JP3312375B2 - 組換え麻疹タンパク質を用いる麻疹ウイルス特異的抗体の検出 - Google Patents
組換え麻疹タンパク質を用いる麻疹ウイルス特異的抗体の検出Info
- Publication number
- JP3312375B2 JP3312375B2 JP51872893A JP51872893A JP3312375B2 JP 3312375 B2 JP3312375 B2 JP 3312375B2 JP 51872893 A JP51872893 A JP 51872893A JP 51872893 A JP51872893 A JP 51872893A JP 3312375 B2 JP3312375 B2 JP 3312375B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- measles
- antigen
- recombinant
- protein
- igm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 title claims abstract description 63
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 42
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 27
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 title description 29
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 61
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 60
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 22
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 claims description 12
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 claims description 11
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 10
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 10
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 5
- 108700020497 Nucleopolyhedrovirus polyhedrin Proteins 0.000 claims description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 claims description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims 1
- 102000023891 IgM binding proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010008429 immunoglobulin-binding factors Proteins 0.000 claims 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 29
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 abstract description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 16
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 10
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 10
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 10
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 10
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 5
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 108010059722 Viral Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108010027796 Membrane Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018897 Membrane Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940036133 measles immunoglobulin Drugs 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003156 radioimmunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000201370 Autographa californica nucleopolyhedrovirus Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 description 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108091029795 Intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101150062031 L gene Proteins 0.000 description 1
- 108010028253 Measles virus nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101150084044 P gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000026279 RNA modification Effects 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000011948 assay development Methods 0.000 description 1
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002621 immunoprecipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002761 liquid phase assay Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 230000001459 mortal effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000002764 solid phase assay Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-HOSYLAQJSA-K trioxido(oxo)-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-][32P]([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-HOSYLAQJSA-K 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006656 viral protein synthesis Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1027—Paramyxoviridae, e.g. respiratory syncytial virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
- C12N2760/18422—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
用いる、麻疹特異的IgGおよびIgM抗体の検出に関する。
発現された麻疹抗原は、麻疹に感染した患者由来の免疫
グロブリンとの反応性を維持し、代替宿主におけるクロ
ーン化遺伝子の発現により生産される。次いで、これら
の抗原は、完全体麻疹ウイルス調製物またはそれらの誘
導体の代わりにアッセイで用いられ、ウイルスにさらさ
れた可能性のある患者中の抗麻疹抗体を検出する。この
抗原は、好ましくは、表面に直接的または間接的に(サ
ンドイッチアッセイにおけるように)固定化され、次い
で、血清試料とインキュベートされる。血清中の抗原結
合免疫グロブリンは、抗ヒト免疫グロブリン第二抗体の
ような標識抗体結合試薬により検出される。組換えバキ
ュロウイルス系が麻疹抗原の生産に好ましく、そしてこ
のような系で発現された麻疹ウイルスの核タンパク質遺
伝子が本発明のアッセイに特に好ましい。
は、特に発展途上国において当てはまり、世界的には各
年概算して7,000万の件数が報告されており、200万人の
子供が死亡している。
行っているにも関わらず未だとらえどころがない。ワク
チン欠乏またはワクチン接種の欠如の結果として、米国
において1990年では27,000件を越える麻疹件数が報告さ
れている。これは、1989年よりも50%多く、1988年に報
告されている件数のほぼ10倍近くである。Centers for
Disease Control(1990)Morbid.Mortal.Weekly Rep.3
9:353−363。
行している(頻繁に起こるその合併症と共に)ため、麻
疹の予防および治療の改良法、および相伴って診断の改
良法が引き続き必要とされている。
アッセイ形式において抗原としての完全体ウイルスの使
用を包含する。Whittaker Bioproducts,Inc.,により供
給される「MEASELISA」および「MEASLESTAT M」のよう
な市販の診断試験は、それぞれIgG抗体およびIgM抗体の
検出に対して利用可能であり、完全体ウイルス抗原とし
て、MK−2細胞中で増殖した麻疹ウイルスのEdmonston
ワクチン株を用いる。Botelerら(1983)J.Clin.Microb
iol.17:814−818。
た。これもまた、アッセイ抗原として、E−6 Vero細胞
中で増殖したEdmonstonワクチン株を用いる。Erdmanら
(1991)J.Clin.Microbiol.29:1466−1471。完全体ウイ
ルス捕獲EIAは「MEASLESTAT M」試験とは異なる。「MEA
SLESTAT M」試験では、「MEASLESTAT M」試験での患者
血清を、妨害するIgG抗体を除去するためにまず前処理
しなければならないが、捕獲EIAでは、抗ヒトIgM抗体を
用いて血清IgMのみが「捕獲」される。従って、血清前
処理を行わないので、捕獲EIAは使用がやや簡単であり
得る。
が高く実用的であるが、それらのすべてが細胞培養物由
来の完全体ウイルスに頼っている。不運にも、培養で増
殖した麻疹ウイルスは一般的に低力価で非常に可変性の
試薬を生じる。大量の純麻疹ウイルスをルーチン的に得
ることが困難であることは、費用が非常にかかり、麻疹
診断アッセイの実用性を損なわせる。完全体ウイルス抗
原の使用における元来の可変性に加え、感染材料の取り
扱いにおいて適切な施設および保護手段が用いられなけ
ればならない。従って、診断適用に適したウイルスまた
はウイルス抗原を大量に生産する、より安全で経済的、
かつ便利な方法が必要とされる。
クローン化遺伝子の発現を介した異種宿主細胞における
組換えタンパク質の生産である。このような系による生
産は、麻疹EIAでの使用に適した麻疹抗原の実質的に制
限されない供給源を提供することにより、診断EIAにお
ける完全体麻疹ウイルスの必要性を克服する。これはま
た、ワクチン接種した集団における血清転換(seroconv
ersion)の割合および血清有病率(seroprevelance)を
評価するのに充分な抗原を提供する。さらに、組換え法
によりタンパク質を発現させることはまた、バッチから
バッチへの変動を抑え、アッセイの較正および定量化が
非常に容易にする。
出に関してこれまで理解されていない。原核生物系およ
び単純真核生物系(例えば酵母)で発現されるタンパク
質は、しばしばそれらの天然相対物とは異なる免疫学的
特性を示す。このような違いのために、天然タンパク質
に結合する血清抗体の認識を必要とするアッセイにおけ
る組換えタンパク質の利用性が制限され得る。このよう
な問題を解決するために、組換えバキュロウイルスが、
高等真核生物における遺伝子の高レベルでの発現に用い
られた。生物学的に活性なタンパク質産物を生産するベ
クター構築の成功は、他のタンパク質に対して達成され
ており、これらのタンパク質の研究は、グリコシル化は
詳細には異なるが、翻訳後改変は挿入物および哺乳類細
胞において類似していることを示す。
タンパク質は、バキュロウイルス系におけるこのような
組換え手段により発現されるが、適切なグリコシル化が
損なわれている。Vialardら(1990)Journal of Virolo
gy 64:37−50。グリコシル化されていない核タンパク質
は、本発明に従ってバキュロウイルスで発現させること
により生産されると、確認されているウイルスタンパク
質とより密接に類似している。
改良方法を提供することである。
ための抗原を生産する方法を提供することである。
従って、患者中の麻疹特異的抗体を測定する方法が提供
される。この方法は以下の工程を包含する:(1)該患
者から得られる血清試料中の抗麻疹特異的免疫グロブリ
ンに結合し得る組換え麻疹抗原を提供する工程であっ
て、ここで該麻疹抗原が該抗原をコードする組換えDNA
を発現することにより生産される、工程;(2)該抗原
を直接的にまたは間接的に表面上に固定化する工程;
(3)該固定化抗原を、測定されるべき血清試料を含む
溶液と、該血清試料中の抗麻疹免疫グロブリンを該固定
化麻疹抗原に結合させるのに効果的な条件下で、インキ
ュベートする工程;および、(4)該固定化麻疹抗原に
結合した該免疫グロブリンを測定する工程。
原は、麻疹膜融合タンパク質、ヘマグルチニンタンパク
質、または核タンパク質であるタンパク質、または、そ
れらの誘導体である。この点において特に好ましいの
は、麻疹核タンパク質およびその誘導体である。
原が、該抗原をコードする組換えDNAにより発現され
る。ここで該組換えDNAは、該抗原をコードするcDNAに
作動可能に連結されるバキュロウイルスポリヘドリンプ
ロモーターを含み、該プロモーターによる該抗原の発現
は、Spodoptera frugiperda細胞中である。本発明のこ
の局面において特に好ましいのは、プラスミドpAcYM1S
−MVNである。
な説明から明らかになる。しかし、詳細な説明、特定の
実施例は、本発明の好ましい実施態様を示しているが、
本発明の意図および範囲内での種々の変化および改変は
この詳細な説明から当業者に明らかになるので、これら
は例示のためにのみ与えられていることが理解されるべ
きである。
麻疹ウイルスを用いる、間接IgG EIA結果の比較を示
す。麻疹ウイルスまたはワクチンに予めさらしたおよび
さらさなかったヒト由来の160個の血清標本をアッセイ
した。直線は、直線回帰に適合した(R:=0.80)。
麻疹ウイルスを用いる、捕獲IgM EIA結果の比較を示
す。臨床的に麻疹の感染を受けたヒト由来の25個の急性
期(○)および回復期(●)の血清のペアをアッセイし
た。直線は、直線回帰に適合した(R2=0.85)。
バキュロウイルス発現ベクターpAcYM1Sへの挿入のため
の、サブクローニング方法を示す模式図である。制限エ
ンドヌクレアーゼ消化は、示されるように行った。ハッ
チング領域および点描領域は、それぞれ麻疹核タンパク
質およびバキュロウイルスポリヘドリン遺伝子のコーデ
ィング領域を表す。
グラムである。この結果は、組換え核タンパク質が、確
認されている核タンパク質と同じ電気泳動度および抗原
性を有することを実証する。
ローニングされた麻疹融合遺伝子およびヘマグルチニン
遺伝子の連結接合を示す模式図である。
の方法の欠点の多くが克服される。これは、本方法が、
酵素イムノソルベントアッセイ[「EIA」]および他の
免疫学的アッセイにおけるより感度の高い検出因子とし
て機能する組換え麻疹抗原を容易に生産させ得ることに
よる。
築を包含する。ここでは、抗原と考えられるタンパク質
をコードするDNA配列が、転写に適切なシス作用制御シ
グナルの制御下で存在し、そしてこのプラスミドDNAが
適当な宿主細胞に導入されて、適切な発現条件が提供さ
れるとき、抗原が形質転換細胞で生産される。
現ベクターを形成する方法、および遺伝子によりコード
されるタンパク質を異種宿主中で発現させる方法は周知
であり、そしてこれらの手法は、本発明に従って用いら
れ、麻疹抗原をコードするクローン化遺伝子を宿主内で
発現させて、とりわけ診断アッセイで用いる組換え抗原
を生産するための、発現媒体(vehicle)、宿主細胞な
どを提供し得ることが理解される。例えば、Sambrook
ら,MOLECULAR CLONING,A LABORATORY MANUAL,第2版,Vo
l.1−3(Cold Spring Harbor Laboratory,1989)を参
照のこと、そして文献は以下に援用されている。
チドのRNAで構成されており、すなわち、このゲノムは
メッセンジャーRNAとして機能しないが、ウイルスタン
パク質合成のための相補的モノシストロンメッセージに
転写されなければならない。麻疹ゲノムの遺伝子順序
は、3'N,P/V/C,M,F,HA,L 5'である。N遺伝子は核タン
パク質、またはNタンパク質をコードしている。P、
V、C遺伝子は、同じヌクレオチド配列内で、重複する
オープンリーディングフレームのRNA修正または受け入
れにより、3つのタンパク質、すなわち、リンタンパク
質、Vタンパク質、およびCタンパク質をそれぞれコー
ドしている。M遺伝子は、マトリックス(または膜)タ
ンパク質をコードし、これはウイルス集合および発芽に
関連している。F遺伝子およびHA遺伝子は、それぞれ融
合タンパク質およびヘマグルチニンタンパク質をコード
し、これらはエンベロープ融合および宿主細胞認識に関
連した膜貫通糖タンパク質である。L遺伝子は、大きな
ポリメラーゼタンパク質をコードする。これらは、ゲノ
ムの3'末端に位置する麻疹ウイルスゲノム中のただ1個
のプロモーターであると考えられる。そしてメッセンジ
ャーRNA(mRNA)の合成は、NのmRNAが最も豊富であ
り、LのmRNAが最も豊富でない勾配を形成する。従っ
て、感染細胞では、Nタンパク質が最も豊富なタンパク
質であり、そしてこのタンパク質との免疫応答が感染初
期に起こる。これらの理由のため、Nタンパク質の組換
え源は、麻疹ウイルスに対する抗体の検出のためのELIS
Aアッセイの開発の目的に望ましいと考えられた。本発
明に用いるのに適した抗原は、麻疹ウイルスにさらされ
たまたは感染した患者の任意の麻疹特異的抗体と組み合
わされる任意の麻疹タンパク質を包含する。本発明の好
ましい抗体は、麻疹ウイルスにさらされたまたは感染し
た患者において免疫応答を優先的に引き起こし、従っ
て、典型的には患者の抗体により最も容易に認識される
抗原を包含する。本発明の特に好ましい抗体は、麻疹ウ
イルスの膜融合タンパク質およびヘマグルチニンタンパ
ク質を包含する。最も好ましい抗原のなかには、麻疹核
タンパク質がある。この抗原は、ヒトT細胞応答の主要
な標的として同定されている。
であり得ることがさらに理解される。分子生物学におけ
る周知の手法が、麻疹抗原のアミノ酸配列を変えて、本
発明に従って用いられ得る抗原の改変型を生産するため
に用いられ得る。
有用である。例えば、タンパク質のアミノ酸配列の変化
は、そのグリコシル化またはリン酸化のパターンを変化
させ得る。このような手法はまた、とりわけ組換え発現
タンパク質の効果的な発現または精製の助けとなる特異
的な機能部分を提供するのに有用である。従って、本発
明によれば、完全な一揃いの組換えDNA法が、抗麻疹免
疫グロブリンを検出するのに有用な抗原を提供するため
に用いられ得ることが理解される。
現系が用いられ得る。例えば、E.coli、B.subtilis、酵
母、昆虫および哺乳類細胞中で、タンパク質を生産する
のに適した種々の発現ベクターが記載されており、その
いずれもが本発明に従って用いられて、さらされた患者
において抗麻疹抗体を検出するのに適した麻疹抗原を生
産し得る。しかし、より原子的な系(例えば細菌および
酵母)での発現は高レベルのタンパク質を生じるが、抗
原性に重要な翻訳後改変がしばしば行われない。これに
対して、タンパク質の完全性を維持する哺乳類系は、し
ばしば低収量になる。従って、本発明の発現系のなかで
は、バキュロウイルス発現系が非常に好ましい。このバ
キュロウイルス発現系は、大量の外来タンパク質を発現
するのに用いられ得、必要なプロセシングを提供し得
る。この点に関して特に好ましいのは、ポリヘドリンプ
ロモーターを利用して麻疹抗原の発現を指示するバキュ
ロウイルス発現系である。Matsuuraら,(1987)J.Gen.
Virol.68:1233−1250。
を検出するための種々の免疫学的アッセイにおいて用い
られ得る。事実上、本発明による抗原が、麻疹特異的抗
体の検出のためのいずれもの免疫学的アッセイにおい
て、実用的に天然ウイルスの代わりに用いられ得ること
が当業者には容易に理解される。
イ、サンドイッチアッセイ、固相アッセイ(例えば、特
にプレートまたはビーズを用いるアッセイ)、および液
相アッセイを包含する。本発明における使用に適したア
ッセイは、第一抗体および第二抗体を用いるアッセイ、
およびプロテインAのような抗体結合試薬を用いるアッ
セイを包含する。さらに、種々の検出法が本発明で用い
られ得る。この検出法には、比色分析法、蛍光法、リン
光法、化学発光法、発光法、および放射標識法が包含さ
れる。
る。
tonワクチン株)の核タンパク質遺伝子の一部をコード
している)を共に連結し、バキュロウイルス発現ベクタ
ーpAcYM1Sへの挿入に適した完全長オープンリーディン
グフレームを生成する。
り、図3に示すように、最初のフレーム内AUGから7塩
基対上流で始まり、終止コドン、遺伝子間領域、および
P遺伝子の最初の200ヌクレオチドまで伸長する部分で
あった。
V)およびベクターDNAの培養したSpodoptera frugiperd
a細胞(Sf9)へのトランスフェクションは、Summersお
よびSmith(1987)Texas Agricultural Experiment Sta
tion.Bulletin No.1555に記載のように、リン酸カルシ
ウム沈降法を用いて行った。
タンパク質遺伝子のcDNAプローブを用いるドットブロッ
トハイブリダイゼーションに基づく選択の操作を1回行
って、組換えバキュロウイルスを単離し、2回プラーク
させることによりこれを精製した。連続スクリーニング
の各回をポジティブ免疫蛍光により確認し、核タンパク
質に対するマウスモノクローナル抗体およびイソチオシ
アネート結合第二抗体を用いて、アセトン固定した細胞
で観察した。
発現により得られた核タンパク質の特性を確認されてい
るウイルスタンパク質と比較するために行った。放射標
識した感染細胞ライゼートを、核タンパク質特異的モノ
クローナル抗体で免疫沈降し、そして免疫複合体を4〜
20%のグラジエントゲルを通してSDS−PAGEにより分析
し、フルオログラフィーにより可視化した。これらの実
験の結果を図4に示す。
ウイルスに感染させたSf9細胞のライゼートを[32P]オ
ルトリン酸で放射標識し、2つの核タンパク質特異的モ
ノクローナル抗体、81I168および83VIIKK2で免疫沈降し
た時に得られた免疫沈降物質を示す。
バキュロウイルスに感染させたSf9細胞のライゼートを
[35S]メチオニンで放射標識し、核タンパク質特異的
モノクローナル抗体、81I168または83VIIKK2でそれぞれ
免疫沈降した時に得られた免疫沈降物質を示す。
らしたときに、Edomonston麻疹ウイルス感染CV−1細胞
ライゼートを[35S]メチオニンで放射標識し、核タン
パク質特異的モノクローナル抗体、81I168および83VIIK
K2で免疫沈降した時に得られた免疫沈降物質を示す。
ライゼートを[35S]メチオニンで放射標識し、バキュ
ロウイルス生産麻疹核タンパク質に対してマウスで生じ
た抗血清で免疫沈降した時に得られた免疫沈降物質を示
す。
ン株と同じように移動しており、そしてこれはリン酸化
されていた。これは免疫蛍光アッセイおよび放射性免疫
沈降アッセイの両方で一区画のモノクローナル抗体と反
応性であり、そして免疫原性であって、マウスにおいて
天然核タンパク質を認識する抗血清を誘起した。つま
り、麻疹ウイルスのEdmonston株から得られた核タンパ
ク質は、バキュロウイルス発現系においてクローン化核
タンパク質遺伝子を発現させることにより得られた核タ
ンパク質とは、区別し得なかった(電気泳動移動度およ
び抗体認識により規定されるエピトープの維持に関し
て)。
EIA. 抗原として組換え核タンパク質を用いる間接的IgG EI
Aを、Erdmanら(1990),J.Clin.,Microbiol.29:1466−1
471に記載されている麻疹ウイルスのEdmonston株を用い
るアッセイの改変により実施した。
ュロウイルスに感染させ、感染後72時間で回収した。細
胞懸濁液をPBS(pH7.2)で2回洗浄し、細胞密度を5.0
×106細胞/mlに調整し、3回凍結−溶解を繰り返した。
大きな細胞デブリを低速遠心分離(500×g、15分間)
により沈殿させて、上清を集め、使用するまで−70℃で
貯蔵した。ネガティブコントロール抗原のために、非感
染細胞を同様に処理した。
プレート(例えば「IMMULON II」プレート)を被覆する
ために、1:100から1:1000の範囲で希釈して用いた。非
感染細胞ライゼートを2組のウエルに入れて実行し、ネ
ガティブコントロールとして扱った。1.5時間インキュ
ベートした後、プレートを0.01M PBS(pH7.2)/0.05%
Tween 20(「PBS/T」)で5回洗浄した。試験血清を、
正常ヤギ血清(例えば「DIFCO」から得られる)を4%
で、そして非感染Sf9細胞を10%で加えた0.01M PBS(pH
7.2)/0.5% ゼラチン/0.15% Tween 20(「PBS/G
T」)で1:100に希釈し、3組のウエル中で37℃で1時間
インキュベートした。標準血清力価測定が、各実行中に
包含される。
ワサビペルオキシダーゼをPBS/GTで1:3000から1:5000ま
でで希釈し、ウエルに加えて、37℃で1時間インキュベ
ートした。次いで、プレートをPBS/Tで3回洗浄し、酵
素基質TMB、3,3',5,5'テトラメチルベンジジン(例えば
「SIGMA」から得られる)と共に室温で15分間インキュ
ベートし、そして反応を75μlの2Mリン酸で停止した。
比色分析の読みとりを、自動マイクロタイタープレート
リーダー(この場合はDynatech MR5000リーダー)を用
い、450nmで測定した。
のP−N値は、各血清標本に対する核タンパク質
(「P」)および正常Sf9細胞(「N」)の2組のウエ
ル間の吸光度測定値の平均の差として定義した。
ク中和抗体を含まない一区画の20個のコントロール標本
の平均値+3標準偏差として得た。組換え核タンパク質
を用いる間接的IgGアッセイに対して選択されたカット
オフ値は、P−N=0.09であった。高いバックグラウン
ドシグナルを有する標本の場合を考慮すると、P/N比≧
3であることもまた必要であった。
体ウイルスEIAによりポジティブであった血清標本の99
%(129/131)で麻疹特異的抗体を検出した。これらの
結果は、市販のEIAを用いて同じ標本(特に低い抗体力
価で)をアッセイして得られた結果よりも、中和抗体の
存在とよりよく関連づけられた。さらに、完全体ウイル
スEIAにより検出可能なIgG抗体が存在しない27個の標本
もまた、N組換えEIAによりネガティブであった。
A. 抗原として組換え核タンパク質を用いる捕獲IgM EIA
を、Erdmanら(1990),J.Clin.,Microbiol.29:1466−14
71に記載されている麻疹ウイルスのEdmonston株を用い
るアッセイの改変により実施した。
ANON TEKNIKA CORP.」から得られる)を、0.01M PBS(p
H7.2)で1:800に希釈し、75μlをマイクロタイタープ
レート(例えば「IMMULON II」プレート)のウエルに加
えた。湿潤させたチャンバー中で37℃で1時間インキュ
ベートした後、プレートをPBS/Tで3回洗浄した。PBS/G
Tで1:200に希釈した試験血清の75μlを3組のウエルに
加え、37℃で1時間インキュベートした。次いで、プレ
ートをPBS/Tで3回洗浄した。
3%デオキシコール酸ナトリウムを加えたPBS/GTで1:250
に希釈し、ウエルに加え、37℃で2時間インキュベート
した。非感染細胞ライゼートをネガティブコントロール
として扱い、2組のウエルに入れて実行した。
1:5000に希釈した75μlのビオチニル化抗核タンパク質
モノクローナル抗体と37℃で1時間インキュベートし
た。PBS/GTで1:3000に希釈した75μlのストレプトアビ
ジンペルオキシダーゼ(例えば「AMERSHAM INTERNATION
AL」から得られる)を加え、37℃で20分間インキュベー
トした。
5,5'テトラメチルベンジジン(例えば「SIGMA」から得
られる)と共に室温で15分間インキュベートし、そして
反応を75μlの2Mリン酸で停止した。比色分析の読みと
りを、Dynatech MR5000リーダーを用い、450nmで測定し
た。
のP−N値は、各血清標本に対する核タンパク質
(「P」)および正常Sf9細胞(「N」)の2組のウエ
ル間の吸光度測定値の平均の差として定義した。
ク中和抗体を含まない一区画の20個のコントロール標本
の平均値+3標準偏差として得た。組換え核タンパク質
を用いる捕獲IgMアッセイに対して選択されたカットオ
フ値は、P−N=0.21であった。P/N比≧3であること
もまた、高いバックグラウンドシグナルを有する標本の
場合を考慮するのに必要とされた。
る捕獲IgM EIAの感度を、臨床的に麻疹ウイルスの感染
を受けたヒト由来の25個の急性期および回復期の血清の
ペアを用いて比較した(図2)。IgM抗体を、組換え核
タンパク質EIAにより、18個(72%)の急性期標本で検
出した。22個(88%)の急性期標本(組換え核タンパク
質EIAによりポジティブであった18個の標本を含む)
は、完全体ウイルスでポジティブであった。すべての回
復期標本が、両アッセイによりIgM抗体に対してポジテ
ィブであった。組換え核タンパク質捕獲EIAの特異性
は、健常者および他のパラミクソウイルス感染者由来の
120個の血清標本を試験することにより決定した。これ
らのうち、1人(<1%)が、組換え核タンパク質EIA
および完全体ウイルスEIAにより検出可能なIgM抗体を有
していた。
スよりも組換え核タンパク質を用いるとより正確であっ
た. 麻疹ウイルスまたはワクチンに既にさらされたまたは
感染した経歴があるヒトおよび経歴がないヒトから採取
した160個の血清標本を、図1に示すように、N組換えE
IAおよび完全体ウイルスEIAによりIgG抗体に対して同時
に試験した。特異的IgG抗体を、N組換えEIAによって、
完全体ウイルスEIAによりポジティブであった131個の標
本のうち129個(99%)で検出した。完全体ウイルスEIA
によって検出可能なIgG抗体が存在しないすべての27個
の標本もまた、組換えEIAによりネガティブであった。
プラーク中和抗体に対して既に試験されている268個の
血清標本もまた、N組換えEIAおよび市販のEIA(「MEAS
ELISA」)により、特異的IgG抗体に対して試験した。Al
brechtら(1981)J.Virol.Methods 3:251−260およびO
rensteinら(1987)J.Infect.Dis.155:146−149を参照
のこと。
IAにより得られた値より、特に低レベルの中和抗体で、
中和抗体の存在とよく一致した。
うち48個(44%)がN組換えEIAによりポジティブであ
った。これに対して、市販のEIAでは、11個(10%)の
みがポジティブであった。全体的には、中和抗体に対し
てポジティブであった223個の標本のうち137個(61%)
がN組換えEIAによりポジティブであり、そして88個(4
0%)が市販のEIAによりポジティブであった。検出可能
な中和抗体が存在しない45個の標本のうち、1個(2
%)が各アッセイによりポジティブであった。
麻疹融合タンパク質およびヘマグルチニンタンパク質を
用いるEIAの可能性. ヘマグルチニンおよび融合タンパク質は、麻疹ビリオ
ンの2つの膜貫通エンベロープ糖タンパク質である。ヘ
マグルチニンは、宿主細胞付着および赤血球の凝集の原
因になる。融合タンパク質はウイルス進入および溶血に
必要である。両タンパク質に対する中和抗体は、一生の
免疫を確立する役割を有している。VIROLOGY,第2版,Fi
eldsら編,Raven Press,New York(1990)のVol.1,1013
〜1044頁を参照のこと。
発現はまた、麻疹特異的抗体の検出のためのアッセイに
用いる組換え抗原の供給源を提供する。さらに、核タン
パク質と組み合わせにおけるそれらの使用は、例えば、
麻疹ウイルスに対する抗体の検出において酵素イムノア
ッセイの感度を増大し得た。
に、ヘマグルチニンおよび融合タンパク質に対する遺伝
子をまず適切な発現ベクター中にクローニングした。Ed
monstonワクチン株のヘマグルチニン遺伝子を表す1.949
kbのcDNAクローンをバキュロウイルス転移ベクターpAcY
M1Sに連結し、完全長のオープンリーディングフレーム
をポリヘドリン遺伝子の転写リーダー配列の下流に提供
する。(図5)。
ーンを一緒に連結し、完全長のコーディング領域を提供
した。この領域は、長さ1.726kbであり、発現に適して
いた(図5)。
フェクションを、SummersおよびSmith(1987)Texas Ag
ricultural Experiment Station.Bulletin No.1555Aに
記載の手順に従う、リン酸カルシウム沈降法により行っ
た。
対するドットブロットハイブリダイゼーションとを2回
繰り返した後、組換えバキュロウイルスを単離し、プラ
ーク精製した。連続スクリーニングの各回でポジティブ
免疫蛍光を行って確認し、マウスモノクローナル抗体お
よび蛍光イソチオシアネート結合第二抗体を用いて、ア
セトン固定した細胞で観察した。放射性免疫沈降後、組
換え糖タンパク質は、SDS−PAGE上でEdmonstonのタンパ
ク質と同じように移動したが、Vialardら(1990)Journ
al of Virology 64:37−50により既に特徴付けされるよ
うに、グリコシル化は明らかに異なっていた。
低レベルであることが観察された。これは翻訳後改変が
多く起こっているためである。細胞ライゼートを用いる
予備的EIAで低レベルの発現が得られた結果として、組
換え糖タンパク質は、正確度の高いアッセイに充分なバ
ックグラウンド比に対するシグナルを提供しなかった。
の組換えタンパク質をさらに精製し濃縮することが望ま
しいとされ得る。この目的で用いられ得る種々の精製法
は周知であり、種々の種類のアフィニティークロマトグ
ラフィーを含むが、これに限定されない。
Claims (7)
- 【請求項1】以下の工程を包含する、ヒト血清試料中の
麻疹特異的免疫グロブリンを検出するためのイムノアッ
セイ方法: (i)該試料を、麻疹特異的免疫グロブリンにより認識
される少なくとも1つのエピトープを含む固定化組換え
麻疹核タンパク質抗原と接触させる工程であって、該接
触が、該免疫グロブリンおよび該固定化抗原の結合が行
われる条件下である、工程;および (ii)該固定化抗原に結合した麻疹特異的免疫グロブリ
ンの存在を検出する工程。 - 【請求項2】以下の工程を包含する、ヒト血清試料中の
麻疹特異的免疫グロブリンIgMを検出するための捕獲イ
ムノアッセイ方法: (i)該試料を、固定化精製抗ヒトIgM捕獲抗体と、該I
gMおよび該固定化抗体の結合が行われる条件下で、接触
させる工程; (ii)該捕獲されたIgMを、該IgMにより認識される少な
くとも1つのエピトープを含む組換え麻疹核タンパク質
と、該核タンパク質および該捕獲されたIgMの結合が十
分に行われる条件下で接触させる工程;および (iii)該捕獲されたIgMに結合した核タンパク質の存在
を検出する工程。 - 【請求項3】工程(iii)が、IgM結合タンパク質を、検
出し得る標識に結合した抗原タンパク質モノクローナル
抗体と、両者間を十分に結合させる条件下で接触させる
工程、および結合した標識の存在を検出する工程を包含
する、請求項2に記載の方法。 - 【請求項4】前記捕獲抗体が、プレート表面に間接的に
固定することにより固定化される、請求項2に記載の方
法。 - 【請求項5】前記抗原が、表面に間接的に固定すること
により固定化される、請求項1に記載の方法。 - 【請求項6】前記核タンパク質が、該核タンパク質をコ
ードするDNA分子に作動可能に連結されたバキュロウイ
ルスポリヘドリンプロモーターを含む組換えDNA配列で
トランスフェクトされた細胞により発現される、請求項
1から5のいずれかに記載の方法。 - 【請求項7】前記細胞がSpodoptera frugiperdaであ
る、請求項6に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US87301792A | 1992-04-24 | 1992-04-24 | |
US07/873,017 | 1992-04-24 | ||
PCT/US1993/003833 WO1993022683A1 (en) | 1992-04-24 | 1993-04-23 | Measles virus-specific antibody detection using recombinant measles proteins |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH08500179A JPH08500179A (ja) | 1996-01-09 |
JP3312375B2 true JP3312375B2 (ja) | 2002-08-05 |
Family
ID=25360827
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP51872893A Expired - Fee Related JP3312375B2 (ja) | 1992-04-24 | 1993-04-23 | 組換え麻疹タンパク質を用いる麻疹ウイルス特異的抗体の検出 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0638174B1 (ja) |
JP (1) | JP3312375B2 (ja) |
AT (1) | ATE155890T1 (ja) |
AU (1) | AU680821B2 (ja) |
CA (1) | CA2118510C (ja) |
DE (1) | DE69312485T2 (ja) |
DK (1) | DK0638174T3 (ja) |
ES (1) | ES2108872T3 (ja) |
GR (1) | GR3024899T3 (ja) |
WO (1) | WO1993022683A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999012038A1 (en) * | 1997-09-01 | 1999-03-11 | Muller Claude P | Detection of measles virus-specific antibodies |
JP2010122205A (ja) * | 2008-08-29 | 2010-06-03 | Sysmex Corp | 麻疹ウイルス検出方法、メンブレンアッセイ用試験具およびメンブレンアッセイ用試験キット |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IE872748L (en) * | 1986-10-16 | 1988-04-16 | Arjomari Europ | Polypeptides derived from the evvelope gene of human¹immunodeficiency virus in recombinant baculovirus infected¹insect cells |
AP114A (en) * | 1987-02-19 | 1991-02-01 | Oxford Virology Ltd | Production of bluetongue virus antigens using a baculovirus expression vector. |
WO1993021325A1 (en) * | 1992-04-08 | 1993-10-28 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Wild-type measles virus glycoproteins: vaccine and detection method therefor |
-
1993
- 1993-04-23 ES ES93910753T patent/ES2108872T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-23 EP EP93910753A patent/EP0638174B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-23 DE DE69312485T patent/DE69312485T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-23 JP JP51872893A patent/JP3312375B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-23 AT AT93910753T patent/ATE155890T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-04-23 AU AU41137/93A patent/AU680821B2/en not_active Ceased
- 1993-04-23 DK DK93910753.8T patent/DK0638174T3/da active
- 1993-04-23 CA CA002118510A patent/CA2118510C/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-23 WO PCT/US1993/003833 patent/WO1993022683A1/en active IP Right Grant
-
1997
- 1997-10-01 GR GR970402546T patent/GR3024899T3/el unknown
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
J.GEN.VIROL.,Vol.70,No.2(1989)p.435−441 |
J.MED.VIROL.,Vol.14,NO.2(1984)p.149−158 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE155890T1 (de) | 1997-08-15 |
CA2118510A1 (en) | 1993-11-11 |
EP0638174B1 (en) | 1997-07-23 |
ES2108872T3 (es) | 1998-01-01 |
AU4113793A (en) | 1993-11-29 |
GR3024899T3 (en) | 1998-01-30 |
CA2118510C (en) | 1998-12-15 |
DE69312485D1 (de) | 1997-08-28 |
JPH08500179A (ja) | 1996-01-09 |
DK0638174T3 (da) | 1997-10-20 |
EP0638174A1 (en) | 1995-02-15 |
DE69312485T2 (de) | 1998-01-15 |
WO1993022683A1 (en) | 1993-11-11 |
AU680821B2 (en) | 1997-08-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Hummel et al. | Baculovirus expression of the nucleoprotein gene of measles virus and utility of the recombinant protein in diagnostic enzyme immunoassays | |
JP4813471B2 (ja) | ハンタウイルス感染の診断のための方法および試薬 | |
US5316910A (en) | Bioassay for influenza A and B nucleoprotein | |
von Messling et al. | Rapid and sensitive detection of immunoglobulin M (IgM) and IgG antibodies against canine distemper virus by a new recombinant nucleocapsid protein-based enzyme-linked immunosorbent assay | |
Sjölander et al. | Evaluation of serological methods for diagnosis of Puumala hantavirus infection (nephropathia epidemica) | |
King et al. | Evaluation of the hemagglutination-inhibition test for measuring the response of chickens to avian infectious bronchitis virus vaccination | |
EP1186890B1 (en) | Srsv detection kit | |
Warnes et al. | Production of measles nucleoprotein in different expression systems and its use as a diagnostic reagent | |
US5965354A (en) | Herpes simplex virus diagnostics | |
Nikkari et al. | One-incubation time-resolved fluoroimmunoassay based on monoclonal antibodies in detection of influenza A and B viruses directly in clinical | |
US20230375548A1 (en) | Indirect enzyme-linked immunosorbent assay detection kit based on p30 protein and p22 protein of african swine fever virus | |
JP3312375B2 (ja) | 組換え麻疹タンパク質を用いる麻疹ウイルス特異的抗体の検出 | |
Chiodi et al. | Measles IgM antibodies in cerebrospinal fluid and serum in subacute sclerosing panencephalitis | |
KR101032956B1 (ko) | 수청바이러스 유래 뉴클레오캡시드 단백질을 이용하여 신증후출혈열 특이 IgM과 IgG를 검출하는 신속 진단 키트 | |
Pohl-Koppe et al. | Detection of human coronavirus 229E-specific antibodies using recombinant fusion proteins | |
Potgieter et al. | Quantitation of canine distemper virus and antibodies by enzyme-linked immunosorbent assays using protein A and monoclonal antibody capture | |
JP2022027498A (ja) | さまざまなウイルスのための多重迅速検出キットおよび方法 | |
EP0839184B1 (en) | Synthetic hpv11 virus-like particles | |
Liu et al. | Production of a fragment of glycoprotein G of herpes simplex virus type 2 and evaluation of its diagnostic potential | |
Hornsleth et al. | Sensitive enzyme immunoassay for the rapid diagnosis of influenza A virus infections in clinical specimens | |
Machado et al. | Expression of recombinant Araraquara Hantavirus nucleoprotein in insect cells and its use as an antigen for immunodetection compared to the same antigen expressed in Escherichia coli | |
JP4084403B2 (ja) | 鳥インフルエンザ感染の検査方法 | |
US20050221299A1 (en) | Peptide from the glycoprotein B from human herpesvirus 7 for use in a serological ELISA test | |
JPH11346768A (ja) | イヌジステンパーウイルスヌクレオカプシド蛋白質の抗原性を有する蛋白質及び抗イヌジステンパーウイルスヌクレオカプシド蛋白質抗体測定試薬 | |
JPH0862217A (ja) | 酵素免疫定量法用プレート |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080531 Year of fee payment: 6 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090531 Year of fee payment: 7 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100531 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110531 Year of fee payment: 9 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |