JP3168098B2 - ハリコンドリン類 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】

【０００２】本発明は海綿動物Ｌｉｓｓｏｄｅｎｄｒｙ
ｘ ＳＰ．から分離されたハリコンドリン類に関するも
のである。本発明書で詳細に記述するある種のハリコン
ドリンは海綿動物Ｌｉｓｓｏｄｅｎｄｒｙｘ ＳＰ．か
ら分離され、細胞毒活性を有することがｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ試験によって明らかにされている。従って、本発明は
以下の化学式に示すハリコンドリン誘導体を提供するも
のである：

【化４】

【０００３】式中のＲ^１とＲ^２は共に水素化アルキル鎖
で置換された２環または３環式の含酸素縮合環を形成
し、次に示すような化学式を有するものである：

【０００４】

【化５】

【０００５】既に記載したように、本発明の化合物は細
胞毒活性を有しているが、本発明は上記化合物を含有す
る医薬品組成物、並びに医薬品担体または希釈剤を提供
するものである。更にまた、本発明は活性成分として上
記の化合物を使用した細胞毒化合物の調製方法を提供す
るものである。本発明は本発明の化合物を使用した細胞
毒化の方法も併せて提供するものである。本発明の化合
物はＫａｉｋｏｕｒａ半島の大陸棚の中程度の深さ（例
えば、南緯４２°２６’２０”、東経１７３°４４’３
０”の位置）で見出される海綿動物Ｌｉｓｓｏｎｄｅｎ
ｄｒｙｘ ｇｅｎｕｓから分離されたものである。この
海域では当該種は中程度の頻度で棲息する海綿動物であ
って、約１００メートルの深さで見出される。Ｌｉｓｓ
ｏｎｄｅｎｄｒｙｘ ｎ．ｓｐ．１は初めて採集された
標本Ｕ２２８−１０として表示されているＭｙｘｉｌｌ
ｉｄ海綿であって、ニュージランドのＣａｎｔｅｒｂｕ
ｒｙ大学の化学部の標本として保管されている。この海
綿は直径が５０ｃｍにも達する不定形の土饅頭状の形で
生息している。その表面には凹凸があって幾らか半透明
性がある。この海綿は外見的にも、また内部も黄色であ
って、空気に触れると粘液を分泌する。微小骨片はシグ
マ型と円弧型の鋏状である。主大骨片は刺のある肥厚性
の１種類のみである。この海綿はＦｏｒｃｅｐｉａ ｓ
ｏ．と一緒に群落を作った形で見出される。ハリコンド
リン類は添付した図面に詳細に記述した一般的方法に従
って海綿から分離された。

【０００６】抽出と分別 抽出はＭｅＯＨに１０〜２０％のＨ_２Ｏを加えたもの４
リットル／ｋｇとＣＨ_２Ｃｌ_２４リットル／ｋｇとをこ
の順序に使用して抽出し、抽出液を一緒にして蒸発濃縮
すると０．５〜０．８リットルの水溶液が得られる。メ
タノールの使用量を少なくした方が第１回の分別が容易
である。ＣＨ_２Ｃｌ_２よりもＥｔＯＡｃを使用した方が
第１回の分別で好結果が得られる（乳化による問題が少
なくなる）。第２回の分別は石油エーテルよりもヘキサ
ンやヘプタンを使用した方が好結果が得られる。含水メ
タノールを蒸発させるのにロータリー・エバポレーター
を使用するとメタノールの割合が１０％程度になったと
きに問題（泡立ち）が起こる場合がある。この様な問題
を回避するためには、大型の丸底フラスコを使用して少
量の溶媒を蒸発させ（例えば１０００ｍｌのフラスコで
２００ｍｌ）、この段階で若干量のジクロロメタンを添
加してメタノールを共沸混合物の形にし、最後にフラス
コを速やかに回転させて気泡を破壊するのが有効であ
る。この段階からのフラクションで見出されるＩＣ_５０
（従って単位数）は塩または脂肪の影響を顕著に受け
る。

【０００７】クロマトグラフ法による精製 Ｃ１８ 粗抽出物（通常は数グラムから数十グラム）をＣ１８ク
ロマトグラフ処理を行う前日にメタノール溶液にして、
カラムにチャージする前に同量の蒸留水を添加する（１
／１のＨ_２Ｏ／ＭｅＯＨ溶液にするために）。溶液をセ
ライトに吸収させてから蒸発させて粉末またはスラリー
にして、カラムの上に置くこともできる。Ｃ１８材料は
抽出物１ｇ当たり１０〜２０ｇで十分である。溶離には
ＭｅＯＨ／Ｈ_２ＯからＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２への濃度
勾配を利用する。メタノール中に５０、４０、３０％の
水を含むものを粗抽出物１ｇ当たり約２５ｍｌ、２０、
１０％を含むものを５０ｍｌ／ｇ、１００％ＭｅＯＨと
ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（１／１）を４０ｍｌ／ｇを、
順次使用した。

【０００８】Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０ 透過ゲルをＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に浸す。各カラム（φ４．
５×５０ｃｍ）には２００〜２５０ｇのＳｅｐｈａｄｅ
ｘ（全容積８００ｍｌ）を使用し、カラムには２００〜
３００ｍｇの抽出物を賦課する。極性の小さいハリコン
ドリン（ＬＰ１、ＬＰ２、ＬＰ３、イソホモハリコンド
リンＢ）が非常に極性の強い物質（恐らくは乾燥中にバ
イアル瓶の壁面にフィルムを形成する巨大ポリマー）と
結合した形で先ず溶出し、次に極性のハリコンドリン
（Ｎｂ、ＨｏＢ、微量成分１、微量成分２）がある種の
脂肪酸並びに少量のステロールと一緒に溶出する。カラ
ムの使用が終わったら（ハリコンドリン類を集めるには
１００ｍｌのフラクション４〜５回で十分である）、Ｍ
ｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２１／１（１００ｍｌ）を使用して
Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０を洗浄して不用の化合物を
取り除いた後、焼結ファンネルに集める

【０００９】シリカ シリカ・カラムを使用した追加工程はＨＰＬＣによる最
終精製の前に行われる。シリカは抽出物の重量の約３０
倍を使用する（５０〜１００ｍｇの抽出物に対して３５
〜７０μのｄａｖｉｓｉｌを、φ１．６×１１５ｃｍ＝
３０ｃｍ^３）。極性の小さいハリコンドリンの精製には
ＣＨ_２Ｃｌ_２に０〜５％のＭｅＯＨを含んだ勾配を、極
性の小さいハリコンドリンには２〜１５％を含んだ勾配
を使用する。この追加工程はフラクション中に脂肪酸や
ステロールを含んでいる場合に特に有効である。（ＬＰ
１を得るためにはこの工程の後の精製操作は不必要であ
る）。

【００１０】ＨＰＬＣ、Ｃ１９を使用したカラム 波長２００ｎｍでＵＶ検出を行い、各ハリコンドリンの
量が１〜２ｍｇ／１回注入であれば通常の０．６４、
１．２８、２．５６の減衰度を使用する。 カラムの諸元は次の通りである： カラム＋プレカラム、長さ２５＋５ｃｍ×内径２１．４
ｍｍ、８μ６０Ａ粒子移動相は化合物の極性に応じて選
択する。極性のハリコンドリンに対して５５％のＡＣＮ
をＨ_２Ｏに溶かした混合物（流速５ｍｌ／分）を使用す
ると、１７、２２、２３、２６、４０分の各保持時間
で、微量成分２、微量成分１、ハリコンドリンＢ、ホモ
ハリコンドリンＢ、イソホモハリコンドリンＢが溶出す
る。１０ｍｇ（４００ａループ）以上を一度に注入して
はならない。極性の小さい成分（ＬＰ１または３）がイ
ソホモハリコンドリンＢに転移するのを避けるために
は、試料は注入の前にメタノールではなくてアセトニト
リルに溶かす。試料は注入前に綿花で濾過するのみで十
分である。より多くの微量成分を得るためにフラクョン
は次のようにして集める： − 極性の化合物に対して；最初の主成分の溶剤ピーク
から３〜４分毎に（ハリコンドリンＢと微量成分１が個
別に集められる）、ホモハリコンドリンＢとイソホモハ
リコンドリンＢとの中間では１つのフラクションが集め
られる。 − 極性の小さい化合物に対してはイソホモハリコンド
リンＢとｌｐ１の中間で４〜５分毎に。数回の注入を行
うと保持時間が同じフラクションは一緒になって溶出さ
れる。より小さいピークを検出するためには同じ移動相
を使用して（ＵＶ検出器の）減衰度を小さくする。

【００１１】

【表１】

【００１２】４７ｋｇの原料のうち２４．５ｋｇを処理
してハリコンドリンＢ、ホモハリコンドリンＢ、および
イソホモハリコンドリンＢをそれぞれ、５２．８、５
３．５、および６５．８ｍｇ（濡れた海綿に対する収率
で５．０６×１０^−５％、５．２２×１０^−５％、６．
３１×１０^−５％）分離した。更に微量成分も分離さ
れ、その中の６種類は構造を確定した。化合物の構造は
各種のＮＭＲ技術：^１Ｈ ＮＭＲ、^１３Ｃ ＮＭＲ、^１
Ｈ−^１Ｈ ｃｏｓｙ、^１Ｄ ａｎｄ^２Ｄ ＴＯＣＳＹ、
ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣを使って、３００ＭＨｚ（イソホモ
ハリコンドリンＢは例外的に一部のＮＭＲ測定を５００
ＭＨｚで実施した）で、ＣＤＣｌ_３／ピリジン０．１
％、ＣＤＣｌ_３、ＣＤ_３ＯＤ中で測定した。Ｂ系列に属
するとして研究の対象とされた化合物は、ウエムラの命
名法に従えば、１２と１３の位置に水酸基が存在しない
のがその特徴である。化合物間の差異は分子の末端部
（４４位置以降）で起こっていて、その他の部分は同じ
である。

【００１３】イソホモハリコンドリンＢ（ＭＬ１ ４
３．３） イソホモハリコンドリンは白色の無定型粉末として得ら
れた；２１０ｎｍ以上にはＵＶ極大は存在しない；ＩＲ
（ＮａＣｌ錠剤法）３４５０、１７３２、１６９５（ｓ
ｈ）、１６４８ｃｍ^−１は水酸基、ノルハリコンドリン
Ａで既に報告されている５員環より大きいラクトン、脂
肪族ケトン、エキソメチレンの存在を示している。質量
分析の結果は１１２２の分子量に導かれたｍ／ｚ１１４
５と１１６１にＭＮａ^＋とＭＫ^＋を示している。測定さ
れたＨＲＦＡＢＭＳはｍ／ｚ１１６１．５３９５（ＭＫ
^＋、計算値１１６１．５３９９９；誤差−０．４ｐｐ
ｍ）で、ホモハリコンドリンＢとして１９箇所に不飽和
結合があるＣ_６１Ｈ_８６Ｏ_１９の元素組成に相当してい
るこの構造は、３００ＭＨｚの装置を使用して２種類の
溶媒：ＣＤ_３ＯＤとＣＤＣｌ_３／ピリジン−ｄ_５０．１
％中で、及び５００ＭＨｚの装置を使用してＣＤＣｌ_３
／ピリジン−ｄ_５０．１％中で測定した^１Ｈ−^１Ｈｃｏ
ｓｙスペクトルを主な根拠として確立されたものであ
る。一方、３スピン系（次の第１表参照）はハリコンド
リンＢ型の分子の何れのスペクトルにおいても完全に同
じではないので、新規なものである

【００１４】

【表２】

【００１５】更にまた、Ｈ４７とＨ５１に帰属される信
号はノルハリコンドリンＡで観測される信号と同等であ
って、Ｃ５２とＣ５４上のプロトンの化学シフトはこれ
らのプロトンがカルボニル炭素に隣接していることを示
唆している（^１Ｈ ＮＭＲの表参照）。

【００１６】

【化６】

【００１７】イソホモハリコンドリンＢの^１３Ｃ ＮＭ
Ｒスペクトルには６１個の炭素原子が認められる。ＨＭ
ＱＣの測定では“左側”の側鎖末端（Ｃ４７からＣ５
５）に４個のメチレンと４個のメチン（Ｏに結合したＣ
Ｈ）が存在することを立証している。５００ＭＨｚで行
ったＨＭＢＣの測定は、５２、５４、５５の３個のメチ
レンと第１図に示した２０９．５ｐｐｍの炭素との間に
長範囲の相関が認められることから、Ｃ５２からＣ５５
に至る連鎖を支持している。イソホモハリコンドリンＢ
の立体化学はＮＯＥＳＹ測定（第２図）からも支持され
ているが、このことは炭素４７と４８、５０と５１が何
れもシス配置（椅子型配置）であって、Ｃ５０上の水酸
基と側鎖が同一平面上にあることを意味している。

【００１８】

【化７】

【００１９】炭素５０に結合した水酸基と炭素５３との
間に形成されると思われる水素結合は、四重項（３００
ＭＨｚでの三重項の二重項）として出現するメチレン５
２とメチレン５４との２つのプロトンの化学シフトの間
に差があることを説明している。実際に、この四重項は
モデルで観測されているもっと複雑な系の一部を形成し
ている。５４と５５のＣＨ_２の緩和時間を測定すると他
のプロトンのｔ_１値の平均値の２倍となり、これはこの
化合物の末端側鎖の運動性が大きいためであると考えら
れる。（幾つかの試料の（ＣＤＣｌ_３中での）^１Ｈ Ｎ
ＭＲスペクトルを基にして、イソホモハリコンドリンは
溶液中では２種類の違った配置で存在するということ
が、最終的に結論された。δ３．８４ｐｐｍにある鋭い
三重項は、ある不明の理由によって、消滅して幅の広い
信号となるが、δ２．７４ｐｐｍにある三重項は変化し
ない。

【００２０】化学的転移 この化合物は、ＮＭＲ管中にメタノール溶液の形で数週
間残しておくと、ｌｐ１またはｌｐ３の形のアセタール
炭素（極性の小さいハリコンドリン参照）または（５３
位置に）ヘミアセタール炭素を持った他の化合物に転移
することを指摘しておく必要があるが、この化合物は
３．２７から３．１３ｐｐｍにＨ４７がシフトし（ＣＤ
_３ＯＤ中）５２、５４、５５の３個のメチレンが消滅し
ているのがその特徴である。この観測はＲ．Ｌａｋｅに
よって行われたものであって部分的には再現されている
（室温で日光に暴露すると１２週後には試料の３分の２
が転移している）。転移を立証するためにＣＤ_３Ｃｌ中
で幾つかのｎＯｅ測定が行われた。δ３．１３ｐｐｍ
（Ｈ１７）における新規の信号の発生はδ３．６２と
４．００ｐｐｍの２個のプロトンの強化またはその逆を
導くものであって、末端の５員環に結合した６員環に含
まれるＨ４８とＨ５１に同様のことが起こるホモハリコ
ンドリンＢに対比される。ｄ４．００ｐｐｍにあるＨ５
１の放射はδ３．９０と２．００ｐｐｍ（それぞれＨ５
０とＣＨ_２５２）にあるプロトンの強化を導く。ＨＭＱ
Ｃ測定が行われたが、ウエムラによってホモハリコンド
リンに対して与えられた化学シフトによれば、“ホモ型
ハリコンドリン”構造と完全に合致している（下記の第
２表参照）。

【００２１】

【表３】

【００２２】最後に各種の化合物の極性を比較するため
に薄層クロマトグラフィーを実行した（シリカ、ジクロ
ロメタン中メタノール５％で展開）。イソホモハリコン
ドリンＢと転移化合物を含む試料では明確に分離した２
つのスポットが認められた；この転移化合物はｌｐ１と
同じｒｆ値を示しているから、ｌｐ１と類縁のものであ
ると考えられている。

【００２３】極性の小さいハリコンドリン類 これらの化合物は、Ｃ−１８カラムを使ったＨＰＬＣで
の保持時間を基準にして、イソホモハリコンドリンＢよ
りも極性が小さいものを意味している。 ＬＰ１、ＭＬ１ １５４．８並びにＭＬ１ １７３．１
３ ＬＰ１は今までに単離されたハリコンドリン類の中で最
も極性の小さいものである。シリカのカラムからは約１
２ｍｇのこの化合物が単離され、最終のＨＰＬＣステッ
プからは約３ｍｇが単離されているが、極めて不安定で
化学転移を起こしてイソホモハリコンドリンＢになる。
この転移は精製工程中でも起こり、また質量分析のマト
リックス中でも、ＮＭＲ管中でも４、５日以内に起こ
る。低分解能ＦＡＢＭＳスペクトル（ＮＯＢＡ＋ＫＣ
ｌ）はｍ／ｚ１１７５．４（ＭＫ^＋）と１１５９．５
（ＭＮａ^＋）に２つのピークを示し、１１３６の質量を
導いている。転移後の高分解能ＦＡＢＭＳの最強ピーク
は１２９７．５７９８４にある（質量＋ＮＯＢＡ＋Ｋ−
ＯＣＨ_３、Ｃ_６８Ｈ_９２ＮＯ_２１Ｋとして計算、１２９
７．５７５５ｐｐｍ）。これを基にした分子式はＣ_６２
Ｈ_８８Ｏ_１９となる。^１Ｈ ＮＭＲでの先駆化合物との
主な相違は、ＣＨ_２５４と５５に対応するδ２．７１と
３．８６ｐｐｍの２つの三重項がなくて、δ３．１と
３．９６ｐｐｍの（Ｈ４７とＨ５１の各^１Ｈに対応す
る）２つの幅広の二重項とδ３．２３ｐｐｍ（３Ｈ、Ｃ
Ｈ_３Ｏ ５３）の鋭い一重項が存在することである。Ｈ
４７の化学シフトはその位置に対して極めて特異的なも
のであって、ハリコンドリンの３つのタイプを識別する
指標となっている。“ノル”シリーズではＨ４７はδ
３．３５ｐｐｍにあるが“ハリコンドリン”シリーズで
はδ３．５６ｐｐｍにある。我々の場合では、３．１ｐ
ｐｍは６員環に結合した５員環で終わっている“ホモハ
リコンドリン型”分子であることを支持するものであ
る。

【００２４】転移の前後で行ったＨＭＱＣと^１３Ｃ Ｎ
ＭＲが構造を明確に出来る転機となった。δ１０９．３
ｐｐｍのケタール炭素５３が消滅してδ２０９．５ｐｐ
ｍケトンが出現する。２つのメチレン５２と５４は転移
前にはδ４５．２と３５．５に存在していた；Ｃ１３と
Ｃ１５に対応した化学シフト（４８．３と３４．４ｐｐ
ｍ）はケタール炭素と同じような挙動を示している。以
上の全てのデータから次のような構造（次式）が提案さ
れる。^１Ｈ ＮＭＲと^１３Ｃ ＮＭＲの表は本報告の最
後に記載してある。

【００２５】

【化８】

【００２６】ｌｐ１について幾つかのｎＯｅ測定を行っ
た結果は末端環（Ｃ４４以降）の配置について提案され
た椅子型配置と一致した；このことはＨ４７、４８、５
０、５１が全てシス位置にあるイソホモハリコンドリン
Ｂで観察されている。Ｈ４７の放射はＨ４６、ＣＨ_３４
６、Ｈ４８、Ｈ５１の４つの信号を強めるが、δ３．９
６ｐｐｍ（Ｈ５１）にある信号の放射はδ２．２４と
３．０８ｐｐｍ（ＣＨ_２５２とＨ４７）にある２つの信
号を強めるのみである。結論として、Ｈ５０（δ３．８
８ｐｐｍにある）の放射はδ３．９６ｐｐｍ（Ｈ５
１）、２．２０ｐｐｍ（Ｈ４９）にある信号とδ３．２
３ｐｐｍにあるメトキシルの信号を強めることとなっ
て、その結果我々は炭素５３（Ｓ）の相対配置を決定す
ることが出来た。Ｈ５０と５２を強めているメトキシル
の放射がこの配置を立証している。アセタール加水分解
とその結果としてのケトンの形成は塩基Ｂ^＊の攻撃によ
るメトキシル基の離脱から説明できる。ｌｐ３の場合に
も同様の反応が起こる。逆反応は、その速度は非常に小
さいが、イソホモハリコンドリン試料Ｂではメタノール
中で起こっている。

【００２７】

【化９】

【００２８】結論 現在の問題は何れの化合物が天然化合物であるかを決定
することである。ｌｐ１（またはｌｐ３）のイソホモハ
リコンドリンＢへの転移は比較的速いが逆反応は非常に
遅いことが判っているから、イソホモコンドリンＢの方
が安定であると考えられる。しかし、ｌｐ３が存在する
と抽出または精製操作中にも条件によっては逆反応（イ
ソＢ→ｌｐ１＋ｌｐ３）が起こることが立証されてい
る。この現象を説明する可能性の高い仮説は、イソホモ
ハリコンドリンＢ形成の基質として、５３の位置にアセ
タールまたはヘミアセタール炭素を有する比較的不安定
な化合物が存在していて、少量ではあるがｌｐ１とｌｐ
３を与えているという考え方である。５３の位置にヘミ
アセタール炭素を有する化合物の発見は、幾つかの他の
微量化合物は発見されてはいるが、未だ成就されていな
い。 ＬＰ２；ＭＬ１ ２００．５ この化合物は僅かに０．７ｍｇが単離されている。ＨＲ
ＦＡＢＭＳ測定値はｍ／ｚ １１３７．６０１８（ＭＨ
^＋、計算値：１１３７．５９９８；誤差１．８ｐｐｍ）
であって、Ｃ_６２Ｈ_８９Ｏ_１９の元素組成に相当してい
る。この化合物のプロトンＮＭＲを解析するとイソホモ
ハリコンドリンＢのスペクトルに類似しているが、δ
３．３４ｐｐｍ（３プロトン）に鋭い一重項があって三
重項が３．８５ｐｐｍから３．６２ｐｐｍにシフトして
いることから、５５位置のメチレンに結合しているのが
イソホコハリコンドリンＢの場合には水酸基であったも
のがメトキシル基になっていることが判る。しかしなが
ら、５５の位置のメチレンの放射の後では、末端メトキ
シルと５２と５４の位置の両メチレンのｎＯｅの強化が
観察されていて、このことは前述の考え方を支持するも
のであって、下記の図に示したようにカルボニルと５０
位置の水酸基との間に水素結合が出来ているものと考え
られている。

【００２９】ＬＰ２の末端部分

【化１０】

【００３０】２Ｄ ＴＯＣＳＹ測定を行った結果のデー
タは想定している構造と完全に一致し、特に５４と５５
位置の２つのメチレンとメチレン５２の２つのプロトン
との間の関係、およびＨ４７とＨ５０からのスピン・シ
ステムに含まれる相関関係を完全に説明することが出来
る。 ＬＰ３（ＬＰ１の異性体）；ＭＬ１ １７３．１１ この化合物は僅かに１．５ｍｇが単離されている。ｌｐ
１に比べるとこの化合物は極めて不安定であって、極め
て速やかに転移してイソホモハリコンドリンＢになる。
イソハリコンドリンＢはＣＤＣｌ_３中での^１Ｈ ＮＭＲ
の測定から確認されているが、特にｄ２．７４と３．８
５ｐｐｍ（ＣＨ_２５４と５５）にある２つの鋭い三重項
が特異的である。ｌｐ３の^１Ｈ ＮＭＲは、δ３．４０
ｐｐｍにあるＣ５３のメトキシル基とδ３．９１ｐｐｍ
にある恐らくはＨ５１プロトンによると思われる化学シ
フトを除いては（ｌｐ１では３．２３ｐｐｍと３．９６
ｐｐｍに位置している）、ｌｐ１のスペクトルとの間に
差異はない。このことは５３炭素がＲ配置であることを
意味している；従ってｌｐ３はｌｐ１の鏡像異性体であ
る。 その他の極性が小さいハリコンドリン類 ２種類、若しくは３種類の極性の小さい化合物が単離さ
れている。イソホモハリコンドリンＢの直後にＣ１８か
ら溶出する（クロマトグラムは２つのピークになってい
る）ＭＬ１ １７３．７のフラクションの^１Ｈ ＮＭＲ
はδ３．０８ｐｐｍにｌｐ１と同様の信号（恐らくはＨ
４７）を示すが、メトキシルは存在しない。その上メチ
ル領域はイソホモハリコンドリンＢよりはホモハリコン
ドリンＢに類似していて、恐らくは５３の位置に水酸基
を持った“ホモタイプ”のハリコンドリンであると考え
られる。ＭＬ１ １７３．８のフラクション（クロマト
グラムから見るとｌｐ１、イソＢ、その他に２種類の化
合物を含んでいる）の^１Ｈ ＮＭＲは３．１ｐｐｍの付
近に２つの信号を示すが、このことはこれらの信号の中
の１つはｌｐ１とは違った化合物に帰属するものである
ことを示している（３．０９ｐｐｍはｌｐ１のＨ４７に
よるものと考えられる）。δ３．１１ｐｐｍにある同様
の信号はＭＬ１１９６．７並びにＲＴ１ １５８．８の
試料のＮＭＲスペクトルにも認められるが、これらはメ
トキシルを示すものではない。

【００３１】極性のハリコンドリン類 これらの化合物はハリコンドリンＢよりも極性の強いも
のであって、Ｃ−１８カラムを使用したＨＰＬＣでは保
持時間が短くなる。２種類の微量の化合物（微量成分１
と２）が単離されているので、この両者について一部不
明の点があるが詳しく述べることとする。 微量成分１、ＭＬ１ １３８．２ この化合物はハリコンドリンＢと同程度の極性を有して
いる（クロマトグラムは通常ハリコンドリンＢの前の非
常に小さいピークになる）；約７ｍｇが精製、単離され
ている。ＨＲＦＡＢＭＳはｍ／ｚ １１６３．５５５３
（ＭＫ^＋、計算値：１１６３．５５５０；誤差−０．３
ｐｐｍ）と観測され、Ｃ_６１Ｈ_８８Ｏ_１９の元素組成に
相当する（ハリコンドリンＢに比べてＣＨ_２が１つ多
い）。ＨＭＱＣスペクトルを詳細に観察すると幾つかの
小さい相違点を除いてハリコンドリンＢのスペクトルに
類似していることが判る（第３表参照）。

【００３２】

【表４】

【００３３】上記の相違以外の全ての相関関係はハリコ
ンドリンＢと同じてある。^１３ＣＮＭＲスペクトルは６
１番炭素の存在を示し、その余分の炭素がＣＨ_２であっ
て３１．１ｐｐｍに化学シフトを有する点以外はハロコ
ンドリンＢに極めてよく類似している。これらのデータ
はハリコンドリンＢで認められるのと同様の末端５員環
の存在を示していて、この５員環に結合した側鎖にＣＨ
_２が１つ多くなっている。ｃｏｓｙスペクトルでは３．
４５と３．７０ｐｐｍ（Ｈ５５とＨ５４）の間に相関が
認められるが、側鎖が−ＣＨＯＨ−ＣＨ_２ＯＨで終わっ
ているものと我々は考えている。１つ多いメチレンの位
置については３つの可能性がある。混合時間を変えて２
回行った２Ｄ ＴＯＣＳＹスペクトルの断面を解析する
と暖昧性が変化していることが判る。δ３．７０ｐｐｍ
（Ｈ５４に疑いなく同定されている）でトレースを行う
と、“２０ｍｓ ２Ｄ ＴＯＣＳＹ”からδ３．４５
（三重項）と３．６３ｐｐｍ（ＣＨ_２５５）およびδ
１．６ｐｐｍ（幅広の信号、ＣＨ_２５３）に３つの相関
関係が見出される。“１００ ｍｓ ２Ｄ ＴＯＣＳ
Ｙ”から同じトレースを行うとδ１．４ｐｐｍ（幅広の
信号、ＣＨ_２５２）とｄ３．８５ｐｐｍ（二重項、ＣＨ
５１）に追加的な相関が観察され、これらの２つの信
号は元のものから派生したものであることを示してい
る。最後にδ４．０５ｐｐｍ（ＣＨ ５０）でのトレー
スからは３．８５ｐｐｍ（二重項、ＣＨ ５１）に相関
が観察されるが、δ１．４と１．６ｐｐｍでの相関は極
めて弱くて−ＣＨＯ_（５０）−ＣＨＯＨ_（５１）−ＣＨ
_{２（５２）}−の以下のようなシーケンスを支持してい
る。δ３．８５ｐｐｍの信号の大きな結合定数（二重
項、Ｊ＝１１．１Ｈｚ）はこの想定と一致している（仮
にそうでなくて、このメチン基が２つのメチレン基の中
間にあれば三重項になるはずである）。ＨＭＢＣの測定
（ＪＮＸＨ＝４．５Ｈｚ）も行ったが、側鎖についての
想定を確認することも否認することも出来なかった。端
末部についての想定は以下のようなものである。

【００３４】

【化１１】

【００３５】（メチン炭素の対掌性を求めるためにｎＯ
ｅ指差スペクトルの測定を行った）。

【００３６】微量成分２、ＭＬ１ ２００．４ この化合物は分離されたものの中で最も極性の強いもの
である。僅かに０．９ｍｇが単離されている。低分解能
ＦＡＢ質量分析を測定してｍ／ｚ １０９７と１１３５
（ＭＨ^＋とＭＫ^＋）に２つのピークが得られている。Ｈ
ＲＦＡＢＮＳではｍ／ｚ １０９７．５６９０（Ｍ
Ｈ^＋、計算値：１０９７．５６８５、誤差０．４ｐｐ
ｍ）が得られ、Ｃ_５９Ｈ_８５Ｏ_１９の元素組成に対応す
る。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルはハリコンドリンＢや微量
成分１に比べて非常に特異的な挙動を示す。メチル領域
には１ｐｐｍの近傍には二重項が３つだけ存在していて
４番目のメチルはδ１．３５ｐｐｍに一重項として表
れ、このことは通常のメチンの位置にあるのではない炭
素に結合した酸素の存在の可能性を示唆している。２つ
の二重項も（δ２．８６ｐｐｍ、Ｊ＝１１．２Ｈｚとδ
３．７３ｐｐｍ、Ｊ＝４．９Ｈｚ）この化合物に特異的
なものである。２Ｄ ＴＯＣＳＹ（１００ｍｓの混合時
間で行う）とＨＭＱＣ測定を注意深く解析するとこの化
合物の主要部分は４４番の炭素まではハリコンドリンの
骨格と変わらないことが判る（通常は４．０ｐｐｍにあ
るＨ４０がδ４．１８ｐｐｍに少しシフトしていること
を除いて）。しかしＨＭＱＣ測定は“炭素に結合した酸
素”領域には６つの新しい炭素が、メチレン領域には４
つ（新しいメチルを含めて）が存在することを示してい
る。これらの中で、１つのメチレンは２つのプロトン
（１．８６と２．１１ｐｐｍ）の化学シフトを考えると
特にシールドされていなくて（δ５４．２ｐｐｍ）、酸
素原子の付加的なｂ効果によってケタール炭素に接近し
ていることが示唆される；第２のメチレン（δ３７ｐｐ
ｍ）に含まれる２つのプロトンは非常に異なる化学シフ
ト（１．５２と２．８６ｐｐｍ）を有し、２．８６ｐｐ
ｍのプロトンは酸素原子に接近して平置しているものと
考えられる。プロトンと炭素の化学シフトによって（そ
してハリコンドリンＢおよび微量成分１の化学シフトと
比較して）２Ｄ ＴＯＣＳＹ測定から得られた結果を基
にして、次のようなフラグメント：ＨＯＣＨ_２−Ｃ
_（５２）ＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ_２−Ｃ_（４９）ＨＯ−
ＣＨＯ−ＣＨ_２−を我々は提案する。それに加えて、メ
チン４９は５員環に帰属しているものと考えている（８
１．７ｐｐｍにあるＣ４９の化学シフトに関してはハリ
コンドリンＢまたは微量成分１の場合と殆ど同じであ
る）。ＨＭＢＣ測定を行って（ＪＮＸＨ＝６Ｈｚ）次の
ような非常に有用な情報が得られた。その第１はδ１．
３５ｐｐｍのメチルとδ３６．８、５２．４、８０．２
ｐｐｍの３つの炭素（Ｃ４７、４５、４６）の間の相
関、第２はδ８０．２ｐｐｍの炭素とδ４．２８（Ｈ４
８）と１．８８（Ｈ４９）ｐｐｍのプロトンとの付加的
な相関である。これらの相関は下記のようなものであ
る。

【００３７】

【化１２】

【００３８】ｎＯｅ測定（上記）を行った結果は６員環
に結合した５員環を想定した末端部分と完全に合致した
（Ｈ４８とＨ４９はシス位置にあって６員環は舟形の配
置をとっている）。この強化はＨ４８とＣＨ_２４７の両
プロトンの間と、Ｈ４８とＨ４９の間では特に顕著であ
るが、メチレン４７（δ１５ｐｐｍ）とＨ４９との間で
は弱い。この様な特異な配置のためにＣＨ_２４７の１つ
のプロトンと炭素４４に結合した酸素原子とが非常に近
くなることから、極めて小さいシールド値（δ２．８６
ｐｐｍ）を説明することが出来る。以上のような情報を
総合して我々は次のような微量成分２の構造を提案する
ことが出来た。

【００３９】

【化１３】

【００４０】その他のハリコンドリン類 ノルハリコンドリンＢ、ＭＬ１ ２０１．４ この化合物は僅かに０．６ｍｇが単離されている。この
化合物の極性はシリカを使った薄層クロマトグラフィー
からはイソホモハリコンドリンよりも若干極性が強いと
考えられているが明確ではない。ＨＲＦＡＢＭＳの測定
結果はｍ／ｚ１０９５．５５７４（ＭＨ^＋、計算値：１
０９５．５５２９；誤差４．１ｐｐｍ）であって、Ｃ
_５９Ｈ_８３Ｏ_１９の元素組成に相当する。この試料につ
いて^１Ｈ ＮＭＲ、ＨＭＱＣ、２Ｄ ＴＯＣＳＹ、ｎＯ
ｅの測定を実施した。これらの測定結果から分子の末端
部分についての結論を得ることが出来る。この化合物は
イソホモハリコンドリンＢと同様に６員環で構成されて
いて、５１位置に結合したＣＨ_２−ＣＯＯＨ末端を有し
ている（５２メチレンはδ２．６０／２．８９ｐｐｍに
ある）。この最後の環に帰属するプロトンの化学シフト
はイソＢとは若干違った挙動を示す：Ｈ４７、４８、５
０、５１、ＣＨ_２４９は３．３７、３．８１、３．６
０、３．８０、１．８７／２．１８ＰＰＭにδを有して
いる（イソホモハリコンドリンＢは３．２５、３．７
５、３．５２、３．８２、１．８４／２．１３ＰＰＭに
ある）。メチレン５２の２つのプロトンが対等でないこ
とは興味のある問題として指摘されるが、これは５０位
置の水酸基とカルボン酸のＣＯとの間に水素結合が出来
るためであると考えられている。メタノールを溶媒とし
て使用するとこの非対等性は消滅する（ＣＨ_２５２はδ
２．４７ｐｐｍに、ウエムラの報告参照）。ｎＯｅの測
定結果は此処に提案された末端部の挙動：Ｈ５１＋Ｈ４
８の照射後のＨ４７の強化及びその逆、δ２．６１ｐｐ
ｍにあるＨ５２の照射後のＨ５１とＨ４９の強化、Ｈ５
０照射後のＨ５１とＨ４９の強化：を支持している。赤
外スペクトルの測定も行われたが、その結果は水酸基
（３４７０ｃｍ^−１）、５員環より大きいラクトン（１
７３．５ｃｍ^−１）、カルボキシル基（１７００ｃｍ
^−１付近にある前記吸収のショルダー）の存在を示して
いる。ノルハリコンドリンＢの端末部を次の図に示して
ある。

【００４１】ノルハリコンドリンＢの末端部

【００４２】

【化１４】

【００４３】ＭＬ１ ２０６．５および２０６．６（そ
れぞれ０．５ｍｇと０．６ｍｇ）これらの試料はＨＰＬ
ＣのホモハリコンドリンＢの後、イソホモハリコンドリ
ンＢの前のフラクションを集めたものであって、新規の
化合物を含有している。この試料の一方の^１Ｈ ＮＭＲ
を測定した結果、δ５．７５ｐｐｍに特異なプロトンが
認められ、アセタールまたはヘミアセタールの炭素に結
合したものであると考えられている（Ｊｏｃ １９９
０，５５，８６３−８７０参照）。今一方の試料の^１Ｈ
ＮＭＲにはδ５．９と６．４ｐｐｍに２つのプロトン
が認められる；その中の１つは３．４２ｐｐｍにあるメ
トキシルで我々が観察したのと同様にアセタール炭素に
結合したものであると考えられる。 ＲＴ１ １５８．２および１５８．６ 第１の試料は極性のハリコンドリン類（微量成分２より
極性の強いもの）を含有していると考えられ、第２の試
料は中間極性を持ったハリコンドリン類（ホモハリコン
ドリンＢとイソホモハリコンドリンＢの中間）を含有し
ているものと考えられる。

【００４４】生物学的検討 大多数の化合物についてＰ３８８抗癌性生体試験を実施
した。Ｐ３８８細胞に対する抵抗性は下記の通りであっ
た。

【００４５】

【００４６】Ｐ３８８抗癌性生体試験の結果はＢシリー
ズに属する化合物が最も有効であることを示している。
イソホモハリコンドリンＢはネズミ白血病細胞（Ｐ３８
８細胞系列）に対する強い細胞毒性を示し、ハリコンド
リンＢやホモハリコンドリンＢに比べるとその効果がは
るかに大きい（ＩＣ５０：０．８，６．７，６．４ｍｇ
／ｍｌ）。

【００４７】

【表５】

【００４８】

【表６】

【００４９】

【表７】

【００５０】

【表８】

【００５１】

【表９】

【００５２】

【表１０】

【００５３】

【表１１】

【表１２】

【００５４】

【表１３】

【００５５】

【表１４】

【００５６】

【表１５】

【００５７】

【表１６】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ドロレス ジー・グラバロス スペイン国マドリッド，28760 トレス カントス，ポリゴノ インダストリア ル ド トレス カントス， カルレ ド ラ カレラ ナンバー ３，ファー マ マー，ソシエダッド アノニマ 気 付 (72)発明者 ロビン ジェイ．レイク ニュージーランド国クライストチャーチ １，プライベート バッグ 4800，ユ ニバーシティ オブ カンターベリィ 気付 (72)発明者 ジョン ダブリュ．ブラント ニュージーランド国クライストチャーチ １，プライベート バッグ 4800，ユ ニバーシティ オブ カンターベリィ 気付 (72)発明者 マレイ エィチ．ジー，マンロ ニュージーランド国クライストチャーチ １，プライベート バッグ 4800，ユ ニバーシティ オブ カンターベリィ 気付 (72)発明者 マーク ステファン フィリバート リ タウドン ニュージーランド国クライストチャーチ １，プライベート バッグ 4800，ユ ニバーシティ オブ カンターベリィ 気付 (56)参考文献 Ｐｕｒｅ ＆ Ａｐｐｌ．Ｃｈｅ ｍ．，Ｖｏｌ．58，Ｎｏ．５（1986年) Ｐ．701−710 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07D 493/22 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 1. 構造式 【化１】 式中、Ｒ¹及びＲ²は一緒になって下記環を形成し、この
   うちＲ¹は下記環において４８位の炭素原子に架橋した
   酸素原子を、Ｒ²は下記環において４５位の炭素原子を
   示す。 【化２】 を有するハリコンドリン。
2. 【請求項２】 特許請求の範囲第１項記載のハリコンド
   リンと製薬の担体又は希釈剤より成る細胞毒活性製薬組
   成物。