JP4685237B2 - 経口運搬用共重合体組成物 - Google Patents

Description

【０００１】
本出願は、１９９５年６月７日に出願された米国出願第０８／４７８，９７９号、および１９９７年１０月１５日に出願された米国出願第０８／９５１，０７９号の一部継続出願であり、１９９５年６月７日に出願された米国出願第０８／４７８，９７８号の分割出願であり、これは１９９５年１月１７日に出願された米国出願第０８／３７４，４０６号の継続出願であり、これは順に１９９２年１０月８日に出願された米国出願第０７／９５７，９９８号の継続出願である。
【０００２】
発明の分野
本発明は、いくつかの生物学的薬剤経口投与に有用な共重合医薬組成物に関するものである。
【０００３】
発明の背景
現在、様々な生物学的薬剤が病気および疾患の治療に利用されている。これら薬剤の多くは、局所、直腸、膣に、肺経由または非経口で投与されうる。
【０００４】
しかしながら、非経口投与（例えば筋肉内、皮下、腹腔内、動脈内、静脈内）、同様に直腸、膣および肺経由は、しばしば不便か、経費が高く、またはその両方である。このように経口投与はこれら他の経路に比べていくつもの利点を有する。費用効果がある投与形態は患者にとって都合がよい。
【０００５】
本発明は、これらのことに鑑み、（１）化学療法薬のための医薬組成物および方法、および（２）生物学的薬剤のための医薬組成物、特にその標的細胞または組織は該生物学的薬剤に耐性を持っているものに関する。
【０００６】
化学療法薬のいくつかは、生理的な流体中で溶解性および安定性が低い。しばしば化学療法薬は、細胞膜をほとんど透過できない。さらにこれら薬剤の多くは、それらが標的癌に到達する前に、血流中でその他の非特異的相互作用も同様に、血漿タンパクと結合してしまう。
【０００７】
多剤耐性
効果的な化学療法的処置にとっての主要な障害は、多くの腫瘍および微生物感染症を引き起こす生物学的薬剤への耐性である。腫瘍細胞の抗癌剤への感受性は、化学療法的摂生中、該薬剤によって１０³も減少する。このような耐性が一つの因子に対して発生した場合、しばしばその標的細胞は、それらが以前晒されていなかったいくつかの他の生物学的薬剤に対しても耐性が生じる。Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ等、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，１２：２４３〜２５３（１９９２）；Ｇｏｏｄｍａｎ’ｓ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ｔｈ Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４を参照。このような耐性が生じる一つのメカニズムとして、膜輸送タンパクｇｐ−１７０（糖タンパク質ＰまたはＰ−ｇｐタンパク質）の関与が信じられている（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ等、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，１２：２４３〜２５３（１９９２）を参照）。
【０００８】
現在、これらの難点は、以下に示す特性を持つ一つまたはそれ以上のブロック共重合体のミセルを含む配合物中に、問題の生物学的薬剤を投与することによって克服されうることが見出された。さらに現在、これらのブロック共重合体のある種のサブセットが、薬剤を運搬しかつ生物学的薬剤への耐性を克服するのに特に効果的であることも見出された。
【０００９】
血液脳バリアー
脳は循環血液から孤立しており、これは脳内で血管の内皮細胞内張り（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｉｎｇ）が、脳の間質腔へ拡散することができる分子について他の臓器よりも選択性が高いためである。脳が隔離されているメカニズムは、しばしば“血液−脳バリアー”のように言及されることがある。血液−脳バリアーにより、脳または脳内の病気に作用するように意図された生物学的薬剤は、しばしばその血液−脳バリアーによる拡散バリアーに対して埋め合わせするために、高用量を投与しなければならない。高用量が投与された動物は、かなり高い毒作用または他の副作用を経験する危険を負う。それゆえに血液−脳バリアーを通過する化学療法薬の透過性を増強することが切望されている（Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅ ｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｅｉｇｈｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐ．１１を参照）。
【００１０】
脳および他の組織内で、生物学的薬剤がその薬剤が有益に作用することが予想される部位の特殊な組織を標的にすることが、場合によって望ましい。この望ましい点は特に、潜在的に高い毒性を非標的組織に対して持っている化学療法薬に対してあてはまる。例えば、多くの抗癌化学療法薬は、複製細胞を選択的に被毒することによって機能する。このメカニズムは必然的に、例えば重要な血液細胞のいくつかを生産する骨髄細胞等の迅速な複製細胞を標的にしている。癌部位から末端への濃度が減少する一方で、癌性組織または癌が存在する組織中で有効な化学療法薬の濃度が維持されるように化学療法薬の生体内分布が変化している場合、毒性副作用の範囲は一般的に減少する。
【００１１】
加えて、癌、抗生物質およびその他の生物学的薬剤が毒性を示すことから、化学療法的指標に逆に作用することなく投与量を低くすれば有益である。
【００１２】
中枢神経系の腫瘍が特に困難な治療的課題を提供している。このような腫瘍はしばしば外科的に切除することが困難であり、外科的切除は望ましくない結果を生じうる。これらの腫瘍は放射性で治療することが困難であり、なぜならこれらはしばしば正確に位置を示すことが難しく、さらに場合によって腫瘍患者の健康状態に決定的な組織に近すぎるためである。このような腫瘍は、投与される化学療法薬の腫瘍に到達しうる量が非常に少ないために、標準的な化学療法では効果的に治療されない。その腫瘍に対する有効量は、標準用量が一般的に許容されない副作用が生じる量に近いために、より高い投与量を患者に投与することによって増加させることができない。
【００１３】
サイトカイン
サイトカインは細胞によって分泌されるポリペプチドである。サイトカインは免疫系で細胞間相互作用に関する重要な役割を持ち、それゆえに癌、ウイルス性またはその他の病気の治療に対して潜在的に有効な薬剤である。これらのタンパク因子の作用メカニズムは、多くの病理学的プロセスに対して順に防御する免疫系の特異的な活性化に関連している。すでに臨床的な実践に使用されているインターフェロン（Ｉｎｆｓ）を基礎にした抗ウイルス製剤がよく知られている。例えば、抗癌剤としてのインターロイキン−２（ＩＬ−２）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の臨床試験は、有望な結果を示した。ＩＬ−４および他のリンフォカインを基礎とした新規薬剤を創造するために、相当な研究がなされている。
【００１４】
一般的にいえることは、微生物による大量生産において三次構造の形成が不正確なことと、必要な翻訳後修飾が欠けていることにより、組み換えサイトカインは、標的細胞状の特異的受容体に対して低い親和性しか持たない。このような組み換え体の製剤は低い生物学的活性を示し、かつ非常に高い投与量を必要とし、顕著な副作用を生じる。
【００１５】
ホルモン
ホルモンは、様々な代謝の場を制御する内分泌腺によって分泌される化学的メッセンジャー分子である。例えばインスリンは、脾臓のランゲルハンス島から分泌されるタンパク質ホルモンである。インスリンは、糖の異化および糖原分解を活性化し、それによって多くの細胞への糖の拡散を促進する。インスリン形成不能は、糖尿病を引き起こし、これは現在食事制限と組み合わせて、インスリン注射をして血糖値を制御することによって治療されている。このようにインスリン生産は、特に分子生物学および酵素学に関連している。
【００１６】
それゆえに経口投与することができ、上述の難点のいくつかまたは全てを緩和するような組成物と共に生物学的薬剤を患者に投与することが望ましい。
【００１７】
発明の概要
従って本発明は、生物学的薬剤およびブロック共重合体を含む経口投与のための組成物に関する。
【００１８】
一つの実施形態において、本発明は、
（ａ）生物学的薬剤：
（ｂ）Ｂ型直鎖状ポリマーセグメントへ一つの末端が結合しているＡ型直鎖状ポリマーセグメントを含むポリエステルブロック共重合体
（ここで該Ａ型セグメントは比較的親水性特性を持ち、その反復単位の分子量は約３０〜約５００の分子量であり、ここで該Ｂ型セグメントは比較的疎水性特性を持ち、その反復単位の分子量は約３０〜約５００の分子量であり、ここでそれぞれのポリマーセグメントに対して反復単位を連結しているリンケージの少なくとも約８０％はエーテル結合を含む）；および
（ｃ）約３〜約４１の炭素原子を持つ炭化水素、好ましくは約５〜約２５の炭素原子を持つ炭化水素、およびより好ましくは約９〜約１７の炭素原子を持つ炭化水素を含む親油性部位に連結されたターゲッティング部位（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍｏｉｅｔｙ）を含む医薬組成物を提供する。
【００１９】
このように本発明は、生物学的薬剤およびポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体を含む医薬組成物に関するものである。好ましい組成物は、前記ブロック共重合体のポリ（オキシプロピレン）［すなわち疎水性］部位は、該ブロック共重合体の少なくとも約５０質量％含む。また好ましい組成物において、該ブロック共重合体の疎水性分子の質量は、少なくとも約９００であり、より好ましくは少なくとも約１７００である。特に好ましい組成物において、該ブロック共重合体の疎水性分子の質量は、少なくとも約２０００であり、該疎水性分子の質量の割合は少なくとも約２０％である。本発明はまた、これらを用いた治療方法に関するものである。
【００２０】
また好ましい組成物において、該ブロック共重合体は、等張溶液中で約０．５％ ｗｔ／ｖｏｌの臨界ミセル濃度（“ＣＭＣ”）または約３７℃以下である。
【００２１】
さらにその他の好ましい実施形態において、該ブロック共重合体は式：
【００２２】
【化９】

【００２３】
（式中、ＡおよびＡ’はＡ型直鎖ポリマーセグメントであり、ＢおよびＢ’はＢ型ポリマーセグメントであり、およびＲ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴はそれぞれ式（Ｉ）、（II）もしくは（III）、または水素であり、Ｌは結合基であり、ただしＲ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴の二つ以上が水素であることはない）
のポリマーからなる群より選択されるものである。
【００２４】
好ましい実施形態において、該ブロック共重合体を含むミセル化合物を含むために、または投与またはその後続中に該ブロック共重合体を含むミセルを形成するために、該組成物は適合されている。好ましくは、生物学的薬剤の少なくとも約０．１％が該ミセル中に結合されており、さらに好ましくは生物学的薬剤の少なくとも１．０％、よりさらに好ましくは生物学的薬剤の少なくとも約５％である。
【００２５】
好ましい実施形態において、該組成物のブロック共重合体の疎水性部位の割合は、少なくとも約５０％であり、より好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは約７０％である。
【００２６】
他の好ましい実施形態において、該共重合体の疎水性部分の質量は、少なくとも約９００、より好ましくは少なくとも約１７００、さらに好ましくは少なくとも約２０００、さらにその上好ましくは少なくとも約２３００である。
【００２７】
さらに他の好ましい実施形態において、該疎水性部分の質量は少なくとも約２０００であり、かつ該疎水性部位の割合は少なくとも約２０％、好ましくは３５％であり；または該疎水性部分の質量は少なくとも約２３００であり、かつ該疎水性部位の割合は少なくとも約２０％、好ましくは約３５％である。
【００２８】
他の好ましい実施形態において、該共重合体または組成物の共重合体は、等張溶液中で約３７℃で約０．５％ｗｔ／ｖｏｌ、好ましくは約０．０５％ｗｔ／ｖｏｌ、より好ましくは約０．０１％ｗｔ／ｖｏｌ、さらに好ましくは約０．００３％ｗｔ／ｖｏｌを超過しない、臨界ミセル濃度（“ＣＭＣ”）を持つ。
【００２９】
好ましくは、式（Ｖ）に一致する組成の共重合体であり、下記に示す。特に好ましくは、これらの共重合体において、約１５００〜約２０００、好ましくは約１７１０〜約１７８０の疎水性部分の質量、および約８５％〜９５％、好ましくは約８８％〜９２％の疎水性部位の割合を持つ。また特に好ましくは、これらの共重合体において、約３０００〜約３５００、好ましくは約３２００〜約３３００の疎水性部分の質量、および約１５％〜２５％、好ましくは約１８％〜２２％の疎水性部位の割合を持つ。加えて、特に好ましくは、これらの共重合体において、約３５００〜約４０００、好ましくは約３７００〜約３８００の疎水性部分の質量、および約２５％〜３５％、好ましくは約２８％〜３２％の疎水性部位の割合を持つ。
【００３０】
好ましい実施形態において、該組成物の生物学的薬剤は脳の機能に作用し、または脳の病気を治療もしくは予防する薬剤である。
【００３１】
第二の実施形態において、本発明は、約３〜約４１、好ましくは約５〜約２５、約９〜約１７の炭素原子を持つ炭化水素を含む親油性部位に連結されたターゲッティング部位と共に関連しているポリマーミセル中に溶解させた生物学的薬剤を含む医薬組成物を提供することである。
【００３２】
他の実施形態において、本発明は、生物学的薬剤が選択前の組織を標的にする方法を提供する。該方法は、上述の組成を投与することを含み、ここでそのターゲッティング部位は、選択前の組織を持つ動物に対して、組織を標的にすることで選択される。
【００３３】
さらにその他の実施形態において、本発明は、
（ａ）化学療法薬；および
（ｂ）末端がＢ型直鎖ポリマーセグメントに結合しているＡ型直鎖ポリマーセグメントを含むブロック共重合体を投与することによる微生物の病気または脳の腫瘍を治療する方法を提供する。ここでＡ型セグメントは比較的親水性特性を持ち、その反復単位は標準ハンス−レオフラグメント定数（Ｈａｎｓｃｈ−Ｌｅｏ ｆｒａｇｍｅｎｔａｌ ｃｏｎｓｔａｎｔｏ）の約０．４またはそれ以下、および約３０〜約５００の分子量を持ち、ここで該Ｂ型セグメントは比較的疎水性特性を持ち、その反復単位は標準ハンス−レオフラグメント定数の約０．４またはそれ以下、および約３０〜約５００の分子量を持ち、ここでそれぞれのポリマーセグメントに対して反復単位に連結している結合の少なくとも約８０％はエーテル結合を含む。
【００３４】
さらに他の実施形態において、本発明はポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体、および（ａ）タンパク質、ペプチドまたはその誘導体、またはｂ）膜タンパク質により、少ない細胞透過性能、少ない組織浸透性能もしくは生物学的バリアーに対し少ない透過性能を持つ生物学的に活性な薬剤およびその誘導体の少なくとも一つを含む生物学的に活性な薬剤に関するものであり、ここでポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体の疎水性部位の割合は、少なくとも約５０％である。
【００３５】
好ましいブロック共重合体は、式：
【００３６】
【化１０】

【００３７】
【化１１】

【００３８】
（式中、ｘ，ｙ，ｚ，ｉおよびｊは、約２〜約８００であり、ここでＲ¹、Ｒ²対のそれぞれは、一つは水素原子で他方はメチル基である）
他の好ましい実施形態において、本発明は、生物学的に活性な薬剤またはその誘導体の運搬用組成物に関するものであり、これは生物学的に活性な薬剤、またはその誘導体および式：
【００３９】
【化１２】

【００４０】
（式中、Ｒ¹、Ｒ²対のそれぞれは、一つは水素原子で他方はメチル基である）
であるＰＯＥ−ＰＯＰブロック共重合体を含む。
【００４１】
さらに他の好ましい実施形態において、本発明は、生物学的に活性な薬剤またはその誘導体の運搬用組成物に関するものであり、これは生物学的に活性な薬剤、またはその誘導体および式：
【００４２】
【化１３】

【００４３】
（式中、ｘ，ｙ，およびｚは、約２〜約８００である）
であるＰＯＥ−ＰＯＰブロック共重合体を含む。
【００４４】
その上他の好ましい実施形態において、本発明は、エチレン（オキサイド）を５０％以下で含む少なくとも一つのブロック共重合体、およびエチレン（オキサイド）を５０％以上で含む少なくとも一つのブロック共重合体、ならびに生物学的に活性な薬剤を含む組成物に関するものである。該エチレン（オキサイド）を５０％以下で含む少なくとも一つのブロック共重合体の、エチレン（オキサイド）を５０％以上で含む少なくとも一つのブロック共重合体に対する割合は、１：２、より好ましくは１：５である。
【００４５】
該タンパク質、ペプチドおよびその誘導体は、好ましくは、例えば免疫調整薬、サイトカイン、ホルモン、酵素、組織プラスミノーゲン活性化因子、凝固因子、コロニー刺激因子、ニューロペプチド、組み換え可溶性受容体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｓｏｌｕｂｌｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、モノクローナル抗体、またはエリスロポイエチン等であり得る。好ましいホルモンは、ヒト成長ホルモン、およびインスリンである。
【００４６】
本発明はまた、これらの組成物を用いたほ乳動物の治療方法に関するものである。
【００４７】
本発明はまた、エチレン（オキサイド）を５０％未満で含む少なくとも一つのブロック共重合体（すなわち疎水性共重合体）、および、エチレン（オキサイド）を５０％を超えて含む少なくとも一つのブロック共重合体（すなわち親水性共重合体）の混合物を含む経口運搬用組成物に関するものである。好ましくは、これらは１の疎水性共重合体に対して２の親水性共重合体の割合、より好ましくは１の疎水性共重合体に対して５の親水性共重合体の割合、さらにより好ましくは１の疎水性共重合体に対して１０の親水性共重合体の割合で存在する。
【００４８】
発明の詳細な説明
定義
以下に示した用語およびフレーズは、次のような意味である。
【００４９】
生物学的薬剤：診断やイメージングに有用である薬剤、または薬剤に限定されないが、細胞、臓器または生体に作用し、細胞、臓器または生体の機能において変化を起こす薬剤である。このような薬剤は、これらに限定されないが、ペプチドおよびポリペプチド、核酸、ポリ核酸、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗寄生虫剤、殺腫瘍性または抗癌剤、タンパク質、毒素、酵素、ホルモン、神経伝達物質、糖タンパク質、免疫グロブリン、免疫調節薬、染料、放射性ラベル、放射線不透過性（ｒａｄｉｏ−ｏｐａｑｕｅ）化合物、蛍光化合物、多糖類、細胞受容体結合分子、抗炎症剤、抗緑内障薬、散瞳化合物ならびに局所麻酔、ならびに中枢神経系の細胞または中枢神経系の病気に作用する生物学的薬剤である。
【００５０】
・中枢神経系：中枢神経系の細胞または中枢神経系の病気に作用する生物学的薬剤である。
【００５１】
・化学療法薬：腫瘍性または病原性細胞の成長を阻害または生存を減少させる、またはウイルスの増殖（これらに限定されないが、複製、ウイルス凝集または細胞への感染を含む）を阻害する生物学的薬剤である。
・疎水性部位の割合：Ｂ型ブロックによって製造されるブロック共重合体の分子量の割合である。
【００５２】
・疎水性部分の質量：ブロック共重合体のＢ型ブロックに寄与する分子量である。
【００５３】
ＩＣ ₅₀ ：５０％の細胞毒性が得られる濃度である。細胞毒性はＡｌｌｅｙ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４８：５８９〜６０１，１９８８またはＳｃｕｄｉｅｒｏ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，４８：４８２７，１９９８の方法によって測定されうる。特に、ミトコンドリア酵素活性において５０％の減少が得られた薬剤濃度を基礎にして測定されうる。
【００５４】
ＩＣ ₉₅ ：９５％の細胞毒性が得られる濃度である。細胞毒性は上述のＡｌｌｅｙ等またはＳｃｕｄｉｅｒｏ等の方法によって測定されうる。特にミトコンドリア酵素活性における９５％の減少が観察された薬剤濃度を基礎にして測定されうる。
【００５５】
・親油性部位：ターゲッティング部位に結合して、共重合体ミセルの親油性部分に分割している親油性置換基である。
【００５６】
・微生物：細菌、マイコプラズマ、酵母菌、真菌、ウイルスまたは寄生生物（例えばマラリア原虫）である。
【００５７】
・ＭＤＲ：関連のない生物学的薬剤に対して複数の耐性を持つ現象である。
【００５８】
・ターゲッティング部位：細胞、組織、ウイルス、または、例えば細胞表面レセプターもしくはアクセプター分子のような土台の構成成分によって認識される分子構造である。
【００５９】
以下に示す共重合体の特性は、目標とする本発明の治療方法の実施形態および本発明の脳の化学療法の実施形態の両方に対する、該組成物の経口運搬に適していることが理解される。
【００６０】
中でも本発明は、特にその標的細胞または組織は生物学的薬剤に耐性を持つような生物学的薬剤のための、医薬組成物および方法に関するものである。多剤耐性（ＭＤＲ）は、関連のない生物学的薬剤に対して複数の耐性を持つ現象と説明されている。これは、ＡＴＰ−結合カセット（ＡＢＣ）タンパク質のスーパーファミリーに属する膜タンパク質が過剰発現することに関連する（Ｌｉｎｇ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４０ Ｓｕｐｐｌ：Ｓ３〜Ｓ８（１９９７）；Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ｅｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９２：５４２１〜５４２５（１９９５）を参照）。ＡＢＣ／ＭＤＲ−関連タンパク質（ＭＲＰ）および肺耐性−関連タンパク質（ＬＲＰ）は、多様な原核または真核細胞で同定されている（Ｄｅｎ-Ｂｏｅｒ 等、Ｌｅｕｋｅｍｉａ １１：１０７８〜１０８５（１９９７）；Ｄａｖｅｙ 等、Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．，２０：６５７〜６６４（１９９６）；Ｆｕｒｕｙａ 等、Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ２０：６５７〜６６４（１９９６），Ｆｕｒｕｙａ 等、Ｃａｎｃｅｒ-Ｒｅｓ．５７：３７０８〜３７１６（１９９７）を参照）。ヒトの遺伝子は、最小限の２００のＡＢＣ輸送体スーパーファミリーメンバーを含むと考えられている（Ｌｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，４０ Ｓｕｐｐ．：Ｓ３〜Ｓ８（１９９７）を参照）。膜タンパクである糖タンパク質Ｐファミリーのメンバーは、多くの腫瘍における多剤耐性に関与していると考えられており、その耐性は本発明の組成物を用いて逆転（ｒｅｖｅｒｓｅｄ）されうる（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ等、Ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｓ．，５７：１０１〜１１９（１９９１）を参照）。これらのタンパク質は、腫瘍が耐性を持つような生物学的薬剤を排出するポンプとして機能していると考えられている。同じタンパク質ファミリーのメンバーは、脳内血管が内張り（ｌｉｎｉｎｇ）されてある内皮細胞の膜中に存在し、多くの生物学的薬剤の有効量が脳へ入ることを妨げている“血液−脳バリアー”（ＢＢＢ）機能に関連していると考えられている。例えば、Ｔａｔｓａｕｔａ 等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２０３８３２０３９１を参照。
【００６１】
本発明の組成物は、薬剤の脳への透過性を増強するために使用することができ、より詳細には、“ターゲッティング生物学的薬剤のための組成物（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｇｅｎｔ）”という名称で１９９５年６月７日出願の米国出願第０８／４７８，９７９号に記載されており、ここで引用によってその内容を用いる。このタンパク質ファミリーのメンバーはまた、ペプチドを含む多くの生物学的薬剤（Ｎｅｒｕｒｋａｒ 等、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１３：５２８（１９９６））に関連して、腸上皮の透過性を制御していると考えられている（Ｔｈｉｅｂａｕｌｔ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８４：７７３５（１９８７））。さらに、このタンパク質ファミリーのメンバーは、ある種のカンジダ属、マラリアまたはその他の感染症に対する薬物耐性に関与すると考えられている。ヒトＭＲＰの過剰発現は、糖タンパク質Ｐによって付与されたものと類似の、多剤耐性の形成の原因となる。ＭＲＰは、有機陰イオン結合の構造的に異なった範囲の一次活性輸送体であると考えられている。多様な化学感作薬剤が、糖タンパク質−ＰおよびＭＲＰの機能を阻害するといわれており、このような薬剤はこれらの摂生と組み合わせて用いる場合に従来の治療の効果を促進すると考えられている（Ｌｉｎｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４０ Ｓｕｐｐｌ：Ｓ３〜Ｓ８（１９９７）を参照）。
【００６２】
特殊な理論に結びつけることなく、本発明の組成物は、糖タンパク質−Ｐファミリーのメンバーによって媒介されている流出メカニズム、およびその他の薬剤耐性メカニズムを逆転（ｒｅｖｅｒｓｅ）し、特に（これらに限定されないが）ＡＢＣ／ＭＤＲ−関連タンパクの過剰発現に関連している。その結果、これらに限定されないが標的細胞または組織への該生物学的薬剤の改良された運搬、このような標的細胞および組織を遮蔽する生物学的バリアーに対する増加した透過性、および標的細胞または組織から該生物学的薬剤を除去するメカニズムの阻害を含む、生物学的薬剤の性能が改良された。一つの特殊な実施形態において、本発明は、ＡＢＣ／ＭＤＲ−関連膜タンパク質によって反応する生物学的薬剤の経口の生物学的利用可能性が改良された組成物を提供する。
【００６３】
その他の特殊な実施形態において、本発明はこのような生物学的薬剤の改良された脳の運搬を提供し、他の実施形態において、本発明は、ＡＢＣ／ＭＤＲ−関連膜タンパク質に関連したメカニズムの結果として細胞の蓄積を減少させた、生物学的薬剤の改良された組成物を提供する。さらに他の特殊な実施形態において、本発明は、ＭＤＲ癌に対して効果的な、改良された化学療法剤組成物を提供する。さらに他の特殊な実施形態において、本発明は、脳腫瘍の治療のための、改良された化学療法剤組成物を提供する。さらに他の特殊な実施形態において、本発明は、ＣＮＳ薬剤のための改良された組成物を提供する。
【００６４】
近年の研究によると、より詳細には、１９９５年６月７日に出願された米国特許出願第０８／４７８，９７８号の「生物学的薬剤組成物」にここで結合される成分が説明されており、この発明の化学療法薬の効力が増強しているブロック共重合体の有効性を示し、逆転している薬剤耐性は（ａ）疎水性部の割合および（ｂ）疎水性部の質量に高く依存する。その有効性は、該割合の増加（ａ）もしくは該質量の増加（ｂ）により、またはその両方により増加する。これらの疎水性部の割合および疎水性部の質量の増加はまた、ミセル形成特性の改良と互いに関係があり、ここでこれらの共重合体のミセル形成はより低い濃度でおこる（Ｈｕｎｔｅｒ等、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２６：５０３０（１９９３）；Ｈｕｎｔｅｒ等、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２６：５５９２（１９９３）；Ａｌｅｘａｎｄｒｉｓ等、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２７：２４１４（１９９４）参照）。
【００６５】
一方で特殊な理論に限定されることはないが、ミセル形成物は、生物学的薬剤運搬特性の改良を導く物理特性を測定するための代用物として作用する。再び特殊な論理に限定されることはないが、生物学的薬剤効果および多剤耐性の逆転の改良を導くのは、ミセルそれ自身ではないと考えられている。高いレベルの糖タンパク質Ｐを発現する多剤耐性細胞系（Ｇｅｒｖａｓｏｎｉ，等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５１，４９５５（１９９１）は、生物学的に活性な薬剤におけるブロック共重合体の効果を評価することに使用されうる。ダウノルビシンまたはローダミン１２３等のＭＤＲ薬剤は、癌および正常細胞におけるＭＤＲ関連膜タンパク質に有効なプローブとして作用する（Ｊａｎｃｉｓ等、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４３，５１（１９９３）；Ｌｅｅ等、Ｍｏｌ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４６，６２７（１９９４））。これらのプローブの結果は、全てのＭＤＲクラス薬剤を排出する効果を示している。
【００６６】
ダウノルビシンをモデル生物学的薬剤として使用する場合、（ａ）組成物を含む共重合体のＩＣ₅₀（有効細胞毒性濃度の基準）の、（ｂ）遊離ダウノルビシンのＩＣ₅₀に対する割合は、共重合体の濃度に対してプロットされ、そのプロットは、共重合体の濃度は増加につれて急激に減少し、共重合体のＣＭＣで維持される二相を含む。ＣＭＣ以上では、該割合の急激なレベリングオフが観察される。生物学的薬剤活性の最大増強は、ＣＭＣ以上でおこるが、増強された活性は、共重合体プルロニックＬ６１では０．０００１％（ｗｔ／ｖｏｌ）も低い、またはそれ以下の濃度で見られる。そのミセル状はまた、以下に示すような他の理由のために、ドラッグデリバリーにおいて共重合体を使用することが重要であると考えられている。
【００６７】
下記の模式図は、共重合体の疎水性部の割合と疎水性部の質量との間の関係、および本発明の多様な局面を理解するのに役立つ。この模式図によると、疎水性（ポリ（ポリプロピレン））および共重合体の質量は、それぞれ相当する共重合体の下に直接示されている。これらの値の隣の値は、それぞれの共重合体の疎水性部の割合値である。
【００６８】
【化１４】

【００６９】
プルロニックＦ６８は、生物学的薬剤の効力を増強することにおいて、わずかな活性しか示さない。プルロニックＬ６１は、プルロニックＦ６８と同じ疎水性部の質量を有し、疎水性部の割合が高く、これは一般的に模式図中で示される共重合体の中で最も効果的である。プルロニックＦ１０８は、プルロニックＦ６８と同じ疎水性部の割合を有するが、疎水性部の質量がより高く、これもまた有効な共重合体であるが、プルロニックＬ６１ほどではない。プルロニックＰ８５は、プルロニックＦ６８より高い疎水性部の質量およびより高い疎水性部の割合を持つが、それぞれの値における相違は、それぞれ、プルロニックＦ１０８およびＬ６１のそれよりも少ない。生物学的薬剤の効力を増強したプルロニックＰ８５の有効性は、プルロニックＦ１０８およびプルロニックＬ６１の間の有効性の中間である。ＣＭＣ以上の濃度における様々な共重合体、およびダウノルビシンが、インビトロで薬剤耐性細胞と共にインキュベーションされる場合に、有効性におけるこのような相違が例示される。共重合体存在下における割合に対する、共重合体非存在下のドキソルビシンのＩＣ₅₀値の割合は、“耐性逆転指標（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒｅｖｅｒｓｉｏｎ ｉｎｄｅｘ）”である。様々な共重合体に対する耐性逆転指標を以下に示す。
【００７０】
【表１】

【００７１】
生物学的薬剤を運搬する際のミセル状の重要性はまた、インビボ実験において解明されている。ミセル状において、生物学的薬剤はミセルの疎水性コア中に位置しており、それによりミセルを取り囲んで親水性シェル（Ａ型セグメントを含む）によってマスクされるこのマスキングが、肝臓、血漿タンパク質、その他の非標的組織、および薬剤に結合し、もしくは薬剤を不活化し、または中毒性代謝へ該薬剤を転換するような他の分子との相互作用を減少させる。例えば、肝臓によるアントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ）抗生物質の迅速な代謝は、Ｃ１３位で修飾された心臓毒性の代謝産物の形成を導く。Ｍｕｓｈｌｉｎ，等、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１１０：９７５〜９８２（１９９３）を参照。ドキソルビシンをモデル薬剤として使用することにより、ミセル状は肝臓での吸収を減少させ、ドキソルビシノールへの転換を減少させ、さらに血中におけるドキソルビシン濃度の減少率を減少させる。
【００７２】
（ａ）ミセルを形成すること（ここでより大きい効果は、減少したＣＭＣＳにおいて測定される）および（ｂ）様々な生物学的薬剤の遊離状よりむしろ、ミセル状に様々な生物学的薬剤を分割させることにおける共重合体の有効性は、同じパターンに従って増加する。すなわち有効性の階層構造は再びＬ６１＞Ｐ８５＞Ｆ１０８＞＞Ｆ６８である。低い濃度のミセルの存在は、生物学的薬剤がミセルと結合し続けるとみなして該生物学的薬剤および共重合体が共に標的組織に到達することの証明に役立つものと考えられる。ミセル形成を促進する分割係数は、生物学的薬剤がミセルと結合し続けるという仮説に真実があるということを証明することに役立つ。その生物学的薬剤のミセル状はまた、生物学的薬剤を非有効性または中毒性代謝生産物に代謝するような非標的組織によって生物学的薬剤が吸収されること、および、血液成分、細胞成分等への非特異的吸収を防ぐと考えられている。
【００７３】
高い濃度において、ブロック共重合体は肝臓、腎臓または他の対象物（ｓｕｂｊｅｃｔ）の細胞にとって有毒となりうる（ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ．，Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｍａｔｅｒｉａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｄａｔａ Ｓｈｅｅｔ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｍａｓｔｅｒ Ｆｉｌｅｓを参照）。共重合体の有毒性は、潜在的な生物学的薬剤における有効性の増加でみられる同じパターンに従って、共重合体の疎水性パラメータと共に増加する。幸運にも、これらの疎水性パラメータの変化としての効力の増加率は、共重合体の有毒性の増加に比べて著しく大きい。例えば、実施例２０で説明したように、ＢＡＬＢ／ｃマウスのＬ６１のＬＤ₅₀は、プルロニックＦ１０８のＬＤ₅₀に比べて１０倍低い。しかしながら、最適治療用量における相違は、プルロニックＦ１０８に対してプルロニックＬ６１において１００倍改良されている（実施例１４を参照）。このように、共重合体により有毒性を阻みながら、生物学的薬剤活性の増強作用における有効性を維持させるような濃度範囲は、プルロニックＦ１０８に対してプルロニックＬ６１で増加する。
【００７４】
本発明の組成物は、それらに結合した生物学的薬剤の実質的な部分を持つ予備成形されたミセル、または患者への生物学的薬剤の投与中またはその後続効果中に、それらの中に溶解した実質的な部分を持つミセルを形成する共重合体組成物のいずれかを含むことが意図されている。本発明の目標とする実施形態において、標的の一部が、ミセルと前もって結合している、または、投与中にミセルと結合していることであろう。特に好ましいブロック共重合体は、生理学的温度で等張溶液中において低いＣＭＣ値を持つものである。このようなブロック共重合体は、例えば処理されるものが血液のような生理学的流動体中で、実質的に希釈された後でさえ、生物学的薬剤のためのミセル運搬担体を維持する。このような低いＣＭＣ値により、本発明の薬剤組成中におけるブロック共重合体のレベルを減少させて使用することができる。
【００７５】
本発明は、ハンスおよびレオによって開発されたフラグメンタル定数（ｆｒａｇｍｅｎｔａｌ ｃｏｎｓｔａｎｔ）を参照して、以下に記載される（ＨａｎｓｃｈおよびＬｅｏ，Ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ Ｃｏｎｓｔａｎｔｓ ｆｏｒ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９；Ｊａｍｅｓ，Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８６，ｐｐ．３２０〜３２５を参照）。これらの定数は、分子がオクタノール−水混合物により形成される相の間に分配される傾向に対して、分子部分の寄与を見積もるため使用することにおいて開発された。これらの定数は、一般的にハンス−レオフラグメンタル分配定数（以降、ここでは“ハンス−レオフラグメンタル定数という）として言及される。
【００７６】
１９９５年６月７日に出願された米国特許出願第０８／４７８，９７８号、「生物学的薬剤組成物」の開示によると、１９９３年４月２８日に出願された米国特許出願第０８／０５４，４０３号での全ての開示のように、ここで引例として参照される。
【００７７】
ポリエーテル共重合体における全親水性（Ａ型）ブロックまたは全疎水性（Ｂ型）ブロックの反復単位の数は、好ましくは約２〜約８００であり、より好ましくは、約４〜約２００であり、さらにより好ましくは、約５〜約８０である。ブロックを含む反復単位は、Ａ型およびＢ型において、一般的に約３０〜約５００、好ましくは約３０〜約１００、より好ましくは約３０〜約６０の分子量を持つ。一般的に、Ａ型またはＢ型ブロックにおいて、反復単位間の結合の少なくとも約８０％がエーテル結合しており、好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％である。この用途の目的のため、エーテル結合は、グリコシド結合（例えば、糖結合（ｓｕｇａｒ ｌｉｎｋａｇｅｓ））を含む。しかしながら、一つの観点において、単純なエーテル結合が好ましい。
【００７８】
好ましくは、Ａ型ブロックを含むすべての反復単位は、ハンス−レオフラグメンタル定数が−約０．４、より好ましくは−約０．５以下、さらにより好ましくは−約０．７以下である。好ましくは、Ｂ型ブロックを含むすべての反復単位は、ハンス−レオフラグメンタル定数が−約０．３０、より好ましくは−約０．２０以下である。
【００７９】
本発明の第一の実施形態によるポリマーは、式：
【００８０】
【化１５】

【００８１】
【化１６】

【００８２】
で示されるブロック共重合体によって例示される。
【００８３】
式中、ｘ，ｙ，ｚ，ｉおよびｊは、約２〜約８００の値であり、好ましくは約５〜約２００であり、より好ましくは約５〜約８０であり、Ｒ¹，Ｒ²対はそれぞれ、一つは水素原子、および他方はメチル基である。式（Ｖ）〜（VII）は、非常に単純化されているが、実際にはＢブロック中のイソプロピレン基の方向はランダムである。このランダムな方向はは式（VIII）および（VIV）で示されており、これらはより完全である。このようなポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）化合物は、Ｓａｎｔｏｎ，Ａｍ．Ｐｅｒｆｕｍｅｒ Ｃｏｓｍｅｔ．，７２（４）：５４〜５８（１９５８）；Ｓｃｈｍｏｌｋａ，Ｌｏｃ．ｃｉｔ．８２（７）：２５〜３０（１９６７）；Ｎｏｎ-ｉｏｎｉｃ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ，Ｓｃｈｉｃｋ，ｅｄ．（Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９６７），ｐｐ．３００〜３７１によって説明されている。このような化合物のいくつかは、“リポロキサマー（ｌｉｐｏｌｏｘａｍｅｒｓ）”、“プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）”および“シンペロニクス（ｓｙｎｐｅｒｏｎｉｃｓ）”という総称商品名で、商業的に利用できる。Ｂ−Ａ−Ｂ構造式中のプルロニックポリマーはしばしば、“逆の（ｒｅｖｅｒｓｅｄ）”プルロニック、“プルロニックＲ”または“メロキサポール（ｍｅｒｏｘａｐｏｌ）”といわれている。
【００８４】
式（VIII）の“ポリオキサミン（ｐｏｌｙｏｘａｍｉｎｅ）”ポリマーは、商品名テトロニック^TM（Ｔｅｔｒｏｎｉｃ^TM）の商品名で、ＢＡＳＦ（Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ，ミシガン州）より入手できる。式（VIII）で示されるポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンブロックを逆転してテトロニックＲ^TMを製造することができ、これもＢＡＳＦより入手可能である。Ｓｃｈｍｏｌｋａ，Ｊ．Ａｍ．Ｏｉｌ．Ｓｏｃ．，５９：１１０（１９７９）を参照。ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロック共重合体はまた、エチレンオキサイドおよびプロピレンオキサイド反復単位のランダムな混合を含む親水性ブロックで選択される。そのブロックの親水性特性を維持するためには、エチレンオキサイドが優勢である。同様に、疎水性ブロックはエチレンオキサイドおよびプロピレンオキサイド反復単位の混合物である。このようなブロック共重合体は、プルラドット（Ｐｌｕｒａｄｏｔ）^TMの商品名でＢＡＳＦより入手可能である。
【００８５】
所定のブロック共重合体の疎水性／親水性特性は、オキシプロピレン基の数に対するオキシプロピレン基の数の割合に依存している。ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）の単一のブロック共重合体を含む組成物において、例えば、中央の疎水性ブロックおよび末端の親水性ブロックの分子質量を考慮して、この関係は、以下のように表現される：
【００８６】
【数１】

【００８７】
式中、Ｈはオキシプロピレン単位の数であり、Ｌはオキシエチレン単位の数である。疎水性Ｂ型セグメントおよび親水性Ａ型セグメントを含むブロック共重合体の一般的な場合において、その疎水性−親水性特性およびミセル形成特性は、式：
【００８８】
【数２】

【００８９】
として定義されるｎ値に関連している。
【００９０】
式中、｜Ｂ｜および｜Ａ｜は、それぞれ共重合体の疎水性および親水性ブロックにおける反復単位の数であり、ｂおよびａは、相当する反復単位の分子量である。
【００９１】
適切なｎ値を持つ共重合体を選択することは、特異的な薬剤の疎水性／親水性特性、または調合される薬剤の混合物の複合的な疎水性／親水性特性に依存している。典型的に、ｎは約０．２〜約９．０、好ましくは約０．２５〜約１．５の範囲である。この範囲は、数の上では臨界的に示されていないが、主として親水性のポリ（オキシエチレン）ブロックおよび主として疎水性のポリ（オキシプロピレン）ブロック間の、最適な疎水性／親水性バランスを表現したものとして示されている。
【００９２】
本発明の重要な観点は、ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）の異なるブロック共重合体の混合物を利用して、所定のサイトカインまたは数種のサイトカインの混合物に適したより特異的な疎水性／親水性バランスを達成し、粒子の適切なサイズを保存することである。例えば、第１のブロック共重合体は、ｎが１．０であるが、第２のはｎが１．５である。ｎが１．３である材料が望ましい場合、第１のブロック共重合体の１質量部および第２のブロック共重合体の１．５質量部の混合物が使用されうる。
【００９３】
このように、これらの混合物に対するより一般化された関係式は、式：
【００９４】
【数３】

【００９５】
のように示される。
【００９６】
式中、Ｈ₁およびＨ₂はそれぞれ第１および第２のブロック共重合体におけるオキシプロピレン単位の数であり；Ｌ₁は第１ブロック共重合体におけるオキシエチレン単位の数であり；Ｌ₂は第２ブロック共重合体におけるオキシエチレンの数であり；ｍ₁は第１のブロック共重合体における質量部であり；ｍ₂は第２の共重合体における質量部である。
【００９７】
疎水性Ｂ型ブロック共重合体および親水性Ａ型ブロック共重合体を含むＫブロック共重合体混合物のより一般的な場合でさえ、Ｎ値は、式：
【００９８】
【数４】

【００９９】
のように示される。
【０１００】
式中、｜Ａ｜_iおよび｜Ｂ｜_iは、ｉ番目のブロック共重合体の、親水性（Ａ型）および疎水性（Ｂ型）ブロックにおける反復単位の数であり、ｍはこの共重合体の質量部であり、Ｍは全てのブロック共重合体の質量比率の合計であり（
【０１０１】
【数５】

【０１０２】
）、およびａおよびｂは、これらのブロック共重合体の、親水性および疎水性ブロックの反復単位における分子量である。
【０１０３】
ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）の一つのブロック共重合体が使用される場合、Ｎはｎと等しい。類似の関係式が、ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）の二つ以上のブロック共重合体を用いた組成物に適用しうる。
【０１０４】
ブロック共重合体の混合物が使用される場合、Ｎ値が用いられ、この値は、構成成分である共重合体の質量部に基づき平均化することで得られた、それぞれ付与されている共重合体におけるｎの質量平均値である。このＮ値は、共重合体混合物のミセル形成特性を見積もるのに使用されうる。ブロック共重合体の混合物を使用することによって、溶解性を増強し、血清タンパク質存在下でより疎水性のブロック共重合体の凝集を防ぐことができる。特に、含量が５０％を超えるエチレンオキサイドを有するポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体は、含量が５０％以下のエチレンオキサイドを有するポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）を可溶化させる。このような混合物において、親水性および疎水性共重合体の好ましい割合は、少なくとも２：１（ｗ／ｗ）、好ましくは少なくとも５：１（ｗ／ｗ）、さらに好ましくは８：１（ｗ／ｗ）である。ポリエチレンオキサイド−ポリプロピレンオキサイド以外の共重合体が使用されている場合、ポリマークラスの一つのメンバーの疎水性／親水性特性を、他のクラスのメンバーの特性に関連づけることによって、類似のアプローチが開発されうる。
【０１０５】
上記パラメータを用いて、一つまたはそれ以上のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体が、Ｎ値が約０．１〜約９、好ましくは約０．２５〜約１．５であるように結合される。結合された共重合体はミセルを形成し、Ｎ値はこのように形成されたミセルのサイズに影響を及ぼす。典型的に、ミセルは約１０〜約２５ｎｍの標準直径を持つが、この範囲は広く変化しうる。任意の所定の製剤における標準直径は、ｑｕａｓｉｅｌａｓｔｉｃ光散乱方法によって簡単に測定される。
【０１０６】
いくつかのサイトカインのより効果的な可溶化において、例えばこのような薬剤のブロック共重合体ミセルへの結合の際に疎水性アンカーとして作用する脂肪酸残基による、それらの部分的な修飾が必要である。いくつかのサイトカインにおいて、ブロック共重合体で形成されたミセル中に結合することは、サイトカインとブロック共重合体の共有結合を介して達成される。このような結合の様々な方法が使用される。これらは、様々なヘテロ二価薬剤を用いたスペーサー基を介した結合の共重合体の活性化末端基へ薬剤を直接架橋することを含む。
【０１０７】
プルロニックのいくつかは、下記式：
【０１０８】
【化１７】

【０１０９】
に適合するように作製されている。
【０１１０】
もちろん、通常の当業者にとって、ｍおよびｎが通常統計的な標準値を表し、所定の分子の第１ブロックの反復単位の数は一般的に厳密な第３ブロックの反復単位の数ではない、ということは明白であろう。プルロニックのいくつかの特性は、式（ＩＸ）を参照して説明され、以下の通りである。
【０１１１】
【表２】

【０１１２】
好ましくはＣＭＣ値はＫａｂａｎｏｖ等、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２８：２３０３〜２３１４（１９９５）で説明されている表面張力方法によって測定されたものである。
【０１１３】
本発明に関連する追加の特異的なポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体は、以下を含む。
【０１１４】
【表３】

【０１１５】
【表４】

【０１１６】
（表３の続き）
＊これより上の全ての共重合体は、式（IX）に一致しており、この共重合体およびこれより下の共重合体は式（VII）に一致する。
【０１１７】
式（VIII）のジアミン結合プルロニックもまた、式：
【０１１８】
【化１８】

【０１１９】
で示されるジアミン結合ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体のファミリーの一つである。
【０１２０】
式中、破線は第二の窒素から伸張したポリエーテルの対称的コピーを示し、Ｒ^*は炭素原子約２〜約６のアルキルであり、炭素原子が約５〜約８のシクロアルキレンまたはフェニレンであり、Ｒ¹およびＲ²において、（ａ）両方が水素原子または（ｂ）一つが水素原子および他方がメチルのいずれかであり、Ｒ³およびＲ⁴において、（ａ）両方が水素原子または（ｂ）一つが水素原子および他方がメチルのいずれかであり、Ｒ³およびＲ⁴の両方が水素原子の場合、Ｒ⁵およびＲ⁶の一つが水素原子および他方がメチルであり、Ｒ³およびＲ⁴の一つがメチルの場合、Ｒ⁵およびＲ⁶両方が水素原子である。式（VIII）の−ＮＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＮＨ₂−基および式（Ｘ）のＮ−Ｒ^*−Ｎ基は式（IV）の結合基の例である。
【０１２１】
これに関する当業者であれば、本発明の実施例が例えばポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）化合物に限定されている場合、上記の一般式も限定される。重要な特徴は、Ａ型ブロックにおけるモノマーの標準ハンス−レオフラグメンタル定数が−約０．４またはそれ以下であることである。このように、第１ブロックを形成する単位はエチレンオキサイド単独を含む必要はない。同様に、全てのＢ型ブロックがプロピレンオキサイド単位単独を含む必要はない。その代わり、第１の実施形態のパラメータが維持される限り、そのブロックは式（Ｖ）〜（Ｘ）で定義されたもの以外のモノマーと結合することができる。
【０１２２】
他の観点において、本発明は、式（Ｉ）〜（Ｘ）の少なくとも一である共重合体を含む薬剤組成物に関するものであり、ここでそのＡ型およびＢ型ブロックは実質的に式−０−Ｒ⁵の反復単位からなり、ここでＲ⁵は；
（１）−（ＣＨ₂）−ＣＨ（Ｒ⁶）−であり、ここでｎは０または１〜５の整数であり、Ｒ⁶は水素原子、約３〜約８の炭素原子を持つシクロアルキル、約１〜約６の炭素原子を持つアルキル、フェニル、アルキルフェニル（該アルキルは約１〜約６の炭素原子を持つ）、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル（該アルキルは約１〜約６の炭素原子を持つ）、約１〜約６の炭素原子を持つアルコキシ、炭素原子約２〜約７を持つアルキルカルボニル、アルコキシカルボニル（該アルコキシは約１〜約６の炭素原子を持つ）、アルコキシカルボニルアルキル（該アルコキシおよびアルキルは、それぞれ独立して約１〜約６の炭素原子を持つ）アルキルカルボキシアルキル（該アルキルのそれぞれは、独立して約１〜約６の炭素原子を持つ）、アミノアルキル（該アルキルは約１〜約６の炭素原子を持つ）、アルキルアミンもしくはジアルキルアミン（アルキルのそれぞれは、独立し約１〜約６の炭素原子を持つ）、モノ−もしくはジアルキルアミノアルキル（該アルキルのそれぞれは、独立して約１〜約６の炭素原子を持つ）、クロロ、クロロアルキル（該アルキルは約１〜約６の炭素原子を持つ）、フルオロ、フルオロアルキル（該アルキルは約１〜約６の炭素原子を持つ）、シアノもしくはシアノアルキル（該アルキルは約１〜約６の炭素原子を持つ）、またはカルボキシルであり；
（２）約３〜約８の環状炭素原子を持つ炭素環式基であり、ここで該基は、例えば、シクロアルキルまたは芳香族基であり、これらは約１〜約６の炭素原子を持つアルキル、約１〜約６の炭素原子を持つアルコキシ、約１〜約６の炭素原子を持つアルキルアミノ、ジアルキルアミノ（該アルキルのそれぞれは、独立して約１〜約６の炭素原子を持つ）、アミノ、スルホニル、ヒドロキシ、カルボキシ、フルオロ、またはクロロ置換基であり、または
（３）約３〜約８の炭素原子を持つヘテロ環式基であり、これらはヘテロシクロアルキルまたはヘテロ芳香族基を含み、これらは酸素、窒素、硫黄およびそれらの混合物から選択される１〜４のヘテロ原子からなり、これらは約１〜約６の炭素原子を持つアルキル、約１〜約６の炭素原子を持つアルコキシ、約１〜約６の炭素原子を持つアルキルアミノ、ジアルキルアミノ（該アルキルのそれぞれは、独立して約１〜約６の炭素原子を持つ）、アミノ、スルホニル、ヒドロキシ、カルボキシル、フルオロまたはクロロ置換基を含むものである。
【０１２３】
好ましくは、ｎは１〜３の整数である。Ｒ⁵を含む炭素環式またはヘテロ環式基は、好ましくは４〜７の環状原子を持ち、より好ましくは、５〜６である。好ましくは、ヘテロ環式基は、ヘテロ原子を１または２で含み、より好ましくは該ヘテロ環式基は一つのヘテロ原子を持つ。好ましくは、該ヘテロ環式基は炭水化物または炭化水素類似体である。
【０１２４】
通常の当業者にとって、これらのポリマーを形成するのに必要とされるモノマーが合成的に得られるということは明白であろう。Ｖａｕｇｈｎ 等、Ｊ．Ａｍ．ｏｉｌ Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２８：２９４（１９５１）を参照。いくつかの場合において、モノマーの重合は、当業者によって認められうる適切な保護基の使用が必要である。一般的に、ＡおよびＢ型ブロックは少なくとも約８０％、好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％が−ＯＲ⁵−反復単位を含む。
【０１２５】
他の観点において、本発明は、式（Ｉ）〜（Ｘ）の一つのブロック共重合体を含む薬剤組成物に関するものであり、ここでそのＡ型およびＢ型ブロックは本質的に式−Ｏ−Ｒ⁷反復単位からなり、ここでＲ⁷は約１〜約６の炭素原子のアルキレン基である。
【０１２６】
有機分子に対するオクタノール−水分割係数（Ｐ）のハンス−レオ見積もりは、下記の式によって計算される。
【０１２７】
【数６】

【０１２８】
式中、ｆ_n値は分子中の異なる基のフラグメンタル定数であり、ａ_n値は分子中の任意のタイプの基の数であり、ＦＭ値は例えば単結合または二重結合のようなある種の分子的な特徴に関するファクターであり、ｂ_m値は任意のこのような分子的な特徴の数である。例えば、エチレンオキサイド反復単位（−ＣＨ₂ＣＨＯ−）のハンス−レオフラグメンタル定数は：
【０１２９】
【数７】

【０１３０】
となりうる。
【０１３１】
プロピレンオキサイド（−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）Ｏ−）反復単位のハンス−レオフラグメンタル定数は：
【０１３２】
【数８】

【０１３３】
となりうる。
【０１３４】
通常の当業者にとって、分配定数の見積もりに対するハンス−レオアプローチは、それにおいてハンス−レオフラグメンタルアプローチが適用されているが、経験上の分配定数を正確に与えるものではない（Ｈａｎｓｃｈ ａｎｄ Ｌｅｏ，Ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ Ｃｏｎｓｔａｎｔｓ ｆｏｒ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９；Ｊａｍｅｓ，Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｍｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８６，ｐｐ．３２０〜３２５を参照）。しかしながら、そのアプローチは、ポリマーの運搬担体の疎水性特徴を定義するには十分正確である。
【０１３５】
本発明で利用されるブロック共重合体は、好ましくは、生理学的温度の等張液中で、約１０ｎｍ〜約１００ｎｍの直径を持つミセルを形成する。ミセルは両親媒性の非極性部位のミクロ相（ｍｉｃｒｏｐｈａｓｅ）分離により、水溶液中で形成されるある種の両親媒性分子の超分子複合体である。両親媒性分子の濃度が、所定温度で両親媒性の特徴であるＣＭＣに達したときに、ミセルが形成される。ブロック共重合体の親水性および疎水性セグメントのサイズを変化させることで、共重合体が生理学的温度でミセルを形成する傾向は、生理学的温度で形成されたミセルの標準サイズと同様に変化する。これらの傾向はまた、疎水性および親水性ブロックの混合を変えてポリマーをブレンドすることによって調節されうる。そのミセルは、水溶性Ｂブロックの反復単位とそれに溶解した薬剤の親油性部位とから形成される密集したコア、および、Ａブロックと生物学的薬剤の疎水性部位とから形成される親水性シェルを持つ。そのミセルは、水性環境において並進および回転の自由を持ち、ミセルを含む水性環境は水と類似した低い粘性を持つ。ミセル形成は、典型的に約０．００１〜５％（ｗ／ｖ）の共重合体濃度でおこる。
【０１３６】
本発明の共重合体により形成されたミセルの小さいサイズによって、小さいキャピラリーにおいてこれらのミセルは透過し、細胞に吸収されることができる。そのミセルはまた、適切な生物学的薬剤を大量に包含させることができる。例えば、プルロニックＬ６１によって形成されたミセルは少なくとも１ｍｇのドキソルビシンを２ｍｇの共重合体に包含させることができる。
【０１３７】
本発明のミセル中における薬剤の有効固定率は、式：
【０１３８】
【数９】

【０１３９】
を用いて決定される分配係数（Ｐ）により定量される。
【０１４０】
ここで、［Ａｇｅｎｔ］_aqはミセルの外の水性環境中における生物学的薬剤の濃度であり、［Ａｇｅｎｔ］_mはミセル中の薬剤の濃度である。いくつかの場合において、Ｐは、より疎水性の環境と比較して、水溶液中である種の薬剤の蛍光特性が異なることに基づき、簡単かつ正確に見積もりされる。
【０１４１】
炭素原子３〜４１を持つ炭化水素を含む親油性部位に結合したターゲッティング部位を含むターゲッティング分子の小さい部位は、本発明が目標とする実施形態による組成物のミセルに結合する。典型的にこの部分は、組成物のわずか約１０％ｗ／ｗの共重合体成分を含む。その親油性部位は疎水性“アンカー”として作用すると考えられており、これは非共有結合的にブロック共重合体ミセルと結合し、ターゲッティング部位がミセルの一部になる（ただし、それらを超えて伸張する）。このようなターゲッティング部位はまた、好ましくは、本発明の脳の化学療法の実施形態において使用されるミセルに結合する。しかしながら、脳の化学療法の実施形態において、その親油性部位は、ターゲッティング部位をミセルと非共有結合的に結合させるのに有効な、任意の親油性部位であり得る。脳の化学療法の実施形態において、その親油性部位は、例えば脂肪酸残基、脂質、リン脂質、または天然もしくは合成のポリマーでありうる。入手可能性および使用上の容易さにより、脂肪酸残基のような炭化水素基を含む親油性部位が好ましい。
【０１４２】
そのターゲッティング部位は、細胞、組織、ウイルス性または基質部位に対して親和性を持つ。典型的なターゲッティング部位は、細胞結合成分に対して親和性を持つ抗体およびホルモンを限定することなく、細胞結合成分に認識される炭化水素部位を含む任意の分子、および、細胞結合成分に結合する薬剤を含む。“細胞結合成分”というフレーズは、受容体および受容体分子の両方を含む。好ましくは、その細胞結合成分は、細胞表面結合成分である。商業的に入手できるかまたは文献にて説明されているポリクローナルおよびモノクローナル抗体の両方が使用されうる。その代わりに、そのリガンドは、例えばインスリンのような天然発生的なタンパク質であり、標的部に結合する。ターゲッティング部位の非限定例は、脳神経膠細胞（α₂−糖タンパク質）に対する抗−α₂−ＧＰ抗体であり、これはＳｌｅｐｎｅｖ等、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．３：２７３〜２７４（１９９２）で説明されている。
【０１４３】
ポリペプチドの特異性の多くを維持するために、好ましくは単一または二つの親油性部位がそれぞれポリペプチド分子に結合する。この結合は、Ｋａｖａｎｏｖ 等、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，３，３９〜４２（１９８９）に説明された方法によって達成され、その内容は引例によってここに参照する。この方法において、親油性部位またはそれらの反応性アナログが、界面活性剤のビス（２−エチルヘキシル）スルホコハク酸ナトリウム｛ＡＯＴ（登録商標）｝、の存在下でターゲッティング部位と反応し、オクタンと少量の水が転換したミセルを形成し、これは内部に水、外部にオクタンを持つミセルである。この転換したミセルはミクロ反応物として作用し、ポリペプチド分子の親油性部位による均一なポイント修飾を可能にする。例えば塩化ステアロイルまたは塩化ラウロイルのような脂肪酸の反応性誘導体は、ポリペプチド分子または他の親水性ターゲッティング部位と、この反応系を用いて反応させることができる。その反応系が脂肪酸アシル置換基のレベルで限定されるため、より大きい生物学的活性およびターゲッティング部位の溶解性が一般的に維持される。
【０１４４】
投与経路
経口運搬は、本組成物における好ましい投与方法である。経口投与において、組成物は錠剤、ロゼンジ、トローチ、粉末、シロップ、エリキシル、水溶液尾ｙぼい縣濁液の形態で使用することができる。錠剤の場合において、ラクトース、クエン酸ナトリウム、およびリン酸塩を含む担体が使用されうる。スターチのような様々な崩壊剤、およびステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクのような潤滑剤が、一般に錠剤中に使用されうる。カプセル形状の経口投与において、有用な希釈剤として、ラクトースおよび高分子量ポリエチレングリコールが使用される。水性縣濁液が経口用途に必要される場合、その組成物は乳化剤または懸濁剤と配合される。望ましくは、ある種の甘味料および／または香料が添加されうる。
【０１４５】
本発明の医薬組成物はまた、他の経路により投与され、その経路は典型的に（これらに限定されないが）、直腸、膣、例えばエアロゾルの使用により肺経由、または、筋肉内、皮下、腹腔内、動脈内もしくは静脈内による、非経口投与を含む。その組成物は、単一で投与され、または、標準的な医薬的な実施形態に従い医薬的に許容される担体または賦形剤と共に配合されうる。
【０１４６】
非経口的投与において、配合物の滅菌溶液が通常調製され、その溶液のｐＨは適切に調節されて緩衝される。静脈内の使用において、溶液の総濃度は製剤を等張にすることで制御されるべきである。眼への投与において、軟膏または点眼液が、アプリケーターまたは点眼剤にような当業界で周知の眼の運搬システムによって運搬される。このような組成物は、例えばヒアルロン酸、硫酸コンドロイチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはポリ（ビニルアルコール）、のような粘性様物質（ｍｕｃｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）、例えばソルビン酸、ＥＤＴＡまたは塩化ベンジルクロニウムのような保存剤、および、一般的な量の希釈剤および／または担体を含む。肺への投与において、希釈剤および／または担体はエアロゾルを形成するのに適しているように選択される。
【０１４７】
本発明の組成物の座薬形状として、膣、尿道および直腸への投与が有効である。このような座薬としては、一般的に室温では固体だが体温で溶解するような物質の混合物によって製造されうる。一般的にこのようなビヒクルを形成するための物質は、カカオ脂、グリセロゼラチン、硬化植物油、様々な分子量のポリエチレングリコールの混合物、およびポリエチレングリコールの脂肪酸エステルを含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１６ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９８０，ｐｐ．１５３０〜１５３３を参照すると、さらなる座薬投与形態の説明がある。類似したゲルまたはクリームも、膣、尿道、および直腸投与に用いられうる。
【０１４８】
さまざまな生物学的薬剤が本発明の用途に適している。これらは（これらに限定されないが）、サイトカイン、ホルモン（例えばインスリン）等のタンパク質、ペプチド（例えば、オリゴペプチドおよびポリペプチド）、組み換え溶解性受容体、モノクローナル抗体、ヒト成長ホルモン、組織プラスミノーゲン活性化因子、凝固因子、ワクチン、コロニー形成刺激因子、エリスロポイエチン、酵素およびジスムターゼを含む。
【０１４９】
生物学的薬剤の好ましいクラス（化学療法薬も含む）は、抗腫瘍剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、抗真菌剤、中枢神経系薬剤、免疫調節役およびサイトカイン、トキシン並びに神経ペプチドを含む。標的細胞が耐性メカニズムを発展させるような生物学的薬剤も好ましい。特に好ましい生物学的薬剤は、例えばドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ、ｍｉｔｈｏｘａｎｔｈｒｏｎｅもしくはカルミノマイシンのようなアントラサイクリン、ビンカアルカロイド、マイトマイシン系抗生物質、ブレオマイシン系抗生物質、例えばフルコナゾール（ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）のようなアゾール抗真菌剤、例えばアンホテリシンＢのようなポリエン抗真菌剤、例えばパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）のようなタキサン関連抗腫瘍剤、および、例えば腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターフェロンならびにサイトカインのような免疫調節薬を含む。
【０１５０】
好ましい生物学的薬剤（化学療法薬を含む）は、これらに限定されないが、例えばアンホテリシンＢ、フルシトシン、ケトコナゾール（ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、ミコナゾール、イトラコナゾール（ｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、グリセオフルビン、クロトリマゾール、エコナゾール、ターコナゾール（ｔｅｒｃｏｎａｚｏｌｅ）、ブトコナゾール（ｂｕｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、シクロピロックスオラミン、ハロプロジン、トイナフテート（ｔｏｉｎａｆｔａｔｅ）、ナフチフィン（ｎａｆｔｉｆｉｎｅ）、ナイスタチン、ナタマイシン、ウンデシレン酸、安息香酸、サリチル酸、プロピオン酸およびカプリル酸のような、追加の抗真菌剤を含む。このような薬剤はさらに、これらに限定されないが、例えばジドブジン（ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ）、アシクロビア、ガンシクロビア（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ビダラビン、イドクスウリビン、トリフルリジン（ｔｒｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、フォックスカルネット（ｆｏｘｃａｒｎｅｔ）、アマンダジン、リマンタジン（ｒｉｍａｎｔａｄｉｎｅ）およびリバビリンのような抗ウイルス剤を含む。このような薬剤はさらに、これらに限定されないが、例えば９−ラクタム抗生物質、広域抗菌ペニシリンおよびペニシリナーゼ耐性ペニシリン（例えばメチリシリン、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｌｉｎ）、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、アモキシリン、アンピシリン、アンピシリン−スルバクタム、アゾシリン（ａｚｏｃｉｌｌｉｎ）、バカンピシリン、カルベニシリン、カルベニシリン インダニル（ｉｎｄａｎｙｌ）、シクラシリン、メズロシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラジン、チカルシリン、イミ ペネム（ｉｍｉｐｅｎｅｍ）、およびアズトレオナム（ａｚｔｒｅｏｎａｍ）等）、セファロスポリン（セファロスポリンは、例えばセファピリン、セファキソリン（ｃｅｆａｘｏｌｉｎ）、セファレキシン、セフラジンおよびセファドロキシル等の第一世代セファロスポリン；例えばセファマンドル、セホキシチン、セファクロール、セフロキシム、セフロキシム アクセチル（ａｘｅｔｉｌ）、セフォニシド（ｃｅｆｏｎｉｃｉｄ）、セフォテタンおよびセフォラニド等の第二世代セファロスポリン；例えばセフォタキシム、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セホペラゾンおよびセフタジジム等の第三世代セファロスポリンを含む）、テトラサイクリン（例えばデメクロシテトラサイクリン（ｄｅｍｅｃｌｏｃｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリンおよびオキシテトラサイクリン等）、β−ラクタマーゼ阻害剤（例えばクラブラン酸等）、アミノグリコシド（例えばアミカシン、ゲンタマイシンＣ、カナマイシンＡ、ネオマイシンＢ、ネチルミシン、ストレプトマイシンおよびトブラマイシン等）、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシン、スペクチノマイシン，バンコマイシン、バシトラシン、イソニアジド、リファピン、エタンブトール、アミノサリチル酸、ピラジンアミド、エチオナイｍド、サイクロセリン、ダプソン、スルホキソンナトリウム、クロファジミン、スルホアミド（例えばスルファニルアミド、スルファメトキサゾールスルファセタミド、スルファダイアジンおよびスルフィソキサゾール等）、トリメトプリムスルファメトキサゾール、キノロン（ｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ；例えばナリジクス酸、シノキサシン、ノルフロキサシンおよびシプロフロキサシン（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）等）、メテナミン、ニトロフラントインおよびフェナゾピリジン等の抗菌剤を含む。このような薬剤はさらに、クロロキン、ジロキサニド フロエート、エメチンまたはデヒドロエメチン、８−ヒドロキシキノリン、メトロニダゾールキナクリン、メラルリプロール、ニフルチモックス（ｎｉｆｕｒｔｉｍｏｘ）、ペンタジジン、スチボグルコネートナトリウムおよびスラミン等の活性な抗原虫感染薬を含む。
【０１５１】
多様な中枢神経系薬が本発明の組成物における用途に適している。これらは、例えばフェノチアジン（例えばコンパジン（ｃｏｍｐａｚｉｎｅ）、トラジン（ｔｈｏｒａｚｉｎｅ）、プロマジン、クロルプロマジン、マセプロマジン、アミノプロマジン、ペラジン、プロクロルペラジン、トリフルオロペラジン、およびチオプロペラジン等）、ラウオルフィアアルカロイド（例えばレセルピンおよびデセルピン（ｄｅｓｅｒｐｉｎｅ））、チオキサンテン（例えばクロルプロチキセンおよびチオチキセン等）、ブチロフェノン（例えばハロペリドール、モペロン、トリフルオペリドール（ｔｒｉｆｌｕｏｐｅｒｉｄｏｌ）、チミペロン、およびドロペリドール等）、ジフェニルブチルピペリジン（例えばピモジド等）、およびベンズアミド（例えばスルピリドおよびチアプリド（ｔｉａｐｒｉｄｅ））等の精神安定剤；例えばグリセロール誘導体（例えばメネフェシンおよびメトカルバモール等）、プロパンジオール（例えばメプロバメート等）、ジフェニルメタン誘導体（例えばオルフェナドリン、ベンゾトラピン（ｂｅｎｚｏｔｒａｐｉｎｅ）、およびヒドロキシジン等）、およびベンゾジアゼピン（例えばクロルジアゼポキシドおよびジアゼパム）等のトランキライザー；９−遮断薬（例えばプロプラノール、アセブトロール、メトプロロールおよびピンドロール等）；例えばジベンズアゼピン（ｄｉｂｅｎｚａｚｅｐｉｎｅｓ）（例えばイミプラミド等）、ジベンゾシクロヘプテン（例えばアミトリプチリン等）、および四員環化合物（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｃｓ）（例えばミアンセリン）等の抗うつ薬；ＭＡＯ阻害剤（例えばフェネルジン、イプロニアジド、およびセレゲリン（ｓｅｌｅｇｅｌｉｎｅ）等）；例えばフェニルエチルアミン誘導体（例えばアンフェタミン、デキサムフェタミン（ｄｅｘａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅｓ）、フェンプロポレックス（ｆｅｎｐｒｏｐｏｒｅｘ）フェンテルミン、アンフェプラモン（ａｍｆｅｐｒａｍｏｎｅ）、およびペムリン（ｐｅｍｌｉｎｅ）等）およびジメチルアミノエタノール（例えばクロフェンシクラン（ｃｌｏｆｅｎｃｉｃｌａｎ）、シプロデネート（ｃｙｐｒｏｄｅｎａｔｅ）、アミノレックス、およびマジンドール等の神経賦活剤；ＧＡＢＡ作動性神経興奮様薬（例えばプロガバイド（ｐｒｏｇａｂｉｄｅ）等）、アルカロイド（例えばコデルゴクリン（ｃｏ−ｄｅｒｇｏｃｒｉｎｅ）、ジヒドロエルゴクリスチンおよびビンカミン（ｖｉｎｃａｍｉｎｅ）等）；コリン作用薬（例えばシチコリンおよびフィゾスチグミン等）；血管拡張剤（例えばペントキシフィリン等）；および脳活性化薬（例えばピリチノールおよびメクロフェノキセート）；同様にこれら薬剤のいくつかの混合物を含む。
【０１５２】
特に、例えばベンゾジアゼピン等の催眠鎮静薬、例えばフェノキアジン、チオキサンテンおよびブチロフェノン等の神経薬理学的薬剤、および中枢神経興奮薬も含まれる。本発明の脳の治療に関する実施形態は、生物学的薬剤の活性を向上させるような組成物に意図されているので、ここで説明した原則と方法を適用することによって、本発明のこの実施形態において広い範囲の中枢神経系薬剤を適用することができる。
【０１５３】
この組成物はまた、例えば抗体等のポリペプチド、例えばジフテリア毒素等の毒素、例えばコロニー形成刺激因子および腫瘍壊死因子、神経ペプチド、成長ホルモン、エリスロポイエチンならびに甲状腺ホルモン等のペプチドホルモン、α−リポタンパク質等のリポタンパク質、例えばヒアルロン酸等のプロテオグリカン、例えばゴナドトロピンホルモン等の糖タンパク質、例えばインターフェロンまたはインターロイキン等の免疫調節薬またはサイトカイン、例えばエストロゲン受容体等のホルモン受容体等の様々を利用できる。
【０１５４】
好ましいペプチドは、分子量が少なくとも約１，０００、より好ましくは少なくとも約５，０００，さらに好ましくは約１０，０００である。
【０１５５】
本共重合体はまた、例えば逆転写酵素阻害剤等の酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、アンジオテンシン変換酵素、５α−レダクターゼ等と共に使用されうる。これら薬剤の典型的なものは、ペプチド、および、例えばフィナステライド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）、キナプリル（ｑｕｉｎａｐｒｉｌ）、ラミプリル（ｒａｍｉｐｉｌ）、リシノプリル（ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ）、サキナビア（ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ）、リトナビア（ｒｉｔｏｎａｖｉｒ）、インジナビア（ｉｎｄｉｎａｖｉｒ）、ビス−テトラヒドロフランリガンド（Ｇｈｏｓｈ 等、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９（１７）：３２７８〜９０ １９６６を参照）、およびダイダノシン（ｄｉｄａｎｏｓｉｎｅ）等の非ペプチド構造である。このような薬剤は、単一でまたは併用療法で投与される：例えば、サキナビア、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、およびダイダノシン、またはサキナビア、ザルシタビンおよびジドブジンを利用した併用療法である（例えば、Ｃｏｌｌｉｅｒ 等、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．，１９９６ Ｊａｍ．２９（１）：９９を参照）。
【０１５６】
サイトカインが用いられる場合、選択されたサイトカイン（数種のサイトカインを含む）は、好ましくはそれぞれ疎水性置換基（例えば脂肪酸または脂質残基）で共有結合で修飾され、もしくは水性分散液中のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体のミセルに結合するか、または、疎水性置換基で共有結合で修飾され、次に前述のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体のミセルに結合するか、のいずれかである。
【０１５７】
ブロック共重合体ミセルへのサイトカインの結合は、ブロック共重合体水溶液中においてサイトカインを可溶化することによって非共有結合で、または、ブロック共重合体水溶液中でサイトカインをブロック共重合体と結合させて、生じた結合物を可溶化することによって共有結合で実施される。
【０１５８】
疎水性置換基のサイトカイン共有結合修飾、および、疎水性基によって修飾されていない、または修飾されたサイトカインのブロック共重合体ミセルへの結合の両方により、このサイトカインの特異的な免疫調節の増強、および患者に対するその副作用を減少させることが導かれる。これらの効果は、その免疫調節効果を提供するものよりむしろ、｛ｉ｝修飾された、またはミセル結合サイトカインの、受容体を持つ（標的）細胞への見かけ上の親和性を増加させる、｛ｉｉ｝サイトカインの標的細胞への透過性の有効性を増加させる、および｛ｉｉｉ｝臓器および組織でのサイトカイン非特異的相互作用の減少によって生ずるものである。
【０１５９】
多様なヒトおよび動物のサイトカインは、本発明の組成物における用途に適している。これらは、インターフェロン、インターロイキン、例えばＴＮＦα等の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ならびに免疫系の機能を制御する他のタンパク質およびペプチド因子を含む。これはこのような薬剤数種の混合物に拡張され、本発明は根本的にサイトカインそのものの特異的な活性を意図しているのではなく、むしろそれらの組成物を意図している、ということが認識できるであろう。
【０１６０】
疎水性置換基のサイトカイン共有結合修飾は、オクタン中のＡＯＴ（登録商標）の転換されたミセルであり、これは脂肪酸または脂肪残基（タンパク質またはペプチド分子あたり１〜５の残基）を持つペプチドまたはタンパク質分子の均一なポイント修飾を可能にするミクロリアクターを提供する。これにより、修飾された薬剤の水溶性および生物学的活性を維持することができる（Ｋａｂａｎｏｖ，等、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，３（１），３９〜４２（１９８９）を参照）。
【０１６１】
本発明における用途に適した追加の化学療法薬は、これらに限定されないが、例えばビンクリスチンおよびビンブラスチン等のビンカアルカロイド、例えばマイトマイシンＣおよびＮ−メチルマイトマイシンＣ等のマイトマイシン系抗生物質、例えばブレオマイシンＡ２等のブレオマイシン系抗生物質、例えばメトトレキセート、アミノプテリンおよびジデアザア−テトラヒドロ葉酸等の抗葉酸拮抗物質、コルヒチン、デメコルチン、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、例えばパクリタキセル（タキソール（Ｔａｘｏｌ）；登録商標）等のタキサン、アントラサイクリン抗およびその他である。該アントラサイクリン抗生物質は、低い安定性、標的組織中枢神経系での薬剤耐性の促進、または迅速な代謝による運搬問題を有する薬剤の例である。これらの抗生物質は、典型的に、７位でダウノサミン（ｄａｕｎｏｓａｍｉｎｅ）と結合する、融合テトラサイクリンアグリコン環系（ｆｕｓｅｄ ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ ａｇｌｙｃｏｎｅ ｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ）を含む。それらは例えば、式：
【０１６２】
【化１９】

【０１６３】
で示される化合物を含む。
【０１６４】
式中、Ｒ¹はヒドロキシまたはメトキシであり；Ｒ²は水素原子またはヒドロキシであり；Ｒ³はエチル、アセチル、ヒドロキシアセチル、またはヒドロキシアセチルのエステルである。これらのテトラサイクリン抗生物質は、多くの抗腫瘍剤のように、ＤＮＡの平面芳香環構造の間に挿入されて作用し、それによりＤＮＡ複製を阻害すると考えられている（Ｎｅｉｄｌｅ ａｎｄ Ｗａｒｉｎｇ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｓｐｅｃｔ ｏｆ Ａｎｔｉ-Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ａｃｔｉｏｎ，Ｐｉｔｍａｎ Ｐｒｅｓｓ（１９８３）を参照）。一般的に、腫瘍細胞は特に感受性が強く、それらが活発に増殖し、そのためそれらのＤＮＡの複製コピーが合成されるためである。このようなテトラサイクリン抗生物質は、これらに限定されないが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、カルミノマイシン、エピルビシン、インダルビシン（ｉｎｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、ミトキサントローネ、４−デメトキシ−ダウノルビシン、１１−デオキシダウノルビシン、１３−デオキシダウノルビシン、アドリアマイシン−１４−ベンゾエート、アドリアマイシン−１４−オクタノエート、またはアドリアマイシン−１４−ナフタレンアセテートを含む。
【０１６５】
用量
ミセル組成物中の生物学的薬剤の用量は、多くの場合、生物学的薬剤のみの用量に関してである。用量は、年齢、体重および患者の容態、並びに薬剤の薬物動態活性を考慮して医療専門家により処方されることによって設定される。場合によって、効果的な治療に必要とされる薬剤のミセル形成の量は、遊離の生物学的薬剤の使用で必要とされる量より少ないことがある。例として、癌治療におけるダウノルビシンにおいて、典型的な用量は約１．０ｍｇ／ｋｇ体重である。ビンブラスチンは典型的に、０．１〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。
【０１６６】
一般的に、本発明で用いられる生物学的薬剤は、有効量で動物に投与される。有効性に関し組成物において使用される共重合体の効果は、有効量において考慮されなければならない。一般的に、有効量は（１）治療しようとする病気の症状を減少させること、または（２）治療しようとする病気を治療することに関する薬理学的変化を誘導することの、いずれかに有効な量である。癌において、有効量は、：腫瘍のサイズを小さくする；腫瘍の成長を遅くする；転移を防ぐまたは阻害する；または罹患動物の余命を長くすることに有効な量を含む。
【０１６７】
多くの場合、多様な生物学的薬剤の代謝によって、その薬剤を投与したことによる未知の効果をもたらす、または増強する。これは確かに、アントラサイクリン系薬剤における場合であり、代謝により心臓毒性を導くと考えられている（Ｍｕｓｈｌｉｎ等、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１０：９７５〜９８２（１９９３）を参照）。本発明の共重合体組成物は、生物学的薬剤における代謝率を減少させ、それにより有害な副作用の潜在性を減少させることができる。
【０１６８】
生物学的薬剤による脳の透過性は、数種の技術によって測定され、同様に通常の当業者によって認識されうるものである。このような方法は、アイソトープ標識、生物学的薬剤の効果に対する動物行動の評価、および脳で生じる毒性効果を持つ薬剤に対する致死量の測定が含まれる。このような方法はさらに、適切な生物学的反応を引き出すために必要とされる容量における減少を測定することも含まれる。
【０１６９】
様々な抗真菌剤はヒト真菌感染症をうまく治療する。しかしながら、治療上の用量は場合によって、有効な薬物レベルを達成する量から、毒性副作用を防ぐ量の中間である。近年、例えばカンジダ アルビカンス（Candida albicans）等の本質的に感受性の強い種において薬剤耐性が出現し、例えばカンジダ クルセット（Candida kruset）等の本質的な薬剤耐性種の発生が増加することにより、より新規の薬剤の検索が促進されている。
【０１７０】
フルコナゾールが低い副作用発生率を持つにも関わらず、耐性の発生はますます問題となっている。化学療法薬活性を増強し、このような薬剤に対する耐性を転換した運搬ビヒクルは、それゆえにこの薬剤に対して切望されており、他の抗菌剤にとっても同様である。
【０１７１】
下記の実施例は、本発明の本質をさらに表すために提供されたものであり、本発明の発明の範囲を限定するものではなく、その範囲は添付の請求項によってのみ定義される。
【０１７２】
実施例１ ミセルサイズ
下記で示すポリ（オキシエチレン）に対するポリ（オキシプロピレン）の割合を持つポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体を、ＲＰＭＩ１６４０媒体中で下記に示す濃度で分散させた。その混合物を４０分、３００Ｃでインキュベーションした。その平均的なミセルの直径はｑｕａｓｉｅｌａｓｔｉｃ光散乱法によって測定された（Ｋａｂａｎｏｖ等、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２８：２３０３２３１４（１９９５）を参照）。その結果を以下に示す。
【０１７３】
【表５】

【０１７４】
実施例２ 脂肪酸アシル共役
０．１Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）中の、２ｍｇ／ｍｌのグリア細胞のα₂−糖タンパク質に特異的な抗α₂−ＧＰ抗体５０μｌ（Ｃｈｅｋｈｏｎｉｎ等、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２８７：１４９〜１５２ １９９１）の溶液を、オクタン中の０．１ＭのＡＯＴ（登録商標）ビス（２−エチルヘキシル）スルホコハク酸ナトリウム（Ｓｅｒｖａ、Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ドイツ国）より購入可能）２ｍｌ中に混合した。反応は、オクタンの０．１ＭのＡＯＴ（登録商標）０．２ｍｌ中にステアリン酸塩化物の二倍を超過するモル量で添加することにより開始される。そのステアリン酸塩化物は、Ｋａｂａｎｏｖ等、Ｍｏｌｅｋ Ｂｉｏｌｏｇｉｙａ（ロシア国）、２２：４７３〜４８４（Ｅｎｇｌ．ｅｄｎ．：３８２〜３９１ １９９８）に記載されているように，ステアリン酸（Ｒｅａｋｈｉｍ，（ロシア国）より購入可能）より得られる。その反応は２５℃で一晩行われた。その生成物は冷アセトンで３回沈殿させ、ＲＰＭＩ１６４０媒体中に溶解させ、０．２２μｍフィルターで無菌的にろ過した（本実験において使用されているポリクローナル抗体はまた、神経膠線維酸性タンパク質と共に反応させた）。
【０１７５】
実施例３ ヨウ化ターゲッティング部位
抗−α₂ＧＰ抗体は、Ｓｌｅｐｎｅｖ Ｖ．Ｉ．等、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，３，２７３〜２７４（１９９２）に記載されているように、オクタン中のＡＯＴ（登録商標）の転換されたミセルの系で、Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ試薬で¹²⁵Ｉでラベルした。¹²⁵Ｉでラベルされたタンパク質の特異的な放射性活性は、１９〜２１Ｃｉ／ｍｏｌの範囲であった。
【０１７６】
ＲＰＭＩ１６４０中に１．５％（ｗ／ｖ）の共重合体プルロニックＰ８５および２．５％（ｗ／ｖ）の共重合体プルロニックＬ６４を溶解した混合物中に、¹²⁵Ｉでラベルされた抗−α₂ＧＰ抗体（１ｍＣｉ／ｍｌ）を溶解することによって作製された組成物を用いて、ウィスターラット（体重８０ｇ、８匹／グループ）に腹腔内注射した。ＲＰＭＩ１６４０媒体に溶解した¹²⁵Ｉでラベルされたポリペプチドを、同じ濃度で投与した。３日後、その動物を殺し、放射活性分析のために組織サンプルを取り、Ｃｈｅｋｈｏｎｉｎ等、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２８７，１４９〜１５２（１９９１）に記載の方法で生体内分布を分析した。放射活性の分布は、液体シンチレーション係数器を用いて定量された。この実験は少なくとも２回繰り返され、結果は誤差１０％以下の再現性を得た。その結果、脳の放射活性の特定の組織（±Ｓ．Ｄ．）中の放射活性に対する割合は、以下に示すとおりである。
【０１７７】
【表６】

【０１７８】
実施例４ 行動変化の定量
行動反応における変化の定量的評価［Ｔｈｅｏｒｙ ｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｓ．Ｊ．Ｃｏｏｐｅｒ，Ｅｄ．，Ｖｏｌ．１（アカデミックプレス、ロンドン、ニューヨーク、１９８１年）を参照］を行った。ＤＢＡ／２雄マウスのグループ（１０匹／用量ポイント）（Ｋｒｉｕｋｏｖｏ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｕｓｓｉａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ロシア国）より得られる。体重２０〜２５ｇ）に、同様な特性の動き活性と共に、０．１０ＬＤ９５に相当する用量で試験製剤を腹腔内注射した。濃度は、最高値０．１ｍｌがそれぞれのマウスに注射されるように調製された。マウス可動性（セル内でのマウス移動の度合い）および毛づくろい特性（ｇｒｏｏｍｉｎｇ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ）は、Ｒｈｅｍａラボテクニックデバイスを用いて、３０分のインターバルで１５時間以上、それぞれのグループについて記録された。この実験は３回繰り返された。
【０１７９】
実施例５ 毒性測定
Ｔｈｅｏｒｙ ｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｓ．Ｊ．Ｃｏｏｐｅｒ，Ｅｄ．，Ｖｏｌ．１（アカデミックプレス、ロンドン、ニューヨーク、１９８１年）に記載の特異的な神経症状の発症によって伴う致死効果を測定した。ＤＢＡ／２マウス（体重１８〜１９ｇ）のグループ（１０匹／用量ポイント）に、試験製剤を腹腔内に注射した。濃度は、最高値０．５ｍｌがそれぞれのマウスに投与されるように調節した。特異的な致死作用の定量的評価において、致死量（Ｌ．Ｄ．）は、１０の濃度ポイントに基づいてプロビット方法を用いて算出された。この実験は２回繰り返され、その結果は誤差１０％以下で再現されるべきである。
【０１８０】
実施例６Ａ ミセル形成
（ポリプロピレン）の（ポリエチレン）に対するそれぞれの割合が、それぞれ１．００および１．５０であり、結合値（ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｖａｌｕｅ）（Ｎ）が１．３０である、ブロックプルロニックＰ８５およびプルロニックＬ６４の１：１．５の混合物をＲＰＭＩ１６４０媒体で希釈し、最終濃度を４０℃で４．０％にした。その混合物を３７℃で３０分インキュベーションし、次に０．２２μｍフィルターでろ過滅菌した。ＲＰＭＩ１６４０媒体中のダウノルビシン２００μｇの等量溶液を加え、この混合物を３７℃で３０分間インキュベーションした。
【０１８１】
実施例６Ｂ 脳標的ミセルの調製
実施例６Ａのプルロニックミセル溶液および実施例２のステアリン酸化した抗体溶液を等量、３７℃で混合した。得られた溶液およびＲＰＭＩ１６４０中に溶解した滅菌６ｍｇ／ｍｌハロペリドール溶液を等量、３７℃で混合した。
【０１８２】
実施例７ 脳の生体内分布の行動測定
実施例６で記載された製剤を、抗ＧＦＡＰ抗体が放射活性ではなく、０．４ｍｇ／ｍｌの濃度で使用されたことを除いて、これらの実験に用いた。
【０１８３】
溶液は、腹腔内注射され、動物の死亡は１４日間毎日モニターされた。ＬＤ₅₀および最大耐量（“Ｍ．Ｔ．Ｄ．”、すなわち試験されている動物と同数の６匹の動物が死なない最大用量である）をプロビット分析を用いて算出した。Ｃｈａｎ ａｎｄ Ｈａｙｅｓ ｉｎ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，Ｈａｙｅｓ，Ａ．Ｗ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９，ｐｐ．１６９〜１８９を参照。プルロニック賦形剤中で投与された場合、ハロペリドールのＬＤ₉₅の値は、０．１５ｍｇ／ｋｇと決定され、プルロニック賦形剤がない場合、ハロペリドールのＬＤ₉₅の値は、７５ｍｇ／ｋｇと決定された。
【０１８４】
プルロニック賦形剤０．５ｍｌ中の、一定の組成物のＬＤ₉₅の１０％に等しい量をＤＢＡ／２マウスに腹腔内注射した（実施例６）。これらの注射による行動の結果（±Ｓ．Ｄ．）はＫａｂａｎｏｖ 等、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，２２：１４１（１９９２）の記載と同様に測定され、結果を下記に示す。
【０１８５】
【表７】

【０１８６】
上記の表からわかるように、ミセル状ハロペリドールは、ＬＤ₉₅の１０％量を基準に合わせた遊離ハロペリドールに比べて顕著に活性化している。
実施例８ 特異的および非特異的標的分子
特異的な標的組成物を実施例６に記載の方法で調製した。抗ＧＦＡＰ抗体の最終濃度は０．０２ｍｇ／ｍｌであり、その特異的な放射活性は２０Ｃｉ／ｍｏｌであった。
【０１８７】
非特異性のものは、脳特異的抗体に対する非特異的マウスＩｇＧのＦａｂ製剤で置き換えた以外は、同じ方法を用いて調製された。抗体の最終濃度は０．０２ｍｇ／ｍｌであり、その特異的な放射活性は２０Ｃｉ／ｍｏｌであった。
【０１８８】
これらの製剤（０．５ｍｌ）をＤＢＡ／２マウスに腹腔内注射した。その結果の生体内分布（±Ｓ．Ｄ．）を以下に示す。
【０１８９】
【表８】

【０１９０】
実施例９ ニューロン特異的抗エノラーゼ抗体を用いた標的
ターゲッティング組成物を実施例６の方法に基づいて形成され、ここでその抗体は、ニューロン特異的エノラーゼ（“抗ＮＳＥ ＭＡｂ”、Ｒｕｓｓｉａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（モスクワ、ロシア国）より入手可能）のｙ−サブユニットに対するモノクローナル抗体であった。その抗体の最終濃度は０．３５ｍｇ／ｍｌで、その特異的放射活性は１８Ｃｉ／ｍｏｌであった。対照実験として、実施例８に記載の非特異的マウス抗体中性物が使用された。
【０１９１】
これらの製剤（０．５ｍｌ）を、ＤＢＡ／２マウスに腹腔内注射した。結果の生体内分布（±Ｓ．Ｄ．）を以下に示す。
【０１９２】
【表９】

【０１９３】
実施例１０ インスリンを用いた標的
インスリン標的分子を、実施例６の方法を用いて、ステアリル部位をインスリン（シグマ（セントルイス、ミズーリ州）より入手可能）に結合させることによって調製した。その標的分子を、実施例６に記載の方法を用いてハロペリドール組成物に結合させた。組成物中のインスリンの最終濃度は、０．４ｍｇ／ｍｌであった。ハロペリドール組成物のＬＤ₉₅を、実施例７の方法を用いて３．０ｍｇ／ｋｇと決定した。
【０１９４】
一定の組成物のＬＤ₉₅の１０％に等しい量をＤＢＡ／２マウスに０．５ｍｌ腹腔内注射した（それぞれの処理に対して６匹のマウス）。これらの注射による行動は、Ｋａｂａｎｏ等、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，２２：１４１（１９９２）に記載のように測定され、その結果を以下に示す。
【０１９５】
【表１０】

【０１９６】
上記の表からわかるように、ミセル状ハロペリドールは、ＬＤ₉₅の１０％量で標準化した遊離のハロペリドール量に比べて顕著に活性であった。
【０１９７】
実施例１１ スルピリド組成物
スルピリドおよび実施例９のステアリル化した抗ＮＳＥ Ｆａｂ抗体製剤を、実施例６に記載の方法を用いてブロック共重合体ミセルに結合させた。調合物中の抗ＮＳＥ Ｆａｂの最終濃度は、２．１ｍｇ／ｍｌであった。滅菌したＲＰＭＩ１６４０媒体中のスルピリド対照溶液を調製した。その調合物のＬＤ₉₅値は実施例７に記載の方法で決定された。そのブロック共重合体製剤のＬＤ₉₅は１２．１ｍｇ／ｋｇ体重であり、その対照調合物は１００ｍｇ／ｋｇ体重であった。
実施例１２ トリフルオロペラジン組成物
ステアロイル塩化物で処理したトリフルオロペラジンおよび抗ＧＦＡＰ Ｆａｂ抗体製剤を実施例６に記載の方法でブロック共重合体に結合させた。製剤中の抗体の最終濃度は０．２ｍｇ／ｍｌであった。ＲＰＭＩ１６４０媒体中のトリフルオロペラジンの滅菌対照溶液を調製した。その製剤のＬＤ₉₅値は実施例７に記載の用に決定された。そのブロック共重合体のＬＤ₉₅は、０．０４ｍｇ／ｋｇ体重であり、対照製剤では１０ｍｇ／ｋｇ体重であった。
【０１９８】
最小神経弛緩用量（ＭＮＤ）をそれぞれの製剤に対して決定した。最小神経弛緩用量は、観察された行動としての神経弛緩効果を起こす最小用量として定義される（Ｋａｂａｎｏｖ等、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２５８：３４３〜３４５，１９８９を参照）。共重合体含有製剤のＭＮＤは、０．０２ｍｇ／ｋｇであり、一方で対照製剤では２ｍｇ／ｋｇであった。ＬＤ₉₅／ＭＮＤの割合は、共重合体製剤で５０，および対照製剤で５であった。
【０１９９】
実施例１３Ａ 癌細胞耐性に対する細胞毒性
プルロニックＰ８５をＲＰＭＩ１６４０（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．Ｃｏｓｔａ Ｍｅｓａ，ＣＡ）に溶解し、最終濃度を１．０％とし、次にその溶液をろ過で微生物または真菌類を除去して滅菌した。好ましくはプルロニックＰ８５溶液を滅菌薬剤溶液で適宜希釈して、下記の細胞培養実験に使用した。
【０２００】
細胞毒性研究は、形質転換細胞のＳＫＯＶ３系（以降、“ＳＫ細胞”という）およびそれらから誘導されたＳＫＶＬＢ細胞（以降、“ＳＫ耐性細胞”という）を用いてなされた。両方の細胞系はリング博士（Ｄｒ．Ｖ．Ｌｉｎｇ、トロント大学）により提供された。ＳＫ耐性細胞系は、ビンブラスチン存在下での長期間の培養によりＳＫ細胞系から誘導された多剤耐性細胞系である。
【０２０１】
多様な抗癌剤希釈液のいくつかをＲＰＭＩ媒体または上述のプルロニックＰ８５溶液で調製した。細胞は、これらの実験に使用するために、等量の細胞縣濁液（２０００〜３０００細胞）を９６ウェルマイクロリッタープレート（コースター、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）のウェルにプレーティングし、２日間培養することによって調製された。全細胞培養は、３７℃、５％二酸化炭素雰囲気下でなされた。その後、新鮮な培地（１０％ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６３０培地）をプレート当たり１０μｌ添加した。遊離抗癌剤または共重合体と抗癌剤の希釈液をウェルに１００μｌ添加した。細胞は、遊離またはミセル状の薬剤に２時間晒された。このインキュベーションの後、その細胞を新鮮培地で３回洗浄した。次にその細胞を新鮮培地でさらに４日間培養した。
【０２０２】
それぞれの培養における生存細胞に数を、標準ＸＴＴ解析によって決定し、これはミトコンドリア酵素の活性を測定するものである（Ｓｃｕｄｉｅｒｏ等、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，４８：４８２７（１９８８）を参照）。ウェル当たり５０μｌの、１．５４ｍｇ／ｍｌフェナジンメトサルフェート（シグマ）のＰＢＳ溶を５μｌ／ｍｌで含む、ＰＲＭＩ１６４０の滅菌１ｍｇ／ｍｌＸＴＴ（２，３−ビス［２メトキシ−４−ニトロ−５−スルフォフェニル］−２Ｈ−テトラゾリウム−５カルボキシアニリド ｉｎｎｅｒ ｓａｌｔ、シグマ、セントルイス、ミズーリ州）溶液を、細胞に添加した。その細胞を１６時間インキュベーションし、各ウェルの吸光度を４５０ｎｍで測定した。任意の測定値（３つの測定値の平均）に対するＳＥＭを１０％の値で測定した。ＩＣ₅₀値（すなわち５０％阻害が達成された濃度）を、生存細胞の数（すなわちミトコンドリア酵素の活性）とその細胞に適用された薬剤の濃度をプロットしたグラフから外挿することによって決定した。ＳＫ耐性細胞の結果は以下に示すとおりである。
【０２０３】
【表１１】

【０２０４】
実施例１４ 共重合体の滴定
実施例１３Ａの方法論が、二つの詳細な点を除いて用いられた。第一の相違点は、ドキソルビシン耐性ＭＣＦ７細胞（ＭＣＦ ＡＤＲ細胞、実施例２１でさらに記載される）をＳＫ細胞の代わりに用いた。第二に、多様なドキソルビシン濃度に加えて、多様な共重合体濃度も用いられた。多様な濃度のプルロニックＬ６１の存在下で維持された培養における、ドキソルビシン濃度の変化に伴う阻害の割合は、図１Ａに示されている。系１は遊離ドキソルビシン；系２は０．６１×１０^-6ＭプルロニックＬ６１存在中のドキソルビシン；系３は０．３×１０^-5ＭプルロニックＬ６１存在中のドキソルビシン；系４は０．１６×１０^-4ＭプルロニックＬ６１存在中のドキソルビシン；系５は０．８×１０^-4ＭプルロニックＬ６１存在中のドキソルビシン；系６は０．４×１０^-3ＭプルロニックＬ６１存在中のドキソルビシン；および系７は０．４×１０^-1ＭプルロニックＬ６１存在中のドキソルビシンである。図１Ｂにおいて、これらのデータはプルロニックＬ６１の指定された濃度の存在下で、細胞に適用されたドキソルビシンに対するＩＣ₅₀値を示した図のように統合されている。
【０２０５】
実施例１５ 非経口用組成物
非経口投与に適した組成物は、４０℃で、４００ｍｇのプルロニックＰ８５および６００ｍｇのプルロニックＬ６４を５０ｍｌのＲＰＭＩ１６４０に溶解した溶液によって調製された。その混合物を３７℃で３０分インキュベーションし、次に０．２２ｇｍフィルターでろ過することで滅菌した。そのろ過溶液を、１００ｍｇの滅菌凍結乾燥ハロペリドール粉末を５０ｍｌのＲＰＭＩに溶解した溶液と混合し、３７℃で３０分間インキュベーションした。
【０２０６】
その組成物は、活性を失うことなく室温で暗所に７日間保存することができ、または、凍結乾燥すれば室温、暗所で少なくとも１年保存することができる。
【０２０７】
実施例１６ 非経口用組成物
非経口投与に適した組成物は、１００ｍｇのアスコルビン酸ナトリウムを１０ｍｌの塩化ナトリウム９％水溶液に溶解することによって調製された。この溶液の半分に、４００ｍｇのプルロニックＰ８５および６００ｍｇのプルロニックＬ６４を４℃で添加した。その混合物を３７℃で３０分インキュベーションし、次に０．２２μｍフィルターでろ過することで滅菌した。１００ｍｇの滅菌凍結乾燥ハロペリドール粉末および５０ｍｇのグルコースを別々に、残りのアスコルビン酸ナトリウム−塩化ナトリウム溶液に溶解し、その二つの溶液を混合し、３７℃で３０分間インキュベーションした。
【０２０８】
この組成物は、活性を失うことなく室温で暗所に３０日間保存することができ、または、凍結乾燥すれば室温、暗所で少なくとも１年保存することができる。
【０２０９】
実施例１７ 非経口用組成物
さらに非経口投与に適した組成物は、１００ｍｇのアスコルビン酸ナトリウムを１００ｍｇの塩化ナトリウム９％水溶液に溶解することによって調製された。この溶液の半分に、４００ｍｇのプルロニックＰ８５および６００ｍｇのプルロニックＬ６４を４℃で添加した。その混合物を３７℃で３０分インキュベーションした。１００ｍｇの滅菌凍結乾燥ハロペリドール粉末および５０ｍｇのグルコースを別々に、残りのアスコルビン酸ナトリウム−塩化ナトリウム溶液に溶解し、その二つの溶液を混合し、３７℃で３０分間インキュベーションした。この混合物を、０．２２Ａｍフィルターでろ過することで滅菌した。この組成物は、活性を失うことなく室温で暗所に３０日間保存することができ、または、凍結乾燥すれば室温、暗所で少なくとも１年保存することができる。
【０２１０】
実施例１８ 非経口用組成物
非経口投与に適した組成物は、４００ｍｇのプルロニックＰ８５および６００ｍｇのプルロニックＬ６４を、アスコルビン酸ナトリウム１ｍｇ／ｍｌおよび塩化ナトリウム０．９ｇ／ｍｌを含む水溶液の５０ｍｌに溶解するよって調製された。この混合物を３７℃で３０分間インキュベーションした。アスコルビン酸ナトリウム１ｍｇ／ｍｌおよび塩化ナトリウム０．９ｇ／ｍｉを含む水溶液５０ｍｌ中に溶解した、１００ｍｇの滅菌凍結乾燥ハロペリドール粉末および５０ｍｇのグルコースをこれに添加した。次にこの混合物を、３７℃で３０分間インキュベーションした。この製剤１００ｍｌに、４０ｍｇの凍結乾燥された疎水性化された抗ＧＦＡＰ Ｆａｂ粉末を溶解し、この溶液を３７℃で３０分間インキュベーションし、次に０．２２μｍフィルターでろ過することで滅菌した。この組成物は、活性を失うことなく室温で暗所に３０日間保存することができ、または、凍結乾燥すれば室温、暗所で少なくとも１年保存することができる。
【０２１１】
実施例１９
さらに非経口投与に適した組成物は、１００ｍｇのアスコルビン酸ナトリウムを１００ｍｇの塩化ナトリウム９％水溶液に溶解することによって調製された。この溶液に１０ｍｇのプルロニックＬ６１を４０℃で添加した。その混合物を３７℃で３０分間インキュベーションし、０．２２μｍフィルターでろ過することで滅菌した。１０ｍｇドキソルビシンと共にコンテナにパッケージングされた。
【０２１２】
実施例２０ 急性毒性
プルロニックＦ１０８、Ｐ８５およびＬ６１の急性毒性を、５週間齢のＢＡＬＢ／ｃ雌マウスで試験した。それぞれの実験グループは、６匹のマウスを含む。
【０２１３】
等張プルロニック溶液の様々な用量を腹腔内注射した。動物死亡率を１４日間毎日観察した。ＬＤ₅₀および最大耐量（“ＭＴＤ”、すなわち処理された６匹が等しく死なない用量である）をプロビット解析によって算出された（Ｃｈａｎ ａｎｄ Ｈａｙｅｓ ｉｎ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ， Ｈａｙｅｓ，Ａ．Ｗ．，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９，ｐｐ．１６９〜１８９を参照）。結果を以下に示す。
【０２１４】
【表１２】

【０２１５】
実施例２１
ＧＦＡＰおよびα２−糖タンパク質に対する抗体（Ａｂ）を、実施例１で記載したようにステアリン酸で修飾した。それらはまた、Ｋａｖａｎｏｖ等、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，２２：１４１（１９９２）に記載されたようにプルロニックＰ８５に共有結合された。
【０２１６】
グリオームの治療において、ドキソルビシンの治療効果を調査した。Ｋｒｉｕｋｏｖｏ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｕｒｓｅｒｙ ｏｆ Ｒｕｓｓｉａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓより得た雌スプラギーダウレィラット（Ｓｐｒａｇｕｅ-Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔｓ）（２８０〜３００ｇ）のグループ（ｎ＝２５）において、Ｃ６グリオーム細胞を脳内接種させた。接種より１０，１５，および２５日後に、（ａ）１０ｍｇ／ｋｇの遊離ドキソルビシン、（ｂ）１％プルロニックＰ８５中のドキソルビシン、（ｃ）ステアリン酸塩化物で修飾したＡｂを０．１ｍｇ／ｍｌで含む１０％プルロニックＰ８５、および（ｄ）プルロニックＰ８５十結合したＡｂを０．１Ｍｇ／ｍｌで含む１０％プルロニックＰ８５中のドキソルビシンを腹腔内注射した（量は、１ｍｌ／３００ｇ体重）。対照は、等量の塩を用いて腹腔内注射することでなされた。臨床的観察を毎日行った。はじめの２ヶ月は毎週、その後は毎月、動物の計量を行った。生存徴候は、動物が死亡し、検死を死亡後５分以内に開始して確認する。生存中のデータは、腫瘍の発生および潜伏に対する薬剤の効果を評価するために分析された。そのデータは処理グループ（Ｔ）および対照（Ｃ）の中間生存時間の割合として表されている。検死のために全ての主要な臓器を保存し、そのまま固定した。その尾（生存中の動物同定ための試験に使用された）を組織と共にホルマリンで保存した。脳全体を除去し、異なる３点を切り出した。脊髄の３部位は頸部、胸部および腰部の位置で収集された。組織部位はマイクロトームを用いて４〜６ｍｍ厚さにカットされ、ヘマトキシリン−エオシンで染色された。脳の病理組織学的試験は、（ｉ）動物中の腫瘍の総数、および（ｉｉ）担癌動物の数、（ｉｉｉ）病理組織学的分類および腫瘍の格付によって評価された。その実験の結果を以下に示す。
【０２１７】
【表１３】

【０２１８】
病理組織学的試験はまた、（１）遊離ドキソルビシンは、対照と比較しても腫瘍サイズおよび数に対して何の効果もなかった、（２）全ての３つのミセル状製剤は、腫瘍サイズおよび数において顕著な減少がみられた、（３）最も顕著な効果は、ミセル状ドキソルビシン＋ステアロイル化抗体の場合において観察され、この場合腫瘍は特に観察されなかった、ということが明らかになった。
実施例２２ 経口投与によるインスリン製剤のインビボ活性
マウスにおけるインスリンの過剰投与による低血糖症を、生物学的反応基準として使用した。薬剤活性は、投与中の時間経過に対する血糖値を分析することによって評価した。遊離インスリンの等張液（Ｉｎｓ）またはＰＯＥ−ＰＯＰブロック共重合体を調合したインスリンを、皮下または経口のいずれかで同じ用量をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。
【０２１９】
雌の６週齢Ｂａｌｂ／ｃマウス（時間のポイント当たり６匹）に、皮下または経口で、体重２０ｇあたり（５ｍｌ／ｋｇ）１００μｌの滅菌インスリンまたはＳＰ１−インスリン溶液を投与し、対照グループの動物には等張溶液を同量投与した。０．０２ｍｇ／ｍｌのインスリンおよびＳＰ１−インスリン注射は、２７．３μ／ｍｌの活性を持つ。
【０２２０】
様々な時間インターバル（投与後、０．５〜６時間）の後、動物を殺し、血漿サンプルを収集し、標準グルコースオキシダーゼ−パーオキサイド方法によって血糖値を分析した。統計的な有意性は、ダンカン−クラマー（Ｄｕｎｃａｎ−Ｋｒａｍｅｒ）の複数範囲のテキストによって分析された。
【０２２１】
インスリンは、皮下注射された場合、薬剤を投与された後３時間で正常状態の約１５％に達するほどの、可逆的な血糖値降下をもたらし、次に約６時間後、正常状態に戻る。皮下に投与されたＳＰ１−インスリン製剤は、インスリンとしてほぼ同様の変化を起こす（データは示さず）。薬剤の経口投与の比較によって、ＳＰ１−インスリンは、薬剤を皮下投与されたのと同様の薬物動態パターンで、血糖値の顕著な減少（正常状態の約２８％）をもたらすことを示し、一方で同じ方法および同じ用量で投与されたインスリンはわずかな変化しか生じなかった。
【０２２２】
この研究の結果は、インスリンがブロック共重合体担体へ結合することにより、経口投与中の活性を実質的に増加させることが示され、これは経口投与されたＳＰ１−インスリンの生物学的利用可能性は、皮下注射された遊離インスリンに匹敵することが示唆されている。
【０２２３】
実施例２３
Ａ．Ｎ＝１．００（プルロニックＰ７８５）であるポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）のブロック共重合体を、最終濃度が４℃で２．０％になるようにＲＰＭＩ１６４０媒体で希釈した。その混合物を３７℃で３０分インキュベーションし、次に０．２２μｍフィルターでろ過滅菌した。ヒト組み換えインターフェロンα₂のＲＰＭＩ１６４０媒体の滅菌溶液の等量を添加し、この混合物を３７℃で３０分間インキュベーションした（製剤Ａ）
Ｂ．製剤Ａ、および、Ｊｕｒｋａｔ細胞に関するＲＰＭＩ１６４０媒体中の非修飾ヒト組み換えインターフェロンα₂の溶液（製剤Ｂ）の抗増殖活性を、細胞成長の指標における減少によって（初期の細胞数に対する、製剤Ａまたは製剤Ｂで２４時間インキュベーションした細胞数の割合）、フローサイトメトリーを用いて測定した。結果を以下に示す。
【０２２４】
【表１４】

【０２２５】
実施例２４
Ａ．実施例２３（製剤Ａ）に記載されたように、ヒト組み換えインターフェロンα₂をポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）のブロック共重合体のミセル（Ｎ＝１．０）に結合した。非修飾ヒト組み換えインターフェロンα₂のＲＰＭＩ１６４０溶液（製剤Ｂ）を対照として用いた。製剤Ａおよび製剤Ｂのインターフェロンα₂の濃度はそれぞれ１×１０^-13Ｍおよび１×１０^-10Ｍであった（実施例２３で示したデータに従って、製剤Ａおよび製剤Ｂのインターフェロンα₂の濃度は、Ｊｕｒｋａｔ細胞に同じ抗増殖効果を起こさせる）。
【０２２６】
Ｂ．製剤Ａおよび製剤Ｂの抗増殖活性は、Ｊｕｒｋａｔ細胞の細胞周期分布ののフローサイトメトリー解析によって決定された。結果を以下に示す。
【０２２７】
【表１５】

【０２２８】
実施例２５
Ａ．ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）の１：１．５の混合物のブロック共重合体（プルロニックＰ８５およびＬ６４）は、（オキシエチレン）ブロックに対する（オキシプロピレン）の個別の割合（ｎ）が、それぞれ１．００および１．５０であり、１．３０の結合値（Ｎ）を持ち、これをＲＰＭＩ１６４０媒体で最終濃度が４℃で２．０％になるように希釈した。好ましくは混合物を３７℃で３０分インキュベーションし、次に０．２２μｍのフィルターでろ過滅菌した（製剤Ａ）。
Ｂ．０．１Ｍホウ酸塩緩衝液（ｐＨ８〜５）中の２ｍｇ／ｍｌ天然ヒトインターフェロンα₂ ５０μｌを、オクタン中の０．１Ｍ ＡＯＴ（登録商標）の２ｍｌに溶解した。オクタン中の０．１Ｍ ＡＯＴ（登録商標）の１００倍モル量超（インターフェロンα₂に比べて）の塩化ステアロイルを得られたミセル系に添加した。その反応混合物を２５度で一晩インキュベーションした。ステアロイル化サイトカインを冷アセトンで３回沈殿させ、ＲＰＭＩ１６４０媒体に溶解し、０．２２μｍフィルターでろ過滅菌した（製剤Ｂ）。
【０２２９】
Ｃ．修飾したヒト天然インターフェロンα₂（製剤Ｂ）をポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）のブロック共重合体に結合させ、ここで、実施例２４で記載したようにＮ＝１．３０（製剤Ａ）であった（製剤Ｃ）。
【０２３０】
Ｄ．製剤Ｃ、および対照として修飾されていない天然のインターフェロン−α₂（製剤Ｄ）の抗ウイルスを、３Ｔ３ＮＩＨ細胞における水泡性口内炎ウイルスの細胞変性作用の抑制によって評価した。製剤ＣおよびＤを、致死量の１００倍のウイルスで感染させる２４時間前に細胞に添加した。抗ウイルス効果をウイルス感染２４時間後に測定した。製剤ＣおよびＤのウイルス力価は、それぞれ３×１０⁹および２×１０⁵と測定された。
【０２３１】
実施例２６
Ａ．天然のブタインターフェロン−αを、実施例２５（製剤Ａ）で記載されたように塩化ステアロイルで修飾した。修飾されていない天然のインターフェロン−α（製剤Ｂ）を対照に用いた。
【０２３２】
Ｂ．製剤ＡおよびＢの抗ウイルス活性は、ブタ胎児の腎細胞における水泡性口内炎ウイルスの細胞変性作用の抑制によって評価した。製剤ＡおよびＢを、致死量の１００倍のウイルスで感染させる２４時間前に細胞に添加した。抗ウイルス効果をウイルス感染２４時間後に測定した。製剤ＡおよびＢのウイルス力価は、それぞれ２×１０⁸および１×１０⁴と測定された。
【０２３３】
実施例２７
Ａ．天然のブタインターフェロン−αを、ホスファチジルイノシトールで修飾した。最後に、０．１Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）中の２ｍｇ／ｍｌインターフェロン−α溶液５０μｌを、オクタンの０．１Ｍ ＡＯＴ（登録商標）２ｍｌに溶解させた。オクタン０．１Ｍ ＡＯＴ（登録商標）中で前もって過ヨウ素酸ナトリウムによって酸化したインターフェロン−α₂の５０倍以上のモル量のホスファチジルイノシトール、および１００倍以上のモル量の水素化ホウ素ナトリウムを、得られたミセル系に添加した。その反応混合物を２５℃で一晩インキュベーションした。修飾されたサイトカインは、冷アセトンで３回沈殿させ、ＲＰＭＩ１６４０媒体中に溶解させ、０．２２μｍフィルターでろ過滅菌した（製剤Ａ）。修飾されていない天然のインターフェロン−α（製剤Ｂ）を対照として用いた。。
【０２３４】
Ｂ．製剤ＡおよびＢの抗ウイルス活性は、ブタ胎児の腎細胞における水泡性口内炎ウイルスの細胞変性作用の抑制によって評価した。製剤ＡおよびＢを、致死量の１００倍のウイルスで感染させる２４時間前に細胞に添加した。抗ウイルス効果をウイルス感染２４時間後に測定した。製剤ＡおよびＢのウイルス力価は、それぞれ５×１０⁷および１×１０⁴と測定された。
【０２３５】
実施例２８
Ａ．天然のヒトインターフェロン−α₂を塩化ステアロイルで修飾し、実施例２５（製剤Ａ）で記載したＮ＝１．３０のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体に結合させた（製剤Ａ）。修飾されていないＢを対照として用いた。
【０２３６】
Ｂ．製剤ＡおよびＢの抗ウイルス活性は、ブタ胎児の腎細胞におけるオーエスキー病ウイルスの細胞変性作用の抑制によって評価した。製剤ＡおよびＢを、致死量の１００倍のウイルスで感染させる２４時間前に細胞に添加した。抗ウイルス効果をウイルス感染２４時間後に測定した。製剤ＡおよびＢのウイルス力価は、それぞれ１×１０¹⁰および２×１０⁵と測定された。
【０２３７】
実施例２９
Ａ．ヒト組み換え腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）を、実施例２３（製剤Ａ）で記載したＮ＝１．００のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体（プルロニックＬ８５）に結合させた（製剤Ａ）。修飾されていないＴＮＦα（製剤Ｂ）を対照として用いた。
【０２３８】
Ｂ．細胞製剤ＡおよびＢの比活性を、ヒト卵巣癌細胞ＳＫＯＶ₃に対して４８時間測定した。その結果を以下に示す。
【０２３９】
【表１６】

【０２４０】
実施例３０
Ａ．ヒト組み換えインターロイキン−２（ＩＬ−２）を、末端のアルデヒド基を含む、Ｎ＝１．００のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体（プルロニックＬ８５）に結合させた。最後に、１０μｇのＩＬ−２を、０．１Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）中の５０倍以上のモル量のシアノボロハイドライド存在下で、５０倍以上のモル量のブロック共重合体と共に、室温で４時間インキュベーションした。その結合物をバイオゲルＰ−４（Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−４）でゲルろ過で精製し、次に実施例２３（製剤Ａ）のＮ＝１．００のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体（プルロニックＰ８５）のミセルに結合させた。修飾されていないＩＬ−２を対照として用いた（製剤Ｂ）。
【０２４１】
Ｂ．製剤ＡおよびＢにおけるＩＬ−２の比活性は、Ｇｉｌｌｉｓ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２０，２０２７（１９７８）によって記載されているＩＬ−２依存性ＣＴＬＬ２細胞系を用いて測定された。そのＩＬ−２活性は、製剤Ａで３６×１０⁶ユニット／μｇであり、製剤Ｂで５×１０⁶ユニット／μｇであった。
【０２４２】
実施例３１
天然のヒトインターフェロン−α₂を、塩化ステアロイルで修飾し、実施例２３２６に記載のＮ＝１．３０（製剤Ａ）のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体に結合させた。修飾されていない天然のインターフェロン−α₂を対照として用いた（製剤Ｂ）。
【０２４３】
Ｂ．Ｃ５７ＢＩ／６〜７週齢の雄マウスのグループ（３６匹／グループ）に、インフルエンザウイルスＨ／Ｃｈｉｌｉ／１／８３（Ｈ１Ｎ１）の致死量の１０倍を、鼻腔内に注射した。動物の生存率を投与から３０日間観察した。３０日目に、対照グループの生存率は０％であり、製剤Ａ処理されたグループは〜７５％であり、製剤Ｂで処理されたグループは〜１２％であった。
【０２４４】
実施例３２
Ａ．天然のブタインターフェロン−α₂を、塩化ステアロイルで修飾し、実施例２５に記載のＮ＝１．３０（製剤Ａ）のポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体に結合させた。修飾されていない天然のインターフェロン−α（製剤Ｂ）を対照として用いた。
【０２４５】
Ｂ．オーエスキー病に対するワクチンを接種されていない３月齢の白子豚（ｗｈｉｔｅ ｐｉｇｌｅｔ）のグループに、オーエスキー病ウイルス（有毒系の“オースキー（Ａｒｓｋｙ）”）のＬＤ₅₀の１０００倍量を脳内注射した。製剤ＡおよびＢを３回筋肉中に投与した；２４時間前、同時にまたは２４時間後に１匹への１回の注射あたり０．０１ｍｇ、０．１ｍｇおよび１．０ｍｇの用量。生存率およびオーエスキー病の発症を６０日間観察した。対照実験において感染処理されていない同じグループが観察された。その結果を以下に示す。
【０２４６】
【表１７】

【０２４７】
ａ オーエスキー病の症状は、中枢神経系の障害、痙攣、消化道、喉頭および四肢の麻痺を含む症状である。その病気を感染させた動物のパーセンテージを示す。
【０２４８】
実施例３３
製剤ＡおよびＢは実施例３１と同様である。オーエスキー病に対するワクチンを接種されていない４月齢の子豚（１１匹／グループ）のグループに、オーエスキー病ウイルス（有毒系の“オースキー（Ａｒｓｋｙ）”）のＬＤ₅₀の１００００倍量を脳内注射した。製剤ＡおよびＢを病状の重篤段階で３回筋肉中に投与した：１匹への１回の注射当たり０．０１ｍｇ、０．１ｍｇおよび１．０ｍｇの用量で注射した後、６，８，１０日後。生存率およびオーエスキー病の発症を６０日間観察した。対照実験において感染処理されていない同じグループが観察された。その結果を以下に示す。
【０２４９】
【表１８】

【０２５０】
実施例３４ ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体の溶液状態
ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体を、１０μＭ、ｐＨ７．４のリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）またはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の２．５％溶液中に、下記に示す濃度で溶解させた。その混合物を２２．５℃または３７℃で１時間インキュベーションした。その後、これらの系の中で形成された凝集体の有効直径を、Ｋａｂａｎｏｖ等、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２８，２３０３〜２３１４（１９９５）によって記載されたｑｕａｓｉｅｌａｓｔｉｃ光散乱法を用いて測定された。結果を以下に示す。
【０２５１】
【表１９】

【０２５２】
（表１９の続き）
【０２５３】
【表２０】

【０２５４】
（表１９の続き）
【０２５５】
【表２１】

【０２５６】
“ＮＤ”：検知不能
“ＬＰＳ”：液相分離
（＊）光散乱法測定において、濁度が非常に高い。
【０２５７】
これらの結果により、（１）ポリエチレンオキサイド含量が５０％（ｗ／ｖ）以上である疎水性ポリ（エチレンオキサイド）−ポリ（プロピレンオキサイド）ブロック共重合体は、生理学的な温度で水溶液中枢神経系で凝集する傾向が認められ、（２）これらの共重合体の凝集および相分離は、血清タンパク質の存在下で顕著に増強される、ということが示唆された。
【０２５８】
実施例３５
疎水性プルロニック共重合体の溶液状態における親水性プルロニック共重合体の効果
実施例３４と同じ生成物であるが、ただし単一の共重合体に対して二つの異なるポリ（エチレンオキサイド）−ポリ（プロピレンオキサイド）ブロック共重合体の混合物で置き換えた。その結果を以下に示す。
【０２５９】
【表２２】

【０２６０】
（表２２の続き）
【０２６１】
【表２３】

【０２６２】
“ＮＤ”：検知不能
（＊）光散乱法測定において、濁度が非常に高い。
【０２６３】
これらの結果により、（１）生理学的温度で、エチレンオキサイドの含有率が５０％（ｗ／ｖ）を超える親水性ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体は、プロピレンオキサイドの含有率が少なくとも５０％（ｗ／ｖ）の疎水性親水性ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体の凝集を防ぐ、（２）血清タンパク質の存在下で、エチレンオキサイドの含有率が５０％（ｗ／ｖ）を超える親水性ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体は、プロピレンオキサイドの含有率が少なくとも５０％（ｗ／ｖ）の疎水性親水性ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体の凝集を防ぐ、ということが示唆された。
実施例３６ ダウノルビシン蓄積のカイネティクス
ＳＫ細胞およびＳＫ耐性細胞におけるダウノルビシン蓄積のカイネティクスは、１０ｍｇ／ｍｌのダウノルビシンで処理した細胞の、細胞内に蓄積されたダウノルビシンの蛍光を測定することにより測定された（λ_ex＝４７１ｎｍ、λ_em＝５５６ｎｍ）。ＳＫ耐性細胞における薬剤蓄積のデータは、図２に示されており（系１：遊離薬剤、系２：ミセル状）；ＳＫ細胞のデータもまた、図２に示されている（系３：遊離薬剤、系４：ミセル状）。
【０２６４】
実施例３７：ポリマーの生体内分布
プルロニックＰ８５ポリマーの放射活性のチタン含有誘導体を、Ｋｕｒｃｈａｔｏｖ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｔｏｍｉｃ Ｅｎｅｒｇｙ（モスクワ、ロシア国）より得た。体重２０ｇあたり１００μｌの放射活性共重合体の１％ｗ／ｖ等張溶液を、（ａ）ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｋｒｉｕｋｏｖｏ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｒｕｓｓｉａｎ Ａｃａｄ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、モスクワ、ロシア国）および（ｂ）３×１０⁶ＳＰ２／０^dnrのマウスミエローマ細胞を６ヶ月前に皮下注射されたＢＡＬＢ／ｃマウスに、静脈注射した。様々な時間における放射活性共重合体注射後の、リマー生体内分布を、様々な時間ポイントで処理マウスを殺し、下記の表に示された組織の切り出し、液体シンチレーションカウンティングにより放射活性分布を定量することにより測定された。液体シンチレーションカウンティング用に組織を調製するために、１ｍｌの組織可溶化剤（Ｓｅｒｖａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ドイツ国より入手可能）中に置き、冷やしながらホモジナイズした。そのホモジネートを室温で１４時間インキュベーションし、５０μｌの」３０％過酸化水素水で漂白し、室温で一晩インキュベーションした。
【０２６５】
腫瘍細胞を注射されていないＢＡＬＢ／ｃマウスの結果を以下に示す。
【０２６６】
【表２４】

【０２６７】
腫瘍細胞を注射されたＢＡＬＢ／ｃマウスの結果を以下に示す。
【０２６８】
【表２５】

【０２６９】
この一連の実験により得られた付加的な観察により、（１）ポリマーの分解生成物はポリマー投与から２４時間まで観察されなかった、および（２）マウスからのポリマーの完全なクリアランスは投与から２５０〜３００時間で生じた、ということがわかった。
【０２７０】
実施例３８ 共重合体の血中濃度
２０ｇ体重あたり１００μｌの実施例３７の［³Ｈ］プルロニックＰ８５を６週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスに静脈注射または経口投与した。注射後の様々な時間ポイントにおけるマウス血液中でみられた放射活性量を図３に示す。ただし、それぞれの対における第１のバーは静脈注射されたポリマーであり、第２のバーは経口投与されたポリマーである。
【０２７１】
実施例３９
（オキシプロピレン）の（オキシエチレン）ブロックに対する個々の割合（ｎ）がそれぞれ１．００および１．５０であり、かつ結合値（Ｎ）が１．３０であるプルロニックＰ８５およびプルロニックＬ６４の１：１．５の混合物を、４℃での最終濃度が２．０％になるようにＲＰＭＩ１６４０媒体で希釈した。その混合物を３７℃で３０分インキュベーションし、次に０．２２μｍフィルターでろ過滅菌した。ＲＰＭＩ１６４０媒体中の２００μｇのダウノルビシン溶液の等量を加え、この混合物を３７℃３０分インキュベーションした。
【０２７２】
ヒト卵巣癌細胞（ＣＲＬ１５７細胞）への細胞毒性を、この製剤および遊離ダウノルビシンを含む相等しい製剤の両方について測定した。その結果を以下に示す。
【０２７３】
【表２６】

【０２７４】
そのダウノルビシン組成物を、（ｉ）ヒトＴ−リンパ腫（Ｊｕｒｋａｔ細胞）および（ｉｉ）正常なヒト単核細胞における細胞毒性のために評価した。その結果を以下に示す。
【０２７５】
【表２７】

【０２７６】
¹ 化学療法薬＋プルロニックでの処理
² 遊離（非ミセル状）化学療法薬での処理
実施例４０
（ｉ）ヒトＴ−リンパ腫Ｊｕｒｋａｔおよび（ｉｉ）正常なヒト単核細胞におけるＩＣ₅₀値を、実施例３９のダウノルビシン組成物において測定され、遊離ダウノルビシンの同様な組成物と比較した。測定は、細胞の薬剤接触の指示されたインターバルにおいてなされた。その結果を以下に示す。
【０２７７】
【表２８】

【０２７８】
¹ 化学療法薬＋プルロニックでの処理
² 遊離（非ミセル状）化学療法薬での処理
実施例４１
抗腫瘍性剤のビンブラスチンを、実施例３９で記載したブロック共重合体混合物に結合させた。この製剤のＳＫ細胞に対するＩＣ₅₀は、０．１２１μｇ／ｍｌと決定され、ＳＫ耐性細胞に対するＩＣ₅₀は０．００１２μｇ／ｍｌと決定された。遊離ビンブラスチンのＩＣ₅₀値は、ＳＫ細胞に対して０．０９５μｇ／ｍｌ、ＳＫ耐性細胞に対して０．６１５μｇ／ｍｌと決定された。
【０２７９】
実施例４２
抗腫瘍性剤のマイトマイシンＣを、実施例３９で記載したブロック共重合体混合物に結合させた。この製剤のＳＫ細胞に対するＩＣ₅₀は、０．２６５μｇ／ｍｌと決定され、ＳＫ耐性細胞に対するＩＣ₅₀は０．００５μｇ／ｍｌと決定された。遊離マイトマイシンＣのＳＫ細胞に対するＩＣ₅₀値は、０．３２０μｇ／ｍｌ、ＳＫ耐性細胞に対して１．１２０μｇ／ｍｌと決定された。
【０２８０】
実施例４３
抗腫瘍性剤のメトトレキセートを、実施例３９で記載したブロック共重合体混合物に結合させた。この製剤のＳＫ細胞に対するＩＣ₅₀は、０．８８０μｇ／ｍｌと決定され、ＳＫ耐性細胞に対するＩＣ₅₀は０．０１７５μｇ／ｍｌと決定された。遊離メトトレキセートのＳＫ細胞に対するＩＣ₅₀値は、１．０９０μｇ／ｍｌ、ＳＫ耐性細胞に対して１．３４０μｇ／ｍｌと決定された。
【０２８１】
実施例４４
抗腫瘍性剤のコルヒチンを、実施例３９で記載したブロック共重合体混合物に結合させた。この製剤のＳＫ細胞に対するＩＣ₅₀は、０．７２０μｇ／ｍｌと決定され、ＳＫ耐性“ＳＫＶＬＢ”細胞に対するＩＣ₅₀は０．０４５μｇ／ｍｌと決定された。遊離コルヒチンのＳＫ細胞に対するＩＣ₅₀値は、０．９５０μｇ／ｍｌ、ＳＫ耐性細胞に対して７．４５０μｇ／ｍｌと決定された。
【０２８２】
実施例４５
抗腫瘍性剤のダウノルビシンを、実施例３９で記載したブロック共重合体混合物に結合させた。この製剤のＳＫＯＶ３細胞に対するＩＣ₅₀は、０．６００μｇ／ｍｌと決定され、ＳＫＯＶ３耐性細胞に対するＩＣ₅₀は０．００６８μｇ／ｍｌと決定された。遊離ダウノルビシンのＳＫＯＶ３細胞に対するＩＣ₅₀値は、０．６２０μｇ／ｍｌ、ＳＫＯＶ３耐性細胞に対して５．８５０μｇ／ｍｌと決定された。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１Ａおよび１Ｂは、様々な濃度のドキソルビシンおよびプルロニックＬ６１でインキュベーションした、ドキソルビシン耐性ＭＣＦ７細胞の阻害を示したものである。
【図２】 図２は、それぞれ遊離またはミセル形態中でドキソルビシンで処理した、ＳＫ−耐性細胞またはＳＫ細胞における、ドキソルビシン蓄積のカイネティクスを示したものである。
【図３】 図３は、静脈内または経口で投与された［³Ｈ］−プルロニックＰ８５の血中濃度の比較を示したものである。

Claims (16)

1. ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体の混合物と、少なくとも一つの生物学的に活性な薬剤とを含む、生物学的に活性な薬剤の運搬用組成物であって、
   前記混合物が、含量が５０質量％を超えるエチレンオキサイドを有する少なくとも一つのポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体からなる第１の共重合体と、含量が５０質量％以下のエチレンオキサイドを有する少なくとも一つのポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロック共重合体からなる第２の共重合体とを含み、
   前記第１の共重合体および前記第２の共重合体が、ともに式：
   

   

   （式中、ｘ，ｙ，およびｚは２〜８００の値である）
   で示され、前記第１の共重合体と前記第２の共重合体との割合が少なくとも５：１（ｗ／ｗ）である、生物学的に活性な薬剤の運搬用組成物。
2. 前記第１の共重合体と前記第２の共重合体との割合が少なくとも８：１（ｗ／ｗ）である、請求項１に記載の組成物。
3. 前記生物学的に活性な薬剤は、免疫調節薬、サイトカイン、ホルモン、酵素、組織プラスミノーゲン活性化因子、凝集因子、コロニー形成刺激因子およびエリスロポイエチンからなる群より選択される、請求項１または２に記載の組成物。
4. 前記生物学的に活性な薬剤は、神経ペプチド、またはその誘導体である、請求項１または２に記載の組成物。
5. 前記生物学的に活性な薬剤は、組み換え可溶性受容体およびモノクローナル抗体からなる群より選択される、請求項１または２に記載の組成物。
6. 前記生物学的に活性な薬剤は、タンパク質、ペプチドまたはその誘導体である、請求項１または２に記載の組成物。
7. 前記生物学的に活性な薬剤は、化学療法薬である、請求項１または２に記載の組成物。
8. 前記生物学的に活性な薬剤は、ビンカアルカロイドである、請求項１または２に記載の組成物。
9. 前記生物学的に活性な薬剤は、パクリタキセルである、請求項１または２に記載の組成物。
10. 前記生物学的に活性な薬剤は、抗腫瘍剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、抗真菌剤、または中枢神経系薬剤である、請求項１または２に記載の組成物。
11. 前記生物学的に活性な薬剤は、核酸またはポリヌクレオチドである、請求項１または２に記載の組成物。
12. 前記生物学的に活性な薬剤は、ドキソルビシン、ダウノルビシン、またはエピルビシンである、請求項１または２に記載の組成物。
13. 前記第１の共重合体が、プルロニック（登録商標）Ｆ１２７である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
14. プルロニック（登録商標）Ｌ６１ブロック共重合体とプルロニック（登録商標）Ｆ１２７ブロック共重合体との混合物を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
15. ０．２５％のプルロニック（登録商標）Ｌ６１ブロック共重合体、および２．０％のプルロニック（登録商標）Ｆ１２７ブロック共重合体を含む、請求項１４に記載の組成物。
16. 治療に用いられる、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。