JP4457364B2 - 新規な乳酸菌及び当該乳酸菌を使用して加工した各種製品 - Google Patents
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- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
Description
本発明は、ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、短時間で増殖すること、病原菌を抑制すること、及び有用な細菌の増殖を促進すること、の性質を有することを特徴とする新規な乳酸菌、並びに前記新規な乳酸菌を使用し、加工することを特徴とする各種製品に関する。尚、本明細書において百分率の表示は、特に断りのない限り、重量によるものである。
ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌の耐酸性については、ラクトバシラス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）についてｐＨ３．０における試験が報告されている（非特許文献１を参照。）。また、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌については、フジサワ（Ｆｕｊｉｓａｗａ）らによりラクトバシラス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバシラス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）等の詳細な菌種に分別されている（非特許文献２を参照。）。
一方、最近プロバイオティクスとしての乳酸菌の効果についてアレルギー炎症性腸疾患、感染症、潰瘍性大腸炎、高血圧、コレステロール血症、大腸癌等の予防又は治療が注目されている（非特許文献３を参照。）。しかしながら、従来公知の乳酸菌を飲食品、医薬品等に利用した場合、摂取又は服用時に胃酸の影響により腸まで到達する菌数が減少することが知られている（非特許文献４を参照。）。従来、この菌数の減少を防止するために、使用する乳酸菌末又は乳酸菌錠剤をコーティングする等の方法により、胃酸による乳酸菌の死滅を軽減する方法が採用されている（特許文献１乃至特許文献５を参照。）。また、耐酸性を有するラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を使用したヨーグルトも市販されている。
特開平５−１８６３３５号 特開平５−１８６３３６号 特開平５−１８６３３７号 特開２０００−１６３２０号 特開２００１−６４１８９号 プラサド・ジェー（Ｐｒａｓａｄ，Ｊ．）ら、インターナショナル・デイリー・ジャーナル（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄａｉｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ）、第８巻、第９９３ページ、１９９８年 フジサワ・ティー（Ｆｕｊｉｓａｗａ，Ｔ．）ら、インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（Ｉｉｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）、第４２巻、第３号、第４８７ページ、１９９２年 グウプタ・ピー・エー（Ｇｕｐｔａ，Ｐ．Ａ．）ら、インターナショナル・ジャーナル・オブ・フード・マイクロバイオロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、第巻２９、第１０５ページ、１９９６年 ホッド・エス・ケー（Ｈｏｏｄ，Ｓ．Ｋ．）ら、ジャーナル・オブ・フード・サイエンス（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第５３巻、第１５１４ページ、１９８８年
前記従来技術に鑑みて本発明者は、数年前から胃酸により死滅することなく腸に到達可能な耐酸性乳酸菌に強い関心を持ち、耐酸性乳酸菌の研究を鋭意行った結果、ｐＨ１．０において少なくとも６０分間生存する従来にない格段に優れた耐酸性を有するラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌を見出し、更にこの新規な乳酸菌の用途として各種製品に利用することが可能であることを見出し、本発明を完成した。
本発明の第一の目的は、短時間で増殖し、優れた耐酸性を有し、病原菌の増殖を抑制するラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌を提供することであり、本発明の第二の目的は、当該新規な乳酸菌の用途として、当該乳酸菌を含有する各種製品を提供することである。
前記課題を解決する本発明の第一の発明（以下、第一発明、と記載する。）は、ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、次のａ）乃至ｄ）
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有することを特徴とする新規な乳酸菌であり、ラクトバシラス属に属する乳酸菌が、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｏｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）であることを望ましい態様としている。
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有することを特徴とする新規な乳酸菌であり、ラクトバシラス属に属する乳酸菌が、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｏｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）であることを望ましい態様としている。
前記課題を解決する本発明の第二の発明（以下、第二発明、と記載する。）は、ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、次のａ）乃至ｄ）
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有する新規な乳酸菌を使用し、加工することを特徴とする各種製品であり、ラクトバシラス属に属する乳酸菌が、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）であること、並びに加工が、新規な乳酸菌による発酵、新規な乳酸菌の混合、新規な乳酸菌の菌末化又は新規な乳酸菌の錠剤化であることを望ましい態様としている。
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有する新規な乳酸菌を使用し、加工することを特徴とする各種製品であり、ラクトバシラス属に属する乳酸菌が、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）であること、並びに加工が、新規な乳酸菌による発酵、新規な乳酸菌の混合、新規な乳酸菌の菌末化又は新規な乳酸菌の錠剤化であることを望ましい態様としている。
次に本発明について詳細に記載する。第一発明は、本発明者がヒトの胃液から後記試験例１に示すとおり分離した乳酸菌ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（以下、Ｎｏ．１０８８と略記する。）であり、従来知られていなかったラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌であり、各種製品に使用することが可能である。これらの菌株は後記試験例から明らかなとおり、１６ＳｒＲＮＡ の塩基配列から新規な菌株であることが明白である。更に後記試験例から明らかなとおり、短時間で増殖し、病原菌の増殖を抑制し、有用な細菌の増殖を促進し、ｐＨ１．０の緩衝液（０．１Ｍの塩酸・クエン酸ナトリウム緩衝液）において少なくとも６０分間生存し得る優れた耐酸性を有する乳酸菌である。
第二発明は、前記第一発明の短時間で増殖し、病原菌の増殖を抑制し、優れた耐酸性を有するラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌を含有する各種製品であり、前記新規な乳酸菌により発酵したヨーグルト等の発酵製品、前記新規な乳酸菌を凍結乾燥した粉末からなる健康食品、前記新規な乳酸菌末を加工した錠剤等の医薬品等の多くの製品に使用することが可能である。
前記発酵製品を製造するには、例えば次のように実施する。原料乳に前記新規な乳酸菌、スターターとしてラクトバシラス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）及びストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）を添加し、常法により製造することができる。
前記新規な乳酸菌末を製造するには、例えば次のように実施する。前記新規な乳酸菌を市販の培地（例えば、エムアールエス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）、ベクトン・デッキンソン社製）に接種し（例えば、培地１ｍｌ当たり１×１０７の割合で接種）、培養し（例えば、３７℃で１２〜１８時間）、培養終了後に遠心分離により集菌し、集菌した菌体を洗浄液（例えば、食塩濃度０．８５％の滅菌生理食塩水）により洗浄し、再び遠心分離により集菌し、脱脂粉乳を主成分とする溶液（例えば、１０％脱脂粉乳及び１％グルタミン酸ナトリウムを勧誘する溶液）に洗浄した菌体を懸濁し、常法により凍結乾燥し、前記新規な乳酸菌末を製造する。
前記新規な乳酸菌末を加工した錠剤を製造するには、例えば次のように実施する。前記新規な乳酸菌末を、例えば糖、デキストリン及び澱粉等からなる賦形剤を使用し、常法により錠剤に加工する。以上記載したとおり、前記新規な乳酸菌は公知の乳酸菌と同様に処理又は使用することが可能である。
次に試験例を示し、本発明について詳細に記載する。
試験例１
この試験はラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌株を分離、同定するために行った。尚、菌株の分離及び菌株の確認は、厚生省生活衛生局監修、「食品衛生検査指針：微生物編」、日本食品衛生協会、１９９０年及び乳酸菌研究集談会編、「乳酸菌の科学と技術」、学会出版センター、１９９６年に記載されている方法に基づいて実施した。
試験例１
この試験はラクトバシラス属に属する新規な乳酸菌株を分離、同定するために行った。尚、菌株の分離及び菌株の確認は、厚生省生活衛生局監修、「食品衛生検査指針：微生物編」、日本食品衛生協会、１９９０年及び乳酸菌研究集談会編、「乳酸菌の科学と技術」、学会出版センター、１９９６年に記載されている方法に基づいて実施した。
１．乳酸菌株の分離
１）菌株の採取
健康な成人１０名から胃液を採取し、採取した胃液の１ｍｌに滅菌生理食塩水９ｍｌを添加し、試料液を調製した。調製した試料液を滅菌生理食塩水により１０倍から１０万倍に希釈し、希釈液を調製した。
１）菌株の採取
健康な成人１０名から胃液を採取し、採取した胃液の１ｍｌに滅菌生理食塩水９ｍｌを添加し、試料液を調製した。調製した試料液を滅菌生理食塩水により１０倍から１０万倍に希釈し、希釈液を調製した。
胃液原液、試料液及び各希釈液０．１ｍｌを、滅菌して調製したビーエル（ＢＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）、エムアールエス（ＭＲＳ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）を充填したシャーレの培地表面に塗布し、コンラージ棒によりまき広げ、各シャーレをアネロパック（三菱ガス化学社製）と共に嫌気培養用ジャー（三菱ガス化学社製。アネロパック角型ジャー標準型）に入れ、３７℃で４８時間培養した。培養終了後、出現したコロニーをエムアールエス（ＭＲＳ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）により３代継承培養し、純粋な菌株を分離した。
２）菌株の確認
分離した菌株の確認は前記文献記載の方法により、グラム染色性が陽性、細胞形態が桿菌、カタラーゼが陰性、運動性が陰性、芽胞形成が陰性及び乳酸産生能が陽性であることから、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する菌株であることを確認し、１５株を取得した。
分離した菌株の確認は前記文献記載の方法により、グラム染色性が陽性、細胞形態が桿菌、カタラーゼが陰性、運動性が陰性、芽胞形成が陰性及び乳酸産生能が陽性であることから、ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する菌株であることを確認し、１５株を取得した。
３）耐酸性菌株の分離
前記１５菌株を、それぞれ別個にエムアールエス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）に接種し、３７℃で４８時間培養した。得られた菌液０．１ｍｌを、ｐＨ２．０の０．１Ｍ塩酸・クエン酸ナトリウム緩衝液２ｍｌに添加し、３７℃で２時間保持し、のち残存菌数を測定し、最も残存菌数の多い１菌株を取得した。
前記１５菌株を、それぞれ別個にエムアールエス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）に接種し、３７℃で４８時間培養した。得られた菌液０．１ｍｌを、ｐＨ２．０の０．１Ｍ塩酸・クエン酸ナトリウム緩衝液２ｍｌに添加し、３７℃で２時間保持し、のち残存菌数を測定し、最も残存菌数の多い１菌株を取得した。
２．菌株の同定
前記取得した菌株の同定は、乳酸菌研究集談会編、「乳酸菌の科学と技術」、学会出版センター、１９９６年及びピーター・エッチ・エー・スニース（Ｐｅｔｅｒ Ｈ．Ａ．Ｓｎｅａｔｈ）編、「バージェイズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（ＢｅｒｇｅｙｓＭａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）」、第２巻、ウイリアムス・アンド・ウイルキンス社、１９８６年に記載されている方法に基づいて実施した。
前記取得した菌株の同定は、乳酸菌研究集談会編、「乳酸菌の科学と技術」、学会出版センター、１９９６年及びピーター・エッチ・エー・スニース（Ｐｅｔｅｒ Ｈ．Ａ．Ｓｎｅａｔｈ）編、「バージェイズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（ＢｅｒｇｅｙｓＭａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）」、第２巻、ウイリアムス・アンド・ウイルキンス社、１９８６年に記載されている方法に基づいて実施した。
３．試験結果
この試験の結果、前記取得した菌株の細菌学的性質は表１及び表２に示すとおりである。尚、表２は表１の続きである。表１及び表２から明らかなとおり、細菌学的性質からこの菌株は、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）であることが証明され、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８と命名した。この菌株を平成１８年１１月１４日付で独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託し、ＮＩＴＥ Ｐ−２７８の受託番号が付与された。
試験例２
この試験は、Ｎｏ．１０８８の塩基配列レベルでの特徴を調べるために行った。尚、Ｎｏ．１０８８の塩基配列の同定は、株式会社テクノスルガに依頼し、次の方法により同定した旨の報告を受けた。
この試験は、Ｎｏ．１０８８の塩基配列レベルでの特徴を調べるために行った。尚、Ｎｏ．１０８８の塩基配列の同定は、株式会社テクノスルガに依頼し、次の方法により同定した旨の報告を受けた。
１．供試菌体の調製
Ｎｏ．１０８８をエムアールエス・アガー（ＭＲＳ Ａｇａｒ）培地（オクソイド社製）により３７℃で２４時間嫌気培養し、供試菌体を調製した。
Ｎｏ．１０８８をエムアールエス・アガー（ＭＲＳ Ａｇａｒ）培地（オクソイド社製）により３７℃で２４時間嫌気培養し、供試菌体を調製した。
２．塩基配列の決定
塩基の抽出からサイクルシークエンスまでの操作は、各プロトコルに基づいて実施した。塩基の抽出はインスタ・ジーン・マトリックス（Ｉｎｓｔａ Ｇｅｎｅ Ｍａｔｒｉｘ）（バイオラド社製）を使用し、ポリメラーゼ連鎖反応にはプリメ・スター・クッチエス・デイーエヌエー・ポリメラーゼ（Ｐｒｉｍｅ Ｓｔａｒ ＨＳ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）（タカラバイオ社製）を使用し、サイクルシークエンスにはビッグ・ダイ・ターミネーター・ブイ３．１・サークル・シークエンシング・キット（Ｂｉｇ Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔａｒ Ｖ３．１ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ）（アプライド・バイオシステム社製）を使用した。また、使用したプライマーは、９Ｆ、３３９Ｆ、７８５Ｆ、１０９９Ｆ、５３６Ｒ、８０２Ｒ、１２４２Ｒ 及び１５１０Ｒ であり、配列の測定にはアビイ・プリズム３１００ジェネティック・アナライザー・システム（ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１００ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ）（アプライド・バイオシステム社製）を使用し、解析ソフトウェアにはオートアセンブラー（Ａｕｔｏ Ａｓｓｅｍｂｌｅｒ）（アプライド・バイオシステム社製）を使用し、相同性検索にはアポロン・デービー最新基準株データベース（テクノスルガ社製）及び国際塩基配列データベース（ジーン・バンク／ディーディービージェー／イーエムビーエル（Ｇｅｎ Ｂａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ））を使用した。
塩基の抽出からサイクルシークエンスまでの操作は、各プロトコルに基づいて実施した。塩基の抽出はインスタ・ジーン・マトリックス（Ｉｎｓｔａ Ｇｅｎｅ Ｍａｔｒｉｘ）（バイオラド社製）を使用し、ポリメラーゼ連鎖反応にはプリメ・スター・クッチエス・デイーエヌエー・ポリメラーゼ（Ｐｒｉｍｅ Ｓｔａｒ ＨＳ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）（タカラバイオ社製）を使用し、サイクルシークエンスにはビッグ・ダイ・ターミネーター・ブイ３．１・サークル・シークエンシング・キット（Ｂｉｇ Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔａｒ Ｖ３．１ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ）（アプライド・バイオシステム社製）を使用した。また、使用したプライマーは、９Ｆ、３３９Ｆ、７８５Ｆ、１０９９Ｆ、５３６Ｒ、８０２Ｒ、１２４２Ｒ 及び１５１０Ｒ であり、配列の測定にはアビイ・プリズム３１００ジェネティック・アナライザー・システム（ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ３１００ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ）（アプライド・バイオシステム社製）を使用し、解析ソフトウェアにはオートアセンブラー（Ａｕｔｏ Ａｓｓｅｍｂｌｅｒ）（アプライド・バイオシステム社製）を使用し、相同性検索にはアポロン・デービー最新基準株データベース（テクノスルガ社製）及び国際塩基配列データベース（ジーン・バンク／ディーディービージェー／イーエムビーエル（Ｇｅｎ Ｂａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ））を使用した。
３．試験結果
この試験の結果は、表３及び配列表に示すとおりである。表３から明らかなとおりＮｏ．１０８８はアポロン・デービー最新基準株データベース（テクノスルガ社製）のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株であるＡＴＣＣ３３２００株との相同率が９９．７％であり、国際塩基配列データベースの同菌の基準株であるＮＣＣ５３３株との相同率が１００％であった。従って、塩基配列からもＮｏ．１０８８がラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）であることが確認された。
全ての細菌は、１６Ｓｒ塩基配列中に共通な塩基配列が存在しているので、１６Ｓｒ塩基配列により細菌の分類群を推定することが可能である。しかしながら、乳酸菌に属する菌群の推定には１６Ｓｒ塩基配列のみならず、細菌の形態、生理学的性質、生化学的性質も重要であり、本発明の試験例で示したとおりである。
試験例３
この試験は、Ｎｏ．１０８８の耐酸性を調べるために行った。
１．試料の調製
Ｎｏ．１０８８、耐酸性が知られているラクトバシラス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＴＩ１０１２（ヒト糞便由来。東海大学医学部生体防御学保存株）、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＪＣＭ２０１２（理化学研究所リソースセンターから入手）、後記する方法により市販ヨーグルトから分離したラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＣ１、ラクトバシラス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＪＣＭ１１３２（理化学研究所リソースセンターから入手）及びラクトバシラス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＪＣＭ１１３１（理化学研究所リソースセンターから入手）を、それぞれ別個にエムアールエス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）に接種し、３７℃で１８時間培養し、試料の培養液を調製した。
この試験は、Ｎｏ．１０８８の耐酸性を調べるために行った。
１．試料の調製
Ｎｏ．１０８８、耐酸性が知られているラクトバシラス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＴＩ１０１２（ヒト糞便由来。東海大学医学部生体防御学保存株）、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＪＣＭ２０１２（理化学研究所リソースセンターから入手）、後記する方法により市販ヨーグルトから分離したラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＣ１、ラクトバシラス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＪＣＭ１１３２（理化学研究所リソースセンターから入手）及びラクトバシラス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＪＣＭ１１３１（理化学研究所リソースセンターから入手）を、それぞれ別個にエムアールエス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）に接種し、３７℃で１８時間培養し、試料の培養液を調製した。
尚、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＣ１は、この菌株を含有する市販のヨーグルト（ネスレ社製）から次のとおり分離した。ヨーグルトを滅菌生理食塩水により１０倍、１０３倍、１０５倍及び１０７倍に希釈し、各希釈液の０．１ｍｌをビーエル（ＢＬ）寒天平板培地（ニッスイ社製）に滴下し、コンラージ棒によりまき広げ、３７℃で２日間嫌気培養し、培養後に各コロニーを常法により鑑別し、桿菌状の乳酸菌を同菌と同定し、この菌株を試験に使用した。
２．試験方法
得られた６種の培養液０．１ｍｌを、それぞれ別個にｐＨ２．０、ｐＨ１．５及びｐＨ１．０の０．１Ｍ塩酸・クエン酸緩衝液に添加し、３７℃に保持し、１５分後、３０分後、６０分後及び９０分後に経時的な残存菌数を常法により測定した。
得られた６種の培養液０．１ｍｌを、それぞれ別個にｐＨ２．０、ｐＨ１．５及びｐＨ１．０の０．１Ｍ塩酸・クエン酸緩衝液に添加し、３７℃に保持し、１５分後、３０分後、６０分後及び９０分後に経時的な残存菌数を常法により測定した。
３．試験結果
この試験結果は表４に示すとおりである。尚、表４のＮＤは、残存菌数が検出されなかったことを示す。表４から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８は、最も高い残存菌数を示し、ｐＨ１．０において９０分間保持した場合にも生存し、格段に耐酸性に優れた菌株であることが判明した。
試験例４
この試験は、Ｎｏ．１０８８が前記試験例３において使用したラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＣ１と異なる菌株であることを立証するために行った。
１．試料の調製
１）菌株の調製
前記試験例３において使用した両菌株をそれぞれエムアールエス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）に接種し、３７℃で１８時間培養し、培養液から各菌株を集菌し、リン酸緩衝化生理食塩水により３回洗浄し、各菌株を調製した。
この試験は、Ｎｏ．１０８８が前記試験例３において使用したラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＬＣ１と異なる菌株であることを立証するために行った。
１．試料の調製
１）菌株の調製
前記試験例３において使用した両菌株をそれぞれエムアールエス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）に接種し、３７℃で１８時間培養し、培養液から各菌株を集菌し、リン酸緩衝化生理食塩水により３回洗浄し、各菌株を調製した。
２）デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の調製
各菌株をそれぞれリン酸緩衝化生理食塩水に懸濁し、各懸濁液からウイザード・ジェノミック・ディーエヌエー・ピューリフィケーション・キット（Ｗｉｚａｒｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ）（プロメガ社製）によりＤＮＡを抽出した。尚、抽出の方法は前記キットに添付されている方法に従った。
各菌株をそれぞれリン酸緩衝化生理食塩水に懸濁し、各懸濁液からウイザード・ジェノミック・ディーエヌエー・ピューリフィケーション・キット（Ｗｉｚａｒｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ）（プロメガ社製）によりＤＮＡを抽出した。尚、抽出の方法は前記キットに添付されている方法に従った。
３）使用したプライマー配列
表５に示した６種類のプライマーを使用した。
２．試験方法
表６に示した反応液を使用し、表７に示した条件により反応サイクルを行い、反応終了後に反応液５μｌを１．４％アガロースゲルを使用し、常法により電気泳動を行った。
３．試験結果
この試験の結果は、図１に示すとおりである。図中Ｍ、Ａ及びＢは、それぞれ１００ｂラターマーカー、ＬＣ１菌株及び本発明のＮｏ．１０８８菌株を示す。図１から明らかなとおり、Ｐ−０７、Ｐ−０９及びＰ−３０の電気泳動パターンには明瞭な相違が認められ、ＬＣ１菌株及び本発明のＮｏ．１０８８菌株は、いずれもラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）に属するが、異なった菌株であることが立証された。
この試験の結果は、図１に示すとおりである。図中Ｍ、Ａ及びＢは、それぞれ１００ｂラターマーカー、ＬＣ１菌株及び本発明のＮｏ．１０８８菌株を示す。図１から明らかなとおり、Ｐ−０７、Ｐ−０９及びＰ−３０の電気泳動パターンには明瞭な相違が認められ、ＬＣ１菌株及び本発明のＮｏ．１０８８菌株は、いずれもラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）に属するが、異なった菌株であることが立証された。
試験例５
この試験は、Ｎｏ．１０８８のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）に対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
試験菌株であるＮｏ．１０８８及びラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株であるＪＣＭ２０１２（理化学研究所リソースセンターから入手）を、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０（ヒト慢性胃炎患者から分離。東海大学医学部生体防御学保存株）と共に、ビー・エッチ・アイ・ブロス（ＢＨＩ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）１００ｍｌに５％の馬血清を添加した液体培地に、液体培地１ｍｌ当たりラクトバシラス属の２菌株を各１．０×１０６及びヘリコバクター・ピロリを１．０×１０７の割合で接種し、３７℃の微好気培養条件下で培養し、培養開始後６時間、１２時間、２４時間及び４８時間に経時的に培地を採取し、試料を調製した。尚、前記両菌を添加しない液体培地そのものを対照試料とした。
この試験は、Ｎｏ．１０８８のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）に対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
試験菌株であるＮｏ．１０８８及びラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株であるＪＣＭ２０１２（理化学研究所リソースセンターから入手）を、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０（ヒト慢性胃炎患者から分離。東海大学医学部生体防御学保存株）と共に、ビー・エッチ・アイ・ブロス（ＢＨＩ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）１００ｍｌに５％の馬血清を添加した液体培地に、液体培地１ｍｌ当たりラクトバシラス属の２菌株を各１．０×１０６及びヘリコバクター・ピロリを１．０×１０７の割合で接種し、３７℃の微好気培養条件下で培養し、培養開始後６時間、１２時間、２４時間及び４８時間に経時的に培地を採取し、試料を調製した。尚、前記両菌を添加しない液体培地そのものを対照試料とした。
２．試験方法
採取した試料を次の培地により、アネロパック角型ジャー（三菱ガス化学社製）にアネロパック・ヘリコ（三菱ガス化学社製）を入れ、３７℃で４日間微好気培養し、ヘリコバクター・ピロリの菌数を測定した。菌数測定に使用した培地は、ビー・エチ・アイ（ＢＨＩ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）１０００ｍｌに馬血清７％、テトラゾリウム（ジグマ社製）２５ｍｇ、ポリミキシン・ビー（ジグマ社製）２５００単位、バンコマイシン（ジグマ社製）１０ｍｇ、バシトラシン（ジグマ社製）５ｍｇ及びアンフォテリシン・ビー（ジグマ社製）２ｍｇの割合で添加した。
採取した試料を次の培地により、アネロパック角型ジャー（三菱ガス化学社製）にアネロパック・ヘリコ（三菱ガス化学社製）を入れ、３７℃で４日間微好気培養し、ヘリコバクター・ピロリの菌数を測定した。菌数測定に使用した培地は、ビー・エチ・アイ（ＢＨＩ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）１０００ｍｌに馬血清７％、テトラゾリウム（ジグマ社製）２５ｍｇ、ポリミキシン・ビー（ジグマ社製）２５００単位、バンコマイシン（ジグマ社製）１０ｍｇ、バシトラシン（ジグマ社製）５ｍｇ及びアンフォテリシン・ビー（ジグマ社製）２ｍｇの割合で添加した。
３．試験結果
この試験の結果は図２に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図２から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０３／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０４．２／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株よりも１０倍以上ヘリコバクター・ピロリ菌を抑制することが認められた。
この試験の結果は図２に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図２から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０３／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０４．２／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株よりも１０倍以上ヘリコバクター・ピロリ菌を抑制することが認められた。
試験例６
この試験は、腸管出血性大腸菌、エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ−１５７に対するＮｏ．１０８８の抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
ガム（ＧＡＭ）ブイヨン（ニッスイ製薬社製）にブドウ糖０．７％を添加した液体培地を使用したことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ−１５７は、臨床分離株で東海大学医学部生体防御学保存株である。
この試験は、腸管出血性大腸菌、エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ−１５７に対するＮｏ．１０８８の抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
ガム（ＧＡＭ）ブイヨン（ニッスイ製薬社製）にブドウ糖０．７％を添加した液体培地を使用したことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ−１５７は、臨床分離株で東海大学医学部生体防御学保存株である。
２．試験方法
エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ−１５７の培養にディー・エッチ・エル（ＤＨＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）を使用したことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。
エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ−１５７の培養にディー・エッチ・エル（ＤＨＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）を使用したことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。
３．試験結果
この試験の結果は図３に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図３から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０３．８／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０４．９／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基凖株よりも１０倍以上エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ−１５７を抑制することが認められた。
この試験の結果は図３に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図３から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０３．８／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、２４時間後のヘリコバクター・ピロリの菌数が１．０×１０４．９／ｍｌ、４８時間後には検出限界以下であった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基凖株よりも１０倍以上エッシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｏ−１５７を抑制することが認められた。
試験例７
この試験は、Ｎｏ．１０８８のサルモネラ菌に対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｈｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＬＴ２）は、臨床分離株で東海大学医学部生体防御学保存株である。
この試験は、Ｎｏ．１０８８のサルモネラ菌に対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｈｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＬＴ２）は、臨床分離株で東海大学医学部生体防御学保存株である。
２．試験方法
前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。
前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。
３．試験結果
この試験の結果は図４に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図４から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では１２時間後にはサルモネラ菌の検出限界以下であった。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、１２時間後のサルモネラ菌の菌数が１．０×１０３／ｍｌであった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株よりも１０００倍以上サルモネラ菌を抑制することが認められた。
この試験の結果は図４に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図４から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では１２時間後にはサルモネラ菌の検出限界以下であった。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、１２時間後のサルモネラ菌の菌数が１．０×１０３／ｍｌであった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株よりも１０００倍以上サルモネラ菌を抑制することが認められた。
試験例８
この試験は、Ｎｏ．１０８８のクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
嫌気培養を行ったことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６は、理化学研究所リソースセンターから入手した。
この試験は、Ｎｏ．１０８８のクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
嫌気培養を行ったことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６は、理化学研究所リソースセンターから入手した。
２．試験方法
クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の菌数測定のための培養にシーシーエフエー（ＣＣＦＡ）寒天培地を使用したことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。
クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の菌数測定のための培養にシーシーエフエー（ＣＣＦＡ）寒天培地を使用したことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。
３．試験結果
この試験の結果は図５に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図５から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では４８時間後にはクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６が１．０×１０３／ｍｌ検出された。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、４８時間後のクロストリジウム・ティフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６の菌数が１．０×１０３．６／ｍｌであった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株よりもクロストリジウム・ティフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６を抑制することが認められた。
この試験の結果は図５に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図５から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では４８時間後にはクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６が１．０×１０３／ｍｌ検出された。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では、４８時間後のクロストリジウム・ティフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６の菌数が１．０×１０３．６／ｍｌであった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株よりもクロストリジウム・ティフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ＪＣＭ１２９６を抑制することが認められた。
試験例９
この試験は、Ｎｏ．１０８８のカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する増殖抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
嫌気培養を行ったことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１は、臨床分離株で東海大学医学部生体防御学保存株である。
この試験は、Ｎｏ．１０８８のカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する増殖抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
嫌気培養を行ったことを除き、前記試験例５と同様の方法により試料及び対照試料を調製した。尚、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１は、臨床分離株で東海大学医学部生体防御学保存株である。
２．試験方法
カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１の菌数測定のための同菌の接種菌数を１．０×１０６／ｍｌにしたこと及び菌数測定のための培地を次のとおり変更したこと除き、前記試験例４と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。菌数測定のための培地は、ポテトデキストロース寒天培地（ニッスイ製薬社製）を滅菌後、１０％酒石酸を培地１１当たり１．４ｍｌ添加し、ｐＨを３．５に調整したものを使用した。
カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１の菌数測定のための同菌の接種菌数を１．０×１０６／ｍｌにしたこと及び菌数測定のための培地を次のとおり変更したこと除き、前記試験例４と同様の方法により試料及び対照試料の菌数を測定した。菌数測定のための培地は、ポテトデキストロース寒天培地（ニッスイ製薬社製）を滅菌後、１０％酒石酸を培地１１当たり１．４ｍｌ添加し、ｐＨを３．５に調整したものを使用した。
３．試験結果
この試験の結果は図６に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図６から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では４８時間後にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１の菌数が２×１０５／ｍｌ検出された。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では４８時間後にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１の菌数が５×１０５／ｍｌであった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は、公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）基準株よりもカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１を抑制することが認められた。
この試験の結果は図６に示すとおりである。図中●は対照試料、△はＮｏ．１０８８、□はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株を示す。図６から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８添加試料では４８時間後にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１の菌数が２×１０５／ｍｌ検出された。一方、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の基準株添加試料では４８時間後にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１の菌数が５×１０５／ｍｌであった。この試験結果から、Ｎｏ．１０８８は、公知のラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）基準株よりもカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）ＴＩ３００１を抑制することが認められた。
試験例１０
この試験は、Ｎｏ．１０８８のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）感染マウスに対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
４週齢の無菌マウス（東海大学医学部生体防御学繁殖マウス）１５匹に、試験例４と同一の方法により培養したヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０（臨床分離株。東海大学医学部生体防御学保存株）を３日間１．０×１０９／０．５ｍｌを経口投与し、常法により飼育した。４週間飼育後、５匹のマウスを屠殺し、胃組織中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の菌数を、次の試験方法に記載の方法により測定した結果、いずれのマウスも胃組織１ｇ当たり１０４〜１０５のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の感染が確認され、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０感染マウスを作成した。
この試験は、Ｎｏ．１０８８のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）感染マウスに対する抑制効果を調べるために行った。
１．試料の調製
４週齢の無菌マウス（東海大学医学部生体防御学繁殖マウス）１５匹に、試験例４と同一の方法により培養したヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０（臨床分離株。東海大学医学部生体防御学保存株）を３日間１．０×１０９／０．５ｍｌを経口投与し、常法により飼育した。４週間飼育後、５匹のマウスを屠殺し、胃組織中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の菌数を、次の試験方法に記載の方法により測定した結果、いずれのマウスも胃組織１ｇ当たり１０４〜１０５のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の感染が確認され、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０感染マウスを作成した。
２．試験方法
前記ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０感染マウス１０匹に、試験例４と同一の方法により調製したＮｏ．１０８８ １．０×１０９を１回経口投与し、常法により飼育した。Ｎｏ．１０８８投与、２週間後及び４週間後にそれぞれ感染マウス５匹を屠殺し、胃組織中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の菌数を次の方法により測定した。尚、Ｎｏ．１０８８を投与しない１０匹を対照マウス試料とした。
前記ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０感染マウス１０匹に、試験例４と同一の方法により調製したＮｏ．１０８８ １．０×１０９を１回経口投与し、常法により飼育した。Ｎｏ．１０８８投与、２週間後及び４週間後にそれぞれ感染マウス５匹を屠殺し、胃組織中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の菌数を次の方法により測定した。尚、Ｎｏ．１０８８を投与しない１０匹を対照マウス試料とした。
胃組織中のヘリコバクター・ピロリ菌数の測定は、マウスをエーテルで麻酔し、胃を摘出し、胃の内容物を除去し、滅菌したリン酸緩衝化生理食塩水を添加し、ガラスホモジナイザー（旭テクノグラス社製。５ｍｌ容）で破砕し、試料液を調製した。この試料液を１
広げ、３７℃で４〜５日微好気培養し、出現したコロニー数に希釈倍率を乗じて菌数を測定した。尚、この試験を２回実施した。
３．試験結果
この試験の結果は、図７に示すとおりである。図中黒の表示はＮｏ．１０８８を投与しない対照群の平均値、白の表示はＮｏ．１０８８を投与した群の平均値を示し、両群の有意差検定（Ｔ検定）の結果をｐ＜０．０５と表示している。図７から明らかなとおりＮｏ．１０８８投与しない対照群では２回の試験とも胃組織中に１．０×１０４．７／ｇのヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０が存在していたが、Ｎｏ．１０８８を投与した試料群では胃組織中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０が１．０×１０２．４／ｇ（第１回）、１．０×１０３／ｇ（第２回）であり、対照群よりも有意に減少していたことが認められた。従って、Ｎｏ．１０８８の経口投与がヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の抑制に有効であることが証明された。
この試験の結果は、図７に示すとおりである。図中黒の表示はＮｏ．１０８８を投与しない対照群の平均値、白の表示はＮｏ．１０８８を投与した群の平均値を示し、両群の有意差検定（Ｔ検定）の結果をｐ＜０．０５と表示している。図７から明らかなとおりＮｏ．１０８８投与しない対照群では２回の試験とも胃組織中に１．０×１０４．７／ｇのヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０が存在していたが、Ｎｏ．１０８８を投与した試料群では胃組織中のヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０が１．０×１０２．４／ｇ（第１回）、１．０×１０３／ｇ（第２回）であり、対照群よりも有意に減少していたことが認められた。従って、Ｎｏ．１０８８の経口投与がヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）Ｎｏ．１３０の抑制に有効であることが証明された。
試験例１１
この試験は、Ｎｏ．１０８８の腸内菌叢への影響を調べるために行った。
１．試料の調製
試験例１０と同一の無菌マウス１０匹に、ヒト成人の糞便を１００倍に希釈した希釈液を経口投与し、常法により４週間飼育し、ヒトフローラ・マウスを調製した。
この試験は、Ｎｏ．１０８８の腸内菌叢への影響を調べるために行った。
１．試料の調製
試験例１０と同一の無菌マウス１０匹に、ヒト成人の糞便を１００倍に希釈した希釈液を経口投与し、常法により４週間飼育し、ヒトフローラ・マウスを調製した。
２．試験方法
前記ヒトフローラ・マウス１０匹に、Ｎｏ．１０８８をエム・アール・エス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）により３７℃で２４時間培養した培養液（２．０×１０９／ｍｌの菌数）を１回０．５ｍｌ連日経口投与して常法により飼育し、４週間後の各マウスの糞便中の菌叢を光岡の方法（光岡知足著、「腸内菌の世界：嫌気性菌の分離と同定」、叢文社、１９８０年）により次のとおり検出した。尚、残りのヒトフローラ・マウス５匹には何も投与せず、常法により４週間飼育し、対照群とした。
前記ヒトフローラ・マウス１０匹に、Ｎｏ．１０８８をエム・アール・エス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）により３７℃で２４時間培養した培養液（２．０×１０９／ｍｌの菌数）を１回０．５ｍｌ連日経口投与して常法により飼育し、４週間後の各マウスの糞便中の菌叢を光岡の方法（光岡知足著、「腸内菌の世界：嫌気性菌の分離と同定」、叢文社、１９８０年）により次のとおり検出した。尚、残りのヒトフローラ・マウス５匹には何も投与せず、常法により４週間飼育し、対照群とした。
次の培地を使用した。尚、メーカー名の記載のない培地は、本発明者が、前記光岡の方法に基づいて調製した。
１）非選択培地
ａ．嫌気培養用
イー・ジー（ＥＧ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）、ビー・エル（ＢＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）
ｂ．好気培養用
トリプト・ソイ血液寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）
１）非選択培地
ａ．嫌気培養用
イー・ジー（ＥＧ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）、ビー・エル（ＢＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）
ｂ．好気培養用
トリプト・ソイ血液寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）
２）選択培地
ａ．嫌気培養用
＊ビー・エス（ＢＳ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）：ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）選択培地
＊イー・エス（ＥＳ）寒天培地：ユーバクテイリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）選択培地
＊エヌ・ビー・ジー・ティー（ＮＢＧＴ）寒天培地：バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）選択培地
＊変法ブイ・エス（ＶＳ）寒天培地：ベイロネラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ）選択培地
＊エヌ・エヌ（ＮＮ）寒天培地：クロストリジウム・パーフリンゲス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｓ）選択培地
＊シー・シー・エフ・エー（ＣＣＦＡ）寒天培地（オクソイド社製）：クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）選択培地
ａ．嫌気培養用
＊ビー・エス（ＢＳ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）：ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）選択培地
＊イー・エス（ＥＳ）寒天培地：ユーバクテイリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）選択培地
＊エヌ・ビー・ジー・ティー（ＮＢＧＴ）寒天培地：バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）選択培地
＊変法ブイ・エス（ＶＳ）寒天培地：ベイロネラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ）選択培地
＊エヌ・エヌ（ＮＮ）寒天培地：クロストリジウム・パーフリンゲス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｓ）選択培地
＊シー・シー・エフ・エー（ＣＣＦＡ）寒天培地（オクソイド社製）：クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）選択培地
ｂ．好気培養用
＊変法エル・ビー・エス（ＬＢＳ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）：ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）選択培地
＊ディー・エッチ・エル（ＤＨＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）：エンテロバクテリア（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）選択培地
＊ティー・エー・ティー・エー・シー（ＴＡＴＡＣ）寒天培地：エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）選択培地
＊ピー・イー・イー・エス（ＰＥＥＳ）寒天培地：スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）選択培地
＊ポテト・デキストロース寒天培地（ニッスイ製薬社製）：酵母選択培地
＊エヌ・エー・シー（ＮＡＣ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）：緑膿菌選択培地
＊変法エル・ビー・エス（ＬＢＳ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製）：ラクトバシラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）選択培地
＊ディー・エッチ・エル（ＤＨＬ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）：エンテロバクテリア（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）選択培地
＊ティー・エー・ティー・エー・シー（ＴＡＴＡＣ）寒天培地：エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）選択培地
＊ピー・イー・イー・エス（ＰＥＥＳ）寒天培地：スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）選択培地
＊ポテト・デキストロース寒天培地（ニッスイ製薬社製）：酵母選択培地
＊エヌ・エー・シー（ＮＡＣ）寒天培地（ニッスイ製薬社製）：緑膿菌選択培地
前記各平板培地に希釈した試料液を滴下し、３７℃で３日間好気培養又は嫌気ジャー（三菱化学社製。角型ジャー標凖型）にアネロパック（三菱化学社製）を入れて嫌気培養した。培養後、出現した集落を計測し、のちグラム染色し、細胞の形態学的観察及び集落の好気・嫌気培養条件下の育成の有無から細菌群を決定した。
３．試験結果
この試験の結果は、図８に示すとおりである。図中、両群の有意差検定（Ｔ検定）の結果をｐ＜０．０５と表示している。図８から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８投与群では糞便１ｇから１．０×１０７〜１０８のＮｏ．１０８８が検出された。また、善玉菌と言われているビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）が対照群よりも有意に増加し、腐敗菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）が対照群よりも有意に減少したことが認められた。従って、Ｎｏ．１０８８は、ヒトの腸内菌叢に極めて有利に作用することが確認された。
この試験の結果は、図８に示すとおりである。図中、両群の有意差検定（Ｔ検定）の結果をｐ＜０．０５と表示している。図８から明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８投与群では糞便１ｇから１．０×１０７〜１０８のＮｏ．１０８８が検出された。また、善玉菌と言われているビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）が対照群よりも有意に増加し、腐敗菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）が対照群よりも有意に減少したことが認められた。従って、Ｎｏ．１０８８は、ヒトの腸内菌叢に極めて有利に作用することが確認された。
以上の試験結果を総括すれば、図２、図３、図４、図５及び図６に示すインビトロの試験において明らかなとおり、Ｎｏ．１０８８は多くの病原菌に対して格段の抑制効果を有し、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）基準株ＪＣＭ２０１２よりも、その抑制効果は顕著であった。更に、動物実験においても図７及び図８に示すとおり、ヘリコバクター・ピロリ感染に対する抑制効果、整腸作用を有するビフィズス菌の増加、腐敗菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）の抑制が実証され、Ｎｏ．１０８８はプロバイオティクスとして格段に有効な菌株であることが立証された。
本発明は、ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存し得る強い耐酸性を有すること、短時間で増殖すること、及び病原菌の増殖を抑制すること、の性質を有することを特徴とする新規な乳酸菌、並びに前記新規な乳酸菌を使用し、加工することを特徴とする各種製品に関するものであり、本発明が奏する効果は次のとおりである。
１）優れた耐酸性を有するので、服用又は摂取したとき胃酸による死滅が少なく、大量の 菌数を腸に到達させ、プロバイオティクス効果を高める新規な乳酸菌を提供する。
２）この新規な乳酸菌は、発酵製品、健康食品、機能性食品、医薬品等の広範囲な製品に 利用することが可能である。
３）この新規な乳酸菌は、プロバイオティクスとして広範囲の病原菌の抑制効果を有し、 特に胃内のヘリコバクター・ピロリ感染に対して顕著な抑制効果を有する。
４）この新規な乳酸菌は、ビフィズス菌等の有用細菌を増加させ、腐敗菌であるクロスト リジウムを減少させる効果を有する。
１）優れた耐酸性を有するので、服用又は摂取したとき胃酸による死滅が少なく、大量の 菌数を腸に到達させ、プロバイオティクス効果を高める新規な乳酸菌を提供する。
２）この新規な乳酸菌は、発酵製品、健康食品、機能性食品、医薬品等の広範囲な製品に 利用することが可能である。
３）この新規な乳酸菌は、プロバイオティクスとして広範囲の病原菌の抑制効果を有し、 特に胃内のヘリコバクター・ピロリ感染に対して顕著な抑制効果を有する。
４）この新規な乳酸菌は、ビフィズス菌等の有用細菌を増加させ、腐敗菌であるクロスト リジウムを減少させる効果を有する。
次に本発明を実施するための最良の形態について、実施例を記載するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
エムアールエス・ブロス（ＭＲＳ ｂｒｏｔｈ）（ベクトン・デッキンソン社製）１０１にＮｏ．１０８８を生菌数濃度１×１０７／ｍｌの割合で接種し、３７℃で１５時間培養し、培養終了後、遠心分離により集菌し、集菌した菌体を濃度０．８５％の滅菌食塩水に懸濁し、遠心分離により洗浄した菌体を集菌し、１０％の脱脂粉乳及び１％のグルタミン酸ナトリウムを含有する溶液に洗浄した菌体を懸濁し、常法により凍結乾燥し、約５０ｇの乾燥菌末を製造した。得られた乾燥菌末の生菌数を前記試験例１と同一の方法により測定した結果２．０×１０１１／ｇであった。
前記Ｎｏ．１０８８の乾燥菌体１０ｇを水分３％以下の市販デキストリン（松谷化学社製。パインデックス）４．９９ｋｇに倍散し、乳酸菌末約５ｋｇを製造した。得られた乳酸菌末の生菌数を前記試験例１と同一の方法により測定した結果４．０×１０８／ｇであった。
殺菌した原料乳１０ｋｇに、スターターとしてＮｏ．１０８８、ラクトバシラス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（市販ヨーグルトから分離した菌株）及びストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（市販ヨーグルトから分離した菌株）の等量混合菌末を２％の割合で添加したことを除き、常法のタンク発酵タイプによりタンク内で発酵させ、約１０ｋｇのヨーグルトを製造した。
実施例１で得られたＮｏ．１０８８の乾燥菌体２．０ｋｇを、約０．３ｇずつそのまま直接打錠し、約６．５００個の錠剤を製造した。
以上記載したとおり、Ｎｏ．１０８８は、優れた耐酸性を有するので、発酵製品、健康食品、機能性食品、医薬品等の広範囲な製品に利用することが可能である。
Claims (3)
- ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、次のａ）乃至ｄ）
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有することを特徴とするラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）。 - ラクトバシラス属に属する乳酸菌であって、次のａ）乃至ｄ）
ａ）ｐＨ１．０の緩衝液において少なくとも６０分間生存する強い耐酸性を有すること、
ｂ）短時間で増殖すること、
ｃ）病原菌を抑制すること、及び
ｄ）有用な細菌の増殖を促進すること、
の性質を有することを特徴とするラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）を使用し、加工したことを特徴とする各種製品。 - 加工が、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）による発酵、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）の混合、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）の粉末化又はラクトバシラス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）Ｎｏ．１０８８（受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−２７８）の錠剤化である請求項２に記載の各種製品。
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