JP4228230B2 - Method for producing liposome suspension and use using liposome - Google Patents
Method for producing liposome suspension and use using liposome Download PDFInfo
- Publication number
- JP4228230B2 JP4228230B2 JP2004323697A JP2004323697A JP4228230B2 JP 4228230 B2 JP4228230 B2 JP 4228230B2 JP 2004323697 A JP2004323697 A JP 2004323697A JP 2004323697 A JP2004323697 A JP 2004323697A JP 4228230 B2 JP4228230 B2 JP 4228230B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- liposome
- liposomes
- carbon dioxide
- producing
- agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
本発明は、リポソームの製造方法、より詳しくはエタノール、クロロホルム等の有機溶剤を用いない効率的なリポソームの製造方法および製造されたリポソームを用いた用途に関する。
The present invention relates to a method for producing liposomes, more specifically, an efficient method for producing liposomes without using an organic solvent such as ethanol and chloroform, and an application using the produced liposomes.
リポソーム（liposome）は、図１に示すように、リン脂質と水とを混合して得られるリン脂質の単層あるいは複数層からなる閉鎖小胞体であり、内部の水層あるいは脂質層に種々の物質を内包できる。例えば、水溶性薬剤はその中心部または2重層の間に存在でき、一方、親油性薬剤は2重層中に含有される。
リポソームは生体膜と類似の脂質から構成されているため、細胞膜と結合しやすく、生体親和性がある。このため、医薬品としては癌治療や遺伝子治療の際のDNAのキャリヤーとしてや、薬物徐放機能を持つ薬剤の担体として利用できる。また、化粧品としては水分や種々の薬効成分を角質層に運搬できる。また、リポソーム化によって、本来不安定で失活しやすい薬効成分を長期間安定に保つことができる。また、バイオセンサーなどへも広く利用することが出来る、
As shown in FIG. 1, a liposome is a closed endoplasmic reticulum composed of a single layer or a plurality of layers of phospholipid obtained by mixing phospholipid and water. Can contain substances. For example, a water-soluble drug can be present in the center or between the two layers, while a lipophilic drug is contained in the two layers.
Liposomes are composed of lipids similar to biological membranes, and therefore easily bind to cell membranes and have biocompatibility. Therefore, it can be used as a drug as a carrier for DNA in cancer therapy or gene therapy, or as a drug carrier having a drug sustained release function. Moreover, as cosmetics, moisture and various medicinal ingredients can be conveyed to the stratum corneum. In addition, the medicinal components that are inherently unstable and easily deactivated can be kept stable for a long period of time by liposome formation. It can also be widely used for biosensors, etc.
薬効成分を封入したリポソームを調製する方法は、以下に示すように多くの方法が開示されている。
Bangham法（薄膜法）：
図２に示したように脂質をクロロホルム等の有機溶媒に溶解した後、減圧下、有機溶媒を留去し脂質薄膜を得る。
ここに封入物質の水溶液を加えて、更に、超音波乳化機やvortexミキサー等の機械力で水和分散させることでリポソームを得る。この方法で、親油成分を内包させる場合は、それらを有機溶剤中にリン脂質とともに溶解させておく。このときの封入物質の内包率は数％程度である。
Many methods for preparing liposomes encapsulating medicinal ingredients have been disclosed as shown below.
Bangham method (thin film method):
As shown in FIG. 2, after dissolving the lipid in an organic solvent such as chloroform, the organic solvent is distilled off under reduced pressure to obtain a lipid thin film.
The liposome is obtained by adding an aqueous solution of the encapsulated substance and further hydrating and dispersing it with a mechanical force such as an ultrasonic emulsifier or a vortex mixer. In this method, when lipophilic components are included, they are dissolved together with phospholipids in an organic solvent. The encapsulation rate of the encapsulated material at this time is about several percent.
逆相蒸発法：
図３に示したように、脂質をジエチルエーテルやクロロホルムに溶解し、封入物質を含む水溶液を加えてW/Oエマルジョンとする。減圧下、エマルジョン中の有機溶媒を除去し、更に、水を添加しリポソームを得る。
この他に、脂質のエタノール溶液を、注射器を用いて相転移温度以上で、水溶液中に注入する方法（エタノール注入法）、エーテルに溶解した脂質を、50〜60℃に保った封入物を含有する水溶液に一定速度で注入することで、エーテルを蒸発させながらリポソームを得る方法（エーテル蒸発法）等が知られている。
また、脂質を、封入物を含む水相中に、予め、ホモミキサーで混合分散しておき、更に、高圧ホモジナイザーや超音波乳化機などの、高エネルギーを印加できる乳化機で2次処理することでもリポソームを得ることができる。
Reversed phase evaporation method:
As shown in FIG. 3, lipid is dissolved in diethyl ether or chloroform, and an aqueous solution containing an encapsulating substance is added to form a W / O emulsion. Under reduced pressure, the organic solvent in the emulsion is removed, and water is further added to obtain liposomes.
In addition, a method in which an ethanol solution of lipid is injected into an aqueous solution at a temperature higher than the phase transition temperature by using a syringe (ethanol injection method), and inclusions in which lipid dissolved in ether is kept at 50 to 60 ° C. A method of obtaining liposomes by evaporating ether by injecting into an aqueous solution at a constant rate (ether evaporation method) is known.
In addition, the lipid is mixed and dispersed in advance in a water phase containing inclusions with a homomixer, and further subjected to secondary treatment with an emulsifier capable of applying high energy, such as a high-pressure homogenizer or an ultrasonic emulsifier. But liposomes can be obtained.
以上のすでに開示されているリポソームの調製方法と、これらにより得られたリポソーム製剤には、実用上、特に、これらを医薬品や化粧料や皮膚外用剤として使用する場合に、次の問題がある。
リン脂質を溶解する場合に有機溶剤を使用するので、最終製品からこれらを完全に除去することが困難であり、化粧料や皮膚外用剤に応用する場合、安全性の面で支障をきたす。
有機溶媒を使用する方法は、調製中に有機溶媒が飛散し、環境に影響を与える。また、これを回避するための溶媒回収装置等にコストがかかる。
工程が煩雑で工業スケールでの製造が困難である。特に、薄膜法は、有機溶剤を除去してリン脂質薄膜を得る工程が、工業スケールでは、実用上不可能である。
超音波乳化機や高圧ホモジナイザー等の強い機械力を使用して、リン脂質と、場合によりそこに親油性の内包物を予め混合した油相を、直接水相に分散させる方法は、工程が簡便で、工業スケールでの製造に適するが、リポソームの生成率が十分でなく、内包率も小さい。
また、攪拌の際に発生する熱や高せん断力により、不安定な薬効成分を封入する場合、分解や変性の問題が生ずる。
上記の方法は、簡便で工業スケールでの製造に適するので汎用されている方法であるが、得られたリポソームの安定性が低く、これを化粧料や皮膚外用剤として直接応用することは困難である。特に、このリポソームを化粧料や皮膚外用剤の製剤に配合すると、乳化剤等他の成分の影響で、安定性が著しく低下することが知られている。
The above-described methods for preparing liposomes and the liposome preparations obtained by these methods have the following problems in practical use, particularly when they are used as pharmaceuticals, cosmetics, or skin external preparations.
Since organic solvents are used when phospholipids are dissolved, it is difficult to completely remove them from the final product, which causes problems in terms of safety when applied to cosmetics and external preparations for skin.
In the method using an organic solvent, the organic solvent is scattered during the preparation, which affects the environment. In addition, a cost is required for a solvent recovery apparatus for avoiding this.
The process is complicated and it is difficult to manufacture on an industrial scale. In particular, in the thin film method, the process of removing the organic solvent to obtain the phospholipid thin film is practically impossible on an industrial scale.
Using a strong mechanical force such as an ultrasonic emulsifier or a high-pressure homogenizer, the method of dispersing the phospholipid and, in some cases, the lipophilic inclusions in advance in the oil phase, directly in the aqueous phase is a simple process. However, it is suitable for production on an industrial scale, but the production rate of liposomes is not sufficient and the encapsulation rate is small.
In addition, when an unstable medicinal component is encapsulated by heat or high shear force generated during stirring, problems of decomposition and denaturation occur.
The above method is simple and suitable for production on an industrial scale, so it is a widely used method. However, the stability of the obtained liposome is low, and it is difficult to directly apply it as a cosmetic or a skin external preparation. is there. In particular, it is known that when this liposome is blended into a cosmetic preparation or an external preparation for skin, the stability is significantly lowered due to the influence of other components such as an emulsifier.
超臨界流体を用いる方法では、図４に示すフレデリクソン等が提唱する製造法がある。この製造法の代表例は、脂質と超臨界炭酸ガスとメタノールの混合物を、減圧弁で減圧しながら、水溶液を混合し、リポソームを生成する。本発明者がこれを改良した発明は、すでに出願している（特許文献３参照）。
さらに、本発明者が過去に提唱した方法の概要を図５に示す。これは、脂質／補助溶媒（代表的にはエタノール）／ｓｃＣＯ２の均一な混合物（必要な場合には親油性物質、リポソームを修飾する低分子ないし高分子の修飾物質を含む）を作成し、そこに内包物質を含んだ水溶液を滴下して、二酸化炭素中に水の粒が分散したＨ２Ｏ／ｓｃＣＯ２エマルションを作成し、さらに水溶液を滴下して相を反転させ、ｓｃＣＯ２／Ｈ２Ｏエマルションを作成する。次いで減圧してリポソーム水溶液を得るものである（特許文献１及び特許文献２参照）。しかし、この方法では、エタノールが必要であるばかりか、水溶液の滴下に時間がかかるため、効率が悪いものであった。
As a method using a supercritical fluid, there is a manufacturing method proposed by Frederickson shown in FIG. In a typical example of this production method, a solution of lipid, supercritical carbon dioxide, and methanol is mixed with an aqueous solution while reducing the pressure with a pressure reducing valve to produce a liposome. An invention in which the present inventor has improved this has already been filed (see Patent Document 3).
Furthermore, the outline | summary of the method which this inventor advocated in the past is shown in FIG. This creates a homogenous mixture of lipid / co-solvent (typically ethanol) / scCO 2 (including lipophilic substances if necessary, low or high molecular weight modifying substances that modify liposomes), An aqueous solution containing the encapsulated substance is dropped there to create an H 2 O / scCO 2 emulsion in which water particles are dispersed in carbon dioxide, and the aqueous solution is further dropped to reverse the phase, scCO 2 / H 2. Create an O emulsion. Then, the pressure is reduced to obtain an aqueous liposome solution (see Patent Document 1 and Patent Document 2). However, in this method, not only ethanol is required, but it takes time to drop the aqueous solution, so that the efficiency is poor.
本発明は、医薬品、化粧料や皮膚外用剤として実用に耐えうる安定性と、親水性薬効成分や親油性薬効成分を安定かつ高率で内包したリポソームを製造するために、次の課題を解決することを目的としている。
薬効成分の安定性を損なうことのない程度の少ない機械力で、リポソームを調製する。かつ、工業スケールでの製造に適する方法とする。
リポソームの生成率と薬効成分の内包率をできるだけ高める。リポソームと内包成分の安定性を確保する。
製品中に残留する懸念のある有機溶媒を使用しない調製方法とする。有機溶媒が環境に排出されない方法とする。
リポソームの安定性を向上させ、また、DNAなどのアニオン性物質との結合状態を安定化させるために、表面にカチオンを持ったリポソームを、有機溶媒を使用せず、工業スケールで、効率よく製造する方法とする
The present invention solves the following problems in order to produce liposomes that are stable in practical use as pharmaceuticals, cosmetics, and external preparations for skin, and stably and highly encapsulated hydrophilic medicinal ingredients and lipophilic medicinal ingredients. The purpose is to do.
Liposomes are prepared with a small mechanical force that does not impair the stability of the medicinal component. And it is set as the method suitable for manufacture on an industrial scale.
Increase the production rate of liposomes and the encapsulation rate of medicinal ingredients as much as possible. Ensure the stability of liposomes and encapsulated components.
Use a preparation method that does not use organic solvents that may remain in the product. A method that prevents organic solvents from being discharged into the environment.
In order to improve the stability of liposomes and to stabilize the binding state with anionic substances such as DNA, liposomes with cations on the surface are efficiently produced on an industrial scale without using organic solvents. And how to
上記目的を達成するために本発明は、図６に示すように、1種以上の膜脂質と、内包したい物質が溶けているか分散している水溶液を、圧力容器に入れ、圧力容器中に炭酸ガスとを導入すると、水溶液中に脂質を界面活性剤とした。ＣＯ２／Ｈ２Ｏのエマルションが得られる。次いで、圧力容器中から炭酸ガスＣＯ２を抜くと、リポソーム懸濁液が得られる。
すなわち、本発明は、リン脂質及び／または糖脂質を膜脂質として用い、親水性薬効成分及び／または親油性薬効成分の1種以上を内包物とし、その調製に際し、水、内包物、リポソームを修飾するキトサン及び／またはそれらに１種類以上の溶解助剤を溶解ないし分散した、実質的に有機溶媒を含まない水溶液と、炭酸ガスとを圧力容器に封入して、温度０〜１００℃、圧力３０〜５００ 気圧、０．５〜５時間保持しながら撹拌し、水中に二酸化炭素のエマルションが分散したＣＯ２／Ｈ２Ｏのエマルションを得、次いで、圧力容器中から炭酸ガスを抜くことにより残留ないし同伴して流出する水相中にリポソームが分散した懸濁液を得ることを特徴とするリポソームの製造方法である。
また、本発明においては、二酸化炭素は高圧で水に溶解し、水を酸性にする。従って、中性水では水溶せず中性水には溶解しない物質も、酸性水中では解離して溶解させることができる。このようにして溶解した低分子、およびまたは高分子はリポソームに取り込まれ、リポソーム表面をプラスに帯電させカチオンリポソームを形成する。
カチオンリポソームは通常のリポソームに比べても安定である。また、負に帯電するDNAなどと強く相互作用し、遺伝子治療などにおける有力な遺伝子ベクターとなる。
このような物質としては、キトサン、コラーゲン、生体ポリアミン、ポリ-L-リシン、プルラン、コレステロールの１種類以上を挙げることができる。
さらに、本発明は、リポソームに内包される親水性薬効成分又は親油性薬効成分が、抗酸化剤、抗菌剤、抗炎症剤、血行促進剤、美白剤、肌荒れ防止剤、老化防止剤、発毛促進剤、保湿剤、ホルモン剤、ビタミン類、色素、およびタンパク質類からなる群れより選ばれる1種以上とすることができる。
In order to achieve the above object, the present invention, as shown in FIG. 6, puts one or more kinds of membrane lipids and an aqueous solution in which a substance to be encapsulated is dissolved or dispersed in a pressure vessel, When gas was introduced, lipid was used as a surfactant in the aqueous solution. An emulsion of CO 2 / H 2 O is obtained. Then, when removing the carbon dioxide gas CO 2 from the pressure vessel, the liposome suspension is obtained.
That is, the present invention uses a phospholipid and / or glycolipid as membrane lipids, and inclusions of one or more hydrophilic medicinal ingredient and / or lipophilic medicinal properties, upon its preparation, water, inclusions, liposomes A chitosan to be modified and / or an aqueous solution substantially free of an organic solvent in which one or more dissolution aids are dissolved or dispersed and carbon dioxide gas are sealed in a pressure vessel, and the temperature is 0 to 100 ° C., pressure Stirring while maintaining at 30 to 500 atmospheres for 0.5 to 5 hours to obtain an emulsion of CO 2 / H 2 O in which an emulsion of carbon dioxide is dispersed in water, and then remaining by removing carbon dioxide from the pressure vessel or entrained liposomes in the aqueous phase flowing out the Ru manufacturing method der liposomes, characterized in that to obtain a suspension dispersed.
In the present invention, carbon dioxide is dissolved in water at high pressure to make water acidic. Therefore, substances that are not soluble in neutral water but not soluble in neutral water can be dissociated and dissolved in acidic water. The small molecule and / or polymer dissolved in this manner are taken into the liposome, and the surface of the liposome is positively charged to form a cationic liposome.
Cationic liposomes are more stable than ordinary liposomes. In addition, it strongly interacts with negatively charged DNA and the like, and becomes a powerful gene vector in gene therapy.
Examples of such substances include one or more of chitosan, collagen, biological polyamine, poly-L-lysine, pullulan, and cholesterol.
Further, in the present invention, the hydrophilic medicinal component or lipophilic medicinal component encapsulated in the liposome is an antioxidant, an antibacterial agent, an anti-inflammatory agent, a blood circulation promoter, a whitening agent, a rough skin preventing agent, an antiaging agent, a hair growth It can be at least one selected from the group consisting of promoters, moisturizers, hormones, vitamins, pigments, and proteins.
また、本発明は、リン脂質が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、カルジオリピン、卵黄レシチン、水添卵黄レシチン、大豆レシチン、水添大豆レシチン等のグリセロリン脂質類、スフィンゴエミリン、セラミドホスホリルエタノールアミン、セラミドホスホリルグリセロールからなる群より選ばれるスフィンゴリン脂質類の１種以上、プラスマローゲン及び／またはこれらの混合物であることができる。
さらに本発明は、糖脂質が、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド硫酸エステル等のグリセロ脂質類、ガラクトシルセラミド、ガラクトシルセラミド硫酸エステル、ラクトシルセラミド、ガングリオシドG7、ガングリオシドG6、ガングリオシドG4等のスフィンゴ糖脂質類、およびまたはこれらの混合物であることができる。
また、本発明は、溶解助剤が、グリコール、グリコールエーテル、グリコールエステル、炭酸アルキルの1種以上であることができる。
さらに本発明は、親水性薬効成分が、アスコルビン酸、およびアスコルビン酸誘導体の任意の1種以上であることができる。
また、さらに本発明は、これらの各製造方法により得られるリポソームを用いたリポソーム製剤、これらを含有する化粧品、内服医薬品、外用医薬品でもある。
In the present invention, phospholipids are glycerophospholipids such as phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidic acid, phosphatidylglycerol, phosphatidylinositol, cardiolipin, egg yolk lecithin, hydrogenated egg yolk lecithin, soybean lecithin, hydrogenated soybean lecithin and the like. , Sphingoemilin, ceramide phosphorylethanolamine, one or more sphingophospholipids selected from the group consisting of ceramide phosphorylglycerol, plasmalogen and / or a mixture thereof.
Furthermore, the present invention provides glycolipids such as digalactosyl diglyceride, glycerolipids such as galactosyl diglyceride sulfate, galactosylceramide, galactosylceramide sulfate, lactosylceramide, ganglioside G7, ganglioside G6, ganglioside G4 and other sphingoglycolipids, And / or a mixture thereof.
In the present invention, the dissolution aid may be one or more of glycol, glycol ether, glycol ester, and alkyl carbonate.
Furthermore, in the present invention, the hydrophilic medicinal component can be any one or more of ascorbic acid and ascorbic acid derivatives.
Furthermore, the present invention is also a liposome preparation using liposomes obtained by each of these production methods, and cosmetics, internal medicines and external medicines containing these.
本発明のリポソーム懸濁液の製造方法は、有機溶媒を使用しないで、一段階で、高濃度のリポソーム懸濁液、修飾リポソーム懸濁液を効率よく大量にを得ることができる。また、この方法を用いて安定なキトサン修飾リポソームリポソーム懸濁液を得ることができる。
本発明の製造方法により得られたリポソームは、そのままで、また既存の製剤に混合することで、医薬品、化粧料や皮膚外用剤として使用することができる。
既存の製剤に混合する場合は、製剤の最終段階で混合しても良く、製剤の途中、例えば、水相を添加する際に、混合しても良い。混合条件は、通常の化粧料や皮膚外用剤を製造する条件がそのまま適用できる。
さらに、薬効成分を内包した本発明の製造方法により得られたリポソームは、既存の製剤に混合してもリポソームが安定に保たれ、内包成分の安定性が損なわれることがない。
The method for producing a liposome suspension of the present invention can efficiently obtain a large amount of a high-concentration liposome suspension and a modified liposome suspension in one step without using an organic solvent. In addition, a stable chitosan-modified liposome liposome suspension can be obtained using this method.
The liposome obtained by the production method of the present invention can be used as it is, or by mixing it with an existing preparation, so that it can be used as a pharmaceutical, a cosmetic or a skin external preparation.
In the case of mixing with an existing preparation, it may be mixed at the final stage of the preparation, or may be mixed during the preparation, for example, when an aqueous phase is added. As the mixing conditions, the conditions for producing ordinary cosmetics and external preparations for skin can be applied as they are.
Furthermore, liposomes obtained by the production method of the present invention encapsulating medicinal components can be kept stable even when mixed with existing preparations, and the stability of the encapsulated components is not impaired.
本発明においては、脂質膜の成分として、天然あるいは人工のリン脂質、およびまたは糖脂質の任意の1種以上が好適に使用できる。発明において用いることが出来るリン脂質としては、大豆、卵黄等から得られるレシチン、リゾレシチンおよびまたはこれらの水素添加物、水酸化物等の誘導体が挙げられる。更には、ホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン等が挙げられる。その際に、構成リン脂質は、特に限定されず、また、構成脂肪酸は、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸のどちらでもよく特に限定されない。
発明において用いることが出来る糖脂質としては、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド硫酸エステル等のグリセロ脂質、ガラクトシルセラミド、ガラクトシルセラミド硫酸エステル、ラクトシルセラミド、ガングリオシドG7、ガングリオシドG6、ガングリオシドG4等のスフィンゴ糖脂質等が好適に使用できる。
In the present invention, any one or more of natural or artificial phospholipids and / or glycolipids can be suitably used as the lipid membrane component. Examples of the phospholipid that can be used in the invention include lecithin, lysolecithin obtained from soybean, egg yolk and the like, and derivatives thereof such as hydrogenated products and hydroxides. Furthermore, phosphatidylcholine, phosphatidic acid, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphatidylethanolamine, phosphatidylglycerol, sphingomyelin and the like can be mentioned. At that time, the constituent phospholipid is not particularly limited, and the constituent fatty acid may be either a saturated fatty acid or an unsaturated fatty acid, and is not particularly limited.
Examples of glycolipids that can be used in the invention include glycerolipids such as digalactosyl diglyceride and galactosyl diglyceride sulfate, galactosylceramide, galactosylceramide sulfate, lactosylceramide, ganglioside G7, ganglioside G6, ganglioside G4 and other sphingoglycolipids. Can be suitably used.
本発明のリポソームを調製するには、1種以上の膜脂質と、内包したい物質が溶けている水溶液を、圧力容器に入れ、圧力容器中に炭酸ガスとを導入すると、水溶液中に脂質を界面活性剤とした。ＣＯ２／Ｈ２Ｏのエマルションが得られる。次いで、圧力容器中から炭酸ガスＣＯ２を抜くと、リポソーム懸濁液が得られる。その際に、水溶液中にグリコール、グリコールエーテル、グリコールエステル、炭酸アルキルの1種以上を併用すると、リポソームの形成がさらに促される場合があることが判明した。
好ましいグリコール、グリコールエーテル、グリコールエステルとしては、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、1.3-ブタンジオール、エチルカービトール、ブチルカービトール、ジエチレングリコールジエチルエーテル、これらグリコール類のアルキルエステル等が挙げられる。
好ましい炭酸アルキルとしては、プロピレンカーボネート、ジエチルカーボネート等の炭酸アルキルが挙げられる。
本発明のリポソームには、親水性薬効成分、およびまたは親油性薬効成分を内包させることで、化粧料、皮膚外用剤に好適に使用できる。好適な薬効成分としては、抗酸化剤、抗菌剤、抗炎症剤、血行促進剤、美白剤、肌荒れ防止剤、老化防止剤、発毛促進剤、保湿剤、ホルモン剤、ビタミン類、色素、およびタンパク質類が挙げられる。
In order to prepare the liposome of the present invention, an aqueous solution in which one or more membrane lipids and a substance to be encapsulated are dissolved is placed in a pressure vessel, and carbon dioxide gas is introduced into the pressure vessel. The activator was used. An emulsion of CO 2 / H 2 O is obtained. Then, when removing the carbon dioxide gas CO 2 from the pressure vessel, the liposome suspension is obtained. At that time, it has been found that the use of one or more of glycol, glycol ether, glycol ester, and alkyl carbonate in the aqueous solution may further promote the formation of liposomes.
Preferred glycols, glycol ethers, and glycol esters include ethylene glycol, propylene glycol, dipropylene glycol, 1.3-butanediol, ethyl carbitol, butyl carbitol, diethylene glycol diethyl ether, alkyl esters of these glycols, and the like.
Preferred alkyl carbonates include alkyl carbonates such as propylene carbonate and diethyl carbonate.
The liposome of the present invention can be suitably used for cosmetics and skin external preparations by encapsulating a hydrophilic medicinal component and / or a lipophilic medicinal component. Suitable medicinal ingredients include antioxidants, antibacterial agents, anti-inflammatory agents, blood circulation promoters, whitening agents, rough skin prevention agents, anti-aging agents, hair growth promoters, moisturizers, hormone agents, vitamins, pigments, and Examples include proteins.
本発明において用いることが出来るリポソームを修飾する低分子ないし高分子の修飾物質「中性水では水溶せず、酸性水に溶解する物質」としては、キトサン、コラーゲン、生体ポリアミン、ポリ-L-リシン、プルラン、コレステロール等があげられる。好適にはキトサンを挙げることができる。
発明において用いることが出来る好適な抗酸化剤としては、トコフェロール類、天然ビタミンE類およびそれらの脂肪酸エステル類、BHT、BHA、ヒドロキシアニソール、t-ブチルハイドロキノン、ノルジヒドログアヤレチン、没食子酸アルキルエステル類、チオジプロピオン酸ジラウリル、トリルビグアナイド、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、エリソルビン酸およびその塩類、L-アスコルビン酸およびその塩類、脂肪酸アスコルビル類、茶エキス、リンゴエキス等のカテキン類、カテキン誘導体類、およびポリフェノール類等が挙げられる。また、チオタイン、グルタチオン、チオタウリン、ヒポタウリン等の還元性基を有するアミノ酸も好ましい。
また、発明において用いることが出来る好適な抗菌剤としては、安息香酸、ウンデシレン酸、サリチル酸、ソルビン酸、デヒドロ酢酸、パラオキシ安息香酸アルキルエステル等の有機酸およびその塩類や誘導体類、イソプロピルメチルフェノール、クロルヘキシジン、グルコン酸クロルヘキシジン、フェノール、クレゾール、チモール、トリクロサン等のフェノール類、ヒノキチオール、ヒバオイル、茶エキス、リンゴエキス、グレープフルーツ種子エキス等の植物抽出油類、植物抽出物類、カテキン類、カテキン誘導体類、およびポリフェノール類等が挙げられる。また、クロラミンＴ、ジンクピリチオン等も好ましい。
Low-molecular or high-molecular-weight modifying substances that modify liposomes that can be used in the present invention "substances that are not soluble in neutral water but soluble in acidic water" include chitosan, collagen, biological polyamines, poly-L-lysine , Pullulan, cholesterol and the like. A preferred example is chitosan.
Suitable antioxidants that can be used in the invention include tocopherols, natural vitamin Es and their fatty acid esters, BHT, BHA, hydroxyanisole, t-butylhydroquinone, nordihydroguaiaretin, gallic acid alkyl esters Catechins such as dilauryl thiodipropionate, tolylbiguanide, sodium bisulfite, sodium bisulfite, sodium pyrosulfite, erythorbic acid and its salts, L-ascorbic acid and its salts, fatty acid ascorbyl, tea extract, apple extract, Examples include catechin derivatives and polyphenols. Also preferred are amino acids having a reducing group such as thiotain, glutathione, thiotaurine, hypotaurine.
Suitable antibacterial agents that can be used in the invention include benzoic acid, undecylenic acid, salicylic acid, sorbic acid, dehydroacetic acid, paraoxybenzoic acid alkyl ester and other organic acids and salts and derivatives thereof, isopropylmethylphenol, chlorhexidine , Chlorhexidine gluconate, phenols such as phenol, cresol, thymol, triclosan, plant extract oils such as hinokitiol, hiba oil, tea extract, apple extract, grapefruit seed extract, plant extracts, catechins, catechin derivatives, and Examples include polyphenols. Also preferred are chloramine T, zinc pyrithione, and the like.
また、発明において用いることが出来る好適な抗炎症剤としては、ε―アミノカプロン酸、トラネキサム酸、トラネキサム酸アルキルエステル、グルチルリチン酸、グリチルリチン酸アルキルエステル、グリチルレチン酸、グリチルレチン酸アルキルエステル、塩化リゾチーム、グアイアズレン、ヒドロコルチゾン、シソエキス、イチョウエキス、海藻エキス等の植物抽出物等が挙げられる。
またさらに、発明において用いることが出来る好適な血行促進剤としては、イチョウエキス、センブリエキス、セリコサイド、マロニエエキス等の植物抽出物、トコフェロール類、およびビタミンＥとその誘導体、γ−オリザノール等が挙げられる。
またさらに、発明において用いることが出来る好適な美白剤としては、L-アスコルビン酸、L-アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム、アスコルビン酸硫酸エステルナトリウム、アスコルビン酸グリセリル（ポリグリセリル）エーテル類、アスコルビン酸グリセリル（ポリグリセリル）エステル類、アスコルビン酸グルコシド（グリコシド）類、アスコルビン酸アルキルエステル類、アスコルビン酸アルキルエーテル類等のビタミンC類およびその誘導体、コウジ酸、アルブチン、プラセンタエキス、イオウ等が挙げられる。また、油溶性甘草エキス、クワエキス、シャクヤクエキス、トウキエキス、ワレモコウエキス、マロニエ樹皮エキス、カミツレエキス等の植物抽出物、更には、リノール酸、リノレン酸、乳酸、トラネキサム酸等も好ましい。
Suitable anti-inflammatory agents that can be used in the invention include ε-aminocaproic acid, tranexamic acid, tranexamic acid alkyl ester, glutyrrhizic acid, glycyrrhizic acid alkyl ester, glycyrrhetic acid, glycyrrhetinic acid alkyl ester, lysozyme chloride, guaiazulene, Examples include plant extracts such as hydrocortisone, perilla extract, ginkgo biloba extract, seaweed extract and the like.
Furthermore, suitable blood circulation promoters that can be used in the invention include plant extracts such as ginkgo biloba extract, assembly extract, sericoside, and maronier extract, tocopherols, vitamin E and its derivatives, and γ-oryzanol. .
Further, suitable whitening agents that can be used in the invention include L-ascorbic acid, sodium L-ascorbate, sodium ascorbate phosphate, magnesium ascorbate phosphate, sodium ascorbate sulfate, glyceryl ascorbate (Polyglyceryl) ethers, ascorbic acid glyceryl (polyglyceryl) esters, ascorbic acid glucosides (glycosides), ascorbic acid alkyl esters, ascorbic acid alkyl ethers and other vitamin C and derivatives thereof, kojic acid, arbutin, placenta extract , Sulfur and the like. In addition, plant extracts such as oil-soluble licorice extract, mulberry extract, peony extract, pearl millet extract, bitumen extract, maronier bark extract and chamomile extract, and linoleic acid, linolenic acid, lactic acid, tranexamic acid and the like are also preferred.
またさらに、発明において用いることが出来る好適な肌荒れ防止剤、保湿剤としては、グリセリン、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール等の多価アルコール、トレハロース、マルトース等の糖類、ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、キチン・キトサン等の生体高分子、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、ヒドロキシプロリン等のアミノ酸類、乳酸ナトリウム、尿素、スフィンゴ脂質、セラミド類、コレステロールおよびその脂肪酸エステルやポリオキシエチレン付加物等の誘導体
が挙げられる。また、スクワラン、スクワレン等の炭化水素油、ククイナッツ油、ボラジ油、ローズヒップ油等のグリセライド類も好適に使用できる。
さらに、発明において用いることが出来る好適な老化防止剤としては、前述した抗酸化剤、保湿剤、血行促進剤、肌荒れ防止剤が挙げられる。また、α−ヒドロキシ酸、ビタミンA酸およびその誘導体、ビタミンAアルコールおよびその誘導体が好適に使用できる。
またさらに、発明において用いることが出来る好適な発毛促進剤としては、トウガラシチンキ、トウキンセンカエキス、オウゴウエキス、センブリエキス等の植物抽出物、ステロール類およびステロール配糖体類、リノール酸、リノレン酸、ペンタデカン酸等の脂肪酸類およびそのグリセライド等の誘導体、エチニルエストラジオール等のホルモン、また、ミノキシジル等が挙げられる。
またさらに、発明において用いることが出来る好適なホルモン剤としては、コルチコステロン、アンドステロン、ハイドロコルチゾン、β-エストランジオール等のステロイドホルモン、プロスタグランジン等が挙げられる。
また、発明において用いることが出来る好適なビタミン類としては、ビタミンＡ群、ビタミンＢ群、ビタミンＣ群、ビタミンＥ群、ビタミンＫ群より任意に選択された1種以上が使用でき、これらの親油性および親水性誘導体も好適である。
また、ユビキノン類のような補酵素、カルニチン、フェルラ酸、γ-オリザノール、α-リポ酸、オロット酸等のビタミン用作用因子も好適に使用できる。
Furthermore, suitable rough skin preventing agents and moisturizers that can be used in the invention include polyhydric alcohols such as glycerin, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, polyethylene glycol and sorbitol, saccharides such as trehalose and maltose, and hyaluron. Biopolymers such as sodium acid, sodium chondroitin sulfate, chitin and chitosan, amino acids such as sodium pyrrolidonecarboxylate and hydroxyproline, sodium lactate, urea, sphingolipids, ceramides, cholesterol and its fatty acid esters and polyoxyethylene adducts And the like. In addition, hydrocarbon oils such as squalane and squalene, and glycerides such as kukui nut oil, borage oil, and rosehip oil can also be suitably used.
Furthermore, suitable antioxidants that can be used in the invention include the antioxidants, humectants, blood circulation promoters, and rough skin inhibitors described above. Further, α-hydroxy acid, vitamin A acid and derivatives thereof, and vitamin A alcohol and derivatives thereof can be preferably used.
Furthermore, suitable hair growth promoters that can be used in the invention include plant extracts such as capsicum tincture, cinnamon extract, sorghum extract, essence extract, sterols and sterol glycosides, linoleic acid, linolenic acid, Examples thereof include fatty acids such as pentadecanoic acid and derivatives thereof such as glyceride, hormones such as ethinyl estradiol, and minoxidil.
Furthermore, suitable hormonal agents that can be used in the invention include steroid hormones such as corticosterone, andosterone, hydrocortisone, and β-estradiol, prostaglandins, and the like.
Moreover, as suitable vitamins that can be used in the invention, one or more kinds arbitrarily selected from the vitamin A group, the vitamin B group, the vitamin C group, the vitamin E group, and the vitamin K group can be used. Oily and hydrophilic derivatives are also suitable.
In addition, coenzymes such as ubiquinones, vitamins such as carnitine, ferulic acid, γ-oryzanol, α-lipoic acid, orotic acid can be suitably used.
また、発明において用いることが出来る好適な色素としては、法定色素（タール色素）、および、フラボノイド、カロチノイド、キノン、ポリフィリン、ジケトン、ビオフラボノイド、フラビン、ベタシアニジン等の骨格を有する天然色素から任意に選択した1種以上が好適に使用できる。
また、発明において用いることが出来る好適なタンパク質類としては、アミノ酸類、および、加水分解エラスチン、水溶性エラスチン、加水分解コラーゲン、小麦ペプチド、大豆ペプチド、カチオン化ペプチド、アシルペプチド等のタンパク質変性物、また、カゼイン、グルタチオン等が挙げられる。
本発明において好適な条件として、圧力容器中に、温度として0〜100℃、好ましくは、31℃〜100℃、より好ましくは、35℃〜80℃の範囲にある水、あるいは場合により、親水性薬効成分の水溶液、およびまたは親油性役構成分を溶解、分散、混合した水溶液、およびまたは補助物質を溶解、分散、混合した水溶液をいれ、圧力として50〜500気圧、好ましくは、75〜500気圧、より好ましくは、100〜400Kg/cm2になるまで二酸化炭素を圧入し、時間として0.5〜5時間攪拌する。これにより、二酸化炭素が水中に分散したCO2／H2Oエマルションができる。所定時間後、二酸化炭素を圧力容器から減圧してゆくと、圧力容器内に残った水相、およびまたは二酸化炭素に同伴して圧力容器外に流出した水相中に、リポソームが懸濁液した溶液が得られる。
Further, suitable dyes that can be used in the invention are arbitrarily selected from legal dyes (tar dyes) and natural dyes having a skeleton such as flavonoids, carotenoids, quinones, porphyrins, diketones, bioflavonoids, flavins, and betacyanidines. One or more selected can be suitably used.
Suitable proteins that can be used in the invention include amino acids and hydrolyzed elastin, water-soluble elastin, hydrolyzed collagen, wheat peptide, soybean peptide, cationized peptide, acyl peptide, and other modified proteins, Moreover, casein, glutathione, etc. are mentioned.
As a suitable condition in the present invention, the temperature in the pressure vessel is 0 to 100 ° C., preferably 31 ° C. to 100 ° C., more preferably 35 ° C. to 80 ° C. An aqueous solution of a medicinal component and / or an aqueous solution in which a lipophilic role component is dissolved, dispersed, or mixed, and / or an aqueous solution in which an auxiliary substance is dissolved, dispersed, or mixed are added, and the pressure is 50 to 500 atmospheres, preferably 75 to 500 atmospheres. More preferably, carbon dioxide is injected until it becomes 100 to 400 kg / cm 2 , and the mixture is stirred for 0.5 to 5 hours. This makes a CO2 / H2O emulsion in which carbon dioxide is dispersed in water. When carbon dioxide is depressurized from the pressure vessel after a predetermined time, the liposomes are suspended in the aqueous phase remaining in the pressure vessel and / or the aqueous phase that flows out of the pressure vessel accompanying the carbon dioxide. A solution is obtained.
上記の好適な条件のもとに本発明において用いることが出来るリポソームを修飾する低分子ないし高分子の修飾物質「中性水では水溶せず、酸性水に溶解する物質」として、好適にはキトサンを入れる。圧力として30〜500気圧、好ましくは、75〜500気圧、より好ましくは、100〜400Kg/cm2になるまで二酸化炭素を圧入し、時間として0.5〜5時間攪拌する。これにより、キトサンは水相に溶解し、二酸化炭素が水中に分散したCO2／H2Oエマルションができる。所定時間後、二酸化炭素を圧力容器から減圧してゆくと、圧力容器内に残った水相、およびまたは二酸化炭素に同伴して圧力容器外に流出した水相中に、カチオンリポソームが懸濁液した溶液が得られる。
参考として本発明のリポソーム懸濁液の製造方法の一例を、膜脂質としてジパルミトイルホスファチジルコリン（DPPC）を、水溶性の内包物質としてグルコースを用いて、従来のリポソーム懸濁液の製造方法と比較したものを、図７に示す。
Bangham法（薄膜法）に比べ、本発明の水溶性物質内包率は９倍弱である。
さらに、圧力容器に封入すべき脂質と内包物を溶解した水溶液と炭酸ガスの他にエチルアルコールを添加させることによる効果を確認したところ、図８に示すように、従来の超臨界逆相蒸発法ほど効果がなく、逆に本発明のリポソーム懸濁液の製造方法では、エチルアルコールの添加が、保持効率（リポソームに内包すべき物質がリポソームに内包される）をかえって減少させる。
また、本発明において、炭酸ガスの影響を調べたところ、図９のようになった。ちなみに、窒素ガスは、ほとんど影響が無いことが解る。
Chitosan is preferably used as a low or high molecular weight modifying substance that modifies liposomes that can be used in the present invention under the above-mentioned preferred conditions, as a substance that does not dissolve in neutral water but dissolves in acidic water. Insert. The pressure is 30 to 500 atmospheres, preferably 75 to 500 atmospheres, and more preferably, carbon dioxide is injected until the pressure becomes 100 to 400 kg / cm 2 , and the time is stirred for 0.5 to 5 hours. Thereby, chitosan is dissolved in the aqueous phase, and a CO2 / H2O emulsion in which carbon dioxide is dispersed in water is formed. When carbon dioxide is depressurized from the pressure vessel after a predetermined time, the cationic liposomes are suspended in the aqueous phase remaining in the pressure vessel and / or the aqueous phase that flows out of the pressure vessel accompanying the carbon dioxide. Solution is obtained.
For reference, an example of a method for producing a liposome suspension of the present invention was compared with a conventional method for producing a liposome suspension by using dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) as a membrane lipid and glucose as a water-soluble inclusion substance. This is shown in FIG.
Compared with the Bangham method (thin film method), the water-soluble substance inclusion rate of the present invention is slightly less than 9 times.
Furthermore, the effect of adding ethyl alcohol in addition to the aqueous solution in which the lipid and inclusions to be sealed in the pressure vessel and carbon dioxide are added was confirmed. As shown in FIG. 8, the conventional supercritical reverse phase evaporation method was used. Conversely, in the method for producing a liposome suspension according to the present invention, the addition of ethyl alcohol reduces the retention efficiency (the substance to be encapsulated in the liposome is encapsulated in the liposome).
Further, in the present invention, when the influence of carbon dioxide gas was examined, it was as shown in FIG. Incidentally, nitrogen gas has almost no effect.
本発明の製造方法により得られたリポソームを適用できる医薬品、化粧料や皮膚外用剤は、遺伝子治療薬、抗ガン剤、抗炎症剤、乳液、ローション、クリーム、サンスクリーン等の基礎化粧料、洗顔料、ボディーソープ等の洗浄料、シャンプー、ヘアリンス、ヘアコンディショナー、育毛料、整髪料、ヘアトニック、パーマネント・ウェーブ剤、ヘアカラー・ヘアブリーチ等の頭髪用化粧料、リキッドファンデーション、口紅等のメークアップ化粧料、軟膏等の皮膚外用剤等が挙げられる。 Drugs, cosmetics and skin external preparations to which the liposomes obtained by the production method of the present invention can be applied include basic therapeutics such as gene therapy drugs, anticancer drugs, anti-inflammatory drugs, emulsions, lotions, creams, sunscreens, and facial cleansings. Cosmetics, body soaps, cleansing agents, shampoos, hair rinses, hair conditioners, hair growth agents, hair styling agents, hair tonics, permanent wave agents, hair color and hair bleaching cosmetics, liquid foundations, lipsticks, and other makeup products Examples include skin preparations such as cosmetics and ointments.
また、本発明において、脂質濃度の影響を調べたところ、図１０のようになった。図１０において、Bangham法では炭酸ガスに対してエタノール７ｗ％を添加したものである。
さらに、本発明において、「中性水では水溶せず、酸性水に溶解する物質」として、キトサンを用いた場合の水溶液について、水溶液のｐＨが及ぼす影響について調べた結果を図１１に示す。
炭酸ガス／水へのキトサンの溶解度測定方法は、水１００ｇに対してキトサン（１〜５ｍｇ、１０〜５０ｐｐｍ）を入れ、炭酸ガスで加圧し、４０分で解けるかどうかを調べた。また、参考として希塩酸１００ｇにキトサン（１〜６ｍｇ）を加えて、粉末がなくなるまでの時間を測定した。
In the present invention, when the influence of the lipid concentration was examined, it was as shown in FIG. In FIG. 10, in the Bangham method, 7 w% ethanol is added to carbon dioxide gas.
Furthermore, in the present invention, FIG. 11 shows the results of examining the influence of aqueous solution pH on an aqueous solution using chitosan as “a substance that does not dissolve in neutral water but dissolves in acidic water”.
The method for measuring the solubility of chitosan in carbon dioxide gas / water was to check whether chitosan (1-5 mg, 10-50 ppm) was added to 100 g of water, pressurized with carbon dioxide gas, and dissolved in 40 minutes. For reference, chitosan (1 to 6 mg) was added to 100 g of diluted hydrochloric acid, and the time until the powder disappeared was measured.
本発明について実施例を用いてさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
（実施例−１ リポソームの製造）
ジパルミトイルホスファチジルコリン（DPPC） 0.2ｇ、グルコース水溶液２０ｇ（グルコース濃度0.15ｍＭ）を入れた圧力容器に、炭酸ガスを導入して２００気圧になるように封入し、６０℃で４０分撹拌した。炭酸ガスを抜いて常圧まで減圧し、リポソーム懸濁液を得た。
グルコース溶液に対する脂質濃度は、13.6mM/Lであった。
保持効率（内包率）17.0％ 原料からの製造時間は約２時間であった。参考までに、同じ脂質濃度を用いてBangham法（薄膜法）でリポソームを製造した場合、保持効率（内包率）は2.0％程度、所要時間24時間程度である。
The present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
(Example-1 Production of liposome)
Carbon dioxide gas was introduced into a pressure vessel containing 0.2 g of dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) and 20 g of an aqueous glucose solution (glucose concentration of 0.15 mM), and the mixture was sealed to 200 atm and stirred at 60 ° C. for 40 minutes. Carbon dioxide was removed and the pressure was reduced to normal pressure to obtain a liposome suspension.
The lipid concentration for the glucose solution was 13.6 mM / L.
Retention efficiency (inclusion rate) 17.0% The production time from the raw material was about 2 hours. For reference, when liposomes are produced by the Bangham method (thin film method) using the same lipid concentration, the retention efficiency (inclusion rate) is about 2.0% and the required time is about 24 hours.
（実施例−２ リポソームの製造）
ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、ジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)、ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)、ジステアロイルホスファチジルコリン（DSPC）を膜脂質とし、それぞれ5〜20mMをグルコース溶液20g（グルコース濃度０．１５ｍＭ）に加え、これを圧力容器に入れて、炭酸ガスを導入して２００気圧になるように封入し、６０℃で４０分撹拌した。炭酸ガスを抜いて常圧まで減圧し、リポソーム懸濁液を得た。
図１２に示すように、用いる膜脂質で差が見られるものの、保持効率は脂質濃度に比例して増加し、DOPCの場合で30%に達した。
(Example-2 Production of liposome)
Dipalmitoyl phosphatidylcholine (DPPC), dioleoylphosphatidylcholine (DOPC), dimyristoyl phosphatidylcholine (DMPC), and distearoylphosphatidylcholine (DSPC) are used as membrane lipids, and 5 to 20 mM is added to 20 g of glucose solution (glucose concentration of 0.15 mM). This was put in a pressure vessel, carbon dioxide gas was introduced and sealed to 200 atm, and stirred at 60 ° C. for 40 minutes. Carbon dioxide was removed and the pressure was reduced to normal pressure to obtain a liposome suspension.
As shown in FIG. 12, although there is a difference in the membrane lipid used, the retention efficiency increased in proportion to the lipid concentration, reaching 30% in the case of DOPC.
（実施例−２ キトサン修飾リポソームの製造）
ＤＰＰＣ 0.2ｇ、グルコース水溶液２０ｇ（グルコース濃度０．１５ｍＭ）、キトサン１〜５ｍｇを入れた圧力容器に、炭酸ガスを導入して２００気圧になるように封入し、６０℃で４０分撹拌した。炭酸ガスを抜いて常圧まで減圧し、リポソーム懸濁液を得た。
グルコース溶液に対する脂質濃度は、１３．６ｍＭ／Lであった。
保持効率（内包率）１７．０％ 製造時間は約２時間であった。得られたカチオンリポソームの表面電位（ζ電位）は、キトサン添加量が1mgのときに最も高く約25mVであった。図１３に、キトサンの量と保持効率の関係、およびキトサンの量と表面電荷の関係を、Bangham法、超臨界逆相蒸発法、および本申請で提案する方法で調整したリポソームについて示した。
キトサン修飾リポソームは安定であり、室温（25℃）で１ヶ月保存しても、保持効率はほとんど変化しなかった。キトサン修飾リポソームの安定性を図１４に示す。
(Example-2 Production of chitosan-modified liposome)
Carbon dioxide gas was introduced into a pressure vessel containing DPPC 0.2 g, glucose aqueous solution 20 g (glucose concentration 0.15 mM), and chitosan 1 to 5 mg, and the mixture was sealed at 200 atm and stirred at 60 ° C. for 40 minutes. Carbon dioxide was removed and the pressure was reduced to normal pressure to obtain a liposome suspension.
The lipid concentration for the glucose solution was 13.6 mM / L.
Holding efficiency (inclusion rate) 17.0% The production time was about 2 hours. The surface potential (ζ potential) of the obtained cationic liposome was highest at about 25 mV when the amount of chitosan added was 1 mg. FIG. 13 shows the relationship between the amount of chitosan and retention efficiency, and the relationship between the amount of chitosan and surface charge for liposomes prepared by the Bangham method, supercritical reverse phase evaporation method, and the method proposed in this application.
The chitosan-modified liposome was stable, and the retention efficiency hardly changed even when stored for 1 month at room temperature (25 ° C.). The stability of chitosan modified liposomes is shown in FIG.
（実施例−２ キトサン修飾リポソームの製造、攪拌時間の影響）
ＤＰＰＣ 0.2ｇ、グルコース水溶液２０ｇ（グルコース濃度０．１５ｍＭ）、キトサン１〜５ｍｇを入れた圧力容器に、炭酸ガスを導入して２００気圧になるように封入し、６０℃で４０分、および２時間、撹拌した。炭酸ガスを抜いて常圧まで減圧し、リポソーム懸濁液を得た。
グルコース溶液に対する脂質濃度は、１３．６ｍＭ／Lであった。攪拌時間によらず保持効率（内包率）は１７．０％ であり、また、キトサンの料にも依存しなかった。撹拌時間の影響を図１５に示す。
(Example-2 Production of chitosan-modified liposome, influence of stirring time)
Carbon dioxide gas was introduced into a pressure vessel containing DPPC 0.2 g, glucose aqueous solution 20 g (glucose concentration 0.15 mM), and chitosan 1 to 5 mg, and sealed at 200 atm. At 60 ° C. for 40 minutes and 2 hours , Stirred. Carbon dioxide was removed and the pressure was reduced to normal pressure to obtain a liposome suspension.
The lipid concentration for the glucose solution was 13.6 mM / L. Regardless of the stirring time, the retention efficiency (inclusion rate) was 17.0%, and it did not depend on the chitosan charge. The influence of the stirring time is shown in FIG.
（比較例１）
従来法によるキトサン修飾リポソーム懸濁液の代表例としてBangham法によるものを示す。
（Bangham法によるキトサン修飾リポソームの製造）
ｐＨ３．０に調整したキトサン水溶液（濃度２０ｐｐｍ）中に、Bangham法により調整したリポソームを滴下して撹拌する。冷暗所で１２時間放置して、上澄みを除去し、同量のリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＳＢ）を添加し、ミキサーで再分散させる。さらに、冷暗所で１２時間放置して、上澄みを除去し、同量のリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＳＢ）を添加し、ミキサーで再分散させる。この工程をさらにくり返し、合計３回再分散させる。最後に得られた分散液を注射用蒸留水を用いて分散させた。その概略を図１７に示す。
(Comparative Example 1)
A representative example of the chitosan-modified liposome suspension by the conventional method is shown by the Bangham method.
(Production of chitosan-modified liposomes by the Bangham method)
Liposomes adjusted by the Bangham method are dropped into a chitosan aqueous solution (concentration 20 ppm) adjusted to pH 3.0 and stirred. Leave in a cool dark place for 12 hours to remove the supernatant, add the same amount of phosphate buffered saline (PSB) and redisperse with a mixer. Further, leave for 12 hours in a cool dark place, remove the supernatant, add the same amount of phosphate buffered saline (PSB), and redisperse with a mixer. This process is repeated further and redispersed a total of 3 times. Finally, the obtained dispersion was dispersed using distilled water for injection. The outline is shown in FIG.
（キトサン修飾リポソーム懸濁液の特性比較）
実施例２で得たキトサン修飾リポソーム懸濁液と比較例１で得たキトサン修飾リポソーム懸濁液を、ゼータポテンシャル電位及び保持効率についてテストし、その結果を図１３に示す。
本発明の製造方法により得られたキトサン修飾リポソーム懸濁液は、保持効率が高く、ゼータポテンシャル電位が高いのが特徴であることが解る。
(Characteristic comparison of chitosan modified liposome suspension)
The chitosan modified liposome suspension obtained in Example 2 and the chitosan modified liposome suspension obtained in Comparative Example 1 were tested for zeta potential potential and retention efficiency, and the results are shown in FIG.
It can be seen that the chitosan-modified liposome suspension obtained by the production method of the present invention is characterized by high retention efficiency and high zeta potential potential.
本発明の製造方法により得られたリポソーム懸濁液、及びキトサン修飾リポソームリポソーム懸濁液は、製造が簡単でしかも、保持効率が高いため、多くの内包物質を包み込むことが出来、癌治療、遺伝子治療、機能性化粧品、バイオセンサーなどに広く利用することが出来る。 The liposome suspension obtained by the production method of the present invention and the chitosan-modified liposome liposome suspension are easy to produce and have high retention efficiency, so that many encapsulated substances can be encapsulated, cancer treatment, gene It can be widely used for treatment, functional cosmetics, biosensors, etc.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2004323697A JP4228230B2 (en) | 2004-11-08 | 2004-11-08 | Method for producing liposome suspension and use using liposome |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2004323697A JP4228230B2 (en) | 2004-11-08 | 2004-11-08 | Method for producing liposome suspension and use using liposome |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2006131567A JP2006131567A (en) | 2006-05-25 |
| JP4228230B2 true JP4228230B2 (en) | 2009-02-25 |
Family
ID=36725426
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2004323697A Expired - Fee Related JP4228230B2 (en) | 2004-11-08 | 2004-11-08 | Method for producing liposome suspension and use using liposome |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4228230B2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2012102364A1 (en) * | 2011-01-27 | 2014-06-30 | サンスター株式会社 | Polyunsaturated fatty acid-containing composition |
| WO2021235425A1 (en) | 2020-05-20 | 2021-11-25 | 株式会社リコー | Particle containing lipid nanoparticles, and method for producing same |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4969050B2 (en) * | 2005-01-07 | 2012-07-04 | ロート製薬株式会社 | Topical skin preparation |
| JP2008179563A (en) * | 2007-01-24 | 2008-08-07 | Cosmo Shokuhin Kk | Functional material and functional food comprising useful phospholipid composition |
| ES2396798T3 (en) | 2007-08-22 | 2013-02-27 | Seiwa Kasei Company, Limited | Derivatives of ascorbic acid and salts thereof, process for their production and cosmetic preparations thereof |
| JP5695308B2 (en) * | 2009-10-02 | 2015-04-01 | 株式会社フェース | Cosmetic base comprising collagen-modified liposome and skin cosmetic containing the same |
| EP2364600A1 (en) * | 2010-02-18 | 2011-09-14 | Nestec S.A. | Liquid-filled chitosan-anionic liposoluble capsule dispsersions |
| JP5756602B2 (en) * | 2010-04-16 | 2015-07-29 | 株式会社フェース | Cosmetic base comprising liposome modified with gelatin and / or elastin-constituting polypeptide and skin cosmetic containing the same |
| CN101912363A (en) * | 2010-07-29 | 2010-12-15 | 蔡海德 | Dissolving ultrafiltration-spray drying-molecule dispersion coating-hydration palletizing-freeze drying method for preparing liposome combination medicine |
| CN101912364B (en) * | 2010-08-09 | 2015-07-15 | 刘会梅 | Ginkgolide B liposome medicinal composition |
| CN102091035A (en) * | 2010-08-20 | 2011-06-15 | 邓学峰 | Pefloxacin mesilate liposome medicine composition |
| DE102011076149A1 (en) * | 2011-05-19 | 2012-11-22 | Rovi Cosmetics International Gmbh | Charge generator for a vesicular carrier system of a UV protection agent for the skin or the hair |
| WO2014009857A2 (en) * | 2012-07-10 | 2014-01-16 | Koninklijke Philips N.V. | Release of molecules from container by selective heating of hair |
| JP6471407B2 (en) * | 2013-12-25 | 2019-02-20 | サンスター株式会社 | Oral or throat composition |
| JP2016169167A (en) * | 2015-03-11 | 2016-09-23 | 株式会社彩光コーポレーション | Polyphenol-containing liposome and production methods thereof |
| CN110613843A (en) * | 2019-10-22 | 2019-12-27 | 武汉轻工大学 | Preparation method of water-soluble chitosan liposome adjuvant for livestock |
| CN115105447B (en) * | 2022-06-30 | 2023-07-28 | 山东福瑞达生物股份有限公司 | Cationic alpha glucan oligosaccharide modified liposome with repairing effect and preparation method and application thereof |
| CN115737471B (en) * | 2022-12-02 | 2024-05-14 | 辽宁省海洋水产科学研究院 | Preparation method of photodamage-resistant tussah silk peptide liposome |
| CN115777862B (en) * | 2022-12-12 | 2024-07-30 | 西北农林科技大学 | Epsilon-polylysine coating method, epsilon-polylysine coating and antibacterial application |
-
2004
- 2004-11-08 JP JP2004323697A patent/JP4228230B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2012102364A1 (en) * | 2011-01-27 | 2014-06-30 | サンスター株式会社 | Polyunsaturated fatty acid-containing composition |
| JP6137836B2 (en) * | 2011-01-27 | 2017-05-31 | サンスター株式会社 | Polyunsaturated fatty acid-containing composition |
| WO2021235425A1 (en) | 2020-05-20 | 2021-11-25 | 株式会社リコー | Particle containing lipid nanoparticles, and method for producing same |
| KR20230005989A (en) | 2020-05-20 | 2023-01-10 | 가부시키가이샤 리코 | Particles containing lipid nanoparticles and method for producing the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2006131567A (en) | 2006-05-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4228230B2 (en) | Method for producing liposome suspension and use using liposome | |
| JP2003119120A (en) | Method for producing liposome, cosmetic containing the liposome, and skin care preparation | |
| KR100654841B1 (en) | Lipid solution composition and method for preparing nano particle cosmetics having analogous structure and composition of human skin and promoting the transepidermal absorption of physiologically active substances using the same | |
| JP4758915B2 (en) | Multilamellar liposome and production method thereof | |
| JP5706326B2 (en) | Stable unilamellar composition and method for producing the same | |
| US10307349B2 (en) | Apparatus and method for preparing cosmeceutical ingredients containing epi-dermal delivery mechanisms | |
| KR101497055B1 (en) | High moisturizing cosmetic composition with color and high content of pearls using high density lipid network and method for preparing thereof | |
| KR100810164B1 (en) | Anti-wrinkle cosmetic composition encapsulating idebenone with nano sizes and its manufacturing method | |
| KR100921959B1 (en) | Multi-Emulsified Vesicles Comprising a Multi Lamellar Liposome and Phospholipid Monolayer Nanoliposomes | |
| KR102007469B1 (en) | Method for the production of niosome with idebenone or coenzymeQ10 and cosmetic composition therewith | |
| KR100785484B1 (en) | Base composition encapsulating high concentration of idebenone with nano sizes, its manufacturing method thereof, and cosmetic compositions containing it | |
| JP2005179313A (en) | Method for producing base agent for skin cosmetic, and skin cosmetic | |
| KR100715311B1 (en) | A cosmeticss to promote the transepidermal absorption and stabilize ursolic acid for anti-wrinkle and its manufacturing method thereof | |
| JP2017171649A (en) | Having liposome compositions with high percutaneous absorption properties, and cosmetics or skin external preparations containing the same | |
| KR100461458B1 (en) | Multiple layered liposome and preparation method thereof | |
| JP2018115124A (en) | Liposome, liposome liquid and cosmetic, and method for producing the liposome | |
| KR20100024050A (en) | Multi-vesicular liposome, the method preparing thereof and the pharmaceutical or cosmetic composition containing the same | |
| KR20190086829A (en) | Method for manufacturing bioactive substance carriers having a multi-layer structure and Functional cosmetic composition comprising the bioactive substance carriers prepared thereof | |
| KR100778903B1 (en) | Nano?concentrated capsule compositions with high content water?soluble active materials, it's manufacturing method and cosmetic composition containing the same | |
| KR101599398B1 (en) | Encapsulated composition of lamellar non-water liquid crystalline phase containing biochanin-a and cosmetic composition using the same | |
| JPH11130615A (en) | Production of liposome dispersion and cosmetic using the same | |
| KR100778946B1 (en) | Nano?concentrated capsule compositions with high content oil?soluble active materials, it's manufacturing method and cosmetic composition containing the same | |
| KR20240149552A (en) | High-content ceramide composition with excellent water dispersibility | |
| Bibette et al. | Lipids in Dermal Applications: Cosmetics and Pharmaceutics | |
| JP2022134357A (en) | Microparticle capsule formulation for external use and skin formulation for external use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20061101 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20080513 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080520 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080716 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20081007 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081020 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20081118 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20081118 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4228230 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111212 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121212 Year of fee payment: 4 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121212 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121212 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121212 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131212 Year of fee payment: 5 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131212 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131212 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131212 Year of fee payment: 5 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |