JP4602078B2 - ヒト心不全における血漿ウロテンシン - Google Patents

Description

本発明は、ヒトのような哺乳類被験体の心不全の診断のための方法に関する。特に、それは、体液の試料中のウロテンシンのレベルを測定するように構成された、そのような方法に関する。

心不全（左心室収縮機能障害）は死亡および発病の主要な原因である。その病態生理学は、カテコラミン、レニン−アンギオテンシン、エンドセリン、心房性および脳性ナトリウム利尿ペプチド系をはじめとする多くの神経ホルモン系の活性化が関与する。

最近の研究は、硬骨類のホルモンとの相同性を持つウロテンシンＩＩ（ＵＴＮ）と呼ばれる新規の心臓血管ペプチドの存在を明らかにした（エイムズら、Ｎａｔｕｒｅ １９９９；１６：２８２−２８６）。この環状ウンデカペプチドはオーファンＧタンパク質受容体（ＧＰＲ１４）のリガンドであり、ペプチドおよび受容体は両方とも心筋、内皮、血管筋細胞、および神経系内に分布する（エイムズら、Ｎａｔｕｒｅ １９９９；１６：２８２−２８６）。それはラットおよびサルの特定の血管床にとっては強力な血管収縮剤であるが（エイムズら、Ｎａｔｕｒｅ １９９９；１６：２８２−２８６；ダグラスら、Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０００；３６：Ｓ１６３−６）、腸間膜抵抗血管では血管拡張剤となる（ボトリルら、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ ２０００；１３０：１８６５−１８７０）。ＵＴＮに対する様々な血管の反応性には重要な種差がある。例えば、サルの血管はＵＴＮによって強く血管収縮するが、ヒトの肺血管系および腸間膜抵抗血管はＵＴＮによって強力に血管拡張し（ストラットら、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００１；２８０：Ｈ９２５−９２８）、ヒトの皮下抵抗血管はＵＴＮに反応性を示さない（ヒリアーら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００１；１０３：１３７８−１３８１）。ＵＴＮによる血管平滑筋の慢性刺激は、肥大性応答を導く（ワタナベら、Ｊ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ ２００１；１９：２１９１−２１９６）。心筋に対する直接の影響は、おそらく冠血管収縮の結果生じる心筋抑制を持つサルで示唆された（エイムズら、Ｎａｔｕｒｅ １９９９；１６：２８２−２８６）が、ヒトの心筋では、陽性変力作用が示された（ラッセルら、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ ２００１；１３２；５−９）。さらに、コラーゲン沈積の増加を含む肥大効果が記述されており、心不全の心室リモデリングにおけるＵＴＮの役割の可能性が示唆された（ゾウら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ２００１；５０８：５７−６０；ツァニディスら、Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ ２０００；２１：７２）。ＵＴＮは、より原始的な表現型への復帰により心不全で予想される変化、心筋細胞の心房性および脳性ナトリウム利尿ペプチドの発現の増加（ゾウら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ２００１；５０８：５７−６０）を導いた。ダグラスらによる最近の研究（ダグラスら、Ｌａｎｃｅｔ ２００２；３５９：１９９０−１９９７）は、病気の早期段階でさえ心不全患者の心筋におけるＵＴＮおよびその受容体の両方の発現の増加を実証した。ＵＴＮは心臓内の心筋細胞、血管平滑筋細胞、内皮および炎症細胞に存在した。心不全におけるウロテンシンの推定上の役割に関して、リモデリングの前のヒトにおける初期陽性変力および血管拡張剤効果は代償的であり、線維化の増大はますます不適応性応答を導くようになる。

第一態様では、本発明は、体液の試料中のウロテンシンのレベルを測定し、心不全が無いことを示す被験体の前記体液中に一般的にみられる基準レベルと比較し、それによって高レベルのウロテンシンが心不全の徴候を示すように構成された、哺乳類被験体の心不全の診断方法を提供する。

Ｎ末端前脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）または脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）のような、心不全を示す少なくとも一つのさらなる標識のレベルを付加的に測定し、心不全が無いことを示す哺乳類被験体の体液に一般的にみられる基準レベルと比較し、それによって高レベルの少なくとも一つのさらなる標識が心不全を示すことができる。

ウロテンシンまたはさらなる標識のレベルは免疫測定法を使用することによって決定することができ、体液は血漿または間質液とすることができる。

一実施形態では、本発明の方法は、ヒト被験体の心不全の診断用である。

第二態様では、本発明は、第一態様の方法を組み込んだ、体液の試料中のウロテンシンの検出のための免疫測定法を提供する。

第三態様では、本発明は、ウロテンシンおよび心不全を示す少なくとも一つのさらなる標識の一回測定またはある期間にわたる二回以上の測定を行なって標準モデルと比較することにより、ヒト被験体の心疾患の重症度を追跡して病期分類する方法を提供する。

標準モデルは、被分析物のレベル対病状の標準モデルとすることができ、病期分析はニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）分類に従って決定することができる。これは次の四段階分類である。

分類１ 患者は労作レベルでのみ症状のみを示す。
分類２ 通常の労作で症状を示す。
分類３ 最小限の労作で症状を示す。
分類４ 静止時に症状を示す。

本発明の発明者は、ヒト心不全（左心室収縮機能障害）のＵＴＮの血漿レベルを調査し、それらをより確立されたＮ末端前脳性ナトリウム利尿ペプチド（Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰ）の血漿上昇と比較した。血漿は、１２６名の心不全の患者および年齢と性別が一致する２２０名の健常者の対照から得た。Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰおよびＵＴＮはイムノルミノメトリックアッセイ（ｉｍｍｕｎｏｌｕｍｉｎｏｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ）によって測定した。Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰおよびＵＴＮは両方とも心不全の患者の血漿で上昇し、かなりの相関性があった（ｒ_ｓ＝０．３５、Ｐ＜０．００１）。Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰとは対照的に、血漿ＵＴＮとＮＹＨＡ分類の関係は無かった。血漿Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰは年齢および女性との明らかな関連性を示したが、血漿ＵＴＮにはそのような年齢依存変化は無く、健常な女性は男性に比べて低レベルであった。心不全の診断のための受診者動作特性曲線は、Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰおよびＵＴＮについてそれぞれ０．９０および０．８６の領域を有した（両方ともＰ＜０．００１）。血漿ＵＴＮはヒト心不全で上昇し、該疾患の病態生理学におけるこのペプチドの役割を示唆している。血漿ＵＴＮは、心不全におけるそのレベルが年齢、性別、またはＮＹＨＡ分類に関係なく上昇するので、心不全の診断におけるＮ末端ｐｒｏＢＮＰの有用な代替物になり得る。

本発明では、ウロテンシン（および測定した場合、心疾患を示すさらなる標識）の測定レベルを、心不全が無いことを示す被験体の前記体液中に一般的にみられる基準レベルと比較する。これらの基準レベルは、心不全の無い被験体の人口調査から決定することができる。そのような被験体は年齢および／または性別を一致させることができる。

先に示した通り、さらなる標識はＮ末端ｐｒｏＢＮＰとすることができる。代替的に、または付加的に、ＢＮＰのレベルを測定することができる。左心室の心筋細胞からの貯蔵ｐｒｏＢＮＰ（二つの循環形態つまりＢＮＰ（活性ペプチド）およびＮ末端ＢＮＰ（ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、不活性ペプチド）の無傷の前躯体）の放出、およびＢＮＰの生産の増加は、心筋の伸張、心筋の緊張、および心筋の損傷によって誘発される。

ウロテンシンのレベルを測定する体液は血漿または間質液とすることができるが、他の体液源、例えば全血、血清、または尿を使用することもできる。

本発明で測定する標識は、免疫測定法を使用して検出することができる。一実施形態では、免疫測定法は、検査対象の被験体からの試料を、標識が存在する場合に免疫特異的な結合が発生できるような条件下で適切な抗体に接触させ、抗体による免疫特異的な結合の量を検出または測定することによって実行される。ウェスタンブロット、放射性免疫測定法、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）、「サンドイッチ」免疫測定法、免疫沈降測定法、沈降素反応、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散測定法、凝集測定法、補体結合測定法、免疫放射線測定法、蛍光免疫測定法、およびタンパク質Ａ免疫測定法のような技法を使用する競合または非競合測定システムをはじめ、それらに限らず、任意の適切な免疫測定法を使用することができる。

例えば、標識は二段階サンドイッチ測定法によって流体試料中で検出することができる。第一段階で、捕獲試薬（例えば抗標識抗体）を使用して標識を捕獲する。捕獲試薬は任意選択的に固相上に固定することができる。第二段階で、直接または間接的に標識化された検出試薬を使用して、捕獲された標識を検出する。一実施形態では、検出試薬は抗体である。別の実施形態では、検出試薬はレクチンである。

本発明はまた、本発明の第一態様の方法を組み込むことができる、ウロテンシン検出用の免疫測定法、キット、または装置をも提供する。そのような免疫測定キットまたは装置は、ウロテンシンに特異的に結合する抗体、および任意選択的に心不全のさらなる標識を結合する抗体を含むことができる。加えて、そのような免疫測定法は任意選択的に、次のうちの一つまたはそれ以上を含むことができる。（１）心不全の診断のために免疫測定法、キットまたは装置を使用するための説明書、（２）抗体の標識結合パートナ、（３）抗体または各抗体を固定する固相（試薬ストリップなど）、および（４）診断、予後、または治療上の使用またはそれらの任意の組合せに対する規制当局の認可を示すラベルまたは挿入物。抗体または各抗体の標識結合パートナが提供されない場合、抗体または各抗体自体に検出可能な標識、例えば化学発光性、酵素的、蛍光性、または放射性成分を付けることができる。

本書で使用する用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、つまり抗原を特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。本発明で有用な免疫グロブリン分子は、任意のクラス（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）またはサブクラスの免疫グロブリン分子とすることができる。抗体はポリクローナル、モノクローナル、二重特異性、ヒト化およびキメラ抗体、単鎖抗体、ＦａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’）フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリによって作製されたフラグメント、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントを含むが、それらに限定されない。

本発明は、体液の試料中の心不全を示す少なくとも第一標識および／またはウロテンシンのレベルを測定して、心不全が無いことを示す哺乳類被験体の前記体液中に一般的にみられる基準レベルと比較し、よって少なくとも一つの第一標識および／またはウロテンシンのレベルの上昇が心不全を示すように構成された、哺乳類被験体の心不全の診断のための方法を提供する。本発明はまた、少なくとも第一標識およびウロテンシンの一回測定またはある期間にわたる二回以上の測定を行なって標準モデルと比較することにより、ヒト被験体の心疾患の重症度を追跡して病期分類する方法をも提供する。

本発明の各態様の好適な特長は、必要な変更を加えて他の態様の各々にも当てはまる。本書で示した先行技術の文書は、法律が許す範囲で最大限に本書に組み込む。

以下の非限定実施例で、添付の図面を参照しながら本発明をさらに詳しく説明する。

方法
健常な対照および心不全の患者からの血漿試料
心不全の患者は、レスター王立病院診療室および病棟から募集した。全員が心不全の臨床診断を受けており、４５％未満の駆出分画率が心エコー検査により確認された。健常な対照は年齢および性別がこれらの患者と一致し、薬物治療中ではなく、５５％を超える駆出分画率が心エコー検査により確認された。患者の特性を表１に報告する。

１５分間のベッド安静後に静脈穿刺により１０ｍｌの血液を得て、ＥＤＴＡおよびアプロチニンを含む氷冷試験管内で混合した。遠心分離に従って回収された血漿は、測定まで−７０℃で保管された。

Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰの測定
Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰの測定は、カールによって記載された非競合Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰ測定法に基づいた（カールら、Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ Ｓｕｐｐｌ １９９９；２３０：１７７−１８１）。ウサギのポリクローナル抗体をヒトＮ末端ｐｒｏＢＮＰのＮ末端（アミノ酸１−１２）およびＣ末端（アミノ酸６５−７６）に産生させた。

血清からのＩｇＧをタンパク質Ａセファロースカラム上で精製した。Ｃ末端特異的抗体（各ＥＬＩＳＡプレートウェルに１００μＬ中０．５μｇ）は捕獲抗体として働いた。Ｎ末端抗体はアフィニティ精製し、ビオチン化した。試料またはＮ−ＢＮＰ標準のアリコート（２０μＬ）は、Ｃ末端抗体被覆ウェル内でビオチン化された抗体と共に４℃で２４時間インキュベートした。洗浄後、メチルアクリジニウムエステルで標識したストレプトアビジン（ストレプトアビジンＭＡＥ、５×１０^６相対光単位／ｍｌ）（Ｈａｒｔ ＆ Ｔａａｆｆｅ， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １９８７；１０１：９１−８６）を各ウェルに添加した。プレートを前述の通りダイナテク社のＭＬＸ照度計で読み取った（ヒューら、Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ １９９９；９６：３７３−３８０）。検出の下限は非抽出血漿の５．７ｆｍｏｌ／ｍｌであった。測定内および測定間の変動係数はそれぞれ２．３％および４．８％で許容されるものであった。ＡＮＰ、ＢＮＰまたはＣＮＰの交差反応性は無かった。

ウロテンシンＩＩの測定
環状形態のＵＴＮに特異的な抗体は、カリフォルニア州ベルモントのフェニックス・ファーマシューティカルズ社から入手した。逆相ＨＰＬＣで精製されたビオチン化ＵＴＮをトレーサとして使用した。血漿のＣ_１８抽出物を使用する競合測定法を利用し、５０ｎｇの抗体を抽出物または標準（１ウェル当たり１から２０００ｆｍｏｌの範囲）と共に、１００μｌのアッセイ緩衝液中（１２に記載するとおり）でインキュベートした。４℃で２４時間インキュベートした後、ビオチン化ＵＴＮとレーサを添加した（１ウェル当たり２５０ｆｍｏｌ）。抗ウサギＩｇＧ（１ウェル当たり１００ｎｇ）を被覆したＥＬＩＳＡプレートで免疫沈降物を回収した。洗浄しストレプトアビジンＭＡＥとインキュベートした後、上述したように化学発光を誘発させた。測定内および測定間の変動係数はそれぞれ２．３および８．１％であり、ＢＮＰまたはＮ末端ｐｒｏＢＮＰに対する反応性は無かった。検出の下限は３．１ｆｍｏｌ／ｍｌであった。

統計分析
ＳＰＳＳバージョン１１で統計分析を実行した。データは中央値［範囲］として提示される。比較はクルスカル−ウォリス分散分析によって行ない、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線を描画（プロット）した。相関分析はスピアマンのロー（ｒ_ｓ）を使用した。Ｐ＜０．０５の値が統計的に有意であるとみなされた。

結果
表１は、年齢および性別がよく一致する健常者および心不全患者の特性を示す。予想どおり、Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰは心不全患者で有意に上昇した。健常者の母集団では、Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰは加齢に対し正の相関があり（ｒ_ｓ＝０．４１、Ｐ＜０．００１）、女性は男性より高レベルであった（Ｐ＜０．００１、表１）。Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰは、ＮＹＨＡ分類が高くなるにつれて増加した（図１ａ、クルスカル−ウォリス試験によりＰ＜０．００１）。血漿ＵＴＮもまた心不全患者で上昇した（表１）が、年齢との相関は無かった。Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰとは対照的に、女性のレベルは男性に比較して低かった（Ｐ＜０．００１、表１）。血漿ＵＴＮは、ＮＹＨＡ分類が高くなることによって影響されなかった（図１ｂ）。Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰおよびＵＴＮは両方とも、性別に関係なく、心不全患者で上昇した（全ての比較に対し、Ｐ＜０．００１）。Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰおよびＵＴＮもまたやや相関性があった（ｒ_ｓ＝０．３５、Ｐ＜０．００１）。

心不全患者では、血漿ＵＴＮレベルは利尿薬、ベータ遮断薬、またはＡＣＥ遮断薬の使用に依存しなかった。両方のペプチドの心不全の検出のＲＯＣ曲線は、Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰおよびＵＴＮについてそれぞれ０．９０および０．８６の領域を明らかにした（診断基準線に比較してＰ＜０．００１）。

ＳＰＳＳで単変量一般線形モデル手順を使用し、共変量として年齢を、かつ因子として性別およびＮＹＨＡ分類を入力すると、心不全患者のＮ末端ｐｒｏＢＮＰの対数正規化レベルの分析から、年齢、性別、およびＮＹＨＡ分類（それぞれＰ＜０．０３４、０．００２、および０．００１）を有意の予測変数とするモデルの場合、０．４４６のｒ^２が明らかになった。これらの因子のいずれもＵＴＮの予測変数とは識別されなかった（ｒ^２＝０．０５８）。したがって、心不全患者のＵＴＮレベルは年齢、性別、またはＮＹＨＡ分類に関係なく上昇する。

図１ａおよび１ｂの比較から、血漿ＵＴＮの測定と血漿ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰのそれを組み合わせると、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ単独の測定より、心不全に診断に関して多くの情報を産出することができることが分かる。つまり、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰのレベルのみは、ＮＹＨＡ分類３への進行後にようやく上昇し始めるが、血漿ＵＴＮレベルは、１を超えるＮＹＨＡ分類の患者で上昇することが示されている。したがって、これらの二つの標識の測定は、心不全の早期段階の識別を導くことができる。

表１．患者の特性。中央値［範囲］を報告され、Ｐ値はクルスカル−ウォリスまたはマン・ホイットニー試験を使用して計算した（健常者と心不全患者の比較）。

この研究は血漿中のＵＴＮおよびＮＴ−ｐｒｏＢＮＰのレベルを検討したが、他の体液源、つまり全血、血清、間質液、または尿の分析も考えられる。さらに、ＢＮＰもまた血漿中にＮＴ−ｐｒｏＢＮＰと共に発現するので、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの代わりにＢＮＰを血漿ＵＴＮと一緒に監視して、心不全の診断に関する同様の情報を産出することができることが予想され得る。

考察
この研究は、以前に発表されたＮ末端ｐｒｏＢＮＰレベルの上昇に関連して（ハントら、Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １９９７；４７：２８７−２９６；ヒューら、Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ １９９９；９６：３７３−３８０）、血漿ＵＴＮレベルが心不全の患者で非常に顕著に上昇することを初めて実証するものである。したがって、心不全患者のヒト心筋におけるＵＴＮの発現の増加（ダグラスら、Ｌａｎｃｅｔ ２００２；３５９：１９９０−１９９７）は、血漿にも反映される。血漿Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰは年齢によりかつ女性で上昇するが、ＵＴＮの場合、そのような年齢傾向は健常な母集団では明白ではない。ペプチド測定におけるこれらの年齢および性別の相違は、この研究で行なわれたように、年齢および性別の両方を患者と健常者対照とを一致させる重要性を際立たせる。二つの血漿ペプチドの相関関係は、ＵＴＮが心筋のＢＮＰの発現を増大させるというｉｎ ｖｉｔｒｏ観察（ゾウら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ２００１；５０８：５７−６０）と非常によく一致する。レベルがＮＹＨＡ分類と共に上昇するＮ末端ｐｒｏＢＮＰとは対照的に、ＵＴＮレベルはＮＹＨＡ分類１の患者で上昇し、より重症な疾患に対しそれ以上変化しなかった。これが疾患の重症度によるクリアランス速度の相違を反映しているか否かは、依然として調査中である。心不全の検出のためのＵＴＮのＲＯＣ曲線の下の領域は、Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰのそれに匹敵し、心不全の正確な診断における該ペプチドの用途が示唆される。心不全の診断にとってのＵＴＮの特に有用な特長は、それが患者の年齢、性別、およびＮＹＨＡ分類などの因子に依存しないことである。対照的に、Ｎ末端ｐｒｏＢＮＰはこれらの全ての変数によって非常に大きく影響される。

血漿中のＵＴＮの源は現在不明であるが、心筋細胞、内皮、血管筋細胞、および炎症細胞中の発現の増加が実証されているので、起源は心血管であり得る（ダグラスら、Ｌａｎｃｅｔ ２００２；３５９：１９９０−１９９７）。この証拠と併せて検討すると、我々のデータは、ＵＴＮ系が心不全の病態生理学に関与している可能性があることを示唆している。現在、活性の増加が心室機能不全の原因または影響であるかどうかは不明瞭である。

この新しい心血管ペプチドの心不全病態生理学における関与は、将来適切な受容体作用薬または拮抗薬により調節することができる付加的ホルモン系を示唆している。心不全の診断試験としてのその使用は近い将来ありえる。

ＮＹＨＡ分類による血漿ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰを示すグラフ。 ＮＹＨＡ分類による血漿ＵＴＮを示すグラフ。 心不全の診断におけるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰの受診者動作曲線（ＲＯＣ）。 心不全の診断におけるＵＴＮの受診者動作曲線（ＲＯＣ）。 心不全の診断におけるＮ末端ｐｒｏＢＮＰとＵＴＮの組合せのＲＯＣ曲線の予後指標。

Claims (9)

1. 血漿または間質液の試料中のウロテンシンのレベルを測定し、心不全が無いことを示す被験体の前記血漿または間質液中に一般的にみられる基準レベルと比較し、それによって高レベルのウロテンシンが心不全を示すように構成された、哺乳類被験体の心不全の診断のための装置。
2. ウロテンシンのレベルが免疫測定法を使用して決定される、請求項１に記載の装置。
3. 心不全を示す少なくとも一つのさらなる標識を付加的に測定し、心不全が無いことを示す被験体の前記血漿または間質液中に一般的にみられる基準レベルと比較し、それによって高レベルの前記少なくとも一つのさらなる標識が心不全を示すように構成された、請求項１または２に記載の装置。
4. 前記さらなる標識がＮＴ−ｐｒｏＢＮＰまたはＢＮＰである、請求項３に記載の装置。
5. 前記さらなる標識のレベルが免疫測定法を使用して決定される、請求項３または４に記載の装置。
6. 前記被験体がヒトである、請求項１から５のいずれか一項に記載の装置。
7. 血漿または間質液中のウロテンシンおよび心不全を示す少なくとも一つのさらなる標識の一回測定またはある期間にわたる二回以上の測定を行なって標準モデルと比較することにより、ヒト被験体の心不全の疾病状態を分類する装置。
8. 前記標準モデルが、被分析物のレベルを疾病状態に関連づけた標準モデルである、請求項７に記載の装置。
9. 前記疾病状態がＮＹＨＡ分類に従って決定される、請求項７または８に記載の装置。

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