JP3205899B2 - 糖尿病又は腎不全に伴う合併症の診断試薬 - Google Patents
糖尿病又は腎不全に伴う合併症の診断試薬Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、特定のピリジニウ
ム化合物を主たる成分とする糖尿病又は腎不全に伴う合
併症の診断試薬に関するものである。
ム化合物を主たる成分とする糖尿病又は腎不全に伴う合
併症の診断試薬に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】周知のように、糖と蛋白アミンとのメイ
ラード反応については、まずそれら糖と蛋白アミンとの
非酵素的反応（グリケーション）によってシッフ塩基が
形成され、このシッフ塩基からアマドリ転位反応により
比較的短期間にメイラード反応前期生成物であるケトア
ミンが形成され、更に種々の段階をへてメイラード反応
後期生成物が産生される。
ラード反応については、まずそれら糖と蛋白アミンとの
非酵素的反応（グリケーション）によってシッフ塩基が
形成され、このシッフ塩基からアマドリ転位反応により
比較的短期間にメイラード反応前期生成物であるケトア
ミンが形成され、更に種々の段階をへてメイラード反応
後期生成物が産生される。
【０００３】このメイラード反応前期生成物としては、
臨床的には糖化ヘモグロビン（ＨｂＡｌｃ）や糖化アル
ブミン（フルクトサミン）が、血糖コントロールの指標
として利用されている。
臨床的には糖化ヘモグロビン（ＨｂＡｌｃ）や糖化アル
ブミン（フルクトサミン）が、血糖コントロールの指標
として利用されている。
【０００４】一方、メイラード反応後期生成物は、コラ
ーゲン、神経ミエリンや水晶体等生体の代謝回転の遅い
蛋白で生成され、長期高血糖状態（糖尿病）により増加
することも知られており、糖尿病において最も特徴的変
化である持続性高血糖状態が、なぜ糖尿病に特異的であ
る慢性合併症を引き起こすかを説明する仮説として、こ
のメイラード反応後期生成物がその成因として注目され
ると共に、その産生を阻害することによって合併症の発
症や進展を阻止し得る可能性が示唆されてきた。
ーゲン、神経ミエリンや水晶体等生体の代謝回転の遅い
蛋白で生成され、長期高血糖状態（糖尿病）により増加
することも知られており、糖尿病において最も特徴的変
化である持続性高血糖状態が、なぜ糖尿病に特異的であ
る慢性合併症を引き起こすかを説明する仮説として、こ
のメイラード反応後期生成物がその成因として注目され
ると共に、その産生を阻害することによって合併症の発
症や進展を阻止し得る可能性が示唆されてきた。
【０００５】又、メイラード反応後期生成物の血中、尿
中や組織中の濃度を測定することによる、合併症の診断
への可能性が期待されている。
中や組織中の濃度を測定することによる、合併症の診断
への可能性が期待されている。
【０００６】メイラード反応後期生成物の構造体として
報告されているものに、ピラリン、ペントシジン、クロ
スリン等があり、これらのうちのピラリンは、ネオペン
チルアミンとグルコースの反応物より分離、構造決定さ
れ、糖尿病患者の血中では増加していると報告されてい
るが、蛍光性を持たず、主要なメイラード反応後期生成
物ではないともいわれている。
報告されているものに、ピラリン、ペントシジン、クロ
スリン等があり、これらのうちのピラリンは、ネオペン
チルアミンとグルコースの反応物より分離、構造決定さ
れ、糖尿病患者の血中では増加していると報告されてい
るが、蛍光性を持たず、主要なメイラード反応後期生成
物ではないともいわれている。
【０００７】ペントシジンは、リジン、アルギニンやリ
ボースの反応物より分離、構造決定されたもので、糖尿
病や腎不全患者の皮膚コラーゲンでは増加しており、特
に腎不全患者の血中では顕著に増加するが、メイラード
反応後期生成物による蛋白間全架橋の１％以下しか寄与
しておらず、主要なメイラード反応後期生成物として
は、なお疑問が残るといわれている。
ボースの反応物より分離、構造決定されたもので、糖尿
病や腎不全患者の皮膚コラーゲンでは増加しており、特
に腎不全患者の血中では顕著に増加するが、メイラード
反応後期生成物による蛋白間全架橋の１％以下しか寄与
しておらず、主要なメイラード反応後期生成物として
は、なお疑問が残るといわれている。
【０００８】又、クロスリンはアセチルリジンとグルコ
ースの反応物より分離、構造決定されたが、未だ糖尿病
態との関連は明らかではない。
ースの反応物より分離、構造決定されたが、未だ糖尿病
態との関連は明らかではない。
【０００９】このように、これまでに開発されたメイラ
ード反応後期生成物測定法より得られた知見は、生体内
メイラード反応後期生成物の増量と各種組織障害との間
には密接な因果関係があることを強く示唆しているが、
未だ生体内の主要メイラード反応後期生成物の化学構造
は不明である。
ード反応後期生成物測定法より得られた知見は、生体内
メイラード反応後期生成物の増量と各種組織障害との間
には密接な因果関係があることを強く示唆しているが、
未だ生体内の主要メイラード反応後期生成物の化学構造
は不明である。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記のよう
な従来技術の現状に鑑み、各種組織障害との間に密接な
因果関係を有する生体内メイラード反応後期生成物の構
造を特定すると共に、この化合物を主たる成分とする糖
尿病又は腎不全に伴う合併症の診断試薬を提供すること
を目的としてなされた。
な従来技術の現状に鑑み、各種組織障害との間に密接な
因果関係を有する生体内メイラード反応後期生成物の構
造を特定すると共に、この化合物を主たる成分とする糖
尿病又は腎不全に伴う合併症の診断試薬を提供すること
を目的としてなされた。
【００１１】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明は、式、
に、本発明は、式、
【化３】 で表されるピリジニウム化合物を主たる成分として含有
することを特徴とする糖尿病又は腎不全に伴う合併症の
診断試薬を提供する。
することを特徴とする糖尿病又は腎不全に伴う合併症の
診断試薬を提供する。
【００１２】即ち、本発明者等は、新規でかつ病態の変
化を反映する新規な生体内の主要なメイラード反応後期
生成物を発見するために鋭意研究を行った結果、新規な
蛍光化合物を発見し、更に研究を続行して当該化合物が
上記構造を有するピリジニウム化合物であることを確認
し、更にこのピリジニウム化合物が糖尿病又は腎不全に
伴う合併症の診断試薬として有用であるとの知見を得、
本発明を完成したものである。
化を反映する新規な生体内の主要なメイラード反応後期
生成物を発見するために鋭意研究を行った結果、新規な
蛍光化合物を発見し、更に研究を続行して当該化合物が
上記構造を有するピリジニウム化合物であることを確認
し、更にこのピリジニウム化合物が糖尿病又は腎不全に
伴う合併症の診断試薬として有用であるとの知見を得、
本発明を完成したものである。
【００１３】
【発明の実施の態様】以下、本発明を詳細に説明する。
【００１４】本発明の合併症の診断試薬の主たる成分で
ある上記ピリジニウム化合物は、一種のメイラード反応
後期生成物であり、例えば、アルブミン、リゾチーム、
カゼイン、リボヌクレアーゼやグロブリン等の蛋白質
と、グルコース、ダイアセチル、グリオキザールやフル
クトース等のカルボニル化合物との、非酵素的反応によ
って産生されるものである。
ある上記ピリジニウム化合物は、一種のメイラード反応
後期生成物であり、例えば、アルブミン、リゾチーム、
カゼイン、リボヌクレアーゼやグロブリン等の蛋白質
と、グルコース、ダイアセチル、グリオキザールやフル
クトース等のカルボニル化合物との、非酵素的反応によ
って産生されるものである。
【００１５】上記ピリジニウム化合物は、ウサギ赤血球
とグルコースとを３７℃で２週間反応させた系の反応液
を４８時間透析して加水分解した後、ＯＤＳ−５カラム
による高速液体クロマトグラフィーにより、励起波長３
４０ｎｍ、蛍光波長４０２ｎｍにより検出され、その生
成量はグルコースの濃度と反応時間並びに反応液の褐変
化に比例して増加し、その生成はメイラード反応阻害物
質であるアミノグアニジンによって阻害された。又、ウ
シ血清アルブミンとグルコースとの系においても、同様
に生成した。
とグルコースとを３７℃で２週間反応させた系の反応液
を４８時間透析して加水分解した後、ＯＤＳ−５カラム
による高速液体クロマトグラフィーにより、励起波長３
４０ｎｍ、蛍光波長４０２ｎｍにより検出され、その生
成量はグルコースの濃度と反応時間並びに反応液の褐変
化に比例して増加し、その生成はメイラード反応阻害物
質であるアミノグアニジンによって阻害された。又、ウ
シ血清アルブミンとグルコースとの系においても、同様
に生成した。
【００１６】そして、高速液体クロマトグラフィーにお
けるピークが、糖尿病の患者の血液から検出されたピー
クと一致したのである。
けるピークが、糖尿病の患者の血液から検出されたピー
クと一致したのである。
【００１７】上記ピリジニウム化合物の構造は、ウシ血
清アルブミンとグルコースの反応で生成したメイラード
反応後期生成物を加水分解した後、蛍光波長を利用した
高速液体クロマトグラフィーにより分取した後、グリセ
ロールとニトロベンジルアルコールとの混合物をマトリ
クスとしたＦＡＢ−マススペクトルを用いて測定するこ
とにより、まずその分子量が２１２と決定された。
清アルブミンとグルコースの反応で生成したメイラード
反応後期生成物を加水分解した後、蛍光波長を利用した
高速液体クロマトグラフィーにより分取した後、グリセ
ロールとニトロベンジルアルコールとの混合物をマトリ
クスとしたＦＡＢ−マススペクトルを用いて測定するこ
とにより、まずその分子量が２１２と決定された。
【００１８】又、蛍光波長については、励起波長３５０
ｎｍ、蛍光被長４０５ｎｍに極大値が観測された。
ｎｍ、蛍光被長４０５ｎｍに極大値が観測された。
【００１９】次いで、高分解能マススペクトルを利用す
ることにより、上記ピリジニウム化合物の組成式がＣ９
Ｈ１０Ｏ３Ｎ１Ｓ１と決定され、更に二次元を含むＮＭ
Ｒ解析の結果、このピリジニウム化合物は、式
ることにより、上記ピリジニウム化合物の組成式がＣ９
Ｈ１０Ｏ３Ｎ１Ｓ１と決定され、更に二次元を含むＮＭ
Ｒ解析の結果、このピリジニウム化合物は、式
【化４】 で表される８−ヒドロキシ−５−メチルジヒドロチアゾ
ロ［３，２−ａ］ピリジニウム−３−カルボキシレート
と決定された。
ロ［３，２−ａ］ピリジニウム−３−カルボキシレート
と決定された。
【００２０】尚、上記ピリジニウム化合物は、牛の肝臓
より蛍光を有する加水分解物としてすでに単離されてい
るものである。又、このピリジニウム化合物は、生体内
では、その前駆体とタンパク質との複合体として存在し
ているものと推定される
より蛍光を有する加水分解物としてすでに単離されてい
るものである。又、このピリジニウム化合物は、生体内
では、その前駆体とタンパク質との複合体として存在し
ているものと推定される
【００２１】本発明の発明者等は、種々の蛋白質（アル
ブミン、グロブリン、カゼイン、リゾチーム、リボヌク
レアーゼ、プロタミン）１０ｍｇ／ｍｌとグルコース
０．１Ｍを反応させ、高速液体クロマトグラフィーで測
定した結果、上記ピリジニウム化合物は、アルギニンと
システインを多く含むアルブミンリボヌクレアーゼから
大量に生成し、次にリゾチームから多く生成する一方
で、アルギニンを多く含むが、システインを含まないプ
ロタミンからは全く生成しないことを見出した。
ブミン、グロブリン、カゼイン、リゾチーム、リボヌク
レアーゼ、プロタミン）１０ｍｇ／ｍｌとグルコース
０．１Ｍを反応させ、高速液体クロマトグラフィーで測
定した結果、上記ピリジニウム化合物は、アルギニンと
システインを多く含むアルブミンリボヌクレアーゼから
大量に生成し、次にリゾチームから多く生成する一方
で、アルギニンを多く含むが、システインを含まないプ
ロタミンからは全く生成しないことを見出した。
【００２２】しかし、プロタミンとグルコースにシステ
インを添加することにより、上記ピリジニウム化合物が
生成することから、このピリジニウム化合物の生成に
は、グルコースとポリアルギニンとシステインが必要で
あることが判明した。
インを添加することにより、上記ピリジニウム化合物が
生成することから、このピリジニウム化合物の生成に
は、グルコースとポリアルギニンとシステインが必要で
あることが判明した。
【００２３】現在までに提唱されているメイラード反応
後期生成物としては、上記の通りピラリン、ペントシジ
ン、クロスリン等が挙げられるが、その生成には全てリ
ジンが関与している点から、上記ピリジニウム化合物
は、全く新しいタイプのものであると推定される。
後期生成物としては、上記の通りピラリン、ペントシジ
ン、クロスリン等が挙げられるが、その生成には全てリ
ジンが関与している点から、上記ピリジニウム化合物
は、全く新しいタイプのものであると推定される。
【００２４】更に、上記ピリジニウム化合物の生成にお
ける還元糖の影響を検討するために、カルボニル構造を
持つ化合物（グルコース、ダイアセチル、グリオキザー
ル、フルクトース）０．１Ｍとアルブミン１０ｍｇ／ｍ
ｌを２週間反応させ、高速液体クロマトグラフィーで分
析を行ったところ、このピリジニウム化合物は、アルブ
ミンとダイアセチルを反応させても生成し、生成量はグ
ルコースとの反応よりもわずかに増加した。
ける還元糖の影響を検討するために、カルボニル構造を
持つ化合物（グルコース、ダイアセチル、グリオキザー
ル、フルクトース）０．１Ｍとアルブミン１０ｍｇ／ｍ
ｌを２週間反応させ、高速液体クロマトグラフィーで分
析を行ったところ、このピリジニウム化合物は、アルブ
ミンとダイアセチルを反応させても生成し、生成量はグ
ルコースとの反応よりもわずかに増加した。
【００２５】ダイアセチルは糖の酸加水分解物であり、
弱アルカリ条件下で蛋白質中のアルギニン残基のグアニ
ジノ基と特異的に反応し、加水分解には安定になること
から、溶液中のグルコースがまず酸化分解を受け、ダイ
アセチルとなった後、アルギニン残基を攻撃し、上記ピ
リジニウム化合物が生成する経路が考えられる。
弱アルカリ条件下で蛋白質中のアルギニン残基のグアニ
ジノ基と特異的に反応し、加水分解には安定になること
から、溶液中のグルコースがまず酸化分解を受け、ダイ
アセチルとなった後、アルギニン残基を攻撃し、上記ピ
リジニウム化合物が生成する経路が考えられる。
【００２６】上記ピリジニウム化合物の含有量は、スト
レプトゾトシンを投与した実験的糖尿病ラットの血清中
では有意に低下したが、腎、腱、皮膚、神経中では有意
に増加した。又、上記ピリジニウム化合物の尿中排泄量
は、正常ラットに比べ、糖尿病ラットでは尿１ｍｌ当た
りで４．３倍、蛋白量当たりで２．９倍、１日当たりで
２１倍の増加が認められた。更に、遺伝性肥満糖尿病ラ
ット（ＯＬＥＴ−Ｆ）のピリジニウム化合物の尿中の排
泄量は、正常ラット（ＬＥＴＯ）に比べて、蛋白量当た
りで３倍、１日当たりで２２倍の増加が認められた。
レプトゾトシンを投与した実験的糖尿病ラットの血清中
では有意に低下したが、腎、腱、皮膚、神経中では有意
に増加した。又、上記ピリジニウム化合物の尿中排泄量
は、正常ラットに比べ、糖尿病ラットでは尿１ｍｌ当た
りで４．３倍、蛋白量当たりで２．９倍、１日当たりで
２１倍の増加が認められた。更に、遺伝性肥満糖尿病ラ
ット（ＯＬＥＴ−Ｆ）のピリジニウム化合物の尿中の排
泄量は、正常ラット（ＬＥＴＯ）に比べて、蛋白量当た
りで３倍、１日当たりで２２倍の増加が認められた。
【００２７】これらの事実から、上記ピリジニウム化合
物は、糖尿病における症状の進展、特に腎機能の低下を
反映していることが示唆される。
物は、糖尿病における症状の進展、特に腎機能の低下を
反映していることが示唆される。
【００２８】前記方法によって得られたピリジニウム化
合物は、糖尿病病態において大量に産生して腎、鍵、皮
膚、神経等の組織に沈着すると共に、腎機能の低下に伴
い尿中に大量に排泄されてくることから、糖尿病病態の
バイオマーカーとして適用することが可能である。
合物は、糖尿病病態において大量に産生して腎、鍵、皮
膚、神経等の組織に沈着すると共に、腎機能の低下に伴
い尿中に大量に排泄されてくることから、糖尿病病態の
バイオマーカーとして適用することが可能である。
【００２９】
【実施例】以下に本発明を実施例に基づいて詳細に説明
するが、これらは本発明を何ら限定するものではない。
するが、これらは本発明を何ら限定するものではない。
【００３０】実施例１ ウサギ赤血球１０ｍｇ／ｍｌとグルコース２６６ｍＭを
１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．４）に溶解し、３０℃
で２週間反応させ、トリクロロ酢酸にて蛋白質を回収し
た後、１１０℃、２４時間で加水分解を行った。ＯＤＳ
−５カラムを用い、７ｍＭリン酸を流速１ｍｌ／分で流
し、励起波長３４０ｎｍ、蛍光被長４０２ｎｍにて高速
液体クロマトグラフィーで分析した結果を図１に示し
た。ピリジニウム化合物は溶出時間１３分に検出され、
更に７分付近に新しいピークが検出された。尚、この新
しいピークは、６０℃程度の高温やｐＨ９．０等のアル
カリ条件下で大量に生成された。
１０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．４）に溶解し、３０℃
で２週間反応させ、トリクロロ酢酸にて蛋白質を回収し
た後、１１０℃、２４時間で加水分解を行った。ＯＤＳ
−５カラムを用い、７ｍＭリン酸を流速１ｍｌ／分で流
し、励起波長３４０ｎｍ、蛍光被長４０２ｎｍにて高速
液体クロマトグラフィーで分析した結果を図１に示し
た。ピリジニウム化合物は溶出時間１３分に検出され、
更に７分付近に新しいピークが検出された。尚、この新
しいピークは、６０℃程度の高温やｐＨ９．０等のアル
カリ条件下で大量に生成された。
【００３１】実施例２ ウシ血清アルブミンとグルコースの反応系から生成した
ピリジニウム化合物を、高速液体クロマトグラフィーに
より分取し、グリセロールとニトロベンジルアルコール
を混合したものをマトリクスとし、ＦＡＢ−マススペク
トルを測定した結果を図２に示した。又、高分解能マス
スペクトルから分子量２１２．０４０４が実測され、対
応する組成式はＣ９Ｈ１０Ｏ３ＮＳ（論理値：２１２．
０４２７）と決定された。
ピリジニウム化合物を、高速液体クロマトグラフィーに
より分取し、グリセロールとニトロベンジルアルコール
を混合したものをマトリクスとし、ＦＡＢ−マススペク
トルを測定した結果を図２に示した。又、高分解能マス
スペクトルから分子量２１２．０４０４が実測され、対
応する組成式はＣ９Ｈ１０Ｏ３ＮＳ（論理値：２１２．
０４２７）と決定された。
【００３２】ピリジニウム化合物を重水に溶解し、１Ｈ
−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ），１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０Ｍ
Ｈｚ），ＨＭＢＣ（１Ｈ−Ｄｅｔｅｃｔｅｄ Ｈｅｔｅ
ｒｏｎｕｃｌｅａｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｂｏｎｄ Ｃ
ｏｎｅｃｔｉｖｉｔｙ）を測定し、その分析データーを
表１に示した。又、１Ｈ−ＮＭＲのスペクトラムを図３
に、１３Ｃ−ＮＭＲのスペクトラムを図４に示した。
−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ），１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０Ｍ
Ｈｚ），ＨＭＢＣ（１Ｈ−Ｄｅｔｅｃｔｅｄ Ｈｅｔｅ
ｒｏｎｕｃｌｅａｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｂｏｎｄ Ｃ
ｏｎｅｃｔｉｖｉｔｙ）を測定し、その分析データーを
表１に示した。又、１Ｈ−ＮＭＲのスペクトラムを図３
に、１３Ｃ−ＮＭＲのスペクトラムを図４に示した。
【００３３】
【表１】
【００３４】メチル基については、ＨＭＢＣよりプロト
ン６と３に相関が認められたことから、芳香環に結合し
ていると判断され、プロトン２と３については典型的な
ＡＢＸパターンを示した。即ち、プロトン２のうち一方
は３．９ｐｐｍにダブレットで１１．９Ｈｚのジェミナ
ルカップリングを、残るプロトンは４．１ｐｐｍにダブ
ルダブレットで１１．９Ｈｚのジェミナルカップリング
をすると共に、８．８Ｈｚで隣接するプロトン３とカッ
プリングしていた。又、プロトン３はプロトン２の一方
と５．８ｐｐｍに８．８Ｈｚのダブレットでカップリン
グしていた。
ン６と３に相関が認められたことから、芳香環に結合し
ていると判断され、プロトン２と３については典型的な
ＡＢＸパターンを示した。即ち、プロトン２のうち一方
は３．９ｐｐｍにダブレットで１１．９Ｈｚのジェミナ
ルカップリングを、残るプロトンは４．１ｐｐｍにダブ
ルダブレットで１１．９Ｈｚのジェミナルカップリング
をすると共に、８．８Ｈｚで隣接するプロトン３とカッ
プリングしていた。又、プロトン３はプロトン２の一方
と５．８ｐｐｍに８．８Ｈｚのダブレットでカップリン
グしていた。
【００３５】これらの観測結果と、１Ｈ−１Ｈｃｏｓ
ｙ、ＨＯＨＡＨＡ及び１３Ｃ−ＮＭＲより、本発明で使
用するピリジニウム化合物の構造は、以下に示す８−ヒ
ドロキシ−５−メチルジヒドロチアゾロ［３，２−ａ］
ピリジニウム−３−カルボキシレートと決定した。
ｙ、ＨＯＨＡＨＡ及び１３Ｃ−ＮＭＲより、本発明で使
用するピリジニウム化合物の構造は、以下に示す８−ヒ
ドロキシ−５−メチルジヒドロチアゾロ［３，２−ａ］
ピリジニウム−３−カルボキシレートと決定した。
【００３６】尚、ＨＭＢＣによる相関を以下の構造式中
に矢印で示した。
に矢印で示した。
【化５】
【００３７】実施例３ ＳＤラットに対し、５５ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシ
ンを尾静脈より投与することにより、糖尿病を誘発した
ラットの臓器中と尿中のピリジニウム化合物を測定し、
正常ラットと比較した。結果を表２に示す。
ンを尾静脈より投与することにより、糖尿病を誘発した
ラットの臓器中と尿中のピリジニウム化合物を測定し、
正常ラットと比較した。結果を表２に示す。
【００３８】
【表２】
【００３９】糖尿病ラットのピリジニウム化合物の濃度
は、正常ラットに比べて血清中では減少したが、鍵、皮
膚、尿中の濃度は著しく上昇した。特に、尿中濃度は尿
１ｍｌ当たりで４．３倍、蛋白量当たりで２．９倍、１
日当たりで２１倍の増加が認められた。
は、正常ラットに比べて血清中では減少したが、鍵、皮
膚、尿中の濃度は著しく上昇した。特に、尿中濃度は尿
１ｍｌ当たりで４．３倍、蛋白量当たりで２．９倍、１
日当たりで２１倍の増加が認められた。
【００４０】実施例４ 遺伝性肥満糖尿病ラット（ＯＬＥＴ−Ｆ）を７２週間飼
育し、尿中のピリジニウム化合物の量を測定すると共に
腎臓の病理組織学的変化を観察し、正幣ラット（ＬＯＴ
Ｏ）と比較検討した。結果を表３に示す。
育し、尿中のピリジニウム化合物の量を測定すると共に
腎臓の病理組織学的変化を観察し、正幣ラット（ＬＯＴ
Ｏ）と比較検討した。結果を表３に示す。
【００４１】
【表３】
【００４２】ＯＬＥＴ−Ｆの尿中のピリジニウム化合物
の量はＬＥＴＯに比べて、２４時間当たりでは３６週齢
で２３倍、４８週齢で２２倍、６０週齢で１６．４倍に
上昇し、ｍｇ／蛋白当たりでは３６週齢で５．７倍、４
８週齢で２．８倍、６０週齢で１６．４倍に上昇すると
ともに、糖尿病の進展に伴って２４時間当たり、ｍｇ蛋
白当たりともに著しい増加が認められた。
の量はＬＥＴＯに比べて、２４時間当たりでは３６週齢
で２３倍、４８週齢で２２倍、６０週齢で１６．４倍に
上昇し、ｍｇ／蛋白当たりでは３６週齢で５．７倍、４
８週齢で２．８倍、６０週齢で１６．４倍に上昇すると
ともに、糖尿病の進展に伴って２４時間当たり、ｍｇ蛋
白当たりともに著しい増加が認められた。
【００４３】更に、病理学組織的検討ではＯＬＥＴ−Ｆ
の腎臓には糸球体の変性、硬化、尿細管の萎縮、細胞間
隙への細胞侵潤、腎孟粘膜の肥厚等が観察され、腎症の
増悪に伴いピリジニウム化合物の尿中への排泄量の増加
が認められた。
の腎臓には糸球体の変性、硬化、尿細管の萎縮、細胞間
隙への細胞侵潤、腎孟粘膜の肥厚等が観察され、腎症の
増悪に伴いピリジニウム化合物の尿中への排泄量の増加
が認められた。
【００４４】実施例５ 遺伝性肥満糖尿病ラット（ＯＬＥＴ−Ｆ）と、その正常
ラット（ＬＥＴＯ）の３６、４８、６０週令の尿中のピ
リジニウム化合物の量を測定し、結果を表４に示した。
尚、単位はｍｖ／ｓｅｃ／ｍｇ尿中クレアチニンで表示
した。
ラット（ＬＥＴＯ）の３６、４８、６０週令の尿中のピ
リジニウム化合物の量を測定し、結果を表４に示した。
尚、単位はｍｖ／ｓｅｃ／ｍｇ尿中クレアチニンで表示
した。
【００４５】
【表４】
【００４６】ＯＬＥＴ−Ｆでは、加令と共に尿中のピリ
ジニウム化合物の量が著しく増加した。即ち、ＯＬＥＴ
−ＦはＬＥＴＯに比較して、３６週令では２１．０倍、
４８週令では２４．７倍、６０週令では１２２倍の高値
を示した。
ジニウム化合物の量が著しく増加した。即ち、ＯＬＥＴ
−ＦはＬＥＴＯに比較して、３６週令では２１．０倍、
４８週令では２４．７倍、６０週令では１２２倍の高値
を示した。
【００４７】実施例６ ＯＬＥＴ−Ｆの腎臓には、糸球体の変性、硬化、尿細管
の委縮、細胞間隙への細胞侵潤、腎孟粘膜の肥厚等が観
察された。これらの病理組織学的変化を数式化して、尿
中のピリジニウム化合物の濃度（ｍｖ／ｓｅｃ／ｍｇク
レアチニン）との相関性を分析した結果、両者の間には
相関係数γ＝０．６４８５と有意の相関性が認められ
た。又、尿中のピリジニウム化合物の濃度は、クレアチ
ニン・クリアランスともγ＝−０．６７２１と有意の相
関性が認められ、尿中のピリジニウム化合物の濃度は腎
機能の変化を反映していることが明らかになった。
の委縮、細胞間隙への細胞侵潤、腎孟粘膜の肥厚等が観
察された。これらの病理組織学的変化を数式化して、尿
中のピリジニウム化合物の濃度（ｍｖ／ｓｅｃ／ｍｇク
レアチニン）との相関性を分析した結果、両者の間には
相関係数γ＝０．６４８５と有意の相関性が認められ
た。又、尿中のピリジニウム化合物の濃度は、クレアチ
ニン・クリアランスともγ＝−０．６７２１と有意の相
関性が認められ、尿中のピリジニウム化合物の濃度は腎
機能の変化を反映していることが明らかになった。
【００４８】実施例７ ３６、４８、６０週令におけるＯＬＥＴ−ＦとＬＥＴＯ
の尿中のピリジニウム化合物を測定し、７２週令（屠殺
時）における腎臓の組織学的変化スコア、クレアチニン
・クリアランス、眼レンズ濁度との相関性を分析し、病
態の診断予測における尿中のピリジニウム化合物の利用
可能性について検討した。結果は表５に示した。
の尿中のピリジニウム化合物を測定し、７２週令（屠殺
時）における腎臓の組織学的変化スコア、クレアチニン
・クリアランス、眼レンズ濁度との相関性を分析し、病
態の診断予測における尿中のピリジニウム化合物の利用
可能性について検討した。結果は表５に示した。
【００４９】
【表５】
【００５０】ピリジニウム化合物の診断予測への利用可
能性についてフルクトサミンと比較検討した結果、尿中
のピリジニウム化合物の濃度は屠殺時の３６週前の時点
でクレアチニン・クリアランスの低下、腎臓の組織学的
変化、眼レンズの混濁等の糖尿病性合併症の発症診断予
測が可能であることが明らかになった。
能性についてフルクトサミンと比較検討した結果、尿中
のピリジニウム化合物の濃度は屠殺時の３６週前の時点
でクレアチニン・クリアランスの低下、腎臓の組織学的
変化、眼レンズの混濁等の糖尿病性合併症の発症診断予
測が可能であることが明らかになった。
【００５１】実施例８ 保存期腎不全患者と健常者の尿中のピリジニウム化合物
を測定し、腎機能の変化を示すマーカーとして利用され
ている尿中蛋白濃度との相関性を検討した。結果は表６
に示した。
を測定し、腎機能の変化を示すマーカーとして利用され
ている尿中蛋白濃度との相関性を検討した。結果は表６
に示した。
【００５２】
【表６】
【００５３】保存期腎不全患者は健常者に比較して尿中
のピリジニウム化合物の濃度は３．６倍、尿中蛋白濃度
は２４．４倍に増加した。両者の相関係数がγ＝０．８
７０９と高度に有意の相関性が認められ、尿中のピリジ
ニウム化合物が腎機能のマーカーとして有用であること
が明らかになった。
のピリジニウム化合物の濃度は３．６倍、尿中蛋白濃度
は２４．４倍に増加した。両者の相関係数がγ＝０．８
７０９と高度に有意の相関性が認められ、尿中のピリジ
ニウム化合物が腎機能のマーカーとして有用であること
が明らかになった。
【図１】本発明で使用するピリジニウム化合物を高速液
体クロマトグラフィーで分析した結果を示すチャートで
ある。
体クロマトグラフィーで分析した結果を示すチャートで
ある。
【図２】本発明で使用するピリジニウム化合物について
ＦＡＢ−マススペクトルを測定した結果を示すチャート
である。
ＦＡＢ−マススペクトルを測定した結果を示すチャート
である。
【図３】本発明で使用するピリジニウム化合物について
１Ｈ−ＮＭＲのスペクトラムを測定した結果を示すチャ
ートである。
１Ｈ−ＮＭＲのスペクトラムを測定した結果を示すチャ
ートである。
【図４】本発明で使用するピリジニウム化合物について
１３Ｃ−ＮＭＲのスペクトラムを測定した結果を示すチ
ャートである。
１３Ｃ−ＮＭＲのスペクトラムを測定した結果を示すチ
ャートである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｕ // Ｃ０７Ｄ 513/04 ３４５ Ｃ０７Ｄ 513/04 ３４５ (72)発明者 森光 康次郎 愛知県名古屋市天白区植田山１−805 (72)発明者 大澤 俊彦 愛知県春日井市押沢台７丁目−９−８ (56)参考文献 特開 平６−73057（ＪＰ，Ａ) 米国特許5374712（ＵＳ，Ａ) 国際公開97／7803（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 49/00 G01N 30/48 G01N 30/74 G01N 30/88 G01N 33/50 C07D 513/00 ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (2)
- 【請求項１】 式、 【化１】 で表されるピリジニウム化合物を主たる成分として含有
することを特徴とする糖尿病に伴う合併症の診断試薬。 - 【請求項２】 式、 【化２】 で表されるピリジニウム化合物を主たる成分として含有
することを特徴とする腎不全に伴う合併症の診断試薬。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20980497A JP3205899B2 (ja) | 1997-07-18 | 1997-07-18 | 糖尿病又は腎不全に伴う合併症の診断試薬 |
| EP98932542A EP1033137B1 (en) | 1997-07-18 | 1998-07-16 | Diagnostic reagent for complications associated with diabetes or renal failure |
| PCT/JP1998/003190 WO1999003510A1 (fr) | 1997-07-18 | 1998-07-16 | Agents diagnostiques pour les complications de diabetes ou insuffisances renales |
| DE69837720T DE69837720T2 (de) | 1997-07-18 | 1998-07-16 | Diagnostica für komplikationen in zusammenhang mit diabetes oder niereninsuffizienz |
| US09/482,927 US6323038B1 (en) | 1997-07-18 | 2000-01-14 | Diagnostic reagent for complications associated with diabetes or renal failure |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20980497A JP3205899B2 (ja) | 1997-07-18 | 1997-07-18 | 糖尿病又は腎不全に伴う合併症の診断試薬 |
Publications (2)
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|---|---|
| JPH1135494A JPH1135494A (ja) | 1999-02-09 |
| JP3205899B2 true JP3205899B2 (ja) | 2001-09-04 |
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ID=16578884
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20980497A Expired - Fee Related JP3205899B2 (ja) | 1997-07-18 | 1997-07-18 | 糖尿病又は腎不全に伴う合併症の診断試薬 |
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| Country | Link |
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| EP (1) | EP1033137B1 (ja) |
| JP (1) | JP3205899B2 (ja) |
| DE (1) | DE69837720T2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| DE10348022A1 (de) * | 2003-10-15 | 2005-05-25 | Imtm Gmbh | Neue Dipeptidylpeptidase IV-Inhibitoren zur funktionellen Beeinflussung unterschiedlicher Zellen und zur Behandlung immunologischer, entzündlicher, neuronaler und anderer Erkrankungen |
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| WO2018227106A2 (en) * | 2017-06-10 | 2018-12-13 | Preventage Healthcare Llc | Methods for improving cardiovascular disease management |
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|---|---|---|---|---|
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| US5374712A (en) * | 1989-12-20 | 1994-12-20 | Case Western Reserve University | Imidazopyridinium compound and processes for isolating, identifying, and chemically synthesizing same |
| JP3113440B2 (ja) * | 1992-03-25 | 2000-11-27 | 日本臓器製薬株式会社 | ピリジニウム誘導体 |
| AU6907496A (en) * | 1995-08-25 | 1997-03-19 | Case Western Reserve University | Process for detecting pentosidine and for assessing the biological age of a biological sample |
-
1997
- 1997-07-18 JP JP20980497A patent/JP3205899B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-07-16 EP EP98932542A patent/EP1033137B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-16 DE DE69837720T patent/DE69837720T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-16 WO PCT/JP1998/003190 patent/WO1999003510A1/ja active IP Right Grant
-
2000
- 2000-01-14 US US09/482,927 patent/US6323038B1/en not_active Expired - Fee Related
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|---|---|
| DE69837720T2 (de) | 2007-09-20 |
| EP1033137A1 (en) | 2000-09-06 |
| EP1033137A4 (en) | 2004-12-15 |
| US6323038B1 (en) | 2001-11-27 |
| JPH1135494A (ja) | 1999-02-09 |
| DE69837720D1 (de) | 2007-06-14 |
| EP1033137B1 (en) | 2007-05-02 |
| WO1999003510A1 (fr) | 1999-01-28 |
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