JP2990708B2 - 有用たん白質の産生方法 - Google Patents
有用たん白質の産生方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、有用たん白質をコードするDNAを組込んだ
動物細胞をミクロキャリヤー上で培養、維持することに
より、該有用たん白質を産生する方法に関する。
動物細胞をミクロキャリヤー上で培養、維持することに
より、該有用たん白質を産生する方法に関する。
［従来の技術］ 近年、遺伝子操作技術の応用により、各種有用たん白
質に対応するDNAを大腸菌をはじめとする原核細胞ある
いは動物細胞などの真核細胞に導入し、その情報を発現
させることにより、該有用たん白質を産生せしめること
が可能となってきた。
質に対応するDNAを大腸菌をはじめとする原核細胞ある
いは動物細胞などの真核細胞に導入し、その情報を発現
させることにより、該有用たん白質を産生せしめること
が可能となってきた。
原核細胞を用いる系と真核細胞を用いる系のたん白質
の生産性の比較については、現時点では一般的には大腸
菌などを用いる原核細胞系の方が有利と考えられてい
る。しかしながら、糖たん白質などpost translational
modificationを要するものについては、原核細胞系で
はその機構が欠除しているために産生させることができ
ないものがある。これらのことから、動物細胞を宿主と
して用いる遺伝子操作によるたん白質産生系が注目を集
めている。本発明は、このように外来遺伝子を導入、増
幅された動物細胞を培養、増殖させ、該外来遺伝子にコ
ードされるたん白質を産生せしめることを特徴とする有
用たん白質の産生方法に関するものである。
の生産性の比較については、現時点では一般的には大腸
菌などを用いる原核細胞系の方が有利と考えられてい
る。しかしながら、糖たん白質などpost translational
modificationを要するものについては、原核細胞系で
はその機構が欠除しているために産生させることができ
ないものがある。これらのことから、動物細胞を宿主と
して用いる遺伝子操作によるたん白質産生系が注目を集
めている。本発明は、このように外来遺伝子を導入、増
幅された動物細胞を培養、増殖させ、該外来遺伝子にコ
ードされるたん白質を産生せしめることを特徴とする有
用たん白質の産生方法に関するものである。
動物細胞に外来遺伝子を導入、発現させる試みは数多
くある（例えば、蛋白質・核酸・酵素、臨時増刊1983.1
2 vol.28 No.14、“組換え遺伝子の細胞への導入と発
現”）。その例としては、マウス由来C127−１細胞を宿
主、ウシパピローマウィルス（BPV）をベクターとし
て、ヒトインターフェロンαおよびγを持続的に産生さ
せる方法〔R.Fukunaga et al.,Proc.NAS,81,5086（198
4）〕、あるいは2.チャイニーズハムスター由来CHO細胞
を宿主、アデノウイルスをベクターとして、ヒトインタ
ーフェロンγを持続的に産生させる方法〔J.Haynes,C.W
eissmann,Nucl.Acid.Res.,11,687（1983）〕などが挙げ
られる。
くある（例えば、蛋白質・核酸・酵素、臨時増刊1983.1
2 vol.28 No.14、“組換え遺伝子の細胞への導入と発
現”）。その例としては、マウス由来C127−１細胞を宿
主、ウシパピローマウィルス（BPV）をベクターとし
て、ヒトインターフェロンαおよびγを持続的に産生さ
せる方法〔R.Fukunaga et al.,Proc.NAS,81,5086（198
4）〕、あるいは2.チャイニーズハムスター由来CHO細胞
を宿主、アデノウイルスをベクターとして、ヒトインタ
ーフェロンγを持続的に産生させる方法〔J.Haynes,C.W
eissmann,Nucl.Acid.Res.,11,687（1983）〕などが挙げ
られる。
しかしながら、上記に例として挙げた動物細胞はいず
れも接着依存性細胞であるため、遺伝子操作を施した動
物細胞を培養する際には浮遊培養による培養はできな
い。従って、このような接着依存性細胞を増殖させるた
めには一般に単層培養を行なう。単層培養法は、いまだ
にローラー培養などが主流を占め、手間のかかること、
およびバクテリアやかびなどに汚染されやすいなどの欠
点があり、試験研究用規模の域を出ない場合が多い。
れも接着依存性細胞であるため、遺伝子操作を施した動
物細胞を培養する際には浮遊培養による培養はできな
い。従って、このような接着依存性細胞を増殖させるた
めには一般に単層培養を行なう。単層培養法は、いまだ
にローラー培養などが主流を占め、手間のかかること、
およびバクテリアやかびなどに汚染されやすいなどの欠
点があり、試験研究用規模の域を出ない場合が多い。
そこで本発明者らは、ミクロキャリヤー培養法を用い
ることにより、遺伝子操作を施した動物細胞を大量に培
養し、かつ長期間にわたって維持させる方法を見い出
し、目的とする有用たん白質を大量に生産する方法を開
発した（特開昭62−32896）。
ることにより、遺伝子操作を施した動物細胞を大量に培
養し、かつ長期間にわたって維持させる方法を見い出
し、目的とする有用たん白質を大量に生産する方法を開
発した（特開昭62−32896）。
［発明が解決しようとする課題］ しかしながら上記方法では、細胞を増殖、維持する上
で必要な成分である血清を添加した培地を使用して細胞
を維持しているため、産生される有用たん白質に血清た
ん白質が混入されやすく、有用たん白質を医薬として使
用する場合は問題となる。また、これを除去するための
精製工程は非常に複雑で手間がかかる。
で必要な成分である血清を添加した培地を使用して細胞
を維持しているため、産生される有用たん白質に血清た
ん白質が混入されやすく、有用たん白質を医薬として使
用する場合は問題となる。また、これを除去するための
精製工程は非常に複雑で手間がかかる。
本発明の目的は、上記問題点を解決し、無血清培地あ
るいはそれに0.1％以下の血清アルブミンを添加した培
地を用い有用たん白質を大量生産する方法を提供するこ
とにある。
るいはそれに0.1％以下の血清アルブミンを添加した培
地を用い有用たん白質を大量生産する方法を提供するこ
とにある。
［課題を解決するための手段］ 上記目的は、以下の本発明により達成される。
すなわち本発明は、動物細胞、好ましくは有用たん白
質をコードするDNAを組込んだベクターを含む動物細胞
をミクロキャリヤー上に増殖、維持させることにより有
用物質生産を行うに際し、完全無たん白培地あるいはそ
れに0.1％以下のウシ血清アルブミンを添加した培地中
で、0.3〜0.6meq・HCl/gのイオン交換容量のミクロキャ
リヤーを用いて、該動物細胞を維持することを特徴とす
る有用たん白質の産生方法である。
質をコードするDNAを組込んだベクターを含む動物細胞
をミクロキャリヤー上に増殖、維持させることにより有
用物質生産を行うに際し、完全無たん白培地あるいはそ
れに0.1％以下のウシ血清アルブミンを添加した培地中
で、0.3〜0.6meq・HCl/gのイオン交換容量のミクロキャ
リヤーを用いて、該動物細胞を維持することを特徴とす
る有用たん白質の産生方法である。
本発明の有用たん白質は、遺伝子操作により産生でき
るものであれば特に限定されないが、例えば、ヒト・イ
ンターフェロンβ、ヒト・インターフェロンγあるいは
ヒト・インターロイキン２などが挙げられる。
るものであれば特に限定されないが、例えば、ヒト・イ
ンターフェロンβ、ヒト・インターフェロンγあるいは
ヒト・インターロイキン２などが挙げられる。
有用たん白質をコードするDNAを組込んだベクター
は、動物細胞中で増幅しうる性質を有するものであり、
好ましくは１）pBR322の複製開始点などの大腸菌中での
複製に必要な複製開始点、ウシパピローマウィルス、タ
イプＩ（BPV−１）DNAのPvu II切断長鎖フラグメント、
SV40プロモーター（初期または後期）、有用たん白質を
コードするDNAおよびpolyrA付加シグナルを含むベクタ
ー、あるいは、２）大腸菌中での複製に必要な複製開始
点、SV40初期プロモーター、その下流に連結したジヒド
ロ葉酸還元酵素（DHFR）をコードするDNA、有用たん白
質をコードするDNAおよびpolyrA付加シグナルを含むベ
クターなどが用いられる。動物細胞は、有用たん白質を
コードするDNAを組込んだベクターの増殖を許容する性
質を有するものであり、好ましくはマウスC127−１細
胞、あるいはCHO dhfr-（ジヒドロ葉酸還元酵素欠損チ
ャイニーズハムスター オバリー細胞）などが用いられ
る。
は、動物細胞中で増幅しうる性質を有するものであり、
好ましくは１）pBR322の複製開始点などの大腸菌中での
複製に必要な複製開始点、ウシパピローマウィルス、タ
イプＩ（BPV−１）DNAのPvu II切断長鎖フラグメント、
SV40プロモーター（初期または後期）、有用たん白質を
コードするDNAおよびpolyrA付加シグナルを含むベクタ
ー、あるいは、２）大腸菌中での複製に必要な複製開始
点、SV40初期プロモーター、その下流に連結したジヒド
ロ葉酸還元酵素（DHFR）をコードするDNA、有用たん白
質をコードするDNAおよびpolyrA付加シグナルを含むベ
クターなどが用いられる。動物細胞は、有用たん白質を
コードするDNAを組込んだベクターの増殖を許容する性
質を有するものであり、好ましくはマウスC127−１細
胞、あるいはCHO dhfr-（ジヒドロ葉酸還元酵素欠損チ
ャイニーズハムスター オバリー細胞）などが用いられ
る。
通常、前記１）のベクターにはマウスC127−１細胞
が、前記２）のベクターにはCHOdhfr-細胞が用いられ
る。
が、前記２）のベクターにはCHOdhfr-細胞が用いられ
る。
ミクロキャリヤーとしては、正に荷電した化学残基を
有する多糖類微小粒子（例えば、ジエチルアミノエチル
化した架橋デキストラン微粒子、ジメチルアミノプロピ
ル化したポリアクリルアミド微粒子など）、あるいはコ
ラーゲン被覆架橋デキストラン微粒子で、表面電荷が0.
3〜0.6meg・HCl/gのイオン交換容量を持つものが用いら
れる。
有する多糖類微小粒子（例えば、ジエチルアミノエチル
化した架橋デキストラン微粒子、ジメチルアミノプロピ
ル化したポリアクリルアミド微粒子など）、あるいはコ
ラーゲン被覆架橋デキストラン微粒子で、表面電荷が0.
3〜0.6meg・HCl/gのイオン交換容量を持つものが用いら
れる。
有用たん白質をコードするDNAを組込んだベクターを
含む動物細胞をミクロキャリヤー上で増殖させる際の培
地は、通常の培地を用いることができるが、C127細胞の
場合はウシ胎児血清（FCS）２〜10％添加ダルベッコー
変法イーグルMEM培地を、CHO dhfr-細胞の場合は、ウ
シ胎児血清２〜10％添加MEMアルファ培地（ヌクレオシ
ド非添加）を用いる。
含む動物細胞をミクロキャリヤー上で増殖させる際の培
地は、通常の培地を用いることができるが、C127細胞の
場合はウシ胎児血清（FCS）２〜10％添加ダルベッコー
変法イーグルMEM培地を、CHO dhfr-細胞の場合は、ウ
シ胎児血清２〜10％添加MEMアルファ培地（ヌクレオシ
ド非添加）を用いる。
維持培地とは、増殖させた細胞を維持させるための培
地であり、本発明では血清を添加しない完全無たん白培
地、すなわちダルベッコー変性MEM培地（Ｄ−MEM）、ME
Mアルファ培地などの基本培地のみか、あるいはこれら
に0.1％以下のウシ血清アルブミンを添加したものを用
いる。
地であり、本発明では血清を添加しない完全無たん白培
地、すなわちダルベッコー変性MEM培地（Ｄ−MEM）、ME
Mアルファ培地などの基本培地のみか、あるいはこれら
に0.1％以下のウシ血清アルブミンを添加したものを用
いる。
インターフェロン、インターロイキン２などの有用た
ん白質を産生させる場合は、この維持培地を有用たん白
質産生用の培地として使用できる。
ん白質を産生させる場合は、この維持培地を有用たん白
質産生用の培地として使用できる。
［実 施 例］ 以下に、マウス由来C127−１細胞を宿主、BPVをベク
ターとしてヒトインターフェロンγを発現する細胞、お
よびチャイニーズハムスター由来CHO細胞を宿主、アデ
ノウィルスをベクターとして、ヒトインターフェロンγ
を発現する細胞を用いた実施例で具体的に本発明を説明
する。いうまでもないが、本発明は以下に述べる実施例
に限定されるものではない。
ターとしてヒトインターフェロンγを発現する細胞、お
よびチャイニーズハムスター由来CHO細胞を宿主、アデ
ノウィルスをベクターとして、ヒトインターフェロンγ
を発現する細胞を用いた実施例で具体的に本発明を説明
する。いうまでもないが、本発明は以下に述べる実施例
に限定されるものではない。
実施例１ BPVγ/C127細胞の構築 pSVIFNγ/BPV97(p)（特開昭61−52286号）を組込んだ
C127−１細胞〔D.R.Lowy et al.,J,Virol,26,191,197
8〕のクローンNo.64−１（特開昭61−52286号）を得
た。以後、このクローン細胞をBPVγ/C127細胞と呼ぶ。
C127−１細胞〔D.R.Lowy et al.,J,Virol,26,191,197
8〕のクローンNo.64−１（特開昭61−52286号）を得
た。以後、このクローン細胞をBPVγ/C127細胞と呼ぶ。
種細胞の培養 BPVγ/C127細胞７×105ケをウシ胎児血清（FCS）10％
およびグルコース1g/を添加したダルベッコー変法イ
ーグルMEM培地（Ｄ−MEM）（日本製薬製）10mlに懸濁
し、プラスチックフラスコ（コーニング社製、25100、
細胞接着面積25cm2）中、37℃にて培養する。通常、３
〜４日でconfluent monolayer（細胞数６〜８×106ケ／
フラスコ）を形成する。0.25％トリブシン（Difco社
製、1:250）を用いて常法に従い細胞懸濁液を調整す
る。
およびグルコース1g/を添加したダルベッコー変法イ
ーグルMEM培地（Ｄ−MEM）（日本製薬製）10mlに懸濁
し、プラスチックフラスコ（コーニング社製、25100、
細胞接着面積25cm2）中、37℃にて培養する。通常、３
〜４日でconfluent monolayer（細胞数６〜８×106ケ／
フラスコ）を形成する。0.25％トリブシン（Difco社
製、1:250）を用いて常法に従い細胞懸濁液を調整す
る。
ミクロキャリヤー培養によるインターフェロン産生
実験 プラスチックフラスコ中で培養した種細胞をルー瓶
（細胞接着面積約150cm2）に継代する。confluent mono
layer（３〜４×107/ルー瓶）を形成させた後、トリプ
シナイズし細胞懸濁液を調整する。0.3〜0.65meq・HCl/
gのイオン交換容量を持つミクロリャリヤー（“Dormace
ll";Pfeifer ＆ Langen Dormagen社）0.6gをFCS5％およ
び1g/グルコース添加Ｄ−MEM190mlに懸濁し、上記細
胞懸濁液（2.4×107細胞/10ml FCS5％添加Ｄ−MEM）と
ともに500ml容量のスピナー瓶中で撹拌培養する。２〜
３日毎に培養液の90％を新しい培養液（FCS5％およびグ
ルコース1g/添加Ｄ−MEM）に交換する。通常、培養開
始後６日目にミクロキャリヤー上にconfluent monolaye
rを形成する。
実験 プラスチックフラスコ中で培養した種細胞をルー瓶
（細胞接着面積約150cm2）に継代する。confluent mono
layer（３〜４×107/ルー瓶）を形成させた後、トリプ
シナイズし細胞懸濁液を調整する。0.3〜0.65meq・HCl/
gのイオン交換容量を持つミクロリャリヤー（“Dormace
ll";Pfeifer ＆ Langen Dormagen社）0.6gをFCS5％およ
び1g/グルコース添加Ｄ−MEM190mlに懸濁し、上記細
胞懸濁液（2.4×107細胞/10ml FCS5％添加Ｄ−MEM）と
ともに500ml容量のスピナー瓶中で撹拌培養する。２〜
３日毎に培養液の90％を新しい培養液（FCS5％およびグ
ルコース1g/添加Ｄ−MEM）に交換する。通常、培養開
始後６日目にミクロキャリヤー上にconfluent monolaye
rを形成する。
この時点以降、２〜３日毎に90％の培地を血清不含の
Ｄ−MEMあるいはそれに0.1％以下のウシ血清アルブミン
（BSA）を含むＤ−MEMに交換し、２〜３ヶ月間長期培養
を行なう。インターフェロンは構成的に培養液中に分泌
されるので、２〜３日毎にインターフェロン原液が得ら
れる。結果を第１〜３図に示す。
Ｄ−MEMあるいはそれに0.1％以下のウシ血清アルブミン
（BSA）を含むＤ−MEMに交換し、２〜３ヶ月間長期培養
を行なう。インターフェロンは構成的に培養液中に分泌
されるので、２〜３日毎にインターフェロン原液が得ら
れる。結果を第１〜３図に示す。
第１図は、イオン交換容量の異なる４種類のミクロキ
ャリヤー（“Dormacell"）を用い、交換容量の差がイン
ターフェロン産生と細胞の長期間培養維持に及ぼす影響
を調べたものである。維持培地はＤ−MEMを用いた。
ャリヤー（“Dormacell"）を用い、交換容量の差がイン
ターフェロン産生と細胞の長期間培養維持に及ぼす影響
を調べたものである。維持培地はＤ−MEMを用いた。
第２図は、BPVγ/C127細胞を増殖培地で増殖させ、細
胞がconfluentになってから無血清維持培地（Ｄ−MEM）
に替えて、15日間培養して得られたインターフェロン産
生量を細胞当りで調べたものである。これよりインター
フェロン産生は、イオン交換容量の増加を共に低下する
ことがわかる。
胞がconfluentになってから無血清維持培地（Ｄ−MEM）
に替えて、15日間培養して得られたインターフェロン産
生量を細胞当りで調べたものである。これよりインター
フェロン産生は、イオン交換容量の増加を共に低下する
ことがわかる。
第３図は、第１図、第２図で良好な結果を得た0.3meq
・HCl/gの交換容量を持つミクロキャリヤーを用い、無
血清条件下と0.1％BSA存在下で細胞を長期間維持した結
果と、２〜３日毎の培地交換で得られたインターフェロ
ン産生量を示している。この結果は、BPVγ/C127細胞
は、無血清条件下でも２〜３ケ月間にわたり、高い力価
のインターフェロン産生を続けながら培養維持できるこ
とを示している。
・HCl/gの交換容量を持つミクロキャリヤーを用い、無
血清条件下と0.1％BSA存在下で細胞を長期間維持した結
果と、２〜３日毎の培地交換で得られたインターフェロ
ン産生量を示している。この結果は、BPVγ/C127細胞
は、無血清条件下でも２〜３ケ月間にわたり、高い力価
のインターフェロン産生を続けながら培養維持できるこ
とを示している。
インターフェロン力価測定は、S.Rubinsteinらの方法
〔J.Virol,37,755,1981〕に従いFL細胞、Sindbis Virus
を用いたCPE50法により行なった。標準インターフェロ
ンとしては、NIH標準ヒトインターフェロンγとすり合
わせを行なった組換え大腸菌由来のヒトインターフェロ
ンγ8,300単位/mlを用いた（特開昭61−52286号参
照）。
〔J.Virol,37,755,1981〕に従いFL細胞、Sindbis Virus
を用いたCPE50法により行なった。標準インターフェロ
ンとしては、NIH標準ヒトインターフェロンγとすり合
わせを行なった組換え大腸菌由来のヒトインターフェロ
ンγ8,300単位/mlを用いた（特開昭61−52286号参
照）。
実施例２ dhfr−γ/CHO細胞の構築 発現プラスミドpSVIFNγ/AdDHFRは、Scahillら〔Pro
c.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.80,4654−4658,1983〕とHayne
sら〔Nucleic Acids.Res.,2,687−706,1983〕の方法に
準じて構築され、Crahamら〔Virology,54,536−539,197
3〕の方法で細胞内に導入され高力価産生株を得た。
c.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.80,4654−4658,1983〕とHayne
sら〔Nucleic Acids.Res.,2,687−706,1983〕の方法に
準じて構築され、Crahamら〔Virology,54,536−539,197
3〕の方法で細胞内に導入され高力価産生株を得た。
種細胞の培養 dhfr−γ/CHO細胞７×105ケをFCS10％を含むヌクレオ
シド不含のアルファ−MEM10mlに懸濁し、プラスチック
フラスコ（コーニング社製、25100、細胞接着面積25c
m2）中、37℃にて培養する。通常、３〜４日でConfuent
monolayer（細胞数６〜８×106/フラスコ）を形成す
る。
シド不含のアルファ−MEM10mlに懸濁し、プラスチック
フラスコ（コーニング社製、25100、細胞接着面積25c
m2）中、37℃にて培養する。通常、３〜４日でConfuent
monolayer（細胞数６〜８×106/フラスコ）を形成す
る。
ミクロキャリヤー培養によるインターフェロン産生
実験 実施例１の（３）と同じ方法で、４種類の交換容量の
“Dormacell"を用い、dhfr−γ/CHO細胞を培養し、イン
ターフェロンを産生させた。維持培地はMEM−アルファ
培地を用いた。結果を第４図に示す。
実験 実施例１の（３）と同じ方法で、４種類の交換容量の
“Dormacell"を用い、dhfr−γ/CHO細胞を培養し、イン
ターフェロンを産生させた。維持培地はMEM−アルファ
培地を用いた。結果を第４図に示す。
［発明の効果］ 本発明方法により、従来は困難であった有用たん白質
高産生の動物細胞の大量培養化が果たせ、その結果、大
量の有用たん白質を分泌生産することが可能となり、商
業生産を考える上でも効果的である。しかし、本発明方
法では、維持培地として血清を添加しない培地を用いる
ため、血清が混入されず高純度の有用たん白質を産生す
ることができる。さらに、高価な血清を必要としないた
めコストを大幅に低減できる。
高産生の動物細胞の大量培養化が果たせ、その結果、大
量の有用たん白質を分泌生産することが可能となり、商
業生産を考える上でも効果的である。しかし、本発明方
法では、維持培地として血清を添加しない培地を用いる
ため、血清が混入されず高純度の有用たん白質を産生す
ることができる。さらに、高価な血清を必要としないた
めコストを大幅に低減できる。
第１図は、BPVγ/C127細胞のインターフェロン産生量お
よび細胞の長時間維持と、ミクロキャリヤーのイオン交
換容量との関係を示すものであり、イオン交換容量は、
○が0.30meq・HCl・ｇ、■が0.50meq・HCl/g、▲が0.58
meq・HCl/g、●が0.65meq・HCl/gを各々示す。 第２図は、BPVγエーC127細胞による細胞当りのインタ
ーフェロン産生量および細胞数と、ミクロキャリヤーの
イオン交換容量との関係を示すものである。 第３図は、0.3meq・HCl/gのイオン交換容量を持つミク
ロキャリヤーを用い、BPVγ/C127細胞を長期間培養した
ときのインターフェロン産生量を示すものである。 第４図は、dhfr−γ/CHO細胞のインターフェロン産生量
とミクロキャリヤーのイオン交換容量との関係を示すも
のである。
よび細胞の長時間維持と、ミクロキャリヤーのイオン交
換容量との関係を示すものであり、イオン交換容量は、
○が0.30meq・HCl・ｇ、■が0.50meq・HCl/g、▲が0.58
meq・HCl/g、●が0.65meq・HCl/gを各々示す。 第２図は、BPVγエーC127細胞による細胞当りのインタ
ーフェロン産生量および細胞数と、ミクロキャリヤーの
イオン交換容量との関係を示すものである。 第３図は、0.3meq・HCl/gのイオン交換容量を持つミク
ロキャリヤーを用い、BPVγ/C127細胞を長期間培養した
ときのインターフェロン産生量を示すものである。 第４図は、dhfr−γ/CHO細胞のインターフェロン産生量
とミクロキャリヤーのイオン交換容量との関係を示すも
のである。
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12P 21/00 - 21/02 C12N 15/09 - 15/28 ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｂｓ. （ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (2)
- 【請求項１】動物細胞をミクロキャリヤー上に増殖、維
持させることにより、有用物質生産を行なうに際し、完
全無たん白培地あるいはそれに0.1％以下のウシ血清ア
ルブミンを添加した培地中で、0.3〜0.6meq・HCL/gのイ
オン交換容量のミクロキャリヤーを用いて、該動物細胞
を維持することを特徴とする有用たん白質の産生方法。 - 【請求項２】動物細胞が有用たん白質をコードするDNA
を組込んだベクターを含むことを特徴とする請求項１記
載の有用たん白質の産生方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27422889A JP2990708B2 (ja) | 1989-10-20 | 1989-10-20 | 有用たん白質の産生方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27422889A JP2990708B2 (ja) | 1989-10-20 | 1989-10-20 | 有用たん白質の産生方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03133389A JPH03133389A (ja) | 1991-06-06 |
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