JP4550051B2 - 全身性エリテマトーデスの同定およびモニタリング - Google Patents
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Description
全身性エリテマトーデスを有する患者の同定および/またはモニタリングであり、この活動を実行するための方法およびキット。
全身性エリテマトーデス(SLE)または狼瘡は、多くの器官が関与するようになる始原的な自己免疫疾患である。SLE患者における抗自己反応は、種々の核構成成分および細胞質性構成成分に対する自己免疫抗体によって特徴づけられる。これらの自己抗体は、それらのそれぞれの抗原に結合して、循環してそして最終的には組織において沈着する免疫複合体を形成する。この免疫複合体の沈着は、慢性的な炎症および組織損傷を引き起こす。
健康な(健常な)個体から得られる血小板と比較して、全身性エリテマトーデスを有する個体の血小板の表面上に補体C4d量の増加が見られることが見出されている。本明細書中に示されるように、血小板に結合した高レベルの補体C4dは、個体における全身性エリテマトーデスの存在と強い相関があり、そしてその個体における全身性エリテマトーデスの診断およびモニタリングに使用され得る。本発明は、全身性エリテマトーデスであると推測される患者から得られる血小板に結合する補体C4dのレベルを決定する工程およびその患者の補体C4dのレベルと健康な(健常な)個体から得られる血小板に結合する補体C4dのレベルを比較する工程を含む。一つの実施形態において、血小板に結合するC4d量は、フローサイトメトリーによる蛍光検出によって計測される。
本発明の方法は、SLEの同定および/またはモニタリングを可能にする。この状態が、重篤な健康上の問題であるので、この状態に対する相対的に正確であり早期の診断の必要性が存在する。同様に、この疾患の活性をモニタリングする能力が、非常に重要である。最も一般的な意味において、本発明の方法は、患者の血小板の表面上に沈着したC4dを決定することが、SLEに関する診断マーカーとしての役割を果たすという発明者らの発見に基づく。
上述のように記載される、C4dの決定およびその診断方法および疾患活動性モニタリング方法は、手動で実施され得るが、しばしば、必要な決定(または複数の決定)ならびに基底値または参照値との比較をなすために血液サンプルが自動的に分析される自動化システムおよび/または装置を使用して、都合よく実施され得る。
(a)血小板の表面に沈着した補体成分C4dの決定に対応するデータを受信する工程;
(b)個体の血小板の表面に沈着した補体成分C4dに関する参照値を受信する工程;および
(c)(a)のデータと(b)の参照値とを比較する工程。
以下の実施例は、例示として提供されるのであって、限定的に提供されるのではない。当業者は、本質的に類似の結果が得られるように変化または改変され得る種々の非臨界的パラメータを用意に認識する。
(健常なコントロールにおける血小板のC4dのアッセイ:ネガティブ)
25名の健常な個体について研究した。表Iにおいて示されるように、C4dは、25名の健常な個体の各々の血小板上に検出されなかった。1mLのEDTA抗凝集化末梢血のサンプルを、個体の各々から採取して、血小板の供給源として使用した。これらの血小板を、洗浄して、蛍光活性化細胞分類(Fluorescence−Activated Cell Sorter;FACS)用緩衝液に再懸濁した。C4dおよびCD42bのレベルを、C4dおよびCD42bにそれぞれ、特異的なモノクローナル抗体を使用する2色の間接的免疫蛍光法によって測定した。C4dおよびCD42bのレベルを、FACSCalibur cytometer(Becton Dickinson)を使用してフローサイトメトリーによって定量した。これらの血小板を、前方散乱および側方散乱によって同定して、CD42b蛍光および平均蛍光チャネル(mean fluorescence chnnel;MFC)を、C4dについて決定した。
に亘って室温でインキュベートして、次いで、0.5mlの冷PBSで希釈して、そして,FACSCaliburフローサイトメトリー(Becton Dickinson Immunocytometry System,San Jose,CA)で分析した。血小板を、前方散乱の特性およびCD42bの発現、血小板特異的マーカーによって電子装置的に開閉、通過させた。血小板に対する免疫グロブリンの非特異的な結合を、アイソタイプコントロール抗体MOPC21(American Type Culture Collection,Manassa,Virginiaより入手可能)を使用して並列的に同じアッセイを実施することによって決定した。抗C4dおよび抗CD42bの特異的結合を、それぞれ、抗C4dおよび抗CD42bで、得られたMFCから、MOPC21で得られたMFCを差し引くことによって決定した。
(健常コントロールからSLEを有する患者を区別するための血小板性C4dのアッセイ)
この実施例は、全身性エリテマトーデスを診断するために、補体C4dに対する参照値または参照範囲を確立するための、アッセイの実施を説明する。
(他の疾患を有する患者とSLEを有する患者とを区別するための血小板性C4dのアッセイ)
SLEを有する患者 対 健常なコントロールとのこれらの研究の後に、SLE以外の他の疾患を有すると診断された患者(n=103)とSLEを有する患者とを比較する研究を続けた。この比較のために、発明者らは、全身性硬化症を有する患者(n=13)、慢性関節リウマチ(n=17)、変形関節症(n=2)、C型肝炎ウイルス感染(n=14)、多発性筋炎/皮膚筋炎(n=18)、シューグレン症候群(n=2)、じんま疹様血管炎(n=1)、鎌状(赤)血球貧血(n=8)、重複症候群(overlap syndrome)/未分化結合組織性疾患(n=12)、白血病/リンパ腫(n=9)、原発性レイノー病(n=3)、血友病(n=2)、および乾癬(n=2)を有する疾患を研究する。血小板性C4dの単一の決定を、同じアッセイを使用しておこなった。SLEを有する患者についてのC4dの平均値および中央値は、他の疾患を有する患者と比較して、表IVに示す。他の疾患を有する患者におけるC4dについての平均値は、0.53であり、SLEを有する患者におけるC4dについての平均値は、2.59である(p=0.0001)。他の疾患に比べると、SLEに患者においては、これら測定の感受性および特異性は、それぞれ、39%および94%である(表V)。
次いで、発明者らは、SLE疾患活動性指数(Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index;SLEDAI)によって規定されるような疾患活動性を測定する際の血小板性C4dレベルの有用性を調べた。発明者らは、この研究に記録された115名の狼瘡患者の結果を提示する。一変量の線形回帰モデルを用いると、血小板性C4dは、疾患活動性の最も有意な予測因子(P=0.002)であった。
Claims (34)
- 個体における全身性エリテマトーデスを同定することを支援するための方法であって、該方法は、以下:
該個体から得た血小板と結合した補体C4dを定量する工程;および
該個体から得た血小板と結合した補体C4dの量を、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量と比較する工程
を包含し、
ここで、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量と比較して、該個体から得た血小板と結合した補体C4d量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
方法。 - 前記個体から得られた血小板と結合したCD42bを定量する工程をさらに包含する、請求項1に記載の方法。
- 請求項1に記載の方法であって、ここで、
補体C4dの定量が、該C4dを、第1の標識された部分と補体C4dに特異的な抗体との結合体に結合させる工程、および
該第1の標識された部分を定量する工程
を包含する、方法によって実施される、方法。 - 前記第1の標識された部分は、蛍光発光部分である、請求項3に記載の方法。
- 前記第1の蛍光発光部分が、フローサイトメトリー分析によって定量される、請求項4に記載の方法。
- 請求項3に記載の方法であって、該方法は、
前記第1の標識された部分とは検出可能に異なっている第2の標識された部分とCD42bに対して特異的な抗体の結合体に、CD42bを結合させる工程;および
該第2の標識された部分を定量する工程
をさらに包含する、方法。 - 請求項6に記載の方法であって、ここで、前記第2の標識された部分が、蛍光発光部分である、方法。
- 請求項7に記載の方法であって、ここで、前記第2の蛍光発光部分がフローサイトメトリー分析によって定量される、方法。
- 個体における全身性エリテマトーデスの疾患活動性をモニタリングすることを支援する方法であって、該方法は、以下:
該個体から得た血小板と結合した補体C4dを定量する工程;および
該個体から得た血小板と結合した補体C4dの量を、1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体のいずれかから得られた血小板と結合した補体C4dの量を比較する工程
を包含し、
ここで、1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量と比較して該個体から得た血小板と結合した補体C4dの量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
方法。 - 方法であって、以下:
個体から得た血小板と結合した補体C4dを定量する工程;および
該個体から得た血小板と結合した補体C4dの量を、1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体のいずれかから得られた血小板と結合した補体C4dの量を比較する工程
を包含し、
ここで、1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量と比較して該個体から得た血小板と結合した補体C4dの量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
方法。 - 個体における全身性エリテマトーデスを同定するために使用するキットであって、該キットは、
以下:
第1の標識部分と、補体C4dに特異的な抗体との結合体を含むパッケージ;および
血小板と結合した補体C4dを同定するための該結合体の使用に関する指示書
を備える、キット。 - 請求項11に記載のキットであって、ここで、前記第1の標識部分が、蛍光発光部分である、キット。
- 請求項11に記載のキットであって、前記第1の標識部分とは検出可能に異なる第2の標識部分とCD42bに特異的な抗体との結合体を備える、キット。
- 請求項13に記載のキットであって、前記第2の標識部分が、蛍光発光部分である、キット。
- 方法を実行するための実行可能命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体であって、該方法は、以下:
血小板の表面に沈着した補体成分C4dの決定に対応するデータを受信する工程;
個体の血小板の表面に沈着した補体成分C4dに関する参照値を引き出す工程;および
該データと該参照値とを比較する工程
を包含する、
コンピュータ読み取り可能媒体。 - 個体において全身性エリテマトーデスを同定するための方法を実行するための実行可能命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体であって、該方法は、以下:
該個体から得られた血小板と結合した補体C4dを定量する工程;および
該個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量と、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合するC4dとの量を比較する工程;
を包含し、
該全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合するC4dの量と比較して該個体から得られた血小板と結合する補体C4dの量が多いことが、該患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関している、コンピュータ読み取り可能媒体。 - 前記個体から得られた血小板と結合するCD42bを定量する実行可能命令をさらに含む、請求項16に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
- 請求項16に記載のコンピュータ読み取り可能媒体であって、第1の標識された部分と、補体C4dに対して特異的な抗体の結合体に、C4dを結合し、該第1の標識された部分
を定量することによって、補体C4dの定量を実行するための実行可能な命令をさらに含む、コンピュータ読み取り可能媒体。 - 前記第1の標識された部分が、蛍光部分である、請求項18に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
- 前記第1の蛍光発光部分が、フローサイトメトリー分析によって定量される、請求項19に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
- 請求項18に記載のコンピュータ読み取り可能媒体であって、
以下:
前記第1の標識部位とは検出可能に異なっている第2の標識部位と、CD42bに特異的な抗体との結合体に、CD42bを結合させる工程;
該第2の標識された標識部分を定量する工程
のための実行可能な命令をさらに含む、コンピュータ読み取り可能媒体。 - 前記第2の蛍光標識された部分が、蛍光発光部分である、請求項21に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
- 前記第2の蛍光発光部分が、フローサイトメトリー分析によって定量される、請求項22に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
- 全身性エリテマトーデスの疾患活動性をモニタリングするための方法を実行するための実行可能な命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体であって、該方法は、
以下:
該個体から得られた血小板と結合した補体C4dを定量する工程;
該個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量を、1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合する補体C4dの量を比較する工程;
を包含し、
1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合するC4dの量と比較して、該個体から得られた血小板と結合するC4dの量が多いことが、該患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関する、
コンピュータ読み取り可能媒体。 - 方法を実行するための実行可能命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体であって、該方法は、以下:
個体から得られた血小板と結合した補体C4dを定量する工程;
個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量を、1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合する補体C4dの量を比較する工程;
を包含し、
1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合する補体C4dの量と比較して、該個体から得られた血小板と結合するC4dの量が多いことが、該患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関する、
コンピュータ読み取り可能媒体。 - 個体における全身性エリテマトーデスを同定するためのシステムであって、該システムは、以下:
該個体から得た血小板と結合した補体C4dを定量するための手段;および
該個体から得た血小板と結合した補体C4dの量を、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量と比較するための手段
を備え、
ここで、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量と比較して、該個体から得た血小板と結合した補体C4d量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
システム。 - 前記個体から得られた血小板と結合したCD42bを定量するための手段をさらに備える、請求項26に記載のシステム。
- 請求項26に記載のシステムであって、ここで、
前記補体C4dを定量するための手段が、第1の標識された部分と補体C4dに特異的な抗体との結合体に結合したC4d、および該第1の標識された部分を定量するための手段を備える、システム。 - 前記第1の標識された部分は、蛍光発光部分である、請求項28に記載のシステム。
- 前記第1の蛍光発光部分が、フローサイトメトリー分析によって定量される、請求項29に記載のシステム。
- 請求項28に記載のシステムであって、該システムは、
前記第1の標識された部分とは検出可能に異なっている第2の標識された部分とCD42bに対して特異的な抗体の結合体に結合したCD42b、および該第2の標識された部分を定量するための手段をさらに備える、システム。 - 請求項31に記載のシステムであって、ここで、前記第2の標識された部分が、蛍光発光部分である、システム。
- 請求項32に記載のシステムであって、ここで、前記第2の蛍光発光部分がフローサイトメトリー分析によって定量される、システム。
- 個体における全身性エリテマトーデスの疾患活動性をモニタリングするシステムであって、該システムは、以下:
該個体から得た血小板と結合した補体C4dを定量するための手段;および
該個体から得た血小板と結合した補体C4dの量を、1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体のいずれかから得られた血小板と結合した補体C4dの量を比較するための手段
を備え、
ここで、1以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体C4dの量と比較して該個体から得た血小板と結合した補体C4dの量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
システム。
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