JP4414761B2 - 雌馬尿からエストロゲンを取得する方法 - Google Patents
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Description
a)場合により粘液物質及び固体物質不含の尿液体、この尿液体の濃縮コンセントレート又はこの尿液体の膜濾過により得られる濃縮尿保留物である尿液体を、尿液体中に含有する抱合エストロゲンの混合物の吸着のために充分な量の半極性ポリマー吸着剤樹脂と接触させ、かつ抱合エストロゲンの混合物で負荷された半極性ポリマー吸着剤樹脂を、余分の尿液体から分離し、
b)この抱合エストロゲンの混合物で負荷された半極性ポリマー吸着剤樹脂を、少なくとも12.0、殊に12.5〜14.0のpH範囲まで調節された洗浄水で洗浄し、
c)この洗浄された吸着剤樹脂を、その上に吸着された抱合エストロゲンの混合物の脱着のために充分な量の溶離液(これは水と混和可能なエーテル、低級アルカノール及び低級脂肪族ケトンの群からの水と混和可能な有機溶剤又は水と混和可能な有機溶剤と場合によりアルカリ性に調節された水とからの混合物である)と接触させ、抱合エストロゲンの天然混合物を含有する溶離物を吸着剤樹脂から分離させ、かつ場合によっては濃縮させる、
この際、本発明による方法は、技術水準の方法に比べて、方法工程b)とc)の間で、抱合エストロゲンのこの混合物で負荷された半極性吸着剤樹脂を水で洗浄する中間洗浄を実施することを特徴とする。
次の実施例に、PMU中に含有する抱合エストロゲンの天然混合物を含有し、フェノール性尿内容物が充分に減少されているPMUから、作用物質−抽出物を取得するための一般的操作処方を挙げる。本発明によれば、高割合の遊離のエストロゲンを含有していてよい老化したPMUからも、高い作用物質含有率を有する高品質抽出物を得ることができることが明らかになる。
本発明の方法のために、WO98/08526と同様に、PMUが、それ自体、それから濃縮により得られるコンセントレート又はそれから膜濾過により得られる保留物(Retentat)として使用されうる。集めた尿から先ず自体公知の方法で、粘液物質及び固体を除去する。固体及び粘液物質を沈殿させ、これらを自体公知の分離法、例えばデカンテーシヨン、分離及/又は濾過により分離除去するのが有利である。従って、このPMUを、例えば自体公知の分離装置、例えば分離器、濾過装置又は沈殿装置上に導入することができる。分離装置としては、例えばサンドベッド(Sandbett)を用いることができるか、又は市販の分離器、例えばノズル−又はチェンバー分離器を使用することができる。所望の場合には、マイクロフィルター又は限外濾過装置も使用でき、これらの使用時には、同時に濾過されたPMUの充分な細菌−及びウイルス不含を達成することができる。
a)半極性ポリアクリルエステル−吸着剤樹脂へのPMUのエストロゲン含分の吸着
直径40mmを有する高さ220mmのカラムに、水中で膨潤された半極性ポリアクリルエステル−吸着剤樹脂(=Fa.Rohm und HaasのアンバーライトXAD−7、粒径0.3〜1.2mm、双極子モーメント1.8デバイ、平均孔径80オングストローム、比表面積約450m2/g乾燥)300mlを充填する。限外濾過装置を通して濾過されたPMU(HPLCを用いて測定されたエストロゲン硫酸塩及びクレゾールの含有率は、後の表を参照)10.5リットル(=35床体積)を、室温で、平均24ml/minの流過速度(=1時間当たり4.8床体積)でカラムに通す。PMUのエストロゲン含分は、このように負荷された半極性吸着剤樹脂−カラム上に完全に吸着される。流出尿液体を、HPLCを用いて、抱合エストロゲンのその含有率(エストロゲン硫酸塩として計算)について検査し、実際にエストロゲン不含であることが判明した。この流出液を捨てる。
負荷吸着剤樹脂−カラムを、13のpH−値を有する水酸化ナトリウム水溶液1.5リットルで洗浄する。このために、アルカリ性洗浄水を平均24.6ml/minの流過速度(=1時間当たり4.9床体積)でカラムに通す。流出する洗浄液を、HPLCを用いて、そのエストロゲン硫酸塩及びクレゾールの含有率について検査する。この検査は、洗浄相の間にカラムに与えられた全てのエストロゲンの5%より少ない分が洗出されることを示している。
溶離液(エタノール/水30:70)1.5リットルを、25ml/minの流速(=1時間当たり5.0床体積)で、実施例表中に記載の溶離温度まで予め加熱されたカラムに通す。流出する溶離物を5フラクシヨンで捕集する。これらのフラクシヨンは、それぞれ300ml(=1床体積)であり、HPCLを用いて、そのエストロゲン硫酸塩及びクレゾールの含有率につき検査する。
再生のために、カラムを、先ずpH12に調節された50%エタノール含有エタノール/水−混合物600mlで、次いでpH12に調節された70%エタノール含有エタノール/水−混合物600mlで、引き続き10%クエン酸ナトリウム水溶液600mlで、かつ、最後に蒸留水600mlで洗浄する。この全ての再生を45℃の温度で行う。カラムは、何回も、例えば40−回まで負荷でき、繰り返し再生することができる。
本発明による方法工程b)及びc)の間の中間洗浄を伴って、例1を繰り返した。
負荷吸着剤樹脂−カラムを水900mlで洗浄する。このために、中性の洗浄水を、平均25.0ml/minの流過速度(=1時間当たり5.0床体積)で、このカラムに通す。
中性洗浄の間のホルモン損失の減少
例1及び2に記載のように、但し冷却下に操作する。この冷却は、中間洗浄の間のホルモン損失の最少化のために役立つ。室温での代わりに氷水を用いて中間洗浄を実施すると、ホルモン損失は約50%までも低下させることができ、殊にこの方法での温度は実際に0℃又はほぼ0℃である。この場合に、室温で存在するカラム内容物に基づき比較的急速に温度上昇する氷水を加えるだけでなく、むしろ全カラムを0℃まで冷却することが推奨される。
中間洗浄に必要な0℃のカラム温度を、先行の塩基洗浄の間の冷却により達成させた、即ち既に塩基洗浄を0℃で行った。この場合に、塩基洗浄の際の0℃での5床体積の施与が、室温のカラム内容物を0℃まで冷却するために充分であった。次いで、引き続く中間洗浄を0℃で進行させることができた。ホルモン損失の最少化と並んで、この塩基洗浄の間のクレゾール分離除去への可能な温度影響も共に検査した。
例3a:
室温での塩基洗浄及び中間洗浄。
0℃での塩基洗浄及び中間洗浄。
第III表は、実験温度及び室温での及び0℃までの熱処理を伴う実験結果を示している。
a)塩基洗浄、即ちクレゾール除去は、0℃までの温度低下により妨げられない。クレゾールの分離除去は、定量的に進行する。第III表は概観を示している。
b)中間洗浄の間のホルモン損失は、温度低下により約50%も減少される。第II表は概観を示している。
前記の例1〜3の方法により、遊離ホルモンの含有率が本発明の方法の使用時にいかに低下するかを検査した。結果は、次の第IVa表(中間洗浄なしの比較実験)及び第IVb表(中間洗浄を伴う本発明による実験)に記載されている。
Claims (18)
- a)場合により粘液物質及び固体物質不含の尿液体、この尿液体の濃縮コンセントレート又はこの尿液体の膜濾過により得られる濃縮尿保留物である尿液体を、この尿液体中に含有する抱合エストロゲンの混合物の吸着のために充分な量のポリマー吸着剤樹脂と接触させ、かつこの抱合エストロゲンの混合物で負荷されたポリマー吸着剤樹脂を、余分の尿液体から分離し、
b)この抱合エストロゲンの混合物で負荷されたポリマー吸着剤樹脂を、少なくとも12.0のpH範囲に調節された洗浄水で洗浄し、かつ
c)この洗浄された吸着剤樹脂を、その上に吸着された抱合エストロゲンの混合物の脱着のために充分な量の溶離液(これは水と混和可能なエーテル、低級アルカノール及び低級脂肪族ケトンの群からの水と混和可能な有機溶剤又は水と混和可能な有機溶剤と場合によりアルカリ性に調節された水とからの混合物である)と接触させ、抱合エストロゲンの天然混合物を含有する溶離物を吸着剤樹脂から分離させ、かつ場合によっては濃縮させる
ことからなる、妊娠雌馬の尿からフェノール性尿内容物の減少された抱合エストロゲンの天然混合物を取得する方法において、
方法工程b)とc)との間で、抱合エストロゲンの混合物で負荷されたポリマー吸着剤樹脂を水で洗浄する中間洗浄を実施することを特徴とする、妊娠雌馬の尿からフェノール性尿内容物の減少された抱合エストロゲンの天然混合物を取得する方法。 - 中間洗浄を、室温を下回る温度で実施することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 中間洗浄を、0〜10℃の温度で実施することを特徴とする、請求項2に記載の方法。
- 中間洗浄を、0℃付近でそれを上回る温度で実施することを特徴とする、請求項2又は3に記載の方法。
- 中間洗浄のために使用される洗浄水を、室温を下回る温度まで予め冷却することを特徴とする、請求項1から4までのいずれか1項に記載の方法。
- 中間洗浄のために使用される洗浄水を、0〜10℃の温度まで予め冷却することを特徴とする、請求項1から5までのいずれか1項に記載の方法。
- 中間洗浄のために使用される洗浄水を、0℃付近でそれを上回る温度まで予め冷却することを特徴とする、請求項1から6までのいずれか1項に記載の方法。
- 方法工程b)で使用されるアルカリ性にされた洗浄水を、室温を下回る温度まで予め冷却することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 方法工程b)で使用されるアルカリ性にされた洗浄水を、0〜10℃の温度まで予め冷却することを特徴とする、請求項8に記載の方法。
- 方法工程b)で使用されるアルカリ性にされた洗浄水を、0℃付近でそれを上回る温度まで予め冷却することを特徴とする、請求項8又は9に記載の方法。
- 中間洗浄及び先行の方法工程b)を、室温を下回る温度で実施することを特徴とする、請求項1から10までのいずれか1項に記載の方法。
- 中間洗浄及び先行の方法工程b)を、0〜10℃の温度で実施することを特徴とする、請求項1から11までのいずれか1項に記載の方法。
- 中間洗浄及び先行の方法工程b)を、0℃付近でそれを上回る温度で実施することを特徴とする、請求項1から12までのいずれか1項に記載の方法。
- ポリマー吸着剤樹脂を収容するための使用装置又はこれを既に含有する装置及び/又は使用PMUを、相応して室温を下回る温度まで予め冷却して使用することを特徴とする、請求項1から13までのいずれか1項に記載の方法。
- ポリマー吸着剤樹脂を収容するための使用装置又はこれを既に含有する装置及び/又は使用PMUを、相応して0〜10℃の温度まで予め冷却して使用することを特徴とする、請求項1から14までのいずれか1項に記載の方法。
- ポリマー吸着剤樹脂を収容するための使用装置又はこれを既に含有する装置及び/又は使用PMUを、相応して0℃付近でそれを上回る温度まで予め冷却して使用することを特徴とする、請求項1から15までのいずれか1項に記載の方法。
- ポリマー吸着剤樹脂として、半極性吸着剤樹脂を使用することを特徴とする、請求項1から16までのいずれか1項に記載の方法。
- ポリマー吸着剤樹脂として、非イオン性の半極性吸着剤樹脂を使用することを特徴とする、請求項1から17までのいずれか1項に記載の方法。
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