JP4660774B2 - 心不全治療薬のスクリーニング方法 - Google Patents
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Description
ゼブラフィッシュ受精卵100個(前日にオスとメスを1匹ずつ水槽に入れ暗室に置き、早朝明かりをつけることにより産卵を促進、受精卵を回収する)を受精後1時間以内から、タクロリムス水和物最終濃度50nMを溶かした飼育水(塩化カルシウム0.1g、塩化ナトリウム3.5g、塩化カリウム0.05g、炭酸水素ナトリウム0.2g/1L)の中での飼育を開始した。密度は卵1個あたりの水量が0.25mLを下回らないようにし(10cmシャーレに100個)28℃の恒温漕で、毎日飼育水を交換して飼育した。受精卵は受精後2〜3日目で孵化した。3日目より心陰影の拡大が確認され、5日目には90%程度の魚に拡張型心筋症に類似した心臓組織形状が認められた。結果を図1に示す。
実施例1で作製したゼブラフィッシュを用いて、心不全治療薬であるカルベジロールの効果を調べた。結果を図2に示す。カルベジロール最終濃度1μMをタクロリムス水和物と同時投与した結果、心陰影の拡大がなくなったゼブラフィッシュは約70%、また受精後24時間からのタクロリムス水和物単独投与の後、受精後2日目からカルベジロールを加えた場合でも心陰影の拡大がなくなったゼブラフィッシュは約60%認められた。心陰影の大きさを画像解析測定、統計学的評価をした結果、両者とも約50%のその領域の縮小を認めた。心拍数の正常化も同程度の割合で認められた。組織学的検討では、タクロリムス水和物単独投与で認められた拡張型心筋症に類似した形状は改善していた。以上より、本発明の心不全モデルゼブラフィッシュを用いて心不全治療薬の効果を判定しうることが示された。
タクロリムス水和物を用いて作製した心不全症状を呈するゼブラフィッシュに、実施例2と同様にして、市販の種々の心不全治療薬を作用させて、その影響を調べた。心不全治療薬としては、βアドレナリン作動性受容体であるチモロール(Timolol)、アルプレノロール(Alprenolol)、アルテレノール(Arterenol)、アセブトロール(Acebutolol)およびピンドロール(Pindolol);心臓選択的βアドレナリン作動性受容体であるメトプロロール(Metoprolol)およびアテノロール(Atenolol);αおよびβアドレナリン作動性受容体であるラベタロール(Labetalol)、カルベジロール(Carvedilol);アンジオテンシン変換酵素阻害剤であるカプトプリル(Captopril)およびエナラプリル(Enalapril);ならびにホスホジエステラーゼIII阻害剤であるアムリノン(Amrinone)を用い、示される最終濃度でタクロリムス水和物と同時投与した。
実施例2と同様にして、タクロリムス水和物を用いて心不全症状を呈するゼブラフィッシュに、ベータアドレナリン受容体拮抗薬であるカルベジロールを投与した。心不全モデルゼブラフィッシュの心臓と、カルベジロールを投与して心不全が治癒したゼブラフィッシュの心臓から、トータルRNAをレーザーキャプチャーマイクロダイセクション法(LCM)により抽出し、マイクロアレイを用いて数百種類の遺伝子についてその発現を調べた。カルベジロールを投与した場合と投与しない場合で発現が変動した遺伝子を数十種類同定した。
実施例4において、その発現と心不全症状とが相関することが示されたPECI遺伝子について、さらにモルフォリノアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いる確認実験を行った。
Claims (1)
- 心不全治療薬の候補物質を選択する方法であって、
タクロリムス水和物により誘導される心不全症状を呈するゼブラフィッシュに試験物質を投与し、
PECI遺伝子の発現を測定し、そして、
試験物質を投与したときに投与していないときと比較してPECI遺伝子の発現が抑制されている場合に、その試験物質を心不全治療薬の候補物質として選択する、
の各工程を含む方法。
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