JP3030362B2 - キュウリモザイクウイルス（ｃｍｖ）の感染による植物の病気をサテライトｒｎａにより治療する方法 - Google Patents
キュウリモザイクウイルス（ｃｍｖ）の感染による植物の病気をサテライトｒｎａにより治療する方法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、キュウリモザイク
ウイルス（以下、ＣＭＶと略称）に感染した植物に対し
て、病徴の軽減化または病気の治療を行う治療法に関す
る。
ウイルス（以下、ＣＭＶと略称）に感染した植物に対し
て、病徴の軽減化または病気の治療を行う治療法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】植物の幼苗に弱毒ウイルスを予防的に接
種する技術や媒介虫の防除のために行われる殺虫剤散布
が知られている。弱毒ウイルスを接種しない場合、ＣＭ
Ｖ感染による発病株は圃場から除去または放置してい
る。
種する技術や媒介虫の防除のために行われる殺虫剤散布
が知られている。弱毒ウイルスを接種しない場合、ＣＭ
Ｖ感染による発病株は圃場から除去または放置してい
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】植物の幼苗に弱毒ウイ
ルスを接種しない場合、ＣＭＶ感染による病気の発生は
収量・品質に損害を与えるので、病気の蔓延を防止する
ため発病株を圃場から除去する作業が必要となる。
ルスを接種しない場合、ＣＭＶ感染による病気の発生は
収量・品質に損害を与えるので、病気の蔓延を防止する
ため発病株を圃場から除去する作業が必要となる。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは、既
に開発されていたサテライトＲＮＡを利用した弱毒ウイ
ルスを、ＣＭＶによるトマトの病気の治療に用いた。詳
しくは、強毒性ＣＭＶの接種によって発病したトマト
に、この弱毒株を汁液接種し、病徴の軽減化の程度、Ｃ
ＭＶの病原性の定量、草丈および生重量を計測した。ま
た、弱毒株に含まれているサテライトＲＮＡを精製して
発病トマトに接種し、病徴の軽減化を調査した。
に開発されていたサテライトＲＮＡを利用した弱毒ウイ
ルスを、ＣＭＶによるトマトの病気の治療に用いた。詳
しくは、強毒性ＣＭＶの接種によって発病したトマト
に、この弱毒株を汁液接種し、病徴の軽減化の程度、Ｃ
ＭＶの病原性の定量、草丈および生重量を計測した。ま
た、弱毒株に含まれているサテライトＲＮＡを精製して
発病トマトに接種し、病徴の軽減化を調査した。
【０００５】その結果、ＣＭＶに感染した植物に対し
て、サテライトＲＮＡ、またはそれを含む弱毒ウイルス
を接種または投与することによって、病徴の軽減化また
は病気の治療が可能であることを見出した。
て、サテライトＲＮＡ、またはそれを含む弱毒ウイルス
を接種または投与することによって、病徴の軽減化また
は病気の治療が可能であることを見出した。
【０００６】本発明の特徴とするところは、ＣＭＶに感
染した植物に対して、サテライトＲＮＡ、それを含む弱
毒ウイルス、または細胞内でサテライトＲＮＡを作る人
工物を接種または投与することによって、病徴の軽減化
または病気の治療を行うことにある。
染した植物に対して、サテライトＲＮＡ、それを含む弱
毒ウイルス、または細胞内でサテライトＲＮＡを作る人
工物を接種または投与することによって、病徴の軽減化
または病気の治療を行うことにある。
【０００７】また本発明は、上記サテライトＲＮＡは、
ＣＭＶ粒子中に存在してＣＭＶの感染・増殖に必要なＲ
ＮＡ以外のＲＮＡであることを他の特徴とする。
ＣＭＶ粒子中に存在してＣＭＶの感染・増殖に必要なＲ
ＮＡ以外のＲＮＡであることを他の特徴とする。
【０００８】更に本発明は、上記サテライトＲＮＡは、
およそ３００〜４００塩基のＲＮＡ分子であることをも
う一つの特徴とする。
およそ３００〜４００塩基のＲＮＡ分子であることをも
う一つの特徴とする。
【０００９】また本発明は、上記サテライトＲＮＡは、
ＣＭＶの増殖を抑制し、病徴を軽減することを他の特徴
とする。
ＣＭＶの増殖を抑制し、病徴を軽減することを他の特徴
とする。
【００１０】更に本発明は、上記サテライトＲＮＡは、
分離株ｓａｔ５５−１を用いることをもう一つの特徴と
する。
分離株ｓａｔ５５−１を用いることをもう一つの特徴と
する。
【００１１】また本発明は、上記した弱毒ウイルスは、
弱毒性のサテライトＲＮＡとＣＭＶの軽症株とを組み合
わせて作り出されていることを他の特徴とする。
弱毒性のサテライトＲＮＡとＣＭＶの軽症株とを組み合
わせて作り出されていることを他の特徴とする。
【００１２】更に本発明は、上記した軽症株のＣＭＶ
は、分離株ＣＭＶ−Ｎｏ．７を用いることをもう一つの
特徴とする。
は、分離株ＣＭＶ−Ｎｏ．７を用いることをもう一つの
特徴とする。
【００１３】また本発明は、細胞内でサテライトＲＮＡ
を作る人工物は、サテライトＲＮＡのｃＤＮＡを組み込
んだプラスミドであることを他の特徴とする。
を作る人工物は、サテライトＲＮＡのｃＤＮＡを組み込
んだプラスミドであることを他の特徴とする。
【００１４】更に本発明は、細胞内でサテライトＲＮＡ
を作る人工物は、サテライトＲＮＡのｃＤＮＡにプロモ
ーターを連結したものであることをもう一つの特徴とす
る。
を作る人工物は、サテライトＲＮＡのｃＤＮＡにプロモ
ーターを連結したものであることをもう一つの特徴とす
る。
【００１５】また本発明は、細胞内でサテライトＲＮＡ
を作る人工物は、サテライトＲＮＡのｃＤＮＡを含むＤ
ＮＡから人工的に作製したＲＮＡであることを他の特徴
とする。
を作る人工物は、サテライトＲＮＡのｃＤＮＡを含むＤ
ＮＡから人工的に作製したＲＮＡであることを他の特徴
とする。
【００１６】なお、本願明細書に使用されている用語の
意味は以下の通りである。 キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ） キュウリ、トマト、ダイコン、ユリなどの野菜類、花き
類によく発生するウイルス病の病原ウイルスであり、多
くの種類のアブラムシによって伝染し、汁液によっても
簡単に伝染する。宿主範囲は非常に広く、感染植物は黄
化、萎縮、葉のモザイク・奇形などの症状を呈する。ウ
イルス粒子は直径約３０ｎｍの球形であり、感染・増殖
に必須のＲＮＡゲノムは３分節されている。
意味は以下の通りである。 キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ） キュウリ、トマト、ダイコン、ユリなどの野菜類、花き
類によく発生するウイルス病の病原ウイルスであり、多
くの種類のアブラムシによって伝染し、汁液によっても
簡単に伝染する。宿主範囲は非常に広く、感染植物は黄
化、萎縮、葉のモザイク・奇形などの症状を呈する。ウ
イルス粒子は直径約３０ｎｍの球形であり、感染・増殖
に必須のＲＮＡゲノムは３分節されている。
【００１７】サテライトＲＮＡ ＣＭＶには感染・増殖に必要なＲＮＡ以外に、余分なＲ
ＮＡが存在する場合があり、これをサテライトＲＮＡと
呼ぶ。このサテライトＲＮＡは３００〜４００塩基の小
さなＲＮＡ分子であり、それ自体は増殖能がなく、ＣＭ
Ｖが増殖している植物細胞でのみ増殖可能である。サテ
ライトＲＮＡがあると、ウイルスの増殖が抑制されるこ
とが多く、いわばウイルスに寄生している分子ともみな
すことができる。また、サテライトＲＮＡの種類によっ
ては病徴が激化したり、弱まったりする。
ＮＡが存在する場合があり、これをサテライトＲＮＡと
呼ぶ。このサテライトＲＮＡは３００〜４００塩基の小
さなＲＮＡ分子であり、それ自体は増殖能がなく、ＣＭ
Ｖが増殖している植物細胞でのみ増殖可能である。サテ
ライトＲＮＡがあると、ウイルスの増殖が抑制されるこ
とが多く、いわばウイルスに寄生している分子ともみな
すことができる。また、サテライトＲＮＡの種類によっ
ては病徴が激化したり、弱まったりする。
【００１８】弱毒ウイルス ウイルスには多くの系統・株がある。同種のウイルス株
にも、激しく病気を引き起こす強毒性のウイルス株、感
染はするが症状を出さないウイルス株が存在する。植物
のウイルス病は、一旦感染すると治療することができな
いことから、人間で用いているある種のワクチンによる
予防接種と同様に、植物ウイルスでも弱毒ウイルスを事
前に接種することによって防除する方法がある。これに
用いるのが弱毒ウイルスであり、例えば本出願人に係る
特公昭６２−３７９５６号公報により、ＣＭＶの弱毒ウ
イルスが知られている。
にも、激しく病気を引き起こす強毒性のウイルス株、感
染はするが症状を出さないウイルス株が存在する。植物
のウイルス病は、一旦感染すると治療することができな
いことから、人間で用いているある種のワクチンによる
予防接種と同様に、植物ウイルスでも弱毒ウイルスを事
前に接種することによって防除する方法がある。これに
用いるのが弱毒ウイルスであり、例えば本出願人に係る
特公昭６２−３７９５６号公報により、ＣＭＶの弱毒ウ
イルスが知られている。
【００１９】サテライトＲＮＡを利用したＣＭＶ弱毒ウ
イルス 本出願人は特公昭６２−３７９５６号公報において、弱
毒性のサテライトＲＮＡとＣＭＶの軽症株とを組み合わ
せて弱毒ウイルスを作出した技術を開示している。サテ
ライトＲＮＡはＣＭＶがないと増殖しないので、このウ
イルスをサテライトＲＮＡに対して「ヘルパーウイルス
（介助ウイルス）」と呼んでいる。
イルス 本出願人は特公昭６２−３７９５６号公報において、弱
毒性のサテライトＲＮＡとＣＭＶの軽症株とを組み合わ
せて弱毒ウイルスを作出した技術を開示している。サテ
ライトＲＮＡはＣＭＶがないと増殖しないので、このウ
イルスをサテライトＲＮＡに対して「ヘルパーウイルス
（介助ウイルス）」と呼んでいる。
【００２０】ｃＤＮＡ ＲＮＡの塩基に対応する（相補的）一本鎖ＤＮＡをｃＤ
ＮＡと呼んでいる。実験上は二本鎖として取り扱い、Ｒ
ＮＡに転写することが可能である。植物汁液や人間の汗
にはＲＮＡ分解酵素が存在し、この酵素によって一本鎖
ＲＮＡは分解され、容易にその活性を消失する性質があ
る。サテライトＲＮＡも一本鎖であるので、単独では不
安定で長期保存しにくい。一方、二本鎖ＤＮＡは分解さ
れにくい性質を持っている。そこで、サテライトＲＮＡ
を安定して合成、保存する技法として、ｃＤＮＡを鋳型
とする方法がある。
ＮＡと呼んでいる。実験上は二本鎖として取り扱い、Ｒ
ＮＡに転写することが可能である。植物汁液や人間の汗
にはＲＮＡ分解酵素が存在し、この酵素によって一本鎖
ＲＮＡは分解され、容易にその活性を消失する性質があ
る。サテライトＲＮＡも一本鎖であるので、単独では不
安定で長期保存しにくい。一方、二本鎖ＤＮＡは分解さ
れにくい性質を持っている。そこで、サテライトＲＮＡ
を安定して合成、保存する技法として、ｃＤＮＡを鋳型
とする方法がある。
【００２１】
【作用】強毒性ＣＭＶの接種により発病したトマトに、
サテライトＲＮＡを含む弱毒ウイルスを接種したとこ
ろ、およそ２〜３週間後の上位葉の病徴が軽くなり、以
後展開する葉の病徴も軽くなった。また、弱毒ウイルス
処理株の草丈及び生重量は、無処理株と比較して高くな
った。更に、弱毒ウイルスから精製したサテライトＲＮ
Ａも同様の病徴軽減効果があった。
サテライトＲＮＡを含む弱毒ウイルスを接種したとこ
ろ、およそ２〜３週間後の上位葉の病徴が軽くなり、以
後展開する葉の病徴も軽くなった。また、弱毒ウイルス
処理株の草丈及び生重量は、無処理株と比較して高くな
った。更に、弱毒ウイルスから精製したサテライトＲＮ
Ａも同様の病徴軽減効果があった。
【００２２】なお、ヘルパーウイルスの接種には上記の
ような病徴軽減効果がなかった。弱毒ウイルスはサテラ
イトＲＮＡとヘルパーウイルスで構成されているので、
弱毒ウイルスの病徴軽減効果はサテライトＲＮＡによる
ものと考えられる。
ような病徴軽減効果がなかった。弱毒ウイルスはサテラ
イトＲＮＡとヘルパーウイルスで構成されているので、
弱毒ウイルスの病徴軽減効果はサテライトＲＮＡによる
ものと考えられる。
【００２３】
【実施例】サテライトＲＮＡを含む弱毒ウイルスによ
り、キュウリモザイクウイルス発病株の治療または病徴
軽減を実験してみたが、実験材料、実験方法および実験
結果について以下のように詳しく説明する。
り、キュウリモザイクウイルス発病株の治療または病徴
軽減を実験してみたが、実験材料、実験方法および実験
結果について以下のように詳しく説明する。
【００２４】実験に用いる材料 トマト品種：桃太郎 強毒ウイルス：ＣＭＶ−４２ＣＭ（サテライトＲＮＡを
持っていない分離株）；感染タバコ汁液を供試。 弱毒ウイルス：ＣＭＶ−Ｎｏ．７＋ｓａｔ５５−１；感
染タバコ汁液を供試。 ヘルパ−ウイルス：ＣＭＶ−Ｎｏ．７ サテライトＲＮＡ：ｓａｔ５５−１
持っていない分離株）；感染タバコ汁液を供試。 弱毒ウイルス：ＣＭＶ−Ｎｏ．７＋ｓａｔ５５−１；感
染タバコ汁液を供試。 ヘルパ−ウイルス：ＣＭＶ−Ｎｏ．７ サテライトＲＮＡ：ｓａｔ５５−１
【００２５】実験に用いる方法 接種法：０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）で磨砕
したウイルス感染葉汁液を用いて、カーボランダムを振
りかけた葉に摩擦接種した。当該接種方法は詳しくは、
ウイルスを維持している感染タバコ葉を用意すること
と、上記感染タバコ葉を０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ
７．５）中で磨砕して病葉汁液を作ることと、上記病葉
汁液を用いて、カーボランダムを振りかけた植物の葉に
摩擦接種することとを含む。 トマトの育苗・栽培方法：野菜用三共培土に種子を播種
し、約８〜１０日目の幼苗を径１２ｃｍの素焼き鉢に２
株ずつ移植した。７〜９葉期に到達した時点で、径１５
ｃｍの素焼き鉢に１株ずつ移植した。幼苗時には、４０
０〜６００倍のハイポネックス野菜液を７〜１０日間で
施用し、４〜５葉期以降は緩効性肥料を適宜施用した。
実験は、２０〜３２℃の長日条件下の温室で実施した。
したウイルス感染葉汁液を用いて、カーボランダムを振
りかけた葉に摩擦接種した。当該接種方法は詳しくは、
ウイルスを維持している感染タバコ葉を用意すること
と、上記感染タバコ葉を０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ
７．５）中で磨砕して病葉汁液を作ることと、上記病葉
汁液を用いて、カーボランダムを振りかけた植物の葉に
摩擦接種することとを含む。 トマトの育苗・栽培方法：野菜用三共培土に種子を播種
し、約８〜１０日目の幼苗を径１２ｃｍの素焼き鉢に２
株ずつ移植した。７〜９葉期に到達した時点で、径１５
ｃｍの素焼き鉢に１株ずつ移植した。幼苗時には、４０
０〜６００倍のハイポネックス野菜液を７〜１０日間で
施用し、４〜５葉期以降は緩効性肥料を適宜施用した。
実験は、２０〜３２℃の長日条件下の温室で実施した。
【００２６】実験例１ [病徴軽減効果] [方法] 播種：１９９７年４月２９日 強毒株接種：５月２５日、第２〜３葉に第一次接種 弱毒株接種：６月１０日、第５〜７葉に第二次接種（強
毒株接種後１６日） 調査：病徴観察（最終調査日：７月２５日） [結果]強毒ウイルスの感染により重症のモザイク症状を
現したトマト幼苗に弱毒株を二次接種したところ、２〜
３週間後に展開した新葉（第１０〜１２葉）のモザイク
症状はやや軽減し、その後に展開した新葉の病徴は更に
軽減した（第１表）。弱毒株接種トマトの草丈は強毒株
接種トマトより顕著に高くなったが、健全株よりは低か
った。なお、病徴の軽減は、新しく展開する新葉だけで
起こり、軽減化の起こる前に展開した葉は、重症株と同
じ病徴のままであった。
毒株接種後１６日） 調査：病徴観察（最終調査日：７月２５日） [結果]強毒ウイルスの感染により重症のモザイク症状を
現したトマト幼苗に弱毒株を二次接種したところ、２〜
３週間後に展開した新葉（第１０〜１２葉）のモザイク
症状はやや軽減し、その後に展開した新葉の病徴は更に
軽減した（第１表）。弱毒株接種トマトの草丈は強毒株
接種トマトより顕著に高くなったが、健全株よりは低か
った。なお、病徴の軽減は、新しく展開する新葉だけで
起こり、軽減化の起こる前に展開した葉は、重症株と同
じ病徴のままであった。
【表１】 [病原性の定量] [方法]弱毒ウイルス接種３５日後、強毒ウイルスのみの
接種株（重症株）と弱毒ウイルスを二次接種した株（病
徴軽減株）について、各６株の上位葉からコルボーラー
で２個ずつ計１２個のディスクを採取し、まとめて乳鉢
で磨砕して１０倍液と１００倍液をササゲの子葉に接種
した。なお、強毒株接種トマト（重症症）汁液をササゲ
の片方の子葉に接種し、他方の子葉に弱毒株接種トマト
（病徴軽減株）汁液を接種し、局部病班数を調査した。
６反復した。 [結果]病徴軽減株では重症と比較して病原性が約１／３
程度に低下していることが判明した（第２表）。二次接
種した弱毒株には弱毒性のサテライトＲＮＡであるｓａ
ｔ５５−１が含まれており、このためにウイルス増殖量
が低減したものと考えられる。
接種株（重症株）と弱毒ウイルスを二次接種した株（病
徴軽減株）について、各６株の上位葉からコルボーラー
で２個ずつ計１２個のディスクを採取し、まとめて乳鉢
で磨砕して１０倍液と１００倍液をササゲの子葉に接種
した。なお、強毒株接種トマト（重症症）汁液をササゲ
の片方の子葉に接種し、他方の子葉に弱毒株接種トマト
（病徴軽減株）汁液を接種し、局部病班数を調査した。
６反復した。 [結果]病徴軽減株では重症と比較して病原性が約１／３
程度に低下していることが判明した（第２表）。二次接
種した弱毒株には弱毒性のサテライトＲＮＡであるｓａ
ｔ５５−１が含まれており、このためにウイルス増殖量
が低減したものと考えられる。
【表２】
【００２７】実験例２ [病徴軽減効果] [方法] 播種：１９９７年６月３日 強毒ウイルス接種：６月１６日、子葉に一次接種 弱毒ウイルス接種： １回目：７月４日、第２〜４葉に二次接種（強毒株接種
後１８日） ２回目：７月１４日、第６〜８葉に二次接種（強毒株接
種後２８日） ３回目：７月２８日、第１０〜１３葉に二次接種（強毒
株接種後４２日） 調査：病徴観察（最終調査日：８月２５日） [結果]前記の実験例１と同様に、弱毒株の二次接種株は
モザイク症状が軽減し、強毒株の一次接種と弱毒ウイル
スの二次接種との間隔が短いほど病徴軽減の程度が高か
った（第３表）。
後１８日） ２回目：７月１４日、第６〜８葉に二次接種（強毒株接
種後２８日） ３回目：７月２８日、第１０〜１３葉に二次接種（強毒
株接種後４２日） 調査：病徴観察（最終調査日：８月２５日） [結果]前記の実験例１と同様に、弱毒株の二次接種株は
モザイク症状が軽減し、強毒株の一次接種と弱毒ウイル
スの二次接種との間隔が短いほど病徴軽減の程度が高か
った（第３表）。
【表３】 なお、強毒ウイルス接種株の症状と弱毒ウイルス二次接
種による病徴軽減株の症状とを図１に示している。図１
に示すように、強毒ウイルスのみの接種株は重症株とな
るが、弱毒ウイルスの二次接種株は症状が大きく軽減し
ている。また、図２に示すように、弱毒ウイルスの二次
接種株は病徴が軽減しているが、強毒ウイルス接種と弱
毒ウイルス二次接種との間隔が短いほど病徴軽減の程度
が大きくなっている。
種による病徴軽減株の症状とを図１に示している。図１
に示すように、強毒ウイルスのみの接種株は重症株とな
るが、弱毒ウイルスの二次接種株は症状が大きく軽減し
ている。また、図２に示すように、弱毒ウイルスの二次
接種株は病徴が軽減しているが、強毒ウイルス接種と弱
毒ウイルス二次接種との間隔が短いほど病徴軽減の程度
が大きくなっている。
【００２８】実験例３ [病徴軽減効果] [方法] 播種：１９９７年６月２３日 強毒ウイルス接種：７月９日、子葉に一次接種 弱毒ウイルス接種： １回目：７月１４日、第２葉に二次接種（強毒株接種後
５日） ２回目：７月２１日、第３〜５葉に二次接種（強毒株接
種後１２日） ３回目：７月２８日、第６〜８葉に二次接種（強毒株接
種後１９日） 調査：病徴観察（最終調査日：９月４日） [結果]上記の実験と同様に、弱毒ウイルスの接種はＣＭ
Ｖのモザイク症状を軽減させた（第４表）。病徴の軽減
程度は、強毒株の接種後に弱毒株を早く接種するほど高
く、草丈および茎葉生重量の回復程度も大きかった。
５日） ２回目：７月２１日、第３〜５葉に二次接種（強毒株接
種後１２日） ３回目：７月２８日、第６〜８葉に二次接種（強毒株接
種後１９日） 調査：病徴観察（最終調査日：９月４日） [結果]上記の実験と同様に、弱毒ウイルスの接種はＣＭ
Ｖのモザイク症状を軽減させた（第４表）。病徴の軽減
程度は、強毒株の接種後に弱毒株を早く接種するほど高
く、草丈および茎葉生重量の回復程度も大きかった。
【表４】
【００２９】実験例４ [病徴軽減効果] [方法] 播種：１９９７年７月３０日 強毒ウイルス接種：８月８日、子葉に一次接種 弱毒ウイルス接種： １回目：８月１５日、第１〜２葉に二次接種（強毒株接
種後７日） ２回目：８月２５日、第３〜４葉に二次接種（強毒株接
種後１７日） ３回目：９月４日、第６〜７葉に二次接種（強毒株接種
後２７日） 調査：病徴観察（最終調査日：１０月９日） [結果]上記の実験と同様に、弱毒ウイルスの接種はＣＭ
Ｖのモザイク症状を軽減させた（第５表）。病徴の軽減
程度は、強毒株の接種後に弱毒株を早く接種するほど高
く、茎葉生重量の回復程度も大きかった。 [病原性の定量] [方法]強毒株のみの接種株、弱毒株接種の１回目の株、
弱毒株接種の３回目の株について、９月３０日に展開直
後の新葉（各６株）を各０．２ｇずつ採取し、１００倍
磨砕汁液をササゲ子葉に接種してＣＭＶの病原性を定量
した。１試料について６株のササゲを供試した。常に片
方の子葉に強毒株接種トマト汁液を接種し、他方の子葉
に弱毒株接種トマト汁液を接種し、子葉上の局部病班数
を調査した。 [結果]弱毒株接種トマト（病徴軽減株）では、強毒株接
種トマト（重症株）と比較して全ての株で病原性は顕著
に低下していた（第６表）。
種後７日） ２回目：８月２５日、第３〜４葉に二次接種（強毒株接
種後１７日） ３回目：９月４日、第６〜７葉に二次接種（強毒株接種
後２７日） 調査：病徴観察（最終調査日：１０月９日） [結果]上記の実験と同様に、弱毒ウイルスの接種はＣＭ
Ｖのモザイク症状を軽減させた（第５表）。病徴の軽減
程度は、強毒株の接種後に弱毒株を早く接種するほど高
く、茎葉生重量の回復程度も大きかった。 [病原性の定量] [方法]強毒株のみの接種株、弱毒株接種の１回目の株、
弱毒株接種の３回目の株について、９月３０日に展開直
後の新葉（各６株）を各０．２ｇずつ採取し、１００倍
磨砕汁液をササゲ子葉に接種してＣＭＶの病原性を定量
した。１試料について６株のササゲを供試した。常に片
方の子葉に強毒株接種トマト汁液を接種し、他方の子葉
に弱毒株接種トマト汁液を接種し、子葉上の局部病班数
を調査した。 [結果]弱毒株接種トマト（病徴軽減株）では、強毒株接
種トマト（重症株）と比較して全ての株で病原性は顕著
に低下していた（第６表）。
【表５】
【表６】
【００３０】実験例５ [病徴軽減効果] [方法] 播種：１９９７年９月１０日 一次接種：９月２１日、子葉に強毒ウイルスを接種 二次接種：１０月１５日、５〜６葉期の上位２葉に下記
のａ，ｂ，ｃを二次接種 （強毒株接種後２４日） ａ．弱毒ウイルス（ＣＭＶ−Ｎｏ．７＋ｓａｔ５５−
１）：タバコ感染葉汁液（５倍液）を供試 ｂ．ヘルパーウイルス（ＣＭＶ−Ｎｏ．７）：ペポカボ
チャ感染葉汁液（５倍液）を供試 ｃ．サテライトＲＮＡ（ｓａｔ５５−１）：鈍化した弱
毒ウイルスを電気泳動によってサテライトＲＮＡを精製
し、１．５μｇ／ｍｌの溶液１ｍｌを１４株のトマトに
接種。 調査日：１１月２１日、１１月３０日、１２月１１日 [結果]弱毒株（ＣＭＶ−Ｎｏ．７＋ｓａｔ５５−１）お
よびｓａｔ５５−１を二次接種したモザイク症状のトマ
トは、共に病徴が軽減したが、ヘルパーウイルス（ＣＭ
Ｖ−Ｎｏ．７）を二次接種した株では病徴が全く軽減し
なかった（第７表）。また、弱毒株およびｓａｔ５５−
１の二次接種株では、草丈と生重量は健全株と強毒ウイ
ルス接種株（重症株）の中間的な値となり、ＣＭＶ−Ｎ
ｏ．７の二次接種では重症株と同じ値を示した。以上の
ことから、弱毒株による病徴軽減効果は、ｓａｔＲＮＡ
によるものと認められた。
のａ，ｂ，ｃを二次接種 （強毒株接種後２４日） ａ．弱毒ウイルス（ＣＭＶ−Ｎｏ．７＋ｓａｔ５５−
１）：タバコ感染葉汁液（５倍液）を供試 ｂ．ヘルパーウイルス（ＣＭＶ−Ｎｏ．７）：ペポカボ
チャ感染葉汁液（５倍液）を供試 ｃ．サテライトＲＮＡ（ｓａｔ５５−１）：鈍化した弱
毒ウイルスを電気泳動によってサテライトＲＮＡを精製
し、１．５μｇ／ｍｌの溶液１ｍｌを１４株のトマトに
接種。 調査日：１１月２１日、１１月３０日、１２月１１日 [結果]弱毒株（ＣＭＶ−Ｎｏ．７＋ｓａｔ５５−１）お
よびｓａｔ５５−１を二次接種したモザイク症状のトマ
トは、共に病徴が軽減したが、ヘルパーウイルス（ＣＭ
Ｖ−Ｎｏ．７）を二次接種した株では病徴が全く軽減し
なかった（第７表）。また、弱毒株およびｓａｔ５５−
１の二次接種株では、草丈と生重量は健全株と強毒ウイ
ルス接種株（重症株）の中間的な値となり、ＣＭＶ−Ｎ
ｏ．７の二次接種では重症株と同じ値を示した。以上の
ことから、弱毒株による病徴軽減効果は、ｓａｔＲＮＡ
によるものと認められた。
【表７】
【表８】
【００３１】
【発明の効果】以上説明したように、キュウリモザイク
ウイルス（ＣＭＶ）の感染植物に対してサテライトＲＮ
Ａにより治療する本発明の方法によれば、ＣＭＶの感染
植物に対して、サテライトＲＮＡ、それを含む弱毒ウイ
ルス、または細胞内でサテライトＲＮＡを作る人工物
を、接種または投与することによって、病徴の軽減化ま
たは病気が治療されるので、ＣＭＶ感染により発病した
植物の病徴を軽減化または病気の治療をすることができ
るようになる。
ウイルス（ＣＭＶ）の感染植物に対してサテライトＲＮ
Ａにより治療する本発明の方法によれば、ＣＭＶの感染
植物に対して、サテライトＲＮＡ、それを含む弱毒ウイ
ルス、または細胞内でサテライトＲＮＡを作る人工物
を、接種または投与することによって、病徴の軽減化ま
たは病気が治療されるので、ＣＭＶ感染により発病した
植物の病徴を軽減化または病気の治療をすることができ
るようになる。
【００３２】また、これまで植物ウイルス病の実用的な
治療薬は全くなかったが、本発明の方法は新薬開発の手
がかりとなる。
治療薬は全くなかったが、本発明の方法は新薬開発の手
がかりとなる。
【図１】強毒ウイルス接種株と弱毒ウイルスの二次接種
による病徴軽減株とを表す写真である。
による病徴軽減株とを表す写真である。
【図２】強毒ウイルス接種株と弱毒ウイルスの二次接種
株と健全株とを表す写真である。
株と健全株とを表す写真である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 河辺 邦正 北海道札幌市豊平区羊ケ丘１番地 農試 寮 (56)参考文献 特開 昭61−177985（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−3789（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A01N 63/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (8)
- 【請求項１】キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の感
染による植物の病気を治療する方法であって、ＣＭＶに
感染した植物に対して、サテライトＲＮＡ、それを含む
弱毒ウイルス、または細胞内でサテライトＲＮＡを作る
人工物を接種または投与することによって、病徴の軽減
化または病気の治療を行うことを特徴とする植物の病気
の治療方法。 - 【請求項２】上記サテライトＲＮＡは、キュウリモザイ
クウイルス（ＣＭＶ）粒子中に存在してＣＭＶの感染・
増殖に必要なＲＮＡ以外のＲＮＡであることを特徴とす
る請求項１記載の植物の病気の治療方法。 - 【請求項３】上記サテライトＲＮＡは、およそ３００〜
４００塩基のＲＮＡ分子であることを特徴とする請求項
１記載の植物の病気の治療方法。 - 【請求項４】上記サテライトＲＮＡは、キュウリモザイ
クウイルス（ＣＭＶ）の増殖を抑制し、病徴を軽減する
ことを特徴とする請求項１記載の植物の病気の治療方
法。 - 【請求項５】上記した弱毒ウイルスは、弱毒性のサテラ
イトＲＮＡとキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の軽
症株とを組み合わせて作り出されていることを特徴とす
る請求項１記載の植物の病気の治療方法。 - 【請求項６】細胞内でサテライトＲＮＡを作る人工物
は、サテライトＲＮＡのｃＤＮＡを組み込んだプラスミ
ドであることを特徴とする請求項１記載の植物の病気の
治療方法。 - 【請求項７】細胞内でサテライトＲＮＡを作る人工物
は、サテライトＲＮＡのｃＤＮＡにプロモーターを連結
したものであることを特徴とする請求項１記載の植物の
病気の治療方法。 - 【請求項８】細胞内でサテライトＲＮＡを作る人工物
は、サテライトＲＮＡのｃＤＮＡを含むＤＮＡから人工
的に作製したＲＮＡであることを特徴とする請求項７記
載の植物の病気の治療方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10100651A JP3030362B2 (ja) | 1998-03-27 | 1998-03-27 | キュウリモザイクウイルス（ｃｍｖ）の感染による植物の病気をサテライトｒｎａにより治療する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10100651A JP3030362B2 (ja) | 1998-03-27 | 1998-03-27 | キュウリモザイクウイルス（ｃｍｖ）の感染による植物の病気をサテライトｒｎａにより治療する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11279013A JPH11279013A (ja) | 1999-10-12 |
| JP3030362B2 true JP3030362B2 (ja) | 2000-04-10 |
Family
ID=14279736
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10100651A Expired - Lifetime JP3030362B2 (ja) | 1998-03-27 | 1998-03-27 | キュウリモザイクウイルス（ｃｍｖ）の感染による植物の病気をサテライトｒｎａにより治療する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3030362B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5128169B2 (ja) * | 2007-04-19 | 2013-01-23 | 日本デルモンテ株式会社 | 植物疫病の防除剤、防除法及び植物疫病抵抗性植物 |
| CA2831125A1 (en) | 2011-03-24 | 2012-09-27 | Incorporated National University Iwate University | Recombinant alsv for preventing pathogenic viral infection of plant |
-
1998
- 1998-03-27 JP JP10100651A patent/JP3030362B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH11279013A (ja) | 1999-10-12 |
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