JP3093885B2 - カラムの洗浄方法 - Google Patents
カラムの洗浄方法Info
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- JP3093885B2 JP3093885B2 JP04251368A JP25136892A JP3093885B2 JP 3093885 B2 JP3093885 B2 JP 3093885B2 JP 04251368 A JP04251368 A JP 04251368A JP 25136892 A JP25136892 A JP 25136892A JP 3093885 B2 JP3093885 B2 JP 3093885B2
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アフィニティカラムを
利用した抗体の分取・精製工程で使用されるカラムの洗
浄方法に関するものである。
利用した抗体の分取・精製工程で使用されるカラムの洗
浄方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】マウス腹水中もしくは細胞培養上清中か
ら抗体の分取・精製を行うには、従来から図２に示すよ
うな装置が使用されていた。この装置による抗体の分取
・精製工程は次の通りである。 抗体を含むマウス腹水等を吸着液バッファーに溶解
させる。 ポンプ12により所定量の吸着液を流し、カラム11内
のリガンドに抗体を吸着させる。 ポンプ12により、カラム11内に洗浄液を流す。洗浄
液量はカラム11の容量の90倍程度である。 ポンプ12により、カラム11内に溶離液を流し、リガ
ンドに吸着されていた抗体を溶離させて回収する。
ら抗体の分取・精製を行うには、従来から図２に示すよ
うな装置が使用されていた。この装置による抗体の分取
・精製工程は次の通りである。 抗体を含むマウス腹水等を吸着液バッファーに溶解
させる。 ポンプ12により所定量の吸着液を流し、カラム11内
のリガンドに抗体を吸着させる。 ポンプ12により、カラム11内に洗浄液を流す。洗浄
液量はカラム11の容量の90倍程度である。 ポンプ12により、カラム11内に溶離液を流し、リガ
ンドに吸着されていた抗体を溶離させて回収する。
【０００３】ところがこのような従来法においては、カ
ラム容量の90倍という多量の洗浄液を必要とするため、
特に工業的スケールにおいては洗浄液量の増加が大きい
問題となっていた。
ラム容量の90倍という多量の洗浄液を必要とするため、
特に工業的スケールにおいては洗浄液量の増加が大きい
問題となっていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記した従来
の問題点を解決して、リガンドに吸着されない夾雑蛋白
等の不純物をカラム内から十分に除去することができ、
しかも洗浄液量を従来よりも大幅に減少させることがで
きるカラムの洗浄方法を提供するために完成されたもの
である。
の問題点を解決して、リガンドに吸着されない夾雑蛋白
等の不純物をカラム内から十分に除去することができ、
しかも洗浄液量を従来よりも大幅に減少させることがで
きるカラムの洗浄方法を提供するために完成されたもの
である。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めになされた本発明のカラムの洗浄方法は、抗体を分取
・精製するためのアフィニティカラムの入口側と出口側
にそれぞれシリンジを接続し、カラムに吸着液を流して
抗体をカラムのリガンドに吸着させた後、洗浄液をこれ
らのシリンジを利用してカラム内に交互に流しながら洗
浄することを特徴とするものである。
めになされた本発明のカラムの洗浄方法は、抗体を分取
・精製するためのアフィニティカラムの入口側と出口側
にそれぞれシリンジを接続し、カラムに吸着液を流して
抗体をカラムのリガンドに吸着させた後、洗浄液をこれ
らのシリンジを利用してカラム内に交互に流しながら洗
浄することを特徴とするものである。
【０００６】
【実施例】以下に本発明を図１に示す実施例とともに更
に詳細に説明する。図１において、１はマウス腹水中も
しくは細胞培養上清中から抗体を分取・精製するための
アフィニティカラム、２は吸着液と溶離液をカラム１に
供給するためのポンプである。実施例においては、カラ
ム１の入口側と出口側にバルブ３、４を介してそれぞれ
シリンジ５、６が設けられている。これらのシリンジ
５、６をバルブ７、８と洗浄液供給用のポンプ９とによ
って動かすことにより、洗浄液をカラム１に正逆交互に
流せるようになっている。
に詳細に説明する。図１において、１はマウス腹水中も
しくは細胞培養上清中から抗体を分取・精製するための
アフィニティカラム、２は吸着液と溶離液をカラム１に
供給するためのポンプである。実施例においては、カラ
ム１の入口側と出口側にバルブ３、４を介してそれぞれ
シリンジ５、６が設けられている。これらのシリンジ
５、６をバルブ７、８と洗浄液供給用のポンプ９とによ
って動かすことにより、洗浄液をカラム１に正逆交互に
流せるようになっている。
【０００７】まず、従来と同様にポンプ２からカラム１
に対して抗体を含む吸着液が供給され、吸着液中の抗体
はカラム１内のリガンドに吸着される。次にカラム１の
洗浄を行うのであるが、最初にシリンジ５、６に洗浄液
を供給する。このときに使用される洗浄液量は、カラム
容量の２〜10倍としておくことが好ましい。
に対して抗体を含む吸着液が供給され、吸着液中の抗体
はカラム１内のリガンドに吸着される。次にカラム１の
洗浄を行うのであるが、最初にシリンジ５、６に洗浄液
を供給する。このときに使用される洗浄液量は、カラム
容量の２〜10倍としておくことが好ましい。
【０００８】次に、バルブ７、８とポンプ９とを使って
一方のシリンジ５のピストンを前進させると同時に、他
方のシリンジ６のピストンを後退させる。これによって
洗浄液はカラム１の上方から下方へ流れ、カラム１内は
洗浄される。このようにして一方のシリンジ５内の洗浄
液がシリンジ６側に移動したら、次にシリンジ６のピス
トンを前進させると同時に、他方のシリンジ５のピスト
ンを後退させる。この結果、洗浄液はカラム１の下方か
ら上方へ流れ、カラム１内は逆方向に洗浄される。
一方のシリンジ５のピストンを前進させると同時に、他
方のシリンジ６のピストンを後退させる。これによって
洗浄液はカラム１の上方から下方へ流れ、カラム１内は
洗浄される。このようにして一方のシリンジ５内の洗浄
液がシリンジ６側に移動したら、次にシリンジ６のピス
トンを前進させると同時に、他方のシリンジ５のピスト
ンを後退させる。この結果、洗浄液はカラム１の下方か
ら上方へ流れ、カラム１内は逆方向に洗浄される。
【０００９】以上の工程を繰り返して行えば、カラム１
内は交互に何度も洗浄されることとなり、洗浄液の量が
カラム容量の２〜10倍であっても、カラム容量の90倍の
洗浄液を使用していた従来と同様に、リガンドに吸着さ
れない夾雑蛋白等の不純物をカラム内から十分に除去す
ることができる。なお、洗浄液量がカラム容量の２倍未
満では洗浄液中の夾雑蛋白等の濃度が高くなって洗浄効
果が上がらず、洗浄液量がカラム容量の10倍を越えても
洗浄効果の向上は認められない。
内は交互に何度も洗浄されることとなり、洗浄液の量が
カラム容量の２〜10倍であっても、カラム容量の90倍の
洗浄液を使用していた従来と同様に、リガンドに吸着さ
れない夾雑蛋白等の不純物をカラム内から十分に除去す
ることができる。なお、洗浄液量がカラム容量の２倍未
満では洗浄液中の夾雑蛋白等の濃度が高くなって洗浄効
果が上がらず、洗浄液量がカラム容量の10倍を越えても
洗浄効果の向上は認められない。
【００１０】以上のようにしてカラム１の洗浄を終了し
たら、再びポンプ２を作動させて溶離液をカラム１に送
り、リガンドに吸着されている後退を溶離させて分取す
ればよい。
たら、再びポンプ２を作動させて溶離液をカラム１に送
り、リガンドに吸着されている後退を溶離させて分取す
ればよい。
【００１１】
【発明の効果】以上に説明したように、本発明のカラム
の洗浄方法によれば、アフィニティカラムの入口側と出
口側に接続したシリンジを交互に動かすことにより洗浄
液をカラム内に交互に流しながらカラムを洗浄するの
で、カラム容量の２〜10倍の洗浄液を使用するのみで従
来と同様に十分にカラム内の洗浄を行うことができ、し
かも洗浄液の使用量を大幅に減少させることができる。
従って本発明は工業的スケールで抗体の分取・精製を行
う場合に大きい価値を発揮するものである。
の洗浄方法によれば、アフィニティカラムの入口側と出
口側に接続したシリンジを交互に動かすことにより洗浄
液をカラム内に交互に流しながらカラムを洗浄するの
で、カラム容量の２〜10倍の洗浄液を使用するのみで従
来と同様に十分にカラム内の洗浄を行うことができ、し
かも洗浄液の使用量を大幅に減少させることができる。
従って本発明は工業的スケールで抗体の分取・精製を行
う場合に大きい価値を発揮するものである。
【図１】本発明の工程を説明する配管系統図である。
【図２】従来の工程を説明する配管系統図である。
１ カラム ５ シリンジ ６ シリンジ
フロントページの続き (56)参考文献 特開 平４−59798（ＪＰ，Ａ) 実開 昭62−44259（ＪＰ，Ｕ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 16/00 C07K 1/22
Claims (1)
- 【請求項１】 抗体を分取・精製するためのアフィニテ
ィカラムの入口側と出口側にそれぞれシリンジを接続
し、カラムに吸着液を流して抗体をカラムのリガンドに
吸着させた後、洗浄液をこれらのシリンジを利用してカ
ラム内に交互に流しながら洗浄することを特徴とするカ
ラムの洗浄方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04251368A JP3093885B2 (ja) | 1992-09-21 | 1992-09-21 | カラムの洗浄方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04251368A JP3093885B2 (ja) | 1992-09-21 | 1992-09-21 | カラムの洗浄方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06100598A JPH06100598A (ja) | 1994-04-12 |
| JP3093885B2 true JP3093885B2 (ja) | 2000-10-03 |
Family
ID=17221794
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04251368A Expired - Fee Related JP3093885B2 (ja) | 1992-09-21 | 1992-09-21 | カラムの洗浄方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3093885B2 (ja) |
-
1992
- 1992-09-21 JP JP04251368A patent/JP3093885B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06100598A (ja) | 1994-04-12 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20000714 |
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