JP4233557B2 - セルソーターチップおよびセルソーター - Google Patents
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すなわち、本発明は、以下のセルソーターチップおよびセルソーターを提供する。
(1)基板に形成された細胞を搬送する流路を備え、該流路の上流端に細胞を注入する手段と、前記流路内の細胞を画像信号として検出する第1の細胞識別領域と、該第1の細胞識別領域の下流に形成された時間調整器と、該時間調整器の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第2の細胞識別領域と、該第2の細胞識別領域の下流に形成された前記流路内の細胞を二つの流路に選択的に排出する流路と、からなるセルソーターチップ。
(2)前記第1の細胞識別領域と、前記時間調整器との間の流路に細胞を刺激する機構が付加された上記(1)記載のセルソーターチップ。
(3)基板に形成された細胞を搬送する流路を備え、該流路の上流端に細胞を注入する手段と、該細胞を注入する手段の下流に形成された流路内の細胞を検出する領域と、該細胞を検出する領域の下流に形成された前記検出された細胞を特定するためのインデックス流体を注入する領域と、該インデックス流体を注入する領域の下流に形成された前記インデックス流体を検出する第1のインデックス検出領域と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第1の細胞識別領域と、該第1の細胞識別領域の下流に形成された時間調整器と、該時間調整器の下流に形成された前記インデックス流体を検出する第2のインデックス検出領域と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第2の細胞識別領域と、該第2の細胞識別領域の下流に形成された前記流路内の細胞を二つの流路に選択的に排出する流路と、からなるセルソーターチップ。
(4)前記第1の細胞識別領域と、前記時間調整器との間の流路に細胞を刺激する機構が付加された上記(3)記載のセルソーターチップ。
(5)前記時間調整器が前記流路に連結されたアガロースゲル膜に形成される上記(1)ないし(4)のいずれかに記載のセルソーターチップ。
(6)前記時間調整器が、前記基板に形成された複数の長さの異なる流路と、前記複数の長さの異なる流路の両端に連結されたアガロースゲル膜と、該アガロースゲル膜に連結された前記第1の細胞識別領域に連通した流路と前記第2のインデックス検出領域に連通した流路と、よりなる上記(1)ないし(4)のいずれかに記載のセルソーターチップ。
(7)前記時間調整器が、前記第1の細胞識別領域に連通した流路と前記第2のインデックス検出領域に連通した流路のそれぞれを延伸して配列された流路と、前記流路をバイパスする並列に配列された流路と、該並列に配列された流路に設けられた止め弁と、よりなる上記(1)ないし(4)のいずれかに記載のセルソーターチップ。
(8)基板に形成された細胞を搬送する流路と、該流路の上流端に細胞を注入する手段と、前記流路内の細胞を画像信号として検出する第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第1の細胞識別領域の下流に形成された時間調整器と、該時間調整器の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、前記流路を流下する細胞を分類する手段と、前記第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号と前記第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号とを比較して前記細胞を分類する手段に選択の指示を与えるパソコンと、からなるセルソーター。
(9)前記第1の細胞識別領域と、前記時間調整器との間の流路に細胞を刺激する機構が付加された上記(8)記載のセルソーター。
(10)基板に形成された細胞を搬送する流路と、該流路の上流端に細胞を注入する手段と、該細胞を注入する手段の下流に形成された流路内の細胞を検出する領域で前記流路を流下する細胞の有無を検出する光学装置と、該細胞を検出する領域の下流に形成された前記検出された細胞を特定するためのインデックス流体を注入する領域にインデックス流体を注入する手段と、該インデックス流体を注入する領域の下流に形成された前記インデックス流体を検出する第1のインデックス検出領域で前記流路を流下するインデックス流体の構成を検知する光学装置と、と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第1の細胞識別領域の下流に形成された時間調整器と、該時間調整器の下流に形成された前記インデックス流体を検出する第2のインデックス検出領域で前記流路を流下するインデックス流体の構成を検知する光学装置と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第2の細胞識別領域の下流に形成された前記流路内の細胞を二つの流路に選択的に排出する流路と、前記光学装置から得られる信号を基礎に各種手段を制御し、かつ、前記第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号と前記第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号とを比較して前記細胞を分類する手段に選択の指示を与えるパソコンと、からなるセルソーター。
(11)前記第1の細胞識別領域と、前記時間調整器との間の流路に細胞を刺激する機構が付加された上記(10)記載のセルソーター。
(12)前記時間調整器が前記流路に連結されたアガロースゲル膜に形成される上記(8)ないし(11)のいずれかに記載のセルソーター。
(13)前記時間調整器が、前記基板に形成された複数の長さの異なる流路と、前記複数の長さの異なる流路の両端に連結されたアガロースゲル膜と、該アガロースゲル膜に連結された前記第1の細胞識別領域に連通した流路と前記第2のインデックス検出領域に連通した流路と、よりなる上記(8)ないし(11)のいずれかに記載のセルソーター。
(14)前記時間調整器が、前記第1の細胞識別領域に連通した流路と前記第2のインデックス検出領域に連通した流路のそれぞれを延伸した平行に配列された流路と、該平行に配列された流路をバイパスする並列に配列された流路と、該並列に配列された流路に設けられた止め弁と、よりなる上記(8)ないし(11)のいずれかに記載のセルソーター。
(15)前記インデックス流体が複数の流体を断続的に配列したものである上記(8)ないし(11)のいずれかに記載のセルソーター。
(16)基板に形成された細胞を搬送する流路と、該流路の上流端に細胞を注入する手段と、該細胞を注入する手段の下流に形成された流路内の細胞を検出する領域で前記流路を流下する細胞の有無を検出する光学装置と、該細胞を検出する領域の下流に形成された前記検出された細胞を特定するためのインデックス流体を注入する領域に磁性インデックス流体を注入する手段と、該インデックス流体を注入する領域の下流に形成された前記磁性インデックス流体を検出する第1のインデックス検出領域で前記流路を流下する磁性インデックス流体の構成を検知する装置と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第1の細胞識別領域の下流に形成された時間調整器と、該時間調整器の下流に形成された前記磁性インデックス流体を検出する第2のインデックス検出領域と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第2の細胞識別領域の下流に形成された前記流路内の細胞を二つの流路に選択的に排出する流路と、前記第2の細胞識別領域の下流の流路を前記第1のインデックス検出領域の上流の流路に選択的に接続する流路と、前記選択的に接続する流路に沿って前記磁性インデックス流体に移動磁界を付与する手段と、前記光学装置から得られる信号を基礎に各種手段を制御し、かつ、前記第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号と前記第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号とを比較して前記細胞を分類する手段に選択の指示を与えるパソコンと、からなるセルソーター。
(17)基板に形成された細胞を搬送する流路を備え、該流路の上流端に細胞を注入する手段と、前記流路内の細胞の形状あるいは状態を画像信号として検出する細胞識別領域および検出手段と、該細胞識別領域の下流に形成された前記流路内の細胞に、前期細胞識別の結果に基づいて、不要な細胞のみに細胞を破壊あるいはアポトーシスを誘導する集束光を選択的に照射する光源および光学系からなるセルソーター。
(18)前記光源の波長として、水の吸収がある近赤外光を用いた上記(17)記載のセルソーター。
(19)前記光源の波長として、細胞を変性させ破壊する機能がある近紫外光を用いた上記(17)記載のセルソーター。
(20)前記光源の光の集束手段として、シリンダー型のレンズを用いて、流路に垂直な方向に直線状に流路全体にまたがるように集束線領域を有する上記(17)記載のセルソーター。
図4は本発明のセルソーターチップと、このチップを利用したセルソーターの実施例1の概要を示す平面図である。実施例1は図3で説明した処理工程に基づく実施例(ただし、破線で示す処理は含まないものとした)である。細胞を流路に添加した後に細胞間にスペーサーを導入し、細胞を1個ずつ区切る機構と、個々の細胞に刺激を与える機構と、刺激を与える前後で細胞の状態を測定する、すなわち細胞スペーサーによるインデックスで特定し、細胞状態を2回測定する機構を有するセルソーターである。
実施例2では、細胞刺激領域59が物理的な刺激を与える構成である場合の例を説明する。セルソーターの構成としては、図4に示す細胞刺激領域59が変更される他は、実施例1と同じ構成である。物理的な刺激の第1例では通過する細胞を電気的に刺激する方法である。この場合には、図4に示した流路64−3から刺激物質溶液溜め168の構成は不要となり、代わりに流路64に電極を設けることが必要となる。図9は流路64に配置された細胞刺激領域59に電極59−2と59−3を設けた例を示す平面図である。電極59−2と59−3にはそれぞれ外部から電気的な入力を与えるためのリード部分59−4と59−5が接続されている。いずれも薄膜であり、基板61を成形した段階で流路64の細胞刺激領域59の領域に作成される。電極59−2と59−3は基板上にクロムを蒸着した後に白金を蒸着して作成する。電気刺激としては、細胞が通過するときに電極59−2と59−3間に数kHzから数十MHzの高周波、直流矩形波など必要に応じて使用する。
実施例3では、他のインデックス用オイルのパターンの作成例を示す。実施例1では、インデックス用オイルの長さを細胞に対応させるものとして説明したが、実施例3では“1”、“0”でコード化されたパターンとする例について、図11を参照して説明する。図11は、図4の細胞検出領域56の下流の流路64に連結されているインデックス用のオイルが供給される流路64−2に対応する部分を示す図である。流路64−2の流路64とオイル添加口ハウジング63−2との間に流路64−4を連結し、流路64−4の端部には水添加口ハウジング63−4を設ける。62−4は流路64−4の端部から基板61の表面まで連通している開口である。水添加口ハウジング63−4の開口62−4に水供給路67−4を介して、開口62−4にポンプ165-4から送り込まれる液を供給する。169は水溜めである。ポンプ165-4はポンプ165-2と同様にパソコン300の与える信号により操作される。
実施例4は、1回の細胞刺激と流路60−1を細胞が通過する時間によるインキュベーション時間では、十分な細胞の変化が期待できないとき、n0回の細胞刺激とn0回の流路60−1を細胞が通過する時間によるインキュベーションを実行するセルソーターの例を示す。
上述の実施例では、時間調整器60の流路60−1の長さが固定されていた。このため、インキュベーション時間は、流路60−1を細胞が通過する時間で、常に一定となり、使用者の都合で変えることができない。細胞の種類や刺激物質によってこのインキュベーション時間を変えたい場合も多い。基板1の成形時に、これに対応するためには、流路60−1の長さを変えた多種類の金型を用意する必要がある。一方、基板1上でインキュベーション時間を可変にできるようになれば、色々な長さの流路60−1を持つチップを予め用意しておく必要が無いので、製造者にとって好都合であるとともに、使用者にとっても、特異なケースの注文により高価なものを購入する必要がなくなり、ユーザーにとっても利点がある。実施例5ではセルソーターチップの時間調整器60の流路60−1の長さを可変として、任意の時間でインキュベーションを行なえるようにする1例に関する。
Claims (9)
- 基板に形成された細胞を搬送する流路と、該流路の上流端に細胞を注入する手段と、前記流路内の細胞を画像信号として検出する第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第1の細胞識別領域の下流に形成された時間調整器と、該時間調整器の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、前記流路を流下する細胞を分類する手段と、前記第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号と前記第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号とを比較して前記細胞を分類する手段に選択の指示を与えるパソコンと、からなるセルソーター。
- 前記第1の細胞識別領域と、前記時間調整器との間の流路に細胞を刺激する機構が付加された請求項1記載のセルソーター。
- 基板に形成された細胞を搬送する流路と、該流路の上流端に細胞を注入する手段と、該細胞を注入する手段の下流に形成された流路内の細胞を検出する領域で前記流路を流下する細胞の有無を検出する光学装置と、該細胞を検出する領域の下流に形成された前記検出された細胞を特定するためのインデックス流体を注入する領域にインデックス流体を注入する手段と、該インデックス流体を注入する領域の下流に形成された前記インデックス流体を検出する第1のインデックス検出領域で前記流路を流下するインデックス流体の構成を検知する光学装置と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第1の細胞識別領域の下流に形成された時間調整器と、該時間調整器の下流に形成された前記インデックス流体を検出する第2のインデックス検出領域で前記流路を流下するインデックス流体の構成を検知する光学装置と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第2の細胞識別領域の下流に形成された前記流路内の細胞を二つの流路に選択的に排出する流路と、前記光学装置から得られる信号を基礎に各種手段を制御し、かつ、前記第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号と前記第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号とを比較して前記細胞を分類する手段に選択の指示を与えるパソコンと、からなるセルソーター。
- 前記第1の細胞識別領域と、前記時間調整器との間の流路に細胞を刺激する機構が付加された請求項3記載のセルソーター。
- 前記時間調整器が前記流路に連結されたアガロースゲル膜に形成される請求項1ないし4のいずれかに記載のセルソーター。
- 前記時間調整器が、前記基板に形成された複数の長さの異なる流路と、前記複数の長さの異なる流路の両端に連結されたアガロースゲル膜と、該アガロースゲル膜に連結された前記第1の細胞識別領域に連通した流路と前記第2のインデックス検出領域に連通した流路と、よりなる請求項1ないし4のいずれかに記載のセルソーター。
- 前記時間調整器が、前記第1の細胞識別領域に連通した流路と前記第2のインデックス検出領域に連通した流路のそれぞれを延伸した平行に配列された流路と、該平行に配列された流路をバイパスする並列に配列された流路と、該並列に配列された流路に設けられた止め弁と、よりなる請求項1ないし4のいずれかに記載のセルソーター。
- 前記インデックス流体が複数の流体を断続的に配列したものである請求項1ないし4のいずれかに記載のセルソーター。
- 基板に形成された細胞を搬送する流路と、該流路の上流端に細胞を注入する手段と、該細胞を注入する手段の下流に形成された流路内の細胞を検出する領域で前記流路を流下する細胞の有無を検出する光学装置と、該細胞を検出する領域の下流に形成された前記検出された細胞を特定するためのインデックス流体を注入する領域に磁性インデックス流体を注入する手段と、該インデックス流体を注入する領域の下流に形成された前記磁性インデックス流体を検出する第1のインデックス検出領域で前記流路を流下する磁性インデックス流体の構成を検知する装置と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第1の細胞識別領域の下流に形成された時間調整器と、該時間調整器の下流に形成された前記磁性インデックス流体を検出する第2のインデックス検出領域と、該インデックス検出領域の下流に形成された前記流路内の細胞を画像信号として検出する第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段と、該第2の細胞識別領域の下流に形成された前記流路内の細胞を二つの流路に選択的に排出する流路と、前記第2の細胞識別領域の下流の流路を前記第1のインデックス検出領域の上流の流路に選択的に接続する流路と、前記選択的に接続する流路に沿って前記磁性インデックス流体に移動磁界を付与する手段と、前記光学装置から得られる信号を基礎に各種手段を制御し、かつ、前記第1の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号と前記第2の細胞識別領域で前記流路を流下する細胞を撮像する手段が与える画像信号とを比較して前記細胞を分類する手段に選択の指示を与えるパソコンと、からなるセルソーター。
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