JP4416470B2 - 高機能脱窒油脂分解菌、当該高機能脱窒油脂分解菌を用いた廃水浄化方法 - Google Patents
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Description
従って、本発明の目的は、比較的低温で増殖が可能で、かつ動植物脂質分解能及び脱窒能を有する微生物を提供することにある。
本発明の高機能脱窒油脂分解菌の好ましい具体例としては、受託番号FERM P−19476を有する菌株である。
また、本発明は、上記高機能脱窒油脂分解菌を固相担体に固定した、脱窒油脂分解用組成物を提供するものである。
また、本発明は、上記高機能脱窒油脂分解菌、又は脱窒油脂分解用組成物を油脂及び窒素分を含有する廃水と接触することを特徴とする、油脂及び窒素分を分解する方法を提供するものである。
また、本発明は上記高機能脱窒油脂分解菌、又は脱窒油脂分解用組成物を、油脂及び窒素分を含有する廃水と接触することを特徴とする、廃水浄化方法を提供するものである。
先ず、本発明の高機能脱窒油脂分解菌について説明する。
本明細書において、「油脂」とは、動植物を起源とするあらゆる油脂を含むものとし、例えば、動植性食用油、不飽和脂肪酸、魚油等を含む油脂が挙げられる。
得られたF−1株の細菌分類学的性質は以下の通りである。
(1)グラム染色:陰性
(2)芽胞:無し
(3)運動性:有り
(3)菌形:桿菌
色調は白色であり、コロニーの形状は円形、であり、コロニーの表面は平滑である。
〔3〕化学分類学的特性
DNAのG+Cモル含有量は62.8%である。
オキシダーゼ試験:陽性
カタラーゼ試験:陽性
尿素分解:陰性
ONPG試験:陰性
硫化水素の産生:陽性
メチルレッド試験:陰性
VP試験:陰性
インドール産生:陰性
硝酸塩の還元:陽性
オリーブ油分解:陽性
ラード分解:陽性
デンプン分解:陰性
ゼラチン分解:陰性
カゼイン分解:陰性
DNA分解:陰性
アルギン酸分解:陰性
Tween 20の分解:陽性
Tween 40の分解:陽性
Tween 60の分解:陽性
Tween 80の分解:陽性
-1℃:−
4℃:+
10℃:+
25℃: +
40℃: +
45℃: −
50℃: −
本発明の高機能脱窒油脂分解菌は、L−アラビノース、D−フルクトース、D−グルコース、グリセロール、ラクトース、D−マンノース、メリビオース、シュークロース、D−キシロース、ソルビトール、L−ラムノース、D−セロビオース、イヌリン、L−トリプトファン、L−スレオニン、L−ヒスチジン、L−リジン、L−アスパラギン、及びL−グリシンを唯一の炭素源として資化しない。
同属細菌の中でもシュードモナス デニトリフィカンス(Pseudomonas denitrificans) と高い相同性を示す(99.4%)ことが示された。
このような脱窒油脂分解用組成物としては、例えば液状製剤や粉末製剤が挙げられる。
高機能脱窒油脂分解菌を培養し、この培養物を遠心分離し、菌体を回収し、生理食塩水を加えて適当な濃度となるように懸濁し、脱窒油脂分解用組成物とする。また、この脱窒油脂分解用組成物に凍結乾燥などにより適度に濃縮してもよい。また、脱窒油脂分解用組成物には、必要に応じてpH調整剤等を加えてもよい。
高機能脱窒油脂分解菌を培養し、この培養液を凍結乾燥等によって乾燥し、粉末製剤とする。また、培養液から菌体を遠心分離によって回収し、生理食塩水や新鮮な培地と懸濁した後、凍結乾燥等によって乾燥してもよい。また、凍結乾燥前にpH調整剤等を加えてもよい。
本発明の油脂及び窒素分を分解する方法は、油脂及び窒素分を含有する廃水(生ゴミも含む)に、本発明の高機能脱窒素油脂分解菌、又は脱窒油脂分解用組成物を投与するこおによって実施することができる。高機能脱窒素油脂分解菌、又は脱窒油脂分解用組成物の投与量に特に制限はなく、廃水中に含まれる油脂及び窒素分を分解することのできる量でよい。なお、廃水の温度は4〜40℃の範囲が好ましく、pHは6.5〜9.0の範囲が好ましい。本発明の油脂及び窒素分を分解する方法によれば、廃水を浄化することが可能となる。
実施例1
牛の糞尿に生ゴミを加えて分解させた分解物を用いて高機能脱窒油脂分解菌を単離するための材料として用いた。
基礎培地(ペプトン、5g; 酵母エキス、3g;NaCl、5g; 寒天、15g; 蒸留水m900ml,pH7.8)、およびオリーブオイル入り寒天溶液(0.5% 寒天溶液、40ml; オリーブオイル、10ml;Tween80、0.5ml)をそれぞれ別滅菌する。滅菌後オリーブ油入り寒天溶液を超音波で乳化し、基礎培地と混合し、シャーレーに分注し固化して高機能脱窒油脂分解菌単離用培地とした。
実施例1で用いた培地にF−1株を接種し、27℃の温度で培養した。3日間培養した後、油脂を分解したことを示す透明帯がコロニー周辺部に観察された。その結果を図2に示す。図2に示すように、F−1株のコロニー周辺部には透明帯が形成されており、F−1株がプレート中の脂質を分解する能力を有していることがわかる。なお、シャーレの周縁部の白く見える部分は、この近くに菌体が存在しないため、脂質分が分解されずに残っていることを示す。
500mlのLB培地(トリプトン,10g; 酵母エキス,5g;NaCl,10g; 蒸留水, 1000ml)に5ml(1%)のオリーブオイルを加え、培地量の1/1000容のF−1株の前培養液を接種し、27℃で120rmpの回転速度で、1日、3日及び7日培養した後、培養液を1mlをとり、この培養液から脂質を定法により抽出した。この脂質の一部の一定量をシリカゲルプレートを用いた薄層クロマトグラフィーに供した。展開溶媒としてはヘキサン/ジエチルエーテル/酢酸 (80/30/1 v/v/v)を用いた。
500ml のLB培地(Tween80無添加)、及びTween 80を1%添加したLB培地を培地として用い、培地量の1/1000容のF−1株の前培養液を接種し、27℃の温度で120rpmの回転速度で1〜3日間培養した後、培養液を遠心分離により菌体を取り除き、上清を粗酵素液とした。得られた粗酵素液の脂質分解活性(リパーゼ活性)を、はp-ニトロフェニル パルミテート(p−NPP)を基質として用い、反応量をp-ニトロフェノールの遊離と見なし分光学的な測定により測定した。
図4において、横軸は反応時間であり、縦軸は450nmにおける吸光度である。また、黒丸はTween80を添加した培地で1日培養したもの、黒三角はTween80を添加した培地で3日培養したもの、四角はTween80を添加しない培地で1日培養したもの、三角はTween80を添加しない培地で3日培養したものの結果である。図4に示すように、オリーブオイルやTween80を培地に添加しなくても時間が多少かかるものの酵素の誘導が起こることが示された。一方、Tween80を添加することにより、僅か培養1日で酵素の誘導が起こることが示された。
肉汁ブイヨン(肉エキス,10g; ペプトン, 10g;NaCl,5g; 蒸留水, 1000ml)を2本の試験管に用意し、一方に1%濃度となるように硝酸ナトリウムを添加し、もう一方には硝酸ナトリウムを添加せずコントロールとした。F−1株培養菌体をそれぞれの培地が入った試験管にそれぞれ接種し、流動パラフィン:白色ワセリンを1:1(v・v)で混合したものを重層し、簡易的な嫌気条件で4℃、10℃、及び27℃の温度で培養した。その結果、それぞれの温度で脱窒反応が確認された。
Claims (7)
- 4〜40℃の範囲の温度で生育することができるシュードモナス デニトリフィカンス(Pseudomonas denitrificans)株(受託番号FERM P−19476)であって、油脂分解能力、及び脱窒能力を有することを特徴とする、高機能脱窒油脂分解菌
- 請求項1に記載の高機能脱窒油脂分解菌を含有する、脱窒油脂分解用組成物。
- 請求項1に記載の高機能脱窒油脂分解菌を固相担体に固定した、脱窒油脂分解用組成物。
- 請求項1に記載の高機能脱窒油脂分解菌を、油脂及び窒素分を含有する廃水と接触することを特徴とする、油脂及び窒素分を分解する方法。
- 請求項2又は3に記載の脱窒油脂分解用組成物を、油脂及び窒素分を含有する廃水と接触することを特徴とする、油脂及び窒素分を分解する方法。
- 請求項1に記載の高機能脱窒油脂分解菌を、油脂及び窒素分を含有する廃水と接触することを特徴とする、廃水浄化方法。
- 請求項2又は3に記載の脱窒油脂分解用組成物を、油脂及び窒素分を含有する廃水と接触することを特徴とする、廃水浄化方法。
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