JP4150675B2

JP4150675B2 - ホスホリパーゼａ２の活性を測定するための化合物

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Publication number: JP4150675B2
Application number: JP2003549360A
Authority: JP
Inventors: デイグナー、ハンス−ペーター; ラスヴルム、シュテファン; キンシェルフ、ラルフ; レーシェ、ヴォルフガング
Original assignee: SIRS Lab GmbH
Current assignee: SIRS Lab GmbH
Priority date: 2001-12-07
Filing date: 2002-10-23
Publication date: 2008-09-17
Anticipated expiration: 2022-10-23
Also published as: EP1318154A1; WO2003048172A1; DE50102625D1; EP1318154B1; US20050064532A1; ATE269342T1; JP2005511701A; US7301043B2; AU2002346871A1

Description

本発明は、ホスホリパーゼＡ_２（ＰＬＡ_２）、特に、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）の活性を測定するのに適した化合物に関する。

血小板活性化因子（ＰＡＦ）は、生理・病理プロセスに関与する生物活性リン脂質である。この因子は、ｓｎ−２位のアセテート基を切断する特異的アセチルヒドロラーゼ、すなわち、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ（リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ_２とも称されるＰＡＦ−ＡＨ，ＥＣ３．１．１．４７）によって生物学的に不活性な生成物に変換される。この基質特異性は、ＰＡＦの他に、ｓｎ−２エステルのω位に極性置換基を有する酸化リン脂質をさらに含む。これらの変性物質は酸化リポタンパク質中によく見出される。ＰＡＦや酸化リン脂質に加えて酸化リポタンパク質もさまざまな疾患に関与するので、この酵素はそのような疾患の発生にも決定的な影響を及ぼすと思われる。

近年、ＰＡＦ−ＡＨの研究はますますその重要性を増してきている。特に、ＰＡＦ−ＡＨ活性の異常はさまざまな疾患で確認されている。治療薬として遺伝子組換え技術によって製造されたこの酵素の一連の臨床試験や検査の開始は、この治療薬がヒトに非常に重要であることを示している〔第３期臨床実験は２００１年春に敗血症適応領域で開始される予定である（ｗｗｗ．ｉｃｏｓ．ｃｏｍ）〕。したがって、総じてＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定するための十分に実行可能な方法を得ることが必要とされる。

ＰＡＦ−ＡＨ活性の測定するためには、放射能測定、ＵＶ測定または蛍光測定などの多様な方法が文献に記載されている。これらの方法のほぼすべてにおいて、基質とその酵素を含むサンプルとを実際に反応させた後に、１つ以上の処理工程（例えば、抽出、結果として生じる標識に対する反応）が続くので、連続的に酵素動力学を測定することは不可能である。

最も古くかつ現在最も広く用いられている測定法は放射能測定をベースとしている（例えば、非特許文献１参照）。これらの方法は、［^３Ｈ］−アセテート標識した天然基質と検査対象サンプルとを反応させることにより、放射能標識酢酸を切断する工程を含む。検査製剤をクロマトグラフィー処理した後、切断した酢酸の放射活性を測定することができる。しかし、クロマトグラフィー処理は時間がかかるだけでなく、ある程度、高額な費用が掛かる。

非特許文献２は、ＰＬＡ_２およびＰＡＦ−ＡＨの測定法における分子内消光ＢＯＤＩＰＹ標識リン脂質類似体を開示している。これらの類似体の１つは、１−（Ｎ−（ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ−ペンタノイル）−１１−アミノウンデシル）−２−（（Ｎ−（２，４−ジニトロフェニル）アミノ）−８−アミノオクタノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。ＢＯＤＩＰＹは発蛍光団として作用する。

しかし、この化合物は極めて重大な不都合を有する。例えば、ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定するために上記化合物を用いても、膜における横方拡散速度の変化を提示することができない。さらに、上記化合物の性質は天然リン脂質の性質とは大きく異なる。
エムイーブランクら（Ｍ．Ｅ．Ｂｌａｎｋｅｔａｌ），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９８１年、第２５６巻、第１７５〜１７８頁。エイチエスヘンドリックソンら（Ｈ．Ｓ．Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎｅｔａｌ）、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９９９年、第２７６巻、第２７〜３５頁。

したがって、本発明の目的は、従来技術から分っている不都合を有することなく、ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定し得る方法を提供することにある。

本発明によれば、これは、下記式（１）の化合物によって達成される。

上記式中、Ｌ_１は、エーテル（Ｒ^１−ＯＲ^２）_ｍまたは１〜２０個の炭素原子を有する炭化水素Ｒから誘導され、前記Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立に選択され、１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素から誘導され、ｍは１〜４の整数であり；
Ｆは発蛍光団としての非置換または置換ピレンであり；
Ｑは消光物質であり；
Ｌ_２は、Ｃ（Ｏ）−Ｌ_１またはＣ（Ｏ）−Ｌ_１−ＮＨであり、このＬ_１は上記定義の通りである。

本発明の化合物は、発蛍光団として非置換または置換ピレンを含むが、蛍光性ではない。というのも、そのような蛍光は、これも本発明の化合物中に含まれている消光物質によって消光されるからである。ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの影響下では、消光物質は切断され、残りの化合物から空間的に分離される。これによって蛍光消光が失活するので、蛍光の増大が観察される。この蛍光強度の増大は、おおむねＰＬＡ_２の活性に比例するので、ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性の指標となる。

驚くべきことには、ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定するために上記化合物を用いると、膜における横方拡散速度の変化を提示し得ることが判明した。その上、上記化合物の性質は、天然リン脂質の性質と大きく異なる。さらに、本発明の化合物は、活性の測定を特に有効かつ容易に実施することができる。活性は直接かつ連続的に測定され得る。

上記に概説したように、本発明の化合物中には非置換または置換ピレンが発蛍光団として存在する。この発蛍光団は、その１位を介してＬ_１に結合し得る。上記ピレンを置換する場合、発蛍光団としてのその性質に有意な影響を及ぼさない置換基を使用する。そのような置換基は当業者には公知である。そのような置換基は、ピレンのＣ原子を置換するアミノ基もしくはカルボニル基、またはＮ、Ｓ、もしくはＰなどのヘテロ原子であり得る。本発明の化合物は、それぞれ独立に選択される１種以上の置換基を含み得る。

上記ピレンは、他の発蛍光団、例えば、ＮＢＤ（Ｎ−（７−ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾル−４−イル））またはＢＯＤＩＰＹ（４，４−ジフルオロ−４−ボラ
−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン）と比べると、極性が低く、消光波長と発光波長との間隔が大きく、水溶液中で機能する能力を有し、細胞中で有利に分配され、蛍光消光せずに膜に組込むことができ、かつＰＨ非依存性蛍光であるという利点を有する。ピレンのさらなる有利な性質は、高濃度でエキシマーを形成し、同時に発光波長を長波長へとシフトすることである。エキシマー形成により、発蛍光団の濃度を評価することができる。

上記式（１）によれば、本発明の化合物は消光物質を含んでいる。消光物質は、蛍光の分野においてそれ自体公知の化合物であり、発蛍光団の蛍光強度を低減するかまたは消光する。そのような消光物質の例としては、１個以上、特に２個のニトロ基で置換されるフェニル残基、例えば、２，４−ジニトロフェニル残基が挙げられる。これらの消光物質は分子内で発蛍光団の蛍光強度を特に有効に低減または消光することができる。

本発明の化合物において、発蛍光団は、リンカーを介してグルセロールのｓｎ−１位の酸素原子に結合される。消光物質も、リンカーを介して、すなわちグリセロールのｓｎ−２位でグリセロールに結合される。そのような場合、リンカーは、それらの大きさ、特に長さに関して、蛍光強度の最適な消光が観察できるように選択される。消光物質とグリセロール残基とを結合するリンカーＬ_２は、Ｏ−Ｃ（Ｏ）基のためにＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨにより加水分解可能である。加水分解によってリンカーと共に消光物質が本発明の化合物から切断されるが、そうなると、分子内消光がもはや不可能なので、蛍光強度が増大する。それに対し、発蛍光団とグリセロールとを結合するリンカーＬ_１は、ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨによって切断されてはならない。それどころか、このリンカーは蛍光強度を検出するために代謝的に安定である必要がある。

先に概説したように、リンカーは、エーテル（Ｒ^１−ＯＲ^２）_ｍから誘導され得る。前記Ｒ^１およびＲ^２はそれぞれ独立に選択され、かつ１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素から誘導され、ｍは１〜４の整数である。

用語「炭化水素」とは、炭素と水素のみからなる有機化合物を表す。その例としては、アルカン、アルケン、およびアルキンが挙げられる。アルケンとアルキンはいくつかの不飽和結合を有し得る。上記式（１）によれば、上記炭化水素の２個の水素原子は、リンカーとして、またはリンカー中で、それらの機能を果たし得るように置換される。そのような置換は、特に、炭化水素の末端Ｃ原子で達成され得る。

本発明の化合物の好ましい実施形態において、前記Ｒ^１およびＲ^２は、（ＣＨ_２）_ｎであり、前記ｎは２〜１２の整数である。Ｌ_１は、特に、（ＣＨ_２）_４−Ｏ−（ＣＨ_２）_１０を表す。ＣＨ_２鎖を含むリンカーは、酵素処理をしても、発蛍光団が本発明の化合物中に留まり、励起されて蛍光を発し得ることを保証する格別な代謝安定性を有するため、特に好ましい。

先に概説したように、リンカーＬ_１は、炭化水素Ｒから誘導され得る。Ｒは、（ＣＨ_２）_ｏであるのが好ましく、前記ｏは１〜２０の整数、特に２〜６である。この種のリンカーは、代謝的に安定であるために、酵素処理中に本発明の化合物から発蛍光団が不要に切断されるのを防止するので特に好ましいことが判明した。

本発明の化合物は、消光物質とグリセロールのｓｎ−２位とを結合させる第２リンカーＬ_２を含んでいる。先に概説したように、Ｌ_２は、Ｃ（Ｏ）−Ｌ_１またはＣ（Ｏ）−Ｌ_１−ＮＨであり、Ｌ_１は上記定義の通りである。

１つの好ましい実施形態において、Ｌ_２は、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｐまたはＣ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｐ−ＮＨであり、前記ｐは１〜２０、特に２〜６の整数であり、Ｌ_２は特にＣ
（Ｏ）−（ＣＨ_２）_５−ＮＨを表す。これらのリンカーは、一方では、ＣＨ_２鎖が代謝的に安定であるために、この位置での消光物質の不要な切断が回避され、他方では、ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨのエステル基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−がこれらの酵素によって意図的かつ選択的に切断されるという理由で特に好適である。

ピレンとグリセロールの１位との結合の１つの利点は、その結合が代謝的に安定であり、これも検査対象サンプル中に存在し得るホスホリパーゼＡ１活性による試験の阻害が認められないことである。

グリセロールのｓｎ−３位にはホスファチジルコリン残基が存在する。これは、本発明の化合物が天然リン脂質の生物物理的挙動を示すことを有利に保証する。
特に好ましい実施形態において、本発明の化合物は下記式（２）の構造を有する。

本発明のこの式（２）の化合物は、特に容易かつ有利にＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性の測定を可能にする。

本発明の化合物を調製するために、当業者は、合成有機化学において慣用的な反応および方法を用いることができる。例えば、先ず、発蛍光団をリンカーに結合させ、次いで、リンカーの第２末端をグリセロールのｓｎ−１位に導入し得る。次いで、ホスホコリン残基をグリセリールのｓｎ−３位に導入し得るが、その場合、グリセロールのｓｎ−２位のＯＨ基を、保護基、例えば、ベンゾイル基で保護し得る。その後、保護基を慣用の方法で切断し、次いで、第２リンカーを、任意で消光物質と一緒に、挿入し得る。本発明の化合物の調製法を中間工程については詳細に説明することなく上述した。例えば、発蛍光団へのリンカーの挿入は、例えば以下の調製の実施例に記載されているように、いくつかの工程で行なわれ得る。

本発明の化合物中に消光物質が存在することによって、蛍光は分子内で消光される。消光物質を本発明化合物から切断すると、分子内消光が不可能になるために、発蛍光団の蛍光強度の増大が観察される。そのような本発明化合物からの消光物質の切断は、ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨにより、すなわち、ｓｎ−２位のエステル基の加水分解により行なわれ得る。したがって、本発明の化合物は、ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性の測定に特に好適である。

そのようなＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性測定法においては、この酵素を含むサンプルを本発明の化合物と一緒にインキュベートし、慣用の方法で蛍光を測定する。そのような場合、出来る限り自然に近い環境で酵素の活性を測定し得るように、インキュベーションは、生理的条件下、例えば、水性媒体、例えば緩衝液中ｐＨ７．４、かつ３７℃下で実施するのが好ましい。蛍光の測定、すなわち、蛍光の増大の測定は、連続的に行なわれ
得る。そのような連続的な測定により、数分から数時間、特に５分から０．５時間という長い時間にわたって、蛍光を連続的に測定することができる。

したがって、本発明の化合物は、酵素ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの測定に特に好適である。これらの化合物は、特に効果的、直接的、容易、迅速かつ低コストの測定を可能にする。その上、この活性測定は、連続的に、すなわち、長時間にわたって実施することができので、酵素動力学に関する貴重な情報が得られる。さらに、本発明の化合物を用いると、極めて正確な値が得られ、それによって、特に治療および診断を目的とした信頼し得る提示を行うことができる。

酵素の活性測定は、例えば以下のような多くの用途を有し得る。
・例えば、以下のような場合における、ヒトおよび動物の多種多様な生物学的サンプル（鼻分泌物、精液、肺分泌物（ＢＡＬ）、血液またはその成分、単離細胞集団、生検組織、胆嚢分泌物、腸分泌物、糞便検体を鑑別診断するための診断薬として：
− 他の局所性および全身性炎症症状；
− アレルギー性および／または免疫性疾患、例えば、花粉アレルギーおよびラテックスアレルギー、糸球体腎炎；
− 中毒発生疾患、例えば、中毒性肺不全（ｔｏｘｉｃｌｕｎｇｆａｉｌｕｒｅ）または中毒症状；
− 冠動脈疾患、例えば、急性冠症候群、狭心症、プリンツメタルアンギナ、心筋梗塞、ならびに、動脈硬化症、急性脳発作；
− 他の症状、例えば、移植、手術、他の侵襲性処置後の症状；
− 上記医学的症候群に関する健康診断関連において；
− 多様な代謝機能、例えば、高脂血症などの不特定症状、酸化ストレス亢進症状の検出；
− 急性炎症性疾患、例えば、敗血症、ＡＲＤＳ（肺不全）、および孤立性器官の炎症、特に創傷治癒障害の診断；
− 慢性炎症症状、例えば、関節リウマチや、リウマチ型の他の疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病の検出；
・以下のような医学的処置の療法モニタリングとして：
− 特に上述の治療適応分野における、あらゆる種類の医学的介入、例えば、組換え酵素を用いた治療、および対応酵素の活性の変化を伴うあらゆるタイプの医学的介入；
− 特に上述の治療適応分野における、侵襲的処置、例えば、炎症原因の除去手術、心肺機能の代替または機械的支持を含む手術、肝臓手術および多様な移植；
− 上記の組み合わせ。

本発明の化合物を用いて、ＰＬＡ_２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定する方法は多くの利点を有する。例えば、酵素活性は、厄介な処理工程や副反応なしに測定することができる。適当な阻害剤の添加により、種々のヒドロラーゼの混合物中のリン脂質エステルを切断する酵素を選択的に測定することが可能である。本発明の化合物を用いた酵素活性の測定は、マイクロタイタープレートのウエル内で行なわれ得る。さらに、この活性測定はＨＴＳにも適している。連続測定により、ＩＣ５０やＫＩ値などの動力学的データを検出することができる。

以下の実施例は、図１および図２を参照して本発明を説明しているが、本発明はそれらの実施例に限定されるものではない。

実施例１：本発明に従った１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキソイル）−ｒａｃ−グリセ
ロ−３−ホスホコリンの調製

ジクロロリン酸（２−ブロモエチルエステル）

４２．５ｇ（０．２７５ｍｏｌ）の塩化ホスホリルを５０ｍｌのジクロロメタンに溶かした溶液に、１５ｍｌのジクロロメタン中の２７ｇ（０．２１５ｍｏｌ）のブロモエタノールを室温下で１５分かけて滴下した。１５分後、反応溶液に微量のアルゴン流を１８時間通した。オイルポンプ真空（７３〜７４℃、３^＊１０^−２ミリバール）下で蒸留して、５０．５ｇ（７６％）の無色透明な液体を得た。
Ｍ（Ｃ_２Ｈ_４ ^７８Ｂｒ^３５Ｃｌ_２Ｏ_２ ^３１Ｐ）＝２３９ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝２４３（０．５）［Ｍ］，２４１（０．９）［Ｍ］，２３９（０．６）［Ｍ］，１６３（２５），１６１（４１），１４９（１８），１４７（３０），１３７（３６），１３５（５５），１１９（２３），１１７（３４），１０９（６４），１０８（１００），１０７（６９），１０６（１００），９９（１８），４７（２７）．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝４．５９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２Ｂｒ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．２６Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＰ＝１０．３４Ｈｚ），３．１３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２Ｏ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．２６Ｈｚ，^４Ｊ_ＨＰ＝１．０５Ｈｚ）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝６９．８８（１ＣＨ_２Ｏ，^２Ｊ_ＣＰ＝８．３９Ｈｚ），２７．３２（１
ＣＨ_２Ｂｒ，^３Ｊ_ＣＰ＝１０．２９Ｈｚ）．ＩＲ（フィルム）：ｖ（ｃｍ^−１）＝３０３３ｗ，２９７１ｗ，２８８３ｗ，１４５３ｍ，１４２３ｍ，１３８５ｗ，１３０６ｓ，１２３３ｍ，１１８０ｍ，１０７１ｓ，１０１６ｓ，９６３ｍ，９０８ｍ，８４５ｗ，７５９ｍ．

４−オキソ−４−（ピレン−１−イル）酪酸

０．５ｇ（５ｍｍｏｌ）の無水コハク酸を６０ｍｌのニトロベンゾールに溶かした溶液に、１．３２ｇ（５ｍｍｏｌ）の無水ＡｌＣｌ_３と１ｇ（５ｍｍｏｌ）のピレンを０℃で加えた。室温下で１８時間反応させた後、この溶液を３０ｍｌの氷塩酸（２５％）上に注ぎ、沈殿物を得た。濾過し、エタノール（ＥｔＯＨ）から再結晶して、１．２３３ｇ（８２％）の４−オキソ−４−（ピレン−１−イル）酪酸を得た。
Ｍ（Ｃ_２０Ｈ_１４Ｏ_３）＝３０２ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝３０３（１０）［ＭＨ^＋］，３０２（４２）［Ｍ］，２３０（１６），２２９（１００），２０２（１１），２０１（６５），２００（２４）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ_２０Ｈ_１４Ｏ_３）：計算値：３０２．０９４３；実測値：３０２．０９４３．^１Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ_６］−ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）＝８．８１−８．１２（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），３．５２（２Ｈ，ｔ，ＣＯＯＨ_２，^３Ｊ_ＨＨ＝６．２２Ｈｚ），２．８２（２Ｈ，ｔ，ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．２２Ｈｚ）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（［Ｄ_６］−ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）＝２０３．０５（１ＣＯ），１７３．８７（１ＣＯ_２Ｈ），１３２．９７−１２３．４１（９ＣＨ_芳香族，７Ｃ_芳香族），３６．８７（
１ＣＯＣＨ_２），２８．５２（１ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ（ｃｍ^−１）＝３４２６ｍ，３０３９ｍ，２９８４ｍ，２９２９ｍ，２６７７ｗ，２５９４ｗ，１６９５ｓ，１６６５ｓ，１５０７ｗ，１４０４ｗ，１２１２ｍ，１１２３ｗ，１０７５ｗ，８４２ｍ，７１３ｗ．

４−（ピレン−１−イル）酪酸

１ｇ（２．７８ｍｍｏｌ）の４−オキソ−４−（ピレン−１−イル）酪酸を３０ｍｌのジエチレングリコールに溶かし、これに、０．５ｇ（１０ｍｍｏｌ）の水和ヒドラジンおよび０．５６ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＫＯＨを加えた。反応溶液を２時間加熱還流し、次いで、氷冷した塩酸（２５％）上に注ぎ、黄色沈殿物を得た。固体を濾過し、ＥｔＯＨから再結晶して、５７０ｍｇ（７１％）の４−（ピレン−１−イル）酪酸を得た。
Ｍ（Ｃ_２０Ｈ_１６Ｏ_２）＝２８８ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝２８９（１６）［ＭＨ^＋］，２８８（６２）［Ｍ］，２１６（２０），２１５（１００），２１３（１１）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ_２０Ｈ_１６Ｏ_２）：計算値：２８８．１１５０；実測値：２８８．１１５０．^１Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ_６］−ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）＝８．５０−７．９２（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），３．３６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９），２．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ），２．０４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２）．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝８．３２−７．８６（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），３．４２（２Ｈ，ｔ，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９，^３Ｊ_ＨＨ＝７．５７Ｈｚ），２．５１（２Ｈ，ｔ，ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ，^３Ｊ_ＨＨ＝７．００Ｈｚ），２．２３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２，^３Ｊ_ＨＨ＝７．５７Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＨ＝７．００Ｈｚ）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（［Ｄ_６］−ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）＝１７４．７４（１ＣＯ），１３６．３９−１２３．３９（９ＣＨ_芳香族，７Ｃ_芳香族），３３．６４−２６．９８（１ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ，２ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１７７．４８（１
ＣＯ），１３５．２５−１２３．０４（９ＣＨ_芳香族，７Ｃ_芳香族），３３．２１−２６．４６（１ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ，２ＣＨ_２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ（ｃｍ^−１）＝３４４７ｗ，３０３７ｗ，２９５０ｍ，２９３４ｗ，２８７４ｗ，１６９５ｓ，１４３１ｗ，１２７５ｍ，１２０６ｍ，９１８ｗ，８４６ｓ，７１１ｗ．

４−（ピレン−１−イル）酪酸メチルエステル

４０ｍｌのメタノールに２０ｍｌ（２６０ｍｍｏｌ）の塩化チオニルを０℃で滴下した。次いで、この溶液を室温下で１時間攪拌した。５．５０ｇ（１９ｍｍｏｌ）の４−（ピレン−１−イル）酪酸を添加した後、調製物を室温下で一晩攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加えて反応物を中和し、酢酸エチルエステルで抽出した。分析用に有機相からアリコートを採取した。残りの粗生成物はその後の４−（ピレン−１−イル）ブタン−１−オールの調製に用いた。
Ｍ（Ｃ_２１Ｈ_１８Ｏ_２）＝３０２ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝３０３（１３）［ＭＨ^＋］，３０２（５７）［Ｍ］，２２８（１５），２１６（２２），２１５（１００），２１３（１２），１０８（１３）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ_２１Ｈ_１８Ｏ_２）：計算値：３０２．１３０７；実測値：３０２．１３０６．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２５−７．７０（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），３．６３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ_３），２．３６（２Ｈ，ｔ，ＣＨ_２ＣＯ，^３Ｊ_ＨＨ＝７．２０Ｈｚ），２．１１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２，^３Ｊ_ＨＨ＝７．６０Ｈｚ）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１７３．７３（１ＣＯ），１３５．５１−１２３．１５（９ＣＨ_芳香族，７，Ｃ_芳香族），５１．３８（１ＣＨ_３），３３．５２−２６．６４（１ＣＨ_２ＣＯ，２ＣＨ_２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ（ｃｍ^−１）＝３０３３ｗ，２９４９ｗ，２８７６ｗ，１７３４ｓ，１４２９ｍ，１２０９ｍ，１１６１ｍ，８４２ｓ．

４−（ピレン−１−イル）ブタン−１−オール

前工程からの粗生成物を３０ｍｌのＴＨＦに０℃で溶かし、これに、３ｇ（７９ｍｍｏｌ）のＬｉＡｌＨ_４を加えた。反応物を室温下で一晩攪拌した。次いで、過剰な還元剤を加水分解した。カラムクロマトグラフィーにかけて、４．６ｇ（９２％、２ステップ）の所望の化合物を得た。
Ｍ（Ｃ_２０Ｈ_１８Ｏ）＝２７４ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝２７５（１０）［ＭＨ^＋］，２７４（５３）［Ｍ］，２１６（１７），２１５（１００）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ_２０Ｈ_１８Ｏ）：計算値：２７４．１３５８；実測値：２７４．１３５７．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２３−７．７９（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），３．６４（２Ｈ，ｔ，ＣＨ_２Ｏ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．３９Ｈｚ），３．３１（２Ｈ，ｔ，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９，^３Ｊ_ＨＨ＝７．６０Ｈｚ），１．８７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２，^３Ｊ_ＨＨ＝７．７０Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＨ＝７．６０Ｈｚ），１．６９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２，^３Ｊ_ＨＨ＝７．７０Ｈｚ、^３Ｊ_ＨＨ＝６．３９Ｈｚ）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１３６．６５−１２３．３５（９ＣＨ_芳香族，７Ｃ_芳香族），６２．７７（１ＣＨ_２Ｏ），３３．１７−２７．９３（３ＣＨ_２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ^−１）＝３４２３ｓ，幅広，３０３８ｍ，２９２７ｍ，２８５９ｍ，１１８１ｗ，１０３０ｗ，９８２ｗ，８４１ｓ．

１−［４−（１０−ブロモデシルオキシ）ブチル］ピレン

２ｇ（７．３ｍｍｏｌ）の４−（ピレン−１−イル）ブタン−１−オールを１ｇ（９ｍｍｏｌ）のカリウム−ｔ−ブチレートを含む５０ｍｌのトルエン中で１００℃で１時間加熱した。次いで、２．２２ｇ（７．４ｍｍｏｌ）の１，１０−ジブロモデカンを加え、さらに１６時間加熱した。カラムクロマトグラフィーにかけて、２．８２ｇ（７９％）の薄
黄色固体を得た。
Ｍ（Ｃ_３０Ｈ_３７Ｏ^７８Ｂｒ）＝４９２ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝４９５（１０）［ＭＨ^＋］，４９４（３１）［Ｍ］，４９３（１０）［ＭＨ^＋］，４９２（３３）［Ｍ］，４１２（１３），２２８（２２），２１５（１００），５５（１８），４１（１３）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ_３０Ｈ_３７Ｏ^７８Ｂｒ）：計算値：４９２．２０２８；実測値：４９２．２０２８．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝８．３０−７．８５（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），３．４９−３．４５（２Ｈ，ｔ，ＣＨ_２Ｂｒ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．４４Ｈｚ），３．４１−３．３４（６Ｈ，ｍ，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９，２ＣＨ_２Ｏ，^３Ｊ_ＨＨ＝７．０８Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．８１Ｈｚ），１．９６−１．９０（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２，^３Ｊ_ＨＨ＝７．０８Ｈｚ，^３Ｊ_ＨＨ＝６．４４Ｈｚ），１．８３−１．７３（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ_２，^３Ｊ_ＨＨ＝６．８１Ｈｚ），１．５５−１．５３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，６ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１３６．７２−１２３．３０（９ＣＨ_芳香族，７Ｃ_芳香族），７０．９３−７０．５５（２ＣＨ_２Ｏ），３３．９４−２６．１５（１ＣＨ_２Ｂｒ，１１ＣＨ_２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ^−１）＝３０３７ｗ，２９２４ｓ，２８５１ｓ，１４９９ｍ，１４４８ｍ，１４２９ｗ，１３６９ｗ，１２４３ｗ，１１８４ｗ，１１１７ｓ，１０６３ｗ，９６５ｗ，８４９ｍ，８４１ｓ，７１０ｓ．

２，２−ジメチル−４−［１０−Ｏ−（４−（ピレン−１−イル）ブトキシ）デシル］メチル］−［１，３］−ジオキソラン

１．８５ｇ（１４ｍｍｏｌ）の２，２−ジメチル−４−ヒドロキシメチルー１，３−ジオキソランを１．６ｇ（１４ｍｍｏｌ）のカリウム−ｔ−ブチレートを含む８０ｍｌのトルエン中で１時間加熱還流した。室温に冷ました後、２．１１８ｇ（４．３ｍｍｏｌ）の１−［４−（１０−ブロモデシルオキシ）ブチル］ピレンを加え、さらに１８時間加熱した。カラムクロマトグラフィーにかけて、１．１７４ｇ（５０％）の薄黄色固体を得た。Ｍ（Ｃ_３６Ｈ_４８Ｏ）＝５４４ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝５４５（２２）［ＭＨ^＋］，５４４（６２）［Ｍ］，２５７（２２），２１５（１００），１０１（１８），５５（１１），４３（１４）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ_３６Ｈ_４８Ｏ_４）：計算値：５４４．３５５３；実測値：５４４．３５５３．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２９−７．８３（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），４．２６−４．２１（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ_２Ｏ），４．０７−４．００（１Ｈ，ｍ，ＣＨＯ），３．７５−３．３１（１０Ｈ，ｍ，４ＯＣＨ_２，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９），１．９５−１．８６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．７８−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．５５−１．５３（４Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．４１および１．３５（６Ｈ，ｓ，２ＣＨ_３），１．２６（１２Ｈ，ｍ，６ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１３６．９２−１２３．４８（９ＣＨ_芳香族，７Ｃ_芳香族），１０９．３３（１Ｃ（ＣＨ_３）_２），７４．７７（１ＣＨＯ），７１．８５−７０．６４（４ＣＨ_２Ｏ），６６．９４（１ＣＨ_２Ｏ），３３．３３−２５．８９（１１ＣＨ_２），２６．７７および２５．４３（２ＣＨ_３）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ^−１）＝３０５９ｍ，２９５２ｓ，２８９０ｍ，２８６６ｓ，１５２４ｗ，１４６７ｍ，１３６９ｗ，１２８９ｍ，１１１２１ｍ，１０５８ｍ，８３７ｗ，６８４ｓ．

１−Ｏ−｛１−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−ｒａｃ−グリセロール

１ｍｌのトリフルオロ酢酸を１０ｍｌのトルエン中の０．１８３ｇ（０．３３６ｍｍｏｌ）の２，２−ジメチル−４−［１０−Ｏ−（４−（ピレン−１−イル）ブトキシ）デシル）メチル］−［１，３］−ジオキソランに０℃で加え、１時間攪拌した。ＮａＨＣＯ_３水溶液を加えて中和した後、カラムクロマトグラフィーにかけて、０．１６０ｇ（９４％）の薄黄色固体を得た。
Ｍ（Ｃ_３３Ｈ_４４Ｏ_４）＝５０４ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝５０５（３２）［ＭＨ^＋］，５０４（１００）［Ｍ］，２５７（１７），２２８（２１），２１６（１９），２１５（８９），５５（１４）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ_３３Ｈ_４４Ｏ_４）：計算値：５０４．３２４０；実測値：５０４．３２３８．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２９−７．８３（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），３．８７−３．５９（３Ｈ，ｍ，ＣＨＯＨ，ＣＨ_２ＯＨ），３．４７−３．３１（１０Ｈ，ｍ，４ＯＣＨ_２，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９），１．９４−１．８９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．７７−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．５４−１．５１（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ_２），１．２４（１２Ｈ，ｍ，６ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１３６．９４−１２３．４８（９ＣＨ_芳香族，７Ｃ_芳香族），７２．０３−７０．６５（４ＣＨ_２Ｏ），７０．５０（１ＣＨＯＨ），６３．８１（１ＣＨ_２ＯＨ），３３．３１−２５．９７（１１ＣＨ_２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ^−１）＝３４１９ｓ，幅広，３０５８ｗ，２９３２ｍ，２８５１ｍ，１４３７ｍ，１４３３ｍ，１２６５ｍ，１２０５ｍ，１１８６ｍ，１１３８ｍ，１１１２ｍ，１０４８ｍ，８４３ｍ．

１−Ｏ−｛１−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−３−Ｏ−トリフェニルメチル−ｒａｃ−グリセロール

５０ｍｌのアセトニトリル中４．２１５ｇ（８．４ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−ｒａｃ−グルセロールを調製し、これに、２０ｍｌのアセトニトリル中４．０９ｇ（１０ｍｍｏｌ）の１−（トリフェニルメチル）ピリジニウムテトラフルオロボレーとを加えた。溶液を１８時間攪拌し、濃縮して、クロロホルムで抽出した。固体を濾去した。濾液をカラムクロマトグラフィーにかけて、３．６９７ｇ（５９％）の薄黄色固体として所望の化合物を得た。
Ｍ（Ｃ_５２Ｈ_５８Ｏ_４）＝７４６ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ^＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝７４６．４［Ｍ］，５０４．３，２４４．
１，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_５２Ｈ_５８Ｏ_４）：計算値：７４６．４３３５；実測値：７４６．４３７５．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_５２Ｈ_５８Ｏ_４Ｎａ）：計算値：７６９，４２３３；実測値：７６９．４３０４．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝８．３１−７．８５（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），７．４５−７．１９（１５Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），３．９５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．５５−３．３３（１０Ｈ，ｍ，４ＯＣＨ_２，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９），３．２４−３．１８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２ＯＣ（Ｃ_６Ｈ_５）_３），１．９７−１．８７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．８１−１．７３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．５５−１．５１（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ_２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，６ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１４６．９０−１２３．５１（２４ＣＨ_芳香族，１０Ｃ_芳香族），８６．６５（１Ｃ（Ｃ_６Ｈ_５）_３），７２．９５−７０．６７（４ＣＨ_２Ｏ），６９．８７（１ＣＨ），６４．６５（１ＣＨ_２ＯＣ（Ｃ_６Ｈ_５）_３），３３．３５−２６．９７（１１ＣＨ_２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ^−１）＝３４２９ｍ，３０５６ｗ，２９２７ｓ，２８５５ｓ，１６０２ｗ，１４９０ｍ，１４４８ｍ，１３１９ｗ，１２１３ｍ，１１１３ｍ，１０７７ｍ，１０３３ｍ，８９９ｗ，８４６ｍ，７４６ｍ，７０６ｓ．

１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−トリフェニルメチル−ｒａｃ−グリセロール

２．５７８ｇ（３．４５５ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−３−Ｏ−トリフェニルメチル−ｒａｃ−グリセロールおよび１．５ｍｌ（１８．６６ｍｍｏｌ）のピリジンを５０ｍｌのＣＨ_２Ｃｌ_２に溶かした溶液に、５４０ｍｇ（３．８５７ｍｍｏｌ）の塩化ベンゾイルを０℃で滴下し、室温下で１時間攪拌した。カラムクロマトグラフィーにかけて、２．８ｇ（９５％）の生成物を単離した。
Ｍ（Ｃ_５９Ｈ_６２Ｏ_５）＝８５０ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ^＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝８７３．４［Ｍ＋Ｎａ］，８５０．４［Ｍ］，６０８．３，５９１．３，３９１．３，３０７．１，２４３．１，２１５．１．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝８．３０−７．８６（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），７．４５−７．２１（２０Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），５．４６−５．４１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７９−３．３４（１２Ｈ，ｍ，４ＯＣＨ_２Ｏ，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９，ＣＨ_２ＯＣ（Ｃ_６Ｈ_５）_３），１．９７−１．８９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．８０−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．５５−１．５１（４Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１６６．００（１ＣＯ），１４６．８８−１２３．５１（２９ＣＨ_芳香族，１１Ｃ_芳香族），８６．４７（１
Ｃ（Ｃ_６Ｈ_５）_３），７２．６５（１ＣＨ），７１．５９−６９．４７（４ＣＨ_２Ｏ），６２．８６（１ＣＨ_２ＯＣ（Ｃ_６Ｈ_５）_３），３３．３５−２６．０１（１１ＣＨ_２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ^−１）＝３０５７ｗ，２９２７ｓ，２８５４ｍ，１７１８ｓ，１４４８ｍ，１３８４ｍ，１２７２ｍ，１２１２ｗ，１１７７ｗ，１１５８ｗ，１１１２ｍ，１０３２ｗ，８９９ｗ，８４６ｍ，７６３ｍ，７０３ｍ．

１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−ｒａｃ−グリセロール

０．５５ｇ（０．６４７ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−トリフェニルメチル−ｒａｃ−グリセロールを２０ｍｌのＣＨ_２Ｃｌ_２に溶かし、これに、０．５ｍｌのＢＦ_３（ＭｅＯＨ中１３％）を−１０℃で滴下した。１時間後、５ｍｌの氷冷水を加えて反応を停止させた。カラムクロマトグラフィーにかけて、２８０ｍｇ（７１％）の化合物を得た。
Ｍ（Ｃ_４０Ｈ_４８Ｏ_５）＝６０８ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ^＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝６０８．３［Ｍ］，５９１．３，４６９．３，３２９．１，２５７．２，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_４０Ｈ_４８Ｏ_５）：計算値：６０８．３５０２；実測値：６０８．３５１９．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_４０Ｈ_３８Ｏ_５Ｎａ）：計算値：６３１．３３９９；実測値：６３１．３４２４．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２９−７．８４（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），７．６２−７．３４（５Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），５．２７−５．２２（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．９９−３．３４（１２Ｈ，ｍ，４ＣＨ_２Ｏ，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９，ＣＨ_２ＯＨ），１．９７−１．８８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．８０−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．５７−１．５１（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ_２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，６ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１６６．３８（１ＣＯ），１３６．９４−１２３．５１（１４ＣＨ_芳香族，８Ｃ_芳香族），７３．８１（１ＣＨ），７１．９４−６８．９５（４ＣＨ_２Ｏ），６２．８７（１ＣＨ_２ＯＨ），３３．８０−２６．１９（１１ＣＨ_２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ^−１）＝３４３１ｍ，３０３８ｍ，２９３０ｓ，２８５９ｍ，１７１８ｓ，１６０３ｍ，１５８５ｍ，１４５３ｍ，１４３５ｍ，１３１７ｍ，１２７４ｓ，１１７９ｍ，１１１３ｍ，１０２７ｍ，９３６ｍ，８４６ｍ，７０９ｓ．

１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン

０．５５ｇ（２．３ｍｍｏｌ）の２−ブロモエチル−ジクロロホスフェートを１５ｍｌのＣＨ_２Ｃｌ_２に０℃で加え、これに、１．６ｍｌのピリジンと４ｍｌのＣＨ_２Ｃｌ_２との混合物を滴下した。次いで、２１０ｍｇ（３．４５ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−ｒａｃ−グリセロールを２ｍｌのＣＨ_２Ｃｌ_２に溶かし、この溶液を室温下でリン酸化混合物に滴下した。反応物を２時間加熱還流し、室温下で一晩攪拌した。５ｍの氷冷水で加水分解（その後１時間攪拌）した後、反応物をＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ（３：２）と共に振盪した。有機相をＮ
ａ_２ＳＯ_４で脱水し、１５ｍｌのＣＨＣｌ_３、１０ｍｌのアセトニトリルおよび５ｍｌのイソプロパノール中で回転させて溶かした。次いで、１．５ｇのトリメチルアミン溶液（エタノール中３３％）を加えた。反応フラスコを緊密に密閉し、５０℃で一晩攪拌した。反応溶液を回転させ、５ｍｌのＣＨＣｌ_３で抽出し、それぞれ４ｍｌのギ酸／ＭｅＯＨ（５：７）、４ｍｌの酢酸ナトリウム（０．１Ｍ）／ＭｅＯＨ（５：７）および３ｍｌの塩化ナトリウム（１Ｍ）／ＭｅＯＨ（５：７）の各々を２回ずつ振盪した。ＮａＳＯ_４で脱水し、有機相をカラムクロマトグラフィーにかけて、９９ｍｇ（３８％）の所望の化合物を得た。
Ｍ（Ｃ_４５Ｈ_６０Ｎ_２Ｏ_８ ^３１Ｐ）＝７７３ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ^＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝７９６．３［Ｍ＋Ｎａ］，７７４．４［ＭＨ^＋］，６０１．５，５６９．４，５３１．４，４１３．３，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_４５Ｈ_６１Ｏ_８ＮＰ）：計算値：７７４．４１４５；実測値：７７４．４１３５．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_４５Ｈ_６０Ｏ_８ＮＰＮａ）：計算値：７９６．３９５４；実測値：７９６．３９５１．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）＝８．３４−７．８９（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），７．７３−７．４５（５Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），５．４１−５．３７（１ＣＨ，ｍ，ＣＨ），４．２０−４．１７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２Ｎ），４．０５−３．３５（１４Ｈ，ｍ，４ＯＣＨ_２，ＣＨ_２ＯＰ，ＰＯＣＨ_２，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９），３．１６（９Ｈ，ｓ，３ＣＨ_３），１．９６−１．９０（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．８１−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．５２−１．４８（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ_２），１．２８（１２Ｈ，ｍ，６ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）＝１６７．７８（１ＣＯ），１３８．３０−１２４．６０（１４ＣＨ_芳香族，８Ｃ_芳香族），７４．２７（１ＣＨ），７２．８１−７０．４８（４ＣＨ_２Ｏ），６８．８７，６６．９０，６０．９５（１ＣＨ_２Ｎ，１ＣＨ_２ＯＰ，１ＰＯＣＨ_２），５４．９０（３ＣＨ_３），３４．３８−２７．２９（１１ＣＨ_２）．

１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン

９０ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−ｒａｃ−グリセロ―３−ホスホコリンを３ｍｌのＭｅＯＨに溶かし、これに、ＭｅＯＨ（１．２５当量）中０．１ＭのＢｕ_４ＮＯＨ溶液を１．５ｍｌ加えた。２時間後、反応溶液を濃縮した。カラムクロマトグラフィーにかけて、７１ｍｇ（９０％）のリソ化合物を得た。
Ｍ（Ｃ_３８Ｈ_５６ＮＯ_７ ^３１Ｐ）＝６６９ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ^＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝６９２．３［Ｍ＋Ｎａ］，６７０．４［ＭＨ^＋］，６６９．４［Ｍ］，５８４．３，２４２．３，２８９．１，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_３８Ｈ_５７ＮＯ_７ ^３１Ｐ）：計算値：６７０．３８７３；実測値：６７０．３８８１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_３８Ｈ_５６ＮＯ_７ ^３１ＰＮａ）：計算値：６９２．３６９２；実測値：６９２．３６９３．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）＝８．２３−７．８８（９Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），４．４３−４．３８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２Ｎ），４．０
２−３．３６（１５Ｈ，ｍ，４ＯＣＨ_２，ＯＣＨ，ＣＨ_２ＯＰ，ＰＯＣＨ_２，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９），３．２２（９Ｈ，ｓ，３ＣＨ_３），１．９６−１．８７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．７７−１．６６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．５５−１．４７（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ_２），１．２７（１２Ｈ，ｍ，６ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１７０．４６（１ＣＯ），１３８．１６−１２４．４８（９ＣＨ_芳香族，７Ｃ_芳香族），７２．９０−７１．４７（４ＣＨ_２Ｏ），７１．０３（１ＣＨ），６７．３１，６６．６３，５９．３３（１ＣＨ_２ＯＰ，１ＣＨ_２Ｎ，１ＰＯＣＨ_２），５４．７８（３ＣＨ_３），３３．３６−２４．５９（１０ＣＨ_２）．ＩＲ（ＢＫｒ）：ｖ〜（ｃｍ^−１）＝３４１８ｓ，３０３９ｍ，２８５２ｍ，１６３５ｍ，１４９０ｍ，１４６７ｍ，１３７５ｗ，１２３０ｍ，１１１１ｍ，１０８７ｍ，１０５１ｍ，９７０ｍ，９２８ｗ，８５０ｍ．

１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキソイル）−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン

０．３２６ｇ（１．１ｍｍｏ）の６−（２，４−ジニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸、１３６ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）のＤＣＣおよび４０８ｍｇ（３．２ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを、１０ｍｌのジクロロメタン中の０．１５０ｇ（０．２２ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンに加え、室温下で４０時間攪拌した。次いで、得られた懸濁液に５ｍｌの水を加え、珪藻土で濾過した。相を分離した後、クロマトグラフィーにかけて、５６ｍｇ（２６％）の生成物を単離した。
Ｍ（Ｃ_５０Ｈ_６９Ｎ_４Ｏ_１２ ^３１Ｐ）＝９４８ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ^＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝９７１．４［Ｍ＋Ｎａ］，９４９．４［ＭＨ^＋］，８８４．４，８６２．４，７２１．４，２４３．２，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_５０Ｈ_７０Ｏ_１２Ｎ_４Ｐ）：計算値：９４９．４７２５；実測値：９４９．４７５５．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ_５０Ｈ_６９Ｏ_１２Ｎ_４ＰＮａ）：計算値：９７１．４５４５；実測値：９７１．４５４７．^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝９．００−６．６７（１２Ｈ，ｍ，ＣＨ_芳香族），５．１３−５．１０（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），４．３４−４．２８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２Ｎ），４．０８−３．２３（１６Ｈ，ｍ，４ＯＣＨ_２，ＰＯＣＨ_２，ＣＨ_２ＯＰ，ＣＨ_２Ｎ，ＣＨ_２Ｃ_１６Ｈ_９），３．１８（９Ｈ，ｓ，３ＣＨ_３），２．３８−２，３１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２ＣＯ），１．９５−１．８６（４Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．８０−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ_２），１．５６−１．４１（８Ｈ，ｍ，４ＣＨ_２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，６ＣＨ_２）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）＝１７０．４６（１ＣＯ），１４８．６６−１１３．９８（１２ＣＨ_芳香族，１０Ｃ_芳香族），７３．８６（１ＣＨ），７２．８１−６９．１２（４ＣＨ_２Ｏ），６７．３１，６６．６３，６０．３０（１ＣＨ_２ＯＰ，１ＣＨ_２Ｎ，１ＰＯＣＨ_２），５４．７８（３ＣＨ_３），４３．２７（１ＣＨ_２Ｎ），３３．３６−２４．５９（１ＣＨ_２ＣＯ，１４ＣＨ_２）．ＩＲ（ＢＫｒ）：ｖ〜（ｃｍ^−１）＝３３６５ｍ，３１０７ｗ，３０４２ｗ，２９２８ｍ，２８５３ｍ，１７２９ｍ，１６２３ｓ，１５
８９ｍ，１５２５ｍ，１５００ｗ，１４７５ｗ，１４２５ｍ，１３６９ｗ，１３３７ｓ，１３１２ｍ，１２８０ｍ，１２４５ｍ，１１８７ｍ，１１４４ｍ，１０９４ｍ，１０６０ｗ，１０３２ｗ，９２３ｗ，８３２ｗ，７４５ｗ．
実施例２：本発明の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキソイル）−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンを用いたＰＡＦ−ＡＨ活性の測定
検査用に、実施例１の本発明化合物の１０ｍＭＤＭＳＯストック溶液を調製し、次いで、使用緩衝液（０．１Ｍトリス塩酸（ＴＲＩＳＨＣｌ）、０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、ｐＨ７．４）で、それぞれ各試験に望ましい濃度に希釈した。

（石英キュベットでの測定）
ヘルマ社（Ｈｅｌｍａ）〔独国ミュルハイム（Ｍｕｌｌｈｅｉｍ）／バーデン（Ｂａｄｅｎ）所在〕の１ｍｌ容量石英キュベット（１ｃｍ×１ｃｍ）を使用する。

バリアン社（Ｖａｒｉａｎ）〔独国ダルムシュタット（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ）所在〕のケーリー・エクリプス（ＣａｒｙＥｃｌｉｐｓｅ）ソフトウエアの設定：
・動力学モジュールにおいて：励起波長（ｎｍ）＝３４４．００；蛍光波長（ｎｍ）＝３７７．００；励起スリット（ｎｍ）＝５；蛍光スリット（ｎｍ）＝５；平均化時間（ｓ）＝０．１０００；滞留時間（ｓ）＝０．１０００；サイクル時間（分）＝０．２５００；励起フィルター＝自動；蛍光フィルター＝オープン；マルチセルホルダー＝マルチセル；ＰＭＴ電圧（Ｖ）＝中；温度制御。

検査は、４方向ペルチェ（Ｐｅｌｔｉｅｒ）キュベットホルダーを用い、３７℃で実施した。
（マイクロタイタープレートでの測定）
パーキンエルマー社（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）〔独国ユーバリンゲン（Ｕｂｅｒｌｉｎｇｅｎ）所在〕の白色９６ウエルタイタープレートおよびグライナー社（Ｇｒｅｉｎｅｒ）〔独国フリケンハウゼン（Ｆｒｉｋｅｎｈａｕｓｅｎ）所在〕の黒色９６ウエルＦＩＡプレートを用いた。

バリアン社（独国ダルムシュタット所在）のケーリー・エクリプス（ＣａｒｙＥｃｌｉｐｓｅ）ソフトウエアの設定：
・動力学モジュールにおいて：励起波長（ｎｍ）＝３４４．００；蛍光波長（ｎｍ）＝３７７．００；励起スリット（ｎｍ）＝５；蛍光スリット（ｎｍ）＝５；平均化時間（ｓ）＝０．１０００；サイクル時間（分）＝０．００００；励起フィルター＝自動；蛍光フィルター＝オープン；ＰＭＴ電圧（Ｖ）＝中；ウエルプレート＝ＯＮ；読取位置＝ウエル中心。

（ＰＡＦ−ＡＨの調製）
（血漿およびヒトＬＤＬの調製および純度検査）
使用緩衝液：ＰＢＳ緩衝液（１５０ｍＭＮａＣｌ、４０ｍＭリン酸、１ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ＝７．４）。この緩衝液を１５分間アルゴンで飽和した。

（血漿の調製）
３，０００ｒｐｍのヘルムレ（Ｈｅｒｍｌｅ）遠心分離機を用いて、１００ｍｌの採取したてのヘパリン添加血液を２×５０ｍｌ管中室温下で遠心した。各上清から２０ｍｌを取ってプールし、これに、４００μｌの０．１ＭＥＤＴＡ溶液（ｐＨ＝７．４５）を加え、アルゴン雰囲気とした（mit Argon ueberschichtet) 。

（ＬＤＬの調製）
３２ｍｌの血漿サンプルに１２．２１１２ｇのＫＢｒｐ．ａ．を加え、アルゴン雰囲気とした。ＫＢｒを低速振動により溶解させた。ベックマン社（Ｂｅｃｋｍａｎ）〔独国ミュンヒェン（Ｍｕｎｉｃｈ）所在〕の６×４ｍｌ遠心分離管中で２ｍｌのＰＢＳ溶液を調製し、ＫＢｒを添加した血漿サンプルを加えて層を形成した。次いで、これを、４℃、真空下３７，０００ｒｐｍで２時間遠心した。この後、ロータから遠心分離管を慎重に抜出した。所望のＬＤＬは、遠心分離管の底から約１／３離れた位置の黄色帯域として区別可能である。先ず、上部の白色層を取り出して廃棄した。黄色層は厚さ約１ｍｍである。この層を、先の丸い曲った針を用いて取り出した。全６本の遠心分離管中に含まれていたＬＤＬをプールし、アルゴン雰囲気にした。ＫＢｒを除去するために、得られた溶液のうち３００μｌを、ＰＢＳ緩衝液を用いるセファデックス−Ｇ２５ミニカラムを用いて色層分析にかけた。

（タンパク質測定）
溶液Ａ：１％Ｎａ_２ＢＣＡ、２％Ｎａ_２ＣＯ_３Ｈ_２Ｏ、０．１６％酒石酸ナトリウム、０．４％ＮａＯＨ、０．９５％ＮａＨＣＯ_３、ｐＨ＝１１．２５
溶液Ｂ：４％ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ
標準としてＢＳＡを用いた。すべての測定は２重測定として実施した。１種の調製物の総量は３００μｌ／ウエルで、たいてい２．５μｌの測定サンプル（場合により希釈後）を用いた。これを水で７５μｌまで満たし、これに、２２５μｌの溶液Ａと溶液Ｂの５０：１混合物を加えた。インキュベーション時間は室温下で２時間であった。次いで、サンプルを５６２ｎｍで光度測定した。

（単離ＬＤＬの純度検査）
検査はサブマリン型ミニゲル電気泳動を用いて実施した。
・ゲル組成：２０ｍｌのバルビタール緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ＝８．６）、０．３％Ｓｅｐａｒｉｄｅ（商標）（６０ｍｇ）
・単離ＬＤＬの調製：１０μｌ（０．５〜１μｇ）の円柱状ＬＤＬ、０．５μｌの９−ジエチルアミノ−５Ｈ［α］フェノキサゼン−５−オン（ナイルレッド）（０．４ｍｇ／ｍｌ）、１０μｌの使用緩衝液（ＴＢＥ緩衝液、３０％グリセロール、１％ＳＤＳ、ブロムフェノールブルーのスパチュラチップ）
・ＴＢＥ緩衝液（８９ｍＭトリス塩酸、８９ｍＭＢ（ＯＨ）_３、２ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ＝８．５）
・電気泳動時間：室温下で（５６Ｖの一定Ｕで）１時間
・固定液：２５％ ^ｉＰｒＯＨ、１０％酢酸、６５％水
・染色液：５０％ＭｅＯＨ、１０％酢酸、４０％水、０．０５％クーマシーブリリアントブルーＲ２５０
・脱色液：５％ＭｅＯＨ、７％酢酸、８８％水
（ＬＤＬからのＰＡＦ−ＡＨの単離）
緩衝液Ａ：２５ｍＭトリス塩酸、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０、２ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７．６
緩衝液Ｂ：２５ｍＭトリス塩酸、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０、２ｍＭＥＤＴＡ、５０〜２００ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．６（線形勾配）
すべての作業は４℃で実施した。

１ｍｌ（２ｍｇ／ｍｌ）のＬＤＬを、アマーシャム・ファルマシアバイオテク社（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａｂｉｏｔｅｃｈ）〔独国フライブルグ（Ｆｒｅｉｂｕｒｇ）所在〕の予備平衡（緩衝液Ａ）ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦＦクロマトグラフィーカラム上にピペットで移し、６倍カラム充填量で洗浄して、タンパク質を含まない溶離液を得た。次いで、緩衝液Ｂでタンパク質を溶出させた。１００−１５０ｍＭＮａＣｌ留分で最高のＰＡＦ−ＡＨ活性を得た。これらをプールし、限外ろ過（
ＡｍｉｃｏｎＹＭ３０）で濃縮した。次いで、濃縮留分を、アマーシャム・ファルマシアバイオテク社（独国フライブルグ所在）の予備平衡（緩衝液Ａ）ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅョ６ＦＦクロマトグラフィーカラムにピペットで移し、６倍カラム充填量で
洗浄して、タンパク質を含まない溶離液を得た。次いで、緩衝液Ａ＋０．５ＭＮａＣｌでタンパク質を溶出させた。最高のＰＡＦ−ＡＨ活性を有する留分をプールし、限外ろ過（ＡｍｉｃｏｎＹＭ３０）して濃縮した。

ＰＡＦ−ＡＨの含有量をタンパク質測定により測定した。純度をＬＤＬのＳＤＳ電気泳動と類似の方法で調べた。得られたＰＡＦ−ＡＨは活性を調べるのに十分な純度を有していた。

図１は、本発明の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキソイル）−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン化合物に対するＰＡＦ−ＡＨの作用による蛍光増大の時間経過を示している。測定は上述の条件下で実施した。図１から明らかなように、ＰＡＦ−ＡＨの存在下で蛍光の増大が生じる。ＰＡＦ−ＡＨ不在の場合（コントロール）には、蛍光強度の増大は認められなかった。

図２は、異なる量のＰＡＦ−ＡＨまたは異なる希釈度のヒトサンプル物質と、蛍光強度の増大との関係を示している（上述の試験条件）。ＰＡＦ−ＡＨ濃度が高くなるほど蛍光強度の著しい増大を観察し得ることが判明した。

上記明細書中、本願の国際出願時の独語明細書において記載されていた下記の文字を便宜的に「ｖ〜」と表記した。

ＰＡＦ−ＡＨの作用による蛍光増大の典型的な時間経過を示す図。異なる量の酵素または異なる希釈度のヒトサンプル物質と、蛍光増大との関係を示す図。

Claims

下記式（Ｉ）で示される化合物

〔式中、Ｌ_１は、エーテル（Ｒ^１−ＯＲ^２）_ｍまたは１〜２０個の炭素原子を有する炭化水素Ｒから誘導され、前記Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立に選択され、１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素から誘導され、ｍは１〜４の整数を表し；
Ｆは発蛍光団としての非置換ピレンまたは置換ピレンであり、前記置換ピレンはそれぞれ独立に選択される１種以上の置換基を含み、前記置換基はアミノ基もしくはカルボニル基であるか、またはピレンのＣ原子を置換するＮ、ＳもしくはＰのヘテロ原子であり、置換ピレンの蛍光特性に影響を及ぼさず；
Ｑは消光物質であり、前記消光物質は１個以上のニトロ基で置換されたフェニル残基であり；
Ｌ_２は、Ｃ（Ｏ）−Ｌ_１またはＣ（Ｏ）−Ｌ_１−ＮＨであり、該Ｌ_１は上記定義の通りである〕。
消光物質が２，４−ジニトロフェニル残基である、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^１およびＲ^２がそれぞれ独立に（ＣＨ_２）_ｎであり、ｎが２〜１２の整数である、請求項１または２に記載の化合物。
Ｌ_１が（ＣＨ_２）_４−Ｏ−（ＣＨ_２）_１０を表す、請求項１乃至３のいずれか１項に記
載の化合物。
Ｒが（ＣＨ_２）_ｏであり、ｏが１〜２０の整数である、請求項１または２に記載の化合物。
Ｌ_２が、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｐまたはＣ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｐ−ＮＨであり、ｐが１〜２０の整数である、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の化合物。
Ｌ_２がＣ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_５−ＮＨである、請求項６に記載の化合物。
前記化合物が下記式（２）の構造を有する、請求項１乃至７のいずれか１項に記載の化合物。
ホスホリパーゼＡ_２の活性を測定するための請求項１乃至８のいずれか１項に記載の化合物の使用。
前記ホスホリパーゼＡ_２が血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼである、請求項９に記載の使用。