JP3923052B2 - 骨形成促進および骨塩量減少防止用大豆食品 - Google Patents
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ている。
(実験方法)
1.培養液及び試薬
ダルベッコ変法イーグル培地、ペニシリン−ストレプトマイシン混合溶液(5000U/ml−5000μg/ml)は Gibco Laboratreis ( Grand IslandN.Y., USA)から購入した。牛血清アルブミンR(BSA)、シクロヘキシミドは Sigma Chemical Co. ( St. Louis, MO., USA )から入手した。ジピコロネート、硫酸亜鉛およびその他の試薬は、高純度製品を用い、和光純薬(株)から購入した。ゲニスティン ( Genistein ) 並びにゲニスチン ( Genistin ) は、Sigma Chemical Co.から購入した。ゲニスティンとゲニスチンは、エタノールに溶解し、その他の試薬は、精製蒸留水に溶解した。
ウィスター系ラット(雌、4週齡と50週齡)を日本SLC(浜松)から購入し、オリエンタル酵母(株)製(MF)の固形飼料(1.1%Ca, 1.1%P)と精製蒸留水を自由に摂取させた。
ラットはジエチルエーテルで麻酔後、大腿骨を無菌的に摘出し、冷0.25Mしょ糖溶液中で骨髄を洗浄し、骨幹部と骨幹端部組織に分けた。大腿骨骨幹端部組織を細分化し、ダルベッコ変法イーグル培養液(0.25%BSA、1%ペニシリン−ストレプトマイシン含有)中にゲニスティン、ゲニスチン、硫酸亜鉛(最終濃度として10-5Mになるように添加)を加え35mm dish中において、24時間培養した。この培養は5%CO2、37℃の条件下でCO2インキュベータ中で行った。
培養した大腿骨骨幹端部組織を0.25Mしょ糖溶液中で軽く洗浄し、100℃で約6時間乾燥器中で乾燥した。その乾燥重量を測定した後、試験管に入れ、濃硫酸3mlを添加して、24時間120℃で分解した。これを試料液として、亜鉛量とカルシウム量を原子吸光光度計で定量した。亜鉛とカルシウム量は、骨乾燥重量1g当たりのμgあるいはmgとして表示した。
大腿骨骨幹端部組織を冷0.25Mしょ糖溶液で洗浄後、冷6.5mMバビタール緩衝液(pH7.4)3ml中で破砕し、60秒間の超遠心処理をした。さらに3000rpmで5分間遠心処理をし、その上清画分を酵素溶液として用いた。骨アルカリ性ホスファターゼ活性は、Walter および Schutt の方法に従って測定した。酵素反応は、基質としてp−ニトロフェノールリン酸二ナトリウムを含む0.1Mジエタノールアミン塩酸緩衝液(pH9.8)2mlに酵素溶液0.05mlを加えることにより反応を開始させ、37℃、30分間インキュベーションを行った。0.05N NaOH 10mlを加えることにより、反応を停止させ、遊離したp−ニトロフェノールを分光光度計(405nm)で測定した。酵素活性は、インキュベーション1分間の反応で生成したp−ニトロフェノール量(nmol)を使用した酵素蛋白質量(mg)当たりで表示した。
大腿骨骨幹端部組織を冷0.25Mしょ糖溶液で洗浄し、水分除去後、湿重量を測定した。これを0.1N NaOH 4.0ml中で破砕し、4℃、24時間振とう、抽出した。その後、3000rpmで5分間遠心分離し、上清画分をDNA測定用試料とした。DNA量の測定は、Ceriotti の方法に従って行った。試料2.0mlに濃塩酸1.0mlおよび0.04%インドール溶液1.0mlを加え、試験管にアルミキャップを被せ、沸騰水浴中で10分間加熱した後、氷中で急冷することによって反応を停止させた。クロロホルム4.0mlで3〜4分間の抽出を数回繰返し、分光光度計(490nm)でDNA量を測定した。DNA量は、骨組織湿重量(g)当たりで表示した。
各々の測定値の有意差検定は、Student's t-test を用いて行った。危険率5%以下のものを有意差有りとした。
ラット大腿骨の骨幹端部組織(海綿骨)における骨成分(石灰化促進酵素アルカリ性ホスファターゼ活性、骨組織中の細胞数の指標としてのDNA、骨組織中の骨塩量としてのカルシウム)について、若齢ラット(4週齡)に比較して老齢ラット(50週齡)の場合には著しい減少が認められた。
豆腐豆乳 1000g
ゲニスティン 5g、
牡蛎ニクエキス(亜鉛として1%以上) 5g、
上記成分を均一に混合して、豆腐用凝固剤を添加して凝固させ、豆腐とした。
Claims (3)
- 主要成分として亜鉛塩とゲニスティンを添加してなることを特徴とする骨形成促進および骨塩量減少防止用大豆食品。
- 前記大豆食品が豆腐であることを特徴とする請求項1に記載の骨形成促進および骨塩量減少防止用大豆食品。
- 前記亜鉛塩を含有する成分として牡蠣肉エキスを添加してなることを特徴とする請求項1又は2に記載の骨形成促進および骨塩量減少防止用大豆食品。
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