JP4115561B2

JP4115561B2 - Hair growth promoter

Info

Publication number: JP4115561B2
Application number: JP26293797A
Authority: JP
Inventors: 克裕筬島; 英治関; 真弓吉田
Original assignee: 仙味エキス株式会社
Priority date: 1997-09-11
Filing date: 1997-09-11
Publication date: 2008-07-09
Anticipated expiration: 2017-09-11
Also published as: KR100523432B1; JPH1180018A; KR19990029136A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、育毛促進剤に関するものであり、更に詳細には、魚肉に由来するペプチドを有効成分とする、従来未知にして安全でありしかもきわめて効果の高い、外用はもちろんのこと内用も可能な天然系育毛促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より育毛促進剤の開発が行われており、天然物を利用する育毛促進剤についてもさかんに開発、実用化が試みられているが、魚肉を酵素分解して得られるペプチドに育毛促進作用があることは知られていないし、ましてや経口投与により育毛が促進されるという知見は、従来、全く知られていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
近年になり、食生活の洋風化、ストレスの増加等各種の要因によって頭髪がうすくなったり脱けたりする症例が非常に増加しており、老年層のみならず若年層にまでその症例は拡大しており、その解決が強く希求されている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、このような当業界における強い要望に応える目的でなされたものであって、魚肉の酵素分解物の研究過程において、イワシ魚肉を加熱変性せしめて自己消化酵素を失活せしめた後プロテアーゼ処理して得たペプチドが毛包細胞の増殖を促進せしめるというきわめて有用な新知見を得、この有用新知見に基づき更に研究の結果、遂に完成されたものである。
【０００５】
すなわち本発明は、魚肉を加熱変性せしめて自己消化酵素を失活せしめた後プロテアーゼ処理して得られるペプチドを有効成分とする育毛促進剤を基本的技術思想とするものである。
【０００６】
本発明に係る育毛促進剤の有効成分として使用するペプチドとしては、上記のように魚肉を加熱変性せしめた後プロテアーゼ処理して得られるペプチドが適宜広範に使用することができるが、例えば、下記表２、表３に示される物理化学的性質を有する魚肉由来のペプチドα−１０００は好適なペプチドの１例である。
【０００７】
【表２】
ペプチドα−１０００の物理化学的性質（１）
（Ａ）分子量
２００〜１０，０００（セファデックスＧ−２５（商標）カラムクロマトグラフィーによる）
（Ｂ）融点
１１９℃で分解着色する。
（Ｃ）比旋光度
２０℃において、ナトリウムのＤ線で測定したときの比旋光度
〔α〕：−２２°
（Ｄ）溶剤に対する溶解性
水に易溶であるが、エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない。
（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別
中性
【０００８】
【表３】

【０００９】
本ペプチドは魚介類を原料として製造するものであるが、先ず、これを採肉機、デボーナー等によって処理して魚肉質を分離する。原料は出来る限り新鮮なものが好ましい。分離した魚肉は、１０kg程度のすり身に分割し、このまま次の処理に使用してもよいが、−２０〜−５０℃、例えば−３０℃程度の冷気を吹き付けて急速凍結し、−２０〜−２５℃に保存しておき、必要に応じてこれを適宜使用することにしてもよい。
【００１０】
魚介類としては、イワシ、アジ、マグロ、カツオ、サンマ、サバ等赤身魚；ヒラメ、タイ、キス、コノシロ、タラ、ニシン、ブリ等白身魚；サメ、エイ等軟骨魚肉；ワカサギ、コイ、イワナ、ヤマメ等淡水魚肉；アイザメ、アンコウ等深海魚肉のほか、エビ、カニ、タコ、アミ類等も適宜使用できる。
【００１１】
本発明においては、採肉した後、粉砕機等によって魚介類を粉砕し、原料重量に対して１／２量〜２０倍量、好ましくは等量〜１０倍量の加水を行った後、加熱処理し、もって、自己消化酵素を失活させ、且つ雑菌を死滅させるとともに、タンパク質を熱変性させて後に行う酵素反応効率を上昇せしめる。加熱条件としては、このような作用が奏される条件であればすべての条件が利用できるが、例えば６５℃以上、２〜６０分、好ましくは８０℃以上、５〜３０分とするのがよい。
【００１２】
次いで、アンモニア水、水酸化ナトリウム（カリウム）水溶液等アルカリ剤を加えて、使用する蛋白分解酵素の適値にｐＨを調整し（例えばアルカリプロテアーゼの場合は、ｐＨ７．５以上、好ましくは８以上）、温度も酵素適温（使用酵素によって異なるが、２０〜６５℃、アルカリプロテアーゼの場合は３５〜６０℃、好ましくは４０〜５５℃）に加温し、蛋白分解酵素を加えて３０分〜３０時間（アルカリプロテアーゼの場合は３０分〜２５時間、好ましくは１〜１７時間）処理する。
【００１３】
蛋白分解酵素としては、中性またはアルカリ性条件下で蛋白質を分解し得る酵素であればすべての酵素が単独で又は混合して使用し得る。その起源は、動植物のほかに微生物に求めることができ、ペプシン、レニン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、ブロメレインのほか、細菌プロテアーゼ、糸状菌プロテアーゼ、放線菌プロテアーゼ等も広く利用できる。これらの酵素は、通常、市販されているものが使用されるが、未精製の酵素、酵素を含有した培養液、麹といった固体又は液体の酵素含有物も、目的により必要に応じて使用することができる。酵素の添加量としては０．１％〜５．０％程度でもよい。
【００１４】
次いで必要であれば中和処理を行った後、７０℃（好適には８０℃）以上の温度に２〜６０分間（好適には５〜３０分間）保持し、酵素を失活させるとともに後に行う分離を良好ならしめる。加熱失活処理後、バイブロスクリーン等による濾過によって粗分離し、必要によりジェクター処理した後、超遠心分離処理して、浮遊物、沈殿物を除去する。
【００１５】
次に、ケイソウ土等濾過助剤（例えばセライト）を用いて濾過し、濾液を活性炭処理して（０．０５〜２０％Ｗ／Ｖ、好ましくは０．１〜１０％Ｗ／Ｖ使用，２０〜６５℃、好ましくは２５〜６０℃、１５分〜４時間、好ましくは３０分〜２時間）、脱臭、脱色、精製する。
【００１６】
これを減圧濃縮（０〜１５℃）その他常法にしたがって濃縮（３０Ｂｘ程度にまで）した後、必要あれば再度（超）遠心分離又は濾過してペプチド原液を得る。このようにして得たペプチド原液は、殺菌（ＵＨＴＳＴその他常法による）した後、容器に充填して製品（α−１０００（液体））とする。又、希望するのであれば、更に濃縮したりあるいは逆に希釈したり、また、噴霧乾燥、凍結乾燥などの常法によって６０メッシュ程度に粉末化し、これを袋などの容器に充填して製品（α−１０００（粉末））とすることもできる。これらの製品は、冷蔵ないし冷凍保管する。
【００１７】
このようにして得た、液状、ペースト状ないし粉末状のペプチドは、その有用性に鑑み、α−１０００と命名した。このペプチドα−１０００(スプレ−ドライ粉末）の物理化学的性質は、下記表４、表５、表６に示すとおりである。
【００１８】
【表４】
ペプチドα−１０００（粉末）の物理化学的性質（１）
（Ａ）分子量
２００〜１０，０００（セファデックスＧ−２５（商標）カラムクロマトグラフィーによる）
（Ｂ）融点：１１９℃で着色（分解点）
（Ｃ）比旋光度
２０℃において、ナトリウムのＤ線で測定したときの比旋光度
〔α〕：−２２°
（Ｄ）溶剤に対する溶解性
水に易溶；エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとんど溶けない。
（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別
中性ｐＨ＝５．０〜８．０（１０％溶液）
（Ｆ）外観、成分：
白色粉末；水分５．１４％（減圧加熱乾燥法）；蛋白質８７．５％（ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数６．２５）；脂質０％（ソックスレー抽出法）；灰分５．０％（直接灰化法）
【００１９】
【表５】

【００２０】
【表６】

【００２１】
本発明において使用するペプチドは、いずれも魚肉を起源としこれを酵素処理したものであるため、安全性については全く問題はないし、しかも魚肉起源につきものの不快な魚臭や苦味がなく、したがって経口投与するのに好適であり、更にまた、容易に粉末化することができ、取扱い易い白色粉末となるので製剤化が容易であって、各種の剤型に製剤化することができる。
【００２２】
飲食品タイプとして使用する場合には、本有効成分であるペプチド（その処理物）をそのまま、使用したり、他の食品ないし食品成分と併用したりして適宜常法にしたがって使用できる。本有効成分を用いる本発明に係る育毛剤は、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよいが、甘味料、酸味料、ビタミン剤その他ドリンク剤製造に常用される各種成分を用いて、育毛ドリンクに製剤化すると好適である。
【００２３】
医薬品タイプとして使用する場合、本有効成分は、種々の形態で投与され、経口投与剤のほか、外用剤等の非経口投与剤、養毛剤等の化粧料に製剤化することができる。
経口投与のための製剤としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、軟・硬カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤などが挙げられる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。その使用量は症状、年齢、体重、投与方法及び剤型等によって異なるが、通常は、成人に対して１回約０．１ｇ乃至１０ｇ、好適には０．２ｇ乃至８ｇを投与することができる。
【００２４】
非経口投与のための製剤としては、注射剤、軟膏、ローション、トニック、スプレー、懸濁剤、油剤、乳剤、坐剤等が挙げられる。本発明の有効成分を製剤化するには、常法にしたがえばよく、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存剤、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張剤その他外用剤や化粧料に常用される補助剤を適宜使用する。
【００２５】
本発明に係る有効成分は、天然起源でありしかも食品としても使用できるため、毒性は全くないか又は極めて低く、卓越した安全性を示し、ラットに対して１日当たり１０g／kg経口投与したが急性毒性は全く認められなかった。したがって飲食品タイプとして使用する場合は、予防用、保健用、通常の飲食品として使用する場合のいずれにおいても、有効成分の使用量に格別の限定はないし、医薬として使用する場合も、患者に応じて上記範囲内で適宜使用すればよい。また、本有効成分は多量に服用しても格別の問題はない。外用剤や育毛料と言った育毛化粧料のように皮膚に適用する場合は、必要個所に必要量適用すればよく、適用量に格別の限定はないし、局所の発赤やかゆみといった副作用も全く認められない。
【００２６】
本発明に係る育毛促進剤は、当該ペプチドを有効成分とするほか、更にコンブの酵素分解物及び／又はカキ肉の酵素分解物を配合してもよい。その場合、配合比率は、ペプチド６０〜９９％、残りをコンブ及び／又はカキ肉の酵素分解物とするのが好適である。これら酵素分解物は、等量混合物とするほか適宜の割合で混合使用してもよい。例えば、次のような割合で混合することができる：ペプチド６０〜１００％；コンブ酵素分解物０〜４０％；カキ肉酵素分解物０〜４０％。
【００２７】
コンブ及び／又はカキ肉の酵素分解物としては、コンブ、カキ肉をプロテアーゼ等の酵素で処理して得られたものをすべて包含するが、例えば先に述べたイワシ等魚肉をプロテアーゼ処理してペプチドを製造する方法にしたがって得られるコンブ、カキ肉の酵素分解物を使用してもよい。
【００２８】
ペプチドと、コンブ及び／又はカキ肉の酵素分解物は、酵素分解した後、精製、殺菌、乾燥処理等の各種後処理をした後にこれらを混合し、この混合物を本発明に係る育毛促進剤の有効成分として使用できるほか、これらの処理の途中においてこれらを混合してもよい。例えば、次のような処理が可能である。
【００２９】
先ず既述したように、イワシなどの魚肉について魚肉質を分離してこれを酵素分解し、他方、コンブ及び／又はカキを粉砕してこれを酵素分解し、これらを合した後に粗分離、超遠心分離、濾過、濃縮、殺菌（ＵＨＴＳＴ）、噴霧乾燥し、これを有効成分として使用することができる。
【００３０】
以下、本発明を製造例および実施例によって更に詳しく説明する。
【００３１】
【製造例１】
新鮮イワシをデボーナーで処理して採肉した。採肉した魚肉質を１０kgのすり身に分割し、これを−３０℃以下で急速凍結した後、粉砕機で粉砕した後等量の水を加え、これをタンクに送り、１００℃に１０分間加熱して自己消化酵素を失活させ、熱変性させた。次いでアンモニア水を加えてｐＨを１０．０に調整した。
【００３２】
これに市販のアルカリプロテアーゼ製品の０．１％液を加え、４５℃に１７時間保持して酵素分解を行った。次いで１５分間煮沸して酵素を失活せしめた。
【００３３】
これをバイブロスクリーン（１５０メッシュ）に通し５０００rpmでジェクター処理した後、シャープレス遠心分離機で処理し（１５０００rpm）、ケイソウ土を濾過助剤として用い、濾過処理したものをペプチド原液とした。
【００３４】
上記で得たペプチド原液に活性炭を１％Ｗ／Ｖ加え，３０℃で６０分間攪拌した後濾過して濾液を得た。これを常法にしたがって減圧濃縮（２０℃）した後、常法にしたがってＵＨＴＳＴ殺菌を行って、α−１０００（液体）製品を得、これを更に常法にしたがって噴霧乾燥して粒径６０メッシュのα−１０００（粉末）製品を得、それぞれこれらの製品は冷凍保管した。
【００３５】
このようにして調製したペプチドα−１０００（粉末）について、セファデックスＧ−２５（商標）カラムを用い、下記の条件でゲル濾過した結果、図３の結果が得られ、分子量は２００〜１０，０００であることが判明した。カラムサイズ：径１６〜９５０ｍｍ、溶出剤：０．１Ｍホスフェートバッファー（ｐＨ７．０）、分画：２ｍｌ／チューブ、流速１０ｍｌ／ｈ、分子量マーカー：バシトラシン（分子量１４５０）。
【００３６】
上記によって得たα−１０００（液体）は、水分含量が７３．６％（減圧加熱乾燥法）であって、淡黄色を呈し、その１０％溶液のｐＨは７．５を示し、魚臭もなく苦味も認められなかった。その成分についての分析、及び、アミノ酸組成についての測定を行った結果、下記する表７及び表８に示す結果が得られた。
【００３７】
【表７】

【００３８】
【表８】

【００３９】
【製造例２】
コンブ１０kg及びカキ肉１０kgをそれぞれ粉砕し、これに等量の水を加えた後、ｐＨを１０．０に調整した。これに市販のアルカリプロテアーゼ製品の０．１％液を加え、４５℃に２０時間保持して酵素分解を行った。次いで、１５分間煮沸してそれぞれ酵素を失活せしめ、コンブ酵素分解物及びカキ肉酵素分解物をそれぞれ得た。
【００４０】
【実施例１】
上記によって製造したコンブ酵素分解物、カキ肉酵素分解物、及び、先に得たイワシ肉酵素分解物を５％、５％及び９０％の混合比率で混合した。得られた混合物をバイブロスクリーン（１５０メッシュ）に通し、５０００rpmでジェクター処理して、粗分離処理を行った。
【００４１】
粗分離処理した後、上記したところにしたがって、超遠心分離、濾過、濃縮、殺菌（ＵＨＴＳＴ）、噴霧乾燥し、黄白色の粉末を得た。これをセンミペプチド３Ｍと命名した。センミペプチド３Ｍの成分組成は、下記表９に示すとおりである。
【００４２】
【表９】

【００４３】
【実施例２】
本発明有効成分が培養毛包細胞の増殖促進作用を有することを以下により試験し、確認した。
先ず、前培養を行った。すなわち、頭皮の各部位より、無作為に抜去した成長期毛包をTrypsin-EDTA処理し、分散した細胞を得た。IV型コラーゲンをコートした培養皿に培養液にて懸濁した毛包細胞を２×１０⁴/cm濃度で植え込み約２週間培養を行った。
【００４４】
次いで、上記によって得たセンミペプチド３Ｍの１μg/ml、１０μg/ml、１００μg/ml水溶液をそれぞれ試験液として、毛包細胞の増殖促進効果確認試験を行った。
すなわち、前培養にて増殖した毛包細胞をTrypsin-EDTA処理にて培養皿からはがし、遠心分離後に得られた細胞塊を培養液に懸濁した。この細胞懸濁液を２．５×１０³/cm²の濃度で組織培養用培養皿に植え込んだ。２４時間培養後、試験液を含む培養液と交換し、培養を継続した。７日および１４日間培養後、血球算定盤によるcell count法にて増殖した毛包細胞の数を測定し、試験液の細胞増殖に及ぼす影響について評価した。結果を図４に示す。
【００４５】
上記試験結果から明らかなように、本発明に係る育毛促進剤は、すぐれた育毛促進効果を有し、特に１０μg/mlの濃度においてコントロールに比べて１４０％もの増加効果を示した。
【００４６】
【実施例３】
本発明有効成分が、経口投与することによって、ヒト頭髪に対して毛成長促進効果を有することを、以下により試験し、確認した。
すなわち、男性型脱毛症である被験者１５名に、上記によって得たセンミペプチド３Ｍを１日１回、２ｇずつ２ケ月間経口投与し、軟毛、硬毛の新生につき視認により改善度を評価した。得られた結果を下記表１０に示す。その結果から明らかなように、本発明に係る育毛促進剤は、外用のみでなく内用によっても育毛が促進されるというきわめて顕著な効果が奏されることが確認された。なお、イワシ魚肉の酵素分解物であるα−１０００のみを経口投与した場合も、同様にすぐれた育毛促進効果が奏された。
【００４７】
【表１０】

【００４８】
【実施例４】
実施例１で得たセンミペプチド３Ｍ粉末８０ｇ、糖類１５０ｇ、蜂蜜１５ｇ、アスコルビン酸１ｇ、クエン酸０．５ｇ、香料適量に水を加えて１kgとし、これを９５℃で２０分間殺菌し、１００mlずつ無菌的にビンに充填して、飲食品タイプの養毛ドリンクを製造した。
【００４９】
【実施例５】
製造例１で得たペプチドα−１０００（液体）２００ｇ、酢酸トコフェロール５ｇ、硝酸チアミン１０ｇ、ニコチン酸アミド２０ｇ、無水カフェイン５０ｇ、安息香酸塩及び香料適量に脱イオン水を加えて３０Ｌとし、殺菌した後３０mlずつ無菌的にビンに充填して、医薬品としての養毛ドリンクを製造した。
【００５０】
【実施例６】
結晶グルコース４００重量部、センミペプチド３Ｍ１００重量部、クエン酸７重量部、Na-Caseinate７重量部、アスコルビン酸５重量部、硬化油３重量部を用い、常法にしたがって育毛促進錠菓を製造した。
【００５１】
【実施例７】
センミペプチド３Ｍ５００重量部、精製炭酸カルシウム２０重量部、ラクトース１７８重量部、ステアリン酸マグネシウム２重量部を用い、これらの混合物を２５０mgずつ１号カプセルに充填し、１カプセル内に５００mgのセンミペプチド３Ｍを含有する育毛促進カプセル剤を製造した。
【００５２】
【実施例８】
エタノール６０ml、植物油０．５ml、プロピレングリコール５ml、塩化カルブロニウム０．５４ml、ペプチドα−１０００（液体）２ml、これに精製水を加えて全量を１００mlとし、上記成分を混合溶解して、育毛促進ヘアートニックを製造した。
【００５３】
【実施例９】
ビタミンＣ２０ｇ、グラニュー糖５０ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物３０ｇに、製造例１で得たペプチドα−１０００を５０ｇ加えて充分に混合した。混合物を１００等分して袋に詰め、１袋１．５ｇのスティック状育毛促進食品を１００袋製造した。
【００５４】
【発明の効果】
魚肉の酵素分解物を有効成分とする本発明に係る育毛促進剤は、患部に適用する非経口的に投与することにより育毛促進効果を奏することはもちろんのこと、これを内服する経口投与により抜毛を防止するとともに育毛も促進するというきわめてユニークにして卓越した著効が奏される。しかも本育毛促進剤は天然物由来であって、安全上も全く問題がない。
【図面の簡単な説明】
【図１】ペプチドα−１０００のＵＶスペクトルを示す。
【図２】ペプチドα−１０００のＩＲスペクトルを示す。
【図３】ペプチドα−１０００のゲル濾過による分子量分布を示す。
【図４】本育毛促進剤による培養毛包細胞の増殖促進効果を示す。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a hair growth-promoting agent. More specifically, the present invention comprises a peptide derived from fish meat as an active ingredient, which is safe and highly effective in the past, and can be used not only for external use but also for internal use. The present invention relates to a natural hair growth promoter.
[0002]
[Prior art]
Hair growth promoters have been developed in the past, and hair growth promoters that use natural products have been extensively developed and put to practical use, but peptides obtained by enzymatic degradation of fish meat have a hair growth promoting effect. It is not known that there is any, and the knowledge that hair growth is promoted by oral administration is not known at all.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
In recent years, the number of cases in which the hair has become dull or removed due to various factors such as the westernization of eating habits and increased stress has increased, and the cases have expanded to not only the elderly but also the young. The solution is strongly desired.
[0004]
[Means for Solving the Problems]
The present invention has been made for the purpose of meeting such a strong demand in the industry, and in the course of research on enzymatic decomposition products of fish meat, the protease is obtained after heat denatured sardine fish meat to inactivate autolytic enzymes. A very useful new finding that the peptide obtained by the treatment promotes the proliferation of hair follicle cells was obtained, and based on this useful new finding, as a result of further research, it was finally completed.
[0005]
That is, the basic technical idea of the present invention is a hair growth-promoting agent comprising a peptide obtained by subjecting fish meat to heat denaturation to inactivate self-digesting enzyme and then protease treatment.
[0006]
As a peptide used as an active ingredient of the hair growth promoter according to the present invention, peptides obtained by subjecting fish meat to heat denaturation as described above and then protease treatment can be used extensively as appropriate. 2. Fish meat-derived peptide α-1000 having the physicochemical properties shown in Table 3 is an example of a suitable peptide.
[0007]
[Table 2]
Physicochemical properties of peptide α-1000 (1)
(A) Molecular weight 200-10,000 (by Sephadex G-25 (trademark) column chromatography)
(B) Melting point Decomposes and colors at 119 ° C.
(C) Specific optical rotation Specific optical rotation as measured by sodium D-line at 20 ° C. [α]: −22 °
(D) Solubility in solvents Easily soluble in water, but hardly soluble in ethanol, acetone and hexane.
(E) Distinguishing between acidic, neutral and basic Neutral
[Table 3]

[0009]
This peptide is produced using seafood as a raw material. First, the peptide is treated with a meat mining machine, a deboner or the like to separate the fish meat quality. The raw material is preferably as fresh as possible. The separated fish meat may be divided into about 10 kg of surimi and used for the next treatment as it is. However, it is rapidly frozen by blowing cold air at −20 to −50 ° C., for example, about −30 ° C., and −20 to − You may preserve | save at 25 degreeC and you may decide to use this suitably as needed.
[0010]
As seafood, red fish such as sardines, horse mackerel, tuna, skipjack, saury, mackerel; white fish such as flounder, Thailand, kiss, konoshiro, cod, herring, yellowtail; shark, cartilage fish such as stingray; Freshwater fish such as yamame trout; deep sea fish such as sharks and salamanders, shrimp, crabs, octopuses, and mites can be used as appropriate.
[0011]
In the present invention, after the meat is collected, the seafood is pulverized by a pulverizer or the like, ½ amount to 20 times the amount of the raw material weight, preferably the equivalent amount to 10 times the amount of water, and then heated. By treating, the self-digesting enzyme is inactivated, the germs are killed, and the protein is thermally denatured to increase the efficiency of the subsequent enzyme reaction. As heating conditions, all conditions can be used as long as such an effect is exerted, but for example, 65 ° C. or higher and 2 to 60 minutes, preferably 80 ° C. or higher and 5 to 30 minutes are preferable. .
[0012]
Next, an alkaline agent such as aqueous ammonia or sodium hydroxide (potassium) solution is added to adjust the pH to an appropriate value for the proteolytic enzyme used (for example, in the case of alkaline protease, pH 7.5 or higher, preferably 8 or higher). The temperature is also appropriate for the enzyme (depending on the enzyme used, 20 to 65 ° C., 35 to 60 ° C., preferably 40 to 55 ° C. for alkaline protease), and 30 minutes to 30 hours after adding the protease (30 minutes to 25 hours in the case of alkaline protease, preferably 1 to 17 hours).
[0013]
As the proteolytic enzyme, all enzymes can be used alone or in combination as long as they are capable of degrading proteins under neutral or alkaline conditions. Its origin can be found in microorganisms in addition to animals and plants, and in addition to pepsin, renin, trypsin, chymotrypsin, papain, bromelain, bacterial protease, filamentous fungal protease, actinomycete protease, etc. can be widely used. These enzymes are usually commercially available. However, unpurified enzymes, enzyme-containing culture fluids, and solid or liquid enzyme-containing materials such as sputum should also be used as required. Can do. The amount of enzyme added may be about 0.1% to 5.0%.
[0014]
Next, if necessary, neutralization treatment is performed, and then maintained at a temperature of 70 ° C. (preferably 80 ° C.) for 2 to 60 minutes (preferably 5 to 30 minutes) to deactivate the enzyme and later. Make the separation good. After the heat inactivation treatment, rough separation is performed by filtration with a vibro screen or the like, and after necessary jetting, ultracentrifugation is performed to remove suspended matters and precipitates.
[0015]
Next, it is filtered using a filter aid such as diatomaceous earth (for example, celite), and the filtrate is treated with activated carbon (0.05 to 20% W / V, preferably 0.1 to 10% W / V used, 20 ˜65 ° C., preferably 25˜60 ° C., 15 minutes˜4 hours, preferably 30 minutes˜2 hours), deodorized, decolorized and purified.
[0016]
This is concentrated under reduced pressure (0 to 15 ° C.) or other conventional methods (up to about 30 Bx), and if necessary, it is centrifuged again (super) or filtered to obtain a peptide stock solution. The peptide stock solution thus obtained is sterilized (by UHTST or other ordinary methods) and then filled into a container to obtain a product (α-1000 (liquid)). If desired, it can be further concentrated or diluted, or powdered to about 60 mesh by a conventional method such as spray drying or freeze drying, and filled into a container such as a bag. α-1000 (powder)). Store these products refrigerated or frozen.
[0017]
The liquid, pasty or powdery peptide thus obtained was named α-1000 in view of its usefulness. The physicochemical properties of this peptide α-1000 (spray-dry powder) are as shown in Table 4, Table 5 and Table 6 below.
[0018]
[Table 4]
Physicochemical properties of peptide α-1000 (powder) (1)
(A) Molecular weight 200-10,000 (by Sephadex G-25 (trademark) column chromatography)
(B) Melting point: colored at 119 ° C. (decomposition point)
(C) Specific optical rotation Specific optical rotation as measured by sodium D-line at 20 ° C. [α]: −22 °
(D) Solubility in solvents Easily soluble in water; almost insoluble in ethanol, acetone and hexane.
(E) Distinguishing between acidic, neutral and basic Neutral pH = 5.0 to 8.0 (10% solution)
(F) Appearance, components:
White powder; moisture 5.14% (heat drying under reduced pressure); protein 87.5% (Kjeldahl method, nitrogen / protein conversion factor 6.25); lipid 0% (Soxhlet extraction method); ash content 5.0% (directly) Ashing method)
[0019]
[Table 5]

[0020]
[Table 6]

[0021]
Since all peptides used in the present invention originate from fish meat and are enzymatically treated, there is no problem with regard to safety, and there is no unpleasant fishy odor or bitterness associated with fish meat. Furthermore, it can be easily pulverized and becomes a white powder that is easy to handle, so that it can be easily formulated and can be formulated into various dosage forms.
[0022]
When used as a food / beverage product type, the peptide (its processed product), which is the active ingredient, can be used as it is or in combination with other foods or food ingredients as appropriate according to conventional methods. The hair restorer according to the present invention using this active ingredient may be solid (powder, granule, etc.), paste, liquid or suspension, but it can be used to produce sweeteners, acidulants, vitamins and other drinks. It is preferable to formulate a hair-growth drink using various commonly used ingredients.
[0023]
When used as a pharmaceutical type, the active ingredient is administered in various forms and can be formulated into oral preparations, parenteral preparations such as external preparations, and cosmetics such as hair nourishing agents.
Examples of the preparation for oral administration include tablets, pills, granules, soft / hard capsules, powders, fine granules, powders, emulsions, suspensions, syrups, elixirs and the like. These various preparations are usually used in the pharmaceutical preparation technical field such as excipients, binders, disintegrants, lubricants, flavoring agents, solubilizers, suspension agents, coating agents, etc. Can be formulated using known adjuvants. The amount used varies depending on symptoms, age, body weight, administration method, dosage form, etc., but usually about 0.1 to 10 g, preferably 0.2 to 8 g can be administered to an adult at a time. .
[0024]
Formulations for parenteral administration include injections, ointments, lotions, tonics, sprays, suspensions, oils, emulsions, suppositories and the like. In order to formulate the active ingredient of the present invention, a conventional method may be used. Surfactant, excipient, coloring agent, flavoring agent, preservative, stabilizer, buffering agent, suspending agent, isotonic agent Other auxiliary agents commonly used in external preparations and cosmetics are appropriately used.
[0025]
Since the active ingredient according to the present invention is of natural origin and can be used as food, it has no or very low toxicity, exhibits excellent safety, and is orally administered to rats at 10 g / kg per day. No toxicity was observed. Therefore, when used as a food / beverage product type, there is no particular limitation on the amount of active ingredient used for prevention, health, or normal food / beverage products. Accordingly, it may be appropriately used within the above range. Moreover, even if this active ingredient is taken in a large amount, there is no particular problem. When applying to the skin like hair-care cosmetics such as topical preparations and hair-growth cosmetics, it is only necessary to apply the necessary amount to the necessary places, there is no particular limitation on the amount applied, and there are no side effects such as local redness or itching. I can't.
[0026]
The hair growth-promoting agent according to the present invention may contain the peptide as an active ingredient, and may further contain an enzyme degradation product of kombu and / or an enzyme degradation product of oyster meat. In that case, it is preferable that the blending ratio is 60 to 99% of the peptide, and the remainder is an enzyme degradation product of the kumbu and / or oyster meat. These enzyme degradation products may be mixed and used at an appropriate ratio in addition to an equal amount mixture. For example, it can mix in the following ratios: Peptide 60-100%; Kombu enzyme degradation product 0-40%; Oyster meat degradation product 0-40%.
[0027]
The enzymatically decomposed products of kombu and / or oyster meat include all those obtained by treating kombu and oyster meat with an enzyme such as protease. For example, the above-described fish meat such as sardine is treated with protease to produce a peptide. An enzyme degradation product of kombu or oyster meat obtained in accordance with the method for producing the oyster may be used.
[0028]
Peptides and enzymatically decomposed products of kombu and / or oyster meat are enzymatically decomposed and then subjected to various post-treatments such as purification, sterilization, and drying treatment, and then mixed, and this mixture is used as a hair growth-promoting agent according to the present invention. In addition to being usable as an active ingredient, these may be mixed during the treatment. For example, the following processing is possible.
[0029]
First, as described above, fish meat such as sardines is separated and enzymatically decomposed, and on the other hand, kumbu and / or oysters are crushed and enzymatically decomposed. Centrifugation, filtration, concentration, sterilization (UHTST), spray drying, and this can be used as an active ingredient.
[0030]
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to production examples and examples.
[0031]
[Production Example 1]
Fresh sardines were processed with a deboner and minced. Divided fish meat is divided into 10 kg surimi, rapidly frozen at -30 ° C or lower, crushed with a pulverizer, added with an equal amount of water, sent to a tank, and heated to 100 ° C for 10 minutes Then, the autolytic enzyme was inactivated and heat denatured. Subsequently, aqueous ammonia was added to adjust the pH to 10.0.
[0032]
A 0.1% solution of a commercially available alkaline protease product was added thereto, and the mixture was kept at 45 ° C. for 17 hours for enzymatic degradation. The enzyme was then inactivated by boiling for 15 minutes.
[0033]
This was passed through a vibro screen (150 mesh), treated with a jet at 5000 rpm, then treated with a sharp press centrifuge (15000 rpm), and filtered using diatomaceous earth as a filter aid to obtain a peptide stock solution.
[0034]
1% W / V of activated carbon was added to the peptide stock solution obtained above, and the mixture was stirred at 30 ° C. for 60 minutes and filtered to obtain a filtrate. This was concentrated under reduced pressure (20 ° C.) according to a conventional method and then UHTST sterilized according to a conventional method to obtain an α-1000 (liquid) product, which was further spray-dried according to a conventional method to obtain a particle size of 60 mesh. Α-1000 (powder) products were obtained and each of these products was stored frozen.
[0035]
The peptide α-1000 (powder) thus prepared was subjected to gel filtration under the following conditions using a Sephadex G-25 (trademark) column. As a result, the result of FIG. 000. Column size: diameter 16-950 mm, eluent: 0.1 M phosphate buffer (pH 7.0), fraction: 2 ml / tube, flow rate 10 ml / h, molecular weight marker: bacitracin (molecular weight 1450).
[0036]
The α-1000 (liquid) obtained as described above has a water content of 73.6% (vacuum drying method), is light yellow, and the 10% solution has a pH of 7.5 and fish odor There was no bitterness. As a result of analyzing the component and measuring the amino acid composition, the results shown in Table 7 and Table 8 below were obtained.
[0037]
[Table 7]

[0038]
[Table 8]

[0039]
[Production Example 2]
10 kg of kombu and 10 kg of oyster meat were pulverized, and an equal amount of water was added thereto, and then the pH was adjusted to 10.0. A 0.1% solution of a commercially available alkaline protease product was added thereto, and the mixture was kept at 45 ° C. for 20 hours for enzymatic degradation. Subsequently, it boiled for 15 minutes and inactivated the enzyme, respectively, and obtained the kumbu enzyme decomposition product and the oyster meat enzyme decomposition product, respectively.
[0040]
[Example 1]
The comb enzyme digest, the oyster meat digest, and the sardine enzyme digest obtained above were mixed at a mixing ratio of 5%, 5% and 90%. The obtained mixture was passed through a vibro screen (150 mesh) and subjected to a jet treatment at 5000 rpm to carry out a rough separation treatment.
[0041]
After the coarse separation treatment, ultracentrifugation, filtration, concentration, sterilization (UHTST), and spray drying were performed in accordance with the above-described conditions to obtain a yellowish white powder. This was named Semipeptide 3M. The component composition of Semipeptide 3M is as shown in Table 9 below.
[0042]
[Table 9]

[0043]
[Example 2]
It was tested and confirmed by the following that the active ingredient of the present invention has an effect of promoting the growth of cultured hair follicle cells.
First, pre-culture was performed. That is, the growing hair follicles randomly extracted from each part of the scalp were treated with Trypsin-EDTA to obtain dispersed cells. Hair follicle cells suspended in a culture solution in a culture dish coated with type IV collagen were implanted at a concentration of 2 × 10 ⁴ / cm and cultured for about 2 weeks.
[0044]
Next, a test for confirming the effect of promoting hair follicle cell proliferation was performed using 1 μg / ml, 10 μg / ml, and 100 μg / ml aqueous solutions of Semipeptide 3M obtained as described above as test solutions.
That is, the hair follicle cells grown in the preculture were peeled from the culture dish by Trypsin-EDTA treatment, and the cell mass obtained after centrifugation was suspended in the culture solution. This cell suspension was implanted in a tissue culture culture dish at a concentration of 2.5 × 10 ³ / cm ² . After culturing for 24 hours, the culture solution was replaced with a culture solution containing a test solution, and the culture was continued. After culturing for 7 and 14 days, the number of hair follicle cells grown by the cell count method using a blood cell counter was measured, and the influence of the test solution on cell growth was evaluated. The results are shown in FIG.
[0045]
As is apparent from the above test results, the hair growth-promoting agent according to the present invention has an excellent hair growth-promoting effect, in particular, an increase effect of 140% compared to the control at a concentration of 10 μg / ml.
[0046]
[Example 3]
It was tested and confirmed as follows that the active ingredient of the present invention has an effect of promoting hair growth on human hair by oral administration.
That is, 15 subjects with male pattern alopecia were orally administered with 2 g of semmipeptide 3M obtained as described above once a day for 2 months at a time, and the degree of improvement was evaluated by visual recognition of the formation of soft hair and hair. The obtained results are shown in Table 10 below. As is apparent from the results, it was confirmed that the hair growth-promoting agent according to the present invention has a very remarkable effect that hair growth is promoted not only by external use but also by internal use. In addition, when only α-1000, which is an enzyme degradation product of sardine fish meat, was orally administered, excellent hair growth promoting effects were also exhibited.
[0047]
[Table 10]

[0048]
[Example 4]
80 g of Semipeptide 3M powder obtained in Example 1, 150 g of saccharide, 15 g of honey, 1 g of ascorbic acid, 0.5 g of citric acid, and 1 kg of water added to an appropriate amount of flavor, sterilized at 95 ° C. for 20 minutes, and 100 ml aseptic The bottle was filled in the bottle to produce a food-and-beverage type hair nourishing drink.
[0049]
[Example 5]
200 g of peptide α-1000 (liquid) obtained in Production Example 1, 5 g of tocopherol acetate, 10 g of thiamine nitrate, 20 g of nicotinic acid amide, 50 g of anhydrous caffeine, benzoate and perfume to an appropriate amount to make 30 L, sterilized Thereafter, each bottle was aseptically filled in 30 ml to produce a hair-growing drink as a pharmaceutical product.
[0050]
[Example 6]
Using 400 parts by weight of crystalline glucose, 100 parts by weight of Semipeptide 3M, 7 parts by weight of citric acid, 7 parts by weight of Na-Caseinate, 5 parts by weight of ascorbic acid, and 3 parts by weight of hardened oil, a hair growth-promoting tablet confection was produced according to a conventional method.
[0051]
[Example 7]
Using 500 parts by weight of Semipeptide 3M, 20 parts by weight of purified calcium carbonate, 178 parts by weight of lactose, and 2 parts by weight of magnesium stearate, 250 mg each of these mixtures is filled into No. 1 capsule, and 500 mg of Semipeptide 3M is contained in one capsule. A hair growth promoting capsule was produced.
[0052]
[Example 8]
60 ml of ethanol, 0.5 ml of vegetable oil, 5 ml of propylene glycol, 0.54 ml of carbronium chloride, 2 ml of peptide α-1000 (liquid), and purified water is added to make a total volume of 100 ml. Tonic manufactured.
[0053]
[Example 9]
50 g of the peptide α-1000 obtained in Production Example 1 was added to and mixed well with 20 g of vitamin C, 50 g of granulated sugar, and 30 g of an equal mixture of corn starch and lactose. The mixture was divided into 100 equal parts and packed in bags to produce 100 bags of 1.5 g of stick-like hair growth promoting food.
[0054]
【The invention's effect】
The hair growth-promoting agent according to the present invention comprising an enzyme degradation product of fish meat as an active ingredient exhibits not only the effect of promoting hair growth when administered parenterally applied to the affected area, but also hair removal by oral administration of this. It has a very unique and outstanding effect of preventing hair growth and promoting hair growth. In addition, the present hair growth promoter is derived from a natural product and has no safety problem.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows the UV spectrum of peptide α-1000.
FIG. 2 shows an IR spectrum of peptide α-1000.
FIG. 3 shows the molecular weight distribution of peptide α-1000 by gel filtration.
FIG. 4 shows the effect of promoting the growth of cultured follicular cells by the present hair growth-promoting agent.

Claims

A mixture of an enzyme degradation product obtained by protease treatment of peptide α-1000 having the following physicochemical properties and kombu and a enzyme degradation product obtained by protease treatment of oyster meat is an active ingredient. Orally administered medicine for promoting human hair growth.
(Physicochemical properties of peptide α-1000)
(A) Molecular weight 200 to 10,000 (by column chromatography)
(B) Melting point Decomposes and colors at 119 ° C.
(C) Specific optical rotation Specific optical rotation as measured by sodium D-line at 20 ° C. [α]: −22 °
(D) Solubility in solvents Easily soluble in water, but hardly soluble in ethanol, acetone and hexane.
(E) Distinguishing between acidic, neutral and basic Neutral (F) ultraviolet absorption spectrum A peak derived from this peptide is observed at around 280 nm.
(G) Infrared absorption spectrum Absorption specific to the peptide bond (—CONH—) is observed in the vicinity of 3400 cm ⁻¹ , and absorption specific to the amino group (—NH ₂ ) is observed in the vicinity of 3300 to 3500 cm ^−1. the backbone -CH ₂ - specific binding absorption observed at about 2900 cm ^-1, absorption attributable to a carboxyl group (-COOH) is observed in the vicinity of 1600 cm ^-1 and around 1400 cm ^-1.
(H) Characteristics
It is a peptide derived from sardine fish meat, obtained by inactivating a self-digesting enzyme by heating and hydrolyzing with a proteolytic enzyme.