JP4456321B2 - Lipase inhibitor - Google Patents

Description

（式中、Ｒ１は、水素原子又は水酸基が保護されていてもよい糖残基を表わし、Ｒ２は、水素原子又は水酸基を表わす。）
で示される化合物、下記式（２）
【００１１】
【化４】

（式中、Ｒ_３は、水素原子、−_αAra²−_αRha³−_βXyl、−_αAra²−_αRha、又は−_αAra²−_αRha³ −_αAraを表わし、Ｒ_４は、水素原子又は水酸基を表わす。）ここで、−Araは、Ｌ-アラビノピラノシル基、Rhaは、Ｌ-ラムノピラノシル基、Xylは、Ｄ-キシロピラノシル基を表わし、α、βは、それぞれ糖の結合のタイプを、上付きの２、３の数字は、結合している糖類の水酸基の位置を表わす。例えば、−_αAra²−_αRha³−_βXylは、β−Ｄ−キシロピラノシル（１−３）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１−２）−α−Ｌ−アラビノピラノシル基を表わす。）
で示される化合物から成る群より選ばれる少なくとも１種を含有する、医薬、リパーゼ阻害剤、脂質吸収阻害剤、抗肥満剤、高脂血症改善剤、ニキビ用皮膚改善剤、更には食品、化粧料に関する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
式（１）で示される化合物において、Ｒ_１は、水素原子又は水酸基が保護されていてもよい糖残基を表し、Ｒ_２は、水素原子又は水酸基を表わす。糖残基としては、二糖類糖残基又は三糖類残基が好ましく、このような糖残基を構成する糖残基としては、具体的には、アラビノピラノシル基、ラムノピラノシル基及びキシロピラノシル基を挙げることができる。また、糖残基における水酸基の保護基としては、メチル基、アセチル基などを挙げることができる。
【００１３】
前記式（１）又は式（２）で示される化合物の中、Ｒ_１又はＲ_３が−_αAra²−_αRha³−_βXyl、Ｒ_２又はＲ_４が−OHである化合物は、サピンドシドB（Sapindoside B）であり、Ｒ_１又はＲ_３が−_αAra²−_αRha³ −_αAra残基、Ｒ_２又はＲ_４が−OHである化合物は、サポニンA（Saponin A）である。Ｒ_１又はＲ_３が−_αAra²−_αRha、Ｒ_２又はＲ_４が−OHである化合物は、カロパナックス−サポニンB（Kalopanax-saponin B）であり、Ｒ_１又はＲ_３が−_αAra²−_αRha³−_βXyl、Ｒ_２又はＲ_４が−Hである化合物は、CP₃、Ｒ_１又はＲ_３が−H、Ｒ_２又はＲ_４が−Hである化合物は、オレアノイック酸（Oleanolic acid）である。Ｒ_１又はＲ_３が−H、Ｒ_２又はＲ_４が−OH残基である化合物は、ヘデラゲニン（Hederagenin）である。
【００１４】
これらの化合物は、ウコギ（Acanthopanax sieboldianus）を適当な溶媒で抽出し、その抽出溶媒より精製して得ることができる。抽出溶媒としては、水又は水と混和する有機溶媒の混合液、メタノール、エーテル、アセトン、アセトニトリル、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロロホルムなどを用いることができる。好適な例としては0〜30％（v/v）の含水エタノールが挙げられる。原料と抽出溶媒の割合は、1：0.5〜1：10（重量比）が望ましく、また抽出は常温、加圧、攪拌下で1〜10時間程度行うことが望ましい。ろ過により抽出液を得ることができるが、その際必要があればパーライトなどのろ過助剤を用いることもできる。
【００１５】
こうして得られた抽出液は、減圧濃縮、凍結乾燥など通常の方法により濃縮する。本発明の化合物は水溶性であるが酢酸エチルに抽出される性質を有することから、この様な性質を利用して、次のような精製を行うことができる。抽出溶媒が水などの場合、濃縮する前にエーテル、石油エーテル、ヘキサン、クロロホルムなどの酢酸エチルより脂溶性の高い溶媒で洗浄し、余剰物を除くこともできる。抽出溶媒に有機溶媒が含まれる場合は、濃縮後、残査を水に転溶し、エーテル、石油エーテル、ヘキサン、クロロホルムなどの酢酸エチルより脂溶性の高い溶媒で洗浄し、余剰物を除くことが望ましい。
【００１６】
洗浄後の水溶液は減圧濃縮、凍結乾燥など通常の方法により濃縮し、そのまま分画精製に供するか、水溶液を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル画分を濃縮後、分画精製することにより、本発明の化合物を得ることもできる。分画精製の方法としては、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーなど通常の方法を用いることができるが、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）を用いた逆相クロマトグラフィーで分画することが望ましい。その際には、精製した画分のリパーゼ阻害活性を指標にして精製を進めることが望ましい。精製した画分は減圧濃縮、凍結乾燥など通常の方法により濃縮し、本発明の化合物を得ることができる。
【００１７】
また、H.SAWADAらの方法（Phytochemistry，34，1117-1121（1993））に従って、本発明の化合物を得ることもできる。
【００１８】
すなわち、乾燥させたウコギ（Acanthopanax sieboldianus）を熱メタノールを用いて抽出する。エバポレーターを用いてメタノールを留去させる。残った抽出物を蒸留水を用いて懸濁させた後に、ヘキサンを用いて脱脂する。その後水層を高極性多孔質樹脂DIAION HP-20（三菱化学社製）に供し、蒸留水、メタノール、3-ペンタノンを用いて順次溶出させ、これにより得られたメタノール画分を減圧濃縮、凍結乾燥など通常の方法により濃縮することにより、本発明の化合物を得ることができる。
【００１９】
さらに、本発明の化合物の一つであるオレアノイック酸（Oleanolic acid）及びヘデラゲニン（Hederagenin）は、サピンドシドB（Sapindoside B）、サポニンA（Saponin A）、カロパナックス−サポニンB（Kalopanax-saponin B）、CP₃から、常法に従って塩酸や硫酸などの酸を用いて酸加水分解することにより、容易に得ることができる。
【００２０】
これらの本発明の化合物は、これらを含有する抽出物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなど慣用の精製手段を用いて精製し、リパーゼ阻害剤、脂質吸収阻害剤、抗肥満剤、高脂血症改善剤、ニキビ用皮膚改善剤として用いても良い。
【００２１】
これらの本発明の化合物に、リパーゼ阻害活性のような生理活性を有することは、従来から全く知られておらず、本発明により得られた新知見である。
【００２２】
本発明における化合物は、卓越したリパーゼ阻害活性を有しており、これらを含有する食品、医薬及び化粧料として、さらに、抗肥満剤、高脂血症改善剤、ニキビ用皮膚改善剤として使用可能である。
【００２３】
本発明の化合物を、リパーゼ阻害剤、抗肥満剤、高脂血症改善剤、ニキビ用皮膚改善剤及びこれらを含有する食品、医薬及び化粧料として製造することができる。
【００２４】
医薬としての適用方法としては、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００２５】
食品としては、そのまま、又は種々の栄養成分を加えて、若しくは飲食品中に含有せしめて、高脂血症あるいは肥満の治療及び予防に有用な保健用食品又は食品素材として食される。例えば、上述した適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。
【００２６】
本発明の化合物の有効投与量は、患者の年齢、体重、症状、患者の程度、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の阻害活性の強さなどにより、適宜選択・決定されるが、例えば、経口投与の場合、一般に１日当たり0.001〜1000ｍg/kg体重程度、サピンドサイドB（Sapindoside B）の場合、１日当たり5〜300mg/kg体重程度とされ、１日に数回に分けて投与してもよい。
【００２７】
また、本発明の化合物を含有せしめて、化粧料または化粧料素材として使用する場合、例えば、サポニンA（Saponin A）を小麦胚芽油あるいはオリーブ油に添加してリパーゼ阻害剤含有組成物とし、これを化粧料素材として使用することができる。本発明の化合物の添加量は、特に限定されるものではないが、一例としてあげると、小麦胚芽油あるいはオリーブ油の重量に対して0.1質量％以上60質量％以下、好ましくは、0.5質量％以上50質量％以下が適当である。
【００２８】
さらに、直接、化粧料成分として使用し、リパーゼ阻害作用を有する化粧料を製造することができる。化粧料としては特に限定されるものではないが、機能面からは、例えば乳液、化粧液、フェイスクリーム、ハンドクリーム、ローション、エッセンス、シャンプー、リンスなどが好ましい。
【００２９】
このような化粧料は、常法に従って製造することができる。化粧料における本発明の化合物の添加量は、特に限定されるものではないが、一例としてあげると、化粧料全重量の0.01質量％以上20質量％以下程度が適当である。
【００３０】
本発明の化合物は、天然物であるためその毒性は低く、例えば、カロパナックス−サポニンB（Kalopanax-saponin B）を毎日1000mg/kg、100日間という長期間に亘ってラットに経口投与しても、死亡例は認められず、体重変化も観察されなかった。
【００３１】
【実施例】
以下に実施例を挙げて、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
【００３２】
［製造例］各種サポニンの抽出
サポニンの抽出は、H.SAWADAらの方法（Phytochemistry，34，1117-1121（1993））に従って行った。
【００３３】
すなわち、乾燥させたウコギ（Acanthopanax sieboldianus）の葉1kgを熱メタノール3Lを用いて抽出した。得られた抽出液をエバポレーターを用いてメタノールを留去させ、残った抽出物235gを蒸留水27.2kgを用いて懸濁させた後に、同量のヘキサン27.2kgを用いて脱脂した。その後水層を高極性多孔質樹脂DIAION HP-20（三菱化学社製）（カラムサイズ：Φ2cm×20cm）に供し、蒸留水（99.7g）、メタノール（75.1g）、3-ペンタノン（3.41g）を用いて順次溶出させた。これにより得られたメタノール溶出画分（10g）をカラム担体としてシリカゲルを用いたケイ酸カラムクロマトグラフィーに供し、溶出溶媒としてクロロホルム：メタノール：水＝10：5：1（v/v/v）を用いて溶出することにより、7つの画分（以下、Fr.1〜Fr.7と名付ける）を得た。得られた各フラクションの重量はそれぞれ、Fr.1 360mg、Fr.2 1290mg、Fr.3 450mg、Fr.4 1160mg、Fr.5 4060mg、Fr.6 2090mg、Fr.7 20mgであった。
【００３４】
次ぎに、上述にして得られたFr.2（1290mg）を、ケイ酸カラムクロマトグラフィーに供し、溶出溶媒としてクロロフルム：メタノール：水＝10：5：1（v/v/v）、50：10：1（v/v/v）、酢酸エチル：エタノール：水＝10：2：1（v/v/v）を用いて順次溶出させ、その後、ODS（C18）カラムクロマトグラフィーに供し、溶出溶媒として80％メタノールを用いて溶出することにより、カロパナックス−サポニンB（Kalopanax-saponin B）（183mg）、CP₃（25mg）を得た。また、Fr.3（450mg）をケイ酸カラムクロマトグラフィーに供し、溶出溶媒としてクロロフルム：メタノール：水＝10：5：1（v/v/v）、50：10：1（v/v/v）、酢酸エチル：エタノール：水＝8：2：1（v/v/v）、10：2：1を用いて順次溶出させることにより、サピンドシドB（Sapindoside B）（97mg）、サポニンA（Saponin A）（25mg）を得た。
【００３５】
得られた本発明の化合物の化学的特性を、以下に示す。
【００３６】
［サピンドシドB（Sapindoside B）］
収率：0.07％、粉末、［α］²¹ _D ＋4.4゜（ｃ1.20）、IR ν_max cm^-1：3430（OH）、1690（COOH）．¹H NMR（anomeric proton）：δ5.12（¹H,d,J＝6.6 Hz，Ara H-1）、5.40（¹H,d,J＝7.7 Hz，Xyl H-1）、6.40（¹H,s,Rha H-1）．FAB-MS（positive）m/z：883 [M+H]^＋、751[M−Xyl＋H]^＋、605[M−（Rha-Xyl）＋H]^＋．
【００３７】
［サポニンA（Saponin A）］
収率：0.02％、粉末、［α］²¹ _D ＋10.6゜（ｃ0.67）、IR ν_max cm^-1：3425（OH）、1695（COOH）．¹H NMR（anomeric proton）：δ5.11（¹H,d,J＝6.6 Hz，Ara H-1）、5.37（¹H,d,J＝7.0 Hz，Ara H-1）、6.40（¹H,s,Rha H-1）．FAB-MS（positive）m/z：883 [M+H]^＋．
【００３８】
［カロパナックス−サポニンB（Kalopanax-saponin B）］
収率：0.14％、針状結晶（MeOH）、mp. 253−256℃（decomp.）、［α］¹⁹ _D ＋18.6゜（ｃ0.59）、IR ν_max cm^-1：3430（OH）、1695（COOH）．¹H NMR（anomeric proton）：δ5.16（¹H,d,J＝6.2 Hz，Ara H-1）、6.29（¹H,s,Rha H-1）．FAB-MS（positive）m/z：751 [M+H]^＋．
【００３９】
［CP₃］
収率：0.02％、粉末、［α］²⁴ _D −4.9゜（ｃ0.71）、IR ν_max cm^-1：3425（OH）、1690（COOH）．¹H NMR（anomeric proton）：δ4.93（¹H,d,J＝8.0 Hz，Ara H-1）、5.41（¹H,d,J＝7.7 Hz，Xyl H-1）、6.33（¹H,s,Rha H-1）．FAB-MS（positive）m/z：867 [M+H]^＋．
【００４０】
［実施例］リパーゼ阻害活性試験
［基質（10％大豆油/アラビアゴムエマルジョン）の調製］
アラビアゴム１gを約5mlの蒸留水に溶かし、5Lの蒸留水で一晩透析する。その後、透析チューブからアラビアゴムを20mlメートルグラスに出し、共洗いをしながら、20mlにする。また、大豆油１gを50mlビーカーに秤り取る。これに、前述の5％アラビアゴム10mlを加え、スターラーでよく攪拌した。
【００４１】
［銅混合液の調製］
6.45％ 硝酸銅（II）三水和物100ml、1M トリエタノールアミン90ml、１N 酢酸 10mlを加えて、銅混合液200mlを調製した。
【００４２】
［発色試薬（0.1％DEDC）の調製］
N,N-ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウム三水和物10mgを、10mlのブタノールに溶解させた。
【００４３】
［阻害活性試験］
リパーゼ阻害活性の測定は、K.Satouchiらの方法（Agric. Biol. Chem. 40巻、889〜897頁（1976年））に従い、Duncombe法により測定した。
【００４４】
すなわち、0.5MTris-HCl （pH7.4）緩衝液50μlに、基質として10％大豆油エマルジョン50μl、5mM 酢酸カルシウム100μl、製造例で得られたそれぞれのサポニンの各種濃度（１、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001mg/ml）の水溶液100μlを加えた後、蒸留水を加えて450μlとする。これを37℃、65r.p.m.で5分間、プレインキュベーションした後、リパーゼ（シグマ社製、ブタ膵臓由来）（1mg/ml）を50μl加えて、37℃、125r.p.m.で20分間、インキュベーションした。その後、クロロホルム3.5mlを加え上層を除去し、残りの下層に銅混合液1.5mlを加え、コンセントレーターで15分間攪拌した後、上層を除去する。残りの下層に発色試薬（0.1％DEDC）を0.5ml加えた後、遊離した脂肪酸の量を440nmでの吸光度を測定することにより、リパーゼ阻害活性を測定し、IC₅₀値（酵素活性を50％阻害する濃度（μg/0.5ml））で表した結果を表１に示した。
【００４５】
また、比較例として、すでにリパーゼ阻害活性を有すると報告されているケツメイシ、コラ・デ・カバロについても同様の試験を行った。その結果を併せて表１に示す。
【００４６】
【表１】

表１からもわかるように、本発明のサポニン、すなわち、サピンドシドB（Sapindoside B）、サポニンA（Saponin A）、カロパナックス−サポニンB（Kalopanax-saponin B）、CP₃、オレアノイック酸（Oleanolic acid）、ヘデラゲニン（Hederagenin）に高いリパーゼ阻害活性を有することがわかる。
【００４７】
以下に、本発明の有効成分を使用した処方例を記載する。
【００４８】
［錠剤の製造］
製造例で得られたサピンドシドB（Sapindoside B）を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
（組 成） （配合：質量％）
サピンドシドＢ ２４
乳糖 ６３
コーンスターチ １２
グァーガム １
【００４９】
［ジュースの製造］
製造例で得られたサポニンA（Saponin A）を用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
（組 成） （配合：質量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁 ５．０
果糖ブドウ糖液糖 １１．０
クエン酸 ０．２
Ｌ−アスコルビン酸 ０．０２
香料 ０．２
色素 ０．１
サポニンＡ ０．２
水 ８３．２８
【００５０】
［フェイスクリームの製造］
製造例で得られたカロパナックス−サポニンB（Kalopanax-saponin B）を用いて、常法に従って、下記の組成のフェイスクリームを製造した。
（組 成） （配合：質量％）
イソステアリン酸イソプロピル ８．０
ホホバ油 ６．０
セタノール ８．０
ステアリルアルコール ２．０
ポリオキシエチレンラウリルエーテル １．５
プロピレングリコール ６．０
ソルビトール １．０
パラベン ０．４
カロパナックス−サポニンＢ ０．５
ビタミンＥ ０．５
香料 ０．１
精製水 ６６．０
【００５１】
【発明の効果】
本発明の化合物は、リパーゼ阻害活性のような酵素阻害作用を有し、医薬、食品、化粧料として使用できる。さらに、リパーゼ活性を強力に阻害することから、肥満や高脂血症の抑制や予防に寄与し得ると共に、細菌性リパーゼに起因するニキビや皮膚炎、ふけなどの皮膚疾患の予防、治療に有効である。このリパーゼ阻害剤は、長期に連用しても安全で効果的であるから、健康食品のような食品としても提供できる。[0001]
[Technical field to which the invention belongs]
The present invention relates to pharmaceuticals, and in particular to the use of triterpenoid saponin compounds useful as lipase inhibitors. Furthermore, the present invention relates to a lipase inhibitor comprising a triterpenoid saponin compound. More specifically, the present invention effectively inhibits pancreatic lipase, which is the key to obesity and hyperlipidemia, which are difficult to digest and absorb lipids in vivo. The present invention relates to a highly safe lipase inhibitor that can contribute to the suppression and prevention of obesity and hyperlipidemia, and is effective in the prevention and treatment of skin diseases such as acne, dermatitis, and dandruff caused by bacterial lipase.
[0002]
[Prior art]
Triterpenoid-type saponins have been reported as compounds isolated and extracted from the deciduous small shrub, Argiaceae (H. Sawada et al., Phytochemistry, Vol. 34, No. 4, 1117-1121, 1993). However, no physiological activity such as lipase inhibition has been reported.
[0003]
Conventionally, abnormal fat deposition has occurred in the body adipose tissue and various organs, resulting in obesity, or hyperlipidemia with abnormally high serum lipids, such as hypertension, arteriosclerosis, diabetes, etc. It is thought to be closely involved in the development of various lifestyle-related diseases. Obesity is said to be caused by constitutional factors, dietary factors, mental factors, central factors, metabolic factors, lack of exercise, etc., resulting in caloric intake exceeding calorie consumption and fat accumulation. ing. Dietary lipids are broken down by pancreatic lipase and absorbed from the small intestine. Therefore, it is thought that obesity can be prevented or hyperlipidemia can be suppressed by using a lipase inhibitor having a function of inhibiting the activity of lipase in order to suppress lipid absorption.
[0004]
From such a point of view, various natural products that can be ingested on a daily basis are vigorously searched for components having strong lipase inhibitory activity, that is, natural components having lipid absorption inhibitory activity. So far, phosphatidylcholine (K. Taniguti et al., Bull. Facul. Agric. Meiji Univ. 73, 9-26 (1986)), soybean protein (K. Satouchi et al., Agric. Biol. Chem. 38, 97-101 (1974); K. Satouchi et al., Agric. Biol. Chem. 40, 889-897 (1976)), tannin (S. Ahimura et al., Solar Eclipse, 41, 561-564) (1994)), solvent extract of herbal medicines such as peonies, oren, psyllium, buttonpi, genus shochu, tea, and kujin (Japanese Unexamined Patent Publication No. 64-90131), peppers, pumpkin, shimeji, maitake, fujiki, Water extracts of green tea, black tea and oolong tea (Japanese Patent Laid-Open No. 3-219872), extracts of Dokkatsu, Ryokyo, Betel wax, Yobaihi, Ketsumeishi (Japanese Patent Laid-Open No. 5-255100) and the like have lipase inhibitory activity Although it has been reported, it is still not sufficient in terms of the properties and effects of the substance itself. Furthermore, in such a search, there is a high content in the raw material, and a substance suitable for industrial production is expected, but no substance that sufficiently satisfies such conditions has been found so far. .
[0005]
In addition, bacterial lipases in the human body include lipases produced by microorganisms resident on the skin surface (Propionibacterium acnes, Pityrosporum ovale, Micrococcus sp., Etc.). Lipase decomposes triglyceride contained in sebum to produce free fatty acids. Free fatty acids cause an irritating inflammatory reaction to the skin and are considered as one of the causes of skin diseases such as acne, dermatitis and dandruff. In particular, there is a correlation between the number of Propionibacterium acnes, the cause of acne, and the amount of free fatty acids produced. It is thought to cause formation (McGinley, K, J. et al., J. Clin. Microbiol. 12, 672-675 (1980)).
[0006]
However, the development of a drug that inhibits bacterial lipase to suppress or prevent diseases has not been advanced yet, and 2-Pyridylmethyl-2- (P- (2-methylpropyl) -phenyl) propinate (common name: ibuprofen) Piconol) (Western skin, Vol. 47, No. 5, 888-898, 899-908 (1985), tetracycline and metal salts (JP-A-59-186919) and loquat leaf extract as plant extract (JP-A-10-265364) and Kola de Cavallo extract (JP-A-11-228338) have been reported, but lipase inhibitory action cannot be exhibited due to the relationship with other ingredients. However, safety and effectiveness in topical application are not always satisfactory.
[0007]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to find a new use for a triterpenoid saponin compound, to provide foods, medicines and cosmetics containing the compound, to prevent obesity using a lipase inhibitor having an activity inhibiting function of lipase action. It is effective in preventing or treating acne and other skin diseases by inhibiting the symptoms of hyperlipidemia or inhibiting lipases produced by skin resident bacteria such as Propionibacterium acnes. It is also an object of the present invention to provide an effective and highly safe lipase inhibitor, anti-obesity agent, hyperlipidemia-improving agent, and acne skin-improving agent with no fear of side effects.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
The present inventor is a deciduous shrub of the family Rabbitaceae, which is obtained by drying leaves and root bark in Kampo, used as a nourishing tonic, an analgesic for abdominal pain, recovery from fatigue, coldness, etc. The leaves were found to have strong lipase-inhibiting activity against the silkworm (Acanthopanax sieboldianus), which is also used for food, and applied for a patent (Japanese Patent Application No. 2000-381248). As a result of further earnest research, the present inventors have found that triterpenoid saponins, which are compounds extracted and isolated from okogi, have properties such as lipase inhibitory activity that can be used as medicines, foods, and cosmetics.
[0009]
That is, the present invention provides the following formula (1):
[0010]
[Chemical 3]

(In the formula, R1 represents a sugar residue in which a hydrogen atom or a hydroxyl group may be protected, and R2 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group.)
A compound represented by formula (2):
[0011]
[Formula 4]

(Wherein, _{R 3} represents a hydrogen ^{_{atom, - α Ara 2 - α Rha}} 3 - β Xyl, - α Ara 2 - α Rha, or ^{_{- α Ara 2 - α Rha 3}} - represents _alpha Ara, _{R 4} is -Ara is an L-arabinopyranosyl group, Rha is an L-rhamnopyranosyl group, Xyl is a D-xylopyranosyl group, and α and β are sugars, respectively. The number of superscripts, the superscript numbers 2 and 3, indicate the position of the hydroxyl group of the saccharide that is bound. For ^{_{example, - α Ara 2 - α Rha}} 3 - β Xyl represents a beta-D-xylopyranosyl (1-3) -α-L- rhamnopyranosyl (1-2) -α-L- arabinofuranosyl pyranosyl group. )
Containing at least one member selected from the group consisting of compounds represented by the following: pharmaceuticals, lipase inhibitors, lipid absorption inhibitors, anti-obesity agents, hyperlipidemia-improving agents, acne skin-improving agents, foods, cosmetics Regarding fees.
[0012]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
In the compound represented by the formula (1), R ₁ represents a sugar residue in which a hydrogen atom or a hydroxyl group may be protected, and R ₂ represents a hydrogen atom or a hydroxyl group. The sugar residue is preferably a disaccharide sugar residue or a trisaccharide residue. Specific examples of the sugar residue constituting such a sugar residue include an arabinopyranosyl group, a rhamnopyranosyl group, and a xylopyranosyl group. The group can be mentioned. Examples of the hydroxyl-protecting group for the sugar residue include a methyl group and an acetyl group.
[0013]
In said formula (1) or a compound represented by the formula (2), _{R 1} or _{R 3} is ^{_{- α Ara 2 - α Rha 3}} - β Xyl, compound _{R 2} or _{R 4} is -OH can Sapindoshido B The compound which is (Sapindoside B), R ₁ or R ₃ is a _-α Ara ² _-α Rha ³ _-α Ara residue, and R ₂ or R ₄ is -OH is Saponin A. The compound in which R ₁ or R ₃ is _-α Ara ² _-α Rha and R ₂ or R ₄ is -OH is Kalopanax-saponin B, and R ₁ or R ₃ is _-α Ara ² _- α Rha ³ - β Xyl, compound _{R 2} or _{R 4} is -H, the compound CP _{3, R 1} or _{R 3} is -H, _{R 2} or _{R 4} is -H is Oreanoikku acid (Oleanolic acid). The compound in which R ₁ or R ₃ is —H and R ₂ or R ₄ is an —OH residue is Hederagenin.
[0014]
These compounds can be obtained by extracting okogi (Acanthopanax sieboldianus) with an appropriate solvent and purifying from the extraction solvent. As the extraction solvent, water or a mixed solution of an organic solvent miscible with water, methanol, ether, acetone, acetonitrile, n-butanol, ethyl acetate, chloroform and the like can be used. Suitable examples include 0-30% (v / v) hydrous ethanol. The ratio of the raw material to the extraction solvent is desirably 1: 0.5 to 1:10 (weight ratio), and the extraction is desirably performed for about 1 to 10 hours at room temperature, pressure, and stirring. An extract can be obtained by filtration, and if necessary, a filter aid such as perlite can be used.
[0015]
The extract thus obtained is concentrated by an ordinary method such as concentration under reduced pressure or lyophilization. Since the compound of the present invention is soluble in water but has the property of being extracted into ethyl acetate, the following purification can be performed using such properties. When the extraction solvent is water or the like, the excess can be removed by washing with a solvent having higher lipophilicity than ethyl acetate such as ether, petroleum ether, hexane and chloroform before concentration. If the extraction solvent contains an organic solvent, after concentration, transfer the residue into water, wash with a solvent that is more lipophilic than ethyl acetate, such as ether, petroleum ether, hexane, or chloroform, and remove excess substances. Is desirable.
[0016]
The aqueous solution after washing is concentrated by a conventional method such as concentration under reduced pressure or lyophilization, and subjected to fraction purification as it is, or the aqueous solution is extracted with ethyl acetate, and the ethyl acetate fraction is concentrated and purified by fractionation. The compounds of the invention can also be obtained. As a method for fractional purification, usual methods such as normal phase chromatography and reverse phase chromatography can be used, but it is desirable to perform fractionation by reverse phase chromatography using high performance liquid chromatography (HPLC). In that case, it is desirable to proceed with purification using the lipase inhibitory activity of the purified fraction as an index. The purified fraction can be concentrated by a conventional method such as concentration under reduced pressure or lyophilization to obtain the compound of the present invention.
[0017]
The compound of the present invention can also be obtained according to the method of H. SAWADA et al. (Phytochemistry, 34, 1117-1121 (1993)).
[0018]
That is, dried okogi (Acanthopanax sieboldianus) is extracted using hot methanol. Methanol is distilled off using an evaporator. The remaining extract is suspended using distilled water and then degreased using hexane. The aqueous layer was then applied to a highly polar porous resin DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), and eluted sequentially using distilled water, methanol, and 3-pentanone. The resulting methanol fraction was concentrated under reduced pressure and frozen. The compound of the present invention can be obtained by concentrating by a usual method such as drying.
[0019]
Furthermore, oleanoic acid (Oleanolic acid) and Hederagenin, which are one of the compounds of the present invention, are Sapindoside B, Saponin A, Caropanax-saponin B, CP ₃ can be easily obtained by acid hydrolysis using an acid such as hydrochloric acid or sulfuric acid according to a conventional method.
[0020]
These compounds of the present invention, the extract by high performance liquid chromatography containing them (HPLC), purified using purification means conventionally such as silica gel column chromatography, lipase inhibitors, lipid absorption inhibitors, antiobesity agents Further, it may be used as a hyperlipidemia improving agent or an acne skin improving agent .
[0021]
The fact that these compounds of the present invention have physiological activity such as lipase inhibitory activity has not been known at all, and is a new finding obtained by the present invention.
[0022]
The compounds in the present invention have excellent lipase inhibitory activity, and can be used as foods, pharmaceuticals and cosmetics containing them, and as anti-obesity agents, hyperlipidemia improving agents, and acne skin improving agents. It is.
[0023]
The compounds of the present invention can be produced as lipase inhibitors, anti-obesity agents, hyperlipidemia-improving agents, acne skin-improving agents, and foods, medicines and cosmetics containing these.
[0024]
As an application method as a medicine, either oral administration or parenteral administration can be employed. In administration, the active ingredient can be mixed with a solid or liquid nontoxic pharmaceutical carrier suitable for administration methods such as oral administration, rectal administration, and injection, and administered in the form of a conventional pharmaceutical preparation. Examples of such preparations include solid preparations such as tablets, granules, powders and capsules, solutions such as solutions, suspensions and emulsions, freeze-dried preparations, and the like. It can be prepared by conventional means. Examples of the non-toxic pharmaceutical carrier include glucose, lactose, sucrose, starch, mannitol, dextrin, fatty acid glyceride, polyethylene glycol, hydroxyethyl starch, ethylene glycol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, amino acid, gelatin, Examples include albumin, water, and physiological saline. Further, if necessary, conventional additives such as a stabilizer, a wetting agent, an emulsifier, a binder, and an isotonic agent can be appropriately added.
[0025]
As a food, it is eaten as a health food or food material useful for the treatment and prevention of hyperlipidemia or obesity as it is, or with various nutritional components added or contained in food or drink. For example, after adding the above-mentioned appropriate auxiliaries, it may be used for edible by using conventional means, forming into an edible form, for example, granular, granular, tablet, capsule, paste, etc. It can also be used in various foods such as processed foods such as ham and sausage, processed fish foods such as kamaboko and chikuwa, bread, confectionery, butter, milk powder, fermented milk products, water, fruit juice, milk, You may add and use for drinks, such as a soft drink.
[0026]
The effective dose of the compound of the present invention is appropriately selected and determined according to the patient's age, weight, symptoms, patient grade, administration route, administration schedule, formulation form, strength of the inhibitory activity of the material, etc. In the case of oral administration, it is generally about 0.001 to 1000 mg / kg body weight per day, and in the case of Sapindoside B, it is about 5 to 300 mg / kg body weight per day. Good.
[0027]
Further, when the compound of the present invention is contained and used as a cosmetic or a cosmetic material, for example, saponin A is added to wheat germ oil or olive oil to obtain a lipase inhibitor-containing composition, It can be used as a cosmetic material. The amount of the compound of the present invention is not particularly limited, but as an example, it is 0.1% by mass or more and 60% by mass or less, preferably 0.5% by mass or more and 50% by mass or more based on the weight of wheat germ oil or olive oil. A mass% or less is appropriate.
[0028]
Furthermore, it can be directly used as a cosmetic ingredient to produce a cosmetic having a lipase inhibitory action. Although it does not specifically limit as cosmetics, From a functional surface, for example, a milky lotion, a cosmetic liquid, a face cream, a hand cream, a lotion, an essence, a shampoo, rinse etc. are preferable.
[0029]
Such a cosmetic can be produced according to a conventional method. The amount of the compound of the present invention to be added to the cosmetic is not particularly limited, but for example, it is suitably about 0.01% by mass to 20% by mass with respect to the total weight of the cosmetic.
[0030]
Since the compound of the present invention is a natural product, its toxicity is low. For example, even if it is orally administered to rats over a long period of 1000 mg / kg daily for 100 days, Kalopanax-saponin B (Kalopanax-saponin B) There were no deaths and no changes in body weight were observed.
[0031]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.
[0032]
[Production Example] Extraction of various saponins Extraction of saponins was performed according to the method of H. SAWADA et al. (Phytochemistry, 34, 1117-1121 (1993)).
[0033]
That is, 1 kg of dried leaves (Acanthopanax sieboldianus) leaves were extracted using 3 L of hot methanol. Methanol was distilled off from the obtained extract using an evaporator, and 235 g of the remaining extract was suspended using 27.2 kg of distilled water, and then degreased using 27.2 kg of the same amount of hexane. The aqueous layer was then applied to a highly polar porous resin DIAION HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) (column size: Φ2cm x 20cm), distilled water (99.7g), methanol (75.1g), 3-pentanone (3.41g) Were eluted in sequence. The methanol elution fraction (10 g) thus obtained was subjected to silicic acid column chromatography using silica gel as a column carrier, and chloroform: methanol: water = 10: 5: 1 (v / v / v) was used as an elution solvent. 7 fractions (hereinafter referred to as Fr.1 to Fr.7) were obtained by elution using The weights of the obtained fractions were Fr.1 360 mg, Fr.2 1290 mg, Fr.3 450 mg, Fr.4 1160 mg, Fr.5 4060 mg, Fr.6 2090 mg, and Fr.7 20 mg, respectively.
[0034]
Next, Fr.2 (1290 mg) obtained as described above was subjected to silicic acid column chromatography, and chloroform: methanol: water = 10: 5: 1 (v / v / v), 50:10 as an elution solvent. : 1 (v / v / v), ethyl acetate: ethanol: water = 10: 2: 1 (v / v / v), then elute sequentially, then subjected to ODS (C18) column chromatography, eluting solvent Was eluted with 80% methanol to obtain Kalopanax-saponin B (183 mg) and CP ₃ (25 mg). Fr.3 (450 mg) was subjected to silicic acid column chromatography, and chloroflum: methanol: water = 10: 5: 1 (v / v / v), 50: 10: 1 (v / v / v) as an elution solvent ), Elution using ethyl acetate: ethanol: water = 8: 2: 1 (v / v / v), 10: 2: 1, and sapindoside B (97 mg), saponin A (Saponin A) (25 mg) was obtained.
[0035]
The chemical characteristics of the obtained compound of the present invention are shown below.
[0036]
[Sapindoside B]
Yield: 0.07%, powder, [α] ²¹ _D + 4.4 ° (c1.20), IR v _max cm ⁻¹ : 3430 (OH), 1690 (COOH). ¹ H NMR (anomeric proton): δ 5.12 ( ¹ H, d, J = 6.6 Hz, Ara H-1), 5.40 ( ¹ H, d, J = 7.7 Hz, Xyl H-1), 6.40 ( ¹ H , s, Rha H-1). FAB-MS (positive) m / z: 883 [M + H] ⁺ , 751 [M−Xyl + H] ⁺ , 605 [M− (Rha-Xyl) + H] ⁺ .
[0037]
[Saponin A]
Yield: 0.02%, powder, [α] ²¹ _D + 10.6 ° (c 0.67), IR ν _max cm ⁻¹ : 3425 (OH), 1695 (COOH). ¹ H NMR (anomeric proton): δ 5.11 ( ¹ H, d, J = 6.6 Hz, Ara H-1), 5.37 ( ¹ H, d, J = 7.0 Hz, Ara H-1), 6.40 ( ¹ H , s, Rha H-1). FAB-MS (positive) m / z: 883 [M + H] ⁺ .
[0038]
[Kalopanax-saponin B]
Yield: 0.14%, needle crystal (MeOH), mp. 253-256 ° C. (decomp.), [Α] ¹⁹ _D + 18.6 ° (c 0.59), IR ν _max cm ⁻¹ : 3430 (OH) 1695 (COOH). ¹ H NMR (anomeric proton): δ 5.16 ( ¹ H, d, J = 6.2 Hz, Ara H-1), 6.29 ( ¹ H, s, Rha H-1). FAB-MS (positive) m / z: 751 [M + H] ⁺ .
[0039]
[CP ₃ ]
Yield: 0.02%, powder, [α] ²⁴ _D −4.9 ° (c 0.71), IR ν _max cm ⁻¹ : 3425 (OH), 1690 (COOH). ¹ H NMR (anomeric proton): δ 4.93 ( ¹ H, d, J = 8.0 Hz, Ara H-1), 5.41 ( ¹ H, d, J = 7.7 Hz, Xyl H-1), 6.33 ( ¹ H , s, Rha H-1). FAB-MS (positive) m / z: 867 [M + H] ⁺ .
[0040]
[Example] Lipase inhibitory activity test [Preparation of substrate (10% soybean oil / gum arabic emulsion)]
Dissolve 1 g of gum arabic in about 5 ml of distilled water and dialyze against 5 L of distilled water overnight. Then, the gum arabic is taken out from the dialysis tube into a 20 ml metric glass and made into 20 ml while washing together. Also, weigh 1 g of soybean oil into a 50 ml beaker. To this, 10 ml of 5% gum arabic was added and stirred well with a stirrer.
[0041]
[Preparation of copper mixture]
6.45% copper nitrate (II) trihydrate 100 ml, 1M triethanolamine 90 ml, 1N acetic acid 10 ml were added to prepare a copper mixture 200 ml.
[0042]
[Preparation of coloring reagent (0.1% DEDC)]
10 mg of sodium N, N-diethyldithiocarbamate trihydrate was dissolved in 10 ml of butanol.
[0043]
[Inhibitory activity test]
The lipase inhibitory activity was measured by the Duncombe method according to the method of K. Satouchi et al. (Agric. Biol. Chem. 40, 889-897 (1976)).
[0044]
That is, 50 μl of 0.5 M Tris-HCl (pH 7.4) buffer, 50 μl of 10% soybean oil emulsion as a substrate, 100 μl of 5 mM calcium acetate, and various concentrations (1, 0.5, 0.1, 0.05) of each saponin obtained in the production examples. , 0.01, 0.005, 0.001 mg / ml), and then add distilled water to make 450 μl. This was preincubated for 5 minutes at 37 ° C. and 65 rpm, 50 μl of lipase (Sigma, porcine pancreas) (1 mg / ml) was added, and incubated at 37 ° C. and 125 rpm for 20 minutes. Thereafter, 3.5 ml of chloroform is added to remove the upper layer, 1.5 ml of the copper mixture is added to the remaining lower layer, and the mixture is stirred for 15 minutes with a concentrator, and then the upper layer is removed. After adding 0.5 ml of a coloring reagent (0.1% DEDC) to the remaining lower layer, the amount of released fatty acid was measured for absorbance at 440 nm to measure lipase inhibitory activity, and IC ₅₀ value (enzyme activity was 50%) Table 1 shows the results expressed in terms of inhibitory concentration (μg / 0.5 ml).
[0045]
In addition, as a comparative example, the same test was also performed on Ketsumeishi and Kola de Cavallo, which have already been reported to have lipase inhibitory activity. The results are also shown in Table 1.
[0046]
[Table 1]

As can be seen from Table 1, the saponins of the present invention, ie, Sapindoside B, Saponin A, Caropanax-saponin B, CP ₃ , oleanoic acid, It turns out that hederagenin (Hederagenin) has high lipase inhibitory activity.
[0047]
Below, the formulation example using the active ingredient of this invention is described.
[0048]
[Manufacture of tablets]
Using the sapindoside B obtained in the production example, tablets having the following composition were produced according to a conventional method.
(Composition) (Composition: Mass%)
Sapindside B 24
Lactose 63
Cornstarch 12
Guar gum 1
[0049]
[Manufacture of juice]
Using saponin A obtained in the production example, a juice having the following composition was produced according to a conventional method.
(Composition) (Composition: Mass%)
Frozen and concentrated Wenzhou orange juice 5.0
Fructose glucose liquid sugar 11.0
Citric acid 0.2
L-ascorbic acid 0.02
Fragrance 0.2
Dye 0.1
Saponin A 0.2
Water 83.28
[0050]
[Manufacture of face cream]
A face cream having the following composition was produced using Kalopanax-saponin B obtained in Production Example according to a conventional method.
(Composition) (Composition: Mass%)
Isopropyl isostearate 8.0
Jojoba oil 6.0
Cetanol 8.0
Stearyl alcohol 2.0
Polyoxyethylene lauryl ether 1.5
Propylene glycol 6.0
Sorbitol 1.0
Paraben 0.4
Caropanax-saponin B 0.5
Vitamin E 0.5
Fragrance 0.1
Purified water 66.0
[0051]
【The invention's effect】
The compound of the present invention has an enzyme inhibitory activity such as lipase inhibitory activity, and can be used as a medicine, food or cosmetic. In addition, since it strongly inhibits lipase activity, it can contribute to the suppression and prevention of obesity and hyperlipidemia, and also effective in the prevention and treatment of skin diseases such as acne, dermatitis and dandruff caused by bacterial lipase. It is. Since this lipase inhibitor is safe and effective even when used for a long time, it can be provided as a food such as a health food.

Claims (5)

Sapindoshido B, saponin A, or a compound of any of CP ₃ as an active ingredient, a lipase inhibitor pharmaceutical. The lipase-inhibiting drug according to claim 1, which is used as a lipid absorption inhibitor. The lipase-inhibiting drug according to claim 1, which is used as an anti-obesity agent. The lipase-inhibiting drug according to claim 1, which is used as an agent for improving hyperlipidemia. The medicament for inhibiting lipase according to claim 1, which is used as an acne improving agent.