JP3703904B2 - Skin moisturizer - Google Patents

Description

【０００９】
これら天然に存在するセラミドについては、動物や植物、あるいは微生物が、その供給源として考えられているが、これら動植物等から抽出されたセラミドは、人体に存在するセラミドと大きく構造が異なっており、また、動物体、特に哺乳類からセラミドを得ることは、動物愛護を考えた場合に好ましくない。
【００１０】
また、コリネバクテリウム属、ノカルジア属またはミコバクテリウム属に属する細菌が、皮膚常在菌として、その存在が認められている。これらの細菌と角質細胞との親和性は、それらの産生する接着因子と深く関わっており、これまで接着因子として、かかる細菌が生産するミコール酸エステルやセラミドが何等かの役割を演じていると言われている。
【００１１】
そこで本発明者らは、鋭意研究を行ったところ、式１で示されるセラミド類似物質が、皮膚角質層の水分保持能を根本的に改善する効果を奏することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明の皮膚保湿剤は、次の式１
【式１】

で示されるセラミド類似物質（ただし、式１中、Ｒ_１基はアシル基、Ｒ_２基は飽和アルキル基、Ｘは、水素、エタノールアミンリン酸基、単糖類リン酸基、イノシトールリン酸基のいずれか１種である。）のうち、前記式３〜式８のいずれかで示されるセラミド類似物質からなることを特徴としている。つまり、本願発明は、式３〜式８のいずれかで示されるセラミド類似物質を皮膚保湿剤として使用するものである。
【００１３】
本発明の皮膚保湿剤である式１に示されるセラミド類似物質は、主としてスフィンゴバクテリウム（Ｓｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属によって産生される物質であって、スフィンゴバクテリウム（Ｓｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の細菌を培養することにより、主として菌体中に当該化合物を生成せしめ、かかる菌体から抽出することによって得ることができる。例えば、Ｓ．ｓｐｉｒｉｔｉｖｏｒｕｍ、Ｓ．ｍｕｌｔｉｖｏｒｕｍ、Ｓ．ｖｅｒｓａｔｉｌｉｓ、Ｓ．ｍｉｚｕｔａｅなどの菌種を培養することにより、本発明のセラミド類似物質を得ることができる。また、これらの菌種に限られず、その他の近縁菌、あるいはＦｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ及びその他の近縁菌からも得ることができる。
【００１４】
これらの細菌から得られるセラミド類似物質は、特に、Ｒ_２基として飽和アルキル基が結合している。これまで、自然界にセラミドにあっては、スフィンゴシンに代表されるように、不飽和のアルキル基がほとんどであったが、本発明においては、例えばスフィンガニン（ジヒドロスフィンゴシン）に代表されるように、飽和のアルキル基を有している。
【００１５】
また、従来のセラミドにあっては、Ｒ_１基、Ｒ_２基ともに、直鎖アルキル基が主たるものであったが、本発明のセラミド類似物質にあっては、Ｒ _１ 基、Ｒ _２ 基ともに分岐鎖を有しており、特に、イソ体であることを特徴としている。
【００１６】
さらに、本発明にあっては、Ｒ_１基に水酸基を有するものが好ましく、具体的には、２位の炭素に水酸基が結合した２−ヒドロキシアシル基が望ましい。
【００１７】
また、自然界においては、Ｒ_１では偶数個の炭素数を有するアシル基及びＲ_２基では奇数個の炭素数（末端の水酸基までは偶数個の炭素数）を有するものが一般的であるが、本発明のセラミド類似物質は、Ｒ _１ 基の炭素数が奇数個であり、Ｒ _２ 基の炭素数が偶数個である。
【００１８】
具体的には、例えば、式１のＸ基が水素である
【式３】

（以下、「ＬＣＢＦＡ−１」と称す。）
又は、式１のＸ基としてエタノールアミンリン酸がエステル結合した
【式４】

（以下、「ＣｅｒＰＥ−１」と称す。）
に示すように、Ｒ_１基として、ＣＨ_３ＣＨ（ＣＨ_３）（ＣＨ_２）_１０ＣＨ_２ＣＯ基（炭素数１５）であり、Ｒ_２基として、ＣＨ_３ＣＨ（ＣＨ_３）（ＣＨ_２）_１１基（炭素数１４）であるものを得ることができる。
【００１９】
また、式１のＸ基が水素である
【式５】

（以下、「ＬＣＢＦＡ−２」と称す。）
又は、式１のＸ基としてエタノールアミンリン酸がエステル結合した
【式６】

（以下、「ＣｅｒＰＥ−２」と称す。）
に示すように、Ｒ_１基として、ＣＨ_３ＣＨ（ＣＨ_３）（ＣＨ_２）_１０ＣＨ（ＯＨ）ＣＯ基（炭素数１５）であり、Ｒ_２基として、ＣＨ_３ＣＨ（ＣＨ_３）（ＣＨ_２）_１１基（炭素数１４）であるものを得ることができる。
【００２０】
さらに、本発明のセラミド類似物質の単糖類としては、グルコース、マンノース、フルクトースなどが挙げられる。また、スフィンゴバクテリウム属からは、イノシトールが結合したものが得られ、例えば、
【式７】

（以下、「ＣｅｒＸ−１」と称す。）
又は、
【式８】

（以下、「ＣｅｒＸ−２」と称す。）
に示すように、ホスホリルイノシトール誘導体が、優れた保湿作用を発揮する。
【００２１】
これらのセラミド類似物質を産生するスフィンゴバクテリウム属の培養法としては、従来から用いられている公知の合成培地および天然培地を用いることができ、特にスフィンゴバクテリウム属に属する細菌の培養に用いられる培地であれば、すべての培地が使用できる。
【００２２】
例えば、生育炭素源としては、グルコース、フルクトース、マンノースなどの単糖類、スクロース、トレハロース等の二糖類等を用いることができる。また、窒素源としては、例えば、硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機窒素化合物、ペプトン、肉エキス、コーンスティーブリカー等の有機窒素化合物を利用できる。また、無機塩として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛、マグネシウム、マンガン、リン酸等を、さらに、成長因子として、各種ビタミン、アミノ酸類、または、それらを豊富に含む酵母エキスを適宜加えることにしてもよい。
【００２３】
培地のｐＨは５〜９、特に７〜７．５が至適範囲であり、培養温度は１０〜４０℃、好ましくは３０〜３７℃が適している。培養は、液体培養または固体培養で好気的条件下に行うことが好ましい。また、培養時間は、通常１〜７日程度とするのが適当である。
【００２４】
このようにして得られる菌体から、本発明のセラミド類似物質を得るには、菌体成分を採取する通常の方法を用いることができる。例えば、培養液を遠心分離をして集菌したのち、有機溶媒を加えて溶媒抽出すればよい。具体的に言うと、有機溶媒として、クロロホルムとメタノールの混液や、クロロホルムとメタノール、アセトンの混液のように、クロロホルムなどの疎水性溶媒やメタノールやアセトンなどの親水性溶媒とを単独、あるいは混合したものを用いるとよい。
【００２５】
次に、抽出した菌体成分をシリカゲルやモレキュラシーブなどに吸着させ、その後、先に述べたような溶媒で溶出して、さらに精製を加える。そして、溶媒に対する溶解度差やイオン結合力の差などを利用し、それぞれ単独の方法で、または２以上の方法を適当に組み合わせて、あるいは同様な操作を数回繰り返すことにより、本発明のセラミド類似物質等をほぼ純粋な物質として分離精製することができる。
【００２６】
こうして精製されたセラミド類似物質は、そのまま、あるいは適当な溶媒で希釈したり、さらに適当な賦形剤と混合することにより用いることができ、慣用の製剤化手段によって、各種軟膏剤、外用皮膚剤に用いることができる。例えば、クリーム、乳液等に代表される各種の水／油、油／水型乳化化粧料、口紅、ファンデーション、皮膚洗浄剤、育毛剤等として適用することができる。
【００２７】
また、セラミド類似物質としては、菌体から上述した方法により抽出し、純粋なものにまで精製する必要もなく、また、各種のセラミド類似物質の混合物として用いることとしてもよい。また、セラミド類似物質としては、炭素数の異なるものが混合した状態で得られるが、炭素数の異なるものそれぞれにまで分離精製する必要もない。さらに、毒性が発揮されず、適度な保湿作用を発揮する程度に、粗精製した菌体抽出物として用いてもよい。もちろん、合成によってもセラミド誘導体を得ることとしてもよく、合成した場合には純度の高いセラミド誘導体を得ることができる。
【００２８】
【実施例】
以下に本発明の実施例について具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例１）
〔菌体の培養〕
スフィンゴバクテリウム属（Ｓ．ｓｐｉｒｉｔｉｖｏｒｕｍ）を１白金耳採り、ハートインフージョンの平面寒天培地（日本製薬社製）に画線し、３０℃で２日間培養する。２日間培養したシャーレから１コロニーを白金耳で採り、ハートインフージョンの斜面寒天培地へ画線し、３０℃で１日間培養する。この斜面培地から培養菌体を１白金耳採り、ｐＨ７．０に調整した、以下に示す組成の培養用ＰＹＧ（Ｍ、Ｆ）培地２００ｍｌに植菌し、３０℃で１〜２日間、振とう培養法によって前培養した。この前培養菌液１０〜５０ｍｌ（前培養菌液の菌体濃度により、液量を適宜調整する。）を、同じ組成のＰＹＧ（Ｍ、Ｆ）培地１．５ｌに加え、３０℃で１〜７日間、本培養した。
【００２９】
〔ＰＹＧ（Ｍ、Ｆ）培地の組成〕
・ｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎ（日本製薬製） ０．５％
・ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ（ＤＩＦＣＯ製） ０．５％
・糖 （Ｄ（＋）−Ｇｌｕｃｏｓｅ、
和光純薬製） １％
【００３０】
〔セラミド類似物質の抽出精製〕
こうして得られた培養菌液を、７５００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、菌体を集菌する。次に集菌された菌体を、クロロホルムとメタノールの混液（容積比で２：１）を加え、超音波ホモジナイザーにて１５分間、超音波処理を行う。この処理した溶液を分液ロートに移し、水を加えて２層に分離させ、溶媒相を分取する。そして、分取した溶媒をエバポレーターにて濃縮し、脂質成分を得た。
【００３１】
ついて、この脂質成分を、水酸化カリウムの濃度が０．５Ｎとなるように調整したクロロホルムとメタノール混液（容積比１：２）に溶解させ、３７℃で２時間振盪して加水分解（弱アルカリ水解）を行い、その後、水酸化ナトリウムでｐＨを中性にして、アルカリ安定脂質とする。
【００３２】
さらに、得られたアルカリ安定脂質を薄層クロマトグラフィーにより展開して、分離精製した。つまり、アルカリ安定脂質を少量のクロロホルムなど適当な溶媒に溶かし、シリカゲルからなる分取用薄層板（ＵＮＩＰＬＡＴＥ ＳＩＬＩＣＡ ＧＥＬ Ｇ ＭＥＲＣＫ社製）上に、スポットした。そして、クロロホルムとメタノール、酢酸の混液（容量比１００：１０：５）にて展開した。次に、この薄層板上で分離された各脂質部分を掻き取り、掻き取ったシリカゲルを、それぞれ、ガラスカラムに充填して、クロロホルムとメタノールの混液（容量比３：１）で溶出し、薄層クロマトグラム上で単一スポットになるまで繰り返し行う。最後に溶媒を留去して、ＣｅｒＦＡ−１及びＣｅｒＦＡ−２で示すセラミド類似物質を得た。
【００３３】
また、分離されたリン脂質部分（ＣｅｒＰＥ−１、ＣｅｒＰＥ−２、ＣｅｒＸ−１、ＣｅｒＸ−２を含む部分）は、さらにクロロホルムとメタノール、酢酸、水の混液（容量比１００：２０：１２：５）で、３回展開し、薄層板上で分離された各成分を掻き取り、掻き取ったシリカゲルをガラスカラムに充填し、クロロホルムとメタノールの混液（容量比、２：１）で溶出し、薄層クロマトグラム上で単一スポットになるまで繰り返し行う。最後に溶媒を留去して、ＣｅｒＰＥ−１、ＣｅｒＰＥ−２、ＣｅｒＸ−１、ＣｅｒＸ−２を、それぞれ得た。
【００３４】
次に、こうして得られた各種のセラミド類似物質について、本発明の効果を確認するため、以下の試験を行なった。
【００３５】
（吸湿性試験）
本発明の皮膚保湿剤であるセラミド類似物質としてＬＣＢＦＡ−２について、スフィンゴ脂質を比較対照として、重量法による吸湿性試験を行った。まず、ＬＣＢＦＡ−２およびスフィンゴ脂質を、それぞれ１０ｍｇずつ別個の試験管に秤量した。各試験管に、それぞれ適量のクロロホルムとメタノールの混液（容量比２：１）を加えて溶解した後、それぞれ、試験管壁に均一な皮膜を形成するようにして、溶媒を窒素ガスで除去した。その後、真空デシケーター内で十分乾燥させた後、その重量を測定した。次に、これらを多湿条件下（４０℃、９８％）で吸湿させ、再び重量を測定した。これら各サンプルの、乾燥後の重量と吸湿後の重量との変化率をもって吸湿能とした。
【００３６】
この結果によれば、スフィンゴ脂質にあっては、１２．５％の増加にとどまったのに対し、ＬＣＢＦＡ−２にあっては、３０．０％も増加しており、優れた保湿能を有していることが分かる。
【００３７】
（皮膚コンダクタンスの測定）
次に、本発明のＬＣＢＦＡ−２を使ってクリームを作製し、当該クリームを塗付した後における皮膚コンダクタンスを測定した。
〔クリームの作製〕
以下の処方１に示す成分分量に従い、まず、（１）〜（８）を混合、加熱して７５℃として、油相とする。これとは別に（９）（１０）を混合し、加熱溶解して７５℃とした水相を、先の油相に加え、ホモミキサーで均一に乳化し、油中水型の実施例のクリームを得た。また、同様にして、ＬＣＢＦＡ−２の入っていない対照例のクリームを得た。
【００３８】
〔処方１〕クリーム
成分（％） 実施例 対照例
（１）ＬＣＢＦＡ−２ ０．５ ０．０
（２）ミリスチン酸オクチルドデシル １．０ １．０
（３）トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン ８．０ ８．０
（４）バチルアルコール ５．０ ５．０
（５）ラノリン ２．０ ２．０
（６）トリステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（９Ｅ．Ｏ．） １．０ １．０
（７）自己乳化型モノステアリン酸グリセリン ５．０ ５．０
（８）防腐剤 適 量 適 量
（９）１、３−ブチレングリコール ７．５ ７．５
（１０）精製水 残 量 残 量
【００３９】
〔皮膚コンダクタンスの測定〕
上記で得られた実施例及び対照例のクリームを用いて、皮膚コンダクタンスを測定した。健常人１０名を被験者とし、それぞれ上腕屈側部に、実施例のクリームと対照例のクリームをそれぞれ塗布し、角質層の水分含有量を皮膚コンダクタンスメーター（ＩＢＳ社製）にて測定した。その結果を図１に示す。図中、−○−は実施例のクリームを、−△−は対照例のクリームについて示す。
【００４０】
図１から分かるように、本実施例のクリーム及び対照例のクリームともに皮膚塗付後、約１０分後に最大となり、その後急速に低下し、約２０〜３０分後にはプラトーに戻る。しかし、このとき、本実施例のクリームにあっては、対照例のクリームよりも皮膚コンダクタンスが大きく、プラトーな状態に戻った場合でも、大きい状態であった。このことよりも、ＬＣＢＦＡ−２は良好な水分保持能を有することが分かる。また、これ以外のセラミド類似物質についても同様に良好な水分保持能を示した。
【００４１】
さらに、本発明のＬＣＢＦＡ−２を用いて、各種の化粧品を作製した。以下の実施例においても、単離精製されたＬＣＢＦＡ−２を用いた。
【００４２】
（実施例２）
次に示す処方２にしたがって、化粧水を作製した。
〔処方２〕化粧水
配合成分 配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２ ０．１
（２）エタノール １０．０
（３）ポリオキシエチレンノニル
フェニルエーテル（９Ｅ．Ｏ．） ０．１
（４）グリセリン ２．０
（５）防腐剤 適 量
（６）精製水 残 量
上記成分（１）〜（３）を室温にて混合し、（４）〜（６）を順次添加して混合し、化粧水を得た。
【００４３】
（実施例３）
次に示す処方３にしたがって、乳液を作製した。
〔処方３〕乳液
配合成分 配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２ ０．１
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）セタノール １．５
（４）スクワラン ５．０
（５）自己乳化型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（６）グリセリン ２．０
（７）１、３−ブチレングリコール ６．０
（８）水酸化ナトリウム ０．０３
（９）防腐剤 適 量
（１０）精製水 残 量
上記成分（１）〜（５）を混合し、７０℃で加熱溶解して油相とする。これとは別に（６）〜（１０）を混合溶解して７０℃に加熱した水相に、前記油相を加え、ホモミキサーで均一に乳化した。その後、撹拌しながら３０℃まで冷却し、乳液を得た。
【００４４】
（実施例４）
次に示す処方４にしたがって、エッセンスを作製した。
〔処方４〕エッセンス
配合成分 配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２ ０．１
（２）エタノール １０．０
（３）グリセリン １０．０
（４）カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
（５）防腐剤 適 量
（６）精製水 残 量
上記成分（１）（２）を室温にて混合したのち、（３）〜（６）を添加撹拌して、エッセンスを得た。
【００４５】
（実施例５）
次に示す処方５にしたがって、ファンデーションを作製した。
〔処方５〕ファンデーション
配合成分 配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２ ０．１
（２）１、３−ブチレングリコール ５．０
（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
（４）ケイ酸アルミニウムマグネシウム ０．０５
（５）精製水 残 量
（６）黄酸化鉄 ０．０７
（７）黒酸化鉄 ０．０１
（８）べンガラ ０．０２
（９）酸化チタン ５．０
（１０）タルク ４．０
（１１）ステアリン酸 ２．０
（１２）セタノール １．０
（１３）スクワラン ５．０
（１４）自己乳化型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（１５）防腐剤 適 量
上記成分（１）〜（５）を混合し、７０℃で加熱溶解させ、（６）〜（１０）をあらかじめ混合したものを加え、充分に撹拌する。これを、（１１）〜（１４）を混合溶解後、７０℃に加熱した油相に加え、ホモミキサーで均一に乳化した。その後、撹拌しながら３０℃まで冷却し、ファンデーションを得た。
【００４６】
（実施例６）
次に示す処方６にしたがって、パックを作製した。
〔処方６〕パック
配合成分 配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２ ０．１
（２）ポリビニルアルコール １０．０
（３）酢酸ビニル樹脂エマルジョン １０．０
（４）エタノール ５．０
（５）カオリン １５．０
（６）グリセリン １．０
（７）防腐剤 適 量
（８）精製水 残 量
上記成分（８）に（６）を混合した後、（３）及び（５）を添加し、更に（４）の一部に湿潤させた（２）を添加し、７０℃に加熱し溶解させた。次に残りの成分（４）に（１）及び（７）を加えて溶解したものを添加した後冷却し、パックを得た。
【００４７】
【発明の効果】
本発明の皮膚保湿剤によれば、角質層の水分保持能を高めることができ、肌荒れ等に対して、優れた改善力及び予防効果を発揮することが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明の一実施例であるセラミド類似物質（ＬＣＢＦＡ−２）を使用したクリームと対照例のクリームを用いて、皮膚コンダクタンスの比較試験を行なった結果を示す図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel skin moisturizer, that is, a skin moisturizer that gives the skin a moist feeling and flexibility.
[0002]
[Prior art]
It is a well-known fact that the moisture in the stratum corneum is important to moisturize human skin and make it soft. The water in this stratum corneum is said to be retained by water-soluble components contained in the stratum corneum, that is, free amino acids, organic acids, urea or inorganic ions. Conventionally, these substances are used alone, Alternatively, they are combined and blended into a medicinal dermatological agent or cosmetic, and used for the purpose of improving or preventing rough skin.
[0003]
Apart from these, many moisturizing substances have been developed and used for the same purpose as represented by plant extracts such as aloe extract, which have a high affinity for water.
[0004]
However, when a water-soluble moisturizing substance present in the stratum corneum is applied to the skin, its action is in the skin stratum corneum and supplies water to the stratum corneum. Moreover, the effect is temporary, and it does not fundamentally improve the water retention ability of the stratum corneum and essentially prevent or cure rough skin.
[0005]
In recent years, lipids present between keratinocytes have been found to have a high moisturizing ability, and substitution is made possible by artificial intercellular lipids composed of substances having a structure similar to the keratinocyte lipid component. Although attempts have been made to chemically synthesize these materials, only racemates and analogs can be produced, and the discovery of natural lipid humectants has been desired.
[0006]
Furthermore, when these artificial intercellular lipids are applied to the skin, the water retention ability of the stratum corneum can be fundamentally improved, and the effect of preventing or healing rough skin can be temporarily obtained to some extent. The interrelationship between intercellular lipids and skin has not been sufficiently studied, has not reached a level close to that of natural skin, and has not yet been a satisfactory skin moisturizer.
[0007]
The present invention has been made in view of the drawbacks of the above conventional example, and its purpose is to restore the function of the water retention capacity of the stratum corneum to a level equivalent to that of healthy skin, The aim is to develop a skin moisturizer that gives the skin a moist feeling and flexibility.
[0008]
In such a situation, ceramide isolated from a living body having good affinity with keratinocytes has been attracting attention. Ceramide has a structure in which a fatty acid is acid amide-bonded to the amino group of sphingosine represented by the following formula 2, and a glycosphingolipid in which a sugar is glucoside-bonded to the hydroxyl group at the terminal of this ceramide, ethanolamine phosphate Are widely present in the animal and plant kingdoms as sphingophospholipids (sphingophospholipids in a narrow sense) or the like in which an ester bond is formed, or as free forms.
[Formula 2]

[0009]
For these naturally-occurring ceramides, animals, plants, or microorganisms are considered as sources, but ceramides extracted from these animals and plants etc. are greatly different in structure from ceramides present in the human body, In addition, obtaining ceramide from an animal body, particularly a mammal, is not preferable in consideration of animal welfare.
[0010]
Bacteria belonging to the genus Corynebacterium, Nocardia or Mycobacterium are recognized as skin resident bacteria. The affinity between these bacteria and keratinocytes is closely related to the adhesion factors they produce, and so far, mycolic acid esters and ceramides produced by these bacteria have played some role as adhesion factors. It is said.
[0011]
Thus, the present inventors conducted extensive research and found that the ceramide-like substance represented by Formula 1 has the effect of fundamentally improving the water retention ability of the skin stratum corneum, and the present invention has been completed. It came.
[0012]
[Means for Solving the Problems]
The skin moisturizer of the present invention has the following formula 1
[Formula 1]

(Wherein R ₁ is an acyl group, R ₂ is a saturated alkyl group, X is hydrogen, ethanolamine phosphate, monosaccharide phosphate, inositol phosphate ) Any one of them ) , and is made of a ceramide-like substance represented by any one of Formulas 3 to 8 . That is, the present invention uses a ceramide-like substance represented by any one of Formulas 3 to 8 as a skin moisturizer.
[0013]
The ceramide-like substance represented by Formula 1 which is a skin moisturizing agent of the present invention is a substance mainly produced by the genus Sphingobacterium, and by culturing the bacteria of the genus Sphingobacterium, It can be obtained mainly by producing the compound in the microbial cells and extracting from the microbial cells. For example, S.M. spiritivorum, S. et al. multivorum, S.M. versatilis, S. et al. The ceramide-like substance of the present invention can be obtained by culturing a bacterial species such as mitutae. Moreover, it is not restricted to these microbial species, It can obtain from other related bacteria, Flavobacterium, and other related bacteria.
[0014]
In particular, ceramide-like substances obtained from these bacteria have a saturated alkyl group bonded as the R ₂ group. Until now, in ceramides in nature, most of them were unsaturated alkyl groups, as represented by sphingosine. However, in the present invention, for example, as represented by sphinganine (dihydrosphingosine), it is saturated. It has an alkyl group.
[0015]
In the conventional ceramide, both the R ₁ group and the R ₂ group are mainly linear alkyl groups. In the ceramide-like substance of the present invention, both the R ₁ group and the R ₂ group are used. It has a branched chain, and is particularly characterized by being an iso form.
[0016]
Furthermore, in the present invention, those having a hydroxyl group in the R ₁ group are preferred, and specifically, a 2-hydroxyacyl group in which a hydroxyl group is bonded to the 2-position carbon is desirable.
[0017]
Further, in the natural world, an acyl group having an even number of carbon atoms in R ₁ and an odd number of carbon numbers in R ₂ group (even number of carbon atoms up to the terminal hydroxyl group) are common, The ceramide-like substance of the present invention has an odd number of carbon atoms in the R ₁ group and an even number of carbon atoms in the R ₂ group.
[0018]
Specifically, for example, the X group of Formula 1 is hydrogen.

(Hereinafter referred to as “LCBFA-1”.)
Alternatively, ethanolamine phosphoric acid is ester-bonded as the X group of formula 1

(Hereinafter referred to as “CerPE-1”.)
As R ₁ group, it is CH ₃ CH (CH ₃ ) (CH ₂ ) ₁₀ CH ₂ CO group (15 carbon atoms), and R ₂ group is CH ₃ CH (CH ₃ ) (CH ₂ ). _{What has 11} groups (14 carbon atoms) can be obtained.
[0019]
In addition, the X group of formula 1 is hydrogen.

(Hereinafter referred to as “LCBFA-2”.)
Alternatively, ethanolamine phosphoric acid is ester-bonded as the X group of formula 1

(Hereinafter referred to as “CerPE-2”.)
As R ₁ group, it is CH ₃ CH (CH ₃ ) (CH ₂ ) ₁₀ CH (OH) CO group (15 carbon atoms), and R ₂ group is CH ₃ CH (CH ₃ ) (CH ₂ ) What is ₁₁ groups (14 carbon atoms) can be obtained.
[0020]
Furthermore, glucose, mannose, fructose etc. are mentioned as a monosaccharide of the ceramide analog of this invention . From the genus Sphingobacteria, inositol bound is obtained, for example,
[Formula 7]

(Hereinafter referred to as “CerX-1”.)
Or
[Formula 8]

(Hereinafter referred to as “CerX-2”.)
As shown in FIG. 2, the phosphorylinositol derivative exhibits an excellent moisturizing action .
[0021]
As a method for culturing Sphingobacteria that produces these ceramide-like substances, conventionally known synthetic and natural media can be used, and in particular, used for culturing bacteria belonging to the genus Sphingobacteria. Any medium can be used as long as it is a medium.
[0022]
For example, as the growth carbon source, monosaccharides such as glucose, fructose and mannose, disaccharides such as sucrose and trehalose, and the like can be used. As the nitrogen source, for example, inorganic nitrogen compounds such as potassium nitrate, sodium nitrate, ammonium sulfate and ammonium phosphate, and organic nitrogen compounds such as peptone, meat extract and corn steep liquor can be used. In addition, sodium, potassium, calcium, zinc, magnesium, manganese, phosphoric acid and the like as inorganic salts, and various vitamins, amino acids, or yeast extract rich in them as growth factors are added as appropriate. Also good.
[0023]
The pH of the medium is 5 to 9, particularly 7 to 7.5, and the culture temperature is 10 to 40 ° C, preferably 30 to 37 ° C. Cultivation is preferably performed under aerobic conditions in liquid culture or solid culture. In addition, the culture time is usually about 1 to 7 days.
[0024]
In order to obtain the ceramide-like substance of the present invention from the thus obtained microbial cells, a usual method for collecting microbial components can be used. For example, the culture solution may be collected by centrifugation and then extracted with a solvent after adding an organic solvent. Specifically, the organic solvent is a mixture of chloroform and methanol, or a hydrophobic solvent such as chloroform or a hydrophilic solvent such as methanol or acetone, such as a mixture of chloroform and methanol or acetone. Use a good one.
[0025]
Next, the extracted bacterial cell components are adsorbed on silica gel, molecular sieve, or the like, and then eluted with a solvent as described above for further purification. Then, using the difference in solubility in the solvent, the difference in ionic bond strength, etc., each by a single method, by appropriately combining two or more methods, or by repeating the same operation several times, similar to the ceramide of the present invention Substances and the like can be separated and purified as almost pure substances.
[0026]
The purified ceramide-like substance can be used as it is, or can be used by diluting with an appropriate solvent or mixing with an appropriate excipient. Various ointments and skin preparations for external use can be used by conventional formulation means. Can be used. For example, it can be applied as various water / oil typified by cream, emulsion, etc., oil / water emulsified cosmetics, lipstick, foundation, skin cleanser, hair restorer and the like.
[0027]
Moreover, as a ceramide-like substance, it is not necessary to extract from a microbial cell by the method mentioned above, and to refine | purify to a pure thing, and it is good also as using the mixture of various ceramide-like substances. The ceramide-like substance can be obtained in a state where substances having different carbon numbers are mixed, but it is not necessary to separate and purify substances having different carbon numbers. Further, it may be used as a crudely purified bacterial cell extract to such an extent that toxicity is not exhibited and an appropriate moisturizing effect is exhibited. Of course, it is also possible to obtain a ceramide derivative by synthesis, and when synthesized, a highly pure ceramide derivative can be obtained.
[0028]
【Example】
Examples of the present invention will be specifically described below, but the present invention is not limited to these.
(Example 1)
[Culture of bacterial cells]
One platinum loop of S. spirivorum is picked, streaked onto a heart infusion flat agar medium (manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd.), and cultured at 30 ° C. for 2 days. One colony is picked from a petri dish that has been cultured for 2 days with a platinum loop, streaked onto a sloped agar medium of heart infusion, and cultured at 30 ° C. for 1 day. From this slant culture medium, 1 platinum loop of cultured cells was picked and inoculated into 200 ml of PYG (M, F) medium for culture having the following composition adjusted to pH 7.0 and shaken at 30 ° C. for 1-2 days. Pre-cultured by the culture method. 10 to 50 ml of this precultured bacterial solution (the amount of the liquid is appropriately adjusted according to the cell concentration of the precultured bacterial solution) is added to 1.5 L of PYG (M, F) medium having the same composition, and 1 to 30 ° C. Main culture was performed for 7 days.
[0029]
[Composition of PYG (M, F) medium]
・ Polypepton (Nippon Pharmaceutical) 0.5%
・ Yeasttexttract (manufactured by DIFCO) 0.5%
・ Sugar (D (+)-Glucose,
Wako Pure Chemicals) 1%
[0030]
[Extraction and purification of ceramide-like substances]
The cultured bacterial solution thus obtained is centrifuged at 7500 rpm for 30 minutes to collect bacterial cells. Next, a mixed solution of chloroform and methanol (2: 1 by volume) is added to the collected cells and subjected to ultrasonic treatment with an ultrasonic homogenizer for 15 minutes. This treated solution is transferred to a separatory funnel, water is added to separate into two layers, and the solvent phase is separated. And the fractionated solvent was concentrated with the evaporator and the lipid component was obtained.
[0031]
Next, this lipid component was dissolved in a chloroform / methanol mixture (volume ratio 1: 2) adjusted so that the concentration of potassium hydroxide was 0.5 N, and was shaken at 37 ° C. for 2 hours for hydrolysis (weak alkali). Hydrolyzate), and then neutralize the pH with sodium hydroxide to obtain an alkali-stable lipid.
[0032]
Further, the obtained alkali-stable lipid was developed by thin layer chromatography and separated and purified. That is, the alkali-stable lipid was dissolved in a suitable solvent such as a small amount of chloroform and spotted on a preparative thin layer plate (made by UNIPLATE SILICA GEL G MERCK) made of silica gel. And it developed by the mixed liquid (volume ratio 100: 10: 5) of chloroform, methanol, and acetic acid. Next, each lipid portion separated on this thin layer plate is scraped off, and the silica gel thus scraped is filled in a glass column and eluted with a mixture of chloroform and methanol (volume ratio 3: 1), Repeat until there is a single spot on the thin layer chromatogram. Finally, the solvent was distilled off to obtain ceramide-like substances represented by CerFA-1 and CerFA-2.
[0033]
In addition, the separated phospholipid part (part containing CerPE-1, CerPE-2, CerX-1 and CerX-2) is further mixed with chloroform, methanol, acetic acid and water (volume ratio 100: 20: 12: 5). ), Developed three times, scraped each component separated on the thin layer plate, packed the silica gel scraped off into a glass column, eluted with a mixture of chloroform and methanol (volume ratio, 2: 1), Repeat until there is a single spot on the thin layer chromatogram. Finally, the solvent was distilled off to obtain CerPE-1, CerPE-2, CerX-1, and CerX-2.
[0034]
Next, the following tests were performed on the various ceramide-like substances thus obtained in order to confirm the effects of the present invention.
[0035]
(Hygroscopic test)
The LCBFA-2 as a ceramide-like substance that is a skin moisturizing agent of the present invention was subjected to a hygroscopic test by a gravimetric method using a sphingolipid as a comparative control. First, 10 mg each of LCBFA-2 and sphingolipid were weighed into separate test tubes. An appropriate amount of a mixture of chloroform and methanol (volume ratio 2: 1) was added to each test tube and dissolved, and then the solvent was removed with nitrogen gas so as to form a uniform film on the test tube wall. . Then, after fully drying in a vacuum desiccator, the weight was measured. Next, these were made to absorb moisture under humid conditions (40 ° C., 98%), and the weight was measured again. The moisture absorption capacity was determined by the rate of change between the weight after drying and the weight after moisture absorption of each sample.
[0036]
According to this result, the sphingolipid increased only by 12.5%, while the LCBFA-2 increased by 30.0%, which has excellent moisturizing ability. You can see that
[0037]
(Measurement of skin conductance)
Next, a cream was prepared using the LCBFA-2 of the present invention, and the skin conductance after the cream was applied was measured.
[Preparation of cream]
According to the component amount shown in the following prescription 1, first, (1) to (8) are mixed and heated to 75 ° C. to obtain an oil phase. Separately from this, (9) and (10) are mixed, heated and dissolved to 75 ° C., the aqueous phase is added to the previous oil phase, uniformly emulsified with a homomixer, and the water-in-oil type cream of Example Got. Similarly, a control cream without LCBFA-2 was obtained.
[0038]
[Prescription 1] Cream
Ingredient (%) Example Control Example (1) LCBFA-2 0.5 0.0
(2) Octyl dodecyl myristate 1.0 1.0
(3) Tri (capryl / capric acid) glycerin 8.0 8.0
(4) Batyl alcohol 5.0 5.0
(5) Lanolin 2.0 2.0
(6) Polyoxyethylene tristearate
Sorbitan (9E.O.) 1.0 1.0
(7) Self-emulsifying glyceryl monostearate 5.0 5.0
(8) Preservative appropriate amount appropriate amount (9) 1,3-butylene glycol 7.5 7.5
(10) Purified water remaining amount Residual amount [0039]
[Measurement of skin conductance]
Skin conductance was measured using the creams of Examples and Controls obtained above. Ten healthy subjects were used as subjects, the creams of Examples and Controls were respectively applied to the humeral flexion side portions, and the water content of the stratum corneum was measured with a skin conductance meter (manufactured by IBS). The result is shown in FIG. In the figure,-○-indicates the cream of the example, and -Δ- indicates the cream of the control example.
[0040]
As can be seen from FIG. 1, both the cream of this example and the cream of the control example reach a maximum after about 10 minutes after application to the skin, then rapidly decrease, and return to a plateau after about 20 to 30 minutes. However, at this time, in the cream of this example, the skin conductance was larger than that of the cream of the control example, and even when the plateau returned to a plateau state, it was in a large state. From this, it can be seen that LCBFA-2 has a good water retention capacity. Further, other ceramide-like substances also showed good moisture retention ability.
[0041]
Furthermore, various cosmetics were produced using the LCBFA-2 of the present invention. Also in the following examples, isolated and purified LCBFA-2 was used.
[0042]
(Example 2)
A skin lotion was prepared according to Formula 2 shown below.
[Prescription 2] Lotion
Compounding ingredients Compounding amount (% by weight)
(1) LCBFA-2 0.1
(2) Ethanol 10.0
(3) Polyoxyethylene nonyl
Phenyl ether (9E.O.) 0.1
(4) Glycerin 2.0
(5) Preservative Appropriate amount (6) Purified water remaining amount The above components (1) to (3) were mixed at room temperature, and (4) to (6) were sequentially added and mixed to obtain a skin lotion. .
[0043]
(Example 3)
An emulsion was prepared according to the following formulation 3.
[Prescription 3] Emulsion
Compounding ingredients Compounding amount (% by weight)
(1) LCBFA-2 0.1
(2) Stearic acid 2.0
(3) Cetanol 1.5
(4) Squalane 5.0
(5) Self-emulsifying glyceryl monostearate 2.0
(6) Glycerin 2.0
(7) 1,3-butylene glycol 6.0
(8) Sodium hydroxide 0.03
(9) Preservative appropriate amount (10) remaining amount of purified water The above components (1) to (5) are mixed and dissolved by heating at 70 ° C. to obtain an oil phase. Separately, (6) to (10) were mixed and dissolved, and the oil phase was added to an aqueous phase heated to 70 ° C. and uniformly emulsified with a homomixer. Then, it cooled to 30 degreeC, stirring, and obtained the emulsion.
[0044]
(Example 4)
Essence was prepared according to the following formulation 4.
[Prescription 4] Essence
Compounding ingredients Compounding amount (% by weight)
(1) LCBFA-2 0.1
(2) Ethanol 10.0
(3) Glycerin 10.0
(4) Sodium carboxymethyl cellulose 0.1
(5) Preservative Appropriate amount (6) Purified water remaining amount After mixing the above components (1) and (2) at room temperature, (3) to (6) were added and stirred to obtain an essence.
[0045]
(Example 5)
A foundation was prepared according to Formula 5 shown below.
[Prescription 5] Foundation
Compounding ingredients Compounding amount (% by weight)
(1) LCBFA-2 0.1
(2) 1,3-butylene glycol 5.0
(3) Sodium carboxymethyl cellulose 0.1
(4) Magnesium aluminum silicate 0.05
(5) Remaining amount of purified water (6) Yellow iron oxide 0.07
(7) Black iron oxide 0.01
(8) Bengala 0.02
(9) Titanium oxide 5.0
(10) Talc 4.0
(11) Stearic acid 2.0
(12) Cetanol 1.0
(13) Squalane 5.0
(14) Self-emulsifying glyceryl monostearate 2.0
(15) Preservative Appropriate amount The above components (1) to (5) are mixed, dissolved by heating at 70 ° C., and a mixture of (6) to (10) in advance is added and sufficiently stirred. This was mixed and dissolved in (11) to (14), then added to the oil phase heated to 70 ° C., and uniformly emulsified with a homomixer. Then, it cooled to 30 degreeC, stirring, and obtained the foundation.
[0046]
(Example 6)
A pack was prepared according to the following formulation 6.
[Prescription 6] Pack
Compounding ingredients Compounding amount (% by weight)
(1) LCBFA-2 0.1
(2) Polyvinyl alcohol 10.0
(3) Vinyl acetate resin emulsion 10.0
(4) Ethanol 5.0
(5) Kaolin 15.0
(6) Glycerin 1.0
(7) Preservative Appropriate amount (8) Purified water remaining amount After mixing (6) with the above component (8), (3) and (5) were added, and further wetted to a part of (4) (2) was added and heated to 70 ° C. to dissolve. Next, the remaining component (4) was added with (1) and (7) and dissolved, and then cooled to obtain a pack.
[0047]
【The invention's effect】
According to the skin moisturizing agent of the present invention, it is possible to enhance the moisture retention ability of the stratum corneum and to exhibit excellent improvement power and preventive effect against rough skin and the like.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a diagram showing the results of a skin conductance comparison test using a cream using a ceramide-like substance (LCBFA-2) which is an example of the present invention and a cream of a control example.

Claims (2)

A skin moisturizer comprising a ceramide-like substance represented by any one of the following formulas 3 to 8.
[Formula 3]

[Formula 4]

[Formula 5]

[Formula 6]

[Formula 7]

[Formula 8]

A skin moisturizing agent characterized by using a ceramide-like substance represented by any one of the following formulas 3 to 8 as a skin moisturizing agent.
[Formula 3]

[Formula 4]

[Formula 5]

[Formula 6]

[Formula 7]

[Formula 8]

Images