JP3417904B2 - バンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある微生物由来の醗酵濃縮飲料 - Google Patents
バンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある微生物由来の醗酵濃縮飲料Info
- Publication number
- JP3417904B2 JP3417904B2 JP2000150125A JP2000150125A JP3417904B2 JP 3417904 B2 JP3417904 B2 JP 3417904B2 JP 2000150125 A JP2000150125 A JP 2000150125A JP 2000150125 A JP2000150125 A JP 2000150125A JP 3417904 B2 JP3417904 B2 JP 3417904B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vancomycin
- concentrated beverage
- chemical
- resistant enterococci
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Non-Alcoholic Beverages (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、バンコマイシン耐
性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある濃縮飲料、
さらに詳しくは、ブルガリア桿菌、顆粒桿菌、嗜酸桿
菌、乳酸球菌、酵母菌の５種類の有益菌を共生培養して
得られた培養液のろ液の濃縮液であって、バンコマイシ
ン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある濃縮飲
料に関するものである。
性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある濃縮飲料、
さらに詳しくは、ブルガリア桿菌、顆粒桿菌、嗜酸桿
菌、乳酸球菌、酵母菌の５種類の有益菌を共生培養して
得られた培養液のろ液の濃縮液であって、バンコマイシ
ン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある濃縮飲
料に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】グリコペプチド抗生物質、バンコマイシ
ンは、他の抗生剤が効かない疾病に対する治療薬として
用いられてきた。
ンは、他の抗生剤が効かない疾病に対する治療薬として
用いられてきた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】抗生物質が効かない
「耐性菌」が出現しない唯一の薬と考えられてきたバン
コマイシンは、抗生物質の「最後の切り札」とされてき
た。しかし、１９８０年代後半にフランスで、また、日
本でも１９９６年にバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲ
Ｅ）が見付かっている。院内感染も海外では多数報告さ
れ、また、日本でも報告例がある。
「耐性菌」が出現しない唯一の薬と考えられてきたバン
コマイシンは、抗生物質の「最後の切り札」とされてき
た。しかし、１９８０年代後半にフランスで、また、日
本でも１９９６年にバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲ
Ｅ）が見付かっている。院内感染も海外では多数報告さ
れ、また、日本でも報告例がある。
【０００４】健康な人の体内にバンコマイシン耐性腸球
菌が存在していても病気を起こす力は非常に弱く問題は
ないが、抗癌剤を使用していたり、高齢で体力が落ちて
いて免疫力が低下していると、バンコマイシン耐性腸球
菌によって敗血症などを起こして死亡することもある。
菌が存在していても病気を起こす力は非常に弱く問題は
ないが、抗癌剤を使用していたり、高齢で体力が落ちて
いて免疫力が低下していると、バンコマイシン耐性腸球
菌によって敗血症などを起こして死亡することもある。
【０００５】バンコマイシン耐性腸球菌に対して抗生物
質が効かないため薬による治療は難しいが、免疫力を高
めるなどの対処法も一つの方法として考えられている。
このような背景下、本発明者は、かねてより微生物醗酵
生産物による飲料を提供することにつき、鋭意研究を重
ねてきた。
質が効かないため薬による治療は難しいが、免疫力を高
めるなどの対処法も一つの方法として考えられている。
このような背景下、本発明者は、かねてより微生物醗酵
生産物による飲料を提供することにつき、鋭意研究を重
ねてきた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】その結果、ブルガリア桿
菌、顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球菌、酵母菌の５種類の
有益菌を共生培養して得られた培養液のろ液から、濃縮
法によってアミノ酸、ビタミン及びミネラルなどの有効
成分をバランス良く含有し栄養価が高い濃縮液が得られ
ること、及び、この濃縮液が健康飲料として適するもの
であることを見出した。そして、さらに研究を重ねて行
くうちに、この濃縮飲料にバンコマイシン耐性腸球菌に
対して殺菌・感染防御作用があることを見出した。本発
明は、かかる知見に基づくものである。
菌、顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球菌、酵母菌の５種類の
有益菌を共生培養して得られた培養液のろ液から、濃縮
法によってアミノ酸、ビタミン及びミネラルなどの有効
成分をバランス良く含有し栄養価が高い濃縮液が得られ
ること、及び、この濃縮液が健康飲料として適するもの
であることを見出した。そして、さらに研究を重ねて行
くうちに、この濃縮飲料にバンコマイシン耐性腸球菌に
対して殺菌・感染防御作用があることを見出した。本発
明は、かかる知見に基づくものである。
【０００７】すなわち、本発明に係るバンコマイシン耐
性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用がある濃縮飲料
は、ブルガリア桿菌、顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球菌、
酵母菌の５種類の有益菌を共生培養して得られた培養液
のろ液の濃縮液からなるものである。そして、本発明に
係る濃縮飲料には含有成分としてのアミノ酸、ビタミン
およびミネラルなどの他に、少なくとも下記構造式から
なる化合物Ａ〜Ｆが１つ以上含まれている。
性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用がある濃縮飲料
は、ブルガリア桿菌、顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球菌、
酵母菌の５種類の有益菌を共生培養して得られた培養液
のろ液の濃縮液からなるものである。そして、本発明に
係る濃縮飲料には含有成分としてのアミノ酸、ビタミン
およびミネラルなどの他に、少なくとも下記構造式から
なる化合物Ａ〜Ｆが１つ以上含まれている。
【０００８】
【化１】
【０００９】
【化２】
【００１０】
【化３】
【００１１】
【化４】
【００１２】
【化５】
【００１３】
【化６】
【００１４】本発明に係る濃縮飲料の製造に際し用いら
れる有益菌としては、表１に示すものを挙げることがで
きる。
れる有益菌としては、表１に示すものを挙げることがで
きる。
【００１５】
【表１】
【００１６】本発明に係る濃縮飲料は、ブルガリア桿
菌、顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球菌、 酵母菌の５種類の
有益菌を共生培養して得られた培養液のろ液を濃縮する
ことにより得られるが、複数種の有益菌のグループ分け
としては、例えば表２に示すような場合を挙げることが
できる。
菌、顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球菌、 酵母菌の５種類の
有益菌を共生培養して得られた培養液のろ液を濃縮する
ことにより得られるが、複数種の有益菌のグループ分け
としては、例えば表２に示すような場合を挙げることが
できる。
【００１７】
【表２】
【００１８】本発明に係る濃縮飲料を分析すると、タン
パク質、リン、鉄、カルシウム、サイアミン（ビタミン
B1）、リボフラビン（ビタミンB2）などが含まれている
ことが判明した。分析結果の一例を表３に示す。
パク質、リン、鉄、カルシウム、サイアミン（ビタミン
B1）、リボフラビン（ビタミンB2）などが含まれている
ことが判明した。分析結果の一例を表３に示す。
【００１９】
【表３】
【００２０】また、本発明に係る濃縮飲料中には、アミ
ノ酸として、スレオニン、バリン、リジン、ロイシンな
どの必須アミノ酸のほか、グルタミン酸、アスパラギン
酸、アルギニンなど20種近いアミノ酸を確認することが
できた。
ノ酸として、スレオニン、バリン、リジン、ロイシンな
どの必須アミノ酸のほか、グルタミン酸、アスパラギン
酸、アルギニンなど20種近いアミノ酸を確認することが
できた。
【００２１】また、本発明に係る濃縮飲料に含まれてい
る有機化合物（アミノ酸及び糖類を除く）を抽出し、さ
らに、酢酸エチル層中に溶けている物質を分離してそれ
らの構造式を特定することができた。なお、有機化合物
の抽出には逆抽出法を用いる液−液抽出の手法を用い、
また、酢酸エチル層中に溶けている物質の分離には液性
を変化させ再度液−液抽出を行う手法を用いた。
る有機化合物（アミノ酸及び糖類を除く）を抽出し、さ
らに、酢酸エチル層中に溶けている物質を分離してそれ
らの構造式を特定することができた。なお、有機化合物
の抽出には逆抽出法を用いる液−液抽出の手法を用い、
また、酢酸エチル層中に溶けている物質の分離には液性
を変化させ再度液−液抽出を行う手法を用いた。
【００２２】本発明に係る濃縮飲料から有機化合物（ア
ミノ酸及び糖類を除く）を抽出する方法を図解すると、
図１のようになる。そして、酢酸エチル層中に溶けてい
る物質から分離された各化合物Ａ〜Ｆの構造式並びに物
質名は次の通りである。
ミノ酸及び糖類を除く）を抽出する方法を図解すると、
図１のようになる。そして、酢酸エチル層中に溶けてい
る物質から分離された各化合物Ａ〜Ｆの構造式並びに物
質名は次の通りである。
【００２３】化合物Ａ（Daidzein）
【化１】
上記構造式の化合物Ａは中性画分より単離、精製された
ものであり、大豆に含まれているイソフラボン配糖体で
あるdaidzin から糖がとれたdaidzeinと同定することが
できる。
ものであり、大豆に含まれているイソフラボン配糖体で
あるdaidzin から糖がとれたdaidzeinと同定することが
できる。
【００２４】化合物Ｂ（2,3,5-Trihydroxybenzaldehyd
e）
e）
【化２】
上記構造式の化合物Ｂは中性画分より単離、精製された
ものであり、３個の水酸基を有する2,3,5-Trihydroxybe
nzaldehydeと同定することができる。文献にも未記載の
新規な物質である。
ものであり、３個の水酸基を有する2,3,5-Trihydroxybe
nzaldehydeと同定することができる。文献にも未記載の
新規な物質である。
【００２５】化合物Ｃ（2-furoic acid ）
【化３】
上記構造式の化合物Ｃは酸性画分より単離、精製された
ものであり、2-furoicacid と同定することができる。
ものであり、2-furoicacid と同定することができる。
【００２６】化合物Ｄ〔4-hydroxy-3-methoxybenzoic a
cid(Vanillic Acid)〕
cid(Vanillic Acid)〕
【化４】
上記構造式の化合物Ｄは酸性画分より単離、精製された
ものであり、バニリン酸と同定することができる。
ものであり、バニリン酸と同定することができる。
【００２７】化合物Ｅ（4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzo
ic acid ）
ic acid ）
【化５】
上記構造式の化合物Ｅも酸性画分より単離、精製された
ものであり、4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzoic acid と
同定することができる。本化合物Ｅは既知物質であり、
文献によると植物から抽出されている。
ものであり、4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzoic acid と
同定することができる。本化合物Ｅは既知物質であり、
文献によると植物から抽出されている。
【００２８】化合物Ｆ（2-methyl-4-hydroxy-4H-pyran-
4-one ）
4-one ）
【化６】
上記構造式の化合物Ｆは塩基性画分より単離、精製され
たものであり、2-methyl-4-hydroxy-4H-pyran-4-one と
同定することができる。
たものであり、2-methyl-4-hydroxy-4H-pyran-4-one と
同定することができる。
【００２９】ところで、本発明に係る濃縮飲料にはバン
コマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用があ
ることが認められる。その試験方法等をデータとともに
詳細に説明する。 〔バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対する試験方
法（その１）〕 本発明に係る濃縮飲料を任意濃度添加した感受性測定用
平板に、バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）の菌液を
塗抹・培養後、発育が阻止された最小濃度をもって、バ
ンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対する最小発育阻
止濃度を求めた。ここに、感受性測定用平板、菌液、塗
抹・培養とは、次のようなものをいう。
コマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用があ
ることが認められる。その試験方法等をデータとともに
詳細に説明する。 〔バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対する試験方
法（その１）〕 本発明に係る濃縮飲料を任意濃度添加した感受性測定用
平板に、バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）の菌液を
塗抹・培養後、発育が阻止された最小濃度をもって、バ
ンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対する最小発育阻
止濃度を求めた。ここに、感受性測定用平板、菌液、塗
抹・培養とは、次のようなものをいう。
【００３０】（感受性測定用平板）
滅菌精製水を用いて本発明に係る濃縮飲料を順次２倍希
釈し、２倍希釈系列溶液を調製した。次に、滅菌、溶解
後、50〜60℃に保った感受性測定用培地〔Heart Infusi
on Agar(DIFCO LABORATORIES INCORPORATED)〕に、本発
明に係る濃縮飲料及び前記希釈系列溶液を任意量添加
し、十分に混合後、シャーレに分注、固化させた。これ
が本試験にいう感受性測定用平板である。
釈し、２倍希釈系列溶液を調製した。次に、滅菌、溶解
後、50〜60℃に保った感受性測定用培地〔Heart Infusi
on Agar(DIFCO LABORATORIES INCORPORATED)〕に、本発
明に係る濃縮飲料及び前記希釈系列溶液を任意量添加
し、十分に混合後、シャーレに分注、固化させた。これ
が本試験にいう感受性測定用平板である。
【００３１】（接種用菌液の調製）
継代培養した試験菌〔Enterococcus faecium NCTC 1220
4(VRE)〕を増菌用培地〔Heart Infusion Broth (DIFCO
LABORATORIES INCORPORATED)〕に接種し、35℃、18〜20
時間培養後、菌数が約106CFU／mlとなるように前記増菌
用培地で希釈し、接種用菌液とした。
4(VRE)〕を増菌用培地〔Heart Infusion Broth (DIFCO
LABORATORIES INCORPORATED)〕に接種し、35℃、18〜20
時間培養後、菌数が約106CFU／mlとなるように前記増菌
用培地で希釈し、接種用菌液とした。
【００３２】（塗抹・培養）
感受性測定用平板に、前記接種用の菌液をニクロム線ル
ープ（内径約１mm）を用いて１〜２cm程度画線塗抹し、
35℃、18〜20時間培養した。これが本試験にいう塗抹・
培養である。そして、この培養後、発育が阻止された最
小濃度を測定した。その結果を表４に示す。
ープ（内径約１mm）を用いて１〜２cm程度画線塗抹し、
35℃、18〜20時間培養した。これが本試験にいう塗抹・
培養である。そして、この培養後、発育が阻止された最
小濃度を測定した。その結果を表４に示す。
【００３３】
【表４】
【００３４】表４から明らかなように、本発明に係る濃
縮飲料を用いるとバンコマイシン耐性腸球菌の成長を阻
害することができ、少なくともバンコマイシン耐性腸球
菌に対して殺菌作用があることが認められる。なお、バ
ンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌作用のない場合、
最小発育阻止濃度（Ｗ／Ｖ％）は 100となることから、
本発明に係る濃縮飲料にはバンコマイシン耐性腸球菌に
対して明らかに殺菌作用があることが分かる。
縮飲料を用いるとバンコマイシン耐性腸球菌の成長を阻
害することができ、少なくともバンコマイシン耐性腸球
菌に対して殺菌作用があることが認められる。なお、バ
ンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌作用のない場合、
最小発育阻止濃度（Ｗ／Ｖ％）は 100となることから、
本発明に係る濃縮飲料にはバンコマイシン耐性腸球菌に
対して明らかに殺菌作用があることが分かる。
【００３５】〔バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に
対する試験方法（その２）〕 本発明に係る濃縮飲料及び対照としての培地10mlを滅菌
Ｌ字管に入れ、108CFU／mlに調製したバンコマイシン耐
性腸球菌（ＶＲＥ）液 0.1mlを加え、室温で振とうし
た。その後、時間ごと（０、60分、120 分及び24時間）
にサンプリングして菌数計算を行った。その結果を表５
に示す。なお、試験菌株には、Enterococcus feacalis
Ku1856株を用いた。
対する試験方法（その２）〕 本発明に係る濃縮飲料及び対照としての培地10mlを滅菌
Ｌ字管に入れ、108CFU／mlに調製したバンコマイシン耐
性腸球菌（ＶＲＥ）液 0.1mlを加え、室温で振とうし
た。その後、時間ごと（０、60分、120 分及び24時間）
にサンプリングして菌数計算を行った。その結果を表５
に示す。なお、試験菌株には、Enterococcus feacalis
Ku1856株を用いた。
【００３６】
【表５】
【００３７】表５から明らかなように、本発明に係る濃
縮飲料では、腸球菌数が０時間で 1.5×106CFU／mlであ
ったのに対し、24時間後では検出限界以下であり、少な
くともバンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌ないし抗
菌作用があることが認められる。その結果、本発明に係
る濃縮飲料にはバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に
対して明らかに殺菌作用があることが分かる。なお、表
５に示すように、本発明に係る濃縮飲料の抗菌作用は抗
生物質あるいは合成抗菌剤に見られる即効性の殺菌作用
ではなく、徐々に作用するタイプであるから、抗生剤等
に見られる副作用がないと考えられる。
縮飲料では、腸球菌数が０時間で 1.5×106CFU／mlであ
ったのに対し、24時間後では検出限界以下であり、少な
くともバンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌ないし抗
菌作用があることが認められる。その結果、本発明に係
る濃縮飲料にはバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に
対して明らかに殺菌作用があることが分かる。なお、表
５に示すように、本発明に係る濃縮飲料の抗菌作用は抗
生物質あるいは合成抗菌剤に見られる即効性の殺菌作用
ではなく、徐々に作用するタイプであるから、抗生剤等
に見られる副作用がないと考えられる。
【００３８】〔バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に
対する試験方法（その３）〕 次に、本発明に係る濃縮飲料及び対照としての培地をマ
ウスに連続経口投与した後、バンコマイシン耐性腸球菌
（ＶＲＥ）を腹腔内に投与し、マウスの生死を観察し
た。以下に、この試験方法をさらに詳細に示す。
対する試験方法（その３）〕 次に、本発明に係る濃縮飲料及び対照としての培地をマ
ウスに連続経口投与した後、バンコマイシン耐性腸球菌
（ＶＲＥ）を腹腔内に投与し、マウスの生死を観察し
た。以下に、この試験方法をさらに詳細に示す。
【００３９】（バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）の
調製） ブレーンハートインフュウジョン寒天培地に37℃24時間
培養後、標準白金耳で10mg集菌し、それを滅菌生理食塩
水に浮遊させ、109CFU／mlに調製した。この菌液を10倍
段階希釈し、10％ムチン溶液で107 及び106CFU／mlに調
製した。
調製） ブレーンハートインフュウジョン寒天培地に37℃24時間
培養後、標準白金耳で10mg集菌し、それを滅菌生理食塩
水に浮遊させ、109CFU／mlに調製した。この菌液を10倍
段階希釈し、10％ムチン溶液で107 及び106CFU／mlに調
製した。
【００４０】（試験動物）
６週齢のBALB／c 雌マウス（ＳＰＦ）を使用した。試験
動物はマウス用ポリカーボネート製のケージ（24×17×
12cm）に５匹づつ収容し、室温23±2 ℃、相対湿度55±
15％に設定した飼育室において飼育した。飼料〔マウス
・ラット用固形飼料；ラボMRストック、日本農産工業株
式会社〕を自由に摂取させた。飲料水（水道水）は吸水
びんに入れて吸水した。
動物はマウス用ポリカーボネート製のケージ（24×17×
12cm）に５匹づつ収容し、室温23±2 ℃、相対湿度55±
15％に設定した飼育室において飼育した。飼料〔マウス
・ラット用固形飼料；ラボMRストック、日本農産工業株
式会社〕を自由に摂取させた。飲料水（水道水）は吸水
びんに入れて吸水した。
【００４１】（被験物質及びバンコマイシン耐性腸球菌
（ＶＲＥ）の投与方法） 上記マウスを１週間予備飼育した後、被験物質0.3 mlを
ゾンデを用いて１日１回５日間連続して強制経口投与
し、２日間（土・日）は投与を休止し、さらに、２日間
連続して投与した。エンドキサン200 mg／kgは被験物質
投与開始５日目に腹腔内に投与した。上述したように調
製したバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）を、最後の
被験物質投与４時間後に0.5 ml／マウスづつ腹腔内に投
与した。
（ＶＲＥ）の投与方法） 上記マウスを１週間予備飼育した後、被験物質0.3 mlを
ゾンデを用いて１日１回５日間連続して強制経口投与
し、２日間（土・日）は投与を休止し、さらに、２日間
連続して投与した。エンドキサン200 mg／kgは被験物質
投与開始５日目に腹腔内に投与した。上述したように調
製したバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）を、最後の
被験物質投与４時間後に0.5 ml／マウスづつ腹腔内に投
与した。
【００４２】なお、被験物質、エンドキサン及びバンコ
マイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）の投与状態を図表に表わ
すと、次のようになる。投与した場合を矢印で示す。
マイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）の投与状態を図表に表わ
すと、次のようになる。投与した場合を矢印で示す。
【００４３】（群分け）
１群：バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）
２群：培地＋バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）
３群：本発明に係る濃縮飲料＋バンコマイシン耐性腸球
菌（ＶＲＥ）
菌（ＶＲＥ）
【００４４】（観察）
マウスの生死の観察は毎日行った（但し、土、日は除
く）。この試験結果を表６に示す。
く）。この試験結果を表６に示す。
【００４５】
【表６】
【００４６】表６から分かるように、バンコマイシン耐
性腸球菌（ＶＲＥ）107CFU／ml投与に対しては、本発明
に係る濃縮飲料及び非投与群では１例づつ生存が認めら
れ、培地投与群では全例斃死した。一方、バンコマイシ
ン耐性腸球菌（ＶＲＥ）106CFU／ml投与に対しては、非
投与群及び培地投与群では全例斃死が認められた（100
％の死亡率であった）が、本発明に係る濃縮飲料投与群
では２例の斃死が認められたのみで、40％の低い死亡率
であった。その結果、本発明に係る濃縮飲料にはバンコ
マイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対して明らかに感染防
御作用があることが分かる。以上のような結果から見
て、本発明に係る濃縮飲料にはバンコマイシン耐性腸球
菌（ＶＲＥ）に対して明らかに殺菌ないし抗菌作用と感
染防御作用とがあることが分かる。
性腸球菌（ＶＲＥ）107CFU／ml投与に対しては、本発明
に係る濃縮飲料及び非投与群では１例づつ生存が認めら
れ、培地投与群では全例斃死した。一方、バンコマイシ
ン耐性腸球菌（ＶＲＥ）106CFU／ml投与に対しては、非
投与群及び培地投与群では全例斃死が認められた（100
％の死亡率であった）が、本発明に係る濃縮飲料投与群
では２例の斃死が認められたのみで、40％の低い死亡率
であった。その結果、本発明に係る濃縮飲料にはバンコ
マイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対して明らかに感染防
御作用があることが分かる。以上のような結果から見
て、本発明に係る濃縮飲料にはバンコマイシン耐性腸球
菌（ＶＲＥ）に対して明らかに殺菌ないし抗菌作用と感
染防御作用とがあることが分かる。
【００４７】一方、本発明に係る濃縮飲料には毒性は認
められない。その試験方法、試験結果等をデータととも
に示す。
められない。その試験方法、試験結果等をデータととも
に示す。
【００４８】（毒性試験）
本発明に係る濃縮飲料について、OECD化学物質毒性試験
指針(1987)に準拠し、マウスにおける急性経口毒性を調
べる。
指針(1987)に準拠し、マウスにおける急性経口毒性を調
べる。
【００４９】（試験液の調製）
本発明に係る濃縮飲料を精製水で５倍希釈し、試験液と
する。
する。
【００５０】（試験動物）
４週齢の ICR系雌雄マウス（日本エスエルシー株式会
社）を約１週間の予備飼育を行って一般状態に異常のな
いことを確認した後、試験に使用した。試験動物はポリ
カーボネート製ケージに各５匹収容し、室温23±2 ℃、
照明時間12時間／日に設定した飼育室において飼育し
た。飼料〔マウス・ラット用固形飼料；ラボMRストッ
ク、日本農産工業株式会社〕及び飲料水（水道水）は自
由に摂取させた。
社）を約１週間の予備飼育を行って一般状態に異常のな
いことを確認した後、試験に使用した。試験動物はポリ
カーボネート製ケージに各５匹収容し、室温23±2 ℃、
照明時間12時間／日に設定した飼育室において飼育し
た。飼料〔マウス・ラット用固形飼料；ラボMRストッ
ク、日本農産工業株式会社〕及び飲料水（水道水）は自
由に摂取させた。
【００５１】（試験方法）
試験群及び対称群ともに雌雄それぞれ10匹を用いた。投
与前に約４時間試験動物を絶食させた。体重を測定した
後、試験群には雌雄ともに検体投与量として4.4mL/Kg用
量の本発明に係る濃縮飲料を胃ゾンデを用いて強制単回
経口投与した。対照群には雄では 0.8mL、雌では 0.7mL
の精製水を同様に投与した。観察期間は14日間とし、投
与日は頻回、翌日から１日１回の観察を行った。投与後
７日目及び14日目に体重を測定し、ｔ−検定により有意
水準５％で群間の比較を行った。観察期間終了時に動物
すべてを剖検した。
与前に約４時間試験動物を絶食させた。体重を測定した
後、試験群には雌雄ともに検体投与量として4.4mL/Kg用
量の本発明に係る濃縮飲料を胃ゾンデを用いて強制単回
経口投与した。対照群には雄では 0.8mL、雌では 0.7mL
の精製水を同様に投与した。観察期間は14日間とし、投
与日は頻回、翌日から１日１回の観察を行った。投与後
７日目及び14日目に体重を測定し、ｔ−検定により有意
水準５％で群間の比較を行った。観察期間終了時に動物
すべてを剖検した。
【００５２】この試験結果を考察とともに以下に示す。
【００５３】（死亡例及び死亡率）
雌雄ともに観察期間中に死亡は認められなかった。
【００５４】（一般状態）
試験群の雄では、観察期間中に異常は認められなかっ
た。雌では、投与後一時間以内に接触刺激により発声す
る動物が２例に見られたが、５時間には回復し、その後
異常は見られなかった。対照群では、雌雄ともに観察期
間中に異常は認められなかった。
た。雌では、投与後一時間以内に接触刺激により発声す
る動物が２例に見られたが、５時間には回復し、その後
異常は見られなかった。対照群では、雌雄ともに観察期
間中に異常は認められなかった。
【００５５】（体重変化）
投与後７日目及び14日目に体重測定した。雌雄ともに各
群間で体重増加に差は見られなかった。雄群についての
体重変化を表７に示す。また、雌群についての体重変化
を表８に示す。表７、表８における体重は、平均値±標
準偏差で表した（単位：ｇ）。なお、括弧内に動物数を
示した。
群間で体重増加に差は見られなかった。雄群についての
体重変化を表７に示す。また、雌群についての体重変化
を表８に示す。表７、表８における体重は、平均値±標
準偏差で表した（単位：ｇ）。なお、括弧内に動物数を
示した。
【００５６】
【表７】
【００５７】
【表８】
【００５８】（剖検所見）
観察期間終了後の剖検では、雌雄ともにすべての試験動
物の主要臓器に異常は見られなかった。
物の主要臓器に異常は見られなかった。
【００５９】（考察）
本発明に係る濃縮飲料を4.4mL/Kgの用量で雌雄マウスに
単回経口投与した結果、死亡例は見られず、剖検時にも
異常は見られなかった。従って、表７、表８から明らか
なように、本発明に係る濃縮飲料には毒性は認められな
いことが分かる。なお、この場合におけるLD50値は、雌
雄ともに4.4mL/Kg以上であるものと考えられる。
単回経口投与した結果、死亡例は見られず、剖検時にも
異常は見られなかった。従って、表７、表８から明らか
なように、本発明に係る濃縮飲料には毒性は認められな
いことが分かる。なお、この場合におけるLD50値は、雌
雄ともに4.4mL/Kg以上であるものと考えられる。
【００６０】以上から明らかなように、本発明に係る濃
縮飲料には、少なくともバンコマイシン耐性腸球菌に対
する殺菌・感染防御作用があることが分かる。本発明に
係る濃縮飲料は、ブルガリア桿菌、顆粒桿菌、嗜酸桿
菌、乳酸球菌、酵母菌の５種類の有益菌を共生培養して
得られた培養液である微生物醗酵生産物のろ液を濃縮す
ることにより得られたものであるから、健康飲料として
適している。
縮飲料には、少なくともバンコマイシン耐性腸球菌に対
する殺菌・感染防御作用があることが分かる。本発明に
係る濃縮飲料は、ブルガリア桿菌、顆粒桿菌、嗜酸桿
菌、乳酸球菌、酵母菌の５種類の有益菌を共生培養して
得られた培養液である微生物醗酵生産物のろ液を濃縮す
ることにより得られたものであるから、健康飲料として
適している。
【００６１】
【発明の実施の形態】以下、具体例を挙げて本発明に係
る濃縮飲料をさらに詳細に説明する。本発明に係る濃縮
飲料は、ブルガリア桿菌、顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球
菌、酵母菌の５種類の有益菌を共生培養して得られた培
養液のろ液を濃縮することにより生成される。培養基と
して、大豆からの豆乳を使用するのが最適である。乳酸
菌の培養には一般に牛乳が多く用いられているが、牛乳
の不均一性、経時変化性、その生産過程における薬剤等
の使用混入等を考慮し、さらに、人工添加物を一切使用
しない自然飲料という観点から、培養基として、自然食
品であって、かつ、完全無農薬保証大豆（アイオワ州
産）からの豆乳を使用するのが最適である。また、本発
明に係る濃縮飲料は、培養完了後において生菌を加熱殺
菌して菌体を除去し、この菌体を分離した培養液のろ液
を約15分の１に濃縮することにより生成するのが好まし
い。
る濃縮飲料をさらに詳細に説明する。本発明に係る濃縮
飲料は、ブルガリア桿菌、顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球
菌、酵母菌の５種類の有益菌を共生培養して得られた培
養液のろ液を濃縮することにより生成される。培養基と
して、大豆からの豆乳を使用するのが最適である。乳酸
菌の培養には一般に牛乳が多く用いられているが、牛乳
の不均一性、経時変化性、その生産過程における薬剤等
の使用混入等を考慮し、さらに、人工添加物を一切使用
しない自然飲料という観点から、培養基として、自然食
品であって、かつ、完全無農薬保証大豆（アイオワ州
産）からの豆乳を使用するのが最適である。また、本発
明に係る濃縮飲料は、培養完了後において生菌を加熱殺
菌して菌体を除去し、この菌体を分離した培養液のろ液
を約15分の１に濃縮することにより生成するのが好まし
い。
【００６２】次に、本発明に係る濃縮飲料の製造方法の
一例を挙げる。その一例として、特許第１９６２５１２
号（特公平６−９５９１４号）を挙げることができる。 (1) 第１工程（特殊寒天培養基の製造） 精製された天然の寒天に、蒸留水により湯煎された牛
肉、昆布から得られたスープと塩分と有益菌培養液とを
加えて特殊寒天培養基を製造する。 (2) 第２工程（有益菌の純粋培養） 第１工程で製造された特殊寒天培養基に有益菌を各種類
ごと移植し、これを恒温器に入れて39℃で48〜50時間培
養する。 (3) 第３工程（特殊豆乳培養基の製造） 大豆より脂肪を除き、蒸留水を加えたものを70〜110 分
煮沸後、ろ過した豆乳のろ液に、塩、三温糖および有益
菌培養液を加えて特殊豆乳培養基を製造する。 (4) 第４工程（有益菌の特殊豆乳培養基による純粋培
養） 第３工程で製造された特殊豆乳培養基に第２工程で純粋
培養された有益菌を各種類ごとに移植し、恒温器に入れ
て39℃で48〜50時間培養する。 (5) 第５工程（有益菌の中量馴化培養） 第３工程で得られた特殊豆乳培養基に第４工程で製造さ
れた純粋培養された有益菌をグループにより分け、その
グループごとに移植して39℃で48〜50時間馴化培養す
る。 (6) 第６工程（有益菌の工業共生培養） 第３工程で得られた特殊豆乳培養基13リットルの中に、
第５工程で製造されたグループに従って、馴化培養した
生菌を一括移植し、40℃で100 〜120 時間一括共生培養
を行う。 (7) 第７工程（培養の停止と濃縮） 第６工程で製造された共生培養液を100 ℃で30分加熱す
ることによって生菌の繁殖を止め、次に、生菌を分離除
去し、得られたろ液を約15分の１（93〜96％の水分を除
去する）にまで濃縮する。 (8) 第８工程（熟成） 第７工程により得られた濃縮液を、17℃に３ケ月以上静
置して熟成させる。以上 (1)〜(8) の工程により得られ
た生産物を容器に封入し、法定加熱を経て濃縮飲料製品
とする。
一例を挙げる。その一例として、特許第１９６２５１２
号（特公平６−９５９１４号）を挙げることができる。 (1) 第１工程（特殊寒天培養基の製造） 精製された天然の寒天に、蒸留水により湯煎された牛
肉、昆布から得られたスープと塩分と有益菌培養液とを
加えて特殊寒天培養基を製造する。 (2) 第２工程（有益菌の純粋培養） 第１工程で製造された特殊寒天培養基に有益菌を各種類
ごと移植し、これを恒温器に入れて39℃で48〜50時間培
養する。 (3) 第３工程（特殊豆乳培養基の製造） 大豆より脂肪を除き、蒸留水を加えたものを70〜110 分
煮沸後、ろ過した豆乳のろ液に、塩、三温糖および有益
菌培養液を加えて特殊豆乳培養基を製造する。 (4) 第４工程（有益菌の特殊豆乳培養基による純粋培
養） 第３工程で製造された特殊豆乳培養基に第２工程で純粋
培養された有益菌を各種類ごとに移植し、恒温器に入れ
て39℃で48〜50時間培養する。 (5) 第５工程（有益菌の中量馴化培養） 第３工程で得られた特殊豆乳培養基に第４工程で製造さ
れた純粋培養された有益菌をグループにより分け、その
グループごとに移植して39℃で48〜50時間馴化培養す
る。 (6) 第６工程（有益菌の工業共生培養） 第３工程で得られた特殊豆乳培養基13リットルの中に、
第５工程で製造されたグループに従って、馴化培養した
生菌を一括移植し、40℃で100 〜120 時間一括共生培養
を行う。 (7) 第７工程（培養の停止と濃縮） 第６工程で製造された共生培養液を100 ℃で30分加熱す
ることによって生菌の繁殖を止め、次に、生菌を分離除
去し、得られたろ液を約15分の１（93〜96％の水分を除
去する）にまで濃縮する。 (8) 第８工程（熟成） 第７工程により得られた濃縮液を、17℃に３ケ月以上静
置して熟成させる。以上 (1)〜(8) の工程により得られ
た生産物を容器に封入し、法定加熱を経て濃縮飲料製品
とする。
【００６３】本発明に係る濃縮飲料はこのような工程を
経て製造することができ、要約するとブルガリア桿菌、
顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球菌、酵母菌の醗酵生産物で
あるということができる。また、人工添加物無添加の自
然健康飲料であるということもできる。
経て製造することができ、要約するとブルガリア桿菌、
顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳酸球菌、酵母菌の醗酵生産物で
あるということができる。また、人工添加物無添加の自
然健康飲料であるということもできる。
【００６４】
【発明の効果】本発明に係る濃縮飲料には、少なくとも
バンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用
があってその成長を阻害するから、これを飲用すること
によりこれらの細菌による感染症を改善又は予防するこ
とができる。
バンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用
があってその成長を阻害するから、これを飲用すること
によりこれらの細菌による感染症を改善又は予防するこ
とができる。
【図１】本発明に係る濃縮飲料から有機化合物を抽出す
る方法の一例を示すフローチャートである。
る方法の一例を示すフローチャートである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ａ６１Ｋ 31/341 Ａ６１Ｋ 31/351
31/351 31/352
31/352 35/66
35/66 35/72
35/72 Ａ６１Ｐ 31/00
Ａ６１Ｐ 31/00 31/04
31/04 Ｃ１２Ｎ 1/20
Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｐ 7/24
Ｃ１２Ｐ 7/24 7/42
7/42 17/04
17/04 17/06
17/06 Ａ２３Ｌ 2/00
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
A23L 2/00
A23L 1/30
A23L 2/38
Claims (2)
- 【請求項１】ブルガリア桿菌、顆粒桿菌、嗜酸桿菌、乳
酸球菌、酵母菌の５種類の有益菌を共生培養して得られ
た培養液のろ液の濃縮液であることを特徴とするバンコ
マイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある
微生物由来の醗酵濃縮飲料。 - 【請求項２】少なくとも下記構造式からなる化合物Ａ〜
Ｆを１つ以上含んでいることを特徴とする請求項１記載
のバンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作
用のある微生物由来の醗酵濃縮飲料。 【化１】 【化２】 【化３】 【化４】 【化５】 【化６】
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000150125A JP3417904B2 (ja) | 1999-10-08 | 2000-05-22 | バンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある微生物由来の醗酵濃縮飲料 |
| TW089112771A TWI243649B (en) | 1999-10-08 | 2000-06-28 | Fermented and concentrated beverage derived from microorganism having disinfection/infection protection action on vancomycin-resistant enterococcus |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28852699 | 1999-10-08 | ||
| JP11-288526 | 1999-10-08 | ||
| JP2000150125A JP3417904B2 (ja) | 1999-10-08 | 2000-05-22 | バンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある微生物由来の醗酵濃縮飲料 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001169760A JP2001169760A (ja) | 2001-06-26 |
| JP3417904B2 true JP3417904B2 (ja) | 2003-06-16 |
Family
ID=26557215
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000150125A Expired - Fee Related JP3417904B2 (ja) | 1999-10-08 | 2000-05-22 | バンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある微生物由来の醗酵濃縮飲料 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3417904B2 (ja) |
| TW (1) | TWI243649B (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020052869A1 (en) * | 2018-09-10 | 2020-03-19 | Lactobio Aps | Method for reducing the transfer of pathogenic microorganisms |
| WO2023009705A1 (en) * | 2021-07-29 | 2023-02-02 | Microbial Discovery Group, Llc | Methods of treating pododermatitis |
| US11998576B2 (en) | 2021-08-16 | 2024-06-04 | Microbial Discovery Group, Llc | Direct-fed microbials |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005032568A1 (ja) * | 2003-10-03 | 2005-04-14 | Nihon Baio Kabushiki Kaisha | 大豆発酵物よりなる免疫増強剤、抗潰瘍剤、加工食品および大豆発酵物の製造方法 |
| CN100450368C (zh) * | 2003-12-04 | 2009-01-14 | 不二制油株式会社 | 面包改良剂及包含该试剂的面包 |
-
2000
- 2000-05-22 JP JP2000150125A patent/JP3417904B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-06-28 TW TW089112771A patent/TWI243649B/zh not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020052869A1 (en) * | 2018-09-10 | 2020-03-19 | Lactobio Aps | Method for reducing the transfer of pathogenic microorganisms |
| WO2023009705A1 (en) * | 2021-07-29 | 2023-02-02 | Microbial Discovery Group, Llc | Methods of treating pododermatitis |
| US11998576B2 (en) | 2021-08-16 | 2024-06-04 | Microbial Discovery Group, Llc | Direct-fed microbials |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TWI243649B (en) | 2005-11-21 |
| JP2001169760A (ja) | 2001-06-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105087423B (zh) | 新型贝莱斯芽孢杆菌cjbv及含有其的抗菌组合物 | |
| WO2019230183A1 (ja) | 乳酸菌及びその用途 | |
| KR101228993B1 (ko) | 발효 및 배양 방법, 식물발효 엑기스, 식물발효 엑기스분말 및 이 식물발효 엑기스 배합물 | |
| CN110835616B (zh) | 副干酪乳杆菌gks6的活性物质、含其的组合物及其促进长寿的用途 | |
| CN102171329B (zh) | 具有高的草酸分解能力的乳酸菌 | |
| CN107047934A (zh) | 利用枯草芽孢杆菌菌株以增强动物健康的方法 | |
| CN109810912B (zh) | 一株植物乳杆菌lh-511及其应用 | |
| CN107338198B (zh) | 一种植物乳杆菌及其应用 | |
| US5143845A (en) | Mixture of saccarifying lactic acid producing and butyric acid producing bacteria | |
| CN107922960A (zh) | 用于在浮萍中生产维生素b12的装置和方法 | |
| CN110835615B (zh) | 乳双歧杆菌gkk2的活性物质、含其的组合物及其促进长寿的用途 | |
| RU2286066C2 (ru) | Кормовая добавка для птицеводства и способ выращивания птицы | |
| JP3417904B2 (ja) | バンコマイシン耐性腸球菌に対して殺菌・感染防御作用のある微生物由来の醗酵濃縮飲料 | |
| RU2380406C2 (ru) | Средство для стимуляции физиологических функций у пчел и защиты их от инфекционных заболеваний | |
| CN113088468A (zh) | 干酪乳杆菌Ma.GLRGJ 1及其应用 | |
| CN114854604B (zh) | 一种肉灵芝、包含肉灵芝的高浓度口服液及其制备方法 | |
| KR100495605B1 (ko) | 육계용 한방사료첨가제와 그 제조방법 | |
| RU2538116C2 (ru) | Биологически активный комплекс на основе бесклеточного пробиотика, кормовая композиция его содержащая, и способ кормления молодняка сельскохозяйственных животных и птицы | |
| JP2009044971A (ja) | 反芻家畜に対するプロバイオティック効果をサイレージ調製用乳酸菌に付加する新規酵母菌およびその利用 | |
| CN112891360A (zh) | 脱氧土大黄苷的新用途 | |
| WO2021071375A1 (ru) | Функциональная питьевая вода | |
| Lambooy et al. | The Biological Activity of 6-Ethyl-9-(1′-D-Ribityl)-Isoalloxazine | |
| CN117264850B (zh) | 一种具有辅助治疗阴道炎和增强免疫力功能的戊糖片球菌sw006及其应用 | |
| RU2812896C1 (ru) | Способ коррекции кишечной микробиоты для повышения резистентности организма рыб | |
| RU2775077C1 (ru) | Функциональная вода с пробиотиками |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080411 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090411 Year of fee payment: 6 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |