JP3122248B2

JP3122248B2 - 抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ２ａ

Info

Publication number: JP3122248B2
Application number: JP04244216A
Authority: JP
Inventors: エンリコ・セルバ; セルジオ・ステラ; ルイジ・コロンボ; マウリツイオ・デナロ
Original assignee: バイオサーチ・イタリア・ソチエタ・ペル・アチオニ
Priority date: 1991-08-30
Filing date: 1992-08-20
Publication date: 2001-01-09
Anticipated expiration: 2016-01-09
Also published as: US5514649A; DE69224497D1; ES2113391T3; KR100249871B1; DK0529410T3; CA2077102C; ATE163428T1; JPH0649087A; DE69224497T2; EP0529410A2; CA2077102A1; EP0529410A3; EP0529410B1; KR930004471A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2a
と表示する新規な抗生物質、その付加塩、その製剤学的
組成物および薬物、とくにそれに感受性の微生物を包含
する感染性疾患の処置における薬物としてのその使用に
関する。

【０００２】本発明の化合物は、また、動物、例えば、
家禽、豚、反芻動物などにおけるの成長促進剤としてと
して活性である。

【０００３】本発明の化合物は、因子Ｃ_2aを産生するこ
とができるプラノビスポラ・ロセア（Ｐｌａｎｏｂｉｓ
ｐｏｒａｒｏｓｅａ）ＡＴＣＣ５３７７３またはＧＥ
２２７０因子Ｃ_2a産生性突然変異体（ｍｕｔａｎｔ）ま
たはその変異型（ｖａｒｉａｎｔ）の培養物から単離さ
れる。とくに、それは菌糸体の中におよびまた培養した
微生物の発酵ブロスの中に見いだされる。

【０００４】プラノビスポラ・ロセア（Ｐｌａｎｏｂｉ
ｓｐｏｒａｒｏｓｅａ）ＡＴＣＣ５３７７３は土の試
料から単離され、これはブダベスト条約の規定に従いア
メリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ｔｈｅ
ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏ
ｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）、米国ＭＤ２０８５２
メリイランド州ロックビレ・パークーンドライブ１２３
０１、に１９８８年６月１４日に受託された。

【０００５】この菌株は受け入れ番号ＡＴＣＣ５３７７
３を与えられた。

【０００６】この菌株は、欧州特許出願公開第３５９０
６２号に、抗生物質ＧＥ２２７０因子Ａと呼ぶ新規な抗
生物質の製造とともに既に記載されている。

【０００７】本発明の化合物は、上の微生物の菌株によ
り、最も豊富な分画であるＧＥ２２７０因子Ａ、および
抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｂ₁、Ｃ₁、Ｃ₂、Ｄ₁、Ｄ₂、
ＥおよびＴと一緒に産生され、このらの因子Ｂ₁、Ｃ₁、
Ｃ₂、Ｄ₁、Ｄ₂、ＥおよびＴは、それぞれ、米国特許出
願第８５６，８５７号に対応する欧州特許出願公開第４
５１４８６号、両者は１９９０年３月８日および１９９
０年１０月２２日の優先権を主張する、欧州特許出願第
９０１０４４０９．９号および欧州特許出願第９０１２
０２１４．３号に記載されている。

【０００８】抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aの産生は、
それを産生することができるプラノビスポラ（Ｐｌａｎ
ｏｂｉｓｐｏｒａ）菌株、すなわち、プラノビスポラ・
ロセア（Ｐｌａｎｏｂｉｓｐｏｒａｒｏｓｅａ）ＡＴ
ＣＣ５３７７３または因子Ｃ_2aを産生することができる
そのＧＥ２２７０産生変異型または突然変異体を、深部
好気的条件下に、炭素、窒素の同化可能な源、および無
機塩類を含有する水性栄養培地中の培養することによっ
て達成される。この発酵技術において通常使用される栄
養培地の多くを使用できるが、ある種の培地は好まし
い。好ましい炭素源はグルコース、マンノース、ガラク
トース、澱粉、トウモロコシ粉末などである。好ましい
窒素源はアンモニア、硝酸塩、大豆粉末、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、トリプトン、アミノ酸などであ
る。培地の中に混入することができる無機塩類の例は、
ナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、コバルト、マグネシ
ウム、カルシウム、アンモニウム、塩化物、炭酸塩、硫
酸塩、リン酸塩、硝酸塩などのイオンを生成することが
できる普通の塩である。

【０００９】通常、抗生物質産生菌株を震盪フラスコ中
の予備培養し、次いで培養物を使用して実質的な量の抗
生物質の産生のためにびんの発酵器を接種する。予備培
養のために使用する培地は大きい発酵に使用するものと
同一であることができるが、他の培地をまた使用するこ
とができる。抗生物質ＧＥ２２７０を産生する菌株は２
０〜４０℃、好ましくは２４〜３５℃の温度において成
長させることができる。

【００１０】発酵の間に、抗生物質の産生はブロスまた
は菌糸体の抽出液の試料を抗生物質の活性について、例
えば、バイオアッセイまたは薄層クロマトグラフィーま
たはＨＰＬＣの手順によりモニターすることができる。

【００１１】抗生物質ＧＥ２２７０の因子Ｃ_2aに対して
感受性の有機体、例えば、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓ）および黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈ
ｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）を試験有機体とし
て使用することができる。このバイオアッセイは、便利
には、寒天希釈法または寒天板により実施する。抗生物
質の活性の最大の産生は、一般に、発酵の第２日と第８
日との間に起こる。

【００１２】抗生物質ＧＥ２２７０の因子Ｃ_2aは、菌株
プラノビスポラ・ロセア（Ｐｌａｎｏｂｉｓｐｏｒａ
ｒｏｓｅａ）ＡＴＣＣ５３７７３、または因子Ｃ_2aを産
生することができるその抗生物質ＧＥ２２７０産生性突
然変異体または変異型を培養することによって産生さ
れ、そして、ある量の産生物を発酵ブロスから単離する
ことができる場合でさえ、主として菌糸体の中に見いだ
される。

【００１３】菌株プラノビスポラ・ロセア（Ｐｌａｎｏ
ｂｉｓｐｏｒａｒｏｓｅａ）ＡＴＣＣ５３７７３の形
態学的、物理学的および化学分類的特性は、前述の欧州
特許出願（ＥＰ−Ａ）第３５９０６２号に記載されてい
る。

【００１４】他の有機体を使用するときのように、抗生
物質ＧＥ２２７０の因子Ｃ_2a産生菌株の特性は変異させ
る。例えば、菌株の人工的変異型および突然変異体は、
種々の既知の突然変異原、例えば、紫外線、Ｘ線、高い
周波数の波、放射線、および化学物質、例えば、亜硝
酸、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソ−グアニ
ジン、および多数の他のもので処理することによって得
ることができる。プラノビスポラ（Ｐｌａｎｏｂｉｓｐ
ｏｒａ）属の種に属しそして抗生物質ＧＥ２２７０因子
Ｃ_2aを産生する、すべての自然および人工の変異型およ
び突然変異体は、本発明の目的に対して菌株プラノビス
ポラ・ロセア（Ｐｌａｎｏｂｉｓｐｏｒａｒｏｓｅａ）
ＡＴＣＣ５３７７３に同等であると見なされる。

【００１５】前述したように、ＧＥ２２７０因子Ｃ
_2aは、一般に、産生菌株の菌糸体の中に見いだされる
が、少量の物質は、また、発酵ブロスの中に見いだされ
る。

【００１６】本発明の抗生物質の回収および単離産生微生物の菌糸体または発酵ブロスからの抗生物質Ｇ
Ｅ２２７０因子Ｃ_2aの回収は、それ自体知られている技
術、例えば、溶媒を使用する抽出、非溶媒による沈澱ま
たは溶液のｐＨの変化、分画クロマトグラフィー、吸着
クロマトグラフィー、逆相分画クロマトグラフィー、イ
オン交換クロマトグラフィー、分子排除クロマトグラフ
ィーなどに従い実施する。

【００１７】菌糸体から本発明の抗生物質を回収する好
ましい手順は、濾過または遠心した菌糸体を水混和性有
機溶媒による抽出、抽出液の濃縮、および粗製の抗生物
質の、必要に応じて沈澱剤を添加する、沈澱による、水
性残留物の水不混和性有機溶媒を使用する抽出による、
または吸着クロマトグラフィーおよび引き続く所望の生
成物の吸収マトリックスからの溶離による回収を包含す
る。

【００１８】発酵ブロスから本発明の抗生物質を反応性
する好ましい手順は、水不混和性有機溶媒を使用する抽
出、引き続く、可能ならば沈澱剤を添加することによ
る、濃縮した抽出液からの沈澱、あるいはその水性残留
物の水不混和性溶媒を使用するそれ以上の抽出を包含す
る。あるいは、発酵ブロスを吸着マトリックスと接触さ
せ、次いで極性溶離混合物で溶離することができる。こ
のクロマトグラフィーの手順は、また、ブロスそれ自体
の代わりに発酵ブロスから得られた濃縮した抽出液に適
用することができる。

【００１９】この出願において使用する用語「水混和性
溶媒」は、この用語にこの分野において現在与えられて
いる意味を有することを意図し、そして、使用条件にお
いて、水と合理的に広い濃度範囲において混和する溶媒
を呼ぶ。

【００２０】菌糸体の塊からの本発明の抗生物質の抽出
において使用できる水混和性有機溶媒の例は、次の通り
である：低級アルカノール、例えば、（Ｃ₁−Ｃ₃）アル
カノール、例えば、メタノール、エタノールおよびプロ
パノール；低級ケトン、例えば、（Ｃ₃−Ｃ₄）ケトン、
例えば、アセトンおよびエチルメチルケトン；環状エー
テル、例えば、ジオキサンおよびテトラヒドロフラン；
グリコールおよびそれらの部分的エーテル化の生成物、
例えば、エチレングリコール、プロピレングリコールお
よびエチレングリコールモノメチルエーテル；低級アミ
ド、例えば、ジメチルホルムアミド、ジエチルホルムア
ミド；およびジメチルスルホキシド。

【００２１】この出願において使用する用語「水不混和
性溶媒」は、この用語にこの分野において現在与えられ
ている意味を有することを意図し、そして、使用条件に
おいて、意図する用途に適当な、合理的に広い濃度範囲
において水とわずかに混和するか、あるいは実際に不混
和性の溶媒を呼ぶ。

【００２２】菌糸体の塊からの本発明の抗生物質の抽出
において使用できる水不混和性有機溶媒の例は、次の通
りである：直鎖状、分枝鎖状または環状であることがで
きる通常の炭化水素溶媒、例えば、ヘキサンまたはシク
ロヘキサン；ハロゲン化炭化水素、例えば、クロロホル
ム、四塩化炭素、ジクロロエタン、フルオロブロモメタ
ン、ジブロモメタン、トリクロロプロパン、クロロトリ
フルオロオクタンなど；芳香族炭化水素、例えば、ベン
ゼン、トルエン、キシレンなど；少なくとも４個の炭素
原子を有するエステル、例えば、酢酸エチル、酢酸プロ
ピル、酪酸ブチルなど；少なくとも４個の炭素原子を有
し、直鎖状、分枝鎖状または環状であることができるア
ルカノール、例えば、ブタノール、１−ペンタノール、
２−ペンタノール、３−ペンタノール、１−ヘキサノー
ル、２−ヘキサノール、３−ヘキサノール、３，３−ジ
メチル−１−ブタノール、４−メチル−１−ペンタノー
ル、２，２−ジメチル−３−ペンタノール、２，４−ジ
メチル−３−ペンタノール、４，４−ジメチル−２−ペ
ンタノール、５−メチル−２−ヘキサノール、１−ヘプ
タノール、２−ヘプタノール、５−メチル−１−ヘキサ
ノール、２−エチル−１−ヘキサノール、２−メチル−
３−ヘキサノール、１−オクタノール、２−オクタノー
ル、シクロペンタノール、２−シクロペンチルエタノー
ル、３−シクロペンチル−１−プロパン、シクロヘキサ
ノール、シクロヘプタノール、シクロオクタノール、
２，３−ジメチルシクロヘキサノール、４−エチルシク
ロヘキサノール、シクロオクチルメタノール、６−メチ
ル−５−ヘプテン−２−オール、１−ノナノール、２−
ノナノール、１−デカノール、２−デカノールおよび３
−デカノール；直鎖状もしくは分枝鎖状のアルキルエー
テルおよびそれらの混合物、例えば、エチルエーテル、
プロピルエーテル、ブチルエーテルなど；およびそれら
の混合物または官能性誘導体。

【００２３】この分野において知られているように、産
生物の抽出は前記産生物を含有する水性相を塩化するこ
とによって改良することができる。

【００２４】抽出操作後、実質的な量の有機溶媒を含有
する水性相を回収するとき、それから水を共沸的に蒸留
することは便利である。一般に、これは水と最小の共沸
混合物を形成できる溶媒の添加、および必要に応じて引
き続いて沈澱剤を添加して所望の生成物を沈澱するこ
と、を必要とする。水と最小の共沸混合物を形成できる
有機溶媒の代表的な例は、ｎ−ブタノール、ベンゼン、
トルエン、ブチルエーテル、四塩化炭素、クロロホル
ム、シクロヘキサン、２，５−ジメチルスルホラン、ヘ
キサノールおよびｍ−キシレンである；好ましい溶媒は
ｎ−ブタノールである。

【００２５】沈澱剤の例は、石油エーテル、低級アルキ
ルエーテル、例えば、エチルエーテル、プロピルエーテ
ルおよびブチルエーテル、および低級アルキルケトン、
例えば、アセトンである。

【００２６】前述したように粗製混合物を回収した後、
それをそれ以上の精製／濃縮工程にかけた後、本発明の
単一の抗生物質を分割することが必要であることがあ
る。この場合において、クロマトグラフィー手順は最初
の選択である。

【００２７】前述したように、本発明の抗生物質ＧＥ２
２７０因子Ｃ_2aは、抗生物質ＧＥ２２７０因子Ａ、
Ｂ₁、Ｃ₁、Ｃ₂、Ｄ₁、Ｄ₂、ＥおよびＴと通常同時産生
される。したがって、一般に因子Ｃ_2aを主要な因子（す
なわち、因子Ａ）および少量の他の因子（すなわち、因
子Ｂ₁、Ｃ₁、Ｃ₂、Ｄ₁、Ｄ₂、ＥおよびＴ）から分離す
ることが必要である。

【００２８】一般に、発酵から回収された粗製混合物を
精製して、抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aを多少の量の
他の因子と一緒に含有する精製された混合物を得る。次
いで、この物質をさらに精製して、本発明の純粋な物質
を生成する。

【００２９】前述の第１精製工程において便利に使用す
ることができるクロマトグラフィー系の例は、ポリスチ
レンまたは混合ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂、
例えば、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ^R）ＸＡ
Ｄ２またはＸＡＤ４［ローム・アンド・ハース（Ｒｏｈ
ｍａｎｄＨａａｓ）］、ドウウェックス（Ｄｏｗｅ
ｘ^R）Ｓ１１２［ダウ・ケミカル・カンパニー（Ｄｏｗ
ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．）］およびダイアイオン（Ｄ
ｉａｉｏｎ^R）［ミツビシ（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）；
アクリル樹脂、例えば、ＸＡＤ７またはＸＡＤ８［ロー
ム・アンド・ハース（ＲｏｈｍａｎｄＨａａ
ｓ）］；ポリアミド、例えば、ポリカプロラクタム、ナ
イロンおよび一般に１〜５の孔体積（ｍｌ／ｇ）、１〜
１００の表面積（ｍ²／ｇ）、０．１５〜０．５０の見
掛けの密度（ｇ／ｍｌ）の範囲、１００〜３０００の平
均直径（オングストローム単位）の範囲および粒子サイ
ズの少なくとも４０％が３００マイクロメートルより小
さい粒子サイズ分布を有する架橋したポリビニルピロリ
ドン、例えば、ポリアミド（Ｐｏｌｙａｍｉｄ）−ＣＣ
６、ポリアミド（Ｐｏｌｙａｍｉｄ）−ＳＣ６、ポリア
ミド（Ｐｏｌｙａｍｉｄ）−ＣＣ６．６、ポリアミド
（Ｐｏｌｙａｍｉｄ）−ＣＣ６ＡＣおよびポリアミド
（Ｐｏｌｙａｍｉｄ）−ＳＣ６ＡＣ［マチェレイ−ネイ
ゲル・アンド・カンパニー（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇ
ｅｌ＆Ｃｏ．）、西ドイツ］、ポリビニルピロリド
ン樹脂ＰＶＰ−Ｃｌ［アルドリッヒ・ヘミー（Ａｌｄｒ
ｉｃｈＣｈｅｍｉｅ）ＧｍｂＨ＆Ｃｏ．、ＫＧ、
西ドイツ］、ポリアミド樹脂ＰＡ４００［Ｍ．ウェルム
（Ｗｏｅｌｍ）ＡＧ、西ドイツ］；および炭素。

【００３０】ポリスチレンまたはアクリル樹脂の場合に
おいて、好ましい溶離剤は水混和性溶媒の極性溶媒混合
物、例えば、前述のもの；ポリアミド樹脂の場合におい
て、溶離剤は好ましくは水混和性溶媒の水性混合物、例
えば、前述のものであるが、炭素について、好ましい溶
離剤は低級ケトン、例えば、アセトンまたは低級アルコ
ール、例えば、メタノールである。

【００３１】前述の工程における便利に使用することが
できるそれ以上のクロマトグラフィー手順は、また、静
止相、例えば、シリカ、アルミナ、ケイ藻土などを使用
するクロマトグラフィーを包含し、ここで有機溶離相は
ハロゲン化低級炭化水素、低級アルカノール、エーテ
ル、および前述の型の高級ケトンおよびそれらの混合物
を包含する溶媒から構成される。

【００３２】便利には、また、いわゆる立体排除クロマ
トグラフィーを使用して、すぐれた精製結果を得ること
ができる。とくに、ヒドロキシル基の大部分がアルキル
化されている、コントロールされた孔の架橋されたデキ
ストラン、例えば、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘ）ＬＨ−２０［ファーマシア・ファイン・ケミカルス
（ＰｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌ
ｓ）、Ａｂ］は、通常この場合において使用される。

【００３３】必要に応じて、前述の手順を反復および／
または組み合わせることができる。前述の通常の手順に
従い、それは通常精製された混合物であり、これは、本
発明の化合物の外に、まだ、多少の量の抗生物質ＧＥ２
２７０因子Ａ、Ｂ₁、Ｃ₁、Ｃ₂、Ｄ₁、Ｄ₂、ＥおよびＴ
を含有することがある。

【００３４】精製した混合物からの抗生物質ＧＥ２２７
０因子Ｃ_2aの分離は、一般にクロマトグラフィーの技
術、例えば、前述のものにより実施することができる。
しかしながら、逆相クロマトグラフィーは好ましい分離
技術であるように思われる。普通の逆相クロマトグラフ
ィーに加えて、また、逆相カラムを使用する調製用ＨＰ
ＬＣを通常使用する。

【００３５】このクロマトグラフィー技術における静止
相は、例えば、種々の官能性誘導体を有するシラン化シ
リカゲルであることができ、そして溶離剤は前述の種類
の水混和性溶媒の水性混合物であることができる。

【００３６】官能化されたシラン化シリカゲルの例は
（Ｃ₈−Ｃ₂₂）アルキル基を有するもの、例えば、官能
性が、例えば、オクタデシルシランまたはオクチルシラ
ン部分、またはシクロヘキサン、フェニル、および同様
な官能性により表されるものである。これらの樹脂は商
業的に入手可能であり、そして本発明の方法において有
用に使用することができる、同様であるか、あるいはな
お改良された性質を有する、新規な追加の樹脂は正式に
登録されている。

【００３７】特別に好ましい調製用ＨＰＬＣ技術は、オ
クタデシル官能化シリカゲル、およびアセトニトリル、
テトラヒドロフランおよび水性ギ酸アンモニウムを含有
する溶離混合物を使用する。

【００３８】特別に好ましい溶離のモードは、約４０％
〜約５０％の相Ａの相Ａおよび相Ｂの直線の勾配で溶離
ことによって表され、ここで相Ａはアセトニトリル：テ
トラヒドロフラン：４０ミリモルのギ酸アンモニウム
４０：４０：２０であり、そして相Ｂは同一成分である
が、比率１０：１０：８０の混合物である。

【００３９】分画を通常のようにそれらの含量に従い、
例えば、普通の紫外線検出器を使用する溶離のプロフィ
ルに従い集め、次いで溶媒をそれ自体知られている技術
（例えば、減圧下の蒸発、凍結乾燥など）に従い除去し
て、本発明の純粋な抗生物質を単離し、これを、必要に
応じて、溶離相の中に存在する塩から、例えば、ポリス
チレンまたは混合ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂
上の吸収および引き続く蒸留水を使用する塩類の洗浄除
去および水と混合可能な溶媒で抗生物質を溶離すること
によってさらに精製することができる、および／または
低級アルカノール、例えば、メタノール、エタノール、
プロパノールおよびイソプロパノールから結晶化するこ
とができる。

【００４０】この分野において通常のように、産生なら
びに回収および精製工程は種々の分析手順によりモニタ
ーすることができ、このような手順はバイオアッセイ、
例えば、微生物についてのペイパーディスクまたは寒天
拡散アッセイ、薄層クロマトグラフィーまたはＨＰＬＣ
手順、これは紫外線または微生物検出工程を包含するす
ることができる、を包含する。

【００４１】好ましいＨＰＬＣ分析技術は、シラン化シ
リカゲルの多孔質および球形の粒子、例えば、均一な直
径を有するＣ−８アルキル基で官能化されたシリカゲル
［例えば、５マイクロメートルのベイカーボンド（Ｂａ
ｋｅｒｂｏｎｄ^R）Ｃ８、ベイカー・リサーチ・プロダ
クツ［ＢａｋｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔ
ｓ）、米国］および極性の水混和性溶媒の直線の勾配の
混合物、例えば、極性が増加する勾配をもつ前述のもの
である溶離剤を使用する逆相ＨＰＬＣにより表わされ
る。

【００４２】この場合において、好ましい溶離混合物は
次のものである：相Ａ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄、４０：４０：２０相Ｂ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄、１０：１０：８０しかし好ましい溶離のモードは次により表される：相Ｂ
中の２０％〜３０％の相Ａ直線勾配、約２０分、約１．
８ｍｌ／分の流速およびおよび２５４ｎｍにおける紫外
線検出。

【００４３】抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aの物理化学
的特性：Ａ）パーキン・エルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）
３２０型分光光度計で記録した紫外線吸収スペクトル
は、次の吸収極大を示： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 溶媒ＵＶｍａｘ（ｎｍ） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ０．１モルのＨＣｌ２４５−２５０（肩）３００−３１５０．１モルのＫＯＨ２４５−２５０（肩）３００−３１５リン酸塩緩衝液ｐＨ７．３８２４５−２５０（肩）３００−３１５メタノール２４５−２５０（肩）３００−３１５ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ）抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aの¹Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルは、ブルーカー（Ｂｒｕｋｅｒ）分光光度計を使
用して２５０ＭＨｚにおいて記録した。内部標準（０．
００ｐｐｍ）としてＴＭＳを使用するＤＭＳＯ−ｄ
₆（ヘキサデューテロジメチルスルホキシド）中のこの
抗生物質のスペクトルは、次のシグナル群を示す［δ、
ｐｐｍ、ｍ］（ｓ＝１重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、
ｍ＝多重線、Ｐｙ＝ピリジン、Ｔｚ＝チアゾリール）９．０３、ｄ、（ＮＨ）；８．７０、ｄ、（２ＮＨ）；
８．６０、ｓ、８．５４、ｓ、８．２９、ｓ、および
７．３８、ｓ、（Ｔｚ、ＣＨ）；８．４８、ｍ、（グリ
シンのＮＨ）；８．４３、ｄ、および８．２７、ｄ、
（ＰｙのＣＨ）；７．３５−７．２０、ｍ、（芳香族の
ＣＨおよび第１アミドのＮＨ）；６．９８、ｓ（第１ア
ミドのＮＨ）；６．０４、ｄ、（ＯＨ）；５．８０、ｔ
（ＯＨ）；５．３５−５．１５、ｍ、（αＣＨ）；５．
０４、ｍ、（フェニルセリンのβＣＨ）；４．９８、ｓ
［ＣＨ₂（ＯＣＨ₃）］；４．８７、ｄ、［ＣＨ₂（Ｏ
Ｈ）］；４．８１、ｍおよび４．５６、ｍ、（オキサゾ
リンのＣＨ₂）；４．３５−３．７５、ｍ、（グリシン
のＣＨ₂およびプロリンアミドのＣＨ）；３．３９、
ｓ、（ＯＣＨ₃）；２．７１、ｍ、および１．３０、
ｍ、（アスパラギンのＣＨ₂）；２．４８、ｄ、（Ｎ−
メチルアスパラギンのＮＣＨ₃）；２．２２−１．８
０、ｍ、（イソプロピルのＣＨおよびプロリンアミドの
ＣＨ）；０．８８および０．８４、ｄ、（バリンのＣＨ
₃）；図１は抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aの¹Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを示す。

【００４４】Ｃ）抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aは、次
の逆相ＨＰＬＣ系を使用して分析すると、１２．６分の
保持時間（Ｒｔ）および０．７６の抗生物質ＧＥ２２７
０因子Ａ（Ｒｔ１６．６分）に関する保持時間を示
す：カラム：ベイカーボンド（Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ^R）Ｃ８
（５μｍ）４．６×２５０ｍｍ［Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ^R
はＪ．Ｔ．ベイカー・リサーチ・プロダクト（Ｂａｋｅ
ｒＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔ）、米国ニュー
ジャージイ州０８８６５、により供給される逆相オクチ
ルシリルシリカゲルのＨＰＬＣカラムについての商品名
である］流速：１．８ｍｌ／分相Ａ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ ４０：４０：２０相Ｂ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ １０：１０：８０溶離：２０分の２０％から３０％の相Ａの直線勾配；検出：紫外線２５４ｎｍＤ）抗生物質ＧＥ２２７０の因子Ｃ_2aの主なＦＡＢ−Ｍ
Ｓピークは１３０６ダルトンである。これはプロトン化
分子イオンの最低のアイソトープに相当する可能性が最
も強い。分析はクレイトス（Ｋｒａｔｏｓ）ＭＳ−５０
二重収束質量分光光度計で、８ｋＶの加速電圧およびサ
ドルフィールド原子ガン、Ｘｅガス（２×１０^-5トルの
圧力、源のイオンゲージ上に示される）、６ｋＶの電圧
および１ｍＡの電流を使用して実施した。ＦＡＢ−ＭＳ
分析のための抗生物質は０．１Ｍの酢酸を含有するチオ
グリセロールマトリックスと試料を混合した。

【００４５】上に報告した物理化学的データに基づい
て、次の構造式を抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aに試験
的に割り当てることができる：

【００４６】

【化１】

【００４７】上の式から明らかなように、抗生物質ＧＥ
２２７０因子Ｃ_2aは、酸、例えば、鉱酸および有機酸と
付加塩を形成できる、いくつかのヘテロサイクルの塩基
の部分を含有する。とくに、製剤学的に許容されうる酸
との塩は好ましい。

【００４８】抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aの抗微生物
活性は、１系列の標準の生体内試験により実証すること
ができる。

【００４９】最小阻止濃度（ＭＩＣ）をミクロブロス希
釈法により決定した。接種物は１０ ⁴〜１０⁵ＣＦＵ／ｍ
ｌであった。すべての微生物は３７℃において培養し
た。ＭＩＣは、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒ
ｒｈａｅａｅ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃ
ｔｅｒｏｉｄｅｓｆｒａｇｉｌｉｓ）、および座瘡プ
ロピオンバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍａｃｎｅｓ）（４８時間）を除外して、１８〜
２４時間に読んだ。淋菌（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈａｅａ
ｅ）は５％のＣＯ₂雰囲気中でインキュベーションし
た；嫌気性微生物は嫌気的ガス混合物中でインキュベー
ションした。使用した培地は次の通りであった：オキソ
イド・アイソ−センシテスト（ＯｘｏｉｄＩｓｏ−Ｓ
ｅｎｓｉｔｅｓｔ）［ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｉ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔ
ｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）、大腸菌（Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、プロテウス・ブル
ガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓｖｕｌｇａｒｉｓ）、緑膿菌
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓ
ａ）］；ディフコ・トッド−ヘウィット（Ｄｉｆｃｏ
Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉｔｔ）のブロス［連鎖球菌属（ｓｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）］；ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）Ｇ
Ｃ塩基ブロスおよび１％のＢＢＬＩｓｏＶｉｔａｌｅ
Ｘ、淋菌（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈａｅａｅ）について；デ
ィフコ・ウィルキンス−チャルグレン（ＤｉｆｃｏＣｈ
ａｌｇｒｅｎ）ブロス、嫌気性微生物について。

【００５０】この抗生物質の最小阻止濃度（ＭＩＣ、マ
イクログラム／ｍｌ）を下表Ｉに報告する。

【００５１】

【表１】

【００５２】その性質にかんがみて、本発明の化合物は
ヒトまたは動物の処置のための薬物の調製において活性
成分として使用することができる。

【００５３】とくに、抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aは
グラム陽性バクテリアおよびグラム陽性ならびにグラム
陰性の嫌気性微生物に対して主として活性な抗微生物剤
である。それはメチシリン、アミノグリコシドまたはグ
リコペプチドの抗生物質との交差抵抗性をもたない。

【００５４】本発明の抗生物質の主な治療学的適用は、
それに対して感受性の微生物の存在に関する感染の処置
である。

【００５５】用語「処置」は予防、治療および治癒を包
含することを意図する。

【００５６】この処置を受ける患者は、処置を必要とす
る動物、例えば、霊長類、とくにヒト、および他の哺乳
動物、例えば、馬、畜牛、豚および羊；および家禽およ
び一般にペットである。

【００５７】本発明の化合物は、そのままで、あるいは
製剤学的に許容されうる担体と混合して投与することが
でき、そして、また、他の抗微生物剤、例えば、ペニシ
リン、セファロスポリン、アミノグルコシドおよびグリ
コペプチドと組み合わせて投与することができる。結合
治療は、こうして、最初に投与したものの治療学的作用
が引き続く投与のとき完全に消失しないような方法にお
いて、活性化合物の順次の、同時のおよび別々の投与を
包含する。

【００５８】好ましい製剤学的組成物は、完全なまたは
損傷した皮膚または粘膜への局所的適用に適当な配合物
である。このような配合物の例は、粉末、軟膏、クリー
ムおよびローションである。これらの配合物の賦形剤
は、通常の製剤学的に許容されうる賦形剤、例えば、油
性軟膏の基剤（例えば、セチルエステルワックス、オレ
イン酸、オリーブ油、パラフィン、鯨油性、澱粉グリセ
ライト）；吸収性軟膏基剤（例えば、無水ラノリン、親
水性ペトロラタム）、乳濁液の軟膏基剤（例えば、セチ
ルアルコール、グリセリルモノステアレート、ラノリ
ン、ステアリン酸）、水溶性軟膏基剤（例えば、グリコ
ールエーテルおよびそれらの誘導体、例えば、ポリエチ
レングリコール、ポリ（オキシ−１，２−エタンジイ
ル）−アルファ−オメガ−ヒドロキシ−オクタデカノエ
ート、ポリソルベート、およびポリエチレングリコール
モノ−ステアレート）である。

【００５９】それらの配合物は他の既知の賦形剤、例え
ば、防腐剤を含有することができ、そしてこの分野にお
いて知られているよに、そして参考文献、例えば、レミ
ントンの製剤科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒ
ｍａｃｅｕｔｉｃａｓＳｃｉｅｎｃｅｓ）、第１７
版、１９８５年、マック・パブリッシング・カンパニー
（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．）に報告さ
れているようにして調製することができる。

【００６０】本発明の化合物は、また、それ自体知られ
ておりそして参考文献、例えば、前述のものに報告され
ている方法に従い、配合することができる。

【００６１】例えば、本発明の化合物は、可溶化剤、例
えば、ポリエチレングリコールまたはジメチルアセトア
ミドおよび表面活性剤、例えば、ポリオキシエチレンソ
ルビタンモノオレエートまたはポリエトキシル化ヒマシ
油を使用して注射のための無菌の水中で配合することが
できる。

【００６２】非経口的投与のための典型的な配合の例
は、最終の調製物の１ｍｌについて１０ｍｇの抗生物質
ＧＥ２２７０因子Ｃ_2a、１０〜２０％の表面活性剤、こ
れはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポ
リオキシエチレンヒマシ油誘導体またはポリオキシエチ
レン水素化ヒマシ油誘導体であることができる、および
０〜２０％、好ましくは１０〜２０％の可溶化剤、例え
ば、プロピレングリコール、ジメチルアセトアミド、ジ
メチルホルムアミド、ｔ−ブチル−Ｎ−ヒドロキシカル
バメート、１，２−、１，３−または１，４−ブタンジ
オール、エチルオレエート、テトラヒドロフルフリル−
ポリエチレン−グリコール２００、ジメチル−イソソル
バイド、ベンジルアルコールなどを含有する。好ましい
可溶化剤はプロピレングリコールである。

【００６３】ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エス
テルは商業的に入手可能であり、そしてそれらのあるも
のは商品名「ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）」で販売されてい
る。それらは、また、「ポリソルベート」の非登録名で
知られている。それらの例はポリソルベート２０、２
１、４０、６０、６１、６５、８０、８１および８５で
ある。本発明の配合において使用のために、ポリソルベ
ート８０（ソリビタンモノ−９−オクタデセノエート、
ポリ（オキシ−１，２−エタンジイル）誘導体）は好ま
しい。

【００６４】ポリオキシエチレンヒマシ油およびポリオ
キシエチレン水素化ヒマシ油は、また、商業的に入手可
能である。それらのいくつかは「クレモフォル（Ｃｒｅ
ｍｏｐｈｏｒ）」の商品名で販売されている。このよう
な化合物の例は、クレモフォル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏ
ｒ^R）ＥＬ（ポリエトキシル化ヒマシ油）、クレモフォ
ル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ^R）ＲＨ４０（ポリエトキシル
化水素化ヒマシ油）、クレモフォル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏ
ｒ^R）ＲＨ６０（ＰＥＧ水素化ヒマシ油）、またはエマ
ルフォル（Ｅｍｕｌｐｈｏｒ^R）ＥＬ−７１９（ポリエ
トキシル化植物油）で販売されている。

【００６５】好ましくは、注射のための配合物は７±
０．５の範囲のｐＨを有する。必要に応じて、調製物の
ｐＨを適当な緩衝剤で調節すること好ましいであろう。
便利には、トリス（ＴＲＩＳ）（すなわち、トリヒドロ
キシメチルアミノメタン）またはホスフェートを緩衝剤
として使用することができる。

【００６６】非経口的投与のための好ましい配合物は、
次の成分を含む：２０％のクレモフォル（Ｃｒｅｍｏｐ
ｈｏｒ^R）ＥＬ（ポリオキシ３５ヒマシ油ＵＳＰ／Ｎ
Ｆ）、５〜２０％、好ましくは１０〜２０％のプロピレ
ングリコール。

【００６７】一般に、これらの配合物は活性成分を有機
溶媒の中に溶解し、次いで表面活性成分を添加し、そし
て最後に注射のための無菌の水で所望の体積に希釈する
ことによって調製することができる。

【００６８】他の賦形剤、例えば、防腐剤または可溶化
剤をこの分野において知られているように添加すること
ができる。

【００６９】非経口的配合物の例は次の通りである：抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2a １０ｍｇＰＥＧ４０ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ^R ＥＬ）０．２ｍｌプロピレングリコール０．２ｍｌメチルパラヒドロキシベンゾエート０．５ｍｇプロピルパラヒドロキシベンゾエート０．０５ｍｇ注射のための水適量１ｍｌあるいは、活性成分は使用前の再構成のための凍結乾燥
した粉末として調製することができる。

【００７０】凍結乾燥した物質は活性成分および表面活
性剤、例えば、ポリエチレングリコール６０水素化ヒマ
シ油を含有する混合物から出発して調製する場合、それ
は水性媒質単独で、有機溶媒を添加しないで、便利に再
構成することができる。

【００７１】必要に応じて、普通の凍結乾燥助剤を添加
して粉末の形態の凍結乾燥した物質を得ることができ
る。

【００７２】好ましくは、すべてのこれらの配合物は、
本発明の抗生物質に対して感受性の微生物を含む感染の
処置において静脈内投与に使用される。

【００７３】偽膜性全膜炎または胃腸管中の嫌気性微生
物の存在に起因する他の病気の処置において、有効投与
量の本発明の化合物は適当な製剤学的形態、例えば、カ
プセル剤、錠剤または水性懸濁液で経口的に投与するこ
とができる。

【００７４】活性成分の投与量は、多数の因子、例え
ば、患者のタイプ、年令および状態、特定の活性成分お
よび投与のために選択した配合物、投与のスケジュール
などに依存する。

【００７５】一般に、有効な抗微生物投与量を単一の単
位投与量の形態につき使用する。

【００７６】一般に、反復した適用／投与、例えば、２
〜６回／日は好ましい。有効投与量は、一般に、０．５
〜５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲であることができる。

【００７７】好ましい局所的調製物は、１％〜１０％の
本発明の化合物を含有する軟膏である。

【００７８】いずれにしても、処方する医師は所定の場
合において所定の患者のために最適な投与量を決定する
ことができるであろう。

【００７９】ヒトおよび獣医学的治療において薬物とし
て使用の外に、本発明の化合物は、また、動物の成長促
進剤として使用することができる。

【００８０】この目的で、本発明の化合物は適当な飼料
の中に含めて経口的に投与される。使用する正確な濃度
は、通常の量の飼料が消費されているとき、成長促進有
効量で活性成分を供給するために要求される濃度であ
る。

【００８１】動物飼料への本発明の化合物の添加は、好
ましくは、活性化合物を有効量で含有する適当な飼料プ
レミックスを調製し、そしてこのプレミックスを完全な
規定食に混入することによって達成される。

【００８２】あるいは、活性成分を含有する中間の濃縮
物または飼料補助物質を飼料の中に配合することができ
る。このような飼料プレミックスおよび完全規定食を調
製しそして投与できる方法は、参考文献、例えば、次の
参考文献に記載されている：Ｅ．Ｗ．クランプトン（Ｃ
ｒａｍｐｔｏｎ）ら、「アプライド・アニマル・ニュー
トリション（ＡｐｐｌｉｅｄＡｎｉｍａｌＮｕｔｒ
ｉｔｉｏｎ）」、Ｗ．Ｈ．フリードマン・アンド・カン
パニー（ＦｒｅｅｄｍａｎａｎｄＣｏ．）、米国サ
ンフランシスコ、１９６９年またはＤ．Ｃ．チャーチ
（Ｃｈｕｒｃｈ）、「ライブストック・フィーズ・アン
ド・フィーディング（ＬｉｖｅｓｔｏｃｋＦｅｅｄｓ
ａｎｄＦｅｅｄｉｎｇ）」、オー・アンド・ビー・ブ
ックス（ＯａｎｄＢＢｏｏｋｓ）、米国オレゴン
州コルバリス。

【００８３】

【実施例】次の実施例によって、本発明をさらに説明す
る。これらの実施例は本発明を限定しない。

【００８４】実施例１発酵による抗生物質ＧＥ２２７０因子の産生寒天の傾斜培地上で成長したプラノビスポラ・ロセア
（Ｐｌａｎｏｂｉｓｐｏｒａｒｏｓｅａ）ＡＴＣＣ５
３７７３の培養物を、１００ｍｌの種子の培地（澱粉２
％、ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．３％、ビー
フエキス０．２％、大豆粉末０．２％、炭酸カルシウム
０．１％、滅菌前にｐＨ７．０にする）を含有する２つ
の５００ｍｌのエルレンマイヤーフラスコの中に接種し
た。種子の培地の３つの５００ｍｌのエルレンマイヤー
フラスコを、回転震盪器（２００ｒｐｍ）上で２８℃に
おいて９６時間インキュベーションした培養物で接種
（５％の接種）した。

【００８５】３つのエルレンマイヤーフラスコの培養物
を回転震盪器（２００ｒｐｍ）上で２８℃において７２
時間インキュベーションし、次いで６リットルの種子培
地を含有する１０リットルのジャー発酵器の中に接種し
た。７２時間２８℃においてインキュベーション、９０
０ｒｐｍで撹拌しそして通気（約１標準リットルの空気
／体積／分）した後、培養物を２００リットルの産生培
地（澱粉２％、ペプトン０．２５％、カゼイン加水分解
物０．２５％、酵母エキス０．３％、ビーフエキス０．
２％、大豆粉末０．２％、炭酸カルシウム０．１％、滅
菌前にｐＨ７．４に調節した）。

【００８６】２８℃において１８０ｒｐｍで撹拌しかつ
通気（約０．５標準リットルの空気／体積／分）しなが
ら１２６時間発酵した後、収穫したブロスは他のＧＥ２
２７０因子とともに本発明の抗生物質を含有した。

【００８７】実施例２ａ）粗製ＧＥ２２７０因子の回収菌糸体を収穫したブロスからヒフロ（Ｈｙｆｌｏ）フィ
ルター助剤を使用する濾過により集めた。菌糸体のケー
クを引き続いて６０および２０リットルのアセトンで順
次に抽出し、そしてプールした抽出液を減圧下に濃縮し
た。粗製の抗生物質の複合体を水残留物から液体−固体
セパレーターで分離した。湿潤した物質を２−プロパノ
ールの中に可溶化し、そして溶液を減圧下に濃縮して水
を除去した。粗製した抗生物質の複合体（５０ｇ）を濃
縮した残留物から沈澱させた。この粗製の複合体は、主
要量の抗生物質ＧＥ２２７０因子Ａを抗生物質ＧＥ２２
７０因子_2aおよび他の少量の前述の因子と一緒にを含有
した。

【００８８】ｂ）他のＧＥ２２７０因子と混合して抗生
物質ＧＥ２２７０因子_2aを含有する精製した混合物の分
離６回の反復した発酵からの粗製ＧＥ２２７０因子の調製
物をプールし、そして１２リットルのＣＨ₂Ｃｌ₂：メタ
ノール（９３：７）とともに撹拌した。不溶性物質を濾
過により除去し、そして抗生物質の複合体を含有する溶
液をＣＨ₂Ｃｌ₂：メタノール（９３：７）の中で平衡化
した１３ｋｇ（２３０〜４００メッシュ）のシリカゲル
のカラムに適用した。抗生物質ＧＥ２２７０の因子Ｃ_2a
をカラムからＣＨ₂Ｃｌ₂：メタノール（９３：７）で溶
離することによって溶離した。本発明の抗生物質を含有
する分画（ＨＰＬＣ分析）を極性し、減圧下に濃縮し、
そして乾燥すると、２３．５ｇの抗生物質ＧＥ２２７０
の因子Ｃ_2aが他の少量のが得られると混合して得られ
た。

【００８９】この調製物の一部分（５．５ｇ）を、再
び、塩化メチレン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）中で平衡化した４００
ｇのシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）を含有する
カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し
た。カラムをまず塩化メチレン（１リットル）を展開
し、次いで１系列の塩化メチレン／次の比（ｖ／ｖ）：
９６／４（３リットル）；９４／６（１リットル）；９
２／８（２リットル）；９０／１０（６リットル）およ
び８８／１２（４リットル）のメタノールの混合物で順
次に展開した。

【００９０】主としてＧＥ２２７０因子Ｃ_2a（ＨＰＬＣ
分析）を含有する分画をプールし、そして濃縮した。抗
生物質の調製物（６４６ｍｇ）を石油エーテルの添加に
より沈澱させた。

【００９１】実施例３純粋な抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aの単離主として抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aを含有する精製
した混合物を、さらに、前述の調製物から調製用ＨＰＬ
Ｃにより精製した。

【００９２】抗生物質の前述の調製物（１０ｍｇ）の一
部分を１ｍｌの相Ａ（ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラ
ン：４０ｍｌのＨＣＯＯＮＨ₄−４０：４０：２０）お
よび１ｍｌの相Ｂ（ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：
４０ミリモルのＨＣＯＯＮＨ₄−１０：１０：８０）の
中に可溶化し、そして４０％の相Ａおよび６０％の相Ｂ
の混合物と平衡化した７μｍのヌクレオシル（Ｎｕｃｌ
ｅｏｓｉｌ^R）Ｃ１８（オクタデシルシラン基で官能化
したシリカゲル）を詰めたＨＰＬＣ２５０×２０ｍｍ
のハイバー（Ｈｉｂａｒ）カラム［Ｅ．メルク（Ｍｅｒ
ｋｃｋ）；ドイツ国ダーマスタット］の中に注入した。
このカラムを１５ｍｌ／分の流速において４０％から５
０％の相Ａの直線の勾配で２２分で溶離した。紫外線の
検出は２５４ｎｍであった。本発明の純粋な抗生物質を
含有する１０の順次のクロマトグラフィーの実験の分画
をプールし、そして減圧下に濃縮してＣＨ₃ＣＮを排除
した。抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aを水から沈澱し
た。沈澱を遠心により集め、蒸留水で２回洗浄し、そし
て真空下に乾燥すると、６６ｍｇの純粋な抗生物質が得
られた。

【００９３】本発明の主な特徴および態様は、次の通り
である。

【００９４】１、次の特性：Ａ）次の吸収極大を示す紫外線吸収スペクトル： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 溶媒ＵＶｍａｘ（ｎｍ） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ０．１モルのＨＣｌ２４５−２５０（肩）３００−３１５０．１モルのＫＯＨ２４５−２５０（肩）３００−３１５リン酸塩緩衝液ｐＨ７．３８２４５−２５０（肩）３００−３１５メタノール２４５−２５０（肩）３００−３１５ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ）内部標準（０．００ｐｐｍ）としてＴＭＳを使用す
るＤＭＳＯ−ｄ₆（ヘキサデューテロジメチルスルホキ
シド）中の次のシグナル群を示す¹Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル［δ、ｐｐｍ、ｍ］（ｓ＝１重線、ｄ＝二重線、ｔ＝
三重線、ｍ＝多重線、Ｐｙ＝ピリジン、Ｔｚ＝チアゾリ
ール）９．０３、ｄ、（ＮＨ）；８．７０、ｄ、（２ＮＨ）；
８．６０、ｓ、８．５４、ｓ、８．２９、ｓ、および
７．３８、ｓ、（Ｔｚ、ＣＨ）；８．４８、ｍ、（グリ
シンのＮＨ）；８．４３、ｄ、および８．２７、ｄ、
（ＰｙのＣＨ）；７．３５−７．２０、ｍ、（芳香族の
ＣＨおよび第１アミドのＮＨ）；６．９８、ｓ（第１ア
ミドのＮＨ）；６．０４、ｄ、（ＯＨ）；５．８０、ｔ
（ＯＨ）；５．３５−５．１５、ｍ、（αＣＨ）；５．
０４、ｍ、（フェニルセリンのβＣＨ）；４．９８、ｓ
［ＣＨ₂（ＯＣＨ₃）］；４．８７、ｄ、［ＣＨ₂（Ｏ
Ｈ）］；４．８１、ｍおよび４．５６、ｍ、（オキサゾ
リンのＣＨ₂）；４．３５−３．７５、ｍ、（グリシン
のＣＨ₂およびプロリンアミドのＣＨ）；３．３９、
ｓ、（ＯＣＨ₃）；２．７１、ｍ、および１．３０、
ｍ、（アスパラギンのＣＨ₂）；２．４８、ｄ、（Ｎ−
メチルアスパラギンのＮＣＨ₃）；２．２２−１．８
０、ｍ、（イソプロピルのＣＨおよびプロリンアミドの
ＣＨ）；０．８８および０．８４、ｄ、（バリンのＣＨ
₃）；Ｃ）次の逆相ＨＰＬＣ系における１２．６分の保持時間
（Ｒｔ）および０．７６の抗生物質ＧＥ２２７０因子Ａ
（Ｒｔ１６．６分）に関する保持時間：カラム：ベイカーボンド（Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ^R）Ｃ８
（５μｍ）４．６×２５０ｍｍ流速：１．８ｍｌ／分相Ａ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ ４０：４０：２０相Ｂ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ １０：１０：８０溶離：２０分の２０％から３０％の相Ａの直線勾配；検出：紫外線２５４ｎｍＤ）クレイトス（Ｋｒａｔｏｓ）ＭＳ−５０二重収束質
量分光光度計で、８ｋＶの加速電圧およびサドルフィー
ルド原子ガン、Ｘｅガス（２×１０^-5トルの圧力、源の
イオンゲージ上に示される）、６ｋＶの電圧および１ｍ
Ａの電流を使用し、０．１Ｍの酢酸を含有するチオグリ
セロールマトリックスと試料を混合するとき、１３０６
ダルトンの値を示すプロトン化分子イオンの最低のアイ
ソトープに相当する主なＦＡＢ−ＭＳピーク；を有する
抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aおよびその付加塩。

【００９５】２、次の式

【００９６】

【化２】

【００９７】を有する化合物。

【００９８】３、次の特性：Ａ）次の吸収極大を示す紫外線吸収スペクトル： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 溶媒ＵＶｍａｘ（ｎｍ） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ０．１モルのＨＣｌ２４５−２５０（肩）３００−３１５０．１モルのＫＯＨ２４５−２５０（肩）３００−３１５リン酸塩緩衝液ｐＨ７．３８２４５−２５０（肩）３００−３１５メタノール２４５−２５０（肩）３００−３１５ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ）内部標準（０．００ｐｐｍ）としてＴＭＳを使用す
るＤＭＳＯ−ｄ₆（ヘキサデューテロジメチルスルホキ
シド）中の次のシグナル群を示す¹Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル［δ、ｐｐｍ、ｍ］（ｓ＝１重線、ｄ＝二重線、ｔ＝
三重線、ｍ＝多重線、Ｐｙ＝ピリジン、Ｔｚ＝チアゾリ
ール）９．０３、ｄ、（ＮＨ）；８．７０、ｄ、（２ＮＨ）；
８．６０、ｓ、８．５４、ｓ、８．２９、ｓ、および
７．３８、ｓ、（Ｔｚ、ＣＨ）；８．４８、ｍ、（グリ
シンのＮＨ）；８．４３、ｄ、および８．２７、ｄ、
（ＰｙのＣＨ）；７．３５−７．２０、ｍ、（芳香族の
ＣＨおよび第１アミドのＮＨ）；６．９８、ｓ（第１ア
ミドのＮＨ）；６．０４、ｄ、（ＯＨ）；５．８０、ｔ
（ＯＨ）；５．３５−５．１５、ｍ、（αＣＨ）；５．
０４、ｍ、（フェニルセリンのβＣＨ）；４．９８、ｓ
［ＣＨ₂（ＯＣＨ₃）］；４．８７、ｄ、［ＣＨ₂（Ｏ
Ｈ）］；４．８１、ｍおよび４．５６、ｍ、（オキサゾ
リンのＣＨ₂）；４．３５−３．７５、ｍ、（グリシン
のＣＨ₂およびプロリンアミドのＣＨ）；３．３９、
ｓ、（ＯＣＨ₃）；２．７１、ｍ、および１．３０、
ｍ、（アスパラギンのＣＨ₂）；２．４８、ｄ、（Ｎ−
メチルアスパラギンのＮＣＨ₃）；２．２２−１．８
０、ｍ、イソプロピルのＣＨおよびプロリンアミドのＣ
Ｈ）；０．８８および０．８４、ｄ、（バリンのＣ
Ｈ₃）；Ｃ）次の逆相ＨＰＬＣ系における１２．６分の保持時間
（Ｒｔ）および０．７６の抗生物質ＧＥ２２７０因子Ａ
（Ｒｔ１６．６分）に関する保持時間：カラム：ベイカーボンド（Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ^R）Ｃ８
（５μｍ）４．６×２５０ｍｍ流速：１．８ｍｌ／分相Ａ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ ４０：４０：２０相Ｂ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ １０：１０：８０溶離：２０分の２０％から３０％の相Ａの直線勾配；検出：紫外線２５４ｎｍＤ）クレイトス（Ｋｒａｔｏｓ）ＭＳ−５０二重収束質
量分光光度計で、８ｋＶの加速電圧およびサドルフィー
ルド原子ガン、Ｘｅガス（２×１０^-5トルの圧力、源の
イオンゲージ上に示される）、６ｋＶの電圧および１ｍ
Ａの電流を使用し、０．１Ｍの酢酸を含有するチオグリ
セロールマトリックスと試料を混合するとき、１３０６
ダルトンの値を示すプロトン化分子イオンの最低のアイ
ソトープに相当する主なＦＡＢ−ＭＳピーク；を有する
抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aおよびその付加塩を製造
するにあたり、プラノビスポラ・ロセア（Ｐｌａｎｏｂ
ｉｓｐｏｒａｒｏｓｅａ）ＡＴＣＣ５３７７３または
ＧＥ２２７０因子Ｃ_2a産生性突然変異体またはその変異
型を深部好気的条件下に発酵して得られる抗生物質をク
ロマトグラフィー技術により分離することからなる上記
抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aおよびその付加塩の製造
方法。

【００９９】４、クロマトグラフィー技術が逆相クロマ
トグラフィーを包含する上記第３項記載の方法。

【０１００】５、逆相クロマトグラフィーがＨＰＬＣ逆
相クロマトグラフィーを包含する上記第４項記載の方
法。

【０１０１】６、逆相クロマトグラフィーの静止相がＣ
₈−Ｃ₂₂アルキル官能性またはシクロヘキシルまたはフ
ェニル官能性を有する官能化シリカゲルである上記第４
および５項記載の方法。

【０１０２】７、静止相がオクタデシル官能化シリカゲ
ルであり、そして溶離をアセトニトリル、テトラヒドロ
フランおよびギ酸アンモニウムを含有する混合物を使用
して実施する上記第６項記載の方法。

【０１０３】８、菌糸体を水混和性溶媒で抽出し、次い
で濃縮した水性抽出液から粗製の抗生物質の混合物を回
収することによって、分離工程にかけるプラノビスポラ
・ロセア（Ｐｌａｎｏｂｉｓｐｏｒａｒｏｓｅａ）Ａ
ＴＣＣ５３７７３またはＧＥ２２７０因子Ｃ_2aを産生す
る突然変異体またはその変異型の発酵から得られる抗生
物質の混合物を調製し、そして得られるＧＥ２２７０因
子の粗製の混合物を中間のクロマトグラフィーの精製に
かけ、次いでＨＰＬＣの逆相クロマトグラフィーを実施
する上記第５〜７項のいずれかに記載の方法。

【０１０４】９、中間のクロマトグラフィーの精製工程
が、静止相としてシリカゲルを使用しそして溶離相とし
てハロゲン化低級炭化水素、低級アルカノールまたはそ
れらの混合物を使用して実施する上記第８項記載の方
法。

【０１０５】１０、濃縮した水性抽出液から水を共沸的
に除去し、そして沈澱剤を濃縮した溶液に添加すること
によって、粗製の抗生物質の混合物を濃縮した水性抽出
液から回収する上記第８および９項記載の方法。

【０１０６】１１、上記第１および２項記載の化合物を
製剤学的に許容されうる担体と混合してを含有する製剤
学的組成物。

【０１０７】１２、薬物として使用するための上記第１
および２項記載の化合物。

【０１０８】１３、抗微生物学的使用のための薬物の調
製のための上記第１および２項記載の化合物の使用。

【０１０９】１４、動物の成長促進剤としての上記第１
および２項記載の化合物の使用。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aの¹Ｈ−
ＮＭＲスペクトルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＣ１２Ｒ 1:01） (72)発明者ルイジ・コロンボイタリア・バレーゼ・21046マルナテ・ビアレデイプグリア15 (72)発明者マウリツイオ・デナロイタリア・ミラノ・20090オペラ・スポルテイングミラソレ35 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07G 11/00 C12P 1/06 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】次の特性：Ａ）次の吸収極大を示す紫外線吸収スペクトル： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 溶媒ＵＶｍａｘ（ｎｍ） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ０．１モルのＨＣｌ２４５−２５０（肩）３００−３１５０．１モルのＫＯＨ２４５−２５０（肩）３００−３１５リン酸塩緩衝液ｐＨ７．３８２４５−２５０（肩）３００−３１５メタノール２４５−２５０（肩）３００−３１５ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ）内部標準（０．００ｐｐｍ）としてＴＭＳを使用す
るＤＭＳＯ−ｄ₆（ヘキサデューテロジメチルスルホキ
シド）中の次のシグナル群を示す¹Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル［δ、ｐｐｍ、ｍ］（ｓ＝１重線、ｄ＝二重線、ｔ＝
三重線、ｍ＝多重線、Ｐｙ＝ピリジン、Ｔｚ＝チアゾリ
ール）９．０３、ｄ、（ＮＨ）；８．７０、ｄ、（２ＮＨ）；
８．６０、ｓ、８．５４、ｓ、８．２９、ｓ、および
７．３８、ｓ、（Ｔｚ、ＣＨ）；８．４８、ｍ、（グリ
シンのＮＨ）；８．４３、ｄ、および８．２７、ｄ、
（ＰｙのＣＨ）；７．３５−７．２０、ｍ、（芳香族の
ＣＨおよび第１アミドのＮＨ）；６．９８、ｓ（第１ア
ミドのＮＨ）；６．０４、ｄ、（ＯＨ）；５．８０、ｔ
（ＯＨ）；５．３５−５．１５、ｍ、（αＣＨ）；５．
０４、ｍ、（フェニルセリンのβＣＨ）；４．９８、ｓ
［ＣＨ₂（ＯＣＨ₃）］；４．８７、ｄ、［ＣＨ₂（Ｏ
Ｈ）］；４．８１、ｍおよび４．５６、ｍ、（オキサゾ
リンのＣＨ₂）；４．３５−３．７５、ｍ、（グリシン
のＣＨ₂およびプロリンアミドのＣＨ）；３．３９、
ｓ、（ＯＣＨ₃）；２．７１、ｍ、および１．３０、
ｍ、（アスパラギンのＣＨ₂）；２．４８、ｄ、（Ｎ−
メチルアスパラギンのＮＣＨ₃）；２．２２−１．８
０、ｍ、（イソプロピルのＣＨおよびプロリンアミドの
ＣＨ）；０．８８および０．８４、ｄ、（バリンのＣＨ
₃）；Ｃ）次の逆相ＨＰＬＣ系における１２．６分の保持時間
（Ｒｔ）および０．７６の抗生物質ＧＥ２２７０因子Ａ
（Ｒｔ１６．６分）に関する保持時間：カラム：ベイカーボンド（Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ^R）Ｃ８
（５μｍ）４．６×２５０ｍｍ流速：１．８ｍｌ／分相Ａ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ ４０：４０：２０相Ｂ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ １０：１０：８０溶離：２０分の２０％から３０％の相Ａの直線勾配；検出：紫外線２５４ｎｍＤ）クレイトス（Ｋｒａｔｏｓ）ＭＳ−５０二重収束質
量分光光度計で、８ｋＶの加速電圧およびサドルフィー
ルド原子ガン、Ｘｅガス（２×１０^-5torrの圧力、源の
イオンゲージ上に示される）、６ｋＶの電圧および１ｍ
Ａの電流を使用し、０．１Ｍの酢酸を含有するチオグリ
セロールマトリックスと試料を混合するとき、１３０６
ダルトンの値を示すプロトン化分子イオンの最低のアイ
ソトープに相当する主なＦＡＢ−ＭＳピーク；を有する
抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aおよびその付加塩。
【請求項２】次の特性：Ａ）次の吸収極大を示す紫外線吸収スペクトル： ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 溶媒ＵＶｍａｘ（ｎｍ） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ０．１モルのＨＣｌ２４５−２５０（肩）３００−３１５０．１モルのＫＯＨ２４５−２５０（肩）３００−３１５リン酸塩緩衝液ｐＨ７．３８２４５−２５０（肩）３００−３１５メタノール２４５−２５０（肩）３００−３１５ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Ｂ）内部標準（０．００ｐｐｍ）としてＴＭＳを使用す
るＤＭＳＯ−ｄ₆（ヘキサデューテロジメチルスルホキ
シド）中の次のシグナル群を示す¹Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル［δ、ｐｐｍ、ｍ］（ｓ＝１重線、ｄ＝二重線、ｔ＝
三重線、ｍ＝多重線、Ｐｙ＝ピリジン、Ｔｚ＝チアゾリ
ール）９．０３、ｄ、（ＮＨ）；８．７０、ｄ、（２ＮＨ）；
８．６０、ｓ、８．５４、ｓ、８．２９、ｓ、および
７．３８、ｓ、（Ｔｚ、ＣＨ）；８．４８、ｍ、（グリ
シンのＮＨ）；８．４３、ｄ、および８．２７、ｄ、
（ＰｙのＣＨ）；７．３５−７．２０、ｍ、（芳香族の
ＣＨおよび第１アミドのＮＨ）；６．９８、ｓ（第１ア
ミドのＮＨ）；６．０４、ｄ、（ＯＨ）；５．８０、ｔ
（ＯＨ）；５．３５−５．１５、ｍ、（αＣＨ）；５．
０４、ｍ、（フェニルセリンのβＣＨ）；４．９８、ｓ
［ＣＨ₂（ＯＣＨ₃）］；４．８７、ｄ、［ＣＨ₂（Ｏ
Ｈ）］；４．８１、ｍおよび４．５６、ｍ、（オキサゾ
リンのＣＨ₂）；４．３５−３．７５、ｍ、（グリシン
のＣＨ₂およびプロリンアミドのＣＨ）；３．３９、
ｓ、（ＯＣＨ₃）；２．７１、ｍ、および１．３０、
ｍ、（アスパラギンのＣＨ₂）；２．４８、ｄ、（Ｎ−
メチルアスパラギンのＮＣＨ₃）；２．２２−１．８
０、ｍ、（イソプロピルのＣＨおよびプロリンアミドの
ＣＨ）；０．８８および０．８４、ｄ、（バリンのＣＨ
₃）；Ｃ）次の逆相ＨＰＬＣ系における１２．６分の保持時間
（Ｒｔ）および０．７６の抗生物質ＧＥ２２７０因子Ａ
（Ｒｔ１６．６分）に関する保持時間：カラム：ベイカーボンド（Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ^R）Ｃ８
（５μｍ）４．６×２５０ｍｍ流速：１．８ｍｌ／分相Ａ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ ４０：４０：２０相Ｂ：ＣＨ₃ＣＮ：テトラヒドロフラン：４０ｍＭのＨ
ＣＯＯＮＨ₄ １０：１０：８０溶離：２０分の２０％から３０％の相Ａの直線勾配；検出：紫外線２５４ｎｍＤ）クレイトス（Ｋｒａｔｏｓ）ＭＳ−５０二重収束質
量分光光度計で、８ｋＶの加速電圧およびサドルフィー
ルド原子ガン、Ｘｅガス（２×１０^-5トルの圧力、源の
イオンゲージ上に示される）、６ｋＶの電圧および１ｍ
Ａの電流を使用し、０．１モルの酢酸を含有するチオグ
リセロールのマトリックスと試料を混合するとき、１３
０６ダルトンの値を示すプロトン化分子イオンの最低の
アイソトープに相当する主なＦＡＢ−ＭＳピーク；を有
する抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aおよびその付加塩を
製造するにあたり、プラノビスポラ・ロセア（Ｐｌａｎ
ｏｂｉｓｐｏｒａｒｏｓｅａ）ＡＴＣＣ５３７７３ま
たはＧＥ２２７０因子Ｃ_2a産生性突然変異体またはその
変異型を深部好気的条件下に発酵して得られる抗生物質
をクロマトグラフィー技術により分離することを特徴と
する上記抗生物質ＧＥ２２７０因子Ｃ_2aおよびその付加
塩の製造方法。
【請求項３】請求項１記載の化合物を有効成分として
含有することを特徴とする抗微生物剤。