JP4416494B2 - Hla−dqアレルを同定するためのプローブセット及び特定方法 - Google Patents
Hla−dqアレルを同定するためのプローブセット及び特定方法 Download PDFInfo
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Description
(日本組織適合性学会HLA標準化委員会「アリル表記法と結果報告の原則について2000」(http://jshi.umin.ac.jp/standarization/hyoki.htmlのサイト) http://www.ihwg.org/protocols/sbt/ambiguities2.pdf
前記2つのプローブ群の各プローブは、大文字で表記された塩基が欠落することがない範囲で明細書中の配列番号165〜240で表される塩基配列からなるHLA−DQ型のアリルリスト中から選択された15〜30塩基の連続した塩基からなり、検体中に含まれるHLA−DQ型のアリルの同定に利用し得るプローブセットである。
該プローブセットが請求項1または2に記載のプローブセットであって、明細書中の表3A及び表3B−1〜表3B−2又は表4A及び表4B−1〜表4−2に記載されるアレル−プローブ対応リストに基づいて、検体中のアレルを同定することを特徴とする、HLA−DQ型のアリルを同定する方法である。
アマシャムバイオサイエンスのGFX Genomic Blood DNA Purification Kitを使って、人の血液1mlからDNAの抽出を行った。以下にプロトコールを示す。
血液1ml
↓+RBC Lysis Solution(溶血)
↓+血液サンプル(穏やかに混和)
↓室温、5分間
↓12,000〜16,000×g、20秒間遠心
↓上清を20〜50 μl残して捨てる
↓沈殿物を再懸濁
↓+Extraction Solution(激しくボルテックス)
↓室温、5分間(DNAの抽出)
↓Collection TubeにGFX Columnをセット
↓溶出バッファーを70℃に加温
↓+サンプル
↓5,000×g、1分間遠心(DNAの結合)
↓+Extraction Solution(洗浄)
↓5,000×g、1分間遠心
↓+Wash Solution(洗浄)
↓12,000×g、3分間遠心
↓GFX Columnを遠心チューブにセット
↓+純水で溶出
↓室温、1分間
↓5,000〜8,000×g、1分間遠心
230μlに濃縮調整………溶液(1)
次にキアゲン社のQuantiTect SYBR Green PCR Kit、ABI社のGeneAmp5700を使って、定量PCRを行った。反応組成およびプロトコールを以下に示す。
QuantiTect SYBR Green 2×プレミクス:10μl
溶液(1):1μl
プローブリスト1Aおよび1Bの各プローブ(10 pmol/μl):1μl
ミックスプライマ(10 pmol/μl)注):4μl
超純水:4μl
(合計:20μl)
注)以下の配列を持つ各10 pmol/μlの水溶液各1μl
GGTGAGGTAACTGATCTTG
TCCTTCTGGCTGTTCCAGTACTC
2)PCRプログラム
94℃:180secの後に(94℃:10sec+66℃:10sec+72℃:20sec)の30 cyclesを行った。5700ソフトウエア画面上のAmp PlotおよびDissociationカーブおよびアレル−プローブ対応リスト1(表3Aおよび表3B−1〜表3B−2)を参照して、DQA1*0103とDQB1*060101であると同定された。
人の血液1mlからのDNA抽出は、実施例1と同様に行った。次にタカラバイオ(株)のEx Taq、ABI社のPCR装置9700を使って、人HLA-DQのPCRを行った。反応組成およびプロトコールを以下に示す。
Ex Taq 2×プレミクス:20μl
溶液(1):3μl
Cy-3 dUTP (1mM):2μl
ミックスプライマ(10 pmol/μl)注):6μl
超純水:9μl
(合計::40μl)
注)以下の配列を持つ各10 pmol/μlの水溶液各1μl
GGTGAGGTAACTGATCTTG
ATGATCCTAAACAAAGCTCTG
TGTGCTACTTCACCAACGGGACG
2)PCRプログラム
94℃:180secの後に、(94℃:10sec+66℃:10sec+72℃ 20sec)の30cyclesを行った。反応終了後、精製用カラム(QIAGEN QIAquick PCR Purification Kit)を用いて未反応のdNTPs等のClean Upを行った。
DQA1*010101 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagGagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccattgtga (配列番号:165)
DQA1*010102 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgaggagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaGgggccattgtga (配列番号:166)
DQA1*010201 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgtgccctggggttgtctgtgggcctcAtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccattgtga (配列番号:167)
DQA1*010202 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatCtgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgtgccctggggttgtctgtgggcctcAtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccattgtga (配列番号:168)
DQA1*0103 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagttcacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggagaagaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcacGcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgtgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga (配列番号:169)
DQA1*010401 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccatgatgagcccttgtggaggtgaaggcattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgaggagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcAccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccattgtga (配列番号:170)
DQA1*010402 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccatgatgagcccttgtggaggtgaagGcattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgaggagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacCtggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactggg (配列番号:171)
DQA1*0105 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccatgatgagcccctgtggaggtgaagGcattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgaggagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccaga (配列番号:172)
DQA1*0106 ctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggagaggaaggagGctgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatg (配列番号:173)
DQA1*0201 atgatcctaaacaaagctctgatgctgggggccctcgccctgaccaccgtgatgagcccttgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttacggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagttcacccatgaatttgatggagacgaggagttctatgtggacctggagaggaaggagactgtctggaagttgcctctgttccacagaCttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgctaaaacataacttgaacatcctgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacctggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggatgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcacctatgtcagagctcacagagactgtggtctgtgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtggggaccgtcttgatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga (配列番号:174)
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DQA1*0302 atgatcctaaacaaagctctgatgctgggggccctcgccctgaccaccgtgaCgagcccttgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttacggtgtaaacttgtaccagtcttatggtccctctgggcagtacagccatgaatttgatggagacgaggagttctatgtggacctggagaggaaggagactgtctggcagttgcctctgttccgcagatttagaagatttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgctaaaacataacttgaacatcgtgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacctggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgatgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggatgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccaacacctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtggggaccgtcttgatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga (配列番号:176)
DQA1*0303 atgatcctaaacaaagctctgatgctgggggccctcgccctgaccaccgtgatgagcccttgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttacggtgtaaacttgtaccagtcttatggtccctctgggcagtacagccatgaatttgatggagacgaggagttctatgtggacctggagaggaaggagactgtctggcagttgcctctgttccgcagatttagaagatttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgctaaaacataacttgaacatcgtgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacctggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgAtgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggatgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccaacacctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtggggaccgtcttgatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga (配列番号:177)
DQA1*040101 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggcccttgccctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttatggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagacgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgacaaaacacaacttgaacatcctgattaaacgctccaactctacTgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacgctgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggacgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctgggattgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccCttgtga (配列番号:178)
DQA1*040102 ctgaccatgttgcctcttatggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagacgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgacaaaacacaacttgaacatcctgattaaacgctccaactctactgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctccTgtgacgctgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggacgagcctcttctgaaacactggg (配列番号:179)
DQA1*050101 atgatcctaaacaaagctctgatgctgggggcccttgccctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgtcgcctcttatggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtcctaaaacataacttgaacagtctgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacatcctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccctcctcccttctgctgaggagagttatgactgcaaggtggagcactggggcctggacAagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctgggAttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga (配列番号:180)
DQA1*050102 gaagacattgtggctgaccacgttgcctcttAtggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtcctaaaacataacttgaacagTctgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaat (配列番号:181)
DQA1*0502 ggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgaccGgcaatttgcactgacaaacatcgctgtcctaaaacataacttgaacagtctgattaaacgctccaactctaccgctgctacc (配列番号:182)
DQA1*0503 atgatcctaaacaaagctctgatgctgggggcccttgccctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgtcgcctcttatggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtcctaaaacataacttgaacagtctgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacatcctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccctcctcccttctTctgaggagagttatgactgcaaggtggagcactggggcctggacaagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctgggattgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga (配列番号:183)
DQA1*0504 ctgaccacgtcgcctcttatggtgtaaacttgtaccagtcttacggtcTctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtcctaaaacataacttgaacagtctgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatg (配列番号:184)
DQA1*0505 atgatcctaaacaaagctctgatgctggggacccttgccctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgtcgcctcttatggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtcctaaaacataacttgaacagtctgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacatcctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccctcctcccttctgctgaggagagttatgactgcaaggtggagcactggggActggacaagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga (配列番号:185)
DQA1*060101 atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggcccttgccctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttatggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagtTcacccatgaatttgatggagacgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgacaaaacacaacttgaacatcctgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacGctgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggacgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctgggattgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccCttgtga (配列番号:186)
DQA1*060102 ggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagttcacccatgaatttgatggagacgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgcCgtgacaaaacacaacttgaacatcctgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatga (配列番号:187)
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DQB1*050102 gggcctgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcggggtgtgaccagacacatctataaccgagaggagtacgtgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagggggcccgggcgtcggtggacagAgtgtgcagacacaactacgaggtggcgtaccgcgggatcctgcagagg (配列番号:189)
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DQB1*0609 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtaaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggggtaccgcgggatcctgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcggtgacagatttctatccaggccagatcaaagtccAgtggtttcggaatgatcaggaggagacagccggcgttgtgtccaccccccttattaggaatggtgactggactttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcgtggagatgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagagccccatcaccgtggagtgg (配列番号:228)
DQB1*0610 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgcgcggtgacgccgcaggggcggcctaGcgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagag (配列番号:229)
DQB1*061101 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagagg (配列番号:230)
DQB1*061102 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagag (配列番号:231)
DQB1*0612 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtaaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggggtaccgcgggatcctgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcggtgacagatttctatccaggccagatcaaagtccAgtggtttcggaatgatcaggaggagacagccggcgttgtgtccaccccccttattaggaatggtgactggactttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcgtggagatgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagagccccatcaccgtggagtgg (配列番号:232)
DQB1*0613 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgtTccgcgggat (配列番号:233)
DQB1*0614 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagacacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagag (配列番号:234)
DQB1*0615 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgcgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggAcccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggGgtaccgcgggatcctgcagaggagag (配列番号:235)
DQB1*0616 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgcgcggtgacgccgcaggggcggcctgatgccgagAactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcttgcagaggagag (配列番号:236)
DQB1*0617 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagacacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagggggcccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggGgtaccgc (配列番号:237)
DQB1*0618 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggag (配列番号:238)
DQB1*0619 gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcTtgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaTcgggcggtgacgccgcTggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagTtggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagag (配列番号:239)
DQB1*0620 gggcctgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgtTccgc。 (配列番号:240)
Claims (5)
- 明細書中の配列番号1〜82で表されるそれぞれの塩基配列またはその一部を有するプローブを全部含むプローブ群または配列番号83〜164で表されるそれぞれの塩基配列またはその一部を有するプローブを全部含むプローブ群からなり、
前記2つのプローブ群の各プローブは、大文字で表記された塩基が欠落することがない範囲で明細書中の配列番号165〜240で表される塩基配列からなるHLA−DQ型のアリルリスト中から選択された15〜30塩基の連続した塩基からなり、検体中に含まれるHLA−DQ型のアリルの同定に利用し得るプローブセット。 - 明細書中の配列番号1〜82で表される塩基配列を有するプローブを全部含むプローブ群または配列番号83〜164で表される塩基配列を有するプローブを全部含むプローブ群であって、前記プローブ群がHLA−DQ遺伝子に由来する30塩基以下の塩基からなる、検体中に含まれるHLA−DQ型のアリルの同定に利用し得るプローブセット。
- 検体からの試料中に含まれるHLA−DQ型のアリルをプローブセットを用いて同定する方法であって、
該プローブセットが請求項1または2に記載のプローブセットであって、明細書中の表3A及び表3B−1〜表3B−2又は表4A及び表4B−1〜表4B−2に記載されるアレル−プローブ対応リストに基づいて、検体中のアレルを同定することを特徴とする、HLA−DQ型のアリルを同定する方法。 - 前記検体中のHLA−DQ領域をプライマーPCR法により増幅する工程と、
前記増幅後の検体を、前記プローブセットが固定されたプローブアレイとハイブリダイゼーション反応させる工程と、
各アレルに対応するプローブの組み合わせを示す、明細書中の表3A及び表3B−1〜表3B−2又は表4A及び表4B−1〜表4B−2に記載されるアレル−プローブ対応リストに基づいて、検体中のアレルを同定する工程と、
を有する請求項3に記載の方法。 - 請求項1または2に記載のプローブセットが基板表面上に固定されている、検体中に含まれるHLA−DQ型のアリルの同定に利用し得るプローブアレイ。
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