JP4477474B2 - 糞便懸濁ろ過用容器 - Google Patents
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Description
図2は本発明の糞便採取キットを構成する糞便採取容器部分及び収納容器部分の断面図である。糞便採取容器1は、シリンジ2状の構造をしており、採取容器使用時に容器を保持する取っ手3を有している。シリンジ2の先端部は糞便に付き差す部分であり、シリンジ2の内部は空洞になっている。シリンジ2の取っ手3近くには、糞便採取容器1の蓋部材としてゴム状の蓋用パッキン4で封止されており、該蓋用パッキン4を外部からシリンジ2内に押し込むことにより、シリンジ内に移動できる。蓋部材4は後から突き破ることの出来る薄膜をシリンジ2の取っ手3近くに貼りつけることで代用することもできる。同じく、シリンジ2の取っ手3近くには、糞便採取時に糞便がシリンジ2内に収納されやすいように空気穴5が設けられている。収納容器6は、該糞便採取容器と結合できる他方の結合部7を有し、該糞便採取容器を収納できる収納筒体8からなる。
図4は、糞便処理容器本体20の断面図を示したものであり、糞便処理容器本体20は、シリンジ収納部21、懸濁部22、濾液受け容器23で構成されている。シリンジ収納部21の上部には糞便採取容器1との結合部24を有し、ねじ込み式に糞便採取容器1と糞便処理容器本体20を結合することができる。この場合、糞便採取容器1を接続せずに、直接糞便のみを糞便処理容器本体20内に落とし込む方式に容器を変更することも可能である。シリンジ収納部21は糞便採取容器1のシリンジ2が収まる部分である。懸濁部22は糞便の懸濁を行う本体の中心部分である。懸濁部22と濾液受け容器23との接続部25は、フィルター26をはめ込みと部位と、濾液受け用容器23の接続をおこなう結合部からなる、ねじ状構造をした部分である。フィルター26は、懸濁液を濾過するために使用する、直径が30mm程度のポリアミドメッシュフィルターで、外周がゴム性のリング構造になっており、懸濁部22の接続部25に嵌め込んで使用する。フィルター部位の素材は上記のものに限定する必要はなく、フィルターの条件を満たし、本操作に適応できるものであれば、他の素材でも問題ない。フィルターの口径は500μmから1000μm程度が好ましいが、糞便量、糞便中の混合物などの条件によって、100μmから2000μm程度まで変化させることができる。濾液受け容器23は、懸濁部22の接続部25にねじ込み式に接続する。コニカルチューブと呼ばれる名前でファルコン社から市販されている50ml遠沈管又は新たに作製したものを接続させて使用する。
濾液中に含まれるがん細胞を、がん細胞にアフィニティーをもった担体を用いて回収する。担体にはがん細胞に対するアフィニティーを持った抗体が表面に結合した磁気ビーズを使用する。具体的にはダイナル社から市販されているBer−EP4抗体結合磁気ビーズ(Dynabeads Epithelial Enrich、ダイナル社)を使用する。Ber−EP4以外にも大腸がん細胞に対するアフィニィティーを持った抗体ならば適応可能である。抗体以外にも大腸がん細胞にアフィニィティーのあるアプタマー、リガンドなどが使用できる。
上記標準化プロトコールで回収したペレットは、続いて大腸がん判定用の検体として使用する。がんの判定には細胞そのものを利用する場合と細胞から抽出した物質を利用する場合がある。細胞そのものを利用する場合は回収後、直ちに使用することが可能である。又、細胞固定液等で保存することも可能である。抽出物質を利用する場合は−80℃にペレットを凍結保存することが可能である。
本発明の糞便採取キット及び糞便処理キットの各樹脂部品を射出成型で作製した。部品は糞便採取容器(ポレエチレン製)、収納容器(ポレエチレン製)、糞便処理キット本体(ポレエチレン製)、フィルター(外周:エラストマー製、フィルター部:ナイロン製)、蓋用パッキン(エラストマー製)、押出し棒(ポリエチレン製)からなる。各部品の説明は上記を参照のこと。
模擬便を使って糞便採取容器及び糞便処理容器の使用方法に関して検討した。模擬便は基材として釣餌(浮子鯉、マルキュー株式会社)2.5g、増粘剤として小麦粉(カメリヤ強力小麦粉、日清製粉)1gを混合した後、水2.5mlを加えて練りこみ作製した。
手術前の3人の大腸がん患者由来糞便(A,B,C)を検体として使用した。糞便の使用に関しては事前に各被験者へ実験内容の説明を行い、同意を得た。
実施例3に示した3人の大腸がん患者と同一の糞便サンプルを使用して、ストマッカーを使用した従来法(上記特許特許文献2)により、細胞-磁気ビーズペレットを回収した。Aの患者由来のサンプルの一部を実施例3と同様に染色し、細胞を観察した。その結果上皮系由来と判断できる細胞が存在していることが確認できた。さらに形態的に詳しく観察すると、核の大小不同、クロマチンの濃縮、核膜肥厚が観察され、ClassVの大腸がん細胞であることが判明した。従って、Aの患者由来の糞便中にはがん細胞が存在していることが明らかになった。
回収した磁気ビーズのペレットからセパジーンキット(三光純薬)を用いてDNAを抽出した。抽出したDNAを鋳型にして、がん抑制遺伝子であるAPC(adenomatous polyposis coli)遺伝子ののエキソン15に含まれる領域をPCRで増幅した。増幅に使用したプライマーの配列はF:5‘-AAACACCTCAAGTTCCAACCAC−3’とR: 5‘−GGTAATTTTGAAGCAGTCTGGGC−3’であり、増幅する領域の塩基数は1553bpであった。この増幅断片中に存在する、MCR(mutation cluster region, codon1250-1550)と呼ばれるAPC遺伝子変異のホットスポットである領域をシークエンス解析した。シークエンス解析にはBig Dye Terminator v3.1/1.1 cycle kit(ABI)を付属プロトコールに従い使用した。
糞便処理キットを改良し、操作性を改善した。
Claims (10)
- 糞便採取容器と該糞便採取容器と結合可能な糞便処理容器本体と該糞便採取容器から該糞便処理容器本体へ採取した糞便を移動させる押出し部材からなる糞便処理キットであって、(a)該糞便採取容器は、糞便に突き刺すことにより0.5グラム以上の糞便を採取できる容量を有するシリンジと、糞便採取口と該糞便採取口の他端の該シリンジ外周部に設けられた取っ手と、該糞便採取口の他端に設けられた蓋部材からなり、(c)該糞便処理容器本体は、該シリンジを収納するシリンジ収納部と、該シリンジ収納部に接続し糞便の懸濁を行う懸濁部と、該懸濁部に分離可能に接続され、糞便懸濁用溶液を収納すると共に懸濁・濾過された糞便の濾液を受ける濾液受け容器と、該懸濁部と該濾液受け容器の接続部に設けられたフィルターからなり、(d)該押出し部材は、該糞便採取容器のシリンジ中に採取された糞便を該蓋部材を押し下げ又は突き破って該懸濁部に移動させる押出し部材である、ことを特徴とする糞便処理キット。
- 前記糞便懸濁用溶液が、細胞洗浄液及び/又は細胞培養液であることを特徴とする請求項1に記載の糞便処理キット。
- 前記懸濁部の内部に、前記糞便を破砕する破砕手段を有することを特徴とする請求項1に記載の糞便処理キット。
- 前記破砕手段が、金属製、セラミック製、ガラス製、プラスチック製から選択される1個以上のボールであることを特徴とする請求項3に記載の糞便処理キット。
- 前記フィルターが、ポリアミドメッシュのフィルターであることを特徴とする請求項1に記載の糞便処理キット。
- 前記糞便採取容器は、前記糞便処理容器のシリンジ収納部と結合できる一方の結合部を有し、該糞便処理容器のシリンジ収納部は該糞便採取容器と結合できる他方の結合部を有することを特徴とする請求項1に記載の糞便処理キット。
- 前記結合部は、螺合部又は勘合(スナップフィット)部であることを特徴とする請求項6に記載の糞便処理キット。
- 前記糞便処理容器本体の、前記懸濁部は前記濾液受け容器と結合できる一方の結合部を有し、前記濾液受け容器は前記懸濁部と結合できる他方の結合部を有することを特徴とする請求項1に記載の糞便処理キット。
- 前記結合部は、螺合部又は勘合(スナップフィット)部であることを特徴とする請求項8に記載の糞便処理キット。
- 前記糞便処理容器本体の前記シリンジ収納部、前記懸濁部、前記濾液受け容器結合部は、透明又は半透明材料からなることを特徴とする請求項1に記載の糞便処理キット。
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