JP4480152B2 - 拡散性生物学的産物を生産する細胞を含有する移植可能なアガロース−コラーゲンビーズとその利用法 - Google Patents
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Description
本出願は、参考文献として本出願にその内容を合体させる、1996年4月3日出願の同時係属出願第08/625,595号の一部継続出願である。
発明の分野
本発明は、アガロースとコラーゲン中へ細胞をカプセル封入した後、アガロースでコーティングすること、アガロース中に細胞をカプセル封入した後、アガロースでコーティングすること、これらの材料細胞を用いる治療法、および、その製造方法に関する。
この例、および以下の諸例では、RENCA細胞を使用する。これはBALB/Cマウスの自然発症の腎腺ガン細胞であり、広く入手可能でイン・ヴィトロの培養およびイン・ヴィヴォの飼育(culture)の両方で維持されてきたものである。フランコ(Franco), Cytokine Induced Tumor Immunogenecity, 181-193(1994)を参照されたい。
RENCA細胞がイン・ヴィヴォで実際に成長することが示されたことに続いて、これら細胞が本発明によるビーズの中で生育するかを判定するための研究を行った。
イン・ヴィヴォでの研究を行うに先立って、RENCA細胞が前述の方法で調製したビーズの中で成長するか否かを判定することが必要であった。
次にイン・ヴィヴォ実験を行った。これらの実験において、ビーズを7日間37℃でインキュベートした。次に対象マウスは、ビーズの移植を受けた。これを行うため、4匹のマウスはそれぞれ腹腔内を通る正中切開を受けた。それぞれが60,000のRENCA細胞を含有する、3つのビーズが移植された。次に切開を吸収性縫合糸を使用して閉じた(二層縫合(two layer closure))。4匹のマウス(BALB/C)は正常な雄のマウスであり、24−26グラムの体重で健康であるようだった。2セットのコントロールを設定した。第1のセットでは、2匹のマウスがRENCA細胞を含有しない3つのビーズを与えられ、第2のセットでは、2匹のマウスは全く処置を受けなかった。
これらの実験では6匹のBALB/Cマウスのそれぞれの一つの腎臓被膜の下にRENCA細胞を注入することによって確立したガンをシュミレートした。15日後、マウスを2つのグループに分けた。第1のグループの3匹のマウスはそれぞれ前述の例4に記載した3つのビーズを与えられた。第2のグループ(コントロールグループ)はRENCA細胞を含有しないビーズを与えられた。
制限を受けずに(固定されずに:freely)接種されたRENCA細胞の増殖は、カプセル封入されたRENCA細胞と一緒にインキュベートされた際は抑制される。この効果が他の細胞についても観察されるかを判定するために更なるセットの実験を行った。
例6の結果に続いてRENCA細胞ではなく1x104MMT細胞を使用して同様の実験を行った。この実験は例6と全く同様にして行った。結果を表2に示す。
前記の諸実験で用いた、RENCA細胞は腎ガン細胞である。本発明の普遍的な有効性をより完全に証明するために、異なるタイプのガン細胞を使用した研究を行った。具体的には、腺ガン細胞を使用した。
前記から示唆されるように、本発明の粒子は結果的に、腫瘍細胞増殖を抑制および/または阻止するなんらかの物質また因子の産生をもたらすものである。これを更に以下の実験において探究した。
前記の実験は調整培地(conditioned medium)中でのRENCA細胞の増殖が、コントロール培地中での細胞の増殖の約半分であるということを示していた。ここに示す実験では、増殖抑制因子が、調整培地を凍結した後でも活性を維持するかどうかを調べた。
Claims (20)
- 組成物がガン細胞の増殖の抑制に有効であるか否かを測定する方法であって、以下の工程:
非封入ガン細胞のサンプルを調整培養培地Bに添加する工程であって、ここで、前記調整培養培地Bは、アガロースコーティングした、アガロース含有ビーズ内に封入されたガン細胞のサンプルを含む組成物を培養するため培養培地Aを使用することによって作り出されたものである、
非封入ガン細胞の前記サンプルを前記培養培地B中にて所定時間培養する工程、そして、前記培養培地A中にて、前記非封入ガン細胞の増殖を前記非封入ガン細胞のサンプルと比較する工程、ここで、前記培養培地Aは、前記組成物の培養に未使用のものである、ここで、増殖の減少は、前記組成物が前記非封入ガン細胞の増殖の抑制に有効であることを示す、
を有する、組成物がガン細胞の増殖の抑制に有効であるか否かを測定する方法。 - 前記封入ガン細胞が、腺ガン細胞である請求項1に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、乳がん細胞、又は腎ガン細胞である請求項1に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、ヒトガン細胞である請求項1に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、マウスガン細胞である請求項1に記載の方法。
- 前記ビーズが、10,000〜200,000のガン細胞を含む請求項1に記載の方法。
- 前記ビーズが、30,000〜100,000のガン細胞を含む請求項1に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、前記非封入ガン細胞と異なるタイプのものである請求項1に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、前記非封入ガン細胞と同じタイプのものである請求項1に記載の方法。
- 前記非封入ガン細胞が、ヒトガン細胞である請求項1に記載の方法。
- 組成物がガン細胞の増殖の抑制に有効であるか否かを測定する方法であって、以下の工程:
非封入ガン細胞のサンプルと、培地と、アガロースコーティングした、アガロース含有ビーズ内に封入されたガン細胞のサンプルを含む組成物とを混合して第1混合物を形成する工程、
前記混合物を所定時間培養する工程、そして
前記非封入ガン細胞の増殖を、前記所定時間と同じ時間培養された、前記組成物不在の、前記培地と前記非封入ガン細胞との第2混合物と比較する工程、ここで、前記第1混合物における増殖の減少は、前記組成物が前記非封入ガン細胞の増殖の抑制に有効であることを示すものである、
を有する、組成物がガン細胞の増殖の抑制に有効であるか否かを測定する方法。 - 前記封入ガン細胞が、腺ガン細胞である請求項11に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、乳がん細胞、又は腎ガン細胞である請求項11に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、ヒトガン細胞である請求項11に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、マウスガン細胞である請求項11に記載の方法。
- 前記ビーズが、10,000〜200,000のガン細胞を含む請求項11に記載の方法。
- 前記ビーズが、30,000〜100,000のガン細胞を含む請求項11に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、前記非封入ガン細胞と異なるタイプのものである請求項11に記載の方法。
- 前記封入ガン細胞が、前記非封入ガン細胞と同じタイプのものである請求項11に記載の方法。
- 前記非封入ガン細胞が、ヒトガン細胞である請求項11に記載の方法。
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