JP3582494B2 - 製紙工程における抗菌処理方法 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は製紙工程における抗菌処理方法に関し、特に２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミド（以下、ＤＢＮＰＡと略記する場合がある）抵抗性微生物の増殖を的確に判定し、この微生物に最適な抗菌剤を使用して抗菌処理する製紙工程における抗菌処理方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
抗菌処理の対象系において同じスライムコントロール剤を使用し続けていると、この薬剤に対して抵抗性を有する微生物が生育するようになり、ついには対象系内の優占微生物が抵抗性菌に遷移し、薬剤の効果が低減する場合がある。製紙工場では２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミド（ＤＢＮＰＡ）を主成分とする抗菌剤が広く使用されており、このＤＢＮＰＡ抵抗性微生物に対する対処が課題となっている。
【０００３】
従来、抵抗性微生物に対する対処は主に経験的判断によって行われている。例えば、ある抗菌剤Ａで処理が行われている抄紙機において、操業時またはシャットダウン時に汚染が観察されたり、または薬注直後の白水中の殺菌率が低下した場合、抵抗性微生物の発生により抗菌剤Ａが有効に作用していないと判断し、別の抗菌剤Ｂに代替する方法が採られている。この場合、代替抗菌剤Ｂの選定は抄紙機からスライムまたは白水を採取し、各種抗菌剤の殺菌試験および増殖抑制試験を行い、その結果から判断されている。
【０００４】
このような方法は経験的判断によるもので主観的であり、本当に抵抗性微生物の発生による汚染であるかどうかを明確にすることはできない。また汚染の度に殺菌試験および増殖抑制試験を繰り返して行って代替抗菌剤を選定する必要があるので、時間と手間がかかっている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、製紙工程中に存在する中心的なＤＢＮＰＡ抵抗性微生物の増殖を的確に判定することができ、この微生物に対する抗菌剤を経験的判断に頼ることなく、かつ殺菌試験および増殖抑制試験を省略して的確に選定し、これにより最適な抗菌剤を使用して効率よく抗菌処理することができる製紙工程における抗菌処理方法を提案することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は次の製紙工程における抗菌処理方法である。
（１） 製紙工程で発生する微生物を抗菌剤により抗菌処理する方法において、
抗菌剤を適用している対象系から、定期的または任意の時点で、微生物を含む試料を採取し、この試料中の微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定し、このＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率に増加傾向が認められる場合、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤を使用する
製紙工程における抗菌処理方法。
（２） 製紙工程で発生する微生物を抗菌剤により抗菌処理する方法において、
抗菌剤を適用する対象系から微生物を含む試料を採取し、この試料中の微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定し、このＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％以上である場合、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤を使用する
製紙工程における抗菌処理方法。
（３） Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓが、その１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列中に、配列表の配列番号１に示す塩基配列と９８％以上の相同性を有する塩基配列を有する細菌である上記（１）または（２）記載の抗菌処理方法。
（４） 対象系が、２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミドを主成分とする抗菌剤を用いて抗菌処理を行っている処理系である上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の抗菌処理方法。
（５） Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤が四級アンモニウム塩系界面活性剤または無機ハロゲン系化合物を有効成分とする抗菌剤である上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の抗菌処理方法。
（６） 四級アンモニウム塩系界面活性剤がジデシルジメチルアンモニウムクロリドである上記（５）記載の抗菌処理方法。
（７） 無機ハロゲン系化合物が臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを反応させて得られる化合物である上記（５）記載の抗菌処理方法。
（８） Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤は、それを選定する際、少なくともＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対する抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されているデータベースを検索し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して有効濃度が入力されている抗菌剤を抽出し、この中から選定する上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の抗菌処理方法。
（９） データベースは、微生物の生育に及ぼす環境条件ごとに抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されており、指定された環境条件の中から抗菌剤を抽出するものである上記（８）記載の抗菌処理方法。
（１０） データベースには、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対する抗菌剤としてジデシルジメチルアンモニウムクロリド、および無機ハロゲン系化合物が臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを反応させて得られる化合物の有効濃度のデータが少なくとも蓄積されている上記（８）または（９）記載の抗菌処理方法。
【０００７】
本明細書において、「微生物」は細菌、酵母、糸状菌（カビ）、藻類およびアーキア（古細菌）等を含む。
また「抗菌剤」は上記微生物に対する殺生物作用および／または増殖抑制作用を有する薬剤を意味し、一般に抗菌剤、殺菌剤、静菌剤、抑制剤、スライムコントロール剤、防腐剤などと称されているものが含まれる。
また「抗菌」は上記微生物を死滅させることおよび／または増殖を抑制することを意味する。
【０００８】
また「微生物相」は対象系または試料中の個々の微生物の種類と構成比および含有量（微生物数または微生物量の割合）を示す意味で用いられているが、優占微生物の種類と構成比および含有量、または特定微生物の種類と構成比および含有量を示す意味で用いられる場合もある。
また「処理実績の結果」および「処理効果」はともに対象系に抗菌剤を使用した場合の効果を意味する。この効果は、例えばスライムコントロール剤の場合、一定期間内におけるスライム成長量（微生物量でもスライム厚さでも可）の差で表してもよい。ある一定の成長量に達するまでの期間で表してもよい。またスライムが対象系で発生することによって生じる障害内容の程度によって示すことも含まれる。
【０００９】
本発明の抗菌処理方法が適用できる対象系は、紙を製造する製紙工程において抗菌剤を使用して抗菌処理する処理系であれば特に制限されない。製紙工程は、通常、パルプに填料や薬品を添加して紙の原料をつくる調成工程、抄紙機で紙を抄く抄紙工程、および紙の表面を塗料等で覆って印刷適性をよくする塗工工程などの工程にさらに分類されるが、このいずれの工程でもよい。具体的には、白水の抗菌処理などがあげられる。
【００１０】
製紙工場ではＤＢＮＰＡを主成分とするスライムコントロール剤を使用して抗菌処理が広く行われているが、このような系でどのようなＤＢＮＰＡ抵抗性微生物が生息しているか、従来知られていなかった。発明者はＤＢＮＰＡを主成分とする抗菌剤を使用している製紙工程中の微生物を調査した結果、ＤＢＮＰＡに対して抵抗性を有するスライムには、特定の１６Ｓ ｒＤＮＡ塩基配列を有する細菌が優占種として存在することを明らかにし、この細菌がＤＢＮＰＡに対して顕著な抵抗性を有することを見い出した。この細菌はＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属に属しＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに分類される細菌であった。国内のある製紙工場から分離されたこの細菌の１６Ｓ ｒＤＮＡの部分塩基配列を配列表の配列番号１に示すが、本発明で述べるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓはこの部分塩基配列と９８％以上の相同性を有する塩基配列を有することで特徴づけられる細菌である。
【００１１】
なお、「Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ」の第８版にＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属は記載されているが、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの記載はない。Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓという名称は、１９９７年にＦｅｒｒｅｉｒａら（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、４７巻、４号、９３９−９４７ページ）によって提唱されたＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属の一種であり、本明細書においてもその名称を用いている。
上記Ｆｅｒｒｅｉｒａらの文献によれば、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの一般性状は次の通りである。
・グラム陽性の球菌
・４個のペアを形成する
・運動性はない
・胞子形成能はない
・最適生育温度：３０〜５５℃
・オキシダーゼ、カタラーゼが陽性
・コロニーはＢｅｒｇｅｙ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ １６２においてオレンジ色を呈する
【００１２】
本発明の抗菌処理方法では、まず抗菌剤を適用する対象系から微生物を含む試料を定期的または任意の時点で採取し、試料中に含まれる微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定する。例えば、白水、スライムなどを試料として採取し、浮遊微生物またはスライム構成微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定する。
【００１３】
Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率は、種々の公知の方法で求めることができる。例えば、次の方法により存在比率を求めることができる。
１）試料を平板培養して形成されたコロニー数に対するＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓのコロニー数から求める方法。
２）試料中の全ＤＮＡに占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ固有のＤＮＡ量を測定する方法。
３）Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列をプライマーやプローブとして、定量ＰＣＲや古典的ハイブリダイゼーションを行い、初発のＤＮＡコピー数として菌数を求める方法。
４）Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列をプローブとして、ＦＩＳＨ（フルオレセント インサイチュウ ハイブリダイゼーション）によって細胞数を求める方法。
【００１４】
前記１）の方法では、まず試料を平板培養して形成されたコロニーから複数、例えば２０〜１００個のコロニーを分離し、各コロニーの１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列を決定する。次に、この塩基配列に基づいてコロニー毎の微生物を同定し、分析したコロニーの個数に対するＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓのコロニーの数としてＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を求めることができる。この場合、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓは、１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列中に、配列表の配列番号１に示す塩基配列と９８％以上の相同性を有する塩基配列を有することで特徴づけられる細菌である。
【００１５】
塩基配列に基づいて微生物を同定するには、ＤＮＡの塩基配列と微生物との関係が蓄積されている公知の微生物系統分類のデータベース（以下、微生物検索データベースという場合がある）を利用することができ、この微生物検索データベースをパソコン等のコンピュータを用いて検索することにより微生物を同定することができる。後述する具体的な微生物検索データベースにはインターネットを介してアクセスすることができるので、迅速にデータを検索できる。後述する微生物検索データベースには、リボゾームＲＮＡ（以下、ｒＲＮＡという）をエンコードするＤＮＡ（ｒＤＮＡという）の塩基配列のデータが蓄積されているので、微生物の同定には試料から分離したｒＤＮＡの塩基配列を用いることができる。ｒＤＮＡは微生物の種類、サブユニットの大きさによって数種類に分類されるが（１６Ｓ ｒＤＮＡ、１８Ｓ ｒＤＮＡなど）、どの分子を用いても差し支えない。またｒＤＮＡだけに限定されず、ｒＲＮＡのスペーサー配列またはｇｙｒＥなど他のＤＮＡ画分を利用した方法であってもよい。したがって、どのような微生物検索データベースを用いてもよいし、どれか単一のものに統一して用いることもできる。またさらに複数の微生物検索データベースを併用することもできる。
【００１６】
前記微生物検索データベースとしては、ＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪなどの公的ＤＮＡデータベースや、ミシガン大学に設置されているＲｉｂｏｓｏｍａｌ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｐｒｏｊｅｃｔなどがあげられる。検索操作はＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ等の既存のプログラムによって短時間に効率的に行うことができる。また、ＭｉｃｒｏＳｅｑ １６Ｓ ｒＤＮＡ Ｓｅｑｕｅｎｓｅ Ｄａｔａｂａｓｅ（ＰＥバイオシステムズ社）などの商用の微生物検索データベースを、ＭｉｃｒｏＳｅｑ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＰＥバイオシステムズ社、商標）などの市販のソフトウェアにより検索することもできる。なお微生物検索データベースを自身で構築してもよい。例えば、塩基配列データから、それに対応する微生物名または微生物を区別するための微生物番号が検索できるデータベースを公知のデータベースソフトウェアなどを用いて構築し、他の微生物検索データベースと併用することもできる。
対象系から採取した試料から微生物コロニーを単離して分離株の該当ＤＮＡ配列を決定し、得られた結果を微生物検索データベースと照合して微生物を同定することができる。ｒＤＮＡは大腸菌等の宿主ベクター系を用い古典的クローニング操作によって単離・増幅することもできるが、ＰＣＲ法（ポリメラーゼ連鎖反応）などの試験管内ＤＮＡ増幅方法によって増幅させる方が簡便である。
【００１７】
前記２）の存在比率を求める方法では、対象系から採取した試料から微生物の全ＤＮＡを抽出し、特定の塩基配列をＰＣＲ増殖してＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ固有のＤＮＡ量を測定することにより、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を求めることができる。混合ｒＤＮＡから個々の微生物のｒＤＮＡを分離する方法には一般に電気泳動が用いられるが、これにはいくつかの方法が提案されている。例えば、ＤＧＧＥ法（Ｄｅｎａｔｕｒｅｄ Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｇｅｌ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ：Ｍｕｙｚｅｒら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、５９巻、６９５〜７００ページ、１９９３年）、ＴＧＧＥ法（Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｇｅｌ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ：Ｅｉｃｈｎｅｒら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、６５巻、１０２〜１０９ページ、１９９９年）、ＳＳＣＰ法（Ｓｉｎｇｌｅ Ｓｔｒａｎｄ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｓｃｈｗｉｅｇｅｒら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、６４巻、４８７０〜４８７６ページ、１９９８年）、ＴＲＦＬＰ法（Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｌｉｕら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、６３巻、４５１６〜４５２２ページ、１９９７年）、またはランダムクローニング法（Ｄｕｎｂａｒら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、６５巻、１６６２〜１６６９ぺージ、１９９９年）などが提案されている。ＤＧＧＥ法やＴＧＧＥ法で観察されるＤＮＡバンドの量がもとの微生物数を反映していると解釈されるので、ＤＮＡバンドの積算量に対するＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに該当するＤＮＡバンドの濃度の比を構成比として捉えることができる。このようなバンド濃度を測定するためには市販のデンシトメータやスキャナーに連動した画像解析装置（例えばＩｍａｇｅ Ｍａｓｔｅｒ（アマシャムファルマシアバイオテク社製、商標）など）を用いることができる。また、蛍光試薬を結合したＤＮＡプライマーを用いたり、電気泳動後の染色に蛍光物質を利用した場合は、その蛍光量をＤＮＡ量としてＦｌｕｏｒＩｍａｇｅｒ（アマシャムファルマシアバイオテク社製、商標）などの蛍光イメージアナライザーで直接測定することもできる。ランダムクローニング法であれば、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ由来のＤＮＡを保持するクローン数を計測し、全クローン数に対する割合として算出することができる。
【００１８】
前記３）の存在比率を求める方法では、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列をプライマーやプローブとして定量ＰＣＲや古典的ハイブリダイゼーションを行い、あらかじめ既知濃度の微生物細胞またはＤＮＡを標準物質として同条件で反応させることにより、試料中の初発の細胞数またはＤＮＡ量を推測することが可能である。全微生物細胞数または全ＤＮＡ量に対するこれらの比を算出することによって構成比を求めることができる。プライマーやプローブに利用できるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列としては、この細菌が特異的に保持するＤＮＡを利用することができる。また１６Ｓ ｒＤＮＡやｇｙｒＥ遺伝子など全ての微生物が保持しているＤＮＡのうち、他の微生物と比較してＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけに特異的に観察される領域を測定して利用することができる。
【００１９】
前記４）の存在比率を求める方法では、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列をプローブとしたＦＩＳＨ法によって、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの細胞だけを特異的に蛍光標識し、一定視野範囲における細胞数を顕微鏡下に直接計測し、初発の菌体濃度を推測することができる。公知の方法、例えば平板培地を用いたコロニー計数法、ＭＮＰ法、ＤＡＰＩ・アクリジンオレンジ等の蛍光物質による染色後の微生物細胞を顕微鏡下で定量計測する方法などによって計測された全微生物に対する比率としてＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの構成比を算出することができる。
【００２０】
上記のようにして測定したＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を前回、またはそれ以前の存在比率と比較し、大きな変化が認められない場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％未満の場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗性菌の増殖が認められないとして、現行の抗菌処理を継続して行う。
一方、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率に増加傾向が認められる場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％以上の場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗菌の増殖が認められるとして、抗菌剤をＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する抗菌剤に切り替えて抗菌処理を行う。
【００２１】
またＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が前回の存在比率と比較して減少傾向が認められる場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％未満に低下した場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗菌が抗菌処理されたとして、ＤＢＮＰＡなどの別の抗菌剤に切り替えて抗菌処理を行う。
またＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する抗菌剤を使用して抗菌処理しているにもかかわらず、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が前回の存在比率と比較して減少傾向が認められない場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が低下していない場合は、抗菌剤をＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する別の抗菌剤に切り替えて抗菌処理を行う。
【００２２】
本発明で使用する抗菌剤はＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有するものが制限なく使用できる。このような抗菌剤は殺菌試験および／または増殖抑制試験等によりスクリーニングすることができる。スクリーニングに使用される抗菌剤は既知のスライムコントロール剤およびその母剤が適しているが、これまでにスライムコントロール剤として使用されていない化合物や未知の素材でも差し支えない。
【００２３】
Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤としては四級アンモニウム塩系界面活性剤または無機ハロゲン系化合物を有効成分とする抗菌剤などがあげられる。具体的には、四級アンモニウム塩系界面活性剤としてはジデシルジメチルアンモニウムクロリドなどがあげられる。また無機ハロゲン系化合物としては臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを反応させて得られる化合物、好ましくは等モル反応させて得られる化合物などがあげられる。
【００２４】
本発明の抗菌処理方法では、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対する抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されているデータベース（以下、抗菌剤検索データベースという場合がある）を予め作成しておき、このデータベースを検索して抗菌剤を選定することもできる。
【００２５】
上記抗菌剤検索データベースは、少なくともＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対応した各種抗菌剤の有効濃度が蓄積され、その抗菌剤をディスプレイなどの出力装置に出力することができるものであれば、どのような形式のものでもよい。有効濃度のデータは、培養試験から得られた有効濃度、処理実績から得られた有効濃度のいずれでもよい。
抗菌剤検索データベースには前記ジデシルジメチルアンモニウムクロリドなどの四級アンモニウム塩系界面活性剤、臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる化合物などの無機ハロゲン系化合物の有効濃度は蓄積しておく。
【００２６】
有効濃度が入力されているということは、検索対象の微生物に対してその濃度で抗菌作用があることを意味するが、抗菌剤の濃度を複数設けて、その濃度における抗菌作用の有無または程度が入力されていてもよい。この場合、抗菌作用が認められる濃度において抗菌剤を抽出する。
【００２７】
抗菌剤検索データベースは、微生物の生育に及ぼす環境条件ごとに抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されており、この環境条件を検索キーとしてキーボードなどの入力装置から入力すると、指定された環境条件の中から有効濃度が蓄積されている抗菌剤を抽出するものであるのが好ましい。環境条件の具体的なものとしてはｐＨ、温度、製紙条件、基質の種類と濃度、および抗菌剤効力に影響を与える物質、例えば還元物質の濃度などがあげられる。上記製紙条件としては、抄紙の種類、抄造条件、サイズ剤、歩留向上剤、紙力向上剤など各種内添剤の種類と添加濃度、過去に使用していた抗菌剤の種類などがあげられる。なお、抗菌剤検索データベースに入力されている抗菌剤の有効濃度が培養試験から得られたデータである場合上記ｐＨ、温度などは培養条件に相当し、処理実績から得られたデータの場合上記ｐＨ、温度などは対象系の環境条件に相当する。
【００２８】
環境条件がｐＨの場合、複数のｐＨ条件における有効濃度が蓄積されているのが好ましい。例えば、ｐＨ５、ｐＨ６、ｐＨ７・・・におけるデータが蓄積されているのが好ましい。温度などの場合も、ｐＨの場合と同様に複数の条件における有効濃度が蓄積されているのが好ましい。このように有効濃度に関するデータが環境条件ごとに蓄積されている場合、例えばｐＨ６かつ温度２０℃を選定条件とし、これらを検索キーにして抗菌剤を絞り込むことができる。
【００２９】
また抗菌剤検索データベースは、対象系に使用した抗菌剤の濃度および抗菌剤使用前後のＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率、ならびに処理実績の結果を入力すると、抗菌剤使用前後のＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率の差を演算して記録し、この演算結果からＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌剤の濃度が有効であったか否かを判定して追加、蓄積および修正できるものが好ましい。このような抗菌剤検索データベースを用いることにより、より適切な抗菌剤を選定することができる。
【００３０】
また新たに、ある対象系に適用する抗菌剤を選定しようとする時に、対象系に抗菌効力を阻害したり、増大させる物質の共存がある場合は、上記抗菌剤検索データベースに集積され、過大評価または過小評価と判定されたデータ群は抗菌剤選定の重要な要素になり得るのでこれらも削除せずに集積することが好ましい。
【００３１】
本発明で使用する抗菌剤検索データベースを構築するコンピューターソフトウェアとしては、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ社製のＭｉｃｒｏｓｏｆｔ ＥｘｅｌやＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ａｃｃｅｓｓ（いずれも商標）などの市販のソフトウェアを使用できるが、これらに限定されるものではなく、目的にそったものであればどのようなものでも使用することができる。該当する各抗菌剤の効力、対象系の環境条件など、目的とする内容を検索する機能は、上記ソフトウェアに通常付随しているので、それらを利用することができ、不足するプログラムがある場合は、公知の方法を組み合わせて追加することもできる。
【００３２】
抗菌剤検索データベースを使用する場合、環境条件などを検索キーとして入力し、抗菌剤検索データベースから抗菌剤を絞り込むことができる。抽出結果はディスプレイなどの出力装置に出力させることができる。抽出された抗菌剤が１種の場合はその抗菌剤を選定し、複数の場合はその中から選定する。抽出または絞り込まれた抗菌剤の中から実際に使用する抗菌剤の選定方法は任意であり、人が選定することもできるし、コンピュータで自動的に行うこともできる。具体的な選定方法としは、例えば次のような方法などがあげられる。
【００３３】
１）Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して最も低い最小有効濃度の抗菌剤を選定する。
２）「最小有効濃度×価格」が最小となる抗菌剤を選定する。この場合、処理コストを加味した選定を行うことができる。
【００３４】
これらの選定方法は、抗菌剤検索データベースに機能の一部として組み込んでおくこともできる。
選定基準は、従来の長期にわたる経験の蓄積からとりあえず設定可能であるが、抗菌剤検索データベースのデータ集積数が少ない初期段階では、データが蓄積される度に処理成功率を目安に修正することが望ましい。
【００３５】
上記のような方法により抗菌剤を選定することにより、対象系の条件に対して最も適切な抗菌剤を短時間で、かつ的確に選定することができる。
Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率の測定は、定期的または任意の時点で繰り返して行うことができる。
【００３６】
【発明の効果】
本発明の製紙工程における抗菌処理方法は、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を指標にして抗菌処理するようにしているので、最適な抗菌剤を使用して効率よく抗菌処理することができる。
【００３７】
【発明の実施の形態】
次に本発明の抗菌処理方法を図面を用いて説明する。
図１は本発明の抗菌処理方法を適用する製紙装置の系統図であり、白水系を抗菌処理する場合の例である。
【００３８】
図１の装置において、１は抄紙機、２は種箱、３は白水ピット、４は微生物相解析系、５は抗菌剤選定系、６は制御系である。７ａ、７ｂ・・・は抗菌剤貯槽であり、抗菌剤の種類毎に複数設けられている。
【００３９】
図１の装置では次のようにして紙が製造される。すなわち、連絡路１１からパルプスラリーが種箱２で流量調整されて導入され、ポンプ１２により連絡路１３、１４を通ってスクリーン装置１５に送られ夾雑物が除かれた後、連絡路１７からインレット１８に送られる。このパルプスラリーがインレット１８から抄紙機１のワイヤー２１上に供給される。ワイヤー２１を通過した白水はセーブーオール２２で受けた後、連絡路２３から白水ピット３に集められる。白水ピット３の白水は、一部は連絡路１４中でパルプスラリーと混合され、循環使用される。残部は排水路２４から排出される。ワイヤー２１上に形成された紙層は後工程の乾燥工程（図示せず）などを経て紙製品とされる。
【００４０】
上記のような製紙装置の抗菌処理は、２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミド（ＤＢＮＰＡ）が指定された濃度となるように、抗菌剤貯槽７ａから薬注路２７ａを通して種箱２に添加されることにより行われる。添加されたＤＢＮＰＡがパルプスラリーおよび白水に溶解して製紙装置を循環することにより、装置全体が抗菌処理される。ＤＢＮＰＡの添加および濃度の調整は、目的の濃度となるように、制御系６から信号をポンプ２８ａに送り、添加量を制御することにより自動的に行うこともできる。
【００４１】
上記のようにして抗菌処理が行われている製紙装置において、白水ピット３から微生物を含む試料を採取し、微生物相解析系４で前記方法によりＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を求める。その結果に基づいて抗菌剤選定系５で抗菌剤を選定する。抗菌剤の選定は前記抗菌剤検索データベースを用いて行うこともできる。抗菌剤選定系５の結果が制御系６にインプットされ、選定された抗菌剤が指定された濃度となるように、抗菌剤貯槽７ａ、７ｂ・・・から薬注路２７ａ、２７ｂ・・・を通して種箱２に添加される。
抗菌剤選定系５において抗菌剤を選定するに際し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を前回、またはそれ以前の存在比率と比較し、大きな変化が認められない場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％未満の場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗性菌の増殖が認められないとして、ＤＢＮＰＡを添加して現行の抗菌処理を継続して行う。
【００４２】
一方、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率に増加傾向が認められる場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％以上の場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗菌の増殖が認められるとして、ＤＢＮＰＡの添加を中止し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する抗菌剤を薬注路２７ｂを通して種箱２に添加して抗菌処理を行う。
【００４３】
またＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が前回の存在比率と比較して減少傾向が認められる場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％未満に低下した場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗菌が抗菌処理されたとして、薬注路２７ａからのＤＢＮＰＡの添加を再開する。
【００４４】
またＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する抗菌剤を使用して抗菌処理しているにもかかわらず、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が前回の存在比率と比較して減少傾向が認められない場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が低下していない場合は、別の抗菌剤に切り替える。例えば、薬注路２７ｂからの抗菌剤の添加を中止し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する別の抗菌剤を薬注路２７ｃを通して種箱２に添加する。この処理結果は、データベースなどに蓄積しておく。
【００４５】
白水ピット３からの試料の採取は定期的または任意の時点で行い、続いて微生物相解析、抗菌剤の選定を行う。これにより、その時点における最も適した抗菌剤が選定され、最も効果的に抗菌処理を行うことができる。
【００４６】
図１では白水ピット３から試料を採取しているが、スクリーン装置１５、インレット１８またはセーブオール２２などから試料を採取してもよい。また図１では抗菌剤貯槽７ａ、７ｂ・・・は３個設けられているが、２個または４個以上であってもよい。
【００４７】
【実施例】
次に本発明の実施例について説明する。
【００４８】
実施例１
国内の１５箇所の製紙工場の白水系からスライムを採取した。このスライムをリン酸緩衝液に懸濁し、終濃度２０ｐｐｍのＤＢＮＰＡを添加して３０℃で３０分間インキュベーションを行い、生存菌数をＣＦＵとして計測した。またＤＢＮＰＡ無添加のブランクのＣＦＵに対する生存菌数の割合を生存率（％）として求めた。結果を表１に示す。
【００４９】
【表１】
＊１ ＤＢＮＰＡ濃度は２０ｐｐｍ（終濃度）
＊２ 生存率＝（ＤＢＮＰＡ添加系のＣＦＵ／ブランクのＣＦＵ）×１００
【００５０】
表１の結果からわかるように、１２工場から採取したスライムでは生存率は１％以下であったが、３工場（Ｄ，Ｇ，Ｍ）では１４〜４２％の生存率であった。ＤＢＮＰＡ添加系において形成されたコロニーは３工場ともその９０％以上が淡い桃色のコロニーであった。
【００５１】
上記のコロニーを工場毎に６個ずつ分離し、１６Ｓ ｒＤＮＡの部分塩基配列を決定した。その結果、各工場における分離菌株のＤＮＡ塩基配列は完全に一致した。また工場間でも９９．１〜９９．８％の相同性を示した。Ｄ工場から分離したＮｏ．１０１株の１６Ｓ ｒＤＮＡの部分塩基配列をＧｅｎＢａｎｋに登録されている既知の塩基配列と比較した結果、アクセッションナンバー「Ｙ１３０４０」で登録されているＤｅ ｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓと９９．８％の相同性を有することがわかった。
これらの結果から、白水系のＤＢＮＰＡ耐性菌はＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに分類される微生物であり、全国の白水系に分布していることがわかった。
【００５２】
実施例２
３つの製紙工場の白水系から分離したＤＢＮＰＡ抵抗性菌３株（Ｎｏ．９７株、Ｎｏ．１０１株、Ｎｏ．１２８株）を１／１０ＰＹ培地で一昼夜振とう培養した。この培養液を菌濃度１０Ｅ６〜１０Ｅ７ＣＦＵ／ｍｌとなるようにリン酸緩衝液に懸濁し、各種スライムコントロール剤に対する殺菌試験を３０℃で３０分間の条件で行った。３株ともＤＢＮＰＡに対して抵抗性が強く、９０％を殺菌するのに必要な最少濃度（ＭＫＣ）は、表２に示すように２５ｐｐｍ以上であった。しかし、ジデシルジメチルアンモニウムクロリド（以下、ＤＤＡＣと略記する）はすべての菌株に対して強い抗菌性を示し、ＭＫＣは１．２〜２．７ｐｐｍであった。また、臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる無機ハロゲン系化合物も効果が高く、ＭＫＣは残留塩素濃度換算で０．５〜５．６ｐｐｍであった。
【００５３】
【表２】
＊１ ＤＢＮＰＡ：２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミド
＊２ ＤＤＡＣ：ジデシルジメチルアンモニウムクロリド
＊３ 無機ハロゲン系化合物：臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる無機ハロゲン系化合物
＊４ ＯＰＡ：オルトフタルアルデヒド
＊５ ジチオール：４，５−ジクロロ−１，２−ジチオール−３−オン
＊６ ＤＢＮＥ：２，２−ジブロモ−２−ニトロエタノール
＊７ ＨＰＧＨＣ：２−（ｐ−ヒドロキシフェニル）グリオキシヒドロキシモイルクロリド
【００５４】
実施例３
Ｄ工場の抄紙機の白水を連続的に採取し、３００ ｌｉｔｅｒ容量のリザーバーに保持した。抄紙機の薬注期間中は持ち込みの薬剤の影響をなくすために取水を停止した。リザーバーから白水を一定流量で３連のスライムモニターに供給した。このスライムモニターは特開平９−７５０６５号に記載されたトルク式スライム試験装置、すなわち静止した外部シリンダと、この外部シリンダ内に同軸的に設置された内部シリンダとを有し、外部シリンダと内部シリンダとの間に水を流通させるとともに内部シリンダを回転させて内部シリンダ表面にスライムを成長させるようにしたスライム試験装置を並列に３個設けた装置である。それぞれのモニターカップには、次の抗菌剤をそれぞれ注入した。
第一系：ＤＢＮＰＡ、接触濃度１５ｐｐｍ
第二系：ＤＤＡＣ、接触濃度１５ｐｐｍ
第三系：臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる無機ハロゲン系化合物、接触濃度１０ｐｐｍ
【００５５】
抗菌剤の注入は１５分間×４回／日の間欠注入で行った。ローター部分に付着するスライム量をスライムモニターのトルク変化で評価した。トルクの経日変化を図２に示す。
【００５６】
図２の結果からわかるように、第一系では、開始８日目からトルクの上昇が起こり、１５日目には著量のスライムの付着が認められた。
しかし、第二および第三系では、それぞれ開始１４日目および１８日目からトルクの上昇が見られたが、どちらも上昇速度は低く、終了時（２８日目）もトルク値は低く、表面に薄いスライムが付着しているだけであった。
【００５７】
また付着したスライムの微生物相評価を行った。すなわち、スライムを緩衝液に懸濁してホモジナイズした後、寒天平板に塗布し、形成されたコロニー２４個の１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列を指標にしてコロニー毎の微生物を同定した。ＧｅｎＢａｎｋに登録されている１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列によって同定したコロニー２４個に対する各微生物のコロニーの数として各微生物の存在比率を求めた。結果を表３に示す。
【００５８】
【表３】
【００５９】
表３からわかるように、第一系ではＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ（表２のＮｏ．１２８株と同じ塩基配列を有するもの）の存在比率は４２％であったが、第二および第三系ではそれぞれ１３％および８％に低下していた。
【００６０】
実施例４
Ｐ工場の抄紙機（連続操業時間２０日、Ｋ社ＤＢＮＰＡ系抗菌剤で処理）の白水中の微生物相を約１０日間隔で測定した。白水を希釈後、寒天平板に塗布し、形成されたコロニー２４個の１６Ｓ ｒＤＮＡ塩基配列を指標にしてコロニー毎の微生物をＧｅｎＢａｎｋの塩基配列表をもとに同定した。同定したコロニー２４個に対するＤｅｉ ｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓのコロニーの数としてＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を求めた。結果を表４に示す。
【００６１】
【表４】
＊１ 処理状況：サクションボックス内の汚れを次の４段階で評価した。
１；良好
２；やや汚れている
３；汚れている
４；非常に汚れている
【００６２】
表４からわかるように、測定開始後４０日目からはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ（Ｎｏ．１０１株と同じ塩基配列を有するもの）が検出され始め、６９日目には全菌数の２１％に達し、増加の傾向が認められた。シャットダウン時のサクションボックス内の汚れも５０日目以降悪化する傾向にあり、薄いピンク色の付着物が見られた。
【００６３】
抗菌剤検索データベースで「最小有効濃度×価格」が最小となる抗菌剤を検索したところ、無機ハロゲン系化合物が選定された。そこで８０日目から注入抗菌剤を臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる無機ハロゲン系化合物に換えて運転した。その結果、シャットダウン時の汚れは低減し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率も次第に低下し、１０８日目から観察されなくなった。
【００６４】
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の抗菌処理方法を適用する製紙装置の系統図である。
【図２】実施例３の結果を示すグラフである。
【符号の説明】
１ 抄紙機
２ 種箱
３ 白水ピット
４ 微生物相解析系
５ 抗菌剤選定系
６ 制御系
７ａ、７ｂ・・・ 抗菌剤貯槽
１１、１３、１４、１７、２３ 連絡路
１２ ポンプ
１５ スクリーン装置
１８ インレット
２１ ワイヤー
２２ セーブーオール
２４ 排水路
２７ａ、２７ｂ・・・ 薬注路
２８ａ、２８ｂ・・・ ポンプ
【発明の属する技術分野】
本発明は製紙工程における抗菌処理方法に関し、特に２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミド（以下、ＤＢＮＰＡと略記する場合がある）抵抗性微生物の増殖を的確に判定し、この微生物に最適な抗菌剤を使用して抗菌処理する製紙工程における抗菌処理方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
抗菌処理の対象系において同じスライムコントロール剤を使用し続けていると、この薬剤に対して抵抗性を有する微生物が生育するようになり、ついには対象系内の優占微生物が抵抗性菌に遷移し、薬剤の効果が低減する場合がある。製紙工場では２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミド（ＤＢＮＰＡ）を主成分とする抗菌剤が広く使用されており、このＤＢＮＰＡ抵抗性微生物に対する対処が課題となっている。
【０００３】
従来、抵抗性微生物に対する対処は主に経験的判断によって行われている。例えば、ある抗菌剤Ａで処理が行われている抄紙機において、操業時またはシャットダウン時に汚染が観察されたり、または薬注直後の白水中の殺菌率が低下した場合、抵抗性微生物の発生により抗菌剤Ａが有効に作用していないと判断し、別の抗菌剤Ｂに代替する方法が採られている。この場合、代替抗菌剤Ｂの選定は抄紙機からスライムまたは白水を採取し、各種抗菌剤の殺菌試験および増殖抑制試験を行い、その結果から判断されている。
【０００４】
このような方法は経験的判断によるもので主観的であり、本当に抵抗性微生物の発生による汚染であるかどうかを明確にすることはできない。また汚染の度に殺菌試験および増殖抑制試験を繰り返して行って代替抗菌剤を選定する必要があるので、時間と手間がかかっている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、製紙工程中に存在する中心的なＤＢＮＰＡ抵抗性微生物の増殖を的確に判定することができ、この微生物に対する抗菌剤を経験的判断に頼ることなく、かつ殺菌試験および増殖抑制試験を省略して的確に選定し、これにより最適な抗菌剤を使用して効率よく抗菌処理することができる製紙工程における抗菌処理方法を提案することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は次の製紙工程における抗菌処理方法である。
（１） 製紙工程で発生する微生物を抗菌剤により抗菌処理する方法において、
抗菌剤を適用している対象系から、定期的または任意の時点で、微生物を含む試料を採取し、この試料中の微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定し、このＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率に増加傾向が認められる場合、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤を使用する
製紙工程における抗菌処理方法。
（２） 製紙工程で発生する微生物を抗菌剤により抗菌処理する方法において、
抗菌剤を適用する対象系から微生物を含む試料を採取し、この試料中の微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定し、このＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％以上である場合、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤を使用する
製紙工程における抗菌処理方法。
（３） Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓが、その１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列中に、配列表の配列番号１に示す塩基配列と９８％以上の相同性を有する塩基配列を有する細菌である上記（１）または（２）記載の抗菌処理方法。
（４） 対象系が、２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミドを主成分とする抗菌剤を用いて抗菌処理を行っている処理系である上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の抗菌処理方法。
（５） Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤が四級アンモニウム塩系界面活性剤または無機ハロゲン系化合物を有効成分とする抗菌剤である上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の抗菌処理方法。
（６） 四級アンモニウム塩系界面活性剤がジデシルジメチルアンモニウムクロリドである上記（５）記載の抗菌処理方法。
（７） 無機ハロゲン系化合物が臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを反応させて得られる化合物である上記（５）記載の抗菌処理方法。
（８） Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤は、それを選定する際、少なくともＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対する抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されているデータベースを検索し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して有効濃度が入力されている抗菌剤を抽出し、この中から選定する上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の抗菌処理方法。
（９） データベースは、微生物の生育に及ぼす環境条件ごとに抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されており、指定された環境条件の中から抗菌剤を抽出するものである上記（８）記載の抗菌処理方法。
（１０） データベースには、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対する抗菌剤としてジデシルジメチルアンモニウムクロリド、および無機ハロゲン系化合物が臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを反応させて得られる化合物の有効濃度のデータが少なくとも蓄積されている上記（８）または（９）記載の抗菌処理方法。
【０００７】
本明細書において、「微生物」は細菌、酵母、糸状菌（カビ）、藻類およびアーキア（古細菌）等を含む。
また「抗菌剤」は上記微生物に対する殺生物作用および／または増殖抑制作用を有する薬剤を意味し、一般に抗菌剤、殺菌剤、静菌剤、抑制剤、スライムコントロール剤、防腐剤などと称されているものが含まれる。
また「抗菌」は上記微生物を死滅させることおよび／または増殖を抑制することを意味する。
【０００８】
また「微生物相」は対象系または試料中の個々の微生物の種類と構成比および含有量（微生物数または微生物量の割合）を示す意味で用いられているが、優占微生物の種類と構成比および含有量、または特定微生物の種類と構成比および含有量を示す意味で用いられる場合もある。
また「処理実績の結果」および「処理効果」はともに対象系に抗菌剤を使用した場合の効果を意味する。この効果は、例えばスライムコントロール剤の場合、一定期間内におけるスライム成長量（微生物量でもスライム厚さでも可）の差で表してもよい。ある一定の成長量に達するまでの期間で表してもよい。またスライムが対象系で発生することによって生じる障害内容の程度によって示すことも含まれる。
【０００９】
本発明の抗菌処理方法が適用できる対象系は、紙を製造する製紙工程において抗菌剤を使用して抗菌処理する処理系であれば特に制限されない。製紙工程は、通常、パルプに填料や薬品を添加して紙の原料をつくる調成工程、抄紙機で紙を抄く抄紙工程、および紙の表面を塗料等で覆って印刷適性をよくする塗工工程などの工程にさらに分類されるが、このいずれの工程でもよい。具体的には、白水の抗菌処理などがあげられる。
【００１０】
製紙工場ではＤＢＮＰＡを主成分とするスライムコントロール剤を使用して抗菌処理が広く行われているが、このような系でどのようなＤＢＮＰＡ抵抗性微生物が生息しているか、従来知られていなかった。発明者はＤＢＮＰＡを主成分とする抗菌剤を使用している製紙工程中の微生物を調査した結果、ＤＢＮＰＡに対して抵抗性を有するスライムには、特定の１６Ｓ ｒＤＮＡ塩基配列を有する細菌が優占種として存在することを明らかにし、この細菌がＤＢＮＰＡに対して顕著な抵抗性を有することを見い出した。この細菌はＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属に属しＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに分類される細菌であった。国内のある製紙工場から分離されたこの細菌の１６Ｓ ｒＤＮＡの部分塩基配列を配列表の配列番号１に示すが、本発明で述べるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓはこの部分塩基配列と９８％以上の相同性を有する塩基配列を有することで特徴づけられる細菌である。
【００１１】
なお、「Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ」の第８版にＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属は記載されているが、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの記載はない。Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓという名称は、１９９７年にＦｅｒｒｅｉｒａら（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、４７巻、４号、９３９−９４７ページ）によって提唱されたＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属の一種であり、本明細書においてもその名称を用いている。
上記Ｆｅｒｒｅｉｒａらの文献によれば、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの一般性状は次の通りである。
・グラム陽性の球菌
・４個のペアを形成する
・運動性はない
・胞子形成能はない
・最適生育温度：３０〜５５℃
・オキシダーゼ、カタラーゼが陽性
・コロニーはＢｅｒｇｅｙ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ １６２においてオレンジ色を呈する
【００１２】
本発明の抗菌処理方法では、まず抗菌剤を適用する対象系から微生物を含む試料を定期的または任意の時点で採取し、試料中に含まれる微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定する。例えば、白水、スライムなどを試料として採取し、浮遊微生物またはスライム構成微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定する。
【００１３】
Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率は、種々の公知の方法で求めることができる。例えば、次の方法により存在比率を求めることができる。
１）試料を平板培養して形成されたコロニー数に対するＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓのコロニー数から求める方法。
２）試料中の全ＤＮＡに占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ固有のＤＮＡ量を測定する方法。
３）Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列をプライマーやプローブとして、定量ＰＣＲや古典的ハイブリダイゼーションを行い、初発のＤＮＡコピー数として菌数を求める方法。
４）Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列をプローブとして、ＦＩＳＨ（フルオレセント インサイチュウ ハイブリダイゼーション）によって細胞数を求める方法。
【００１４】
前記１）の方法では、まず試料を平板培養して形成されたコロニーから複数、例えば２０〜１００個のコロニーを分離し、各コロニーの１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列を決定する。次に、この塩基配列に基づいてコロニー毎の微生物を同定し、分析したコロニーの個数に対するＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓのコロニーの数としてＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を求めることができる。この場合、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓは、１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列中に、配列表の配列番号１に示す塩基配列と９８％以上の相同性を有する塩基配列を有することで特徴づけられる細菌である。
【００１５】
塩基配列に基づいて微生物を同定するには、ＤＮＡの塩基配列と微生物との関係が蓄積されている公知の微生物系統分類のデータベース（以下、微生物検索データベースという場合がある）を利用することができ、この微生物検索データベースをパソコン等のコンピュータを用いて検索することにより微生物を同定することができる。後述する具体的な微生物検索データベースにはインターネットを介してアクセスすることができるので、迅速にデータを検索できる。後述する微生物検索データベースには、リボゾームＲＮＡ（以下、ｒＲＮＡという）をエンコードするＤＮＡ（ｒＤＮＡという）の塩基配列のデータが蓄積されているので、微生物の同定には試料から分離したｒＤＮＡの塩基配列を用いることができる。ｒＤＮＡは微生物の種類、サブユニットの大きさによって数種類に分類されるが（１６Ｓ ｒＤＮＡ、１８Ｓ ｒＤＮＡなど）、どの分子を用いても差し支えない。またｒＤＮＡだけに限定されず、ｒＲＮＡのスペーサー配列またはｇｙｒＥなど他のＤＮＡ画分を利用した方法であってもよい。したがって、どのような微生物検索データベースを用いてもよいし、どれか単一のものに統一して用いることもできる。またさらに複数の微生物検索データベースを併用することもできる。
【００１６】
前記微生物検索データベースとしては、ＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪなどの公的ＤＮＡデータベースや、ミシガン大学に設置されているＲｉｂｏｓｏｍａｌ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｐｒｏｊｅｃｔなどがあげられる。検索操作はＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ等の既存のプログラムによって短時間に効率的に行うことができる。また、ＭｉｃｒｏＳｅｑ １６Ｓ ｒＤＮＡ Ｓｅｑｕｅｎｓｅ Ｄａｔａｂａｓｅ（ＰＥバイオシステムズ社）などの商用の微生物検索データベースを、ＭｉｃｒｏＳｅｑ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＰＥバイオシステムズ社、商標）などの市販のソフトウェアにより検索することもできる。なお微生物検索データベースを自身で構築してもよい。例えば、塩基配列データから、それに対応する微生物名または微生物を区別するための微生物番号が検索できるデータベースを公知のデータベースソフトウェアなどを用いて構築し、他の微生物検索データベースと併用することもできる。
対象系から採取した試料から微生物コロニーを単離して分離株の該当ＤＮＡ配列を決定し、得られた結果を微生物検索データベースと照合して微生物を同定することができる。ｒＤＮＡは大腸菌等の宿主ベクター系を用い古典的クローニング操作によって単離・増幅することもできるが、ＰＣＲ法（ポリメラーゼ連鎖反応）などの試験管内ＤＮＡ増幅方法によって増幅させる方が簡便である。
【００１７】
前記２）の存在比率を求める方法では、対象系から採取した試料から微生物の全ＤＮＡを抽出し、特定の塩基配列をＰＣＲ増殖してＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ固有のＤＮＡ量を測定することにより、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を求めることができる。混合ｒＤＮＡから個々の微生物のｒＤＮＡを分離する方法には一般に電気泳動が用いられるが、これにはいくつかの方法が提案されている。例えば、ＤＧＧＥ法（Ｄｅｎａｔｕｒｅｄ Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｇｅｌ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ：Ｍｕｙｚｅｒら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、５９巻、６９５〜７００ページ、１９９３年）、ＴＧＧＥ法（Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ｇｒａｄｉｅｎｔ Ｇｅｌ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ：Ｅｉｃｈｎｅｒら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、６５巻、１０２〜１０９ページ、１９９９年）、ＳＳＣＰ法（Ｓｉｎｇｌｅ Ｓｔｒａｎｄ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｓｃｈｗｉｅｇｅｒら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、６４巻、４８７０〜４８７６ページ、１９９８年）、ＴＲＦＬＰ法（Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｌｉｕら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、６３巻、４５１６〜４５２２ページ、１９９７年）、またはランダムクローニング法（Ｄｕｎｂａｒら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ誌、６５巻、１６６２〜１６６９ぺージ、１９９９年）などが提案されている。ＤＧＧＥ法やＴＧＧＥ法で観察されるＤＮＡバンドの量がもとの微生物数を反映していると解釈されるので、ＤＮＡバンドの積算量に対するＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに該当するＤＮＡバンドの濃度の比を構成比として捉えることができる。このようなバンド濃度を測定するためには市販のデンシトメータやスキャナーに連動した画像解析装置（例えばＩｍａｇｅ Ｍａｓｔｅｒ（アマシャムファルマシアバイオテク社製、商標）など）を用いることができる。また、蛍光試薬を結合したＤＮＡプライマーを用いたり、電気泳動後の染色に蛍光物質を利用した場合は、その蛍光量をＤＮＡ量としてＦｌｕｏｒＩｍａｇｅｒ（アマシャムファルマシアバイオテク社製、商標）などの蛍光イメージアナライザーで直接測定することもできる。ランダムクローニング法であれば、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ由来のＤＮＡを保持するクローン数を計測し、全クローン数に対する割合として算出することができる。
【００１８】
前記３）の存在比率を求める方法では、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列をプライマーやプローブとして定量ＰＣＲや古典的ハイブリダイゼーションを行い、あらかじめ既知濃度の微生物細胞またはＤＮＡを標準物質として同条件で反応させることにより、試料中の初発の細胞数またはＤＮＡ量を推測することが可能である。全微生物細胞数または全ＤＮＡ量に対するこれらの比を算出することによって構成比を求めることができる。プライマーやプローブに利用できるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列としては、この細菌が特異的に保持するＤＮＡを利用することができる。また１６Ｓ ｒＤＮＡやｇｙｒＥ遺伝子など全ての微生物が保持しているＤＮＡのうち、他の微生物と比較してＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけに特異的に観察される領域を測定して利用することができる。
【００１９】
前記４）の存在比率を求める方法では、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓだけが有する特定のＤＮＡ塩基配列をプローブとしたＦＩＳＨ法によって、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの細胞だけを特異的に蛍光標識し、一定視野範囲における細胞数を顕微鏡下に直接計測し、初発の菌体濃度を推測することができる。公知の方法、例えば平板培地を用いたコロニー計数法、ＭＮＰ法、ＤＡＰＩ・アクリジンオレンジ等の蛍光物質による染色後の微生物細胞を顕微鏡下で定量計測する方法などによって計測された全微生物に対する比率としてＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの構成比を算出することができる。
【００２０】
上記のようにして測定したＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を前回、またはそれ以前の存在比率と比較し、大きな変化が認められない場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％未満の場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗性菌の増殖が認められないとして、現行の抗菌処理を継続して行う。
一方、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率に増加傾向が認められる場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％以上の場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗菌の増殖が認められるとして、抗菌剤をＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する抗菌剤に切り替えて抗菌処理を行う。
【００２１】
またＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が前回の存在比率と比較して減少傾向が認められる場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％未満に低下した場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗菌が抗菌処理されたとして、ＤＢＮＰＡなどの別の抗菌剤に切り替えて抗菌処理を行う。
またＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する抗菌剤を使用して抗菌処理しているにもかかわらず、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が前回の存在比率と比較して減少傾向が認められない場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が低下していない場合は、抗菌剤をＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する別の抗菌剤に切り替えて抗菌処理を行う。
【００２２】
本発明で使用する抗菌剤はＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有するものが制限なく使用できる。このような抗菌剤は殺菌試験および／または増殖抑制試験等によりスクリーニングすることができる。スクリーニングに使用される抗菌剤は既知のスライムコントロール剤およびその母剤が適しているが、これまでにスライムコントロール剤として使用されていない化合物や未知の素材でも差し支えない。
【００２３】
Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤としては四級アンモニウム塩系界面活性剤または無機ハロゲン系化合物を有効成分とする抗菌剤などがあげられる。具体的には、四級アンモニウム塩系界面活性剤としてはジデシルジメチルアンモニウムクロリドなどがあげられる。また無機ハロゲン系化合物としては臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを反応させて得られる化合物、好ましくは等モル反応させて得られる化合物などがあげられる。
【００２４】
本発明の抗菌処理方法では、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対する抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されているデータベース（以下、抗菌剤検索データベースという場合がある）を予め作成しておき、このデータベースを検索して抗菌剤を選定することもできる。
【００２５】
上記抗菌剤検索データベースは、少なくともＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対応した各種抗菌剤の有効濃度が蓄積され、その抗菌剤をディスプレイなどの出力装置に出力することができるものであれば、どのような形式のものでもよい。有効濃度のデータは、培養試験から得られた有効濃度、処理実績から得られた有効濃度のいずれでもよい。
抗菌剤検索データベースには前記ジデシルジメチルアンモニウムクロリドなどの四級アンモニウム塩系界面活性剤、臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる化合物などの無機ハロゲン系化合物の有効濃度は蓄積しておく。
【００２６】
有効濃度が入力されているということは、検索対象の微生物に対してその濃度で抗菌作用があることを意味するが、抗菌剤の濃度を複数設けて、その濃度における抗菌作用の有無または程度が入力されていてもよい。この場合、抗菌作用が認められる濃度において抗菌剤を抽出する。
【００２７】
抗菌剤検索データベースは、微生物の生育に及ぼす環境条件ごとに抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されており、この環境条件を検索キーとしてキーボードなどの入力装置から入力すると、指定された環境条件の中から有効濃度が蓄積されている抗菌剤を抽出するものであるのが好ましい。環境条件の具体的なものとしてはｐＨ、温度、製紙条件、基質の種類と濃度、および抗菌剤効力に影響を与える物質、例えば還元物質の濃度などがあげられる。上記製紙条件としては、抄紙の種類、抄造条件、サイズ剤、歩留向上剤、紙力向上剤など各種内添剤の種類と添加濃度、過去に使用していた抗菌剤の種類などがあげられる。なお、抗菌剤検索データベースに入力されている抗菌剤の有効濃度が培養試験から得られたデータである場合上記ｐＨ、温度などは培養条件に相当し、処理実績から得られたデータの場合上記ｐＨ、温度などは対象系の環境条件に相当する。
【００２８】
環境条件がｐＨの場合、複数のｐＨ条件における有効濃度が蓄積されているのが好ましい。例えば、ｐＨ５、ｐＨ６、ｐＨ７・・・におけるデータが蓄積されているのが好ましい。温度などの場合も、ｐＨの場合と同様に複数の条件における有効濃度が蓄積されているのが好ましい。このように有効濃度に関するデータが環境条件ごとに蓄積されている場合、例えばｐＨ６かつ温度２０℃を選定条件とし、これらを検索キーにして抗菌剤を絞り込むことができる。
【００２９】
また抗菌剤検索データベースは、対象系に使用した抗菌剤の濃度および抗菌剤使用前後のＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率、ならびに処理実績の結果を入力すると、抗菌剤使用前後のＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率の差を演算して記録し、この演算結果からＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌剤の濃度が有効であったか否かを判定して追加、蓄積および修正できるものが好ましい。このような抗菌剤検索データベースを用いることにより、より適切な抗菌剤を選定することができる。
【００３０】
また新たに、ある対象系に適用する抗菌剤を選定しようとする時に、対象系に抗菌効力を阻害したり、増大させる物質の共存がある場合は、上記抗菌剤検索データベースに集積され、過大評価または過小評価と判定されたデータ群は抗菌剤選定の重要な要素になり得るのでこれらも削除せずに集積することが好ましい。
【００３１】
本発明で使用する抗菌剤検索データベースを構築するコンピューターソフトウェアとしては、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ社製のＭｉｃｒｏｓｏｆｔ ＥｘｅｌやＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ａｃｃｅｓｓ（いずれも商標）などの市販のソフトウェアを使用できるが、これらに限定されるものではなく、目的にそったものであればどのようなものでも使用することができる。該当する各抗菌剤の効力、対象系の環境条件など、目的とする内容を検索する機能は、上記ソフトウェアに通常付随しているので、それらを利用することができ、不足するプログラムがある場合は、公知の方法を組み合わせて追加することもできる。
【００３２】
抗菌剤検索データベースを使用する場合、環境条件などを検索キーとして入力し、抗菌剤検索データベースから抗菌剤を絞り込むことができる。抽出結果はディスプレイなどの出力装置に出力させることができる。抽出された抗菌剤が１種の場合はその抗菌剤を選定し、複数の場合はその中から選定する。抽出または絞り込まれた抗菌剤の中から実際に使用する抗菌剤の選定方法は任意であり、人が選定することもできるし、コンピュータで自動的に行うこともできる。具体的な選定方法としは、例えば次のような方法などがあげられる。
【００３３】
１）Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して最も低い最小有効濃度の抗菌剤を選定する。
２）「最小有効濃度×価格」が最小となる抗菌剤を選定する。この場合、処理コストを加味した選定を行うことができる。
【００３４】
これらの選定方法は、抗菌剤検索データベースに機能の一部として組み込んでおくこともできる。
選定基準は、従来の長期にわたる経験の蓄積からとりあえず設定可能であるが、抗菌剤検索データベースのデータ集積数が少ない初期段階では、データが蓄積される度に処理成功率を目安に修正することが望ましい。
【００３５】
上記のような方法により抗菌剤を選定することにより、対象系の条件に対して最も適切な抗菌剤を短時間で、かつ的確に選定することができる。
Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率の測定は、定期的または任意の時点で繰り返して行うことができる。
【００３６】
【発明の効果】
本発明の製紙工程における抗菌処理方法は、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を指標にして抗菌処理するようにしているので、最適な抗菌剤を使用して効率よく抗菌処理することができる。
【００３７】
【発明の実施の形態】
次に本発明の抗菌処理方法を図面を用いて説明する。
図１は本発明の抗菌処理方法を適用する製紙装置の系統図であり、白水系を抗菌処理する場合の例である。
【００３８】
図１の装置において、１は抄紙機、２は種箱、３は白水ピット、４は微生物相解析系、５は抗菌剤選定系、６は制御系である。７ａ、７ｂ・・・は抗菌剤貯槽であり、抗菌剤の種類毎に複数設けられている。
【００３９】
図１の装置では次のようにして紙が製造される。すなわち、連絡路１１からパルプスラリーが種箱２で流量調整されて導入され、ポンプ１２により連絡路１３、１４を通ってスクリーン装置１５に送られ夾雑物が除かれた後、連絡路１７からインレット１８に送られる。このパルプスラリーがインレット１８から抄紙機１のワイヤー２１上に供給される。ワイヤー２１を通過した白水はセーブーオール２２で受けた後、連絡路２３から白水ピット３に集められる。白水ピット３の白水は、一部は連絡路１４中でパルプスラリーと混合され、循環使用される。残部は排水路２４から排出される。ワイヤー２１上に形成された紙層は後工程の乾燥工程（図示せず）などを経て紙製品とされる。
【００４０】
上記のような製紙装置の抗菌処理は、２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミド（ＤＢＮＰＡ）が指定された濃度となるように、抗菌剤貯槽７ａから薬注路２７ａを通して種箱２に添加されることにより行われる。添加されたＤＢＮＰＡがパルプスラリーおよび白水に溶解して製紙装置を循環することにより、装置全体が抗菌処理される。ＤＢＮＰＡの添加および濃度の調整は、目的の濃度となるように、制御系６から信号をポンプ２８ａに送り、添加量を制御することにより自動的に行うこともできる。
【００４１】
上記のようにして抗菌処理が行われている製紙装置において、白水ピット３から微生物を含む試料を採取し、微生物相解析系４で前記方法によりＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を求める。その結果に基づいて抗菌剤選定系５で抗菌剤を選定する。抗菌剤の選定は前記抗菌剤検索データベースを用いて行うこともできる。抗菌剤選定系５の結果が制御系６にインプットされ、選定された抗菌剤が指定された濃度となるように、抗菌剤貯槽７ａ、７ｂ・・・から薬注路２７ａ、２７ｂ・・・を通して種箱２に添加される。
抗菌剤選定系５において抗菌剤を選定するに際し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を前回、またはそれ以前の存在比率と比較し、大きな変化が認められない場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％未満の場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗性菌の増殖が認められないとして、ＤＢＮＰＡを添加して現行の抗菌処理を継続して行う。
【００４２】
一方、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率に増加傾向が認められる場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％以上の場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗菌の増殖が認められるとして、ＤＢＮＰＡの添加を中止し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する抗菌剤を薬注路２７ｂを通して種箱２に添加して抗菌処理を行う。
【００４３】
またＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が前回の存在比率と比較して減少傾向が認められる場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％未満に低下した場合は、ＤＢＮＰＡ抵抗菌が抗菌処理されたとして、薬注路２７ａからのＤＢＮＰＡの添加を再開する。
【００４４】
またＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する抗菌剤を使用して抗菌処理しているにもかかわらず、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が前回の存在比率と比較して減少傾向が認められない場合、あるいはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が低下していない場合は、別の抗菌剤に切り替える。例えば、薬注路２７ｂからの抗菌剤の添加を中止し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに抗菌作用を有する別の抗菌剤を薬注路２７ｃを通して種箱２に添加する。この処理結果は、データベースなどに蓄積しておく。
【００４５】
白水ピット３からの試料の採取は定期的または任意の時点で行い、続いて微生物相解析、抗菌剤の選定を行う。これにより、その時点における最も適した抗菌剤が選定され、最も効果的に抗菌処理を行うことができる。
【００４６】
図１では白水ピット３から試料を採取しているが、スクリーン装置１５、インレット１８またはセーブオール２２などから試料を採取してもよい。また図１では抗菌剤貯槽７ａ、７ｂ・・・は３個設けられているが、２個または４個以上であってもよい。
【００４７】
【実施例】
次に本発明の実施例について説明する。
【００４８】
実施例１
国内の１５箇所の製紙工場の白水系からスライムを採取した。このスライムをリン酸緩衝液に懸濁し、終濃度２０ｐｐｍのＤＢＮＰＡを添加して３０℃で３０分間インキュベーションを行い、生存菌数をＣＦＵとして計測した。またＤＢＮＰＡ無添加のブランクのＣＦＵに対する生存菌数の割合を生存率（％）として求めた。結果を表１に示す。
【００４９】
【表１】
＊２ 生存率＝（ＤＢＮＰＡ添加系のＣＦＵ／ブランクのＣＦＵ）×１００
【００５０】
表１の結果からわかるように、１２工場から採取したスライムでは生存率は１％以下であったが、３工場（Ｄ，Ｇ，Ｍ）では１４〜４２％の生存率であった。ＤＢＮＰＡ添加系において形成されたコロニーは３工場ともその９０％以上が淡い桃色のコロニーであった。
【００５１】
上記のコロニーを工場毎に６個ずつ分離し、１６Ｓ ｒＤＮＡの部分塩基配列を決定した。その結果、各工場における分離菌株のＤＮＡ塩基配列は完全に一致した。また工場間でも９９．１〜９９．８％の相同性を示した。Ｄ工場から分離したＮｏ．１０１株の１６Ｓ ｒＤＮＡの部分塩基配列をＧｅｎＢａｎｋに登録されている既知の塩基配列と比較した結果、アクセッションナンバー「Ｙ１３０４０」で登録されているＤｅ ｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓと９９．８％の相同性を有することがわかった。
これらの結果から、白水系のＤＢＮＰＡ耐性菌はＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに分類される微生物であり、全国の白水系に分布していることがわかった。
【００５２】
実施例２
３つの製紙工場の白水系から分離したＤＢＮＰＡ抵抗性菌３株（Ｎｏ．９７株、Ｎｏ．１０１株、Ｎｏ．１２８株）を１／１０ＰＹ培地で一昼夜振とう培養した。この培養液を菌濃度１０Ｅ６〜１０Ｅ７ＣＦＵ／ｍｌとなるようにリン酸緩衝液に懸濁し、各種スライムコントロール剤に対する殺菌試験を３０℃で３０分間の条件で行った。３株ともＤＢＮＰＡに対して抵抗性が強く、９０％を殺菌するのに必要な最少濃度（ＭＫＣ）は、表２に示すように２５ｐｐｍ以上であった。しかし、ジデシルジメチルアンモニウムクロリド（以下、ＤＤＡＣと略記する）はすべての菌株に対して強い抗菌性を示し、ＭＫＣは１．２〜２．７ｐｐｍであった。また、臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる無機ハロゲン系化合物も効果が高く、ＭＫＣは残留塩素濃度換算で０．５〜５．６ｐｐｍであった。
【００５３】
【表２】
＊２ ＤＤＡＣ：ジデシルジメチルアンモニウムクロリド
＊３ 無機ハロゲン系化合物：臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる無機ハロゲン系化合物
＊４ ＯＰＡ：オルトフタルアルデヒド
＊５ ジチオール：４，５−ジクロロ−１，２−ジチオール−３−オン
＊６ ＤＢＮＥ：２，２−ジブロモ−２−ニトロエタノール
＊７ ＨＰＧＨＣ：２−（ｐ−ヒドロキシフェニル）グリオキシヒドロキシモイルクロリド
【００５４】
実施例３
Ｄ工場の抄紙機の白水を連続的に採取し、３００ ｌｉｔｅｒ容量のリザーバーに保持した。抄紙機の薬注期間中は持ち込みの薬剤の影響をなくすために取水を停止した。リザーバーから白水を一定流量で３連のスライムモニターに供給した。このスライムモニターは特開平９−７５０６５号に記載されたトルク式スライム試験装置、すなわち静止した外部シリンダと、この外部シリンダ内に同軸的に設置された内部シリンダとを有し、外部シリンダと内部シリンダとの間に水を流通させるとともに内部シリンダを回転させて内部シリンダ表面にスライムを成長させるようにしたスライム試験装置を並列に３個設けた装置である。それぞれのモニターカップには、次の抗菌剤をそれぞれ注入した。
第一系：ＤＢＮＰＡ、接触濃度１５ｐｐｍ
第二系：ＤＤＡＣ、接触濃度１５ｐｐｍ
第三系：臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる無機ハロゲン系化合物、接触濃度１０ｐｐｍ
【００５５】
抗菌剤の注入は１５分間×４回／日の間欠注入で行った。ローター部分に付着するスライム量をスライムモニターのトルク変化で評価した。トルクの経日変化を図２に示す。
【００５６】
図２の結果からわかるように、第一系では、開始８日目からトルクの上昇が起こり、１５日目には著量のスライムの付着が認められた。
しかし、第二および第三系では、それぞれ開始１４日目および１８日目からトルクの上昇が見られたが、どちらも上昇速度は低く、終了時（２８日目）もトルク値は低く、表面に薄いスライムが付着しているだけであった。
【００５７】
また付着したスライムの微生物相評価を行った。すなわち、スライムを緩衝液に懸濁してホモジナイズした後、寒天平板に塗布し、形成されたコロニー２４個の１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列を指標にしてコロニー毎の微生物を同定した。ＧｅｎＢａｎｋに登録されている１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列によって同定したコロニー２４個に対する各微生物のコロニーの数として各微生物の存在比率を求めた。結果を表３に示す。
【００５８】
【表３】
表３からわかるように、第一系ではＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ（表２のＮｏ．１２８株と同じ塩基配列を有するもの）の存在比率は４２％であったが、第二および第三系ではそれぞれ１３％および８％に低下していた。
【００６０】
実施例４
Ｐ工場の抄紙機（連続操業時間２０日、Ｋ社ＤＢＮＰＡ系抗菌剤で処理）の白水中の微生物相を約１０日間隔で測定した。白水を希釈後、寒天平板に塗布し、形成されたコロニー２４個の１６Ｓ ｒＤＮＡ塩基配列を指標にしてコロニー毎の微生物をＧｅｎＢａｎｋの塩基配列表をもとに同定した。同定したコロニー２４個に対するＤｅｉ ｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓのコロニーの数としてＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を求めた。結果を表４に示す。
【００６１】
【表４】
１；良好
２；やや汚れている
３；汚れている
４；非常に汚れている
【００６２】
表４からわかるように、測定開始後４０日目からはＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ（Ｎｏ．１０１株と同じ塩基配列を有するもの）が検出され始め、６９日目には全菌数の２１％に達し、増加の傾向が認められた。シャットダウン時のサクションボックス内の汚れも５０日目以降悪化する傾向にあり、薄いピンク色の付着物が見られた。
【００６３】
抗菌剤検索データベースで「最小有効濃度×価格」が最小となる抗菌剤を検索したところ、無機ハロゲン系化合物が選定された。そこで８０日目から注入抗菌剤を臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを等モル反応させて得られる無機ハロゲン系化合物に換えて運転した。その結果、シャットダウン時の汚れは低減し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率も次第に低下し、１０８日目から観察されなくなった。
【００６４】
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の抗菌処理方法を適用する製紙装置の系統図である。
【図２】実施例３の結果を示すグラフである。
【符号の説明】
１ 抄紙機
２ 種箱
３ 白水ピット
４ 微生物相解析系
５ 抗菌剤選定系
６ 制御系
７ａ、７ｂ・・・ 抗菌剤貯槽
１１、１３、１４、１７、２３ 連絡路
１２ ポンプ
１５ スクリーン装置
１８ インレット
２１ ワイヤー
２２ セーブーオール
２４ 排水路
２７ａ、２７ｂ・・・ 薬注路
２８ａ、２８ｂ・・・ ポンプ
Claims (10)
- 製紙工程で発生する微生物を抗菌剤により抗菌処理する方法において、
抗菌剤を適用している対象系から、定期的または任意の時点で、微生物を含む試料を採取し、この試料中の微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定し、このＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率に増加傾向が認められる場合、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤を使用する
製紙工程における抗菌処理方法。 - 製紙工程で発生する微生物を抗菌剤により抗菌処理する方法において、
抗菌剤を適用する対象系から微生物を含む試料を採取し、この試料中の微生物に占めるＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率を測定し、このＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓの存在比率が５％以上である場合、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤を使用する
製紙工程における抗菌処理方法。 - Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓが、その１６Ｓ ｒＤＮＡの塩基配列中に、配列表の配列番号１に示す塩基配列と９８％以上の相同性を有する塩基配列を有する細菌である請求項１または２記載の抗菌処理方法。
- 対象系が、２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミドを主成分とする抗菌剤を用いて抗菌処理を行っている処理系である請求項１ないし３のいずれかに記載の抗菌処理方法。
- Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤が四級アンモニウム塩系界面活性剤または無機ハロゲン系化合物を有効成分とする抗菌剤である請求項１ないし４のいずれかに記載の抗菌処理方法。
- 四級アンモニウム塩系界面活性剤がジデシルジメチルアンモニウムクロリドである請求項５記載の抗菌処理方法。
- 無機ハロゲン系化合物が臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを反応させて得られる化合物である請求項５記載の抗菌処理方法。
- Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して抗菌作用を有する抗菌剤は、それを選定する際、少なくともＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対する抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されているデータベースを検索し、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対して有効濃度が入力されている抗菌剤を抽出し、この中から選定する請求項１ないし４のいずれかに記載の抗菌処理方法。
- データベースは、微生物の生育に及ぼす環境条件ごとに抗菌剤の有効濃度のデータが蓄積されており、指定された環境条件の中から抗菌剤を抽出するものである請求項８記載の抗菌処理方法。
- データベースには、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｅｏｔｈｅｒｍａｌｉｓに対する抗菌剤としてジデシルジメチルアンモニウムクロリド、および無機ハロゲン系化合物が臭化アンモニウムと次亜塩素酸ナトリウムとを反応させて得られる化合物の有効濃度のデータが少なくとも蓄積されている請求項８または９記載の抗菌処理方法。
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