JP4544714B2

JP4544714B2 - Microbe detection medium

Info

Publication number: JP4544714B2
Application number: JP2000239615A
Authority: JP
Inventors: 二一小林; 卓夫一柳
Original assignee: Eiken Chemical Co Ltd
Current assignee: Eiken Chemical Co Ltd
Priority date: 2000-08-08
Filing date: 2000-08-08
Publication date: 2010-09-15
Anticipated expiration: 2020-08-08
Also published as: JP2002051766A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、微生物検出用培地に関し、特にトルラ酵母エキスを有効成分として含有する微生物検出用培地に関するものである。
【０００２】
【従来技術】
病院等における微生物検査では、感染症の原因となる病原菌を検出するため、検査材料からの微生物の分離培養や増殖培養を行わなければならない。特に感染症の病像が複雑で多岐にわたり、臨床所見からの病原菌の推定が困難になりつつある現在、微生物検査による迅速かつ正確な検出結果は更に重要性を増している。
【０００３】
この微生物検査において病原菌の特定を行う場合、一般に寒天平板培地に検体を塗布し分離培養を行う。使用する培地により、目的菌が発育した集落の形状、色および集落周囲の培地の色の変化等に差が生じる。これを利用して雑多に発育した集落より目的菌をスクリーニングして生化学的性状検査等に移行する。
【０００４】
ところで、微生物を培養する培地の窒素源としては、ミルクカゼイン、ゼラチン、大豆タンパク質などのタンパク質をトリプシン、ペプシン、パパインなどの酵素で加水分解して調製されたペプトンが用いられていた。
しかしながら、窒素源としてペプトンを用いたとしても、栄養要求性の高い微生物では、生育が十分でない場合があった（特開平７−２６５０６６号公報）。
【０００５】
このため、窒素源としては、微生物の生育促進物質を豊富に含む酵母エキスが用いられている。酵母エキスとしては、ビール酵母エキスやパン酵母エキスが知られている。因みに、ビール酵母エキスは、ビール発酵後の余剰酵母をエキス化したものであり、パン酵母は、糖蜜発酵で培養したサッカロミセス属酵母を原料にエキス化したものである。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これらの酵母エキスを用いた場合でも、確かに微生物の生育促進性能は改善されるものの、サンプルが少量の場合には陽性や陰性の判定が困難な場合があり、更に改善された培地の出現が強く望まれていた。
従って本発明は、このような従来の課題に着目してなされたものであって、従来の酵母エキスが有する生育促進性能を更に向上させると共に、従来品に比べて溶液の色が薄く、外観色が見た目にも良く、しかも安価で経済的な酵母エキスを含有する培地を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、従来の酵母エキスに代わる新たな酵母エキスを鋭意探索した結果、カンジダ属の酵母を糖蜜原料に培養しエキス化したトルラ酵母エキスが上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
本発明の上記の課題は、トルラ酵母エキスを有効成分として含有する微生物検出用培地により達成された。
以下、本発明について更に詳細に説明する。
【０００９】
本発明に使用するトルラ酵母エキスは、ガンジダ属の酵母を糖蜜原料を培養しエキス化したものである。
この酵母エキスは、従来用いていたビール酵母エキスやパン酵母エキスに比べて５’−イノシン酸、５’−グアニル酸およびオリゴヌクレオチドの含有量が高いことで知られている。
【００１０】
本発明においては、トルラ酵母エキスの含有量を培地全量に対して０．００１〜０．０１ｇ／ｍｌ、好ましくは０．００５〜０．０１ｇ／ｍｌの範囲となるように含有させる。トルラ酵母エキスの含有量が０．００１ｇ／ｍｌ未満になると、微生物の生育促進性能を向上させることができず、逆に０．０１ｇ／ｍｌを超えると、高価なものになり、経済性に劣る。
【００１１】
本発明の微生物検出用培地は、液体、半流動、固形のいずれの形態もとりうるが、検出のし易さ等の観点から、固形培地が好ましく、より好ましくは平板固形培地の形態である。
固形培地の固化剤としては、寒天、カラギーナン、アガロースなど通常使用されているものが挙げられる。本発明に使用しうる培地としては、微生物が増殖できる限り、公知の培地の中から適宜選択することができる。このような培地の具体例としては、ハートインフュージョン培地、トリプトソイ培地、マンニット食塩培地、スタピロコッカス培地が挙げられる。
【００１２】
本発明の培地組成は、実質的にトルラ酵母エキス、ペプトン、ブドウ糖、寒天および精製水を含むものである。トルラ酵母エキス、ペプトン、ブドウ糖の配合割合は、従来用いられている濃度を用いることができるが、通常精製水１０００ｍｌに対してトルラ酵母エキス１．０〜１０．０ｇ、好ましくは２．０〜６．０ｇ、ペプトン２．０〜２０．０ｇ、好ましくは５．０〜１５ｇ、ブドウ糖０．５〜３０ｇ、好ましくは１〜２０ｇである。
【００１３】
固形剤（寒天など）は、使用する培地の所望の硬度（固体、半流動）により任意に設定することができる。本発明の培地は、これらの成分を溶解した状態で通常の酸または塩基を必要に応じて加えｐＨを５．５〜９．０の範囲に調整することにより微生物の検出率を更に向上させることができる。
【００１４】
本発明の微生物検出用培地を、固形培地として用いる場合には、例えばブドウ球菌の存在の確認を目的とする検査用サンプルの適当量を、予め調製した本発明の微生物検出用培地の固形培地上にサンプリングし、適当な条件下で培養を行い、発生したブドウ球菌のコロニーの存否から、ブドウ球菌の存在を確認する。
【００１５】
本発明には、特に必要とされないが、ｐＨ指示薬を用いることにより、試験試料が少量でも反応の陽性や陰性が明瞭に判定できるようにすることができる。このようなｐＨ指示薬としては、特に制限はないが、ブロムチモールブルー、フェノールレッド、ブロムクレゾールパープル、クレゾールレッド、ブロムフェノールレッドが挙げられるが、中でもブロムチモールブルーが好ましい。
【００１６】
【発明の効果】
本発明の微生物検出用培地は、従来の酵母エキスが有する微生物の生育促進性能を更に向上させることができ、更に従来品に比べて溶液の色が薄く、外観色が見た目にも良い。従って、本発明の微生物検出用培地によれば、サンプルが少量の場合でも陽性や陰性の判定を高い精度で行うことができる。
また、本発明の微生物検出用培地は、従来用いていたビール酵母エキスやパン酵母エキスに比べて安価なトルラ酵母エキスを用いるため、経済的にも有利である。
【００１７】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。
【００１８】
実施例１．標準寒天培地を用いた微生物の検出
表１に示した培地成分を精製水１０００ｍｌに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、シャーレに２０ｍｌを注入し、ハートブイヨン培地で前培養した菌液を１０倍連続希釈してそれぞれ１０^-6、１０^-7とした菌株を混釈法で１ｍｌ接種し、培地が凝固しないうちに混合して均一にして凝固後、３７℃で２０時間培養し、菌数を測定した。対照として従来の酵母エキスを用いた培地で菌数を比較した。
その結果を表２〜表６に示す。
表に示すように、本発明品は、従来品に比べて、菌数が多いため、微生物の判定が容易となる。
【００１９】

【００２０】

【００２１】

【００２２】

【００２３】

【００２４】

【００２５】
実施例２．ＴＣＢＳ寒天培地を用いた微生物の検出
表７に示した培地成分を精製水１０００ｍＬに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、シャーレに注入して常法により固化した培地に、ハートブイヨン培地で前培養した菌液を１０^- ^１〜１０^-6まで１０倍連続希釈した菌株をミスラ法で接種し、３７℃で２０時間培養後、菌の発育性、菌数およびコロニーの大きさを評価した。対照として従来の酵母エキスを用いた培地で菌の発育性、菌数およびコロニーの大きさを比較した。その結果を表８〜表１６に示す。
表に示すように、本発明品は、菌数およびコロニーの大きさとも、従来品より優れるため、判定が容易である。
【００２６】

【００２７】

【００２８】

【００２９】

【００３０】

【００３１】

【００３２】

【００３３】

【００３４】

【００３５】

【００３６】
実施例３．ガンジダＧＳ寒天培地を用いた微生物の検出
表１７に示した培地成分を用いた以外は、実施例２と全く同様にして菌の発育性、菌数およびコロニーの大きさを評価した。その結果を表１８〜表２５に示す。
表に示すように、本発明品は、従来品に比べて、菌数およびコロニーの大きさとも勝るため、判定が容易となる。
【００３７】

【００３８】

【００３９】

【００４０】

【００４１】

【００４２】

【００４３】

【００４４】

【００４５】

【００４６】

【００４７】
実施例４．トルラ酵母エキスを用いた場合の培地の色
表２７に示した培地成分を精製水１０００ｍＬに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、培地の溶液の色を日立製作所製の分光光度計を用いて４２０ｎｍで測定した。対照として従来の酵母エキスを用いて同様に溶液の色を測定した。その結果、従来品は０．４８０であったのに対し、本発明品は０．３５３であった。
この結果に示すように、本発明品は、従来品に比べて溶液の色が薄いため、菌数や菌の発育性を判定し易いばかりでなく、外観色が見た目にも良い。
【００４８】

【００４９】[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to a microorganism detection medium, and more particularly to a microorganism detection medium containing Torula yeast extract as an active ingredient.
[0002]
[Prior art]
In microbial testing in hospitals and the like, in order to detect pathogenic bacteria that cause infectious diseases, it is necessary to perform culturing of microorganisms from test materials and growth culture. In particular, since the pathology of infectious diseases is complex and diverse, and it is becoming difficult to estimate pathogenic bacteria from clinical findings, rapid and accurate detection results by microbial testing are becoming increasingly important.
[0003]
In order to identify pathogens in this microbiological examination, a specimen is generally applied to an agar plate medium and separated and cultured. Depending on the medium to be used, there are differences in the shape and color of the village where the target bacteria have grown and the change in the color of the medium around the village. Utilizing this, the target bacteria are screened from the villages that have grown in various ways, and then transferred to biochemical characterization.
[0004]
By the way, peptone prepared by hydrolyzing proteins such as milk casein, gelatin, and soy protein with enzymes such as trypsin, pepsin, and papain has been used as a nitrogen source of a medium for culturing microorganisms.
However, even when peptone is used as the nitrogen source, there are cases where the growth of microorganisms with high auxotrophy is not sufficient (Japanese Patent Laid-Open No. 7-265066).
[0005]
For this reason, as a nitrogen source, a yeast extract rich in microbial growth promoting substances is used. As yeast extract, beer yeast extract and baker's yeast extract are known. Incidentally, the brewer's yeast extract is an extract of surplus yeast after beer fermentation, and the baker's yeast is an extract of Saccharomyces yeast cultivated by molasses fermentation as a raw material.
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
However, even when these yeast extracts are used, the growth promotion performance of microorganisms is certainly improved. However, when the amount of the sample is small, it may be difficult to make a positive or negative determination. The appearance was strongly desired.
Therefore, the present invention has been made paying attention to such a conventional problem, and further improves the growth promoting performance of the conventional yeast extract, and the color of the solution is lighter than the conventional product, and the appearance color is improved. Is to provide a medium containing yeast extract that is good in appearance and inexpensive and economical.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
As a result of earnest search for a new yeast extract that replaces the conventional yeast extract, the present inventors have found that a torula yeast extract obtained by culturing Candida yeast as a molasses raw material can solve the above-mentioned problems. completed.
[0008]
The object of the present invention has been achieved by a microorganism detection medium containing Torula yeast extract as an active ingredient.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
[0009]
The Torula yeast extract used in the present invention is obtained by culturing Gandida yeast by culturing molasses raw materials.
This yeast extract is known to have a high content of 5′-inosinic acid, 5′-guanylic acid and oligonucleotides as compared to conventionally used beer yeast extract and baker's yeast extract.
[0010]
In the present invention, the content of Torula yeast extract is contained so as to be in the range of 0.001 to 0.01 g / ml, preferably 0.005 to 0.01 g / ml with respect to the total amount of the medium. If the content of Torula yeast extract is less than 0.001 g / ml, the growth promotion performance of microorganisms cannot be improved. Conversely, if it exceeds 0.01 g / ml, it becomes expensive and inferior in economic efficiency. .
[0011]
The culture medium for detecting microorganisms of the present invention can take any form of liquid, semi-fluid, and solid, but from the viewpoint of ease of detection and the like, a solid medium is preferable, and a flat plate solid medium is more preferable.
Examples of the solidifying agent for the solid medium include commonly used ones such as agar, carrageenan, and agarose. The medium that can be used in the present invention can be appropriately selected from known media as long as microorganisms can grow. Specific examples of such a medium include a heart infusion medium, a tryptosoy medium, a mannitol salt medium, and a staphylococcus medium.
[0012]
The medium composition of the present invention substantially contains Torula yeast extract, peptone, glucose, agar and purified water. Although the conventionally used concentration can be used as the mixing ratio of Torula yeast extract, peptone, and glucose, Torula yeast extract is usually 1.0 to 10.0 g, preferably 2.0 to 6 with respect to 1000 ml of purified water. 0.0 g, peptone 2.0-20.0 g, preferably 5.0-15 g, glucose 0.5-30 g, preferably 1-20 g.
[0013]
The solid agent (such as agar) can be arbitrarily set depending on the desired hardness (solid, semi-fluid) of the medium to be used. The medium of the present invention can further improve the detection rate of microorganisms by adjusting the pH to a range of 5.5 to 9.0 by adding a normal acid or base as necessary with these components dissolved. Can do.
[0014]
When the microorganism detection medium of the present invention is used as a solid medium, for example, an appropriate amount of a test sample for the purpose of confirming the presence of staphylococci is prepared on the solid medium of the microorganism detection medium of the present invention prepared in advance. And culturing under appropriate conditions, and the presence of staphylococci is confirmed from the presence or absence of the colonies of the generated staphylococci.
[0015]
Although not particularly required in the present invention, the use of a pH indicator can clearly determine whether the reaction is positive or negative even with a small amount of test sample. Such a pH indicator is not particularly limited, and examples thereof include bromothymol blue, phenol red, bromocresol purple, cresol red, and bromophenol red, among which bromothymol blue is preferable.
[0016]
【The invention's effect】
The culture medium for detecting microorganisms of the present invention can further improve the growth promotion performance of microorganisms of a conventional yeast extract, and the color of the solution is lighter than that of the conventional product, and the appearance color may be visible. Therefore, according to the microorganism detection medium of the present invention, positive or negative determination can be performed with high accuracy even when the amount of the sample is small.
In addition, the microorganism detection medium of the present invention is economically advantageous because it uses an inexpensive torula yeast extract as compared with beer yeast extract and baker's yeast extract that have been conventionally used.
[0017]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention is not limited by this.
[0018]
Example 1. Detection of microorganisms using standard agar medium The medium components shown in Table 1 were dissolved in 1000 ml of purified water, sterilized at 121 ° C. for 20 minutes, poured into a petri dish, and 10 ml of the bacterial solution pre-cultured in heart bouillon medium was used. Inoculate 1 ml of 10 ^-6 and 10 ^-7 strains each by serial dilution, mix and homogenize before the medium does not coagulate, and then incubate at 37 ° C for 20 hours. Was measured. As a control, the number of bacteria was compared in a medium using a conventional yeast extract.
The results are shown in Tables 2-6.
As shown in the table, the product of the present invention has a larger number of bacteria than the conventional product, so that the determination of microorganisms becomes easy.
[0019]

[0020]

[0021]

[0022]

[0023]

[0024]

[0025]
Example 2 Detection of microorganisms using TCBS agar medium The medium components shown in Table 7 were dissolved in 1000 mL of purified water, sterilized at 121 ° C. for 20 minutes, poured into a petri dish, and solidified by a conventional method. cultured bacterial solution of 10 ^- ¹ to ^10-6 to 10-fold serially diluted strains were inoculated by Miles and Misra method, after 20 hours incubation at 37 ° C., growth of bacteria, and evaluate the magnitude of the bacterial count and colony. As a control, the growth of bacteria, the number of bacteria and the size of colonies were compared in a medium using a conventional yeast extract. The results are shown in Tables 8-16.
As shown in the table, the product of the present invention is superior to the conventional product in terms of both the number of bacteria and the size of the colonies, and thus is easy to determine.
[0026]

[0027]

[0028]

[0029]

[0030]

[0031]

[0032]

[0033]

[0034]

[0035]

[0036]
Example 3 FIG. Detection of microorganisms using Gandida GS agar medium The growth of bacteria, the number of bacteria and the size of colonies were evaluated in the same manner as in Example 2 except that the medium components shown in Table 17 were used. The results are shown in Table 18 to Table 25.
As shown in the table, the product of the present invention is superior to the conventional product in both the number of bacteria and the size of the colony, and therefore, the determination is easy.
[0037]

[0038]

[0039]

[0040]

[0041]

[0042]

[0043]

[0044]

[0045]

[0046]

[0047]
Example 4 Color of medium when Torula yeast extract is used The medium components shown in Table 27 are dissolved in 1000 mL of purified water, sterilized at 121 ° C. for 20 minutes, and then the color of the medium solution is determined using a spectrophotometer manufactured by Hitachi. Measured at 420 nm. The color of the solution was similarly measured using a conventional yeast extract as a control. As a result, the conventional product was 0.480, while the product of the present invention was 0.353.
As shown in this result, since the product of the present invention has a lighter color than the conventional product, it is not only easy to determine the number of bacteria and the growth of bacteria, but also the appearance color may be visually visible.
[0048]

[0049]

Claims

A microorganism-detecting medium comprising Torula yeast extract as an active ingredient.

The culture medium for microorganism detection according to claim 1, wherein the content of Torula yeast extract is in the range of 0.001 to 0.01 g / ml.

The culture medium for microorganism detection according to claim 1 or 2, which is in the form of a flat solid medium.