JP3034169B2 - 活性酸素種の消去剤 - Google Patents
活性酸素種の消去剤Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は 5,6−Ｏ−ベンジリデン
−Ｌ−アスコルビン酸又はこれの製薬学的に許容できる
塩を有効成分とする活性酸素種の消去剤に関する。ま
た、本発明による活性酸素種の消去剤はアドリアマイシ
ンの如きアンスラサイクリン系抗癌剤の副作用の抑制剤
として応用できる。
−Ｌ−アスコルビン酸又はこれの製薬学的に許容できる
塩を有効成分とする活性酸素種の消去剤に関する。ま
た、本発明による活性酸素種の消去剤はアドリアマイシ
ンの如きアンスラサイクリン系抗癌剤の副作用の抑制剤
として応用できる。
【０００２】
【従来の技術】人間をはじめ、陸上の哺乳動物の体内に
は、Ｏ2-で表示される活性酸素種(activated oxygen sp
ecies)（ＡＯＳと略記される）が生ずることがあり、Ａ
ＯＳは細胞および生体脂質膜、等を攻撃して生体に種々
の障害をもたらすこと、またＡＯＳを無毒化する酵素と
してスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤと略記され
る）が生体に存在することは周知である。
は、Ｏ2-で表示される活性酸素種(activated oxygen sp
ecies)（ＡＯＳと略記される）が生ずることがあり、Ａ
ＯＳは細胞および生体脂質膜、等を攻撃して生体に種々
の障害をもたらすこと、またＡＯＳを無毒化する酵素と
してスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤと略記され
る）が生体に存在することは周知である。
【０００３】更に、６−ホスファチジール−Ｌ−アスコ
ルビン酸〔Nagao, A. ら「Biochem.Biophy. Res. Comn.
」， 172巻， 385− 389頁(1990)〕、および６−パル
ミトイール−アスコルビン酸（Ｐ−ＡＳＣ）〔Tada, H.
ら「J. Cadiovasc. Pharmacol.〕，16巻， 984− 991頁
(1990)〕などのアスコルビン酸誘導体が動物に投与され
た場合にＡＯＳを消去できる活性を有することが知ら
れ、またＡＯＳは種々の病態発生や制癌剤の副作用の発
生に深く関与する知見が集積している〔Oberly,L.W.ら,
「Free radicals, Aging and Degenerative Disease
s」 (Johnson J.E.ら編集), Alan Ito, N.ら「Cancer
Res. 」, 78巻，1011−1026頁(1987)参照〕。
ルビン酸〔Nagao, A. ら「Biochem.Biophy. Res. Comn.
」， 172巻， 385− 389頁(1990)〕、および６−パル
ミトイール−アスコルビン酸（Ｐ−ＡＳＣ）〔Tada, H.
ら「J. Cadiovasc. Pharmacol.〕，16巻， 984− 991頁
(1990)〕などのアスコルビン酸誘導体が動物に投与され
た場合にＡＯＳを消去できる活性を有することが知ら
れ、またＡＯＳは種々の病態発生や制癌剤の副作用の発
生に深く関与する知見が集積している〔Oberly,L.W.ら,
「Free radicals, Aging and Degenerative Disease
s」 (Johnson J.E.ら編集), Alan Ito, N.ら「Cancer
Res. 」, 78巻，1011−1026頁(1987)参照〕。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】ＡＯＳを消去する活性
を有する物質、すなわち活性酵素種の消去剤として優れ
た薬剤が長年、要望されているが、未だ満足できるもの
がない。
を有する物質、すなわち活性酵素種の消去剤として優れ
た薬剤が長年、要望されているが、未だ満足できるもの
がない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の事情
を考慮して鋭意検討を重ねた結果、 5,6−Ｏ−ベンジリ
デン−Ｌ−アスコルビン酸（以下では、単にベンジリデ
ン−アスコルビン酸と記載することもある）又はこれの
製薬学的に許容できる金属塩が低い毒性と高いＡＯＳ消
去活性を有することを見出し、本発明を完成した。
を考慮して鋭意検討を重ねた結果、 5,6−Ｏ−ベンジリ
デン−Ｌ−アスコルビン酸（以下では、単にベンジリデ
ン−アスコルビン酸と記載することもある）又はこれの
製薬学的に許容できる金属塩が低い毒性と高いＡＯＳ消
去活性を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００６】特に、ベンジリデン−アスコルビン酸ナト
リウム塩のＡＯＳ消去活性を検討したところ、本薬剤が
動物、細胞、及び試験管反応などの諸種の系で強いＡＯ
Ｓ消去活性をもつことを見いだし、かつその活性は従来
既知のアスコルビン酸誘導体より高いことを見いだし
た。
リウム塩のＡＯＳ消去活性を検討したところ、本薬剤が
動物、細胞、及び試験管反応などの諸種の系で強いＡＯ
Ｓ消去活性をもつことを見いだし、かつその活性は従来
既知のアスコルビン酸誘導体より高いことを見いだし
た。
【０００７】従って、本発明によると、5,6−Ｏ−ベン
ジリデン−Ｌ−アスコルビン酸又はこれの製薬学的に許
容できるアルカリ金属塩あるいはアルカリ土類金属塩を
有効成分として含有するが但し抗腫瘍剤または抗癌剤の
用途では投与されないことを特徴とする活性酸素種の消
去剤が提供される。
ジリデン−Ｌ−アスコルビン酸又はこれの製薬学的に許
容できるアルカリ金属塩あるいはアルカリ土類金属塩を
有効成分として含有するが但し抗腫瘍剤または抗癌剤の
用途では投与されないことを特徴とする活性酸素種の消
去剤が提供される。
【０００８】本発明において有効成分として用いられる
ベンジリデン−アスコルビン酸またはその塩は公知の化
合物である。 5,6−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビ
ン酸の製造法は「Steroids」12巻， 309頁(1968)等に記
載され、また別の製造法は、特公平３− 33127号公報及
び米国特許第 5,036,103号明細書に示される。更に、5,
6−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン酸又はこれの
ナトリウム塩、カリウム塩及びカルシウム塩が有する抗
癌活性と、これらの塩を製造する方法とは特公平３− 3
3127号公報及び米国特許第 5,036,103号明細書に記載さ
れる。
ベンジリデン−アスコルビン酸またはその塩は公知の化
合物である。 5,6−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビ
ン酸の製造法は「Steroids」12巻， 309頁(1968)等に記
載され、また別の製造法は、特公平３− 33127号公報及
び米国特許第 5,036,103号明細書に示される。更に、5,
6−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン酸又はこれの
ナトリウム塩、カリウム塩及びカルシウム塩が有する抗
癌活性と、これらの塩を製造する方法とは特公平３− 3
3127号公報及び米国特許第 5,036,103号明細書に記載さ
れる。
【０００９】本発明のＡＯＳ消去剤で有効成分として有
用であるベンジリデン−アスコルビン酸の塩の具体例に
は、一ナトリウム塩、二ナトリウム塩、一カリウム塩、
二カリウム塩及びカルシウム塩がある。特に、 5,6−Ｏ
−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン酸一ナトリウム塩
（略号：ＳＢＡ）が好ましい。
用であるベンジリデン−アスコルビン酸の塩の具体例に
は、一ナトリウム塩、二ナトリウム塩、一カリウム塩、
二カリウム塩及びカルシウム塩がある。特に、 5,6−Ｏ
−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン酸一ナトリウム塩
（略号：ＳＢＡ）が好ましい。
【００１０】ＳＢＡは次式（Ｉ）
【００１１】で示される化合物であり、通常の方法で合
成された本化合物は２つの立体異性体、すなわち (S)−
ＳＢＡと (R)−ＳＢＡのラセミ体であり、液体高速クロ
マトグラフィーによる分析で (S)体と (R)−体との混合
比は２：１である。
成された本化合物は２つの立体異性体、すなわち (S)−
ＳＢＡと (R)−ＳＢＡのラセミ体であり、液体高速クロ
マトグラフィーによる分析で (S)体と (R)−体との混合
比は２：１である。
【００１２】アドリアマイシン（ＡＤＭ）またはダウノ
マイシン（ＤＭ）などのアンスラサイクリン系抗癌剤を
担癌患者に連続的に投与すると、この種の抗癌剤の副作
用として心毒性などのが起ることが知られて、それら抗
癌剤の使用上大きな問題となっている。その毒作用の本
体はＡＤＭまたはＤＭなどが活性酸素アニオンラジカル
（Ｏ2-）即ちＡＯＳを生成して心筋細胞膜の損傷を誘起
することによると報告されている〔Singal, P.K.ら「J.
Mol. Cell Cardiol. 」, 19巻， 817− 828頁(1987)参
照〕。
マイシン（ＤＭ）などのアンスラサイクリン系抗癌剤を
担癌患者に連続的に投与すると、この種の抗癌剤の副作
用として心毒性などのが起ることが知られて、それら抗
癌剤の使用上大きな問題となっている。その毒作用の本
体はＡＤＭまたはＤＭなどが活性酸素アニオンラジカル
（Ｏ2-）即ちＡＯＳを生成して心筋細胞膜の損傷を誘起
することによると報告されている〔Singal, P.K.ら「J.
Mol. Cell Cardiol. 」, 19巻， 817− 828頁(1987)参
照〕。
【００１３】ＡＤＭまたはＤＭの連続投与で心毒性の障
害が誘発された場合には、生じたＡＯＳが心筋細胞を損
傷していることになるが、心筋細胞が損傷すると、酵素
であるクレアチン ホスフォキナーセ（ＣＰＫ）が体内
で遊離されて血清中のＣＰＫの濃度が上昇される。それ
故、体内でのＡＯＳの発生は、血清中のＣＰＫ濃度の上
昇の測定により探知できる。
害が誘発された場合には、生じたＡＯＳが心筋細胞を損
傷していることになるが、心筋細胞が損傷すると、酵素
であるクレアチン ホスフォキナーセ（ＣＰＫ）が体内
で遊離されて血清中のＣＰＫの濃度が上昇される。それ
故、体内でのＡＯＳの発生は、血清中のＣＰＫ濃度の上
昇の測定により探知できる。
【００１４】アドリアマイシン（ＡＤＭ）の連続投与を
受けているマウスに本発明によるＡＯＳ消去剤、特にＳ
ＢＡを、投与すると、血清中のＣＰＫ値の上昇を抑制で
きることが実験的に所見された。そして本発明のＡＯＳ
消去剤は、血清中のＣＰＫ値の上昇の抑制を指標とし
て、ＡＯＳ消去活性を有することが確認できる。
受けているマウスに本発明によるＡＯＳ消去剤、特にＳ
ＢＡを、投与すると、血清中のＣＰＫ値の上昇を抑制で
きることが実験的に所見された。そして本発明のＡＯＳ
消去剤は、血清中のＣＰＫ値の上昇の抑制を指標とし
て、ＡＯＳ消去活性を有することが確認できる。
【００１５】本発明のＡＯＳ消去剤は、アンスラサイク
リン系の抗癌剤の投与で生ずるＡＯＳによる副作用また
は障害を軽減または予防できる薬剤として有効であるか
ら、アンスラサイクリン系抗癌剤の副作用の軽減剤また
は予防剤として応用できる。
リン系の抗癌剤の投与で生ずるＡＯＳによる副作用また
は障害を軽減または予防できる薬剤として有効であるか
ら、アンスラサイクリン系抗癌剤の副作用の軽減剤また
は予防剤として応用できる。
【００１６】更に、紫外線を受けた人の皮膚は、その内
部でＡＯＳが発生されて皮膚細胞を損傷させて炎症、等
を起させることもあること、あるいは皮膚細胞の老化を
早めることが知られる。本発明のＡＯＳ消去剤は、人間
の皮膚内に生じたＡＯＳの有害な作用を軽減させるのに
も有効である。
部でＡＯＳが発生されて皮膚細胞を損傷させて炎症、等
を起させることもあること、あるいは皮膚細胞の老化を
早めることが知られる。本発明のＡＯＳ消去剤は、人間
の皮膚内に生じたＡＯＳの有害な作用を軽減させるのに
も有効である。
【００１７】本発明によるＡＯＳ消去剤は、人間の体内
で生じたＡＯＳの有害な作用に由る種々な障害を軽減ま
たは予防するのに有用である。本発明のＡＯＳ消去剤を
上記の目的の医薬品として用いる場合、製薬学的に許容
される添加剤（例えば、担体、賦活剤、希釈剤等）等の
如き製薬上必要な添加剤成分と適宜混合し、粉末、顆
粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、注射剤、外用剤、
坐剤等の態様で組成物に製剤でき、そして、経口的また
は非経口的に投与することができる。
で生じたＡＯＳの有害な作用に由る種々な障害を軽減ま
たは予防するのに有用である。本発明のＡＯＳ消去剤を
上記の目的の医薬品として用いる場合、製薬学的に許容
される添加剤（例えば、担体、賦活剤、希釈剤等）等の
如き製薬上必要な添加剤成分と適宜混合し、粉末、顆
粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、注射剤、外用剤、
坐剤等の態様で組成物に製剤でき、そして、経口的また
は非経口的に投与することができる。
【００１８】上記製剤中には、本発明で用いる有効成分
化合物はその有効量が配合される。投与量は、投与経
路、症状、患者の体重、性別、年齢等によって異なる
が、例えば、成人患者では１日当たり 100〜3000mg程度
が例示される。しかし、その投与量は動物試験の結果な
ど種々の情況を勘案して薬剤投与による薬剤血中濃度が
一定量を越えない範囲で、連続的または間けつ的に投与
できる。一定の条件下における適量と投与回数は、上記
の指針を基にして専門医の決定によらなければならな
い。
化合物はその有効量が配合される。投与量は、投与経
路、症状、患者の体重、性別、年齢等によって異なる
が、例えば、成人患者では１日当たり 100〜3000mg程度
が例示される。しかし、その投与量は動物試験の結果な
ど種々の情況を勘案して薬剤投与による薬剤血中濃度が
一定量を越えない範囲で、連続的または間けつ的に投与
できる。一定の条件下における適量と投与回数は、上記
の指針を基にして専門医の決定によらなければならな
い。
【００１９】また、本発明のＡＯＳ除去剤の製剤された
組成物中における有効成分化合物の含量は製剤型により
種々異なるが、通常は 0.1−99重量％、好ましくは１−
90重量％である。例えば注射液の場合には、通常 0.1−
５重量％の有効成分化合物を含むようにすることがよ
い。経口投与の場合には、前記の固体担体もしくは液状
担体と共に錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、ドライシ
ロップ剤、液剤、シロップ剤等の形態で用いられる。カ
プセル、錠剤、顆粒、粉剤の場合、一般に有効成分化合
物の含量は３−99重量％、好ましくは５−90重量％であ
り、残部は担体である。
組成物中における有効成分化合物の含量は製剤型により
種々異なるが、通常は 0.1−99重量％、好ましくは１−
90重量％である。例えば注射液の場合には、通常 0.1−
５重量％の有効成分化合物を含むようにすることがよ
い。経口投与の場合には、前記の固体担体もしくは液状
担体と共に錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、ドライシ
ロップ剤、液剤、シロップ剤等の形態で用いられる。カ
プセル、錠剤、顆粒、粉剤の場合、一般に有効成分化合
物の含量は３−99重量％、好ましくは５−90重量％であ
り、残部は担体である。
【００２０】かかる製剤中での賦形剤および担体として
は製薬学上許容されるものが選ばれ、その種類および組
成は投与経路や投与方法によって決まる。例えば、液状
担体として水、アルコールもしくは大豆油、ゴマ油、ミ
ネラル油などの動植物油、または合成油などが用いられ
る。固体担体としてマルトース、シュークロースなどの
糖類、リジンなどのアミノ酸類、ヒドロキシプロピルセ
ルロースなどのセルロース誘導体、シクロデキストリン
などの多糖類、ステアリン酸マグネシウムなどの有機酸
塩などが使用される。
は製薬学上許容されるものが選ばれ、その種類および組
成は投与経路や投与方法によって決まる。例えば、液状
担体として水、アルコールもしくは大豆油、ゴマ油、ミ
ネラル油などの動植物油、または合成油などが用いられ
る。固体担体としてマルトース、シュークロースなどの
糖類、リジンなどのアミノ酸類、ヒドロキシプロピルセ
ルロースなどのセルロース誘導体、シクロデキストリン
などの多糖類、ステアリン酸マグネシウムなどの有機酸
塩などが使用される。
【００２１】注射剤として製剤する場合には、一般に生
理食塩水、各種緩衝液、グルコース、イノシトール、マ
ンニトールなどの糖類溶液、エチレングリコール、ポリ
エチレングリコール等のグリコール類が望ましい。ま
た、イノシトール、マンニトール、グルコース、マンノ
ース、マルトース、シュークロースなどの糖類、フェニ
ルアラニンなどのアミノ酸類などの賦形剤と共に凍結乾
燥製剤とし、それを投与時に注射用の適当な溶剤、例え
ば滅菌水、生理食塩水、ブドウ糖液、電解質溶液、アミ
ノ酸などの静脈投与用液体に溶解して用いることもでき
る。
理食塩水、各種緩衝液、グルコース、イノシトール、マ
ンニトールなどの糖類溶液、エチレングリコール、ポリ
エチレングリコール等のグリコール類が望ましい。ま
た、イノシトール、マンニトール、グルコース、マンノ
ース、マルトース、シュークロースなどの糖類、フェニ
ルアラニンなどのアミノ酸類などの賦形剤と共に凍結乾
燥製剤とし、それを投与時に注射用の適当な溶剤、例え
ば滅菌水、生理食塩水、ブドウ糖液、電解質溶液、アミ
ノ酸などの静脈投与用液体に溶解して用いることもでき
る。
【００２２】
【実施例】本発明をより詳細に説明するために製剤例及
び試験例等を挙げるが、本発明はこれらにより何ら限定
されるものではない。
び試験例等を挙げるが、本発明はこれらにより何ら限定
されるものではない。
【００２３】製剤例１（錠剤） （１）ＳＢＡ(5,6−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコルビン酸 一ナトリウム塩） 50ｇ （２）メタケイ酸アルミン酸マグネシウム 14ｇ （３）トウモロコシデンプン 21ｇ （４）乳 糖 35ｇ （５）結晶セルロース 60ｇ （６）ＣＭＣカルシウム 18ｇ
【００２４】上記成分を均一に混合した後にステアリン
酸マグネシウムの２ｇを添加してさらに混合し、その混
合粉末を打錠して、１錠 200mgの錠剤とした。この錠剤
は、必要に応じて、通常用いられる胃溶性フィルムコー
ティング剤（例えば、ポリビニルアセタールジエチルア
ミノアセテート）あるいは食用性着色剤で着色してもよ
い。
酸マグネシウムの２ｇを添加してさらに混合し、その混
合粉末を打錠して、１錠 200mgの錠剤とした。この錠剤
は、必要に応じて、通常用いられる胃溶性フィルムコー
ティング剤（例えば、ポリビニルアセタールジエチルア
ミノアセテート）あるいは食用性着色剤で着色してもよ
い。
【００２５】製剤例２（カプセル剤） （１）ＳＢＡ 1000ｇ （２）乳 糖 960ｇ （３）ステアリン酸マグネシウム 40ｇ 上記成分を均一に混合し、その混合粉末をハードゼラチ
ンカプセルに 200mgずつ充填した。
ンカプセルに 200mgずつ充填した。
【００２６】製剤例３（注射剤） （１）ＳＢＡ 100mg （２）ブドウ糖 100mg （３）生理食塩水 全量で10ml ＳＢＡとブドウ糖を生理食塩水に溶解した液をメンブラ
ンフィルターで濾過後に再び除菌濾過を行い、その濾過
液を無菌的にバイアルに分注し、窒素ガスを充填した
後、密封して静脈内注射剤とした。
ンフィルターで濾過後に再び除菌濾過を行い、その濾過
液を無菌的にバイアルに分注し、窒素ガスを充填した
後、密封して静脈内注射剤とした。
【００２７】試験例１（毒性の評価） 生理食塩水にとかしたＳＢＡ溶液(100μg/ml) を 1000m
g/kg体重の投与量でＳＢＡをＩＣＲ系マウス（５週令，
雄，各群５匹）に静脈内投与しても、死亡するには到ら
なかった。これにより、 5,6−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−
アスコルビン酸が極めて低い毒性を示すことが認められ
る。
g/kg体重の投与量でＳＢＡをＩＣＲ系マウス（５週令，
雄，各群５匹）に静脈内投与しても、死亡するには到ら
なかった。これにより、 5,6−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−
アスコルビン酸が極めて低い毒性を示すことが認められ
る。
【００２８】次に、本発明によるＡＯＳ消去剤に用いる
有効成分化合物の一例としてのＳＢＡがアドリマイシン
の投与で生じるＡＯＳにより誘発された心筋細胞膜の損
傷の指標であるクレアチン ホスフォキナーゼ（ＣＰ
Ｋ）の血清中濃度上昇を抑制する活性を示すこと、従っ
てアドリアマイシンの心毒性を抑制する活性を有するこ
とを試験例２で例証する。
有効成分化合物の一例としてのＳＢＡがアドリマイシン
の投与で生じるＡＯＳにより誘発された心筋細胞膜の損
傷の指標であるクレアチン ホスフォキナーゼ（ＣＰ
Ｋ）の血清中濃度上昇を抑制する活性を示すこと、従っ
てアドリアマイシンの心毒性を抑制する活性を有するこ
とを試験例２で例証する。
【００２９】試験例２ （１）マウス（７週齢、雄性、ＩＣＲ系）に、生理食塩
水に溶解したアドリアマイシン（ＡＤＭ）を皮下に一回
だけ 20mg/kgの量で投与した。ＡＤＭの投与後２日後か
ら、市販のＣＰＫテスト・キッドを用いて測定すると、
血清中内のＣＰＫ活性が増加し、３日後はＣＰＫ活性の
値は急激に上昇することが認められた。マウス５匹にお
ける血清内のＣＰＫ活性（IU/L）を測定し、その平均値
の経時的変化を表１に要約して示す。血清中のＣＰＫ活
性の増加、すなわちＣＰＫ濃度の上昇はＡＤＭの心毒性
を示す指標である。
水に溶解したアドリアマイシン（ＡＤＭ）を皮下に一回
だけ 20mg/kgの量で投与した。ＡＤＭの投与後２日後か
ら、市販のＣＰＫテスト・キッドを用いて測定すると、
血清中内のＣＰＫ活性が増加し、３日後はＣＰＫ活性の
値は急激に上昇することが認められた。マウス５匹にお
ける血清内のＣＰＫ活性（IU/L）を測定し、その平均値
の経時的変化を表１に要約して示す。血清中のＣＰＫ活
性の増加、すなわちＣＰＫ濃度の上昇はＡＤＭの心毒性
を示す指標である。
【００３０】
【００３１】（２）また別に、上記の（１）の試験で用
いたと同種のマウスにＡＤＭの 20mg/kgを皮下投与後
に、ＡＤＭの投与の次の日（１日目）、２日目、３日目
の計３日間、１日１回、連日にわたりＳＢＡを次の表２
に示した各々の投与量で腹腔内(ip.) 投与した。ＡＤＭ
の投与から４日目に、血清中のＣＰＫ活性を測定して、
その平均値（マウス５匹の平均）を表２に示した。コン
トロール群のマウスには、生理食塩水のみを投与した。
ＡＤＭ単独投与群のマウスにはＡＤＭを投与したが、Ｓ
ＢＡを投与しなかった。
いたと同種のマウスにＡＤＭの 20mg/kgを皮下投与後
に、ＡＤＭの投与の次の日（１日目）、２日目、３日目
の計３日間、１日１回、連日にわたりＳＢＡを次の表２
に示した各々の投与量で腹腔内(ip.) 投与した。ＡＤＭ
の投与から４日目に、血清中のＣＰＫ活性を測定して、
その平均値（マウス５匹の平均）を表２に示した。コン
トロール群のマウスには、生理食塩水のみを投与した。
ＡＤＭ単独投与群のマウスにはＡＤＭを投与したが、Ｓ
ＢＡを投与しなかった。
【００３２】
【００３３】表２の結果についてみるに、ＳＢＡの投与
を受けないＡＤＭ単独投与群では、ＣＰＫ活性が 800IU
/Lであるのに比べ、 20mg/kg〜 40mg/kgの範囲の投与量
でＳＢＡを投与されたＳＢＡ投与群では、ＣＰＫ活性が
＊印で示す如く 510〜700IU/L であって有意に低下され
てあり、このことは上記の投与量範囲でＳＢＡがＡＤＭ
による心毒性を抑制する効果を有したことを示す。
を受けないＡＤＭ単独投与群では、ＣＰＫ活性が 800IU
/Lであるのに比べ、 20mg/kg〜 40mg/kgの範囲の投与量
でＳＢＡを投与されたＳＢＡ投与群では、ＣＰＫ活性が
＊印で示す如く 510〜700IU/L であって有意に低下され
てあり、このことは上記の投与量範囲でＳＢＡがＡＤＭ
による心毒性を抑制する効果を有したことを示す。
【００３４】（３）上記の（２）の試験と同様にマウス
に 20mg/kgのＡＤＭを皮下投与した。ＡＤＭ投与された
マウスに、ＡＤＭ投与の１日目から、ＳＢＡを 30mg/kg
の投与量で連日３日間、毎日、腹腔内投与した。また、
ＡＤＭ投与された別のマウスに、ＳＢＡに代えて、比較
のため活性酸素消去剤として既知のＬ−アスコルビン酸
（ＡＳＣ；和光純薬社）、６−パルミトイール アスコ
ルビン酸（Ｐ−ＡＳＣ）及びシステアミン（ＣＹＳ）
（シグマケミカ社）のそれぞれを、ＳＢＡの 30mg/kgと
同モル数に相当する 104μM/kgの投与量で３日間投与し
た。ＡＤＭ投与から３日目に血清中の血清ＣＰＫ値を測
定した。その平均値を次の表３に要約して示す。
に 20mg/kgのＡＤＭを皮下投与した。ＡＤＭ投与された
マウスに、ＡＤＭ投与の１日目から、ＳＢＡを 30mg/kg
の投与量で連日３日間、毎日、腹腔内投与した。また、
ＡＤＭ投与された別のマウスに、ＳＢＡに代えて、比較
のため活性酸素消去剤として既知のＬ−アスコルビン酸
（ＡＳＣ；和光純薬社）、６−パルミトイール アスコ
ルビン酸（Ｐ−ＡＳＣ）及びシステアミン（ＣＹＳ）
（シグマケミカ社）のそれぞれを、ＳＢＡの 30mg/kgと
同モル数に相当する 104μM/kgの投与量で３日間投与し
た。ＡＤＭ投与から３日目に血清中の血清ＣＰＫ値を測
定した。その平均値を次の表３に要約して示す。
【００３５】
【００３６】表３の結果から明らかなように、ＳＢＡ
(30mg/kg)投与群では、ＣＰＫ活性が420IU/Lであり、Ａ
ＤＭ単独投与群のそれが 820IU/Lであるに比べて有意に
低下されてある。その他の比較薬剤ではＣＰＫ活性の有
意な低下をもたらさない。従って、ＳＢＡがＡＤＭによ
るＣＰＫの酵素活性の上昇を抑制する効果を有すること
が認められた。上記のことにより、ＳＢＡは、抗癌剤Ａ
ＤＭの副作用であり活性酵素の誘発による心毒性の発生
を、他の活性酵素消去剤より強く抑制する作用を有する
ことが明らかである。
(30mg/kg)投与群では、ＣＰＫ活性が420IU/Lであり、Ａ
ＤＭ単独投与群のそれが 820IU/Lであるに比べて有意に
低下されてある。その他の比較薬剤ではＣＰＫ活性の有
意な低下をもたらさない。従って、ＳＢＡがＡＤＭによ
るＣＰＫの酵素活性の上昇を抑制する効果を有すること
が認められた。上記のことにより、ＳＢＡは、抗癌剤Ａ
ＤＭの副作用であり活性酵素の誘発による心毒性の発生
を、他の活性酵素消去剤より強く抑制する作用を有する
ことが明らかである。
【００３７】更に、ＳＢＡがＡＯＳ消去活性を有するこ
とを細胞内反応、酵素反応および試験管内の反応のレベ
ルの試験で例証するために、後記の試験例３、試験例４
および試験例５を行った。
とを細胞内反応、酵素反応および試験管内の反応のレベ
ルの試験で例証するために、後記の試験例３、試験例４
および試験例５を行った。
【００３８】試験例３ （ａ）マクロファージ系でのＡＯＳ消去活性の試験 マウス（雄性，ＩＣＲ系）の脾臓より得られるマクロフ
ァージ（ＭＰ）をホルボール ミリステート アセテー
ト（ＰＭＡ）で刺激すると、活性酸素（Ｏ2-）を生成す
ることが知られている。活性酸素の発生量は生物発光検
出器(Aroka Luminescence Reader BLA102)で測定でき
る。
ァージ（ＭＰ）をホルボール ミリステート アセテー
ト（ＰＭＡ）で刺激すると、活性酸素（Ｏ2-）を生成す
ることが知られている。活性酸素の発生量は生物発光検
出器(Aroka Luminescence Reader BLA102)で測定でき
る。
【００３９】脾臓より得たマクロファージ（ＭＰ）（１
×106 個）をハンクス・バランスサルトソルーシュン(H
BSS)に懸濁させ、その細胞懸濁液にＰＭＡ(0.4μg)を添
加した。ＰＭＡの添加に先立ち、ラセミ型のＳＢＡであ
る(R, S)−ＳＢＡ、または立体異性体の (S)−ＳＢＡ、
あるいは別の立体異性体の (R)−ＳＢＡを種々の濃度で
添加して混合させて存在させた。生物発光検出器で測定
された活性酸素（Ｏ2-）の生成量を指標として、Ｏ2-の
生成を50％阻害するＳＢＡ化合物の濃度、すなわちIC50
値を算定した。その結果を後記の表４に示す。比較のた
めに、Ｌ−アスコルビン酸、６−パルミトール アスコ
ルビン酸（６−Ｐ−ＡＳＣ）またはシステアミン（ＣＹ
Ｓ）も同様に試験した。これら比較薬剤のIC50値も算定
して表４に示す。ＳＢＡの５０％阻害値（IC50）は 4.1
μM であり、６−Ｐ−ＡＳＣやＣＹＳより高いＡＯＳ消
去活性をもつことを認めた。
×106 個）をハンクス・バランスサルトソルーシュン(H
BSS)に懸濁させ、その細胞懸濁液にＰＭＡ(0.4μg)を添
加した。ＰＭＡの添加に先立ち、ラセミ型のＳＢＡであ
る(R, S)−ＳＢＡ、または立体異性体の (S)−ＳＢＡ、
あるいは別の立体異性体の (R)−ＳＢＡを種々の濃度で
添加して混合させて存在させた。生物発光検出器で測定
された活性酸素（Ｏ2-）の生成量を指標として、Ｏ2-の
生成を50％阻害するＳＢＡ化合物の濃度、すなわちIC50
値を算定した。その結果を後記の表４に示す。比較のた
めに、Ｌ−アスコルビン酸、６−パルミトール アスコ
ルビン酸（６−Ｐ−ＡＳＣ）またはシステアミン（ＣＹ
Ｓ）も同様に試験した。これら比較薬剤のIC50値も算定
して表４に示す。ＳＢＡの５０％阻害値（IC50）は 4.1
μM であり、６−Ｐ−ＡＳＣやＣＹＳより高いＡＯＳ消
去活性をもつことを認めた。
【００４０】（ｂ）キサンチン／キサンチン オキシダ
ーゼ（ＸＯＤ）の酵素反応系でのＡＯＳ消去活性の試験 50mMトリス−塩酸緩衝液(pH7.8) に(R, S)−ＳＢＡ，
(R)−ＳＢＡまたは (S)−ＳＢＡを種々の濃度で添加し
た。この緩衝液中でＳＢＡの存在下にヒポキサンチン(5
0 μM ）に対してキサンチン オキシダーゼ（ＸＯＤ）
(15mＵ）を反応させ、活性酸素（Ｏ2-）を生成させた。
また、比較薬剤として、アスコルビン酸、６−Ｐ−ＡＳ
ＣまたはＣＹＳも同様に試験した。
ーゼ（ＸＯＤ）の酵素反応系でのＡＯＳ消去活性の試験 50mMトリス−塩酸緩衝液(pH7.8) に(R, S)−ＳＢＡ，
(R)−ＳＢＡまたは (S)−ＳＢＡを種々の濃度で添加し
た。この緩衝液中でＳＢＡの存在下にヒポキサンチン(5
0 μM ）に対してキサンチン オキシダーゼ（ＸＯＤ）
(15mＵ）を反応させ、活性酸素（Ｏ2-）を生成させた。
また、比較薬剤として、アスコルビン酸、６−Ｐ−ＡＳ
ＣまたはＣＹＳも同様に試験した。
【００４１】この酵素反応系でのＡＯＳの生成を阻害す
る各々の供試化合物のIC50値を次の表４に要約して示
す。ＳＢＡのIC50値は 5.6μM であり、比較のＡＯＳ消
去剤より高い活性を有することが認められた。
る各々の供試化合物のIC50値を次の表４に要約して示
す。ＳＢＡのIC50値は 5.6μM であり、比較のＡＯＳ消
去剤より高い活性を有することが認められた。
【００４２】尚、２つの立体異性体、 (R)−ＳＢＡと
(S)−ＳＢＡは、マクロファージ／ＰＭＡ系でも、ＸＯ
Ｄ酵素反応系でも、同等のＡＯＳ消去活性を有すること
も認められる。
(S)−ＳＢＡは、マクロファージ／ＰＭＡ系でも、ＸＯ
Ｄ酵素反応系でも、同等のＡＯＳ消去活性を有すること
も認められる。
【００４３】
【００４４】試験例４ 本例は内皮細胞系でＳＢＡがＡＯＳ消去活性を示すこと
を試験する。内皮細胞の細胞膜はクメンヒドロパーオキ
シド（ＣＰＯ）などの過酸化化合物で損傷を受け、乳酸
脱水酵素（ＬＤＨ）などの細胞内酵素を遊離する。この
ＬＤＨの遊離はＣＰＯなどが活性酵素種を生成すること
による。そこで、内皮細胞に対するＣＰＯの細胞毒性を
ＬＤＨの遊離を指標として検討した。遊離されたＬＤＨ
の生成に対するＳＢＡの抑制作用を検討する。すなわ
ち、種々の濃度でＳＢＡを含む培地中に内皮細胞（２×
105 個）を懸濁し、これにＣＰＯを反応させ、内皮細胞
の細胞膜から培地中に遊離されたＬＤＨの活性を測定し
た。その結果を表５に示す。
を試験する。内皮細胞の細胞膜はクメンヒドロパーオキ
シド（ＣＰＯ）などの過酸化化合物で損傷を受け、乳酸
脱水酵素（ＬＤＨ）などの細胞内酵素を遊離する。この
ＬＤＨの遊離はＣＰＯなどが活性酵素種を生成すること
による。そこで、内皮細胞に対するＣＰＯの細胞毒性を
ＬＤＨの遊離を指標として検討した。遊離されたＬＤＨ
の生成に対するＳＢＡの抑制作用を検討する。すなわ
ち、種々の濃度でＳＢＡを含む培地中に内皮細胞（２×
105 個）を懸濁し、これにＣＰＯを反応させ、内皮細胞
の細胞膜から培地中に遊離されたＬＤＨの活性を測定し
た。その結果を表５に示す。
【００４５】
【００４６】比較のため、同様な試験を、後記の表６に
示した薬剤を用いて反応させて反復した。遊離されたＬ
ＤＨの活性を測定してその結果を表６に示す。
示した薬剤を用いて反応させて反復した。遊離されたＬ
ＤＨの活性を測定してその結果を表６に示す。
【００４７】
【００４８】表５から認められるように、１mMのＣＰＯ
は明らかにＬＤＨの遊離を促進した。そのＬＨＤ遊離は
0.25−0.5mM のＳＢＡで濃度依存的に抑制された。ま
た、表６から、ＬＨＤの遊離の抑制効果はＣＹＳでも認
められるが、同じ濃度のＬ−ＡＣＳやＰ−ＡＳＣには認
められない。
は明らかにＬＤＨの遊離を促進した。そのＬＨＤ遊離は
0.25−0.5mM のＳＢＡで濃度依存的に抑制された。ま
た、表６から、ＬＨＤの遊離の抑制効果はＣＹＳでも認
められるが、同じ濃度のＬ−ＡＣＳやＰ−ＡＳＣには認
められない。
【００４９】試験例５ 本例では、試験管内でリノレイン酸の自動酸化に対する
抑制作用を試験した。長鎖の不飽和脂肪酸であるリノレ
イン酸は空気酸素の存在下で自動酸化し、過酸化脂質を
生じる。チオバルビタール法で過酸化脂質の量を経時的
に測定すると、反応時間に応じて生成量が増加する。リ
ノレイン酸の水溶液にＳＢＡを添加して空気下に攪拌し
た。反応液中に生成した過酸化脂質としてマロンジアル
デヒドの量を 535nmでの吸光度の強さの基準で経時的に
測定した。比較のため、ＳＢＡに代えて、表７に示した
化合物を用いて同様に試験した。得られた結果を表７に
要約して示す。
抑制作用を試験した。長鎖の不飽和脂肪酸であるリノレ
イン酸は空気酸素の存在下で自動酸化し、過酸化脂質を
生じる。チオバルビタール法で過酸化脂質の量を経時的
に測定すると、反応時間に応じて生成量が増加する。リ
ノレイン酸の水溶液にＳＢＡを添加して空気下に攪拌し
た。反応液中に生成した過酸化脂質としてマロンジアル
デヒドの量を 535nmでの吸光度の強さの基準で経時的に
測定した。比較のため、ＳＢＡに代えて、表７に示した
化合物を用いて同様に試験した。得られた結果を表７に
要約して示す。
【００５０】
【００５１】表７の結果から明らかなように、リノレイ
ン酸の自動酸化はＳＢＡの添加で著明に抑制され、その
抑制作用はＡＳＣ，Ｐ−ＡＳＣ，ＣＹＴなどと比較して
高く、かつ持続的であることが認められた。
ン酸の自動酸化はＳＢＡの添加で著明に抑制され、その
抑制作用はＡＳＣ，Ｐ−ＡＳＣ，ＣＹＴなどと比較して
高く、かつ持続的であることが認められた。
【００５２】以上の試験の結果から、ＳＢＡはＡＤＭな
どの抗癌剤などでしばしば認められる活性酸素種による
心毒性などの副作用を軽減する性質があることが認めら
れ、その軽減作用は細胞レベルおよび酵素レベルで活性
酸素を消去することによること、更にＳＢＡの有するこ
れら活性は既知の活性酸素消去剤よりも高いこと、また
持続的であることが証明された。
どの抗癌剤などでしばしば認められる活性酸素種による
心毒性などの副作用を軽減する性質があることが認めら
れ、その軽減作用は細胞レベルおよび酵素レベルで活性
酸素を消去することによること、更にＳＢＡの有するこ
れら活性は既知の活性酸素消去剤よりも高いこと、また
持続的であることが証明された。
【００５３】従って、ＳＢＡは活性酸素種を消去する活
性によって、抗癌剤などの副作用を軽減するのに有用な
新規薬剤として期待されるものである。
性によって、抗癌剤などの副作用を軽減するのに有用な
新規薬剤として期待されるものである。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 平２−184625（ＪＰ，Ａ) Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｓｔｒａｃｔ ｓ，ｖｏｌ．115，要約番号247505＆Ａ ｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．, （1991），11（３），ｐ．1077−81 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 31/375 C07D 407/04 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】 5,6−Ｏ−ベンジリデン−Ｌ−アスコル
ビン酸又はこれの製薬学的に許容できるアルカリ金属塩
あるいはアルカリ土類金属塩を有効成分として含有する
が但し抗腫瘍剤または抗癌剤の用途では投与されないこ
とを特徴とする活性酸素種の消去剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6235434A JP3034169B2 (ja) | 1994-09-29 | 1994-09-29 | 活性酸素種の消去剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6235434A JP3034169B2 (ja) | 1994-09-29 | 1994-09-29 | 活性酸素種の消去剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0899880A JPH0899880A (ja) | 1996-04-16 |
| JP3034169B2 true JP3034169B2 (ja) | 2000-04-17 |
Family
ID=16986058
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6235434A Expired - Fee Related JP3034169B2 (ja) | 1994-09-29 | 1994-09-29 | 活性酸素種の消去剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3034169B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6898072B2 (ja) * | 2015-08-27 | 2021-07-07 | 秀行 佐谷 | １４−３−３タンパク質活性調節剤 |
-
1994
- 1994-09-29 JP JP6235434A patent/JP3034169B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｓｔｒａｃｔｓ，ｖｏｌ．１１５，要約番号２４７５０５＆Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，（１９９１），１１（３），ｐ．１０７７−８１ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0899880A (ja) | 1996-04-16 |
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