JP3346165B2 - 液状免疫凝集反応試薬 - Google Patents
液状免疫凝集反応試薬Info
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- JP3346165B2 JP3346165B2 JP09951496A JP9951496A JP3346165B2 JP 3346165 B2 JP3346165 B2 JP 3346165B2 JP 09951496 A JP09951496 A JP 09951496A JP 9951496 A JP9951496 A JP 9951496A JP 3346165 B2 JP3346165 B2 JP 3346165B2
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- immunoagglutination reagent
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、液状免疫凝集反応
試薬に関する。
試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫凝集反応試薬は、マイクロプレート
等の反応容器中で検体と反応させ、その結果生ずる沈降
パターンにより検体中に測定対象物が存在するか否かを
判定する試薬である。通常、免疫凝集反応試薬は、凍結
乾燥されている訳である。しかし、免疫測定に際して
は、当然液状に復元して使用せねばならない。
等の反応容器中で検体と反応させ、その結果生ずる沈降
パターンにより検体中に測定対象物が存在するか否かを
判定する試薬である。通常、免疫凝集反応試薬は、凍結
乾燥されている訳である。しかし、免疫測定に際して
は、当然液状に復元して使用せねばならない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、従来の免疫
凝集反応試薬が凍結乾燥品であったため、使用時復元操
作を必要としたが、全くその操作を要さない、即、使用
できる液状免疫凝集反応試薬を提供するものである。
凝集反応試薬が凍結乾燥品であったため、使用時復元操
作を必要としたが、全くその操作を要さない、即、使用
できる液状免疫凝集反応試薬を提供するものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本願発明者は、免疫凝集
反応試薬が前記した如き欠点を有していたため、液状に
て安定な試薬を製造し、提供出来ないか、鋭意検討をし
てきた。その結果、特定の化合物を存在させることによ
り、安定な液状免疫凝集反応試薬を見出し、本発明を完
成した。
反応試薬が前記した如き欠点を有していたため、液状に
て安定な試薬を製造し、提供出来ないか、鋭意検討をし
てきた。その結果、特定の化合物を存在させることによ
り、安定な液状免疫凝集反応試薬を見出し、本発明を完
成した。
【０００５】以下、本発明を詳細に説明する。
【０００６】本発明は、希釈することなく使用可能で安
定な液状免疫凝集反応試薬である。希釈することなく使
用可能とは、そのまま、免疫凝集反応試薬として供すこ
とができることをいう。
定な液状免疫凝集反応試薬である。希釈することなく使
用可能とは、そのまま、免疫凝集反応試薬として供すこ
とができることをいう。
【０００７】本発明の液状免疫凝集反応試薬に用いられ
る担体は、ニワトリの赤血球を用いることができる。
る担体は、ニワトリの赤血球を用いることができる。
【０００８】該担体には、トキソプラズマ抗原を担体に
担持させるものである。このとき、担体と抗原とを担持
させる方法としては当業者が通常行っている方法、例え
ば、グルタールアルデヒド法、カルボジイミド法等によ
って結合させることができる。
担持させるものである。このとき、担体と抗原とを担持
させる方法としては当業者が通常行っている方法、例え
ば、グルタールアルデヒド法、カルボジイミド法等によ
って結合させることができる。
【０００９】トキソプラズマ抗原を担持した担体に、保
存液を用い試薬を調製することによって復元操作を必要
とせず、即座に使用可能で安定な液状免疫凝集反応試薬
を得ることができる。
存液を用い試薬を調製することによって復元操作を必要
とせず、即座に使用可能で安定な液状免疫凝集反応試薬
を得ることができる。
【００１０】本発明は、トキソプラズマ抗原をグルター
ルアルデヒド法でニワトリ赤血球に担持させ、トリエタ
ノールアミン、アジ化ナトリウム及びウサギ血清を含む
保存液を用い、最終的にトリエタノールアミンの濃度が
０．０１〜０．２ｗｔ％の範囲となるように試薬を調製
するものである。
ルアルデヒド法でニワトリ赤血球に担持させ、トリエタ
ノールアミン、アジ化ナトリウム及びウサギ血清を含む
保存液を用い、最終的にトリエタノールアミンの濃度が
０．０１〜０．２ｗｔ％の範囲となるように試薬を調製
するものである。
【００１１】以下、本発明を参考例及び実施例により更
に詳細に説明する。
に詳細に説明する。
【００１２】
（参考例１） 抗原の調製 トキソプラズマ虫体を腹腔接種により感染させたマウス
（ＩＣＲ，ｄｄＹ，Ｂａｌｂ／Ｃ，Ｃ５７ＢＬ／６ を
使用）の腹腔に滅菌生理食塩水３〜５ｍｌをディスポー
ザブルニードルを付属したシリンジにより注入して、腹
腔内で増殖した虫体を浮遊液として３〜５ｍｌ得た。こ
の虫体浮遊液には３×１０8 個〜５×１０8 個のトキソ
プラズマ虫体が含まれる。滅菌生理食塩水により、これ
を１×１０8 個／ｍｌになる様に希釈して遠心し、虫体
のペレットを得た。このペレットをよくほぐして同濃度
に滅菌生理食塩水で復元して遠心し、再びペレットを得
た。この操作をさらに２回繰り返してマウス由来蛋白等
の成分を除去する。この操作を終了後、同溶液に１×１
０8 個／ｍｌに再度浮遊して−８０℃にて凍結した。凍
結後、１５時間以上放置し、これを３７℃で急速融解し
て虫体を破壊した。これを遠心して得られた沈渣にＰＢ
Ｓを１×１０8 個／ｍｌの濃度（破壊前の虫体数で換
算）で加え遠心、沈渣を得る。この操作をさらに２回繰
り返して虫体膜成分（ゴースト）を得る。この虫体膜に
２×１０8 個／ｍｌの濃度（破壊前の虫体数で換算）と
なる様にＰＢＳを加えて浮遊させ、冷却しながら５０Ｈ
ｚ、３０ｍｉｎの条件下で超音波処理を行った。２７０
００×ｇで遠心した後、その上清をトキソプラズマ抗原
として使用した。
（ＩＣＲ，ｄｄＹ，Ｂａｌｂ／Ｃ，Ｃ５７ＢＬ／６ を
使用）の腹腔に滅菌生理食塩水３〜５ｍｌをディスポー
ザブルニードルを付属したシリンジにより注入して、腹
腔内で増殖した虫体を浮遊液として３〜５ｍｌ得た。こ
の虫体浮遊液には３×１０8 個〜５×１０8 個のトキソ
プラズマ虫体が含まれる。滅菌生理食塩水により、これ
を１×１０8 個／ｍｌになる様に希釈して遠心し、虫体
のペレットを得た。このペレットをよくほぐして同濃度
に滅菌生理食塩水で復元して遠心し、再びペレットを得
た。この操作をさらに２回繰り返してマウス由来蛋白等
の成分を除去する。この操作を終了後、同溶液に１×１
０8 個／ｍｌに再度浮遊して−８０℃にて凍結した。凍
結後、１５時間以上放置し、これを３７℃で急速融解し
て虫体を破壊した。これを遠心して得られた沈渣にＰＢ
Ｓを１×１０8 個／ｍｌの濃度（破壊前の虫体数で換
算）で加え遠心、沈渣を得る。この操作をさらに２回繰
り返して虫体膜成分（ゴースト）を得る。この虫体膜に
２×１０8 個／ｍｌの濃度（破壊前の虫体数で換算）と
なる様にＰＢＳを加えて浮遊させ、冷却しながら５０Ｈ
ｚ、３０ｍｉｎの条件下で超音波処理を行った。２７０
００×ｇで遠心した後、その上清をトキソプラズマ抗原
として使用した。
【００１３】（実施例１） 保存液の調製 ０．１４５Ｍ 塩化ナトリウム、０．１％ アジ化ナト
リウム、２％正常ウサギ血清、０．０１Ｍ リン酸緩衝
液を調製し、０．０８％濃度のトリエタノールアミンを
加えて保存液を調製した。
リウム、２％正常ウサギ血清、０．０１Ｍ リン酸緩衝
液を調製し、０．０８％濃度のトリエタノールアミンを
加えて保存液を調製した。
【００１４】（実施例２） 感作血球の調製 ０．１４５Ｍ ＰＢＳ（これ以後、Ｂ液と称する。）で
固定ニワトリ血球を洗浄し、５％浮遊液を調製した。こ
の溶液と５％グルタールアルデヒド／０．０１Ｍ ＰＢ
Ｓとを等量混合し、３７℃で３０分インキュベーション
した後、Ｂ液で再び洗浄し５％浮遊液を調製した。Ｂ液
で希釈したトキソプラズマ抗原と２度目に調製した５％
浮遊液とを等量混合し、３７℃で６０分インキュベーシ
ョンした。再び、Ｂ液で洗浄後遠心分離し、実施例１で
調製した保存液を用い０．７％濃度の浮遊液を調製し
た。３７℃で１６時間インキュベーションし、感作血球
を得た。
固定ニワトリ血球を洗浄し、５％浮遊液を調製した。こ
の溶液と５％グルタールアルデヒド／０．０１Ｍ ＰＢ
Ｓとを等量混合し、３７℃で３０分インキュベーション
した後、Ｂ液で再び洗浄し５％浮遊液を調製した。Ｂ液
で希釈したトキソプラズマ抗原と２度目に調製した５％
浮遊液とを等量混合し、３７℃で６０分インキュベーシ
ョンした。再び、Ｂ液で洗浄後遠心分離し、実施例１で
調製した保存液を用い０．７％濃度の浮遊液を調製し
た。３７℃で１６時間インキュベーションし、感作血球
を得た。
【００１５】
【発明の効果】本発明により、凍結乾燥及び復元のよう
な煩雑な操作が不要で、即使用することができる安定な
トキソプラズマ抗体検出用免疫凝集反応試薬を提供する
ことができるようになった。
な煩雑な操作が不要で、即使用することができる安定な
トキソプラズマ抗体検出用免疫凝集反応試薬を提供する
ことができるようになった。
Claims (1)
- 【請求項１】抗原がトキソプラズマ抗原であり、かつ、
担体がニワトリ赤血球であり、全体の０．０１〜０．２
ｗｔ％のトリエタノールアミンを安定保持のため添加し
調製した希釈することなく使用可能な液状免疫凝集反応
試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09951496A JP3346165B2 (ja) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | 液状免疫凝集反応試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09951496A JP3346165B2 (ja) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | 液状免疫凝集反応試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09269326A JPH09269326A (ja) | 1997-10-14 |
| JP3346165B2 true JP3346165B2 (ja) | 2002-11-18 |
Family
ID=14249369
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP09951496A Expired - Fee Related JP3346165B2 (ja) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | 液状免疫凝集反応試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3346165B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6878389B2 (en) * | 2000-10-10 | 2005-04-12 | Auburn University | Azide method and composition for controlling deleterious organisms |
-
1996
- 1996-03-29 JP JP09951496A patent/JP3346165B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09269326A (ja) | 1997-10-14 |
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