JP4550889B2 - ホウ素吸収促進遺伝子 - Google Patents
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Description
(1)以下の[1]〜[5]のいずれかに記載のDNAを含み、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現することができる組換えベクターを、宿主に導入することを特徴とする、宿主のホウ素吸収活性を促進する方法:
[1]配列番号2に示されるアミノ酸配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[2]配列番号2に示されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[3]配列番号1に示される塩基配列若しくはその相補的配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[4]配列番号1に示される塩基配列において、1若しくは数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[5]配列番号1に示される塩基配列の相補的配列からなるDNAと95%以上の相同性を有し、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:や、
(2)宿主が酵母又は植物であることを特徴とする上記(1)記載の方法や、
(3)以下の[1]〜[5]のいずれかに記載のDNAを含み、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現することができる組換えベクターが導入され、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現する形質転換体を、ホウ素吸収活性が促進された形質転換体として使用する方法:
[1]配列番号2に示されるアミノ酸配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[2]配列番号2に示されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[3]配列番号1に示される塩基配列若しくはその相補的配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[4]配列番号1に示される塩基配列において、1若しくは数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[5]配列番号1に示される塩基配列の相補的配列からなるDNAと95%以上の相同性を有し、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:や、
(4)形質転換体が酵母又は植物であることを特徴とする上記(3)記載の方法に関する。
(5)以下の[1]〜[5]のいずれかに記載のDNAを含み、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現することができる組換えベクターが導入され、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現する形質転換体に、被検物質の存在下、ホウ酸を接触させ、細胞内へのホウ素の取り込みの程度を測定・評価することを特徴とするホウ素吸収促進活性を促進又は抑制する物質のスクリーニング方法:
[1]配列番号2に示されるアミノ酸配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[2]配列番号2に示されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[3]配列番号1に示される塩基配列若しくはその相補的配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[4]配列番号1に示される塩基配列において、1若しくは数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[5]配列番号1に示される塩基配列の相補的配列からなるDNAと95%以上の相同性を有し、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:や、
(6)形質転換体が酵母又は植物であることを特徴とする上記(5)記載のホウ素吸収促進活性を促進又は抑制する物質のスクリーニング方法や、
(7)以下の(i)〜(iii)のいずれかに記載のタンパク質を、吸収型ホウ素トランスポーターとして使用する方法:
(i)配列番号2に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質:
(ii)配列番号2に示されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質:
(iii)配列番号1に示される塩基配列の相補的配列からなるDNAと95%以上の相同性を有し、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質:
に関する。
シロイヌナズナの固形培地での栽培および水耕栽培は、特記した場合を除き、以下のように行った。
(i)固形培地での栽培
1%(w/v)のショ糖、1.5%(w/v)のゲランガム(Wako Pure Chemicals, Osaka, Japan)を含むMGRL固形培地(Fujiwara, T., Hirai, M.Y., Chino, M., Komeda, Y., and Naito, S. (1992). Effects of sulfur nutrition on expression of the soybean seed storage protein genes in transgenic petunia. Plant Physiol. 99, 263-268)を使用した。ホウ素濃度はホウ酸によって調整した。表面殺菌した種子を固形培地に播き、4℃にて1〜3日間、春化処理を行った。その後、22℃、白色蛍光灯下で16時間明条件、8時間暗条件に設定した人工気象器 (NK System Biotron, Nippon Medical and Chemical Instrument, Tokyo, Japan) 内にシャーレを垂直に立てて栽培した。
ホウ素濃度をホウ酸により調整したMGRL水耕液(上記Fujiwara et al.,1992)を用いて、水耕栽培法 (平井 (横田) 優美、内藤哲、茅野充男 (1993) アラビドプシスの水耕栽培法 植物細胞工学、5 (6)) により栽培した。植物は、底を切り取った1.5ml容のチューブに固定したロックウール(Nittobo, Tokyo, Japan)の上で栽培した。1.6Lの水耕液を入れたプラスチックタッパーの蓋に16本のプラスチックチューブを固定して用いた。1つのロックウール上に3〜4粒の種を播いて栽培し、10日後に間引きしてひとつのロックウールに植物が1本になるようにして栽培を続けた。水耕液は通気し、はじめの2週間は週に1度、その後は週に2度交換した。約22℃に制御された自然光型温室内で栽培した。
低ホウ素条件下のシロイヌナズナの根においてmRNAの蓄積が増加する遺伝子を探索するため、以下のような方法でマイクロアレイ解析を行った。上記(1)の栽培方法で得られたシロイヌナズナCol−0株をホウ素濃度150μMの水耕液で39日間水耕栽培した後、ホウ素濃度0.3μMの水耕液に移し、3日間栽培した。また、ホウ素濃度150μMの水耕液で39日間水耕栽培したCol−0株を、ホウ素濃度150μMの新たな水耕液でさらに3日間栽培し、コントロールとして用いた。この実験の水耕栽培に関しては、1.6Lの水耕液を入れたプラスチックタッパーの蓋に21本のプラスチックチューブを固定して用い、1つのロックウールに5−6粒の種を播き、間引きしないでそのまま栽培した。プラスチックタッパー1つ分をまとめて1サンプルとした。これらの植物の根からセパゾール−CTAB法(Nakarai Tesque, Kyoto, Japan)によりRNAを抽出した。約8300遺伝子がのったArabidopsis Gene Array (Affymetrix, Santa Clara, USA) を用い、添付のプロトコールに従ってマイクロアレイ実験を行った。このマイクロアレイ実験の結果、ホウ素濃度0.3μMの低ホウ素条件で通常の3倍以上にmRNAの蓄積が増加した12個の遺伝子が選抜された。それらの12個の遺伝子についての結果を表1に示す。
上記(2)のマイクロアレイの結果により選抜された12個の遺伝子の発現誘導について、定量的RT−PCRを用いた検証を行った。12遺伝子について検証を試みたが、増幅が見られず定量できないものがあったため、6遺伝子(At1g27730、At5g26130、At4g10380、At1g22840、At3g27890、At1g01060)についてのみ検証を行った。RT−PCRは以下のような方法で行った。
NIP5;1遺伝子のmRNAの蓄積増加の組織特異性を調べるために、以下のような方法で定量的RT−PCRを行った。上記(2)のマイクロアレイ解析に用いたものと同条件で栽培したシロイヌナズナCol−0株から根、ロゼット葉、および花茎をサンプリングした。サンプルからのRNAの抽出は、セパゾール-CTAB法 (Nakarai Tesque, Kyoto, Japan) を用いた。定量的RT−PCRを行う際のNIP5;1遺伝子のプライマーとして、プライマー15(配列番号17)およびプライマー16(配列番号18)を用いた。その他の条件は、上記(3)の定量的RT-PCRと同様に行った。その結果を図3に示す。図3の結果からわかるように、低ホウ素条件下でのNIP5;1遺伝子のmRNAの蓄積量は、根以外の組織では有意には変化していなかった。この結果から、NIP5;1遺伝子の発現誘導は主に根で起こることが判明した。
低ホウ素条件下におけるNIP5;1遺伝子の誘導の経時変化を調べるために、以下のような実験を行った。人工気象器 (NK System Biotron, Nippon Medical and Chemical Instrument, Tokyo, Japan)を準備し、10時間の明条件(白色蛍光灯)と14時間の暗条件を順に繰り返すように設定した。また、人工気象器内の温度は、22℃に設定した。この人工気象器内でシロイヌナズナCol−0株を栽培した。
NIP5;1はMIPファミリーの中のNIPサブファミリーに属するタンパク質をコードする遺伝子である。そこで、NIPサブファミリーの9遺伝子のうち、NIP5;1以外の5遺伝子、NIP1;1、NIP1;2、NIP2;1、NIP3;1、およびNIP6;1についても低ホウ素条件下での根における発現を調べた。
NIP5;1遺伝子の植物体内における機能を明らかにするため、SIGnAL(Salk Institute Genomic Analysis Laboratory)のT−DNA Express(http://signal.salk.edu/cgi-bin/tdnaexpress)を検索し、シロイヌナズナにおいてNIP5;1にT−DNAの挿入があると予想される形質転換体を2系統取得した。その1系統はSALK_122287(nip5;1-1)であり、これはSALK Institute (La Jolla, USA)より提供された。背景となる野生株はCol−0株である。もう1系統はFLAG_250F08 (nip5;1-2)であり、これはINRA(Institut National de la Recherche Agronomique, Paris, France)より提供された。背景となる野生株はWs(Wassilewskija)株である。
1)プライマーセット1:T−DNAの挿入が予想される位置を挟む、シロイヌナズナのゲノムに特異的なプライマーセット
2)プライマーセット2:T−DNAのLeft borderの配列に特異的なプライマー とゲノムに特異的なプライマーセットのうちの一方
nip5;1−1株およびnip5;1−2株について、NIP5;1の機能が失われていることを確認するため、根におけるNIP5;1のmRNAの蓄積量を定量的RT−PCRにより測定した。T−DNA挿入変異株であるnip5;1−1と、コントロールであるCol−0株を、ホウ素濃度30μMの固形培地でそれぞれ10日間栽培した後、それぞれの根からサンプリングした。それぞれのサンプルから、RNeasy Plant Mini Kitを用いてRNAを抽出し、上記(3)と同様の定量的RT−PCRを行った。定量的RT−PCRを行う際のNIP5;1遺伝子のプライマーとして、プライマー15(配列番号17)およびプライマー16(配列番号18)を用いた。このような定量的RT−PCRを行った結果を図7に示す。また、nip5;1−1およびCol−0株に代えて、nip5;1-2およびWs株を用いて行った同様の定量的RT−PCRを行った結果を図8に示す。図7および図8の結果からわかるように、nip5;1−1株についてはCol−0株(野性株)に比べて平均で1.1%に、nip5;1−2株についてはWs株(野性株)に比べて平均で25%にNIP5;1遺伝子の発現が抑制されていることが明らかとなった。
NIP5;1遺伝子は、低ホウ素条件下においてmRNAレベルで発現誘導を受けることがわかった。この発現誘導がプロモーターの制御で起こっているのかどうかを調べるため、NIP5;1の翻訳開始点の上流約2.5kbの配列の下流にレポーターとしてGUSの配列をつないだコンストラクトを挿入した形質転換シロイヌナズナを作製した。形質転換シロイヌナズナの作製は具体的には以下のような方法で行った。
NIP5;1の細胞内局在を調べるために、カリフラワーモザイクウイルス35S RNAプロモーター(以下35Sと記す)の制御下で、NIP5;1のN末端、またはC末端にsGFPを連結したタンパク質を発現するコンストラクト(タマネギの表皮細胞)を、パーティクルボンバードメントにより作製した。具体的には以下のような方法でコンストラクトを作製した。
NIP5;1のcDNAクローンCERES 36655 (Ceres, Los Angeles, USAより分譲)を鋳型にプライマー38(配列番号40)およびプライマー39(配列番号41)を用いてPCRを行った。DNAポリメラーゼはKOD -plus- (Toyobo, Osaka, Japan)を使用した。PCR産物を、添付のプロトコールに従ってpGEM-Teasy (Promega, Madison, USA)へTAクローニングし、配列を決定してデータベース(TAIR: the Arabidopsis Information Resource; http://arabidopsis.org/)上の配列と比較し、増幅の誤りがないことを確認した。NIP5;1のORFをBsrGIとNotIで切り出して、同制限酵素で切断したpTH2(Chiu, W.L., Niwa, Y., Zeng, W., Hirano, T., Kobayashi, H., and Sheen, J. (1996). Engineered GFP as a vital reporter in plants. Curr. Biol. 6,325-330)へサブクローニングした。
NIP5;1のcDNAクローンRZL55b01(Kazusa DNA research Institute, Kisarazu, Japanより分譲された)を鋳型にプライマー40(配列番号42)およびプライマー41(配列番号43)を用いてPCRを行った。DNAポリメラーゼはPfu turbo DNA polymerase(Stratagene, La Jolla, USA)を使用した。PCR産物を、添付のプロトコールに従ってpGEM-Teasy (Promega, Madison, USA)へTAクローニングし、配列を決定してデータベース(TAIR)上の配列と比較し、増幅の誤りがないことを確認した。NIP5;1を含むXbaI-NcoI断片と、pBI221(Jefferson, R.A., Kavanagh, T.A., and Bevan, M.W. (1987). GUS fusions - beta -glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plants. EMBO J. 6, 3901-3907)のXbaI-EcoRI断片(vectorbackboneを含む断片)と、pTH2(前述のChiu et al., 1996)のNcoI-EcoRI断片(sGFPおよびNOSターミネーターを含む断片)をライゲーションし、クローニングした。結果、NIP5;1とsGFPの間にGly-Gly-Gly-Gly-Alaのリンカーが挿入された。
シロイヌナズナ体内でのNIP5;1の発現の組織特異性を調べるため、NIP5;1プロモーター::GUS形質転換シロイヌナズナを栽培し、GUS染色を行った。具体的には、上記の(9)で作製した、NIP5;1プロモーター::GUSの独立した8つの形質転換ライン(GUSライン1−8)のT2世代を、ホウ素濃度0.3μMの固形培地で9日間栽培した。栽培した植物全体についてGUS染色を行った。GUS染色は以下のような手順で行った。
シロイヌナズナ生体内でのNIP5;1の発現の組織特異性を調べるため、NIP5;1の翻訳開始点の上流約2.5kbの配列の下流にレポーター遺伝子であるGFPの配列をつないだコンストラクトを挿入した形質転換シロイヌナズナを独立して12ライン作製した(GFPライン1−12)。GFPライン1−12のT2世代とCol−0株をホウ素濃度0.3μMの固形培地で6日間栽培し、FluorImager 595(Molecular Dynamics, Sunnyvale, USA)とImagerQuant (Molecular Dynamics, Sunnyvale, USA)を用いて植物全体のGFPの蛍光像を観察した。観察条件は以下のように設定した。対象を波長488nmのアルゴンレーザーにて励起し、GFPの観察用に515−545nmの蛍光を、クロロフィルの自家蛍光の観察用に610nmの蛍光をスキャンした。GFPライン8の結果を図15Bに示す。同様に栽培した野生株(Col−0株)について観察した結果を図15Aに示す。図15の結果からわかるように、GFPは根の先端に強く検出され、地上部ではほとんど検出されなかった(図15A、B参照)。観察した12ライン中11ラインで同様の傾向が見られた。
NIP5;1の発現抑制変異株の生育が、異なるホウ素条件下でどのような影響を受けるかを調べるために以下のような実験を行った。
また、nip5;1−2と野性株Ws株の地上部新鮮重についての結果を図18に、根の長さについての結果を図19に示す。
NIP5;1の発現抑制変異株の形態が、異なるホウ素条件下でどのような影響を受けるかを調べるために、まず、nip5;1−1、nip5;1−2、Col−0株(野生株)およびWs株(野生株)を低ホウ素条件であるホウ素濃度0.3μMの固形培地で10日間栽培した。nip5;1−1とCol−0株(野生株)の栽培後の形態を図20に示す。また、nip5;1−2と野性株Ws株の栽培後の形態を図21に示す。図20および図21の結果からわかるように、nip5;1−1、nip5;1−2共にそれぞれ野生株と比べて顕著に生育阻害を受けた。また、地上部については、野生株では4−6枚の葉が展開していたのに対し、nip5;1−1、nip5;1−2では子葉2枚のみが展開していた。子葉の大きさを比べると、野生株よりもnip5;1−1、nip5;1−2の方が明らかに小さかった。根については、野生株では主根が伸び、側根の発達も見られるのに対し、nip5;1−1、nip5;1−2ではわずかに主根が伸びるだけで側根の発達は見られなかった。
nip5;1−1、nip5;1−2は野生株と比較して低ホウ素状態で生育阻害を受けやすいこと、低ホウ素状態の植物が示した頂芽優勢の損失や不稔などの性質は、一般的なホウ素欠乏症状として知られている(Marschner, H. (1995). Mineral Nutrition of Higher Plants. Academic Press, San Diego, USAおよびDell, B. and Huang, L. (1997). Physiological response of plants to low boron. Plant Soil 193, 103-120)こと、さらに不稔となったnip5;1−2に十分量のホウ素を与えると稔性が回復したことから、nip5;1−1、nip5;1−2では体内ホウ素濃度が低下しているのではないかと思われた。培地中のホウ素濃度と植物体内のホウ素濃度の関係を調べるために以下のような実験を行った。
NIP5;1を過剰発現させるとどのような表現型が現れるかを調べるため、NIP5;1過剰発現変異株の取得を試みた。NIP5;1過剰発現変異株の取得するために、SIGnAL(Salk Institute Genomic Analysis Laboratory)のT−DNA Expressを検索し、シロイヌナズナにおいてNIP5;1の付近に、カリフラワーモザイクウイルス35S RNAプロモーターを含むT−DNAアクチベーションタグの挿入があると予想される形質転換体(Rosso, M.G., Li Y., Strizhov, N., Reiss, B., Dekker, K., and Weisshaar, B. (2003). An Arabidopsis thaliana T-DNA mutagenized population (GABI-Kat) for flanking sequence tag-based reverse genetics. Plant Mol. Biol. 53, 247-259)を3系統(GABI 046C12、GABI 170H09、GABI 297G11)取得した。SIGnALのT−DNA Expressに公開されている隣接配列から予想されるT−DNAの挿入位置を図38に示す。これらの3系統は全てMax Planck Institute fur Zuchtungsforschung(Koln, Germany)より提供された。それらの3株の変異株の背景となる野生株はCol−0株である。
1)プライマーセット1:T−DNAの挿入が予想される位置を挟む、シロイヌナズナのゲノムに特異的なプライマーセット
2)プライマーセット2:T−DNAのLeft borderの配列に特異的なプライマー とゲノムに特異的なプライマーセットのうちの一方
GABI 046C12、GABI 170H09、GABI 297G11株において、NIP5;1の発現が実際に上昇しているかを調べるため、それぞれの株の根におけるNIP5;1のmRNAの蓄積量を定量的RT−PCRにより測定した。具体的には以下のような方法で実験を行った。
GABI 046C12、GABI 170H09、GABI 297G11と、コントロールであるCol−0株を、ホウ素濃度30μMの固形培地でそれぞれ10日間栽培した後、それぞれの根からサンプリングした。それぞれのサンプルから、RNeasy Plant Mini Kitを用いてRNAを抽出し、上記(3)と同様の定量的RT−PCRを行った。定量的RT−PCRを行う際のNIP5;1遺伝子のプライマーとして、プライマー15(配列番号17)およびプライマー16(配列番号18)を用いた。なお、各遺伝子の定量値は、発現量が一定と考えられる遺伝子であるEF−1αの定量値で割ることで標準化した。このような定量的RT-PCRを行った結果を図39に示す。図39からわかるように、Col−0株に比べてGABI 046C12株では平均で2.9倍、GABI 297G11株では平均で3.4倍にNIP5;1の発現が上昇していた。GABI 170H09株では野生株に対して有意な発現上昇は見られなかったものの、発現の上昇傾向は確認された。以下、これらの系統を総称してNIP5;1過剰発現変異株と呼ぶ。
NIP5;1の過剰発現変異株の生育が、異なるホウ素条件下でどのような影響を受けるかを調べるために次の実験を行った。GABI 046C12、GABI 170H09、GABI 297G11およびCol−0株(野生株)を、ホウ素濃度0.3、3、30、150、および300μMのそれぞれの固形培地で栽培し、7日後に根の長さ、10日後に地上部新鮮重を測定した。根の長さは定規で測定した。また、地上部新鮮重は、刈り取ってすぐ、電子天秤(METTLER TOLEDO AG204,METTLER TOLEDO,Tokyo,Japan)で0.1mg単位まで測定した。地上部新鮮重に関する結果を図40に、根の長さに関する結果を図41に示す。図40および図41の結果からわかるように、NIP5;1の過剰発現変異株とCol−0株(野生株)との差はほとんど見られなかった。
NIP5;1過剰発現変異株の植物体内のホウ素濃度が、培地中のホウ素濃度によりどのような影響を受けるかを調べるために次の実験を行った。GABI 046C12、GABI 170H09、GABI 297G11およびCol−0株(野生株)を、ホウ素濃度0.3、3、30、および150μMの水耕液で37日間水耕栽培した。栽培は、人工気象器(NK System Biotron, Nippon Medical and Chemical Instrument, Tokyo, Japan)内で行った。人工気象器は、10時間の明条件(白色蛍光灯)と14時間の暗条件を順に繰り返すように設定した。また、人工気象器内の温度は、22℃に設定した。
Claims (7)
- 以下の[1]〜[5]のいずれかに記載のDNAを含み、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現することができる組換えベクターを、宿主に導入することを特徴とする、宿主のホウ素吸収活性を促進する方法:
[1]配列番号2に示されるアミノ酸配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[2]配列番号2に示されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[3]配列番号1に示される塩基配列若しくはその相補的配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[4]配列番号1に示される塩基配列において、1若しくは数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[5]配列番号1に示される塩基配列の相補的配列からなるDNAと95%以上の相同性を有し、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA。 - 宿主が酵母又は植物であることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 以下の[1]〜[5]のいずれかに記載のDNAを含み、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現することができる組換えベクターが導入され、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現する形質転換体を、ホウ素吸収活性が促進された形質転換体として使用する方法:
[1]配列番号2に示されるアミノ酸配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[2]配列番号2に示されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[3]配列番号1に示される塩基配列若しくはその相補的配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[4]配列番号1に示される塩基配列において、1若しくは数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[5]配列番号1に示される塩基配列の相補的配列からなるDNAと95%以上の相同性を有し、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA。 - 形質転換体が酵母又は植物であることを特徴とする請求項3記載の方法。
- 以下の[1]〜[5]のいずれかに記載のDNAを含み、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現することができる組換えベクターが導入され、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質を発現する形質転換体に、被検物質の存在下、ホウ酸を接触させ、細胞内へのホウ素の取り込みの程度を測定・評価することを特徴とするホウ素吸収促進活性を促進又は抑制する物質のスクリーニング方法:
[1]配列番号2に示されるアミノ酸配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[2]配列番号2に示されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[3]配列番号1に示される塩基配列若しくはその相補的配列からなるホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[4]配列番号1に示される塩基配列において、1若しくは数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA:
[5]配列番号1に示される塩基配列の相補的配列からなるDNAと95%以上の相同性を有し、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質をコードするホウ素吸収促進遺伝子DNA。 - 形質転換体が酵母又は植物であることを特徴とする請求項5記載のホウ素吸収促進活性を促進又は抑制する物質のスクリーニング方法。
- 以下の(i)〜(iii)のいずれかに記載のタンパク質を、吸収型ホウ素トランスポーターとして使用する方法:
(i)配列番号2に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質:
(ii)配列番号2に示されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質:
(iii)配列番号1に示される塩基配列の相補的配列からなるDNAと95%以上の相同性を有し、かつホウ素吸収促進活性を有するタンパク質。
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