JP3980632B2 - アンギオテンシン▲ii▼レセプターの拮抗薬 - Google Patents
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Description
本発明は、関節の炎症性症状の治療において有用なアンギオテンシンII(AII)レセプター拮抗薬に関する。
発明の背景
アンギオテンシンII(以下、AIIと記す)は、アンギオテンシン変換酵素(ACE)によるアンギオテンシンIの酵素的切断によって生産されるオクトペプチドである。末梢組織において、AIIは、有効な血管収縮薬であり、内皮損傷後の血管内膜過形成および狭窄に関係していた[ラポルテ・アンド・エッシャー(Laporte & Escher)、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ(Biochem.Biophys.Res.Commun.)、第187巻、第1510−1516頁(1992);およびアズマ(Azuma)ら、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー(Br.J.Pharmacol.)、第106巻、第665−671頁(1992)]。さらに、AIIは、いくつかの動物モデルにおいて脈管形成を刺激し[フェルナンデス(Fernandez)ら、ジャーナル・オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディシン(J.Lab.Clin.Med.)、第105巻、第141−145頁(1985)、ルノーブル(Le Noble)ら、Eur.H.Pharmacol.、第195巻、第305−306頁(1991)];血管平滑筋による成長因子の発現を誘発し[ナフチラン(Naftilan)ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション(J.Clin.Invest.)、第83巻、第1419−1424頁(1989)]、いくつかの細胞タイプの増殖を自身で調節することもできる[アラキ(Araki)ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、第168巻、第350−357頁(1990)]。
慢性関節リウマチは、滑膜低灌流(synovial hypoperfusion)を示す慢性滑膜低酸素症(synovial hypoxia)によって[レヴィック・ジェイ・アール(Levick J.R.)、J.Rheumatol.、第17巻、第579−582頁(1990)、スティーヴンズ(Stevens)ら、Arthritis Rheum.、第34巻、第1508−1513頁(1991)]、および滑膜増殖によって特徴付けられてきた。
関節炎および滑膜に関係する他の疾患の病原を阻害する能力を有する化合物によって慢性炎症性症状を治療することが依然として必要とされている。
発明の概要
本発明は、慢性炎症性症状の治療を必要とする患者にアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬の有効な非毒性量を投与することを特徴とする、該哺乳動物、特にヒトにおける関節炎などの慢性炎症性症状の新規治療方法を提供するものである。
本発明は、また、哺乳動物、特にヒトにおける関節炎などの慢性炎症性症状の治療薬の製造におけるアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬の使用を提供するものでもある。
【図面の簡単な説明】
第1図 変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜への増加する濃度の[125I](Sar1,Ile8)アンギオテンシンIIの特異的平衡結合。最大結合は、管壁細胞(lining cell)に対してよりも血管に対しての方が大きく(○)(P<0.001)、支質(stroma)に対してよりも管壁細胞に対しての方が大きかった(△)(p<0.01)。データは、6つのケースの平均値(±S.E.M.)である。
第2図 非標識(Sar1,Ile8)アンギオテンシンII(O)、アンギオテンシンII;AT1特異的拮抗薬(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸(D)およびAT2特異的拮抗薬PD123319(O)による変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜における血管への[125I](Sar1,Ile8)アンギオテンシンIIの特異的結合の阻害。データは、6つのケースの平均値(±S.E.M.)である。
発明の説明
本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける慢性炎症性症状の治療方法である。本発明は、局所的に生じたAIIがヒト滑膜中に存在し、したがって、AIIレセプター拮抗薬の使用が慢性炎症性症状の治療に寄与するであろうということを見いだした。好ましくは、AIIレセプター拮抗薬は、AT1レセプター拮抗薬サブタイプのものである。
滑膜細胞上のアンギオテンシンIIレセプターの存在の観察により、損傷に応答して反応し増殖するこの組織が、組織損傷、増殖および分化(differentiation)の調節におけるアンギオテンシンについての幅広い役割を反映するという考えが生じる。これ自体は、腫瘍増殖、例えば、腫瘍トランスフォーメーションおよび増殖/転移、骨髄成熟および分化、皮膚成熟および分化、ならびに肝細胞成熟および分化などの障害の治療を含む。慢性炎症性疾患としては、炎症性自己免疫疾患(好ましくは、乾癬および他の局所的皮膚疾患以外のもの、またはかかる疾患に加えて)、全身性紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチおよび糖尿病などの増殖性リンパ球反応が挙げられる。また、慢性炎症性疾患としては、シェーグレン病、多発性硬化症、スクロデルマ(scloderma)などの結合組織病、ならびに、腎臓、甲状腺および唾液腺などの複数の臓器を含む混合結合組織病も挙げられる。また、慢性炎症性疾患としては、炎症を起こしている関節、慢性関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、および痛風性関節炎などの疾患、ならびに変形性関節炎および膝蓋骨軟骨軟化症(chondromalacia patellae)などの種々の関節炎症状も挙げられる。軟骨軟化症または軟骨の破壊は、関節の炎症症状に存在する特徴である。また、変形性関節症は、それ自体、炎症症状とは考えられないが、ここでの目的のために関節炎症状として含まれると認識される。
特に好ましくは、炎症を起こしている関節、慢性関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、および痛風性関節炎などの関節における損傷に対する滑膜増殖および応答に関連する疾患ならびに変形性関節炎および膝蓋骨軟骨軟化症などの種々の他の関節炎症状である。
以下の方法のセクションで記載する場合、[125I](Sar1,Ile8)AIIの特異的結合およびACE様免疫反応性は、各々、滑膜小動脈の中膜および内皮において観察され、これらの血管が局所的に生じるAIIに作用されることを示唆する。
AT1様結合部位は、従前に、ヒトにおける大きなサイズおよび中位のサイズの動脈の中膜において[ウラタ(Urata)ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・エンドクリノロジー・アンド・メタボリズム(J.Clin.Endocrinol.Metabl.)、第69巻、第54−66頁(1989)]および培養された血管平滑筋細胞上で[ホワイトブレッド(Whitebread)ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ(Biochem.Biophys.Res.Commun.)、第163巻、第264−291頁(1989)]示されており、血管収縮[チュウ(Chiu)ら、ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・イクスペリメンタル・セラピューティクス(J.Pharmacol.Exp.Therapeut.)、第252巻、第711−718頁(1990)]および平滑筋肥大[ミレット(Millet)ら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー(Eur.J.Biochem.)、第206巻、第367−372頁(1992)](共に、組織灌流を低下させる)を媒介すると思われる。滑膜低潅流は、ヒト関節炎の病因[レヴィック,ジェイ・アール(Levick,J.R.)、J.Rheumatol.、第17巻、第579−582頁(1990)]およびAT1拮抗薬の組織灌流増強能[アズマ(Azuma)ら、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー(Br.J.Pharmacol.)、第106巻、第665−671頁(1992)]に寄与する。
炎症性関節炎におけるACE阻害の開放系の非制御研究は、ACE阻害薬カプトプリル(Captopril)が治療利益を有するというある証拠を提供するという結論に達していないが[マーチン(Martin)ら、ランセット(Lancet)、i、第1325−1328頁(1984)]、かかる有益な効果は、ACEの阻害に起因することが必ずしも必要なわけではない[バード(Bird)ら、J.Rheumatol.、第17巻、第603−608頁(1990)]。さらにまた、アンギオテンシノゲンは、ACEに対する唯一の基質というわけではなく、ブラジキニンおよびサブスタンスP(共に、関節炎に関係する)などの炎症前ペプチド(proinflammatory peptide)をも不活性化する[ミアノ(Miano)ら、ニューロサイエンス(Neuroscience)、第51巻、第649−655頁(1992)、ワルシュ(Walsh)ら、アナルズ・ルーマティク・ディジージズ(Ann.Rheum.Dis.)、第51巻、第313−317頁(1992)、カスプリッツ(Caspritz)ら、アルツナイミーテルフォルシュンク(Arzneimittelforschung)、第36巻、第1605−1608頁(1986)]。したがって、ACEの阻害は、AII発生を減少させる有益な効果を遮蔽するかもしれない多くの作用を有する。
本発明は、アンギオテンシンレセプター拮抗薬と称される化合物群、好ましくは、AT1サブタイプレセプターを阻害し、AT1レセプター拮抗薬と称される化合物群の使用による、特に、関節の慢性炎症性症状の治療に対する新規アプローチを提供するものである。好ましくは、本明細書での使用について、AT1レセプター拮抗薬は、ロサルタン(losartan)および(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸である。
AIIは、特異的細胞表面レセプターを介して作用し、その2つのサブタイプは、薬理学的に定義されている。ヒトAT1サブタイプは、最近、クローン化され[フルタ(Furuta)ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ(Biochem.Biophys.Res.Commun.)、第183巻、第8−13頁(1992)、タカヤナギ(Takayanagi)ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、第183巻、第910−916頁(1992)、バーグスマ(Bergsma)ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、第183巻、第989−995頁(1992)]、Gタンパク結合膜内外レセプターのスーパーファミリーの一員である。ロサルタン[ホワイトブレッドら、前記文献]および(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸[ヴァインストック(Weinstock)ら、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー(J.Med.Chem.)、第34巻、第1514−1517頁(1991)]などのAT1は、ジチオトレイトール(DTT)[ホワイトブレッドら、前記文献]などの還元剤およびグアニンヌクレオチド[ボッタリー(Bottari)ら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー(Eur.J.Pharmacol.)、第207巻、第157−163頁(1991)]に対して敏感である。対照的に、AT2レセプターは、DTTによって阻害されず、明らかにGタンパク結合されず、PD123319などの特異的AT2レセプター拮抗薬に対して敏感である[ダッドリィ(Dudley)ら、モレキュラー・ファーマコロジー(Mol.Pharmacol.)、第40巻、第360−367頁(1991)]。
本発明の1つの態様は、従前に製造され、有効なAIIレセプター拮抗薬と評価された拮抗薬群の利用化である。好適なアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬の例としては、限定されないが、以下のものが挙げられる:
フィンケルシュタイン(Finkelstein)らの1993年2月9日に発行されたU.S.P 5,185,351に開示されている2−ヘテロアリール−2−プロペン酸基によって5位で置換されているイミダゾール類(出典明示により本明細書の一部とする)。
この特許の範囲内に含まれる好ましい化合物は、
(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸、
(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシナフタ−1−イル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸、
(E)−3−[2−n−ブチル−1−{2−クロロ−4−カルボキシフェニル)−メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸;および
(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシ−2,3−ジクロロフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸;または
それらの医薬的に許容される塩である。
特に好ましい化合物は、(E)−3−[2−n−ブチル−1−{(4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸および(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシナフタ−1−イル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸;またはその医薬的に許容される塩である。
この発明の最も好ましい化合物は、(E)−3−{2−n−ブチル−1−{(4−カルボキシフェニル)メチル]−1H−イミダゾリル−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸・メタンスルホン酸塩である。
フィンケルシュタイン(Finkelstein)らの1990年12月19日に公開された欧州公開番号EP 0 403 158に開示されている置換(イミダゾリル)アルケン酸類(出典明示により本明細書の一部とする)。
AIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲内に含まれる好ましい化合物は、
(E)−3−[2−n−ブチル−1−{(2−クロロフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(3,4−メチレンジオキシフェニル)メチル−2−プロペン酸、
(E)−3−[2−n−ブチル−1−{(4−カルボキシフェニル)メチル]−1H−イミダゾール−5−イル]−2−n−ブチル−2−プロペン酸、および
(E)−3−[2−n−ブチル−1−{(4−カルボキシフェニル)メチル]−1H−イミダゾール−5−イル]−2−n−ベンジル−2−プロペン酸;または
それらの医薬的に許容される塩である。
キーナン(Keenan)らの1993年1月5日に発行されたU.S.P 5,177,091に開示されている置換5−[(テトラゾリル)アルケニル]イミダゾール類(出典明示により本明細書の一部とする)。
AIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲に含まれる好ましい化合物は、
(E)−1−[2−n−ブチル−1−{(4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(1H−テトラゾール−5−イル)−3−(2−チエニル)−1−プロペンおよび
(E)−1−[2−n−ブチル−1−{(4−(1H−テトラゾール−5−イル)フェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(1H−テトラゾール−5−イル)−3−(2−チエニル)−1−プロペン;または
それらの医薬的に許容される塩である。
ギラルド(Girard)らの1991年5月15日に公開された欧州公開番号EP 0 427 463に開示されている置換N−(イミダゾリル)アルキルアラニン誘導体類(出典明示により本明細書の一部とする)。
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、
N−[{1−(4−カルボキシフェニル)メチル]−2−n−ブチル−1H−イミダゾール−5−イル}メチル]−β−(2−チエニル)アラニンおよび
N−[{1−(2−クロロフェニル)メチル]−2−n−ブチル−1H−イミダゾール−5−イル}メチル]−β−(2−チエニル)アラニン;または
それらの医薬的に許容される塩である。
フィンケルシュタイン(Finkelstein)らの1993年8月10日に発行されたU.S.P 5,234,917に開示されている置換5−(アルキル)カルボキシアミドイミダゾール類(出典明示により本明細書の一部とする)。
AIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲内に含まれる好ましい化合物は、N−[{2−n−ブチル−1−(2−クロロフェニル)メチル−1H−イミダゾール−5−イル}メチル−カルボニル]−L−フェニルアラニンおよびN−[{2−n−ブチル−1−(2−クロロフェニル)メチル−1H−イミダゾール−5−イル}メチルカルボニル]−L−(2−チエニル)アラニン;またはそれらの医薬的に許容される塩である。
グリーソン(Gleason)らの1992年1月9日に公開されたPCT公開番号WO 92/00068に開示されている置換ヒスチジン類(出典明示により本明細書の一部とする)。
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、3−[(2−クロロフェニル)メチル]−2−プロピルチオ−N−ブチリルヒスチジンおよび3−[(2−クロロフェニル)−メチル]−2−n−ブチル−N−ブチリルヒスチジン;またはそれらの医薬的に許容される塩である。
ギラルド(Girard)らの1992年2月20日に公開されたPCT公開番号WO 92/02510に開示されている置換[1H−イミダゾール−5−イル]アルカン酸類(出典明示により本明細書の一部とする)。
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、3−[2−n−ブチル−1−{(2−クロロフェニル)−メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−ベンジルプロパン酸またはその医薬的に許容される塩である。
キーナン(Keenan)らの1992年6月11日に公開されたPCT公開WO92/09278に開示されている置換5−アリールイミダゾール類(出典明示により本明細書の一部とする)。
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、3−[2−n−ブチル−1−{(2−クロロフェニル)−メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]安息香酸またはその医薬的に許容される塩である。
フランツ(Franz)らの1991年10月31日に公開されたPCT公開番号WO 91/16313に開示されている置換ベンズイミダゾール類(出典明示により本明細書の一部とする)。
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、2−n−ブチル−1−(4−カルボキシフェニル)メチル−5−クロロ−1H−ベンズイミダゾール−7−カルボン酸またはその医薬的に許容される塩である。
以下のアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬も、本発明の範囲内に含まれる。AIIレセプター拮抗薬は、本明細書に記載した新規利用能を有すると思われるので、以下のリストは、本発明の範囲を限定するものではない。
本発明において有用なAIIレセプター拮抗薬の他の群は、以下の文献に開示されている(出典明示により本明細書の一部とする)。
シポス(Sipos)らの1973年8月7日に発行されたU.S.P 3,751,404。AIIレセプター拮抗薬のこの群における特に好ましい化合物は、Sar−Arg−Val−Tyr−Val−His−Pro−β−Ala−OHであり、サララシン(Saralasin)とも称される。
レゴリ(Regoli)らの1975年9月23日に発行されたU.S.P 3,907,762。この群の範囲内の好適な化合物の例は、Asp−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Val−OHおよびAsp−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−α−アミノ−n−酪酸である。
ニエキ(Nyeki)らの1983年6月14日に発行されたU.S.P 4,388,304。この特許に開示されている化合物としては、Sar−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Ile−メチルエステルおよびヒドロキシアセチル−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Thr−メチルエステルが挙げられる。同一または同様の化合物は、欧州特許第34,259号にも開示されている。
シポスらの1975年5月27日に発行されたU.S.P 3,886,134。この群の化合物の例は、Sar−Arg−Val−Tyr−Val−His−Pro−Ala−OH、Ser−Arg−Val−Tyr−Val−His−Pro−Ala−OH、およびAsn−Arg−Val−Tyr−Val−His−Pro−D−Leu−OHである。
キスファルディ(Kisfaludy)らの1979年12月18日に発行されたU.S.P 4,179,433。化合物のこの群の例としては、アミノオキシアセチル−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Leu−OHおよびD−α−アミノオキシプロピオニル−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Leu−OHが挙げられる。
ハリナン(Hallinan)らの1980年5月27日に発行されたU.S.P 4,204,991。西ドイツ公開第2846200号[ケミカル・アブストラクツ(Chemical Abstracts)、第91巻、アブストラクトNo.74989d]も参照。
キスファルディらの1980年6月24日に発行されたU.S.P 4,209,442。例としては、ヒドロキシアセチルーArg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Leu−OH、ヒドロキシアセチル−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Ala−OH、およびα−ヒドロキシプロピオニル−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Ile−OHが挙げられる。
ニエキらの1982年5月18日に発行されたU.S.P 4,330,532。この群の化合物の例は、Sar−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Lac、Sar−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Lac(OC2H5)、およびSar−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−2−ヒドロキシ−3−メチル吉草酸である。
フルカワ(Furukawa)らの1982年6月20日に発行されたU.S.P 4,340,598。例としては、1−ベンジル−4−クロロ−2−フェニルイミダゾール−5−アセトアミド、1−ベンジル−2−n−ブチル−4−クロロイミダゾール−5−アセトアミド、および1−ベンジル−2−n−ブチル−5−クロロイミダゾール−4−酢酸が挙げられる。
フルカワらの1982年10月19日に発行されたU.S.P4,355,040。例としては、1−(2−クロロベンジル)−2−n−ブチル−4−クロロイミダゾール−5−酢酸および1−ベンジル−4−クロロ−2−(4−クロロ−3,5−ジニトロフェニル)イミダゾール−5−酢酸が挙げられる。
フルカワらの1984年3月28日に発行された欧州特許公開第103 647号。AIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲内に含まれる好ましい化合物は、4−クロロ−1−(4−ヒドロキシ−3−メチルベンジル)−2−フェニルイミダゾール−5−酢酸またはその医薬的に許容される塩である。
カリニらの1988年1月20日に公開された欧州特許公開第253 310号。AIIレセプター拮抗薬のこの群内に含まれる好ましい化合物は、2−n−ブチル−4−クロロ−1−[(2’−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メチル]−5−(ヒドロキシメチル)−イミダゾールおよび2−n−ブチル−4−クロロ−1−[(2’−(カルボキシビフェニル−4−イル)メチル]−5−(ヒドロキシメチル)−イミダゾール(本明細書中、ロサルタン(Losartan)とも称される);またはそれらの医薬的に許容される塩である。
ブランクリィ(Blankley)らの1987年11月19日に公開された欧州特許公開第245 637号。AIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲内に含まれる好ましい化合物は、1−(2−フェニルエチル)−5−フェニルアセチル−4,5,6,7−テトラヒドロ−1H−イミダゾ[4,5−c]ピリジン−6−カルボン酸および1−(4−アミノ−3−メチルフェニル)メチル−5−ジフェニルアセチル−4,5,6,7−テトラヒドロ−1H−イミダゾ[4,5−c]ピリジン−6−カルボン酸;またはそれらの医薬的に許容される塩である。
カリニらの1989年7月12日に公開された欧州特許公開第323 841号。AIIレセプター拮抗薬のこの群に含まれる好ましい化合物は、5−n−プロピル−1−[(2’−カルボキシビフェニル−4−イル)メチル]ピロール−2−カルボン酸、3−メトキシメチル−5−n−プロピル−4−[(2’−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メチル]−1,2,4−テトラゾール、および3−メトキシメチル−5−n−ブチル−1−[2’−カルボキシビフェニル−4−イル)メチル]ピラゾール;またはそれらの医薬的に許容される塩である。
カリニらの1989年11月14日に発行されたU.S.P 4,880,804。AIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲に含まれる好ましい化合物は、2−n−ブチル−1−[(2’−カルボキシビフェニル−4−イル)メチル]−5−ヒドロキシメチルベンゾ−イミダゾールおよび2−n一ブチル−1−[(2’−カルボキシビフェニル−4−イル)メチル]−6−ヒドロキシメチルベンゾイミダゾール;またはそれらの医薬的に許容される塩である。
カリニらの1990年4月10日に発行されたU.S.P 4,916,129。AIIレセプター拮抗薬のこの群内に含まれる好ましい化合物は、5−[4−(3−(N−イソ−プロピルアミノ)ヒドロキシプロポキシ)インドール−2−カルボキシアミドメチル]−2−n−ブチル−1−[(2’−カルボキシビフェニル−4−イル)メチル]−4−クロロイミダゾールまたはその医薬的に許容される塩である。
ローゼンバーグ(Rosenberg)らの1989年8月15日に発行されたU.S.P 4,857,507。例としては、(4S)−3−オキソ−4−アミノ−2,2−ジフルオロ−1−イソプロピル−メルカプト−5−シクロヘキシルペンタンのBoc−Phe−Leuアミドおよび(3R,4S,EZ)−3−ヒドロキシ−4−アミノ−2−フルオロ−1−イソプロピル−スルホニル−5−シクロヘキシル−1−ペンテンのBoc−Phe−Leuアミド;またはそれらの医薬的に許容される塩が挙げられる。
ウィスマン(Wissmann)らの1977年3月22日に発行されたU.S.P 4,013,791。かかる化合物の例は、スクシナモイル−Arg−Val−Tyr−Val−His−Pro−Phegly−OHである[ここで、Phegly−OHは、L−C−フェニルグリシン残基である]。
バンパス(Bumpus)らの1975年12月2日に発行されたU.S.P 3,923,769。
バンパスらの1975年12月2日に発行されたU.S.P 3,923,770。
バンパスらの1975年12月2日に発行されたU.S.P 3,923,771。
バンパスらの1975年12月9日に発行されたU.S.P 3,925,345。
バンパスらの1976年8月24日に発行されたU.S.P 3,971,77。
ウィル(Wille)の1975年10月28白に発行されたU.S.P 3,915,948。この文献に含まれるAIIレセプター拮抗薬の例は、Sar−Arg−Val−Tyr−Val−His−Pro−OHである。
リファー(Lifer)らの1991年7月31日に公開された欧州特許公開EP 0 438 869。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、α−ヘキシル−4−[(2−カルボキシ−3−ヒドロキシベンゾイル)アミノ]−1H−イミダゾール−1−酢酸エチルエステルまたはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
チャクラバーティ(Chakravarty)らの1990年12月5日に公開された欧州特許公開EP 0 401 030。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、2−n−ブチル−3−(2’−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メチル−6,7−ジヒドロイミダゾ[4,5−e][1,4]ジアゼピン−8(3H)−オンまたはその医薬的に許容される塩である。
チャクラバーティらの1990年12月5日に公開された欧州特許公開EP 0 400 974。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの範囲内に含まれる例は、5,7−ジメチル−2−エチル−3−(2’−(テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メチル−3H−イミダゾ[4,5−b]ピリジンまたはその医薬的に許容される塩である。
チャクラバーティらの1990年12月5日に公開された欧州特許公開EP 0 400 835。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、4,6−ジメチル−2−エチル−1−[2−(テトラゾール−5−イル)ビフェニル−[4−イル]メチルベンゾイミダゾールまたはその医薬的に許容される塩である。
アシュトン(Ashton)らの1991年1月23日に公開された欧州特許公開EP 0 409 332。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、3−n−ブチル−4−[4−(2−カルボキシ−ベンズアミド)ベニル]−5−(2−メチルベンジルチオ)−4−1,2,4−トリアゾールまたはその医薬的に許容される塩である。
グリーンリー(Greenlee)らの1991年1月9日に公開された欧州特許公開EP 0 407 102。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、2−n−ブチル−1,5−ジヒドロ−4,5−ジメチル−1−[(2’−{1H−テトラゾール−5−イル}{1,1−ビフェニル}−4−イル)メチル]−ピロロ[3,4−d]イミダゾールまたはその医薬的に許容される塩である。
カリニらの1989年7月19日に公開された欧州特許公開EP 0 324 377。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、2−n−プロピル−4−ペンタフルオロエチル−1−[2’−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メチル]イミダゾール−5−カルボン酸またはその医薬的に許容される塩である。
オク(Oku)らの1991年5月8日に公開された欧州特許公開EP 0 3426021。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、2−n−ブチル−7−メチル−3−[(2−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル]メチル]−3H−イミダゾ[4,5−b]ピリジンまたはその医薬的に許容される塩である。
ロバーツ(Roberts)らの1991年2月13日に公開された欧州特許公開EP 0 412 848。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、2−エチル−4−(2’−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メトキシ]キノリンまたはその医薬的に許容される塩である。
ロバーツらの1991年5月30日に公開された国際出願公開WO 91/07404。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、2−エチル−4−[(2’−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メトキシ−1,5−ナフチリジンまたはその医薬的に許容される塩である。
ロバーツらの1990年11月28日に公開された欧州特許公開EP 0 399 732。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、4−[(2−n−ブチル−1H−ベンゾイミダゾール−1−イル)メチル−N−フェニルスルホニルベンズアミドまたはその医薬的に許容される塩である。
ミヤケ(Miyake)らの1991年3月3日に公開された欧州特許公開EP 0 420 237。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、7−メチル−2−n−プロピル−3−[(2’(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メチル]−3H−イミダゾ[4,5−b]またはその医薬的に許容される塩である。
ナール(Narr)らの1990年11月17日に公開された欧州特許公開EP 0 392 317。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、4’−[(6−n−ブタノイルアミノ−2−n−ブチル−ベンゾイミダゾール−1−イル)メチル]ビフェニル−2−カルボン酸および4’−[(2−n−ブチル−6−シクロヘキシルアミノカルボニル)アミノ−ベンゾイミダゾール−1−イル)メチル]ビフェニル−2−カルボン酸;またはそれらの医薬的に許容される塩である。
ロス(Ross)らの1991年6月26日に公開された欧州特許公開EP 0 434 249。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、1−{[3−ブロモ−2−[2−テトラゾール−5−イル)フェニル]−5−ベンゾフラニル]メチル}−2−ブチル−4−クロロ−1H−イミダゾール−5−カルボン酸またはその医薬的に許容される塩である。
バーンハート(Bernhart)らの1991年10月3日に公開されたPCT特許公開WO 91/14679。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、2−n−ブチル−4−スピロシクロペンチル−1−[(2’−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メチル]−2−イミダゾリン−5−オンまたはその医薬的に許容される塩である。
ブュールメイヤー
ら、1991年8月28日に公開された欧州特許公開EP 0 443 983。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、(S)−N−(1−カルボキシ−2−メチル−プロパ−1−イル)−N−ペンタノイル−N−[(2’−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メチル]アミンまたはその医薬的に許容される塩である。
ナカ(Naka)らの1991年12月4日に公開された欧州公開第0 459 136号。AIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、1−(シクロヘキシルオキシカルボニルオキシ)−エチル−2−エトキシ−1−[(2’−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)−メチル]ベンゾイミダゾール−7−カルボキシラートまたはその医薬的に許容される塩である。
本発明で使用するためのAII拮抗薬のクラスの前記説明は、継続中の公開された特許出願、特許、刊行物および/またはそれらのアブストラクトから採用した。かかるクラスおよびかかるクラス内の特定の化合物の充分な説明についてかかる特許および公開を参照する(かかる特許および刊行物の全内容は、出典明示により本明細書の一部とする)。
多くのAII拮抗薬は、当該技術分野で知られており、公知の方法によって、または、それらの変形法によって製造される。本発明で用いられるある種のAII拮抗薬は、異性体形で存在してもよい。本発明は、純粋な形およびラセミ混合物を含む混合物およびそれらの医薬的に許容される塩の形の全てのかかる異性体を含む。
局所的に生じたAIIの作用の有効な部位を評価し、特異的なアンギオテンシンレセプター拮抗薬がヒト滑膜におけるアンギオテンシンレセプターと相互に作用することができるかを評価するために、定量的なイン・ビトロレセプターオージオグラフィーを用いて、ヒト滑膜におけるアンギオテンシンについてのレセプターを位置確認し、特徴付ける。本明細書における方法セクションは、かかる位置確認のために使用されるプロセスを説明する。
本発明は、局所的に生じたAIIがヒト滑膜中に存在すること、および、異なる滑膜構造物が別のレセプターサブタイプよりもむしろAT1レセプターの異なる密度を有することを見いだした。さらに、本発明は、かかる滑膜におけるAT2レセプターの欠乏を見いだした。したがって、AT1サブタイプAIIレセプター拮抗薬の使用は、本明細書で使用するのに好ましい。
方法セクション
A)アンギオテンシンII拮抗活性
アンギオテンシンII拮抗活性は、イン・ビトロ法によって評価される。イン・ビトロ拮抗活性は、当該化合物の、血管アンギオテンシンIIレセプターへの結合について125I−アンギオテンシンIIと競争する能力によって、および、それらの、単離したウサギ大動脈におけるアンギオテンシンIIに対する収縮応答を拮抗する能力によって測定される。本発明の目的のために、好ましいAII拮抗薬は、1mM以下の濃度で少なくとも50%AIIの作用を阻害する能力を有する化合物であり、特に好ましいAII拮抗薬は、以下の標準的な方法によって試験した場合、25nM以下の濃度で少なくとも50%AIIの作用を阻害する能力を有する化合物である。
結合
放射性リガンド結合アッセイは、従前に詳細に開示された方法[ガンサー(Gunther)ら、サーキュレイション・リサーチ(Circ.Res.)、47:278、1980]の変形法である。ラット腸間膜動脈からの特定のフラクションを、25℃で1時間、アンギオテンシンII拮抗薬と一緒または該拮抗薬なしで、80pMの125I−アンギオテンシンIIと一緒にトリス緩衝液中でインキュベートする。迅速な濾過により該インキュベーションを停止し、フィルター上にトラップされたレセプター結合125I−アンギオテンシンIIをガンマーカウンターで定量化する。アンギオテンシンII拮抗薬の効力は、全ての特異的に結合したアンギオテンシンIIの50%を置換するのに必要な拮抗薬の濃度であるIC50として表す。(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸についてのIC50は、約1.0nMである。
大動脈
化合物のアンギオテンシンII誘発性血管収縮拮抗能は、ウサギ大動脈において試験される。ウサギ胸部大動脈から環状切片を切り出し、生理食塩水を含有する臓器浴中に吊り下げる。該環状切片を金属支持体上に置き、レコーダーに接続されている力変換器(force displacement transducer)に取り付ける。アンギオテンシンIIに対する累積濃度応答曲線は、拮抗薬の不在下、または、拮抗薬と30分間インキュベートした後に行われる。拮抗薬解離定数(KB)は、平均有効濃度を用いる用量比法によって算出される。(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシナフタ−1−イル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸についてのKBは、約0.15nMである。
B)レセプター・オートラジオグラフィー
ヒト組織
全膝置換を受ける変形性関節炎または慢性関節リウマチに罹っている患者および関節軟骨の炭素繊維リサーフェイシング(resurfacing)を受ける膝蓋骨軟骨軟化症に罹っている患者から手術でヒト膝滑膜を回収した。臨床的な詳細は、第1表に示す。組織試料をTissue−Tek[アメリカ合衆国インディアナ州エルカートのミルズ・インコーポレイテッド(Miles Inc.)]中に包埋し、前固定せずに溶融イソペンタン中でコルクマウントに冷凍した。使用まで標本を−40℃で貯蔵した。クリオスタット中で10μMの厚い切片を切り出し、VectabondTM[イギリス国ピーターバラのベクター・ラボラトリーズ(Vector Laboratories)]処理したスライド上に解凍設置し、風乾し、すぐに使用したか、または、使用まで、5日間まで、シリカゲルと一緒に−20℃で貯蔵した。
リガンド結合
ラット膝の切片を、5mM MgCl2、5mMエチレンジアミン四酢酸(EDTA)および0.004%バシトラシンを含有する10mMリン酸緩衝生理食塩水(pH7.4)(緩衝液A)中で10分間プレインキュベートした。過剰の緩衝液を除去し、切片を、緩衝液B(緩衝液A+1%ウシ血清アルブミン)中でリガンドと一緒に90分間インキュベートした。リガンドは、単独の、または、各々、過剰(1μM)の非標識(Sar1,Ile8)AIIまたはAIIと一緒の0.25nM[125I](Sar1,Ile8)AIIまたは0.25nM[125I]AIIからなる(非特異的結合)。リガンドとして[125I]AIIを使用する実験、および、AIIによる[125I](Sar1,Ile8)AII結合の阻害に対するグアノシン5’−O−(3−チオトリホスファート)(GTPγS)の効果を研究する実験では、緩衝液AおよびBの両方からEDTAを削除した。インキュベーション後、切片を緩衝液A中で4℃で5分間2回洗浄し、蒸留水中で洗浄した後、冷たい空気流下で迅速に乾燥させた。放置する場合以外は、インキュベーションは、22℃で行った。
定量化
標識切片を放射性フィルム[Hyperfilm−3H、イギリス国のアマーシャム(Amersham)]の近くに置き、4℃で4日間([125I](Sar1,Ile8)AII)または17日間([125I]AII)曝露した。フィルムを、15℃で3分間、Kodak D9中で現像した。IBAS 386イメージ・プロセッシング・システムを用いてオートラジオグフィー画像を分析した。滑膜構造物は、必要な場合、フィルムを、ヘマトキシリンおよびエオシンで対比染色した組織片と比較することによって同定した。組織構造物(血管、管壁細胞および特異的結合を表示する内膜下支質の領域(regions of subintimal stroma displaying specific binding)は、各々、詳細に描写された。結合は、最も密集した特異的結合を有する各切片において20個の血管について定量化した。結合密度は、各フィルムで共曝露された125I標準試薬[イギリス国のアマーシャム(Amersham)]との比較によってグレーバリューから誘導され、リガンドの活性データについて修正した。
ミクロオートラジオグラフィー
[125I](Sar1,Ile8)AIIで新しく標識された組織切片を風乾し、次いで、シリカゲルデシカント(dessicant)を用いて90℃で30分間、乾燥パラホルムアルデヒド蒸気中で固定化した。次いで、切片を、42℃で、放射線感受性エマルジョン(Ilford K5)中に浸漬し、冷たい空気流下で迅速に乾燥させた。4℃で3週間曝露した後、エマルジョン浸漬スライドガラスをフィルムオートラジオグラムについてと同様に現像し、次いで、ヘマトキシリンおよびエオシンで対比染色し、脱水し、ビブチル−フタレートポリスチレンキシレン[DPX、イギリス国ロンドンのレイモンド・ラム(Raymond Lamb)]中に置いた。予備実験により、60分間のブーイン(Bouin)固定剤における「湿」固定化技術は、浸漬の間に特異的結合の解離を防止しなかったことが判明した。30分間のパラホルムアルデヒド蒸気における「乾燥」固定化は、より短い固定化時間は、リガンドの解離を防止せず、一方、より長い固定化時間は、ヘマトキシリンおよびエオシン反応性のほぼ全体的な損失を生じたので、最適であると思われた。
結合部位の特徴付け
特異的結合は、全体−非特異的結合と定義された。特異的結合の特徴付けは、変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜の試料について行われた。5〜300分のシンキュベーション時間を用いて、0.25nM[125I](Sar1,Ile8)AIIの特異的結合部位に対する会合割合を評価した。解離は、0.25nM[125I](Sar1,Ile8)AIIと一緒に90分間インキュベートし、添加されたリガンドなしで、5〜120分間、過剰(400ml)の緩衝液Aに切片を移した後に特異的結合の減少として測定した。
結合の飽和性Kd値およびBmax値は、25〜700pM[125I](Sar1,Ile8)AIIを用いて「ホット」飽和実験によって測定した。
結合の特異性は、100pM〜10μMの濃度で非標識リガンドと一緒に0.25nM[125I](Sar1,Ile8)AIIを用いて結合阻害実験によって測定した。阻害リガンドは、作動薬AII、二重AT1/AT2拮抗薬(Sar1,Ile8)AII、感受性AT1拮抗薬ロサルタン(losartan)および(E)−3[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸および感受性AT2拮抗薬PD123319を含んだ。ジチオトレイトール(DTT)への特異的結合の感受性は、10mM DTTと一緒に0.25nM[125I](Sar1,Ile8)AIIを用いてインキュベートすることによって評価した。慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜におけるレセプターサブタイプと、変形性関節炎に罹っている患者からのものとの比較のために、切片を0.25nM[125I](Sar1,Ile8)AII単独(全結合)、1μM非標識(Sar1,Ile8)AIIと一緒に(非特異的結合)、10μM PD123319(AT1レセプターは、非遮断のままである)または10μMロサルタン(AT2レセプターは、非遮断のままである)を用いてインキュベートした。AII結合のグアニンヌクレオチド感受性は、切片を、0.25nM[125I]AIIおよび1μMグアノシン5’−O−(3−チオトリホスファート(GTPγS)を用いてコインキュベートすることによって、および、1μM GTPγSの存在下および不在下、非標識AIIによる0.25nM[125I](Sar1,Ile8)AIIの結合の阻害を測定することによって評価した。
統計学的分析
速度および平衡定数は、GraphPAD Inplot4(サンディエゴ)を用いて単一部位のモデルを仮定する反復非線形回帰によって特異的結合から誘導された。平衡結合密度(Beq)は、22℃で90分間インキュベートした0.25nM[125I](Sar1,Ile8)AIIを用いて得た。結合阻害定数(Ki)およびHIll係数(nHill)についての値は、S字曲線に適合させることによって誘導される。GTPγSの存在下および不在下でのAIIによる[125I](Sar1,Ile8)結合の阻害からのデータは、1および2の部位モデルに適合させ、GraphPAD Inplot4を用いてF試験によって適合の良好さを比較した。記述データは、平均として表し(95%信頼区間)、グループ間の比較は、幾何学的データについてボンフェローニ(Bomferroni)修正を伴う一方向または反復測定ANOVAおよびスチューゲントt試験を用いて行った。
免疫組織化学
特異的[125I](Sar1,Ile8)AII結合の細胞局在化をさらに研究するために、および、特異的結合部位の局在化をアンギオテンシン転換酵素のものと比較するために、エマルジョン浸漬組織標本のために使用するものに対する連続切片を、内皮、平滑筋、マクロファージ、線維芽細胞およびT細胞マーカーに対する一次抗体を用いて免疫染色した(第2表)。クリオスタット切片(10μM厚)を、シュ(Hsu)ら(1981)のアビジン−ビオチン複合物(ABC)法によって染色した。すなわち、4℃で5分間、切片をアセトン中で固定化し、一次抗体と一緒に室温で2時間、または、ビオチニル化ウマ抗マウスIgGまたはビオチニル化ヤギ抗ウサギIgGと一緒に1時間、アビジン−ビオチン複合物と一緒に30分間インキュベートし、ジアミノベンジジン中で現像し、脱水し、DPX中に置いた。
物質
[125I](Sar1,Ile8)AIIおよび[125I]AII(特異的活性、各2000ci/ミリモル)、125I標準試薬、およびHyperfilm−3Hは、イギリス国アマーシャムのアマーシャム・インターナショナル・パブリック・リミテッド・カンパニー(Amersham International plc)から入手した。ロサルタン(losartan)は、アメリカ合衆国デラウエア州ウィルミントンのデュポン・メルク(DuPont Merck)によって、(E)−3−[2−n−ブチル−1−(4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸は、アメリカ合衆国ペンシルベニア州キング・オブ・プルシアのスミスクライン・ビーチャムによって、PD123319は、アメリカ合衆国ミズーリ州アナーバーのパーク−デイヴィス(Parke−Davis)によって好意的に提供された。他の非標識ペプチド、グアニンヌクレオチド、DTT、バシトラシンおよび無ウシ血清アルブミン酵素は、イギリス国プールのシグマ・ケミカル・カンパニー(Sigma Chemical Co.)から入手した。ビオチニル化ウマ抗マウスIgGおよびビオチニル化ヤギ抗ウサギ親和性精製IgGおよびアビジン−ビオチン複合物は、アメリカ合衆国バーリンガムのベクター・ラボラトリーズ(Vector Laboratories)からのものである。
結果
局在化
[125I](Sar1,Ile8)AIIは、全ての場合、微小血管、管壁細胞および支質細胞に対して特異的で高親和性をもって結合した。結合の分布は、慢性関節リウマチにおけると同様に膝蓋骨軟骨軟化症においてである。[125I](Sar1,Ile8)アンギオテンシンIIで観察された結合の分布は、[125I]アンギオテンシンIIを用いて連続切片上で見られたものと同一であるか、まはた、それよりも低密度である。変形性関節炎滑膜の連続における非特異的結合は、細動脈の中膜への特異的結合を示した。慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜の連続切片は、[125I](Sar1,Ile8)アンギオテンシンIIの血管結合を示した。微小血管(直径<100μM)への結合は、隣接した細動脈中膜に対してよりも密であった。[125I]AIIの特異的結合は、連続切片で示したように[125I](Sar1,Ile8)AIIの分布と同一の分布を有したが、各構造物への特異的[125I]AII結合は、(第3表)の対応する結合と同様な密度15〜22%だけであった。全ての疾患グループからの滑膜において、[125I](Sar1,Ile8)AIIの最も密な結合は、滑膜微小血管について、管壁細胞があまり密ではない特異的結合を表し、支質細胞への結合でさえあまり密ではないことが観察された(第4表)。エマルジョン浸漬組織標本において、[125I](Sar1,Ile8)AIIの血管結合は、細動脈中膜(外径>100μM)および微小血管(外径<100μM)への結合からなることが判明した。微小血管への結合は、細動脈中膜への結合よりも密であると思われた。
エマルジョン浸漬組織標本における[125I](Sar1,Ile8)AII結合の局在化を、連続切片の免疫染色における異なるタイプの細胞の分布と比較した。内皮マーカーCD31および血管平滑筋のマーカー、α−平滑筋アクチンについての免疫染色した切片との比較により、[125I](Sar1,Ile8)AIIが滑膜細動脈および微小血管に特異的に結合したことを確認した。CD31免疫反応性内皮細胞によって同定された最小の微小血管でさえα−平滑筋アクチン免疫反応性を表し、微小血管内皮が血管平滑筋のものに加えて特異的[125I](Sar1,Ile8)AII結合を有するを解決することはできなかった。アンギオテンシン転換酵素についての免疫染色は、ウォルシュ(Walsh)ら、1993、アメリカン・ジャーナル・オブ・パソロジー(Am.J.Pathol.)、142、第1610−1621頁(1993)の開示に従って(出典明示により本明細書の一部とする)、滑膜血管内皮上のACEの不均一な分布を示した。強い内皮ACE様免疫反応性を有する大動脈および微小血管もまた、特異的[125I](Sar1,Ile8)AII結合を示した。
マクロファージマーカーCD14(第4図)および線維芽細胞マーカー5B5についての免疫染色は、特異的[125I](Sar1,Ile8)AII結合を有する滑膜管壁層および支質の領域がマクロファージ誘発細胞および線維芽細胞誘発細胞の両方を含有することを確認した。これらの細胞タイプの両方または一方だけが特異的結合を示すかを解決することはできなかった。リウマチ様滑膜の4つの試料は、T細胞マーカーOKT11についての免疫反応性によって示されるように、リンパ球の小胞蓄積を含有した。これらのリンパ小節における特異的[125I](Sar1,Ile8)AII結合は、T細胞自体よりも、CD31−およびα−平滑筋アクチン−ポジティブ血管ならびに毛包周囲結合組織に制限される。特異的[125I](Sar1,Ile8)AII結合の局在化の差異は、疾患グループ間で見られず、各滑膜構造物への平衡結合密度は、膝蓋骨軟骨軟化症に罹っている患者からの滑膜と慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜との間で、また、別の実験では、変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜と慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜との間で、有意には異ならなかった(第4表)。
特徴付け
滑膜構造物への[125I](Sar1,Ile8)AIIの特異的結合は、時間依存性であり、可逆的であった(第5表)。滑膜血管について最大であり、滑膜支質について最小である最大結合密度を有する結合は、飽和できた(第5表、第1図)。各構造物への結合は、高親和性を有しており、会合および解離速度において、ならびに、Kd値において、構造物間で有意な差異は見られなかった(第5表)。
[125I](Sar1,Ile8)AIIの特異的結合は、(Sar1,Ile8)AII>AII>ロサルタン=(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸>PD123319のポテンシーのランク順を有する関連化合物によって阻害された(第5表、第2図)。Kiにおける有意な差異は、構造物間では見られなかった。変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜および慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜において、各構造物への特異的[125I](Sar1,Ile8)AII結合は、AT1拮抗薬ロサルタン(10μM)によって完全に阻害されるが、特異的AT2拮抗薬PD123319(10μM)によっては有意に阻害されなかった(第6表)。各構造物への特異的結合は、10mM DTTによって完全に阻害された(第7表)。
各構造物への作動薬([125I]AII)の結合は、加水分解不可能なGTP類似物、GTPγS(1μM)によって、非特異的結合は有意には異ならないレベルに阻害された(データは、示さない)。GTPγS(1μM)は、[125I](Sar1,Ile8)AII結合を阻害しなかった。各構造物について、EDTAおよびGTPγSの不在下での作動薬AIIによる[125I](Sar1,Ile8)AII結合の阻害は、単一部位モデルによるよりも二部位モデルによる方がより良く説明され(第8表)、部位の15〜26%が高親和性であり(IC50値<0.4nM)、残り74〜85%が低親和性である(IC50値7.0nM)。1μM GTPγSの存在下、阻害曲線は、GTPγSによる高親和性状態のアボリション(abolition)を示す低親和性状態に対応する一部位モデルによって説明された。
ヒト滑膜における[125I](Sar1,Ile8)AIIおよび[125I]AIIについての特異的結合部位は、前記方法によって示された。結合の同一分布およびどちらかのリガンドを使用する作動薬結合に対するGTPγSの阻害効果および非標識AIIによる[125I](Sar1,Ile8)AII結合の阻害は、両方のリガンドがアンギオテンシンレセプターの同一個体群を標識することを示す。特異的結合の阻害についてのポテンシーのランク順は、(Sar1,Ile8)AII>AII>ロサルタン=(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸>PD123319である。DTTによる結合の阻害およびGTPγSによる作動薬結合の阻害は、アンギオテンシンレセプターのAT1サブクラスの特徴である[ホワイトブレッド(Whitebread)ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ(Biochem.Biophys.Res.Commun.)、第163巻、第264−291頁(1989);ワインストック(Weinstock)ら、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー(J.Med.Chem.)、第34巻、第1514−1517頁(1991)]。ロサルタンまたはPD123319の存在下で行った結合研究は、これらの疾患グループのいずれかからの滑膜におけるAT2レセプターの存在についての証拠を提供しない。データは、異なる滑膜構造物が異なるレセプターサブタイプよりもAT1レセプターの異なる密度を有することを示す。
ヒト滑膜における[125I](Sar1,Ile8)AIIの最も密な結合は、滑膜微小血管(直径<100μM)に見られた。これらの微小血管は、内皮ACE様免疫反応性をも示した。[125I](Sar1,Ile8)AIIが、平滑筋細胞への結合に加えて、微小血管内皮に結合したかを決定することは可能ではなかったが、[125I]AIIの特異的結合は、培養物においてこれらの細胞タイプの各々について従前に示されていた[ホワイトブレッドら、1989前記文献、パテル(Patel)ら、アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー(Am.J.Physiol.)、第256巻、C987−C993(1989)]。アンギオテンシンの結合は、脳[プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1985:83;6340−3]、網膜[ファラリーディレオ(Farrari−Dileo)ら、インベスティゲイティブ・オフタルモロジー・アンド・ビジュアル・サイエンス(Invest.Opthalmol.Vis.Sci.)、第32巻、第21−26頁(1991)]および腎臓[セチ(Sechi)ら、アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー、第262巻、F236−F240(1992)]における微小血管について従前に示されていた。血管のトーン(tone)および平滑筋増殖に対する効果に加えて、微小血管アンギオテンシンレセプターは、内皮透過性[モーレル(Morel)ら、インフラメイション(Inflammation)、第14巻、第571−583頁(1990)]および血管新生[フェルナンデス(Fernandez)ら、ジャーナルメオブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディスン(J.Lab.Clin.Med.)、第105巻、第141−145頁(1985);ル・ノーブル(Le Noble)ら、Eur.H.Pharmacol.、第195巻、第305−306頁(1991)]を調節する。
特に、ここで示した結果は、AT1レセプター拮抗薬ロサルタンおよび(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸が、有効かつ完全に、[125I](Sar1,Ile8)AIIの、炎症を起こしているヒト滑膜における微小血管、管壁細胞および支質への結合を阻害したことを示す。
ヒト滑膜における管壁細胞および支質への(Sar1,Ile8)および[125I]についての特異的結合部位がマクロファージおよび線維芽細胞の分布に対応することも示す。マクロファージ[トーマス(Thomas)およびホフマン(Hoffman)、1984]および線維芽細胞[ミラン(Millan)ら、サイエンス(Science)第244巻、第1340−1342頁(1989)]は、培養において、アンギオテンシンレセプターを発現することが従前に示されていた。イン・ビトロで、アンギオテンシンは、マクロファージ移動を阻害し[ワインストック・アンド・ブラム(Weinstock & Blum)、ジャーナル・オブ・イムノロジー(J.Immunol.)、第131巻、第2529−2532頁(1983)]、ファゴサイトーシスを増加させるが[ワインストック・アント・カッサブ(Weinstock & Kassab)、セルーラー・イムノロジー(Cell.Immunol.)、第46−54頁(1984)]、イン・ビボにおけるマクロファージ機能についてのこれらの観察の関連は、不確定のままである。
[125I](Sar1,Ile8)AIIの成人の滑膜支質および管壁細胞への特異的結合は、AT1様部位について排他的であり、炎症を起こしている組織および炎症を起こしていない組織の両方において見られた。したがって、慢性滑膜炎症は、AT1様レセプターからAT2様レセプターへの切り替えに関連しない。ここで示されるように、ロサルタンおよび(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸は、共に、有効かつ完全に、[125I](Sar1,Ile8)AIIの、炎症を起こしているヒト滑膜における微小血管、管壁細胞および支質への結合を阻害した、これにより、関節の炎症性関節炎症状の治療におけるそれらの使用についての支持を与える。
医薬製剤
関節炎のような炎症性関節疾患の治療のための治療用途において、本発明のAIIレセプター拮抗性化合物は、標準的な医薬組成物に取り込まれる。それらは、経口、非経口、直腸内、局所または経皮投与することができる。
本発明の化合物および経口投与される場合に活性であるそれらの医薬的に許容される塩は、液剤、例えば、シロップ剤、懸濁液剤または乳剤、錠剤、カプセル剤、およびロゼンジ剤として製剤化することができる。
液体製剤は、一般に、懸濁化剤、保存剤、フレーバリング剤または着色剤と一緒に、好適な液体担体、例えば、エタノール、グリセリン、非水性溶媒、例えば、ポリエチレングリコール、油、または水中の、当該化合物または医薬的に許容される塩の懸濁液または溶液からなるであろう。
錠剤の形態の組成物は、固体製剤を調製するために慣用的に使用される好適な医薬担体を使用して調製することができる。かかる担体の例としては、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、ラクトース、シュークロースおよびセルロースが挙げられる。
カプセルの形態の組成物は、慣用の被包方法を使用して調製することができる。例えば、標準的な担体を使用して活性成分を含有するペレットを調製し、次いで、ゼラチン硬カプセル中に充填することができる;別法として、好適な医薬担体、例えば、水性ガム、セルロース、シリケートまたは油を使用して分散物または懸濁液を調製し、次いで、該分散物または懸濁液をゼラチン軟カプセル中に充填することができる。
本発明の化合物および非経口投与(輸液の注射による)される場合に活性であるそれらの医薬的に許容される塩は、溶液剤または懸濁液剤として製剤化することができる。
非経口投与用組成物は、一般に、無菌水性担体または非経口用油、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油またはゴマ油中の活性成分の溶液または懸濁液からなる。別法として、該溶液を凍結乾燥させ、次いで、投与直前に好適な溶媒で再構成することができる。
典型的な坐剤組成物は、結合剤および/または滑沢剤、例えば、グリコール重合体、ゼラチンまたはココアバターまたは他の低融点植物性もしくは合成ワックスまたは脂肪と一緒に、本発明化合物まはたこの方法で投与される場合に活性であるそれらの医薬的に許容される塩からなる。
典型的な経皮用製剤は、慣用の水性または非水性賦形剤からなる、例えば、クリーム、軟膏、ローションまたはペーストであるか、または医用硬膏剤、パッチ剤または膜剤の形態である。
局所的投与については、適している医薬組成物としては、溶液剤、懸濁液剤、軟膏および固体挿入物が挙げられる。典型的な医薬的に許容される担体は、例えば、水、水と低級アルカノールまたは植物性油などの水混和性溶媒との混合物、および水溶性の眼科的に許容される非毒性ポリマー、例えば、メチルセルロースなどのセルロース誘導体である。医薬調製物は、非毒性補助剤、例えば、乳化剤、保存剤、湿潤剤および増粘剤、例えば、ポリエチレングリコール;抗菌成分、例えば、4級アンモニウム化合物;緩衝成分、例えば、アルカリ金属の塩化物;抗酸化剤、例えば、メタ亜硫酸水素ナトリウム;および他の慣用成分、例えば、モノラウリン酸ソルビタンを含有していてもよい。
好ましくは、当該組成物は、単位投与形態である。医薬的投与単位の本発明の化合物の投与量は、活性成分0.01−200mg/kg、好ましくは、0.1−100mg/kgの範囲から選択される有効な非毒性量であろう。選択された投与量は、経口的に、直腸内に、局所注射により、1日1〜6回、または輸液により連続的に、アンギオテンシンIIによって誘発される関節炎の治療を必要とするヒト患者に投与される。ヒト投与のための経口投与単位は、好ましくは、活性化合物10〜500mgを含有する。非経口投与のためには、一般に、より低い投与量が使用される。患者のために安全で有効かつ好都合である場合、経口投与を使用する。
許容されない有毒な効果は、本発明化合物を本発明に従って投与する場合には全く予想されない。
以下の実施例は、限定しないが、本発明を説明するものである。
実験IおよびIIは、別々に行った。変形性関節炎の患者の全膝交換による滑膜においてを慢性関節リウマチについての患者の全膝交換による滑膜においてと比較して(実験I)、膝蓋軟骨軟化症(CMP)について炭素繊維リサーフェーシングを受けている患者からの滑膜においてを慢性関節リウマチについての全膝交換を受けている患者からの滑膜においてと比較して(実験II)、特異的結合密度の有意な差は、見られなかった(ボンフェローニ修正したp値は、全て>0.05)。各疾患において、血管への特異的結合は、管壁細胞への特異的結合よりも密であり(p値<0.001、対t試験)、管壁細胞への特異的結合は、支質への特異的結合よりも密であった(p値<0.01、対t試験)。値は、相乗平均としてamol mm-2で与えられる(95%信頼区間)。
変形性関節炎の6つのケースの滑膜からの平均データを表す最良の適合曲線は、これが単一部位モデルよりも有意に良好な適合性を与える場合、2部位モデルに従って生じた。低い親和性状態(部位1)における部位のIC50値およびパーセントの推定値(95%CI)は、最良の適合曲線について与えられる。GTPγSの不在下(−GTPγS)、各構造物についてのデータは、2部位モデルに最良に適合する。1μM GTPγSの存在下、単一の部位モデルは、GTPγSの不在下で観察された低い親和性部位に対応する推定IC50値を有するデータを示す。
利用能実施例
I.方法
イン・ビトロ実験のために、1.0%以下の最終濃度を有するエタノールまたはDMSO(ジメチルスルホキシド)中に適切な濃度で化合物を溶解させ、次いで、本明細書で指示する緩衝液を用いてそれらの相対濃度に希釈した。
特記しない限り、マウスを使用する本実験では、それらは、チャールズ・リバー・ブリージング・ラボラトリーズ(Charles River Breeding Laboratories)から入手したBalb/cマウスであり、単一実験内では、該マウスは、年齢適合させた。それらの体重範囲は、21〜30gである。試験グループは、一般に、3〜6匹の動物を収容する。
A)ラットにおけるアジュバント誘発性関節炎
ルイス(Lewis)ラットの尾の底に軽パラフィン油中のマイコバクテリウム・ブチリカム(Mycobacterium butyricum)0.75mgを単回皮内注射することによってアジュバント誘発性関節炎(AA)を生じさせる。アジュバント関節炎は、約10日の遅延後に生じ、後ろ足の炎症によって特徴付けられる。予防学的研究では、アジュバント注射後、6日目に開始して、5日間、毎日、化合物を投与する。14、17および20日目に、プレスチモグラフで後ろ足の体積を測定した。
アジュバント誘発性関節炎、免疫学的媒介炎症の複合モデル、骨リモデリンク、および関節軟骨損傷における活性は、関節炎および炎症性疾患の幅広いスペクトルにおいてこれらの化合物の利用能についての支持を与える。
B)TPA誘発性マウス耳水腫
マウスの耳への12−0−テトラデカノイルホボルアセタート(TPA)の投与は、リポキシゲナーゼ(LO)およびシクロオキシゲナーゼ(CO)の両方の産生に寄与する炎症を引き起こすことを示した。
TPA誘発性炎症
アセトン中のTPA(12−0−テトラデカノイルホボルアセタート)[シグマ・ケミカル・カンパニー(Sigma Chemical Co.)](4μg/20μl)をBALB/c雄性マウスの左耳の内面および外面に適用する。次いで、処置後、24時間目またはそれを超えて、ダイアルミクロメーター[ミツトヨ(Mitutoyo)、日本]を用いて、両方の耳の厚さを測定し、データは、処置した耳と未処置の耳との間の厚さの変化として表した(10-3cm)。アセトンの適用は、水腫性反応を生じなかった;したがって、耳の厚さの差異は、TPAに対する反応を表した。水腫を測定した後、炎症を起こした左耳を取り出し、それらをMPO(ミエロペルオキシダーゼ)活性についてアッセイするまで、−70℃で貯蔵した。2時間目または4時間目などのように早い時点での動物の試験は、これが急性の変化を示すだけであり、これらの化合物の使用に関連する慢性または増殖性の変化を示さないので、示されない。
試験化合物は、TPAの適用の15分前に経口投与される。結果は、マウス8匹/グループについての測定からの平均+/−標準偏差である。
炎症を起こした耳組織におけるミエロペルオキシダーゼ(MPO)のアッセイ
該アッセイの当日、部分解凍した耳組織を細かく切り刻み、次いで、0.5%HTABを含有する50mMホスファージ緩衝液(pH6)中でTissumizer homogenizer[テクマー・カンパニー(Tekmar Co.)]を用いてホモジナイズする(10%w/v)。該組織ホモジネートに冷凍−解凍の3サイクルを行い、次いで、短時間の超音波処理をした(10秒)。
ブラッドリー(Bradely)ら、J.Invest.Derm.、78:206、1982の方法は、本明細書に記載した変形法を一緒に用いている。o−ジアニスジン(0.167mg/ml;シグマ・ケミカル・カンパニー(Sigma Chemical Co.))および過酸化水素(0.0005%;シグマ・ケミカル・カンパニー)のMPO依存性反応から有色生成物の出現は、460nmで分光測光的に測定した。上清MPO活性は、ベックマン(Beckman)DU−7分光光度計およびカイネティクス・アナリシス(Kinetics Analysis)パッケージ[ベックマン・インストゥルメンツ,インコーポレイデッド(Beckman Instruments,Inc.)]を用いて、速度的に(15秒間隔で試料採取し、3分間かけて測定した吸光度の変化)定量化される。MPO活性の一単位は、25℃で1分間当たり過酸化物1ミクロモルを分解することと定義される。
C)コラーゲン誘発性関節炎
雄性のDBA/1 LacJ種マウスにおいてII型コラーゲン関節炎を誘発させ、ウシII型コラーゲンを2mg/mlの濃度で0.01N酢酸に溶解させ、等量のフロイント完全アジュバント(FCA)で乳化させる。グリスウォルド(Griswold)ら、アースライティス・アンド・ルーマテイズム(Arthritis and Rheumatism)、第31巻、第11号、第1406−1412頁(1988)(出典明示により本明細書の一部とする)に開示されている説明およびアッセイに従って、エマルジョンを投与する。
前記説明は、好ましい具体例を含む本発明を充分に記載している。本明細書に詳細に記載された具体例の変更および改良は、以下の請求の範囲の範囲内である。さらに説明せずとも、当業者は、前記説明を用いて、本発明をその最も完全な程度に利用できると思われる。したがって、本明細書の実施例は、単なる説明であり、如何なる場合も本発明の範囲を限定するものではない。排他的な所有権または特典が請求される発明の具体例は、以下に定義される。
Claims (1)
- アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬を含む、慢性炎症性疾患の治療のための医薬組成物であって、アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が(E)−3−[2−n−ブチル−1−{4−カルボキシフェニル)−メチル}−1H−イミダゾール−5−イル]−2−(2−チエニル)メチル−2−プロペン酸もしくはその医薬的に許容される塩または2−n−ブチル−4−クロロ−1−[(2’−(1H−テトラゾール−5−イル)ビフェニル−4−イル)メチル]−5−(ヒドロキシメチル)イミダゾールもしくはその医薬的に許容される塩である、医薬組成物。
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