JP2956998B2 - 移植器官潅流保存液および移植器官潅流保存法 - Google Patents
移植器官潅流保存液および移植器官潅流保存法Info
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、移植器官の保存に使用される灌流保存液に
関するものである。
関するものである。
（従来の技術および問題点） 腎臓移植が初めて臨床で行われてから30年あまりがた
ち、この間手術手技の向上、移植患者の適応基準の検
討、免疫学的検査の進歩ならびに免疫抑制剤の開発など
により、移植成績は著しく向上し、欧米では既に移植が
一般的な医療として定着している。現在では、腎臓のみ
ならず、心臓、肝臓、膵臓などの移植も広く行われるよ
うになってきている。この臓器移植成績の向上には、臓
器保存法の進歩が大きく寄与している。特に近年、急激
な移植症例数の増加により臓器の供給が不足しており、
また移植後、臓器の機能不全が起こった場合、再移植が
極めて難しくなっている。そのため、移植臓器の機能を
低下させずに長時間の保存が可能な方法の確立が強く求
められている。
ち、この間手術手技の向上、移植患者の適応基準の検
討、免疫学的検査の進歩ならびに免疫抑制剤の開発など
により、移植成績は著しく向上し、欧米では既に移植が
一般的な医療として定着している。現在では、腎臓のみ
ならず、心臓、肝臓、膵臓などの移植も広く行われるよ
うになってきている。この臓器移植成績の向上には、臓
器保存法の進歩が大きく寄与している。特に近年、急激
な移植症例数の増加により臓器の供給が不足しており、
また移植後、臓器の機能不全が起こった場合、再移植が
極めて難しくなっている。そのため、移植臓器の機能を
低下させずに長時間の保存が可能な方法の確立が強く求
められている。
現在、臨床的に用いられている臓器保存法は、低温浸
漬法〔Lancet 2 1219〜1222（1969）〕と低温灌流保存
法〔Lancet 2 536（1967）〕に大別される。近年、死体
腎移植が広範に普及するに伴い、臓器を長期間保存可能
な低温灌流保存法が重要性をましてきており、この保存
法に使用される灌流液の開発、改良が盛んに行われてい
る。
漬法〔Lancet 2 1219〜1222（1969）〕と低温灌流保存
法〔Lancet 2 536（1967）〕に大別される。近年、死体
腎移植が広範に普及するに伴い、臓器を長期間保存可能
な低温灌流保存法が重要性をましてきており、この保存
法に使用される灌流液の開発、改良が盛んに行われてい
る。
低温灌流保存法の目的は、臓器をより生理的な条件に
近づけて保存することにある。すなわち、低温灌流保存
法とは、組織を低温下（一般には10℃以下）におくこと
により代謝を抑制し、灌流によって必要な酸素および栄
養素を補助し、代謝産物を除去する方法であるといえ
る。
近づけて保存することにある。すなわち、低温灌流保存
法とは、組織を低温下（一般には10℃以下）におくこと
により代謝を抑制し、灌流によって必要な酸素および栄
養素を補助し、代謝産物を除去する方法であるといえ
る。
ここで、一般に血液そのもの灌流液として使用する
と、粘性の増加、赤血球破壊による遊離ヘモグロビンの
組織沈着、血小板、脂質、フィブリノーゲンによる血栓
形成などがおこることが知られている。
と、粘性の増加、赤血球破壊による遊離ヘモグロビンの
組織沈着、血小板、脂質、フィブリノーゲンによる血栓
形成などがおこることが知られている。
ベルツァらは、血漿を凍結融解し、フィブリノーゲン
をできるだけ除いた低温沈澱血漿（Cryoprecipitated p
rasma）を灌流液として用い、犬の腎臓を72時間保存す
ることに成功した。〔Lancet ２ ,536,（1967）〕さら
に、トレドーペレイラ等は、シリカゲルで処理した低温
沈澱血漿中に残存するフィブリノーゲン、β−リポプロ
テインを完全に除去し、更に不溶性脂質画分であるトリ
グリセライドの量を1/3まで減少させた灌流液を開発し
た。
をできるだけ除いた低温沈澱血漿（Cryoprecipitated p
rasma）を灌流液として用い、犬の腎臓を72時間保存す
ることに成功した。〔Lancet ２ ,536,（1967）〕さら
に、トレドーペレイラ等は、シリカゲルで処理した低温
沈澱血漿中に残存するフィブリノーゲン、β−リポプロ
テインを完全に除去し、更に不溶性脂質画分であるトリ
グリセライドの量を1/3まで減少させた灌流液を開発し
た。
しかしながら、これらの低温沈澱血漿は、不溶性脂質
画分が完全に除去されていないため、灌流中に脂質栓塞
が生じる危険性があること、また血漿中に含まれる肝炎
ウイルスの不活性操作（加熱処理）ができないため、肝
炎ウイルス感染の危険性を伴うという欠点を有するもの
であった。
画分が完全に除去されていないため、灌流中に脂質栓塞
が生じる危険性があること、また血漿中に含まれる肝炎
ウイルスの不活性操作（加熱処理）ができないため、肝
炎ウイルス感染の危険性を伴うという欠点を有するもの
であった。
これらの欠点を補うものとして、グルドマンらは、ク
レブスーリンゲル液に６％濃度に人アルブミンを加えて
灌流液を用い、犬腎を低温において96時間灌流し、自家
移植を行い、80％以上の成着率を得ることに成功した。
〔Grundman et al;Transpl.,17299〜305（1974）〕 しかしながら、このような灌流液を用いた低温灌流保
存法には、以下のような問題がある。
レブスーリンゲル液に６％濃度に人アルブミンを加えて
灌流液を用い、犬腎を低温において96時間灌流し、自家
移植を行い、80％以上の成着率を得ることに成功した。
〔Grundman et al;Transpl.,17299〜305（1974）〕 しかしながら、このような灌流液を用いた低温灌流保
存法には、以下のような問題がある。
すなわち、細胞はATPを消費しながらNaポンプを動か
し形態を保っている。しかし、組織が低温状態になると
血管内皮のATPaseの活性が低下するため、エネルギーが
供給されず、Naポンプが働かなくなり、細胞は浮種をお
こす。保存器官が延長するに従い、血管内皮およびその
周辺の浮種は顕著になり、移植後、微少循環障害を引き
起こすと考えられている。〔Jacbsen IA.Pegg DE:Kidne
y.In;Organ preservation for transplantation Karow
AM.Pegg DE（eds）.p556〜558.Marcel Dekker Inc.New
York.1981〕 一方、完全フッ素化有機化合物（パーフルオロカーボ
ン化合物）は、非常に良く酸素を溶解する液体で、乳剤
の型において酸素運搬体として作用する。このパーフル
オロカーボン乳剤を用いて、ナカヤらは、家兎腎を室温
で９時間灌流し、腎の生存力を生化学的手法で検討し
た。〔Proceeding of Symposium on perfluoro−chemic
al artificial blood,Kyoto 1975,187〜201〕また、ベ
ルコウイツらは、アルブミンで安定化したパーフルオロ
カーボン乳剤で腎を灌流し、移植後の成績について検討
した。その結果、腎の生着率はほぼ100％と良好な結果
を得たと報告している。〔J.Surg.Res.20595〜600（197
6）〕 しかしながら、このパーフルオロカーボン乳剤を灌流
液として応用した場合においては、灌流液に十分に酸素
を溶解させるために、メンブランタイプあるいはバブリ
ングタイプ等のオキシジェネターにより灌流液中の酸素
分圧を十分高く維持しながら循環させなければならず装
置が複雑化することが避けられない。また、サウザード
らは、犬腎の低温灌流実験で、灌流液の酸素分圧を高く
すると、血管内皮細胞中のミトコンドリアの機能が低下
することを報告している。〔Southard JH et al:Toxici
ty of oxygen to mitochondrial respiratory activity
in hypothermical perfused canine kidneys.Transpla
ntation 29:459,1980〕従って、パーフルオロカーボン
乳剤を灌流液として応用した場合には、過度の酸素化に
よる障害と、灌流圧による血管の障害が起こる危険性を
有するものであった。
し形態を保っている。しかし、組織が低温状態になると
血管内皮のATPaseの活性が低下するため、エネルギーが
供給されず、Naポンプが働かなくなり、細胞は浮種をお
こす。保存器官が延長するに従い、血管内皮およびその
周辺の浮種は顕著になり、移植後、微少循環障害を引き
起こすと考えられている。〔Jacbsen IA.Pegg DE:Kidne
y.In;Organ preservation for transplantation Karow
AM.Pegg DE（eds）.p556〜558.Marcel Dekker Inc.New
York.1981〕 一方、完全フッ素化有機化合物（パーフルオロカーボ
ン化合物）は、非常に良く酸素を溶解する液体で、乳剤
の型において酸素運搬体として作用する。このパーフル
オロカーボン乳剤を用いて、ナカヤらは、家兎腎を室温
で９時間灌流し、腎の生存力を生化学的手法で検討し
た。〔Proceeding of Symposium on perfluoro−chemic
al artificial blood,Kyoto 1975,187〜201〕また、ベ
ルコウイツらは、アルブミンで安定化したパーフルオロ
カーボン乳剤で腎を灌流し、移植後の成績について検討
した。その結果、腎の生着率はほぼ100％と良好な結果
を得たと報告している。〔J.Surg.Res.20595〜600（197
6）〕 しかしながら、このパーフルオロカーボン乳剤を灌流
液として応用した場合においては、灌流液に十分に酸素
を溶解させるために、メンブランタイプあるいはバブリ
ングタイプ等のオキシジェネターにより灌流液中の酸素
分圧を十分高く維持しながら循環させなければならず装
置が複雑化することが避けられない。また、サウザード
らは、犬腎の低温灌流実験で、灌流液の酸素分圧を高く
すると、血管内皮細胞中のミトコンドリアの機能が低下
することを報告している。〔Southard JH et al:Toxici
ty of oxygen to mitochondrial respiratory activity
in hypothermical perfused canine kidneys.Transpla
ntation 29:459,1980〕従って、パーフルオロカーボン
乳剤を灌流液として応用した場合には、過度の酸素化に
よる障害と、灌流圧による血管の障害が起こる危険性を
有するものであった。
（発明が解決しようとする課題） 従って、本発明は、低温灌流保存法に見られるATPase
活性の低下、パーフルオロカーボン乳剤を応用した場合
における血管障害等の危険性を有さず、しかも、灌流に
よって必要な酸素や栄養を十分に補助することが可能で
ある新規な灌流保存液を提供することを目的とする。
活性の低下、パーフルオロカーボン乳剤を応用した場合
における血管障害等の危険性を有さず、しかも、灌流に
よって必要な酸素や栄養を十分に補助することが可能で
ある新規な灌流保存液を提供することを目的とする。
（課題を解決するための手段） 従って、上記課題を解決する本発明は、内部にヘモグ
ロビンを封入したリポソームを含有してなり、ヘモグロ
ビン濃度が７〜15重量％に調整されたことを特徴とする
移植器官灌流保存液である。
ロビンを封入したリポソームを含有してなり、ヘモグロ
ビン濃度が７〜15重量％に調整されたことを特徴とする
移植器官灌流保存液である。
前記保存液は、膠質浸透圧が25〜35mmHgに調整されて
いることが好ましい。
いることが好ましい。
また、前記保存液を灌流させるにあたっては、35〜38
℃の温度下で行うことが好ましい。
℃の温度下で行うことが好ましい。
以下、本発明を詳細に説明する。
しかして本発明に係る移植器官灌流保存液（以下、単
に保存液という。）は、内部にヘモグロビンを封入した
リポソームを含有してなることを特徴とするものであ
る。
に保存液という。）は、内部にヘモグロビンを封入した
リポソームを含有してなることを特徴とするものであ
る。
内部にヘモグロビンを内包したリポソーム（以下、ヘ
モグロビン内包リポソームという）およびその製造方法
は、既に、特開昭52−151758号、同58−183625号、同61
−37735号、同62−178521号、同63−209746号、同63−2
11230号、同63−275522号、同64−61426号、同64−7541
8号、特開平１−180245号公報に開示されている。
モグロビン内包リポソームという）およびその製造方法
は、既に、特開昭52−151758号、同58−183625号、同61
−37735号、同62−178521号、同63−209746号、同63−2
11230号、同63−275522号、同64−61426号、同64−7541
8号、特開平１−180245号公報に開示されている。
以下、ヘモグロビン内包リポソームについて説明す
る。
る。
リポソーム膜を形成する脂質は特に制限はなく、リポ
ソームを形成するものであれば天然または合成の脂質が
使用可能である。特にリン脂質が好適に使用され、その
例としては、ホスファチジルエタノールアミン、ホスフ
ァチジルセリン、スフィンゴミエリン、ホスファチジル
コリン等に代表されるリン脂質で卵黄、大豆その他の天
然材料に由来するもの、または有機化学的な合成手段に
より得られるものを単独または混合して主成分とするこ
とができる。さらに膜安定化剤としてコレステロール、
コレスタノール等のステロール類や、架電物質としてホ
スファチジン酸、ジセチルホスフェート、高級脂肪酸等
を添加してもよい。
ソームを形成するものであれば天然または合成の脂質が
使用可能である。特にリン脂質が好適に使用され、その
例としては、ホスファチジルエタノールアミン、ホスフ
ァチジルセリン、スフィンゴミエリン、ホスファチジル
コリン等に代表されるリン脂質で卵黄、大豆その他の天
然材料に由来するもの、または有機化学的な合成手段に
より得られるものを単独または混合して主成分とするこ
とができる。さらに膜安定化剤としてコレステロール、
コレスタノール等のステロール類や、架電物質としてホ
スファチジン酸、ジセチルホスフェート、高級脂肪酸等
を添加してもよい。
本発明の保存液においては、そのヘモグロビン濃度が
７〜15％に調整してなることが必要である。このような
値に調整することにより、組織を常温下におくことによ
り代謝が活発になっても、これを補うに十分な酸素を補
助することができる。
７〜15％に調整してなることが必要である。このような
値に調整することにより、組織を常温下におくことによ
り代謝が活発になっても、これを補うに十分な酸素を補
助することができる。
ヘモグロビンを酸素運搬物質として使用しこれを移植
組織灌流保存液に応用する試みとしては、ヘモグロビン
にポリオキシエチレンを結合させた安定化ヘモグロビン
が知られている。［岩崎 敬治、山川 孝、岩下 雄
二：人工臓器 17（２）、704〜707（1988）］ 前述したように、本発明の保存液においては、ヘモグ
ロビンがリポソーム内にカプセル化されてなるため、膠
質浸透圧はヘモグロビン濃度の影響を受けない。従っ
て、ヘモグロビン濃度を７〜15％まで高めることによ
り、常温下においても十分に必要とされる酸素を供給す
ることが可能になる。また、灌流中のメトヘモグロビン
の生成も効率的に抑えられる。
組織灌流保存液に応用する試みとしては、ヘモグロビン
にポリオキシエチレンを結合させた安定化ヘモグロビン
が知られている。［岩崎 敬治、山川 孝、岩下 雄
二：人工臓器 17（２）、704〜707（1988）］ 前述したように、本発明の保存液においては、ヘモグ
ロビンがリポソーム内にカプセル化されてなるため、膠
質浸透圧はヘモグロビン濃度の影響を受けない。従っ
て、ヘモグロビン濃度を７〜15％まで高めることによ
り、常温下においても十分に必要とされる酸素を供給す
ることが可能になる。また、灌流中のメトヘモグロビン
の生成も効率的に抑えられる。
これに対し、ポリオキシエチレン結合ヘモグロビンを
主成分とする保存液を適用した場合には、ヘモグロビン
がカプセル化されていないため、組織が許容する膠質浸
透圧を維持するためには、ヘモグロビン濃度は６重量％
程度が限界であり、常温下で灌流を行うには酵素運搬能
が不十分であるという問題があった。また、この保存液
を常温下で灌流させた場合には、メトヘモグロビン生成
が顕著である（24時間で20％）ことが指摘されており、
従って、この保存液を用いて灌流を行う場合には、組織
をある程度低温下（20℃）において、代謝を抑制する必
要があるものであった。
主成分とする保存液を適用した場合には、ヘモグロビン
がカプセル化されていないため、組織が許容する膠質浸
透圧を維持するためには、ヘモグロビン濃度は６重量％
程度が限界であり、常温下で灌流を行うには酵素運搬能
が不十分であるという問題があった。また、この保存液
を常温下で灌流させた場合には、メトヘモグロビン生成
が顕著である（24時間で20％）ことが指摘されており、
従って、この保存液を用いて灌流を行う場合には、組織
をある程度低温下（20℃）において、代謝を抑制する必
要があるものであった。
リポソーム内部に取り込まれるヘモグロビン溶液の濃
度および粘度は、特に限定されるものではないが、粘度
が10〜3,000cp（４℃）、ヘモグロビン濃度は30〜60％
（w/v）が望ましい。膠質浸透圧が、生体血液の正常な
膠質浸透圧に比べて極端に低すぎる場合には、血管外の
細胞が浮種を起こす虞れがあり、また高すぎる場合に
は、血管外の細胞が脱水状態になる虞れがある。本発明
の保存液は、膠質浸透圧調整剤を添加する等して浸透圧
調整がなされたものであること、具体的には25〜35mmHg
に調整されたものであることが望まれる。
度および粘度は、特に限定されるものではないが、粘度
が10〜3,000cp（４℃）、ヘモグロビン濃度は30〜60％
（w/v）が望ましい。膠質浸透圧が、生体血液の正常な
膠質浸透圧に比べて極端に低すぎる場合には、血管外の
細胞が浮種を起こす虞れがあり、また高すぎる場合に
は、血管外の細胞が脱水状態になる虞れがある。本発明
の保存液は、膠質浸透圧調整剤を添加する等して浸透圧
調整がなされたものであること、具体的には25〜35mmHg
に調整されたものであることが望まれる。
このような膠質浸透圧調整剤としては、アルブミン、
グロブリン等の天然血漿由来の蛋白質、あるいはアカシ
アゴム、修飾ゼラチン、ポリビニルピロリドン、デキス
トラン、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセ
ルロース、ヒドロキシエチルデンプン等の人工的な水溶
性高分子化合物が挙げられる。
グロブリン等の天然血漿由来の蛋白質、あるいはアカシ
アゴム、修飾ゼラチン、ポリビニルピロリドン、デキス
トラン、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセ
ルロース、ヒドロキシエチルデンプン等の人工的な水溶
性高分子化合物が挙げられる。
保存液の粘度としては、ずり速度が383sec-1、温度が
37℃において、天然血液と同等かそれ以下の粘度、すな
わち4.5cp以下に調整されてなることが望ましい。
37℃において、天然血液と同等かそれ以下の粘度、すな
わち4.5cp以下に調整されてなることが望ましい。
また、本発明の人工血液においては、電解質組成は、
リンゲル液、乳酸リンゲル液あるいはコリンズ液等の電
解質溶液を用いて天然血液とほぼ同様の組成に調整され
てなることが好ましい。
リンゲル液、乳酸リンゲル液あるいはコリンズ液等の電
解質溶液を用いて天然血液とほぼ同様の組成に調整され
てなることが好ましい。
次に本発明の保存液の製造方法について説明する。
ヘモグロビン内包リポソームを製造するには、公知の
方法が用いられ得るが、好ましくは、リポソーム膜形成
脂質を凍結乾燥した均一混合粉末に蒸留水を添加し、50
〜80℃に加温して脂質を水和させ、該水和物にヘモグロ
ビン水溶液を加え、５〜10℃で高速撹拌機を用いて混合
物中の懸濁粒子の平均粒径が180〜300nmとなるまで撹拌
することにより達成される。
方法が用いられ得るが、好ましくは、リポソーム膜形成
脂質を凍結乾燥した均一混合粉末に蒸留水を添加し、50
〜80℃に加温して脂質を水和させ、該水和物にヘモグロ
ビン水溶液を加え、５〜10℃で高速撹拌機を用いて混合
物中の懸濁粒子の平均粒径が180〜300nmとなるまで撹拌
することにより達成される。
リポソーム膜形成脂質とヘモグロビン水溶液の混合・
撹拌は、撹拌型細胞破砕機（ワーリングブレンダー）を
用いて懸濁粒子の外径が180〜300nmになるまで撹拌する
ことによって実施される。撹拌は、回転数10,000〜20,0
00rpmで６〜10分間行うことが望ましい。
撹拌は、撹拌型細胞破砕機（ワーリングブレンダー）を
用いて懸濁粒子の外径が180〜300nmになるまで撹拌する
ことによって実施される。撹拌は、回転数10,000〜20,0
00rpmで６〜10分間行うことが望ましい。
このようにして得られたリポソーム懸濁液は、常法に
従って洗浄・濃縮される。
従って洗浄・濃縮される。
洗浄・濃縮されたリポソーム懸濁液には、膠質浸透圧
が25〜35mmHg、ヘモグロビン濃度が７〜15％となるよう
に膠質浸透圧調整剤および電解質溶液が添加・混合さ
れ、本発明の保存液とされる。なお、膠質浸透圧調整剤
は、原料粉末の形状で、リポソームの水懸濁液中に添加
・溶解してもよい。
が25〜35mmHg、ヘモグロビン濃度が７〜15％となるよう
に膠質浸透圧調整剤および電解質溶液が添加・混合さ
れ、本発明の保存液とされる。なお、膠質浸透圧調整剤
は、原料粉末の形状で、リポソームの水懸濁液中に添加
・溶解してもよい。
次に本発明の保存液を用いた移植器官保存法について
説明する。
説明する。
すなわち、臓器提供者より提供された移植臓器は、修
正コリンズ液あるいは乳酸リンゲル液により洗浄された
後、市販の灌流保存装置を用いて本発明の保存液に接続
され、35〜38℃にて所定時間（概ね、24〜72時間）灌流
を行いながら保持される。この際の循環速度は、通常、
10〜200ml/g（腎）／時間とされる。灌流保存は終えた
後は、修正リンゲル液あるいは乳酸リンゲル液により洗
浄され、移植に供される。
正コリンズ液あるいは乳酸リンゲル液により洗浄された
後、市販の灌流保存装置を用いて本発明の保存液に接続
され、35〜38℃にて所定時間（概ね、24〜72時間）灌流
を行いながら保持される。この際の循環速度は、通常、
10〜200ml/g（腎）／時間とされる。灌流保存は終えた
後は、修正リンゲル液あるいは乳酸リンゲル液により洗
浄され、移植に供される。
次に実施例および比較例を示して本発明をさらに具体
的に説明する。
的に説明する。
〔実施例〕 ヘモグロビン内包リポソーム懸濁液の作成 水素添加率90％の精製大豆ホスファチジルコリン、コ
レステロール、ミリスチン酸、ビタミンＥの均一凍結乾
燥粉末〔プレソーム：日本精化株式会社製〕108gに等量
の蒸留水を加えて、60℃60分の水和処理を行った。得ら
れた水和脂質にヘモグロビン濃度50％（w/w）の赤血球
膜除去ヘモグロビン溶液60mlを加え、５℃に冷却しなが
ら高速撹拌機〔アジホモミキサー：特殊機化工業株式会
社製〕を用いて、10.000rpm、60分の撹拌処理を行っ
た。
レステロール、ミリスチン酸、ビタミンＥの均一凍結乾
燥粉末〔プレソーム：日本精化株式会社製〕108gに等量
の蒸留水を加えて、60℃60分の水和処理を行った。得ら
れた水和脂質にヘモグロビン濃度50％（w/w）の赤血球
膜除去ヘモグロビン溶液60mlを加え、５℃に冷却しなが
ら高速撹拌機〔アジホモミキサー：特殊機化工業株式会
社製〕を用いて、10.000rpm、60分の撹拌処理を行っ
た。
得られたリポソーム懸濁液を生理食塩水で10倍に希釈
して、0.45μフィルターを用いて除菌および粒子制御を
行った、濾液を血漿分離器で処理し、リポソームに取り
込まれなかったヘモグロビンおよび微小粒子を除去し
た。濾液にヘモグロビンが検出されなくなるまで生理食
塩水を追加して、循環洗浄を繰り返し、最終的にヘモグ
ロビン濃度が５％となるまで濃縮した。得られたリポソ
ーム懸濁液の容量は1200mlであった。
して、0.45μフィルターを用いて除菌および粒子制御を
行った、濾液を血漿分離器で処理し、リポソームに取り
込まれなかったヘモグロビンおよび微小粒子を除去し
た。濾液にヘモグロビンが検出されなくなるまで生理食
塩水を追加して、循環洗浄を繰り返し、最終的にヘモグ
ロビン濃度が５％となるまで濃縮した。得られたリポソ
ーム懸濁液の容量は1200mlであった。
修正リンゲル液の調整 NaCl6.51g/、MgSO40.4g/、KCl0.8g/、NaHCO30.
24g/、Na2HPO40.14g/、グルコース6.0g/の割合で
蒸留水に溶解し、電解質組成が、Na＝112、Ｋ＝11、Mg
＝７、Cl＝118、HCO＝３、HPO4＝２、SO4＝７、グルコ
ース＝33（各単位はmEq/）である溶液を調整した。
市販のヒドロキシエチルデンプン（サリンヘス：杏林製
薬株式会社製〕をで得られた溶液に溶解せしめ、さら
にこれにで得られた修正リンゲル液を添加して、ヘモ
グロビン濃度15％、ヒドロキシエチルデンプン濃度６％
（w/v）に調整し、灌流液（実施例）を作成した。
24g/、Na2HPO40.14g/、グルコース6.0g/の割合で
蒸留水に溶解し、電解質組成が、Na＝112、Ｋ＝11、Mg
＝７、Cl＝118、HCO＝３、HPO4＝２、SO4＝７、グルコ
ース＝33（各単位はmEq/）である溶液を調整した。
市販のヒドロキシエチルデンプン（サリンヘス：杏林製
薬株式会社製〕をで得られた溶液に溶解せしめ、さら
にこれにで得られた修正リンゲル液を添加して、ヘモ
グロビン濃度15％、ヒドロキシエチルデンプン濃度６％
（w/v）に調整し、灌流液（実施例）を作成した。
得られた灌流液の膠質浸透圧は28mmHg、晶質浸透圧は
290mOsm、粘度は3.2cp（ずり速度383sec-1、温度37℃）
であった。
290mOsm、粘度は3.2cp（ずり速度383sec-1、温度37℃）
であった。
モノメトキシポリオキシエチレンコハク酸モノエステ
ル（平均分子量5000）5g、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミ
ド0.23g、ジシクロヘキシルカルボジイミド0.42gを、30
0mlのN,N−ジメチルホルムアミドに溶解し、室温で一夜
撹拌した。
ル（平均分子量5000）5g、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミ
ド0.23g、ジシクロヘキシルカルボジイミド0.42gを、30
0mlのN,N−ジメチルホルムアミドに溶解し、室温で一夜
撹拌した。
生成したジシクロヘキシル尿素を濾過し、濾液に600m
lのエチルエーテルを加え、生成したモノメトキシポリ
エチレングリコールモノ（サクシイミジルサクシネー
ト）結晶を濾過し、エーテルで洗浄した後乾燥し、4.6g
の白色結晶を得た。ピリドキサールリン酸結合ヘモグロ
ビン0.5gを100mlのホウ酸緩衝液（pH8.5）に溶解した液
に、氷冷下上記活性エステル0.5gを加えた。氷冷下４時
間撹拌した後、分子量阻止３万の限外濾過膜により限外
濾過を繰り返し、未反応の活性エステルまたはその分解
物を除去することにより６％修飾ヘモグロビン溶液（比
較例）5mlを得た。
lのエチルエーテルを加え、生成したモノメトキシポリ
エチレングリコールモノ（サクシイミジルサクシネー
ト）結晶を濾過し、エーテルで洗浄した後乾燥し、4.6g
の白色結晶を得た。ピリドキサールリン酸結合ヘモグロ
ビン0.5gを100mlのホウ酸緩衝液（pH8.5）に溶解した液
に、氷冷下上記活性エステル0.5gを加えた。氷冷下４時
間撹拌した後、分子量阻止３万の限外濾過膜により限外
濾過を繰り返し、未反応の活性エステルまたはその分解
物を除去することにより６％修飾ヘモグロビン溶液（比
較例）5mlを得た。
得られた修飾ヘモグロビン溶液の膠質浸透圧は25mmH
g、晶質浸透圧は290mOsm、粘度は3.2cp（ずり速度383se
c-1、温度37℃）であった。
g、晶質浸透圧は290mOsm、粘度は3.2cp（ずり速度383se
c-1、温度37℃）であった。
［メトヘモグロビン生成実験］ ホロファイバー型人工肺キャピオックスII（テルモ社
製）２個を用い、一方Ａには純酸素を、もう一方のＢに
は5.2％酸素（酸素分圧40mmHg）を200ml/分の速さで流
した。この系において、実施例および比較例の灌流保存
液を37℃において100ml/分の速さで灌流し、メトヘモグ
ロビン比率を可視吸収により経時的に測定した。その結
果、比較例の灌流保存液を灌流した例においては、24時
間で初期値に比べ20％上昇したのに対し、実施例の灌流
保存液を灌流した場合においては、初期値に比べ12％し
か上昇しなかった。
製）２個を用い、一方Ａには純酸素を、もう一方のＢに
は5.2％酸素（酸素分圧40mmHg）を200ml/分の速さで流
した。この系において、実施例および比較例の灌流保存
液を37℃において100ml/分の速さで灌流し、メトヘモグ
ロビン比率を可視吸収により経時的に測定した。その結
果、比較例の灌流保存液を灌流した例においては、24時
間で初期値に比べ20％上昇したのに対し、実施例の灌流
保存液を灌流した場合においては、初期値に比べ12％し
か上昇しなかった。
［移植腎灌流保存実験］ 実施例および比較例の灌流保存液を用いて移植腎灌流
保存実験を行った。実験は次の手順で行った。
保存実験を行った。実験は次の手順で行った。
体重10kgの雑種成犬10匹をペントバルビタールナトリ
ウムを30mg/kgの割合で静注して麻酔し、腹部正中線切
開にて開腹して左腎臓を摘出した。摘出した腎の尿管、
動脈および静脈にカニューレを挿入した後、カニューレ
内に冷修正コリンズ液を導入して洗浄し、次いでカニュ
ーレ内に実施例および比較例の灌流保存液を導入して、
37℃において48時間灌流を行った。
ウムを30mg/kgの割合で静注して麻酔し、腹部正中線切
開にて開腹して左腎臓を摘出した。摘出した腎の尿管、
動脈および静脈にカニューレを挿入した後、カニューレ
内に冷修正コリンズ液を導入して洗浄し、次いでカニュ
ーレ内に実施例および比較例の灌流保存液を導入して、
37℃において48時間灌流を行った。
保存を終えた後、再び修正コリンズ液を用いて洗浄
し、これを大腿部へ自家移植した。さらに、移植１週間
目に対側腎を摘出した。
し、これを大腿部へ自家移植した。さらに、移植１週間
目に対側腎を摘出した。
その後、60日間以上生存したものを生存と判定し、60
日未満の死亡で腎機能不全を伴ったものは、腎保存不良
による死亡と判定した。その結果、実施例の灌流保存液
を用いた例においては、10匹中９匹が生存したのに対
し、比較例の灌流保存液を用いた例においては10匹中４
匹しか生存しなかった。
日未満の死亡で腎機能不全を伴ったものは、腎保存不良
による死亡と判定した。その結果、実施例の灌流保存液
を用いた例においては、10匹中９匹が生存したのに対
し、比較例の灌流保存液を用いた例においては10匹中４
匹しか生存しなかった。
（発明の効果） 以上、詳述したように、本発明の移植器官灌流保存液
は、内部にヘモグロビンを封入したリポソームを含有し
てなり、ヘモグロビン濃度が７〜15重量％に調整された
ことを特徴とするので、低温灌流保存法に見られるATPa
se活性の低下、パーフルオロカーボン乳剤を応用した場
合における血管障害等の危険性を有さず、しかも、灌流
によって必要な酸素や栄養を十分に補助することが可能
である効果を奏する。
は、内部にヘモグロビンを封入したリポソームを含有し
てなり、ヘモグロビン濃度が７〜15重量％に調整された
ことを特徴とするので、低温灌流保存法に見られるATPa
se活性の低下、パーフルオロカーボン乳剤を応用した場
合における血管障害等の危険性を有さず、しかも、灌流
によって必要な酸素や栄養を十分に補助することが可能
である効果を奏する。
Claims (3)
- 【請求項１】内部にヘモグロビンを封入したリポソーム
を含有してなり、ヘモグロビン濃度が７〜15重量％に調
整されたことを特徴とする移植器官灌流保存液。 - 【請求項２】膠質浸透圧が25〜35mmHgに調整されてなる
請求項１記載の移植器官灌流保存液。 - 【請求項３】請求項１または２に記載の移植器官灌流保
存液を35〜38℃の温度下で灌流させることを特徴とする
移植器官灌流保存法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2270423A JP2956998B2 (ja) | 1990-10-11 | 1990-10-11 | 移植器官潅流保存液および移植器官潅流保存法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2270423A JP2956998B2 (ja) | 1990-10-11 | 1990-10-11 | 移植器官潅流保存液および移植器官潅流保存法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04149101A JPH04149101A (ja) | 1992-05-22 |
| JP2956998B2 true JP2956998B2 (ja) | 1999-10-04 |
Family
ID=17486067
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2270423A Expired - Fee Related JP2956998B2 (ja) | 1990-10-11 | 1990-10-11 | 移植器官潅流保存液および移植器官潅流保存法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2956998B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1475434A1 (en) * | 2003-05-09 | 2004-11-10 | Oncoscience AG | Method for storing tumor cells |
| CN104986446A (zh) * | 2015-05-29 | 2015-10-21 | 浙江省医疗器械研究所 | 一种自动化生物低温保存装置 |
| JP2021017423A (ja) * | 2019-07-23 | 2021-02-15 | 株式会社Ｓｃｒｅｅｎホールディングス | 灌流液および灌流方法 |
-
1990
- 1990-10-11 JP JP2270423A patent/JP2956998B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04149101A (ja) | 1992-05-22 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |