JP3839238B2

JP3839238B2 - Sample introduction apparatus, liquid chromatograph apparatus using the same, and sample introduction method

Info

Publication number: JP3839238B2
Application number: JP2000288297A
Authority: JP
Inventors: 公彦石井; 聖年森; 正徳高木
Original assignee: Hitachi Ltd
Current assignee: Hitachi Ltd
Priority date: 2000-09-22
Filing date: 2000-09-22
Publication date: 2006-11-01
Anticipated expiration: 2020-09-22
Also published as: JP2002098678A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規な試料導入装置とそれを用いた液体クロマトグラフ装置及び試料導入方法に係り、特にオートサンプラーを用いた自動分析を行う場合に適した試料導入装置とそれを用いた液体クロマトグラフ装置及び試料導入方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
液体クロマトグラフ装置においては図１に示すように、ポンプユニット２７により吸入された溶離液１４はカラム９へと送液される。カラム９の直前には試料を導入するための試料導入ユニット１９が設けられ、所定の操作により試料が導入される。導入された試料はカラムで各々の成分に分離され、各種の検出器２１により検出される。
【０００３】
通常、ポンプユニット２７にはドレインバルブ１７が設けられている。ドレインバルブ１７は、例えば、ポンプシリンダ８に接続される共通ポート１７ａ、試料導入ユニット３１に接続されるポート１７ｂ、ドレイン１５に接続されるポート１７ｃを持つ流路切替バルブであり、装置の始動時に流路内が乾いて送液が出来ない場合には、共通ポート１７ａとポート１７ｃを接続するようにバルブを切り替え、大量の液をドレインに早送りすることにより、溶離液をカラム側へ送らず排出し、送液を可能としている。また、分析条件の変更などで溶離液を異なるものへ交換する場合や、二液以上の溶媒の混合させて送液を行うグラジェント分析の場合にも、ドレインバルブ１７を切り替えた後、大量の液を早送りして迅速に流路内の溶媒交換を行っている（以下、パージと呼称する）。
【０００４】
また、ポンプユニット２７は各種の溶離液を一定量正確に送液する必要があるが、流路内に付着した気泡や溶離液中に溶存する気泡が流路内で成長して、一定した送液が不能になる場合がある。この場合もドレインバルブ１７を開放して溶離液をカラム側へ送らず迅速に排出した後、通常の送液流路に切り替えている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ポンプユニット２７に設けたドレインバルブ１７によってパージ操作を行う上記従来技術においては、ドレインバルブ１７を開放して迅速に排出可能な流路が溶離液１４からドレインバルブ１７間に制限される。このため、溶離液を異なるものに交換した場合は、通常の送液流路に切り替えた後に検出器２１までの流路内の液の置換にある程度の時間が必要となる。
【０００６】
特に、図２のように２液以上の溶媒を混合させて送液を行い、カラムからの各成分の溶出時間を短縮するためのグラジェント分析の場合は、一般に溶媒混合を円滑に行うためのミキサー３２が流路内に挿入されるため、試料導入ユニット３１までの流路内容積が多大なものとなる。この流路内容積はパージ操作では置換不可能なデッドボリュームとなり、結果として各成分の保持時間（試料が試料導入装置からカラムに到達し、カラムを出てから検出器に入り検出されるまでの時間）を遅延させる。このため、分析時間の短縮が困難となり、ハイスループットな液体クロマトグラフ装置を実現する上で大きな障害となっていた。
【０００７】
また、ドレインバルブ−カラム間の流路内で発生または付着した気泡はそのままカラム側へ送られることとなるため、カラムの寿命を縮める原因の一つとなっていた。これらの気泡はクロマトグラム上でゴーストピークとして観測されたり、ベースラインノイズを悪化させる要因となるため、分析データの信頼性を確保する上でも障害となっていた。さらに、ドレインバルブをポンプユニットに付加した液体クロマトグラフ装置は流路内の気泡の除去、溶離液の置換に時間が掛り、カラムの劣化を生じ、信頼性の高いデータが得られにくいという問題があった。
【０００８】
本発明の目的は、ポンプユニットと試料計量用サンプリングループ間における流路内の気泡を除去し、溶離液の置換を短時間で行うことができ、カラムの劣化を防止した試料導入装置とそれを用いた液体クロマトグラフ装置及び試料導入方法を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明は、試料注入用ニードルを備えた試料計量用サンプリングループと、試料又は洗浄液を吸入する計量シリンジと、ポンプユニットにより送液される溶離液を試料と共に分離カラムに導入する第１の流路切替バルブ及び第２の流路切替バルブとを備えた試料導入装置において、前記第２の流路切替バルブは前記ポンプユニットと試料計量用サンプリングループとを接続する複数のポートを有し、前記第１の流路切替バルブは前記ポンプユニットと前記計量シリンジとを接続する複数のポートを有すること、又、前記第１の流路切替バルブ及び前記第２の流路切替バルブは各々に設けられたポートを介して互いに接続されており、且つ各々の前記バルブは共通ポートを有すること、又、前記第１の流路切替バルブ及び前記第２の流路切替バルブは前記ポンプユニットに接続するポートが各々に設けられていることを特徴とする。更に、これらの装置には、第１の流路切替バルブに廃液口に接続されるポートを有することが好ましい。
【００１０】
又、本発明は、前記第２の流路切替バルブは前記分離カラムに接続されるポートを有し、該第２の流路切替バルブに設けられた共通ポートと前記第１の流路切替バルブに設けられたポートとを介して互いに接続され、前記第１の流路切替バルブは前記計量シリンジに接続されるポート及び廃液口に接続されるポートを有すること、又、前記第１の流路切替バルブ及び前記第２の流路切替バルブは各々に設けられたポートを介して互いに接続されており、前記第１の流路切替バルブは前記ポンプユニットに接続するポート及び廃液口に接続されるポートを有することを特徴とする。
【００１１】
前記第２の流路切替バルブは、共通ポートと、前記試料計量用サンプリングループに繋がるポートと、前記分離カラムに繋がるポートと、試料注入口に繋がるポートと、前記第１の流路切替バルブに繋がるポートとを有することが好ましい。
【００１２】
前記第１の流路切替バルブは、前記計量シリンジに繋がる共通ポートと、前記第２の流路切替バルブに繋がるポートと、洗浄用ポットに繋がるポートと、洗浄液に繋がるポートと、前記第２の流路切替バルブの共通ポートに繋がるポートとを有することが好ましい。
【００１３】
本発明は、試料を分離する分離カラムと、溶離液を送液するポンプユニットと、前記送液された前記溶離液を前記分離カラムに導入する試料導入装置と、前記ポンプユニットと前記試料導入装置間を接続した第１の輸送配管と、前記試料導入装置と前記分離カラム間を接続した第２の輸送配管とを有し、前記第１の輸送配管および前記第２の輸送配管内を前記ポンプユニットにより前記溶離液と共に試料を送液して分析を行う液体クロマトグラフ装置において、前述の試料導入装置のいずれかよりなることを特徴とする。
【００１４】
本発明は、溶離液を送液するポンプユニット、試料導入装置、分離カラム、検出器はいずれも筐体によってユニット化されていることが好ましい。
【００１５】
また、溶離液条件を変更した際は、前記第１の輸送配管および前記切替バルブを介して前記廃液口へ送液した後、試料の分析を開始することである。
【００１６】
本発明は、試料注入用ニードルを備えた試料計量用サンプリングループと、試料又は洗浄液を吸入する計量シリンジと、ポンプユニットにより送液される溶離液を試料と共に分離カラムに導入する第１の流路切替バルブ及び第２の流路切替バルブとを備えたダイレクトインジェクション方式による試料導入方法において、下記工程（ａ）〜（ｇ）を有することを特徴とする。
【００１７】
（ａ）前記第１の流路切替バルブのポート及び第２の流路切替バルブのポートを介して前記試料計量用サンプリングループ、試料注入用ニードル及び試料注入口を順次接続すると共に、前記第１の流路切替バルブに設けられたドレインに接続し、流路を大気圧に開放する工程。
【００１８】
（ｂ）前記第１の流路切替バルブのポートを介して前記計量シリンジを前記試料計量用サンプリングループと前記試料注入用二ードルとに順次接続し、前記計量シリンジによって試料の吸入を行う工程。
【００１９】
（ｃ）前記試料注入用二ードルをバイアル内の試料から離して洗浄ポット内の洗浄液に浸し、前記試料注入用ニードルの外壁を洗浄する工程。
【００２０】
（ｄ）前記第２の流路切替バルブのポートを介して前記試料計量用サンプリングループ、試料注入用ニードル、試料注入口及びポンプユニットを順次接続し、前記溶離液と共に試料を分離カラムに導入する工程。
【００２１】
（ｅ）前記第１の流路切替バルブの共通ポートに接続された前記計量シリンジを洗浄液ポットに接続し、前記計量シリンジ内に洗浄液を吸入する工程。
【００２２】
（ｆ）前記第１の流路切替バルブの共通ポートに接続した前記計量シリンジを洗浄用ポットに接続し、前記計量シリンジ内の洗浄液を洗浄用ポットに排出する工程。
【００２３】
（ｇ）前記（ｅ）によって前記計量シリンジ内に洗浄液を吸入し、次いで前記計量シリンジ内の前記洗浄液を前記ポンプユニット内のポンプシリンダを通して吐出して前記ポンプシリンダ内を洗浄する工程。
【００２４】
より具体的には、下記工程（ａ）〜（ｇ）を有することを特徴とする試料導入方法にある。
【００２５】
（ａ）前記第２の流路切替バルブのポートを介して前記試料計量用サンプリングループ、試料注入用ニードル及び試料注入口を順次接続し、更に前記試料注入口より前記第２の流路切替バルブのポートから共通ポートを経て、第１の流路切替バルブのポートに接続すると共に第１の流路切替バルブに設けられたドレインに接続し、流路内を大気圧に開放する工程。
【００２６】
（ｂ）前記第１の流路切替バルブのポートから前記第２の流路切替バルブのポートを経て前記試料計量用サンプリングループと前記試料注入用二ードルとを順次接続すると共に、前記試料注入用二ードルを前記第１の流路切替バルブに設けられた共通ポートに接続された計量シリンジに接続し、前記試料注入用二ードルを試料注入口から離してバイアル内の試料に浸し、前記計量シリンジによって試料の吸入を行う工程。
【００２７】
（ｃ）前記試料注入用二ードルをバイアル内の試料から離して洗浄ポット内の洗浄液に浸し、前記試料注入用ニードルの外壁を洗浄する工程。
【００２８】
（ｄ）前記試料注入用二ードルを洗浄ポットから離して試料注入口に差し込み、次いで第２の流路切替バルブのポートをポンプユニットに接続し、該ポンプユニットにより溶離液を試料計量用サンプリングループに送液し、吸入した試料を試料注入用ニードルから試料注入口を経て、第２の流路切替バルブのポートを経て分離カラムに導入する工程。
【００２９】
（ｅ）前記第１の流路切替バルブの共通ポートに接続された前記計量シリンジを第１の流路切替バルブのポートを経て洗浄液ポットに接続し、前記計量シリンジ内に洗浄液を吸入する工程。
【００３０】
（ｆ）前記第１の流路切替バルブの共通ポートに接続した前記計量シリンジを前記第１の流路切替バルブのポートを経て洗浄用ポットに接続し、前記計量シリンジ内の洗浄液を洗浄用ポットに排出する工程。
【００３１】
（ｇ）前記（ｅ）によって前記計量シリンジ内に洗浄液を吸入し、次いで、前記計量シリンジを第１の流路切替バルブの共通ポートから第１の流路切替バルブのポートを経てポンプユニット内のポンプシリンダに接続し、前記計量シリンジ内の前記洗浄液を前記ポンプシリンダを通して吐出してポンプシリンダ内を洗浄する工程。
【００３２】
本発明によれば、ポンプユニットと試料計量用サンプリングループ間における流路内の気泡を除去し、溶離液の置換を短時間で行うことができ、スループットを向上させ、カラム劣化を防ぐとともに、信頼性の高いデータが得られる高性能のハイスループット液体クロマトグラフ装置を実現できる。
【００３３】
【発明の実施の形態】
図３（ａ）〜（ｆ）は、本発明の一実施例における液体クロマトグラフ装置の流路図である。本実施例の液体クロマトグラフ装置においても、前述の図１に示すように、試料を導入するための試料導入装置３０による所定の操作により試料が分離カラムに導入され、導入された試料は分離カラム９で各々の成分に分離され、各種の検出器２１により検出される。検出器２１にはデータ処理ユニット２２が接続されている。又、複数の溶離液を用いる場合も図２と同様にジョイント、プロポーショニングバルブ及びミキサを有する。
【００３４】
試料導入装置３０内の第１の流路切替バルブ１は８つのポジションに切り替え可能であり、共通ポート１ａを他のいずれかのポートに接続するとともに、共通ポート以外の１ポート間の接続も切り替えて行えるバルブである。共通ポート１ａは計量シリンジ１６に接続されており、ポート１ｂはドレイン１９に接続されている。ポート１ｄは洗浄液ポット７に接続されており、ポート１ｅは洗浄用ポット６に接続されドレイン１３へ廃液できるようになっている。ポート１ｆおよびポート１ｈは共に閉口されており、ポート１ｉはポート２ｆに接続されている。ポート１ｇは溶離液１４に接続されたポンプシリンダ１１、１２に接続され、両シリンダ内のシールを洗浄し、ドレイン１８へ廃液できるようになっている。
【００３５】
試料導入ユニット３０内の第２の流路切替バルブ２は６つのポジションに切り替え可能であり、共通ポート２ａを他のいずれかのポートに接続するとともに、共通ポート以外の２ポート間の接続も切り替えて行えるバルブである。共通ポート２ａは第１の流路切替バルブ１のポート１ｃに接続されており、ポート２ｂはポンプユニット内のポンプシリンダ１２に接続されている。ポート２ｃはカラム９に接続されており、ポート２ｅは閉口されている。ポート２ｇには試料計量用サンプルループ１０が接続され、サンプルループ１０の先端には試料注入用ニードル５が設けられている。ポート２ｄは試料注入口４に接続されており、試料注入口４にはシール部材が設けられていて試料注入用ニードル５が液密を保って試料注入口４に挿入され、閉じた流路が形成される。
【００３６】
試料注入用ニードル５は試料が入れられたバイアル３、試料注入口４、洗浄ポット６の間を自由に移動することができる。
【００３７】
本実施例においては、第１の流路切替バルブ１及び第２の流路切替バルブ２は互いに配管で接続されており、且つ共通ポート２ａ，１ａを各々有している。
【００３８】
又、ポンプユニット２９は第１の流路切替バルブ１及び第２の流路切替バルブ２に設けられたポート２ｂ、ポート１ｇに各々接続されている。
【００３９】
更に、第２の流路切替バルブ２に設けられた共通ポート２ａと第２の流路切替バルブ１に設けられたポート１ｃとが接続され、第１の流路切替バルブ１に廃液口に接続されたポート１ｂを有する。
【００４０】
ポンプユニット２９は、１個又は複数個のプランジャポンプと、それを駆動するカムと、カムの回転角度と関係づけられる切欠き円盤と、その形状を検出するフォトインタラプタと、カムを駆動するモータと、プランジャポンプの駆動と溶離液の開閉弁とのタイミングを制御する制御部と、溶離液の圧力を検出する圧力検出器とを備えている。検出された圧力に基づいて開閉弁の開閉時期が制御される。好ましくは、圧力の上昇に伴って開閉弁の開く時期を遅らせる時間を大きくする。
【００４１】
次に、試料導入装置３０により試料を吸入し、溶離液と共に分離カラム９へ導入する動作を説明する。
【００４２】
（ａ）第２の流路切替バルブ２では図３（ａ）に示すようにポート２f、２ｇが繋がり、試料計量用サンプリングループ１０、試料注入用ニードル５、試料注入口４を経て、更に共通ポート２ａ、第１の流路切替バルブ１のポート１ｃ、１ｂを経て、ドレイン１９に接続され、サンプリング用の流路が大気圧に開放される。又、第１の流路切替バルブ１のポート１ｇにはポンプユニット２９が接続され、ポンプシリンダ１１、１２を経てドレイン１８へと繋がる。又、第２の流路切替バルブ２のポート２ｂにはポンプシリンダ１１、１２を経て溶離液１４に繋がり、ポート２ｃを介して分離カラム９へと繋がる。
【００４３】
（ｂ）第１の流路切替バルブ１が図３（ｂ）に示すように、左方向に１３５°回転し、共通ポート１ａ、１ｉを経て、試料注入用ニードル５が試料計量用サンプリングループ１０を経て計量シリンジ１６に接続される。次に、試料注入用ニードル５が試料注入口４から離されてバイアル３内の試料に浸され、計量シリンジ１６が後退して試料の吸入が行われる。
【００４４】
（ｃ）図３（ｃ）に示されるように、試料注入用ニードル５がバイアル３から離されて洗浄ポット６内の洗浄液に浸され、試料注入用ニードル５の外壁が洗浄される。他の接続は（ｂ）と同様である。
【００４５】
（ｄ）次に、試料注入用ニードル５が洗浄ポット３から離されて試料注入口４に差し込まれる。次に、第２の流路切替バルブ２が図３（ｃ）の状態から右回りに６０°回転して図３（ｄ）の状態となり、第２の流路切替バルブ２のポート２ｂと２ｇとが繋がり、ポンプユニット２９により溶離液１４が試料計量用サンプリングループ１０へ送液される。これにより、吸入された試料は溶離液と共に試料注入用ニードル５、試料注入口４を経て、第２の流路切替バルブ２のポット２ｄ、２ｃを介して分離カラム９へ導入される。その後、第１の流路切替バルブ１が右回り方向に１３５°回転して図３（ｄ）の状態となり、共通ポート１ａとポート１ｄを経て、計量シリンジ１６が洗浄液ポット７と接続され、計量シリンジ１６が後退して洗浄液の吸入が行われる。
【００４６】
（ｅ）第１の流路切替バルブ１が右回り方向に４５°回転して、図３（ｅ）の状態となり、計量シリンジ１６と洗浄ポット６が第１の流路切替バルブ１の共通ポート１ａとポート１ｅを経て接続される。次に、計量シリンジ１６が前進してシリンジ内の洗浄液が洗浄ポット６を介してドレイン１３へと排出される。
【００４７】
（ｆ）第１の流路切替バルブ１が左回り方向に４５°回転して図３（ｄ）の状態に設定され、計量シリンジ１６内に洗浄液が吸入される。次に、第１の流路切替バルブ１が右回り方向に１３５°回転して図３（ｆ）の状態となり、計量シリンジ１６がポンプシリンダ１１，１２を介してドレイン１８と接続される。次に、計量シリンジ１６が前進してシリンジ内の洗浄液を吐出し、ポンプシリンダ１１，１２内のシールが洗浄される。分離カラム９とポンプユニット２９との繋がりは図３（ｅ）と同じである。
【００４８】
図４は上記の図３（ａ）〜（ｆ）の分析前に行われる、いわつるパージ動作を示す流路図である。パージ動作は、分析開始前、すなわち図３（a）の状態の前に行われる。また、複数回の分析の途中で溶離液を変更する場合にもこのパージ動作が行われる。
【００４９】
パージ動作においては、ポンプシリンダ１２により吸入された溶離液が第２の流路切替バルブ２のポート２ｂ、共通ポート２ａから第１の流路切替バルブ１のポート１ｃ、１ｂを経てドレイン１９へと送液される流路が形成される。かかる構成により、ポンプユニット２９と試料導入装置３０間の流路内で発生または付着した気泡は、カラム側へ送られることなく廃液することが可能となるため、カラムの劣化を防止し、信頼性の高い分析データを得ることができる。さらに、従来、ポンプユニット２９に設けられていたドレインバルブが不要となるため、単純な装置構成が実現できる。
【００５０】
図４において、計量シリンジ１６の接続は図３（ａ）と同じである。又、第２の流路切替バルブ２のポート２ｆ、２ｇと２ｅ、２ｄとを介して試料計量用サンプリングループ１０、試料注入用ニードル５、試料注入口４が接続されている。
【００５１】
図５は従来例と本実施例による分析データの比較を示しており、測定試料としてメチルパラベンを導入した際に得られた波長２５０ｎｍにおける吸収度の時間変化を表わしたクロマトグラムである。分析開始前に溶離液を変更したため、それぞれ分析前にパージ操作を行ってから測定を開始した。本実施例の図５（ａ）は従来例の図５（ｂ）に比べてメチルパラベンの保持時間が短かくなっており、分析時間を短縮することが可能である。
【００５２】
図６は、本実施例による複数の試料を溶離液条件を変えて連続で分析する場合のフローチャートである。特に、測定試料が多数に渡り溶離液を頻繁に変更するような場合、トータルの分析時間を大幅に短縮することが可能となり、ハイスループットな液体クロマトグラフ装置を実現できる。
【００５３】
【発明の効果】
本発明によれば、図４に示す構成でパージ動作を行うことにより、分析時間の短縮、カラムの劣化を防止し、気泡によるノイズ除去により、信頼性の高いデータが得られるハイスループット液体クロマトグラフ装置を実現できるものである。また、第１の流路切替バルブからシリンダ１１、１２を介してドレイン１８へ通じる流路を設けているため、分析と同時に容易にシリンダ１１、１２内の洗浄を行うことも可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】従来の液体クロマトグラフ装置の構成図である。
【図２】従来の液体クロマトグラフ装置の構成図である。
【図３（ａ）】本発明の実施例による液体クロマトグラフ装置の流路図である。
【図３（ｂ）】本発明の実施例による液体クロマトグラフ装置の流路図である。
【図３（ｃ）】本発明の実施例による液体クロマトグラフ装置の流路図である。
【図３（ｄ）】本発明の実施例による液体クロマトグラフ装置の流路図である。
【図３（ｅ）】本発明の実施例による液体クロマトグラフ装置の流路図である。
【図３（ｆ）】本発明の実施例による液体クロマトグラフ装置の流路図である。
【図４】本発明の実施例による液体クロマトグラフ装置の流路図である。
【図５（ａ）】従来例と本発明の実施例による分析データである。
【図５（ｂ）】従来例と本発明の実施例による分析データである。
【図６】本発明の実施例による液体クロマトグラフ装置のフローチャートである。
【符号の説明】
１…第１の流路切替バルブ、１ａ，２ａ…共通ポット、１ｂ、１ｃ、１ｄ、１ｅ、１ｆ、１ｇ、１ｈ、１ｉ、２ｂ、２ｃ、２ｄ、２ｆ、２ｇ…ポット、２…第２の流路切替バルブ、３…バイアル、４…試料注入口、５…試料注入用ニードル、６…洗浄ポット、７…洗浄液、８、１１、１２…ポンプシリンダ、９…分離カラム、１０…試料計量用サンプルループ、１３、１５、１８、１９、２０…ドレイン、１４…溶離液、１６…計量シリンジ、１７…ドレインバルブ、２１…検出ユニット、２２…データ処理ユニット、２３…ジョイント、２４…プロポーショニングバルブ、２５…溶離液Ａ、２６…溶離液Ｂ、２７、２８、２９…ポンプユニット、３０、３１…試料導入ユニット、３２…ミキサ。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel sample introduction apparatus, a liquid chromatograph apparatus using the same, and a sample introduction method, and more particularly to a sample introduction apparatus suitable for performing an automatic analysis using an autosampler and a liquid chromatograph using the same. The present invention relates to an apparatus and a sample introduction method.
[0002]
[Prior art]
In the liquid chromatograph apparatus, as shown in FIG. 1, the eluent 14 sucked by the pump unit 27 is sent to the column 9. A sample introduction unit 19 for introducing a sample is provided immediately before the column 9, and the sample is introduced by a predetermined operation. The introduced sample is separated into each component by a column and detected by various detectors 21.
[0003]
Usually, the pump unit 27 is provided with a drain valve 17. The drain valve 17 is, for example, a flow path switching valve having a common port 17a connected to the pump cylinder 8, a port 17b connected to the sample introduction unit 31, and a port 17c connected to the drain 15. When the flow path is dry and liquid cannot be sent, the valve is switched so that the common port 17a and port 17c are connected, and a large amount of liquid is quickly fed to the drain, so that the eluent is discharged without being sent to the column side. The liquid can be sent. In addition, in the case of changing the eluent to a different one by changing the analysis conditions, or in the case of gradient analysis in which two or more solvents are mixed and sent, the drain valve 17 is switched and a large amount of The solution is rapidly fed to quickly exchange the solvent in the flow path (hereinafter referred to as purge).
[0004]
In addition, the pump unit 27 needs to accurately feed various amounts of the eluent, but bubbles adhering in the flow path and bubbles dissolved in the eluent grow in the flow path, and the constant flow rate. Liquid may become impossible. Also in this case, the drain valve 17 is opened and the eluent is quickly discharged without being sent to the column side.
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
However, in the above prior art in which the purge operation is performed by the drain valve 17 provided in the pump unit 27, the flow path that can be quickly discharged by opening the drain valve 17 is limited between the eluent 14 and the drain valve 17. For this reason, when the eluent is replaced with a different one, a certain amount of time is required to replace the liquid in the flow path up to the detector 21 after switching to the normal liquid flow path.
[0006]
In particular, in the case of gradient analysis for reducing the elution time of each component from the column by mixing two or more solvents as shown in FIG. Since the mixer 32 is inserted into the flow path, the volume in the flow path to the sample introduction unit 31 is enormous. This internal volume of the flow path becomes a dead volume that cannot be replaced by the purge operation. As a result, the retention time of each component (from the time when the sample reaches the column from the sample introduction device, the time it leaves the column, the time it enters the detector and is detected) Time). For this reason, it has become difficult to shorten the analysis time, which has been a major obstacle to realizing a high-throughput liquid chromatograph apparatus.
[0007]
In addition, bubbles generated or attached in the flow path between the drain valve and the column are sent to the column as they are, which is one of the causes for shortening the lifetime of the column. These bubbles are observed as ghost peaks on the chromatogram or cause deterioration of the baseline noise, which is an obstacle to ensuring the reliability of the analysis data. Furthermore, the liquid chromatograph with a drain valve added to the pump unit takes time to remove bubbles in the flow path and replace the eluent, resulting in column deterioration and difficulty in obtaining highly reliable data. there were.
[0008]
An object of the present invention is to remove a bubble in a flow path between a pump unit and a sample-measuring sampling loop, to perform eluent replacement in a short time, and to provide a sample introduction device that prevents deterioration of a column. The object is to provide a liquid chromatograph apparatus and a sample introduction method used.
[0009]
[Means for Solving the Problems]
The present invention provides a sampling loop for measuring a sample provided with a sample injection needle, a measuring syringe for sucking a sample or a cleaning solution, and a first flow path for introducing an eluent sent by a pump unit into a separation column together with the sample. In the sample introduction device including a switching valve and a second flow path switching valve, the second flow path switching valve has a plurality of ports connecting the pump unit and a sampling loop for sample measurement, One flow path switching valve has a plurality of ports for connecting the pump unit and the metering syringe, and the first flow path switching valve and the second flow path switching valve are provided respectively. The valves are connected to each other through a port, and each of the valves has a common port, and the first flow path switching valve and the second flow path switching bar. Bed is characterized in that the port is connected to the pump unit is provided for each. Furthermore, these devices preferably have a port connected to the waste liquid port in the first flow path switching valve.
[0010]
Further, according to the present invention, the second flow path switching valve has a port connected to the separation column, the common port provided in the second flow path switching valve, and the first flow path switching valve. And the first flow path switching valve has a port connected to the metering syringe and a port connected to a waste liquid port, and the first flow path The switching valve and the second flow path switching valve are connected to each other via ports provided in each, and the first flow path switching valve is connected to a port connected to the pump unit and a waste liquid port. It has a port.
[0011]
The second channel switching valve includes a common port, a port connected to the sampling loop for sample measurement, a port connected to the separation column, a port connected to a sample inlet, and the first channel switching valve. It is preferable to have a connecting port.
[0012]
The first flow path switching valve includes a common port connected to the metering syringe, a port connected to the second flow path switching valve, a port connected to a cleaning pot, a port connected to a cleaning liquid, and the second It is preferable to have a port connected to a common port of the flow path switching valve.
[0013]
The present invention provides a separation column for separating a sample, a pump unit for feeding an eluent, a sample introduction device for introducing the sent eluent into the separation column, a pump unit, and the sample introduction device A first transport pipe connecting the sample introduction apparatus and the separation column, and the pump in the first transport pipe and the second transport pipe. A liquid chromatograph apparatus for performing analysis by sending a sample together with the eluent by a unit, characterized in that it comprises any of the above-described sample introduction apparatuses.
[0014]
In the present invention, the pump unit for feeding the eluent, the sample introduction device, the separation column, and the detector are all preferably unitized by a casing.
[0015]
In addition, when the eluent conditions are changed, the analysis of the sample is started after the liquid is fed to the waste liquid port via the first transport pipe and the switching valve.
[0016]
The present invention provides a sampling loop for measuring a sample provided with a sample injection needle, a measuring syringe for sucking a sample or a cleaning solution, and a first flow path for introducing an eluent sent by a pump unit into a separation column together with the sample. A sample injection method using a direct injection system including a switching valve and a second flow path switching valve includes the following steps (a) to (g).
[0017]
(A) The sampling loop for sample measurement, the needle for sample injection, and the sample injection port are sequentially connected through the port of the first flow path switching valve and the port of the second flow path switching valve, and the first Connecting to the drain provided in the flow path switching valve and opening the flow path to atmospheric pressure.
[0018]
(B) A step of sequentially connecting the measuring syringe to the sample measuring sampling loop and the sample injecting needle through the port of the first flow path switching valve, and inhaling the sample by the measuring syringe.
[0019]
(C) A step of cleaning the outer wall of the sample injection needle by separating the sample injection needle from the sample in the vial and immersing the sample injection needle in the cleaning liquid in the cleaning pot.
[0020]
(D) The sample measurement sampling loop, the sample injection needle, the sample injection port, and the pump unit are sequentially connected via the port of the second flow path switching valve, and the sample is introduced into the separation column together with the eluent. Process.
[0021]
(E) connecting the measuring syringe connected to the common port of the first flow path switching valve to a cleaning liquid pot, and sucking the cleaning liquid into the measuring syringe;
[0022]
(F) connecting the measuring syringe connected to the common port of the first flow path switching valve to a cleaning pot, and discharging the cleaning liquid in the measuring syringe to the cleaning pot.
[0023]
(G) A step of cleaning the inside of the pump cylinder by sucking the cleaning liquid into the measuring syringe according to (e) and then discharging the cleaning liquid in the measuring syringe through a pump cylinder in the pump unit.
[0024]
More specifically, the sample introduction method includes the following steps (a) to (g).
[0025]
(A) The sample measurement sampling loop, the sample injection needle, and the sample injection port are sequentially connected via the port of the second channel switching valve, and the second channel switching valve is further connected from the sample injection port. Connecting to the port of the first flow path switching valve from the first port to the port of the first flow path switching valve and connecting to the drain provided in the first flow path switching valve to release the flow path to atmospheric pressure.
[0026]
(B) The sample measurement sampling loop and the sample injection needle are sequentially connected from the port of the first flow path switching valve through the port of the second flow path switching valve, and the sample injection The needle is connected to a measuring syringe connected to a common port provided in the first flow path switching valve, the sample injection needle is separated from the sample inlet and immersed in the sample in the vial, and the measuring syringe The step of inhaling the sample by
[0027]
(C) A step of cleaning the outer wall of the sample injection needle by separating the sample injection needle from the sample in the vial and immersing the sample injection needle in the cleaning liquid in the cleaning pot.
[0028]
(D) The sample injection needle is separated from the washing pot and inserted into the sample injection port, and then the port of the second flow path switching valve is connected to the pump unit, and the eluent is sampled by the pump unit into the sampling loop for sample measurement. And the step of introducing the sucked sample from the sample injection needle through the sample injection port into the separation column through the port of the second flow path switching valve.
[0029]
(E) The step of connecting the measuring syringe connected to the common port of the first flow path switching valve to the cleaning liquid pot via the port of the first flow path switching valve and sucking the cleaning liquid into the measuring syringe.
[0030]
(F) The measuring syringe connected to the common port of the first flow path switching valve is connected to the cleaning pot via the port of the first flow path switching valve, and the cleaning liquid in the measuring syringe is cleaned. The process of discharging.
[0031]
(G) The cleaning liquid is sucked into the metering syringe according to (e), and then the metering syringe is moved from the common port of the first channel switching valve to the port of the first channel switching valve in the pump unit. A step of cleaning the inside of the pump cylinder by connecting to the pump cylinder and discharging the cleaning liquid in the measuring syringe through the pump cylinder.
[0032]
According to the present invention, it is possible to remove bubbles in the flow path between the pump unit and the sample measurement sampling loop, to replace the eluent in a short time, improve throughput, prevent column deterioration, and reliably. It is possible to realize a high-performance high-throughput liquid chromatograph that can obtain highly reliable data.
[0033]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
3A to 3F are flow charts of the liquid chromatograph apparatus in one embodiment of the present invention. Also in the liquid chromatograph apparatus of the present embodiment, as shown in FIG. 1 described above, the sample is introduced into the separation column by a predetermined operation by the sample introduction apparatus 30 for introducing the sample, and the introduced sample is separated into the separation column. In FIG. 9, each component is separated and detected by various detectors 21. A data processing unit 22 is connected to the detector 21. Further, when a plurality of eluents are used, a joint, a proportioning valve and a mixer are provided as in FIG.
[0034]
The first flow path switching valve 1 in the sample introduction device 30 can be switched to eight positions, and the common port 1a is connected to any other port, and the connection between one port other than the common port is also switched. It is a valve that can be done. The common port 1 a is connected to the measuring syringe 16, and the port 1 b is connected to the drain 19. The port 1 d is connected to the cleaning liquid pot 7, and the port 1 e is connected to the cleaning pot 6 so that the liquid can be discharged to the drain 13. Port 1f and port 1h are both closed, and port 1i is connected to port 2f. The port 1g is connected to the pump cylinders 11 and 12 connected to the eluent 14 so that the seals in both cylinders can be washed and discharged to the drain 18.
[0035]
The second flow path switching valve 2 in the sample introduction unit 30 can be switched to six positions, and the common port 2a is connected to any other port, and the connection between two ports other than the common port is also switched. It is a valve that can be done. The common port 2a is connected to the port 1c of the first flow path switching valve 1, and the port 2b is connected to the pump cylinder 12 in the pump unit. The port 2c is connected to the column 9, and the port 2e is closed. A sample measuring sample loop 10 is connected to the port 2g, and a sample injection needle 5 is provided at the tip of the sample loop 10. The port 2d is connected to the sample injection port 4. The sample injection port 4 is provided with a seal member, and the sample injection needle 5 is inserted into the sample injection port 4 while maintaining liquid tightness. It is formed.
[0036]
The sample injection needle 5 can freely move between the vial 3 in which the sample is placed, the sample injection port 4 and the washing pot 6.
[0037]
In the present embodiment, the first flow path switching valve 1 and the second flow path switching valve 2 are connected to each other by piping and have common ports 2a and 1a, respectively.
[0038]
The pump unit 29 is connected to a port 2b and a port 1g provided in the first flow path switching valve 1 and the second flow path switching valve 2, respectively.
[0039]
Furthermore, the common port 2a provided in the second flow path switching valve 2 and the port 1c provided in the second flow path switching valve 1 are connected, and the first flow path switching valve 1 is connected to the waste liquid port. Port 1b.
[0040]
The pump unit 29 includes one or a plurality of plunger pumps, a cam that drives the plunger pump, a notch disk that is related to the rotation angle of the cam, a photo interrupter that detects the shape, a motor that drives the cam, And a controller for controlling the timing of driving the plunger pump and the on / off valve of the eluent, and a pressure detector for detecting the pressure of the eluent. The opening / closing timing of the on-off valve is controlled based on the detected pressure. Preferably, the time for delaying the opening timing of the on-off valve with increasing pressure is increased.
[0041]
Next, the operation of sucking a sample with the sample introduction device 30 and introducing it into the separation column 9 together with the eluent will be described.
[0042]
(A) In the second flow path switching valve 2, ports 2 f and 2 g are connected as shown in FIG. 3A, and further common through a sample measurement sampling loop 10, a sample injection needle 5, and a sample injection port 4. The port 2a is connected to the drain 19 via the ports 1c and 1b of the first flow path switching valve 1, and the sampling flow path is opened to atmospheric pressure. A pump unit 29 is connected to the port 1 g of the first flow path switching valve 1 and is connected to the drain 18 through the pump cylinders 11 and 12. The port 2b of the second flow path switching valve 2 is connected to the eluent 14 via the pump cylinders 11 and 12, and is connected to the separation column 9 via the port 2c.
[0043]
(B) As shown in FIG. 3 (b), the first flow path switching valve 1 rotates 135 ° to the left, and the sample injection needle 5 passes through the common ports 1a and 1i. And connected to the metering syringe 16. Next, the sample injection needle 5 is separated from the sample injection port 4 and immersed in the sample in the vial 3, and the metering syringe 16 is retracted to inhale the sample.
[0044]
(C) As shown in FIG. 3C, the sample injection needle 5 is separated from the vial 3 and immersed in the cleaning liquid in the cleaning pot 6, and the outer wall of the sample injection needle 5 is cleaned. Other connections are the same as in (b).
[0045]
(D) Next, the sample injection needle 5 is separated from the washing pot 3 and inserted into the sample injection port 4. Next, the second flow path switching valve 2 is rotated 60 ° clockwise from the state of FIG. 3C to the state of FIG. 3D, and the ports 2b and 2g of the second flow path switching valve 2 are turned on. And the eluent 14 is sent to the sampling loop 10 for sample measurement by the pump unit 29. As a result, the sucked sample is introduced into the separation column 9 via the pots 2 d and 2 c of the second flow path switching valve 2 through the sample injection needle 5 and the sample injection port 4 together with the eluent. Thereafter, the first flow path switching valve 1 rotates 135 ° clockwise and enters the state shown in FIG. 3D, and the measuring syringe 16 is connected to the cleaning liquid pot 7 through the common port 1a and the port 1d. The syringe 16 is retracted and the cleaning liquid is sucked.
[0046]
(E) The first flow path switching valve 1 is rotated 45 ° clockwise and the state shown in FIG. 3 (e) is reached, and the metering syringe 16 and the washing pot 6 are common ports of the first flow path switching valve 1. 1a is connected to port 1e. Next, the measuring syringe 16 moves forward, and the cleaning liquid in the syringe is discharged to the drain 13 through the cleaning pot 6.
[0047]
(F) The first flow path switching valve 1 is rotated 45 ° counterclockwise and set to the state shown in FIG. 3 (d), and the cleaning liquid is sucked into the measuring syringe 16. Next, the first flow path switching valve 1 rotates 135 ° clockwise and enters the state shown in FIG. 3 (f), and the metering syringe 16 is connected to the drain 18 via the pump cylinders 11 and 12. Next, the metering syringe 16 moves forward to discharge the cleaning liquid in the syringe, and the seals in the pump cylinders 11 and 12 are cleaned. The connection between the separation column 9 and the pump unit 29 is the same as in FIG.
[0048]
FIG. 4 is a flow chart showing a so-called purge operation performed before the analysis of FIGS. 3 (a) to 3 (f). The purge operation is performed before the analysis is started, that is, before the state shown in FIG. This purge operation is also performed when the eluent is changed during a plurality of analyzes.
[0049]
In the purge operation, the eluent sucked by the pump cylinder 12 passes from the port 2b of the second flow path switching valve 2 and the common port 2a to the drain 19 through the ports 1c and 1b of the first flow path switching valve 1. A flow path for feeding liquid is formed. With this configuration, bubbles generated or attached in the flow path between the pump unit 29 and the sample introduction device 30 can be discharged without being sent to the column side, so that deterioration of the column is prevented and reliability is improved. High analytical data can be obtained. Further, since a drain valve conventionally provided in the pump unit 29 becomes unnecessary, a simple device configuration can be realized.
[0050]
In FIG. 4, the connection of the measuring syringe 16 is the same as that in FIG. Further, a sample measurement sampling loop 10, a sample injection needle 5, and a sample injection port 4 are connected through ports 2f, 2g, 2e, and 2d of the second flow path switching valve 2.
[0051]
FIG. 5 shows a comparison of analysis data between the conventional example and the present example, and is a chromatogram showing the time change of the absorbance at a wavelength of 250 nm obtained when methylparaben was introduced as a measurement sample. Since the eluent was changed before the analysis was started, the measurement was started after performing a purge operation before the analysis. In FIG. 5A of this example, the retention time of methyl paraben is shorter than in FIG. 5B of the conventional example, and the analysis time can be shortened.
[0052]
FIG. 6 is a flowchart in the case where a plurality of samples according to the present embodiment are continuously analyzed by changing the eluent conditions. In particular, when the eluent is frequently changed over a large number of measurement samples, the total analysis time can be greatly shortened, and a high-throughput liquid chromatograph apparatus can be realized.
[0053]
【The invention's effect】
According to the present invention, by performing the purge operation with the configuration shown in FIG. 4, the analysis time can be shortened, the column can be prevented from being deteriorated, and high-reliability liquid chromatograph can be obtained by removing noise due to bubbles. A device can be realized. Further, since the flow path leading from the first flow path switching valve to the drain 18 via the cylinders 11 and 12 is provided, the cylinders 11 and 12 can be easily cleaned simultaneously with the analysis.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a configuration diagram of a conventional liquid chromatograph apparatus.
FIG. 2 is a configuration diagram of a conventional liquid chromatograph apparatus.
FIG. 3 (a) is a flow chart of a liquid chromatograph apparatus according to an embodiment of the present invention.
FIG. 3B is a flow chart of the liquid chromatograph apparatus according to the embodiment of the present invention.
FIG. 3C is a flow chart of the liquid chromatograph apparatus according to the embodiment of the present invention.
FIG. 3 (d) is a flow chart of the liquid chromatograph apparatus according to the embodiment of the present invention.
FIG. 3 (e) is a flow chart of the liquid chromatograph apparatus according to the embodiment of the present invention.
FIG. 3 (f) is a flow chart of the liquid chromatograph apparatus according to the embodiment of the present invention.
FIG. 4 is a flow path diagram of a liquid chromatograph apparatus according to an embodiment of the present invention.
FIG. 5 (a) is analysis data according to a conventional example and an embodiment of the present invention.
FIG. 5 (b) shows analysis data according to a conventional example and an embodiment of the present invention.
FIG. 6 is a flowchart of a liquid chromatograph apparatus according to an embodiment of the present invention.
[Explanation of symbols]
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 ... 1st flow-path switching valve, 1a, 2a ... Common pot, 1b, 1c, 1d, 1e, 1f, 1g, 1h, 1i, 2b, 2c, 2d, 2f, 2g ... Pot, 2 ... 2nd Flow path switching valve, 3 ... vial, 4 ... sample injection port, 5 ... sample injection needle, 6 ... washing pot, 7 ... washing liquid, 8, 11, 12 ... pump cylinder, 9 ... separation column, 10 ... sample weighing Sample loop, 13, 15, 18, 19, 20 ... drain, 14 ... eluent, 16 ... metering syringe, 17 ... drain valve, 21 ... detection unit, 22 ... data processing unit, 23 ... joint, 24 ... proportioning valve , 25 ... eluent A, 26 ... eluent B, 27, 28, 29 ... pump unit, 30, 31 ... sample introduction unit, 32 ... mixer.

Claims

A sampling loop for sample metering provided with a sample injection needle, a metering syringe for sucking a sample or a washing solution, a first flow path switching valve for introducing an eluent fed by a pump unit into the separation column together with the sample, and In the sample introduction device provided with two flow path switching valves, the first flow path switching valve and the second flow path switching valve are connected to each other via ports provided in each, and The sample introduction device is characterized in that the valve has a common port.

A sampling loop for sample metering provided with a sample injection needle, a metering syringe for sucking a sample or a washing solution, a first flow path switching valve for introducing an eluent fed by a pump unit into the separation column together with the sample, and A sample introduction apparatus comprising two flow path switching valves, wherein the first flow path switching valve and the second flow path switching valve each have a port connected to the pump unit. Introduction device.

3. The second flow path switching valve according to claim 1, wherein the second flow path switching valve includes a common port, a port connected to the sampling loop for sample measurement, a port connected to the separation column, a port connected to a sample inlet, And a port connected to one flow path switching valve.

In any one of Claims 1-3, the said 1st flow-path switching valve is a common port connected to the said measurement syringe, a port connected to the said 2nd flow-path switching valve, and a port connected to the washing pot, A sample introduction apparatus comprising a port connected to a cleaning liquid and a port connected to a common port of the second flow path switching valve.

A separation column for separating a sample, a pump unit for feeding an eluent, a sample introduction device for introducing the sent eluent into the separation column, and a connection between the pump unit and the sample introduction device. A first transport pipe and a second transport pipe connected between the sample introduction device and the separation column, and the elution is performed by the pump unit in the first transport pipe and the second transport pipe. A liquid chromatograph apparatus for performing analysis by feeding a sample together with a liquid, wherein the sample introduction apparatus comprises any one of claims 1 to 4.

6. The apparatus according to claim 5, further comprising a control unit that starts analysis of a new sample after the eluent is fed to the waste liquid port via the first transport pipe and the second flow path switching valve. A characteristic liquid chromatograph.

A sampling loop for sample metering provided with a needle for sample injection, a metering syringe for sucking a sample or a washing solution, a first flow path switching valve for introducing an eluent sent by a pump unit into the separation column together with the sample, and A sample introduction method comprising two flow path switching valves, comprising the following steps.
(A) The sampling loop for sample measurement, the needle for sample injection, and the sample injection port are sequentially connected through the port of the first flow path switching valve and the port of the second flow path switching valve, and the first Connecting to the drain provided in the flow path switching valve and opening the flow path to atmospheric pressure.
(B) The step of sequentially connecting the measuring syringe to the sample measuring sampling loop and the sample injection needle through the port of the first flow path switching valve, and performing the inhalation of the sample by the measuring syringe.
(C) A step of cleaning the outer wall of the sample injection needle by separating the sample injection needle from the sample in the vial and immersing the sample injection needle in a cleaning liquid in a cleaning pot.
(D) The sample measurement sampling loop, the sample injection needle, the sample injection port, and the pump unit are sequentially connected via the port of the second flow path switching valve, and the sample is introduced into the separation column together with the eluent. Process.
(E) connecting the measuring syringe connected to the common port of the first flow path switching valve to a cleaning liquid pot, and sucking the cleaning liquid into the measuring syringe;
(F) connecting the measuring syringe connected to the common port of the first flow path switching valve to a cleaning pot, and discharging the cleaning liquid in the measuring syringe to the cleaning pot.
(G) A step of cleaning the inside of the pump cylinder by sucking the cleaning liquid into the measuring syringe according to (e) and then discharging the cleaning liquid in the measuring syringe through a pump cylinder in the pump unit.
(H) The pump cylinder and the port of the second flow path switching valve are connected, and the first flow path is connected to the first flow path switching valve and the second flow path switching valve via the port. Forming a flow path connected to the drain connected to the port of the switching valve, and discharging the eluent sucked by the pump cylinder from the drain;

A sampling loop for sample metering provided with a needle for sample injection, a metering syringe for sucking a sample or a washing solution, a first flow path switching valve for introducing an eluent sent by a pump unit into the separation column together with the sample, and A sample introduction method comprising two flow path switching valves, comprising the following steps.
(A) The sample measurement sampling loop, the sample injection needle, and the sample injection port are sequentially connected via the port of the second channel switching valve, and the second channel switching valve is further connected from the sample injection port. Connecting to the port of the first flow path switching valve from the first port to the port of the first flow path switching valve and connecting to the drain provided in the first flow path switching valve to release the interior of the flow path to atmospheric pressure.
(B) The sample measurement sampling loop and the sample injection needle are sequentially connected from the port of the first flow path switching valve through the port of the second flow path switching valve, and the sample injection needle Is connected to a measuring syringe connected to a common port provided in the first flow path switching valve, the sample injection needle is separated from the sample injection port and immersed in the sample in the vial, and the sample syringe is used to The process of inhaling.
(C) A step of cleaning the outer wall of the sample injection needle by separating the sample injection needle from the sample in the vial and immersing the sample injection needle in a cleaning liquid in a cleaning pot.
(D) The sample injection needle is separated from the washing pot and inserted into the sample injection port, and then the port of the second flow path switching valve is connected to the pump unit,
The eluent is sent to the sampling loop for sample measurement by the pump unit,
Introducing the sample into the separation column together with the sucked sample from the sample injection needle through the sample injection port and the port of the second flow path switching valve;
(E) The step of connecting the measuring syringe connected to the common port of the first flow path switching valve to the cleaning liquid pot via the port of the first flow path switching valve and sucking the cleaning liquid into the measuring syringe.
(F) The measuring syringe connected to the common port of the first flow path switching valve is connected to the cleaning pot via the port of the first flow path switching valve, and the cleaning liquid in the measuring syringe is cleaned. The process of discharging.
(G) The cleaning liquid is sucked into the measuring syringe according to (e), and then the measuring syringe is connected from the common port of the first flow path switching valve to the pump cylinder in the pump unit via another port. The step of cleaning the inside of the pump cylinder by discharging the cleaning liquid in the measuring syringe through the pump cylinder.
(H) The pump cylinder and the port of the second flow path switching valve are connected, and the first flow path is connected to the first flow path switching valve and the second flow path switching valve via the port. Forming a flow path connected to the drain connected to the port of the switching valve, and discharging the eluent sucked by the pump cylinder from the drain;