッド非含有培地中で血清飢餓させた。
保存され、ホルマリン−固定され、パラフィン包埋された未染色の標本を、ロジャーウイリアムス癌センター腫瘍登録所の情報に基づいて病理学部から入手し、患者の記録とクロス・チェックした。1990から1995に乳癌と診断された、97個体の以前に未治療の患者から摘出された腫瘍を、遡及研究(retrospective study)に利用した。研究集団は、63yrsの年齢の中央値を診断時に有し、6患者はAJCステージ0(DCIS)、39はAJCステージ1、43はAJCステージ2、5はAJCステージ3、および4はAJCステージ4疾患を有する患者から構成され、5.9年の平均追跡時間(mean follow−up time)を有し、5年以前に疾患が再発した患者は除外されている。外科的処置に加えて、患者は引き続いて、多様な、放射線治療、ホルモン、タキソールまたは化学療法を受けた。転移性疾患ではない93の患者のうち、64は腫瘍細胞に関して節ネガティブであった。全体で、17患者が再発性疾患(recurring disease)を生じ、そのうち15はAJCステージ<4であった。
我々の腫瘍登録所を介して同定された、保存され、ホルマリン固定され、パラフィン包埋された腫瘍標本を、回収し、5ミクロンの切片に切断し、スライド上にマウントし、キシレンおよびエタノールを用いて脱パラフィン処理し、そしてPY−Shcまたはp66 Shcに対する我々のポリクローン性のウサギ抗体(またはp66 Shcに対するモノクローン性のマウス抗体)で触媒シグナル増幅(CSA)ペルオキシダーゼ・システム(DAKO, Carpinteria, CA)を用いて、CSAアンシリアリーシステム(DAKO)での標的捕獲および内在性のペルオキシダーゼ消光した後に染色した(キットの指示に従って)。
DI={[(強度スコア+分布スコア/2)]/X}/10、ここで:強度スコア=1から5(0=ネガティブ、バックグランド染色のみ)
1=低レベル、点状(punctate)および非均質(non−uniform)の染色パターン
2=低レベル、点状および均質の染色パターン
3=低レベル、均等に分布した(evenly distributed)細胞染色パターン
4=中程度レベル、均等に分布した(evenly distributed)細胞染色パターン
5=高レベル、均等に分布した(evenly distributed)細胞染色パターン
分布スコア=管領域染色ポジティブ(ductal region staining positive)(10=100%;5=50%, etc.)
X=異なる強度スコアを有する領域の数
(例えば:[(5+2/2)+(4+5/2)+(2+3/2)/3]/10=0.53、これは5の強度で染色されたバイオプシーの20%、4の強度で染色された50%、および2の強度で染色された30%を意味する)
PY−Shcおよびp66 Shc染色の指標の双方が独立したマーカーとして使用できるのみならず(以下のデータを参照されたい)、上記で議論した生化学的な機能から、任意の特定の腫瘍における(または、更に好ましくは、腫瘍は不均一なので、任意の1細胞における)PY−Shcのp66 Shcに対する相対的な染色レベルにより、腫瘍の潜在的な攻撃性に関する更に有用な指標が提供されるだろうことが期待された。結果的に、これはPY−Shcのp66 Shcに対する指標の比率を計算することにより与えられた。
AJCステージ0から4の乳癌を有する患者から構成される試験集団の予備的分析
我々の研究集団(彼らのうち17が再発性疾患を生じた)における97患者に関するPY−Shcおよびp66の染色指標の分析によって、有意な可変性(variability)が明らかとなったが、疾患が再発した患者と疾患が再発しなかった患者とに対する値の間に明らかな差が存在していた(特に比(Ratio)インデックスに関して)(表1)。
二分化されたPY−Shc「生存(Survival)」曲線のLogランク試験(Rank test)比較によって、高いPY−Shc患者が非常に有意に高い比率の疾患再発を(低いPY−Shc集団と比較して)実際に有していることが明らかとなった〔P>X2 0.01(P>X2 of 0.01)〕。高比率(High Ratio)の患者に関して、同様の結論に達した。低いPY−Shcおよび低い比率の患者は、高いPY−Shc(28%)および高い比率(34%)の患者と比較して、非常に低い割合で再発性疾患を患う(それぞれ9%および7%、表2を参照されたい)。
100,000以上の女性が、2002年に早期ステージの乳癌(ステージ0またはステージ1)と診断されると推定される。この大きく臨床的に問題のあるグループの女性に関して信頼できる予後マーカーは存在しないので、AJCステージ0および1の癌(45被験者において10例の再発性疾患)の亜集団におけるShcマーカーの予測値(prognostic value)が確定された。
さらに大きい割合の乳癌患者(全てのステージ0、1、多数のステージ2および少数のステージ3患者から構成される)は、局所のリンパ節に検出可能な程度に伝播していない疾患を有している(節ネガティブな患者)。これらの患者はエストロゲン受容体の状態、腫瘍サイズおよび相対的に低リスク群および高リスク群への組織学的グレードに基づいて細分されるが[1]、異なるリスク群分類は非常に不十分な予測の手段(tool)を提供する。以上のことから、患者(61患者、そのうち13が再発性疾患を発症した)のこのサブセットにおけるPY−Shcおよびp66−Shcレベルを分析した。これらの節ネガティブ患者のK−MプロットをPY−Shcおよびp66 Shcのゼロ化値へと調整することによって、腫瘍再発の理論的な割合が30%から4.6%(図13)へと大きく減少し、このことは腫瘍再発の多くが高くなったPY−Shcおよび低下したp66−Shcレベルによると説明できることを示唆している。Shc比インデックスのCox比例ハザード分析は、優れたモデル適合(Chi2=6.2, 確率>Chi2 0.013)および高度に有意な(P>0.005)ハザード比率(3.2)(表5を参照されたい)を示した。
乳癌は、女性が診断されるもっとも一般的な癌であり、米国単独で毎年約200,000の新しい症例が発症している[1]。乳癌の最初の発生、同様にその攻撃性の程度は、多様な成長因子及びそのレセプター(例えば、HER−2/neu、他のEGFレセプターファミリーメンバー、およびIGF−1)からの、インテグリンからの、及びGタンパク質共役型レセプターからのシグナル伝達によって部分的にコントロールされる。実質的に全てのこれらのシグナルには、1以上のチロシンキナーゼが関与している。
ヒト乳癌細胞におけるShcチロシンリン酸化が、組織培養における効果的なTKIsへの短時間(<2hr)の曝露によって阻害できることが以前から示されている[54, 16]。ヒトの乳房腫瘍に関して、係るアッセイは、摘出した原発腫瘍を18g針でコアリングすること及びそのコアを0.5mmのディスクにスライスすることを含むだろう。ディスクはHank’s溶液でリンスされ、96ウェル組織培養プレートのウェル中に配置され、このウェルの各々には1以上のTKI(100μlのHanks中)が含有されており、約2hrs、37°Cで5%C02チャンバー中で処理されるだろう。組織のディスクは、次に回収され、固定され、パラフィン包埋され、そしてPY−Shcの定量的な免疫組織化学的な染色に対して処理されるだろう。腫瘍PY−Shcのレベルを減少させるTKIsの能力は、これらのTKIsに対する腫瘍の感受性と相関することが予測される。
発明の付加的な態様
免疫学に基づくアッセイ
サンドイッチELISAでは、pan−抗−Shcを腫瘍抽出の捕獲抗体として使用できる、次にPY−Shc特異的およびp66 Shc特異的な抗体を検出に関して使用できる。或いは、前記抗体を逆の順序(order)で使用できる。
(a)新規方法が最近開発され、その方法は個々のタンパク質の量、および更には特定のアミノ酸が翻訳後修飾されたタンパク質の量さえも定量する能力を有する。
ある種の癌遺伝子(oncogenes)/発癌性タンパク質(oncogenic proteins)による腫瘍性転化(Neoplastic transformation)は、少なくともRas/MAPキナーゼに対するPY−Shcシグナル伝達経路の活性化を要求しないと信じられている。
Claims (39)
- 乳房の腫瘍細胞が再発する素因を有するかどうかを決定するための方法であって、前記腫瘍細胞に存在するp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量をin vitroで決定することと、およびそのように決定された量を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量である標準と比較して、前記腫瘍細胞が再発する素因を有するかどうかを決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shc, 標準と比較して高レベルのリン酸化Shc, 標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記腫瘍細胞が再発する素因を有することを示す方法。
- 請求項1に記載の方法であって、p66-Shcの量のみが決定される方法。
- 請求項1に記載の方法であって、リン酸化Shcの量のみが決定される方法。
- 請求項1に記載の方法であって、p66-Shcおよびリン酸化Shcの双方の量が決定される方法。
- 乳房の腫瘍細胞が再発する素因を有するかどうかを決定するための方法であって、前記腫瘍細胞における、p66-Shcのリン酸化Shcに対する比率および/またはリン酸化Shcのp66-Shcに対する比率をin vitroで決定することと、およびそのように決定された比率を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcとリン酸化Shcとの比率である標準と比較して、前記腫瘍細胞が再発する素因を有するかどうかを決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記腫瘍細胞が再発する素因を有することを示す方法。
- 請求項1または5に記載の方法であって、前記腫瘍細胞がヒト腫瘍細胞である方法。
- 請求項1または5に記載の方法であって、前記腫瘍細胞が、リンパ節には腫瘍細胞が存在しない被験者から取得された細胞であることを特徴とする方法。
- 請求項1または5に記載の方法であって、前記腫瘍細胞が乳房腫瘍細胞である方法。
- 請求項1または5に記載の方法であって、前記の決定する工程が、p66-Shcまたはリン酸化Shcと特異的に結合する検出可能な抗体の使用を含む方法。
- 請求項1または5に記載の方法であって、前記の決定する工程がフローサイトメトリーまたは免疫組織化学の使用を含む方法。
- 請求項1または5に記載の方法であって、前記腫瘍細胞が分離される方法。
- 請求項1または5に記載の方法であって、前記腫瘍細胞が組織サンプル内に存在する方法。
- 被験者における、乳房の腫瘍が再発する素因を有するかどうかを決定するための方法であって、前記腫瘍の癌性細胞に存在するp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量をin vitroで決定することと、およびそのように決定された量を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量である標準と比較して、前記腫瘍が再発する素因を有するかどうかを決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shc, 標準と比較して高レベルのリン酸化Shc, 標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記腫瘍細胞が再発する素因を有することを示す方法。
- 請求項13に記載の方法であって、p66-Shcの量のみが決定される方法。
- 請求項13に記載の方法であって、リン酸化Shcの量のみが決定される方法。
- 請求項13に記載の方法であって、p66-Shcおよびリン酸化Shcの双方の量が決定される方法。
- 被験者における、乳房の腫瘍が再発する素因を有するかどうかを決定するための方法であって、前記腫瘍の癌性細胞に存在する、p66-Shcのリン酸化Shcに対する比率および/またはリン酸化Shcのp66-Shcに対する比率をin vitroで決定することと、およびそのように決定された比率を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcとリン酸化Shcとの比率である標準と比較して、前記腫瘍が再発する素因を有するかどうかを決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記腫瘍細胞が再発する素因を有することを示す方法。
- 被験者における、乳房の腫瘍が再発する素因を有するかどうかを決定するための方法であって、前記腫瘍に存在する複数の癌性細胞の各々におけるp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量をin vitroで決定することと、およびそのように決定された量を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量である標準と比較して、前記腫瘍が再発する素因を有するかどうかを決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shc, 標準と比較して高レベルのリン酸化Shc,標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記腫瘍細胞が再発する素因を有することを示す方法。
- 被験者における、乳房の腫瘍が再発する素因を有するかどうかを決定するための方法であって、前記腫瘍に存在する複数の癌性細胞の各々における、p66-Shcのリン酸化Shcに対する比率および/またはリン酸化Shcのp66-Shcに対する比率をin vitroで決定することと、およびそのように決定された比率を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcとリン酸化Shcとの比率である標準と比較して、前記腫瘍が再発する素因を有するかどうかを決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記腫瘍細胞が再発する素因を有することを示す方法。
- 請求項13, 17, 18 または19に記載の方法であって、前記被験者がヒトである方法。
- 請求項13,17, 18 または19に記載の方法であって、前記被験者のリンパ節には腫瘍細胞が存在しない方法。
- 請求項13,17, 18 または19に記載の方法であって、前記腫瘍細胞が乳房腫瘍細胞である方法。
- 請求項13,17, 18 または19に記載の方法であって、前記の決定する工程が、p66-Shcまたはリン酸化Shcと特異的に結合する検出可能な抗体の使用を含む方法。
- 請求項13,17, 18 または19に記載の方法であって、前記の決定する工程がフローサイトメトリーまたは免疫組織化学の使用を含む方法。
- 請求項13,17, 18 または19に記載の方法であって、前記腫瘍細胞が組織サンプル内に存在する方法。
- 乳房の腫瘍を患っていると診断された被験者に関して、前記被験者の一次治療後に前記腫瘍の再発を患う尤度を決定する方法であって、前記腫瘍の癌性細胞に存在するp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量をin vitroで決定することと、およびそのように決定された量を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量である標準と比較して、再発の尤度を決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shc, 標準と比較して高レベルのリン酸化Shc, 標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記被験者が腫瘍の再発を患うことを示す方法。
- 請求項26に記載の方法であって、p66-Shcの量のみが決定される方法。
- 請求項26に記載の方法であって、リン酸化Shcの量のみが決定される方法。
- 請求項26に記載の方法であって、p66-Shcおよびリン酸化Shcの双方の量が決定される方法。
- 乳房の腫瘍を患っていると診断された被験者に関して、前記被験者の一次治療後に前記腫瘍の再発を患う尤度を決定するための方法であって、前記腫瘍の癌性細胞に存在する、p66-Shcのリン酸化Shcに対する比率および/またはリン酸化Shcのp66-Shcに対する比率をin vitroで決定することと、およびそのように決定された比率を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcとリン酸化Shcとの比率である標準と比較して、再発の尤度を決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記被験者が腫瘍の再発を患うことを示す方法。
- 乳房の腫瘍を患っていると診断された被験者に関して、前記被験者の一次治療後に前記腫瘍の再発を患う尤度を決定するための方法であって、前記腫瘍に存在する複数の癌性細胞の各々におけるp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量をin vitroで決定することと、およびそのように決定された量を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcおよび/またはリン酸化Shcの量である標準と比較して、再発の尤度を決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shc, 標準と比較して高レベルのリン酸化Shc, 標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記被験者が腫瘍の再発を患うことを示す方法。
- 乳房の腫瘍を患っていると診断された被験者に関して、前記被験者の一次治療後に前記腫瘍の再発を患う尤度を決定するための方法であって、前記腫瘍に存在する複数の癌性細胞の各々における、p66-Shcのリン酸化Shcに対する比率および/またはリン酸化Shcのp66-Shcに対する比率をin vitroで決定することと、およびそのように決定された比率を、少なくとも5年間再発しなかった乳癌患者の腫瘍細胞におけるp66-Shcとリン酸化Shcとの比率である標準と比較して、再発の尤度を決定することと、を含み、標準と比較して低レベルのp66-Shcの高レベルのリン酸化Shcに対する比率および/または標準と比較して高レベルのリン酸化Shcの低レベルのp66-Shcに対する比率は前記被験者が腫瘍の再発を患うことを示す方法。
- 請求項26,30, 31, または32に記載の方法であって、前記被験者がヒトである方法。
- 請求項26,30, 31, または32に記載の方法であって、前記被験者のリンパ節には腫瘍細胞が存在しない方法。
- 請求項26,30, 31, または32に記載の方法であって、前記腫瘍細胞が乳房腫瘍細胞である方法。
- 請求項26,30, 31, または32に記載の方法であって、前記の決定する工程が、p66-Shcまたはリン酸化Shcと特異的に結合する検出可能な抗体の使用を含む方法。
- 請求項26,30, 31, または32に記載の方法であって、前記の決定する工程がフローサイトメトリーまたは免疫組織化学の使用を含む方法。
- 請求項26,30, 31, または32に記載の方法であって、前記腫瘍細胞が組織サンプル内に存在する方法。
- 請求項26,30, 31, または32に記載の方法であって、前記一次治療が、外科的処置、放射線照射、ホルモン治療および化学療法からなる群から選択される治療を含む方法。
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