JP3333309B2 - ケトアミン含有タンパク質吸着体 - Google Patents

ケトアミン含有タンパク質吸着体

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はケトアミン含有タンパク
質を除去するための吸着体に関する。さらに詳しくは、
体液中に含有されるケトアミン含有タンパク質を除去す
るための吸着体、これを用いたケトアミン含有タンパク
質除去方法、およびケトアミン含有タンパク質吸着器に
関する。
【０００２】
【従来の技術】糖尿病を発症すると数年後にはほとんど
全例で腎糸球体に病理学的変化が出現し始める。糖尿病
患者の死因は腎障害によるものも多く、最近は糖尿病性
腎症による腎不全者の比率も年々増加してきている。こ
れは腎糸球体に起こる血管障害が原因となっている（糖
尿病と腎血管動脈；プラクティス(PRACTICE)、３巻、２
９８頁、１９８６年および糖尿病と血管のかかわり；日
本糖尿病学会総会記録号、１頁、１９８８年参照）。
【０００３】糖尿病患者の血液中には、健常人に比べ多
量の糖が存在するが、このような血中に存在するブドウ
糖は、酵素の関与なしにタンパク質などと結合すること
が知られている。非酵素的に糖が結合したタンパク質は
ケトアミン含有タンパク質となり、その後血管壁に沈着
し、血管障害を引き起こし、ひいては重篤な糖尿病性合
併症を進行させる。ケトアミン含有タンパク質の反応が
さらに進行したものは、アドバンスト・グリコシレーシ
ョン・エンド・プロダクツ (Advanced Glycosylation E
nd Products(AGEs))が知られている。これは糖化された
タンパク質が互いに架橋し合ったものを指し、糖尿病合
併症の原因物質と考えられている（ノンエンザイマティ
ック・グリコシレーション・アンド・ザ・パソゲネシス
・オブ・ダイアベティック・コンプリケーションズ；ア
ナルズ・オブ・インターナル・メディスン(Nonenzymati
c Glycosylation and the Pathogenesis of Diabetic C
omplications ; Annals of Internal Medicine) 、１０
１巻、５２７頁、１９８４年およびアドバンスト・グリ
コシレーション・エンド・プロダクツ・イン・ペイシェ
ンツ・ウィズ・ダイアベティック・ネフロパシー；ザ・
ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディスン
(Advanced Glycosylation End Products inPatients wi
th Diabetic Nephropathy ; The New England Journal
of Medicine) 、３２５巻、８３６頁、１９９１年参
照）。
【０００４】現在このような糖尿病性合併症の治療はイ
ンスリン治療の強化や降圧療法に依存しているが、臨床
的に顕性の腎症が発展するとその進行を止めるのが困難
となる。またインスリン非依存性糖尿病に関しては現在
有効な治療法はない。
【０００５】一方、食品分野においてタンパク質に糖が
付加し、糖化タンパク質が生成することは古くから知ら
れており、この糖化反応を抑制する試みは盛んに行われ
ている。たとえば、ザ・ロックフェラー・ユニバーシテ
ィによる出願の公報、特開昭６２−１４２１１４号公報
および特開平２−１５６号公報において、ヒドラジン、
アミノグアニジンを含む組成物を目的のタンパク質に添
加することによりそのグリコシル化を抑制する効果が見
られるという事実が述べられている。これらは化合物が
水溶液に溶解した状態でタンパク質の糖化を抑制する効
果を示しているものである。
【０００６】また、古くからヒドラジド誘導体などはア
フィニティークロマトグラフィーにおいてリガンドの固
定化によく用いられてきた（実験と応用 アフィニティ
ークロマトグラフィー：講談社、１９７６年参照）。た
とえば、担体上に存在するヒドラジド誘導体を、カルボ
キシル基を含む化合物（リガンド）とカルボジイミドの
存在下に反応させ、さらに開環した糖のアルデヒド基と
反応させてリガンドとして固定化する方法などがある。
しかし、これらヒドラジド誘導体が固定化された担体は
アフィニティー用の吸着体として使用されてきたもので
ある。また、ヒドラジド誘導体が固定化された担体（吸
着体）とアルデヒド基を反応させる条件は体外循環で実
施しうる条件と比較して反応温度が高く、反応時間も長
く、かつ多量のアルデヒド化合物などを用いる反応であ
る（実験と応用 アフィニティークロマトグラフィー：
６５〜７９頁、講談社、１９７６年参照）。これは目的
がアルデヒド化合物などを担体に固定化することにある
ためである。しかし、このような吸着体の合成条件を吸
着条件に適用することは極めて不適当であり、吸着の目
的を遂行することはとてもできない。また、ケトアミン
のカルボニル基の反応性はアルデヒド基に比べると劣る
であろうことは容易に推定でき、さらに厳しい条件、た
とえば温度を高くするとか、時間を長くするなどが要求
されることになる。したがって、ヒドラジド基を用いて
ケトアミノ基を効率よく吸着することは不可能である。
【０００７】一方、古くからフェニルヒドラジンがカル
ボニル化合物と反応して沈澱を生じることを利用したカ
ルボニル基の定量法が知られており、それを利用したケ
トアミンの分析法が研究されている（ジャーナル・オブ
・バイオロジカル・ケミストリィ(J.Biol.Chem.)、２５
５巻（１５）、７２１８頁、１９８０年参照）。しか
し、彼らの研究目的は存在するケトアミンがある一定の
割合（たとえば１％でも）でフェニルヒドラジンと結合
すればよく、反応系中に存在するケトアミンがどの程度
フェニルヒドラジンと反応しているかについては述べて
いない。しかし、本発明者らにとってはその反応程度が
問題であり、さらに溶液状態での反応は固相液相での反
応より効率がよく、溶液状態で起こる反応が固相液相で
は起こらないことは当業界ではよく経験することであ
る。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】タンパク質中のアミン
がケトアミンになることによりその部分が疎水性にな
り、疎水結合が生じて、ケトアミン部分はタンパク質の
内部に包まれる可能性が極めて高い。フェニルヒドラジ
ンが溶液状態のばあい、タンパク質内部のケトアミンに
反応しうるが、フェニルヒドラジンが固相に存在するば
あい、液相のタンパク質と接触できるのはタンパク質の
外部のみであると考えるのが妥当である。このことは、
ケトアミンを反応点とする吸着体の発明が容易ではない
ことを示唆している。したがって、糖尿病性合併症患者
の体液中に存在するケトアミン含有タンパク質を効率よ
く大量に吸着除去しうる安全で安価な体外循環治療用吸
着体が強く求められている。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、 多孔質水不溶性担体に式：
【００１０】
【化６】
【００１１】（式中、Ｒ1 およびＲ2 はそれぞれ有機基
を表し、ｘは０または１である）で示される末端官能基
を有する化合物を固定したことを特徴とするケトアミン
含有タンパク質吸着体、 請求項１記載のケトアミン含有タンパク質吸着体を、
ケトアミン含有タンパク質を含む体液と接触させること
を特徴とするケトアミン含有タンパク質除去方法、およ
び 液の入口、出口を有し、かつケトアミン含有タンパク
質吸着体の容器外への流出防止手段を備えた容器内に、
請求項１記載のケトアミン含有タンパク質吸着体を充填
してなるケトアミン含有タンパク質吸着器に関する。
【００１２】
【実施例】本発明において「体液」とは血液、血漿、血
清、腹水、リンパ液、関節内液およびこれらからえられ
た分画成分、ならびにその他の生体由来の液性成分をい
い、「ケトアミン」とは
【００１３】
【化７】
【００１４】の部分構造をいい、タンパク質が糖化反応
をうけて生成するものをいう。また、本発明において
「ケトアミン含有タンパク質」とは、生体内のタンパク
質のアミノ基に還元糖が非酵素的に結合し、変性したも
の全般を指す。これらには、糖が付加しシッフ塩基とな
ったもの、アマドリ転移してケトアミンになったもの、
これらが互いに架橋しあったものが含まれる（アドバン
スト・グリコシレーション・エンド・プロダクツ・イン
・ティッシュー・アンド・ザ・バイオケミカル・ベーシ
ス・オブ・ダイアベティック・コンプリケーションズ；
ザ・ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディ
スン(Advanced Glycosylation End Productsin Tissue
and the Biochemical Basis of Diabetic Complication
s:The New England Journal of Medicine) 、３１８
巻、１３１５頁、１９８８年参照）。本発明者らは、こ
のようなケトアミンを含むタンパク質の中でもケトアミ
ンを含む割合が多いタンパク質ほど反応点が多く、より
病因性が高いと考えている。
【００１５】ケトアミン含有タンパク質の吸着に有効な
化合物の探索にあたり、種々の化合物を固定し検討した
結果、式：
【００１６】
【化８】
【００１７】（式中、Ｒ1 およびＲ2 はそれぞれ有機基
を表し、ｘは０または１である）で示される末端官能基
を有する化合物がケトアミン含有タンパク質の吸着に有
効であり、推定されるようにケトアミン量の多いタンパ
ク質ほどより吸着効率が高かった。
【００１８】一方、式：
【００１９】
【化９】
【００２０】および
【００２１】
【化１０】
【００２２】で示される化合物はほとんどケトアミン含
有タンパク質吸着能を示さず、ケトアミン含有タンパク
質の吸着には末端の−ＮＨ2 が重要であることがわかっ
た。
【００２３】また、末端から２番目のＮに適当な置換基
を導入してもその影響はさほど大きくなく、式：
【００２４】
【化１１】
【００２５】で示されるＲ2 は末端の−ＮＨ2 を立体的
に障害しないものであれば有機基でよく、通常水素原子
または１〜２０の炭素原子を含む置換基が用いられる。
【００２６】さらに末端から２番目のＮの内隣接するＣ
との結合は単結合で、かつ該隣接Ｃ原子が飽和結合をも
つかまたは該隣接Ｃ原子と他のＣ原子との結合が不飽和
結合であることが好ましく、たとえば、式：
【００２７】
【化１２】
【００２８】で示されるようなヒドラゾン、式：
【００２９】
【化１３】
【００３０】で示されるようなヒドラジドはその効果が
低く、式：
【００３１】
【化１４】
【００３２】で示される基のように末端から２番目のＮ
の内隣接するＣとの結合が単結合で、かつ該隣接Ｃ原子
が飽和結合をもつかまたは該隣接Ｃ原子と他のＣ原子と
の結合が不飽和結合であるばあい吸着効率が高い。
【００３３】つまり、Ｒ1 は好ましくは、
【００３４】
【化１５】
【００３５】（式中、Ｐｈは
【００３６】
【化１６】
【００３７】を表し、Ｒ3およびＲ4はそれぞれ水素原
子、ヒドロキシル基、アミノ基または炭素数１〜２０の
置換基を表す）で示される基、さらに好ましくは、ＣＨ
2、ＣＨ（ＣＨ3）、Ｃ（ＣＨ3）2、ＣＨＯＨ、Ｃ（Ｏ
Ｈ）ＣＨ3、ＣＨＣＨ2ＣＨ3、Ｃ（ＯＨ）ＣＨ2ＣＨ2Ｃ
Ｈ3、Ｃ（ＮＨ2）ＣＨ3、
【００３８】
【化１７】
【００３９】であり、とくに好ましくはＣＨ2 、ＣＨ
（ＣＨ3 ）、Ｃ6 Ｈ4 である。
【００４０】また−Ｒ2 はＮと単結合で結合しているも
のであればどのような置換基でもよく、なかでも以下の
式：
【００４１】
【化１８】
【化１９】
【００４２】で示される置換基をもつＲ2 はとくにケト
アミン含有タンパク質の吸着能が高い。さらに好ましく
はＲ2 は、Ｈ、Ｃn Ｈ2n+1、Ｃn Ｈ2nＯＣm Ｈ2m+1、Ｃ
n Ｈ2nＯＨ、Ｃn Ｈ2nＮＨ2 （式中、ｎおよびｎ＋ｍは
それぞれ１〜２０までの整数を表す）、とくに好ましい
ものは、Ｈ、ＣＨ3 、ＣＨ2 ＣＨ3 、Ｃ16Ｈ33、ＣＨ2
ＯＨ、ＣＨ2 ＣＨ2 ＯＨ、ＣＨ2 ＮＨ2 、ＣＨ2 ＣＨ2
ＮＨ2 およびＣＨ2 ＯＣＨ3 である。
【００４３】したがって、本発明に用いられる好ましい
末端官能基としては、Ｒ1 としてＣＨ2 、ＣＨＣＨ3 、
Ｃ（ＣＨ3 ）2 または
【００４４】
【化１９】
【００４５】Ｒ2 としては前述の置換基の組み合せがあ
げられ、その中でとくに好ましいものは
【００４６】
【化２０】
【００４７】があげられる。
【００４８】なお、これらの化合物はそれぞれ単独で用
いてもよいし、任意の２種類以上の化合物を組み合わせ
てもよい。
【００４９】また、式：
【００５０】
【化２１】
【００５１】で示される末端官能基を有する化合物が、
沈降させた水不溶性担体の体積１ｍｌ当たり、１０μｍ
ｏｌ以下の固定化量では吸着能は低く、１０μｍｏｌ以
上固定されていることが必要である。
【００５２】本発明に用いる水不溶性担体としては、ガ
ラスビーズ、シリカゲルなどの無機担体、架橋ポリビニ
ルアルコール、架橋ポリアクリレート、架橋ポリアクリ
ルアミド、架橋ポリスチレンなどの合成高分子や結晶性
セルロース、架橋セルロース、架橋アガロース、架橋デ
キストランなどの多糖類からなる有機担体、さらにはこ
れらの組み合わせによってえられる有機−有機、有機−
無機などの複合担体などがあげられるが、中でも親水性
担体は非特異吸着が比較的少なくケトアミン含有タンパ
ク質の吸着選択性が良好であるため好ましい。ここでい
う「親水性担体」とは担体を構成する化合物を平板状に
したときの水との接触角が６０度以下の担体を指す。こ
のような担体としてはセルロース、キトサン、セファロ
ース、デキストランなどの多糖類、ポリビニルアルコー
ル、エチレン−酢酸ビニル共重合体けん化物、ポリアク
リルアミド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリ
メタクリル酸メチル、ポリアクリル酸グラフト化ポリエ
チレン、ポリアクリルアミドグラフト化ポリエチレン、
ガラスなどからなる担体が代表例としてあげられる。
【００５３】これらの中でも−ＯＨ基が存在する担体は
吸着性能、選択性の点で優れており、中でも多孔質セル
ロースゲルは、 機械的強度が比較的高く、強靭であるため撹拌などの
操作により破壊されたり微粉を生じたりすることが少な
く、カラムに充填したばあい体液を高流速で流しても圧
密化したり、目詰まりしたりせず、さらに細孔構造が高
圧蒸気滅菌などによって変化を受けにくい、 ゲルがセルロースで構成されているため親水性であ
り、リガンドの結合に利用しうる水酸基が多数存在し、
非特異吸着が少ない、 空孔容積を大きくしても比較的強度が高いため軟質ゲ
ルに劣らない吸着容量がえられる、 安全性が合成高分子ゲルなどに比べて高い、などの優
れた点を有しており、本発明に用いる最も適した担体の
１つである。本発明においてはこれらの担体のみに限定
されるものではない。なお、前述の担体はそれぞれ単独
で用いてもよいし、任意の２種類以上を混合して用いて
もよい。
【００５４】本発明に用いる水不溶性担体にまず第一に
要求される性質は、適当な大きさの細孔を多数有する、
すなわち多孔質であることである。本発明の吸着体の吸
着対象であるケトアミン含有タンパク質は非酵素的に糖
化されたタンパク質であることからその分子量が広い範
囲に及び特定できない。このタンパク質を効率よく吸着
するためにはケトアミン含有タンパク質はある程度大き
な確率で細孔内に侵入できるが他のタンパク質の侵入は
できるかぎり起こらないことが好ましい。
【００５５】細孔の孔径の測定には水銀圧入法が最もよ
く用いられているが、本発明で用いる多孔質水不溶性担
体のばあいには適用できないことが多いので、細孔の孔
径の目安として排除限界分子量を用いるのが適当であ
る。排除限界分子量とは、ゲル浸透クロマトグラフィー
において細孔内に侵入できない（排除される）分子の内
最も小さい分子量をもつものの分子量をいう（波多野博
行、花井俊彦著、実験高速液体クロマトグラフ、化学同
人参照）。排除限界分子量は一般に球状タンパク質、デ
キストラン、ポリエチレングリコールなどについてよく
調べられているが本発明に用いる担体のばあい、球状タ
ンパク質を用いてえられた値を用いるのが適当である。
【００５６】種々の排除限界分子量の担体を用いて検討
した結果、ケトアミン含有タンパク質の吸着に適当な細
孔の孔径は、排除限界分子量が２万以上であることが明
らかとなった。すなわち２万未満の排除限界分子量をも
つ担体を用いたばあいには、ケトアミン含有タンパク質
の吸着除去量は小さくその実用性が低下する。したがっ
て、本発明に用いる担体の好ましい排除限界分子量は２
万以上である。また、排除限界分子量が５００万を超え
たばあい、体液として血漿または血清を用いる限り、と
くに大きな問題は生じないが、リガンドとの相互作用の
ない巨大分子が物理的にリガンドの結合サイトを塞ぎ、
実質的に有効リガンド量を下げる傾向を示す。
【００５７】さらに、体液として血液を用いたばあい、
排除限界分子量が５００万を超えると血小板の付着の割
合が増加する傾向が見られ、本発明の吸着体をＤＨＰ
（直接血液灌流）型の血液浄化システムで用いたばあ
い、必ずしも充分な性能が発揮できない。一方、排除限
界分子量が５００万以下ではどのような使用法によって
もとくに支障はなく、用途の柔軟性をもたせるためには
排除限界分子量が５００万以下であることが望ましい。
【００５８】つぎに担体の多孔構造について述べる。吸
着体の単位体積あたりの吸着能から考えて、表面多孔性
よりも全多孔性が好ましく、空孔容積が２０％以上であ
り、比表面積が３ｍ2 ／ｇ以上であることが好ましい。
また担体の形状は粒状、繊維状、中空形状など任意の形
状を選ぶことができる。
【００５９】さらに担体表面には、リガンドの固定化反
応に用いうる官能基が存在しているとリガンドの固定化
に好都合である。これらの官能基の代表例としては、水
酸基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオ
ール基、シラノール基、アミド基、エポキシ基、ハロゲ
ン、サクシニルイミド基、酸無水物基などがあげられ
る。
【００６０】つぎに本発明に用いる担体としては硬質担
体、軟質担体のいずれも用いることができるが、体外循
環治療用の吸着体として使用するためには、カラムに充
填し、通液する際などに目詰まりを生じないことが重要
である。そのために充分な機械的強度が要求される。し
たがって、本発明に用いる担体は硬質担体であることが
より好ましい。ここでいう硬質担体とは、たとえば粒状
ゲルのばあい、参考例に示すごとく、ゲルを円筒状カラ
ムに均一に充填し、水性流体を流した際の圧力損失ΔＰ
と流量の関係が０．３ｋｇ／ｃｍ2 まで直線関係にある
ものをいう。
【００６１】本発明の吸着体は、式：
【００６２】
【化２２】
【００６３】で示される末端官能基を有する化合物を多
孔質水不溶性担体に固定してえられるが、その固定化の
方法としては公知の種々の方法を特別な制限なしに用い
ることができる。
【００６４】しかしながら、本発明の吸着体は体外循環
治療に供せられるため、滅菌時あるいは治療時のリガン
ドの脱離溶出を極力抑えることが安全上重要であり、そ
のためには共有結合法により固定化することが好まし
い。
【００６５】本発明の吸着体を用いてケトアミン含有タ
ンパク質を体液より除去するには種々の方法がある。最
も簡便な方法としては、ケトアミン含有タンパク質を含
む血液を体外に導出して血液バッグに貯め、これに本発
明の吸着体を混合してケトアミン含有タンパク質を除去
し、そののちフィルターを通して吸着体を除去し、血液
を体内に戻す方法がある。この方法は複雑な装置を必要
としないが、１回の処理量が少なく処理に時間を要し、
操作が煩雑になるという欠点を有する。
【００６６】つぎの方法は吸着体をカラムに充填し、体
外循環回路に組み込みオンラインで吸着除去を行うもの
である。処理方法には全血を直接灌流する方法と血液か
ら血漿を分離したのち、血漿をカラムに通す方法があ
る。本発明の吸着体は、いずれの方法にも用いることが
できるがオンライン処理に最も適している。
【００６７】ここでいう体外循環回路では本発明の吸着
体を単独で用いることもできるが、他の体外循環治療シ
ステムとの併用も可能である。併用の例としては、人工
透析回路などがあげられ、透析療法との組み合わせなど
に用いることもできる。
【００６８】つぎにケトアミン含有タンパク質吸着体を
用いた本発明のケトアミン含有タンパク質吸着器を、そ
の一実施例の概略断面図である図１にもとづき説明す
る。
【００６９】図１中、１は体液の流入口、２は体液の流
出口、３は本発明のケトアミン含有タンパク質吸着体、
４および５は体液および体液に含まれる成分は通過でき
るがケトアミン含有タンパク質吸着体は通過できない吸
着体流出防止手段、６はカラム、７は容器である。前記
容器の形状、材質にとくに限定はないが、好ましい具体
例としては、たとえば容量１５０〜４００ｍｌ程度、直
径４〜１０ｃｍ程度の筒状容器があげられる。
【００７０】以下実施例にもとづいて本発明の吸着体を
さらに詳細に説明するが、本発明はもとよりこれらに限
られるものではない。
【００７１】参考例 両端に孔径１５μｍのフィルターを装着したガラス製円
筒カラム（内径９ｍｍ、カラム長１５０ｍｍ）にアガロ
ースゲル（バイオ−ラド(Bio-rad) 社製のバイオゲル(B
iogel)Ａ−５ｍ、粒径５０〜１００メッシュ）、ビニル
系ポリマーゲル（東洋曹達工業（株）製のトヨパールＨ
Ｗ−６５、粒径５０〜１００μｍ）およびセルロースゲ
ル（チッソ（株）製のセルロファインＧＣ−７００ｍ、
粒径４５〜１０５μｍ）をそれぞれ均一に充填し、ペリ
スタティックポンプにより水を流し、流量と圧力損失Δ
Ｐとの関係を求めた。その結果を図２に示す。
【００７２】図２に示すごとく、トヨパールＨＷ−６５
およびセルロファインＧＣ−７００ｍが圧力の増加にほ
ぼ比例して流量が増加するのに対し、バイオゲル(Bioge
l)Ａ−５ｍは圧密化を引き起こし、圧力を増加させても
流量が増加しないことがわかる。本発明においては前者
のごとく、圧力損失ΔＰと流量の関係が０．３ｋｇ／ｃ
ｍ2 まで直線関係にあるものを「硬質ゲル」という。
【００７３】実施例１ セルロース系多孔質硬質ゲルであるＧＣＬ−７００ｍ
（チッソ（株）製、球状タンパク質の排除限界分子量４
０万）９０ｍｌに水を加え全量を１８０ｍｌとしたの
ち、２Ｍ水酸化ナトリウム６０ｍｌを加え４０℃とし
た。これにエピクロルヒドリン２１ｍｌを加え、４０℃
で撹拌下１時間反応させた。反応終了後、充分に水洗
し、エポキシ化ゲルをえた。
【００７４】このエポキシ化ゲル９０ｍｌに抱水ヒドラ
ジン３００ｍｇを水２０ｍｌに希釈した溶液を加え、室
温で２０時間放置し、充分量の水で洗浄し、ヒドラジン
固定化ゲル（吸着体）をえた。
【００７５】リガンド量の測定はトリニトロベンゼンス
ルホン酸（ＴＮＢＳ）を用い、常法にしたがい、吸着体
１ｍｌに対して飽和ホウ酸ナトリウム水溶液（５ｇ／２
０ｍｌ、２５０μｌ、２１０μｍｏｌ）を添加して２５
０ｎｍの吸光度を測定してその減少量からリガンド量を
算出した。
【００７６】文献（ジャーナル・オブ・バイオロジカル
・ケミストリィ(Journal of Biological Chemistry) 、
２５５巻（１５）、７２１８〜７２２４頁、１９８０年
参照）を参考に、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）（シグマ
(Sigma) 社製、フラクションＶ）」４００ｍｇとグリセ
ルアルデヒド（和光純薬社製）７ｍｇをｐＨ７．４のリ
ン酸緩衝塩水溶液（大日本製薬社製）６ｍｌに溶解し、
３７℃で２０時間加温してケトアミン導入ＢＳＡを調製
した。
【００７７】吸着体０．５ｍｌに、ケトアミン導入ＢＳ
Ａ溶液１．０ｍｌを加えて３７℃で２時間振盪した。振
盪後、上清の溶液および原液のケトアミン量をフルクト
サミン量としてロッシュＩＩ（日本ロッシュ社製）にて
測定し、吸着率を算出した。結果を表１に示す。
【００７８】実施例２ 牛血清アルブミン３５０ｍｇとグルコース（和光純薬社
製）３５０ｍｇをｐＨ７．４のリン酸緩衝塩水溶液５ｍ
ｌに溶解し、３７℃で２０日間加温して糖化ＢＳＡを調
製した。
【００７９】吸着体は実施例１で合成したものを用い、
ケトアミン導入ＢＳＡに変えて糖化ＢＳＡを用いた他は
実施例１と同様の操作を行い、フルクトサミン量を定量
した。結果を表１に示す。
【００８０】実施例３ 吸着体は実施例１で合成したものを用い、ケトアミン導
入ＢＳＡに変えて糖尿病患者血漿を用いた他は実施例１
と同様の操作を行い、フルクトサミン量を定量した。結
果を表１に示す。
【００８１】実施例４ 抱水ヒドラジンをメチルヒドラジンに変えた他は実施例
１と同様にしてメチルヒドラジン固定化ゲル（吸着体）
をえた。この吸着体を用いて実施例１と全く同様にして
吸着実験を行った。結果を表１に示す。
【００８２】実施例５ 文献（ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリィ
(J.Org.Chem.) 、１４巻、８１３頁、１９４９年参照）
にしたがい、ブチルアミンからブチルヒドラジンをえ
た。
【００８３】抱水ヒドラジンをブチルヒドラジンに変え
た他は実施例１と同様にしてブチルヒドラジン固定化ゲ
ル（吸着体）えた。この吸着体を用いて実施例１と全く
同様にして吸着実験を行った。結果を表１に示す。
【００８４】実施例６ 実施例５のブチルアミンをセチルアミンに代えてセチル
ヒドラジンをえた。抱水ヒドラジンをセチルヒドラジン
に変えた他は実施例１と同様にしてセチルヒドラジン固
定化ゲル（吸着体）をえた。この吸着体を用いて実施例
１と全く同様にして吸着実験を行った。結果を表１に示
す。
【００８５】実施例７ 担体をセルロース系多孔質ゲルであるＧＣ−２０００ｍ
（チッソ（株）製、球状タンパク質の排除限界分子量が
リガンド固定化後で３００万）に変えた他は実施例１と
同様にしてヒドラジン固定化ゲル（吸着体）をえた。こ
の吸着体を用いて実施例１と全く同様にして吸着実験を
行った。結果を表１に示す。
【００８６】実施例８ 担体をセルロース系多孔質ゲルであるＧＣ−１００ｍ
（チッソ（株）製、球状タンパク質の排除限界分子量が
リガンド固定化後で３万）に変えた他は実施例１と同様
にしてヒドラジン固定化ゲル（吸着体）をえた。この吸
着体を用いて実施例１と全く同様にして吸着実験を行っ
た。結果を表１に示す。
【００８７】実施例９ 実施例４でえたメチルヒドラジン固定化ゲル１ｍｌを、
ポリプロピレン製小型カラムであるセパコールミニＰＰ
（生化学工業（株）製）に充填し、ここへ糖尿病患者の
血漿を６ｍｌ流した。速度はペリスタリックポンプで約
０．１ｍｌ／分に調整した。この流出液のフルクトサミ
ンを実施例１と同様に測定した。結果を表１に示す。
【００８８】実施例１０ 実施例１のエポキシ化ゲルの合成において２Ｍ水酸化ナ
トリウムの添加量を２５ｍｌ、エピクロルヒドリンの添
加量を８ｍｌに変えた他は全く同様に行い、エポキシ活
性化ゲルをえ、実施例１と全く同様にヒドラジン固定化
ゲルをえた。さらに実施例１と全く同様にケトアミン導
入ＢＳＡ溶液を用いた吸着実験を実施した。
【００８９】実施例１１ 実施例５のブチルアミンをパラフェニレンジアミンに代
えてパラフェニレンジヒドラジンをえた。
【００９０】抱水ヒドラジンをパラフェニレンジヒドラ
ジンに変えた他は実施例１と同様にしてパラフェニレン
ジヒドラジン固定化ゲル（吸着体）をえた。この吸着体
を用いて実施例１と全く同様にして吸着実験を行った。
結果を表１に示す。
【００９１】実施例１２ 文献（テトラヘドロン(Tetrahedron) 、２０巻、２０２
５頁、１９６４年参照）にしたがい、１，３−ペンタジ
エンより誘導した式：
【００９２】
【化２３】
【００９３】で示されるジクリシジルエーテルをエピク
ロルヒドリンの代わりに用い、その他は実施例１と同様
に以下の式で示される基を有するヒドラジン誘導体を固
定化し、前記ヒドラジン誘導体固定化ゲル（吸着体）を
えた。
【００９４】
【化２４】
【００９５】この吸着体を用いて実施例１と全く同様に
して吸着実験を行った。結果を表１に示す。
【００９６】比較例１ 抱水ヒドラジンをアミノグアニジンに変えた他は実施例
１と同様にしてアミノグアニジン固定化ゲルをえた。こ
の吸着体を用いて実施例１と全く同様にして吸着実験を
行った。結果を表１に示す。
【００９７】比較例２ 担体をセルロース系多孔質ゲルであるＧＣＬ−９０ｍ
（チッソ（株）製、球状タンパク質の排除限界分子量が
リガンド固定化後で１５０００）に変えた他は実施例１
と同様にしてヒドラジン固定化ゲルをえた。この吸着体
を用いて実施例１と全く同様にして吸着実験を行った。
結果を表１に示す。
【００９８】比較例３ 担体をセルロース系多孔質ゲルであるＧＣＬ−９０ｍ
（チッソ（株）製、球状タンパク質の排除限界分子量が
リガンド固定化後で１５０００）に変えた他は実施例４
と同様にしてメチルヒドラジン固定化ゲルをえた。この
吸着体を用いて実施例９と全く同様にして吸着実験を行
った。結果を表１に示す。
【００９９】
【表１】
【０１００】
【発明の効果】本発明の吸着体は安価であり、かつ体液
中に含まれるケトアミン含有タンパク質を効率よく吸着
除去することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のケトアミン含有タンパク質吸着器の一
実施例の概略断面図である。
【図２】３種類のゲルを用いて流速と圧力損失との関係
を調べた結果を示すグラフである。
【符号の説明】
１ 体液の流入口 ２ 体液の流出口 ３ ケトアミン含有タンパク質吸着体 ４、５ 体液および体液に含まれる成分は通過できるが
前記ケトアミン含有タンパク質吸着体は通過できないフ
ィルター ６ カラム
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) B01J 20/22 A61M 1/36 B01J 20/28

Claims (6)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 多孔質水不溶性担体に式： 【化１】 （式中、Ｒ1 が式： 【化２】 （式中、Ｐｈは 【化３】 を表し、Ｒ 3 およびＲ 4 がそれぞれ水素原子、ヒドロキシ
    ル基、アミノ基または炭素数１〜２０の置換基を表す）
    で示され、Ｒ 2 が水素原子または１〜２０の炭素原子を
    含む置換基である）で示される末端官能基を有する化合
    物を固定したことを特徴とするケトアミン含有タンパク
    質吸着体。
  2. 【請求項２】 前記多孔質水不溶性担体が親水性である
    請求項１記載のケトアミン含有タンパク質吸着体。
  3. 【請求項３】 前記多孔質水不溶性担体に−ＯＨで表さ
    れる末端官能基が存在する請求項１記載のケトアミン含
    有タンパク質吸着体。
  4. 【請求項４】 前記多孔質水不溶性担体の排除限界分子
    量が２万以上、５００万以下である請求項１記載のケト
    アミン含有タンパク質吸着体。
  5. 【請求項５】 請求項１記載のケトアミン含有タンパク
    質吸着体を、ケトアミン含有タンパク質を含む体液と接
    触させることを特徴とするケトアミン含有タンパク質除
    去方法。
  6. 【請求項６】 液の入口、出口を有し、かつケトアミン
    含有タンパク質吸着体の容器外への流出防止手段を備え
    た容器内に、請求項１記載のケトアミン含有タンパク質
    吸着体を充填してなるケトアミン含有タンパク質吸着
    器。
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