JP2891883B2 - 抗白内障医薬組成物 - Google Patents
抗白内障医薬組成物Info
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- JP2891883B2 JP2891883B2 JP6271271A JP27127194A JP2891883B2 JP 2891883 B2 JP2891883 B2 JP 2891883B2 JP 6271271 A JP6271271 A JP 6271271A JP 27127194 A JP27127194 A JP 27127194A JP 2891883 B2 JP2891883 B2 JP 2891883B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗白内障薬として還元
性チオール誘導体およびそれらのジスルフィド誘導体な
らびにスルフィド誘導体から選ばれるラジカル捕捉物質
を含む医薬組成物、それらの製剤化のための微粒子状担
体およびこれを含む医薬製剤に関する。
性チオール誘導体およびそれらのジスルフィド誘導体な
らびにスルフィド誘導体から選ばれるラジカル捕捉物質
を含む医薬組成物、それらの製剤化のための微粒子状担
体およびこれを含む医薬製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】近
年、我が国では、人口の高齢化が進むにつれて老人性白
内障の発症率は、増加傾向にある。白内障の発生や進行
のメカニズムについて、現在まだ完全な解明はなされて
いないが、何らかの原因で水晶体中の生体内酸化防止シ
ステム機能が総体的に低下し、水晶体蛋白質が凝集する
ことによって水晶体が白濁すると一般に認識されてい
る。この酸化防止システムの機能の低下は、(1)白内障
進行過程で生体内抗酸化剤を異常に消費するような反応
系の発生、(2)水晶体の膜の透過の異常により他の水晶
体成分とともに還元性生体成分のうちのグルタチオン
（ＧＳＨ）などの拡散による水晶体外への流出などが考
えられている。また、水晶体の白濁は水晶体中のＮa／
Ｋのイオンバランスの変化およびＣa2+によるイオンバ
ランスの不可逆化なども考えられている。
年、我が国では、人口の高齢化が進むにつれて老人性白
内障の発症率は、増加傾向にある。白内障の発生や進行
のメカニズムについて、現在まだ完全な解明はなされて
いないが、何らかの原因で水晶体中の生体内酸化防止シ
ステム機能が総体的に低下し、水晶体蛋白質が凝集する
ことによって水晶体が白濁すると一般に認識されてい
る。この酸化防止システムの機能の低下は、(1)白内障
進行過程で生体内抗酸化剤を異常に消費するような反応
系の発生、(2)水晶体の膜の透過の異常により他の水晶
体成分とともに還元性生体成分のうちのグルタチオン
（ＧＳＨ）などの拡散による水晶体外への流出などが考
えられている。また、水晶体の白濁は水晶体中のＮa／
Ｋのイオンバランスの変化およびＣa2+によるイオンバ
ランスの不可逆化なども考えられている。
【０００３】一方、糖尿病時に併発する糖尿病性白内障
を対象としたアルドース還元酵素の阻害による抗白内障
薬の開発にはめざましいものがあり、動物実験において
は有効性を見い出す化合物も出現している。しかしなが
ら、強力なアルドース還元酵素阻害剤を用いる臨床実験
においてアメリカ合衆国で死亡例が報告され、この種の
化合物の抗白内障薬としての応用がほとんど停止してい
る事態が生じている。以上述べたように、白内障の発生
および進行のメカニズムが明確に判明していないことと
も相俟って有効な抗白内障薬が存在せず、長年にわたっ
て、抗白内障薬として有効な薬物の開発が期待されてい
た。
を対象としたアルドース還元酵素の阻害による抗白内障
薬の開発にはめざましいものがあり、動物実験において
は有効性を見い出す化合物も出現している。しかしなが
ら、強力なアルドース還元酵素阻害剤を用いる臨床実験
においてアメリカ合衆国で死亡例が報告され、この種の
化合物の抗白内障薬としての応用がほとんど停止してい
る事態が生じている。以上述べたように、白内障の発生
および進行のメカニズムが明確に判明していないことと
も相俟って有効な抗白内障薬が存在せず、長年にわたっ
て、抗白内障薬として有効な薬物の開発が期待されてい
た。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは抗白内障薬
として、酸化防止システム機能の低下を阻害する化合物
を検索してきたが本発明はこれらの過程で得られた知見
に基づいて完成されたものである。本発明の第１は還元
性チオール誘導体またはそれらのジスルフィド誘導体ま
たはスルフィド誘導体から選ばれるラジカル捕捉物質を
提供するものである。ジエチルジチオカルバメート（Ｄ
ＤＣ）は還元性チオール誘導体の１種であり、本発明者
らにより、白内障治療効果が確認された化合物である。
角膜は脂溶性物質は容易に通過させるが、ＤＤＣは水溶
性であるために角膜の通過が困難であり、従って眼房水
中および水晶体中への取り込みがほとんど行われず、バ
イオアベイラビリティが低く、また酸化されやすく不安
定であり薬効を十分には発揮し得ないという欠点があ
る。
として、酸化防止システム機能の低下を阻害する化合物
を検索してきたが本発明はこれらの過程で得られた知見
に基づいて完成されたものである。本発明の第１は還元
性チオール誘導体またはそれらのジスルフィド誘導体ま
たはスルフィド誘導体から選ばれるラジカル捕捉物質を
提供するものである。ジエチルジチオカルバメート（Ｄ
ＤＣ）は還元性チオール誘導体の１種であり、本発明者
らにより、白内障治療効果が確認された化合物である。
角膜は脂溶性物質は容易に通過させるが、ＤＤＣは水溶
性であるために角膜の通過が困難であり、従って眼房水
中および水晶体中への取り込みがほとんど行われず、バ
イオアベイラビリティが低く、また酸化されやすく不安
定であり薬効を十分には発揮し得ないという欠点があ
る。
【０００５】さらに検索を続けるうちに、角膜の通過が
容易であり、脂溶性かつ化学的に安定であるそれらの誘
導体であるジスルフィド化合物およびスルフィド化合物
が抗白内障薬として有効であることが判明した。すなわ
ち、本発明者らは、さらに、バイオアベイラビリティの
高い安定な還元性ＳＨ基を有するラジカル捕捉物質につ
いて白内障治療効果を検討するうちに、米国では禁酒薬
として用いられ投与方法および安全性が確認されている
化合物であり、ＤＤＣの二量体であるＤＳＦ（ジスルフ
ィラム：Disulfiram（bis(diethylthiocarbamyl)disulf
ide））がＤＤＣと比較して格段に高い白内障治療効果
を示すことを知った。
容易であり、脂溶性かつ化学的に安定であるそれらの誘
導体であるジスルフィド化合物およびスルフィド化合物
が抗白内障薬として有効であることが判明した。すなわ
ち、本発明者らは、さらに、バイオアベイラビリティの
高い安定な還元性ＳＨ基を有するラジカル捕捉物質につ
いて白内障治療効果を検討するうちに、米国では禁酒薬
として用いられ投与方法および安全性が確認されている
化合物であり、ＤＤＣの二量体であるＤＳＦ（ジスルフ
ィラム：Disulfiram（bis(diethylthiocarbamyl)disulf
ide））がＤＤＣと比較して格段に高い白内障治療効果
を示すことを知った。
【０００６】ＤＳＦは、(1)脂溶性であるため角膜通過
が容易であること、および、(2)ＤＳＦはアルブミンの
還元的触媒作用により、ＤＳＦは２分子のＤＤＣを生成
し、１分子のＤＤＣはアルブミンのＳＨ基と結合し、１
分子のＤＤＣを遊離することが知られているところか
ら、角膜を通過後、眼房水中および水晶体中のアルブミ
ンにより、ＤＤＣが生成し、還元性ＳＨ基を有するＤＤ
Ｃとして白内障治療効果を示すものと考えられる。
が容易であること、および、(2)ＤＳＦはアルブミンの
還元的触媒作用により、ＤＳＦは２分子のＤＤＣを生成
し、１分子のＤＤＣはアルブミンのＳＨ基と結合し、１
分子のＤＤＣを遊離することが知られているところか
ら、角膜を通過後、眼房水中および水晶体中のアルブミ
ンにより、ＤＤＣが生成し、還元性ＳＨ基を有するＤＤ
Ｃとして白内障治療効果を示すものと考えられる。
【０００７】さらに、本発明の第２は、上記のジスルフ
ィドおよびスルフィド誘導体などの脂溶性抗白内障薬を
製剤化の段階で局所投与に有利な水性の製剤にするため
の微粒子状担体を提供するものである。すなわち、ＤＳ
Ｆは脂溶性であり、角膜の通過は容易であるが、涙液と
混和せず、眼の局所投与剤としては不利であるため、水
性製剤に調製するために微粒子状担体を用いることによ
って効果を高めこの欠点を解決した。
ィドおよびスルフィド誘導体などの脂溶性抗白内障薬を
製剤化の段階で局所投与に有利な水性の製剤にするため
の微粒子状担体を提供するものである。すなわち、ＤＳ
Ｆは脂溶性であり、角膜の通過は容易であるが、涙液と
混和せず、眼の局所投与剤としては不利であるため、水
性製剤に調製するために微粒子状担体を用いることによ
って効果を高めこの欠点を解決した。
【０００８】さらに、本発明の第３は、抗白内障薬を眼
房水中および水晶体に有効に送達するする陽荷電性微粒
子状担体を提供することである。すなわち、角膜が陰性
に荷電していることから、微粒子状担体を陽性荷電物質
で処理し、本発明者らは微粒子の陽性荷電膜のゼータ電
位を測定し、荷電膜が陽性であることを確認した。すな
わち、確実に白内障の治療剤が角膜をターゲットし、眼
房水中および水晶体に送達される、バイオアベイラビリ
ティの高い陽荷電性微粒子状担体を開発したのである。
房水中および水晶体に有効に送達するする陽荷電性微粒
子状担体を提供することである。すなわち、角膜が陰性
に荷電していることから、微粒子状担体を陽性荷電物質
で処理し、本発明者らは微粒子の陽性荷電膜のゼータ電
位を測定し、荷電膜が陽性であることを確認した。すな
わち、確実に白内障の治療剤が角膜をターゲットし、眼
房水中および水晶体に送達される、バイオアベイラビリ
ティの高い陽荷電性微粒子状担体を開発したのである。
【０００９】本発明の第４は、本発明の抗白内障薬を担
持する脂溶性陽性荷電微粒子状担体を含む医薬製剤を提
供するものである。
持する脂溶性陽性荷電微粒子状担体を含む医薬製剤を提
供するものである。
【００１０】「還元性チオール誘導体」とは、例えば、
式：
式：
【化３】 ［式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、同一または異なって、
ヒドロキシ基または低級アルキルオキシ基または低級ア
ルキルカルボニルオキシ基により置換されていてもよ
い、直鎖状または分枝状の低級アルキル基である］で示
される化合物、それらの誘導体および医薬学的に許容さ
れ得るそれらの塩などを挙げることができる。
ヒドロキシ基または低級アルキルオキシ基または低級ア
ルキルカルボニルオキシ基により置換されていてもよ
い、直鎖状または分枝状の低級アルキル基である］で示
される化合物、それらの誘導体および医薬学的に許容さ
れ得るそれらの塩などを挙げることができる。
【００１１】特に、ＤＤＣ（ジエチルチオカルバメー
ト）、１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル−チ
オールおよび１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−テ
トラゾール−５−イル−チオールおよびそれらの医薬学
的に許容され得る塩が好ましい。
ト）、１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル−チ
オールおよび１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−テ
トラゾール−５−イル−チオールおよびそれらの医薬学
的に許容され得る塩が好ましい。
【００１２】「ジスルフィド誘導体」とは、例えば、
【化４】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は上記と同じ意味である］で示さ
れる化合物、それらの誘導体およびそれらの医薬学的に
許容され得る塩を挙げることができる。特に好ましいの
はＤＳＦである。
れる化合物、それらの誘導体およびそれらの医薬学的に
許容され得る塩を挙げることができる。特に好ましいの
はＤＳＦである。
【００１３】「スルフィド誘導体」としては、セファロ
スポリン類と近縁のセファマイシン類をいうセフェム系
化合物を挙げることができ、特に、セファマンドール、
セフォピラゾン、塩酸セフメノキシム、セフメタゾー
ル、セフォテタン、ラタモキセフ、セフブペラゾン、セ
フピラミド、フロモキセフおよびそれらの医薬学的に許
容され得る塩が好ましい。さらに、より好ましくはセフ
メタゾールおよびそれらの塩である。これらの化合物は
１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル−チオール
および１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−テトラゾ
ール−５−イル−チオールの誘導体である。
スポリン類と近縁のセファマイシン類をいうセフェム系
化合物を挙げることができ、特に、セファマンドール、
セフォピラゾン、塩酸セフメノキシム、セフメタゾー
ル、セフォテタン、ラタモキセフ、セフブペラゾン、セ
フピラミド、フロモキセフおよびそれらの医薬学的に許
容され得る塩が好ましい。さらに、より好ましくはセフ
メタゾールおよびそれらの塩である。これらの化合物は
１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル−チオール
および１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−テトラゾ
ール−５−イル−チオールの誘導体である。
【００１４】「ラジカル捕捉物質」とは、活性化学種で
あるラジカルに対して高い反応性をもつ化合物であり、
ラジカルと迅速に反応してラジカルを系から除去し、後
続反応を止める物質である。さらに具体的には、活性酸
素種、例えば、一重項酸素、過酸化水素、スーパーオキ
サイドアニオン、水酸ラジカルなどからラジカルを捕捉
し、それにかかわる酸化反応による連鎖的生体障害を防
御し得る物質である。「処置」とは、白内障の予防およ
び白内障に由来する症状の治療を含む。低級アルキルオ
キシ基、低級アルキルカルボニルオキシ基の「低級アル
キル」とは、飽和の直鎖または分枝状の、炭素原子１〜
６個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個を
含む炭化水素残基をいう。例えばメチル、エチル、プロ
ピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチルなどが含まれ
る。
あるラジカルに対して高い反応性をもつ化合物であり、
ラジカルと迅速に反応してラジカルを系から除去し、後
続反応を止める物質である。さらに具体的には、活性酸
素種、例えば、一重項酸素、過酸化水素、スーパーオキ
サイドアニオン、水酸ラジカルなどからラジカルを捕捉
し、それにかかわる酸化反応による連鎖的生体障害を防
御し得る物質である。「処置」とは、白内障の予防およ
び白内障に由来する症状の治療を含む。低級アルキルオ
キシ基、低級アルキルカルボニルオキシ基の「低級アル
キル」とは、飽和の直鎖または分枝状の、炭素原子１〜
６個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個を
含む炭化水素残基をいう。例えばメチル、エチル、プロ
ピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチルなどが含まれ
る。
【００１５】微粒子状担体としては、リポソーム、エマ
ルジョン、ナノカプセル、アルブミンマイクロスフィア
ーなどを挙げることができる。
ルジョン、ナノカプセル、アルブミンマイクロスフィア
ーなどを挙げることができる。
【００１６】特に、天然由来の脂質を水中に再分散させ
たときに形成されるリポソームは、細胞膜構造を有する
人口細胞モデルとして極めて近似度が高く、組織指向性
薬物運搬体（ドラッグキャリヤー）、人口赤血球、細胞
修飾剤及び酵素固定化基剤等の医薬用材料として生体適
合性がよく、これまでにも医学、薬学の巾広い分野での
利用の可能性が提案されてきている。
たときに形成されるリポソームは、細胞膜構造を有する
人口細胞モデルとして極めて近似度が高く、組織指向性
薬物運搬体（ドラッグキャリヤー）、人口赤血球、細胞
修飾剤及び酵素固定化基剤等の医薬用材料として生体適
合性がよく、これまでにも医学、薬学の巾広い分野での
利用の可能性が提案されてきている。
【００１７】しかしながら、従来のリポソームを上述の
目的に適用したとしても、現実の使用に耐える成果が得
られていないのが現状であった。その理由としては、第
１点に、従来のリポソーム自体は本来非共有結合性相互
作用による天然脂質のアッセンブリー（集合体）である
ため、生体適合性は良好であったとしても、実用化に際
して要求されるリポソーム自体の構造的安定性が欠如す
ること、ならびに第２点としてドラッグキャリヤーとし
て最も重要である特異的目的組織または目的細胞指向性
がほとんど発揮されない、という点が挙げられている。
目的に適用したとしても、現実の使用に耐える成果が得
られていないのが現状であった。その理由としては、第
１点に、従来のリポソーム自体は本来非共有結合性相互
作用による天然脂質のアッセンブリー（集合体）である
ため、生体適合性は良好であったとしても、実用化に際
して要求されるリポソーム自体の構造的安定性が欠如す
ること、ならびに第２点としてドラッグキャリヤーとし
て最も重要である特異的目的組織または目的細胞指向性
がほとんど発揮されない、という点が挙げられている。
【００１８】そのため本発明者らは、これら上述の欠点
を改善すべく検討を加え、リポソームの表面を脂溶性陽
性荷電負荷物質で修飾する処理を行うことにより、生理
的条件下におけるリポソームの機械的強度を向上せし
め、またこのように処理したリポソームを生体に投与し
たときに目的組織を選択的に指向し得る能力が発揮され
ることを見い出した。
を改善すべく検討を加え、リポソームの表面を脂溶性陽
性荷電負荷物質で修飾する処理を行うことにより、生理
的条件下におけるリポソームの機械的強度を向上せし
め、またこのように処理したリポソームを生体に投与し
たときに目的組織を選択的に指向し得る能力が発揮され
ることを見い出した。
【００１９】これまで、リポソームの表面をある種の脂
溶性陽性荷電負荷物質で修飾処理する技術は、基本的に
は可能とされてきたが、経験的に修飾剤の量の添加で行
われてきたのみで、定量的膜荷電の負担と膜透過性の関
係が明確にはされてきていなかった。本発明では脂溶性
陽性荷電負荷物質の添加時における膜荷電及び膜の安定
性についてゼータ電位測定及び示差走査熱量測定による
定量的に検討し、リポソームからの抗白内障薬の最適な
放出制御と角膜透過をなし得る製剤を見いだすことを可
能とした。
溶性陽性荷電負荷物質で修飾処理する技術は、基本的に
は可能とされてきたが、経験的に修飾剤の量の添加で行
われてきたのみで、定量的膜荷電の負担と膜透過性の関
係が明確にはされてきていなかった。本発明では脂溶性
陽性荷電負荷物質の添加時における膜荷電及び膜の安定
性についてゼータ電位測定及び示差走査熱量測定による
定量的に検討し、リポソームからの抗白内障薬の最適な
放出制御と角膜透過をなし得る製剤を見いだすことを可
能とした。
【００２０】すなわち、かかる脂溶性陽性荷電負荷物質
により修飾処理したリポソーム内部に抗白内障薬を封入
してやれば、該リポソーム修飾化合物により陽性荷電を
示し、特異的に角膜指向性と結合性を示し、角膜上でリ
ポソームが滞留し内部の抗白内障薬が徐々に角膜を通し
て、眼内に到達できると共に、角膜及び他の眼組織に対
してほとんど害を及ぼさないことにより、上述の白内障
の有効な治療手段となる。
により修飾処理したリポソーム内部に抗白内障薬を封入
してやれば、該リポソーム修飾化合物により陽性荷電を
示し、特異的に角膜指向性と結合性を示し、角膜上でリ
ポソームが滞留し内部の抗白内障薬が徐々に角膜を通し
て、眼内に到達できると共に、角膜及び他の眼組織に対
してほとんど害を及ぼさないことにより、上述の白内障
の有効な治療手段となる。
【００２１】本発明の微粒子状担体は上記のリポソーム
以外に、医薬製剤化技術として通常用いられるエマルジ
ョン、ナノカプセル、アルブミンマイクロスフィアなど
を用いることができる。
以外に、医薬製剤化技術として通常用いられるエマルジ
ョン、ナノカプセル、アルブミンマイクロスフィアなど
を用いることができる。
【００２２】リポソームの調製法 脂質をクロロホルム、エーテルなどの有機溶媒に溶解し
たのち丸底フラスコに入れ、窒素気流下または減圧下で
有機溶媒を除去し、フラスコ丸底に脂質の薄膜をつく
る。更に、有機溶媒を完全に除くために、減圧下でデシ
ケーター中に放置しておいてもよい。次に、適当な緩衝
液を脂質薄膜上に加え、脂質を水和させると乳濁色のリ
ポソームが得られる。逆相法によるリポソーム調製法
は、リン脂質のエーテル溶液に有効成分である化合物の
溶液を加え、超音波処理するとＷ／Ｏ型エマルジョンが
作成される。このＷ／Ｏ型エマルジョンを減圧下、エバ
ポレーターによりエーテルを除去し、次に緩衝液を加え
ボルテックスミキサーで撹拌するとＷ／Ｏ型エマルジョ
ンに転相し、さらに残留する有機溶媒を除去するとリポ
ソームが作成できる。いずれの場合も、本発明の抗白内
障薬が脂溶性の場合は脂質とともに有機溶媒に溶解し、
水溶性の場合は適当な緩衝液に抗白内障薬を溶解してリ
ポソームを調製する。これらの調製法のほかに、フレン
チプレス法、凍結乾燥法、凍結融解法なども用いること
ができる。
たのち丸底フラスコに入れ、窒素気流下または減圧下で
有機溶媒を除去し、フラスコ丸底に脂質の薄膜をつく
る。更に、有機溶媒を完全に除くために、減圧下でデシ
ケーター中に放置しておいてもよい。次に、適当な緩衝
液を脂質薄膜上に加え、脂質を水和させると乳濁色のリ
ポソームが得られる。逆相法によるリポソーム調製法
は、リン脂質のエーテル溶液に有効成分である化合物の
溶液を加え、超音波処理するとＷ／Ｏ型エマルジョンが
作成される。このＷ／Ｏ型エマルジョンを減圧下、エバ
ポレーターによりエーテルを除去し、次に緩衝液を加え
ボルテックスミキサーで撹拌するとＷ／Ｏ型エマルジョ
ンに転相し、さらに残留する有機溶媒を除去するとリポ
ソームが作成できる。いずれの場合も、本発明の抗白内
障薬が脂溶性の場合は脂質とともに有機溶媒に溶解し、
水溶性の場合は適当な緩衝液に抗白内障薬を溶解してリ
ポソームを調製する。これらの調製法のほかに、フレン
チプレス法、凍結乾燥法、凍結融解法なども用いること
ができる。
【００２３】本発明で提供するリポソーム自体は、従来
公知の方法により製造することができるが、リポソーム
はリン脂質又はリン脂質とコレステロールより構成され
る従来公知のリポソームが使用し得る。かかるリン脂質
としては、卵黄リン脂質例えば卵黄レシチン、大豆リン
脂質例えば大豆レシチンの他に、ホスファチジルコリ
ン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジル
セリン、スフィンゴミエリン、ジセチルリン酸、ステア
リルアミン、ホスファチジルグリセリン、ホスファチジ
ン酸、ホスファチジリルイノシトール等を挙げることが
でき、これらは単独あるいは２種以上の混合物で使用し
得る。なお、本発明のリポソームは少なくとも上述のリ
ン脂質から構成されるが、更に後述する内部に封入する
抗白内障薬の種類、荷電添加する脂溶性荷電化合物のい
かんによりコレステロール等を含有させることがある。
公知の方法により製造することができるが、リポソーム
はリン脂質又はリン脂質とコレステロールより構成され
る従来公知のリポソームが使用し得る。かかるリン脂質
としては、卵黄リン脂質例えば卵黄レシチン、大豆リン
脂質例えば大豆レシチンの他に、ホスファチジルコリ
ン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジル
セリン、スフィンゴミエリン、ジセチルリン酸、ステア
リルアミン、ホスファチジルグリセリン、ホスファチジ
ン酸、ホスファチジリルイノシトール等を挙げることが
でき、これらは単独あるいは２種以上の混合物で使用し
得る。なお、本発明のリポソームは少なくとも上述のリ
ン脂質から構成されるが、更に後述する内部に封入する
抗白内障薬の種類、荷電添加する脂溶性荷電化合物のい
かんによりコレステロール等を含有させることがある。
【００２４】エマルジョンの製造方法 エマルジョンは乳濁液ともいうが、水−油のエマルジョ
ンには水中油滴型（Ｗ／Ｏ）および油中水滴型（Ｏ／
Ｗ）があり、乳化剤の種類を選択することによりどちら
の型も調製できる。撹拌によって一時的にそれぞれの相
が他を微粒状に分散させるが、乳化剤の性質によって一
方の連続相になり、Ｏ／Ｗ型またはＷ／Ｏ型のエマルジ
ョンになる。例えば、Ｗ／Ｏ／Ｗ型の複合型エマルジョ
ンは、二段階乳化法により調製する。すなわち、第１段
階で複合粒子となるＷ／Ｏ型エマルジョンを調製してお
き、これを適当な乳化剤を用いて再度水中に分散させ
る。また、典型的なｗ／ｏ型エマルジョンは約１０(w/
w)％大豆油、０.６〜２.０(w/w)％の卵レシチン（リン
脂質）および十分量の水に溶解した約２.５(w/w)％のグ
リセリンを用いて製造する。乳化剤（卵レシチン）を油
相に溶解し、容器中にて８０℃に加熱し、予め８０℃に
温めておいた湯をこれに添加する。高速自動撹拌機等を
用いて混合する。混合物の温度を容器中での撹拌開始
後、３０分間８０℃に維持する。１００００回転／分で
撹拌を行う。さらに、微粒子状エマルジョンを製造する
ためには、粗粒子状エマルジョンをさらに、４５００ps
i操作の二段階圧ホモジナイザーにかける。得られた分
散物は本発明のエマルジョンとして使用することができ
る。
ンには水中油滴型（Ｗ／Ｏ）および油中水滴型（Ｏ／
Ｗ）があり、乳化剤の種類を選択することによりどちら
の型も調製できる。撹拌によって一時的にそれぞれの相
が他を微粒状に分散させるが、乳化剤の性質によって一
方の連続相になり、Ｏ／Ｗ型またはＷ／Ｏ型のエマルジ
ョンになる。例えば、Ｗ／Ｏ／Ｗ型の複合型エマルジョ
ンは、二段階乳化法により調製する。すなわち、第１段
階で複合粒子となるＷ／Ｏ型エマルジョンを調製してお
き、これを適当な乳化剤を用いて再度水中に分散させ
る。また、典型的なｗ／ｏ型エマルジョンは約１０(w/
w)％大豆油、０.６〜２.０(w/w)％の卵レシチン（リン
脂質）および十分量の水に溶解した約２.５(w/w)％のグ
リセリンを用いて製造する。乳化剤（卵レシチン）を油
相に溶解し、容器中にて８０℃に加熱し、予め８０℃に
温めておいた湯をこれに添加する。高速自動撹拌機等を
用いて混合する。混合物の温度を容器中での撹拌開始
後、３０分間８０℃に維持する。１００００回転／分で
撹拌を行う。さらに、微粒子状エマルジョンを製造する
ためには、粗粒子状エマルジョンをさらに、４５００ps
i操作の二段階圧ホモジナイザーにかける。得られた分
散物は本発明のエマルジョンとして使用することができ
る。
【００２５】マイクロカプセルの製造方法 薬物の微粒子を芯物質としてその表面を高分子物質によ
って被覆した粒子系をマイクロカプセルという。マイク
ロカプセルの製造方法には、コアセルベーション法、界
面重合法などで調製される。コアセルベーション法は、
例えば、被覆物質の溶液に芯物質を分散し、被覆物質の
コアセルベーションを起こさせる。ついで、芯物質の表
面にコアセルベートを凝縮させ、ついで、凝縮したコア
セルベートを硬化させる。被覆物質には、エチルセルロ
ース、ポリ乳酸、ポリビニルアセテート、ゼラチン、デ
ンプンなどが用いられる。
って被覆した粒子系をマイクロカプセルという。マイク
ロカプセルの製造方法には、コアセルベーション法、界
面重合法などで調製される。コアセルベーション法は、
例えば、被覆物質の溶液に芯物質を分散し、被覆物質の
コアセルベーションを起こさせる。ついで、芯物質の表
面にコアセルベートを凝縮させ、ついで、凝縮したコア
セルベートを硬化させる。被覆物質には、エチルセルロ
ース、ポリ乳酸、ポリビニルアセテート、ゼラチン、デ
ンプンなどが用いられる。
【００２６】マイクロスフィアーの製造方法 マイクロカプセルが１種のコーティングであるのに対し
て、マイクロスフィアーは高分子担体に溶解状態または
微結晶として分散している粒子系をいう。基本的には、
アルブミン水溶液（この中に薬物を溶解またはけんだく
させる）を綿実油または有機溶媒とでＷ／Ｏ型エマルジ
ョンとし、加熱変化、化学的架橋、液中乾燥、放射線重
合などによって固化させて調製する。担体として生体内
分解性の材料である、アルブミン、ゼラチン、デキスト
ラン、ポリ乳酸、ポリエチレンカーボネートなどと非分
解性のポリスチレン、アガロース、ポリアクリルアミド
などがある。界面活性剤の使用によって、０.３〜５０
０μｍの大きさまで変化させることが可能である。
て、マイクロスフィアーは高分子担体に溶解状態または
微結晶として分散している粒子系をいう。基本的には、
アルブミン水溶液（この中に薬物を溶解またはけんだく
させる）を綿実油または有機溶媒とでＷ／Ｏ型エマルジ
ョンとし、加熱変化、化学的架橋、液中乾燥、放射線重
合などによって固化させて調製する。担体として生体内
分解性の材料である、アルブミン、ゼラチン、デキスト
ラン、ポリ乳酸、ポリエチレンカーボネートなどと非分
解性のポリスチレン、アガロース、ポリアクリルアミド
などがある。界面活性剤の使用によって、０.３〜５０
０μｍの大きさまで変化させることが可能である。
【００２７】ナノカプセルの製造方法 粒子がナノメーターのサイズのものをいう。マイクロカ
プセルと同様にコアセルベーション法とミセル重合法な
どがある。高分子材料として、アルブミン、ゼラチン、
アルキルシアノアクリレートなどが用いられる。
プセルと同様にコアセルベーション法とミセル重合法な
どがある。高分子材料として、アルブミン、ゼラチン、
アルキルシアノアクリレートなどが用いられる。
【００２８】微粒子状担体の脂溶性陽性荷電処理方法 微粒子状担体を形成する脂質を溶解する有機溶媒に脂溶
性陽性荷電負荷物質を添加し、微粒子を調製すると同時
に表面荷電処理を行う。
性陽性荷電負荷物質を添加し、微粒子を調製すると同時
に表面荷電処理を行う。
【００２９】本発明で用いる脂溶性陽性荷電負荷物質と
しては、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、ジメチル
ジアルキル（炭素数８〜１８）アンモニウムブロミド
（ＤＣ−１−８〜１８）、Ｎ−メチル−Ｎ−（β−ヒド
ロキシエチル）−ジドデシルアンモニウムブロミド（Ｄ
Ｃ−２−１２）、Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセ
チル）−ジドデシル−Ｌ−グルタメートクロリド（ＤＣ
−３−１２Ｌ）、Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセ
チル）−ジドデシル−Ｄ−グルタメートクロリド（ＤＣ
−３−１２Ｄ）、Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセ
チル）−Ｏ，Ｏ’−ビス−（１Ｈ，１Ｈ，２Ｈ，２Ｈ−
パーフルオロドデシル）−Ｌ−グルタメートクロリド
（ＤＣ−５−８Ｆ２Ｌ）など、およびカチオン界面活性
剤であるアミン塩として、例えば、アルキルアミン塩、
ポリアミンおよびアルカノールアミン脂肪酸誘導体、ア
ルキル四級アンモニウム塩として、例えば、アルキルト
リメチルアンモニウム塩、ジアルキルジトリメチルアン
モニウム塩、アルキルジメチルベンジルアンモニウム
塩、環式四級アンモニウム塩として、例えば、アルキル
ピリジニウム塩、アルキルイソキノリニウム塩、芳香族
アンモニウム塩として、例えば、塩化ベンゼトニウム
塩、含窒素型界面活性剤である、例えば、ポリオキシエ
チレン脂肪酸アミド、ポリオキシエチレンアルキルアミ
ン、アルキロールアミド、アルキルアミンオキシドなど
を挙げることができる。脂溶性陽性荷電負荷物質は、微
粒子の総担体成分、例えば、脂質成分に対して、１〜３
０モル％、好ましくは、３〜２０％、最も好ましくは、
５〜１５％添加する。
しては、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、ジメチル
ジアルキル（炭素数８〜１８）アンモニウムブロミド
（ＤＣ−１−８〜１８）、Ｎ−メチル−Ｎ−（β−ヒド
ロキシエチル）−ジドデシルアンモニウムブロミド（Ｄ
Ｃ−２−１２）、Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセ
チル）−ジドデシル−Ｌ−グルタメートクロリド（ＤＣ
−３−１２Ｌ）、Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセ
チル）−ジドデシル−Ｄ−グルタメートクロリド（ＤＣ
−３−１２Ｄ）、Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセ
チル）−Ｏ，Ｏ’−ビス−（１Ｈ，１Ｈ，２Ｈ，２Ｈ−
パーフルオロドデシル）−Ｌ−グルタメートクロリド
（ＤＣ−５−８Ｆ２Ｌ）など、およびカチオン界面活性
剤であるアミン塩として、例えば、アルキルアミン塩、
ポリアミンおよびアルカノールアミン脂肪酸誘導体、ア
ルキル四級アンモニウム塩として、例えば、アルキルト
リメチルアンモニウム塩、ジアルキルジトリメチルアン
モニウム塩、アルキルジメチルベンジルアンモニウム
塩、環式四級アンモニウム塩として、例えば、アルキル
ピリジニウム塩、アルキルイソキノリニウム塩、芳香族
アンモニウム塩として、例えば、塩化ベンゼトニウム
塩、含窒素型界面活性剤である、例えば、ポリオキシエ
チレン脂肪酸アミド、ポリオキシエチレンアルキルアミ
ン、アルキロールアミド、アルキルアミンオキシドなど
を挙げることができる。脂溶性陽性荷電負荷物質は、微
粒子の総担体成分、例えば、脂質成分に対して、１〜３
０モル％、好ましくは、３〜２０％、最も好ましくは、
５〜１５％添加する。
【００３０】上記の方法に従って調製した本発明の抗白
内障薬を含む脂溶性陽性荷電負荷微粒子状担体は通常の
製剤技術により、水性点眼剤、水性懸濁点眼剤、非水性
点眼剤、非水性懸濁点眼剤、眼軟膏剤に調製することが
できる。１回当たりの投与量は、白内障の症状の重さ、
患者の年令などによって変化するが、本発明に用いられ
る薬物の毒性が非常に低いことから、特に制限はない
が、１μｇ〜１ｍｇである。また１日当たりの投与量は
１μｇ〜５０ｍｇである。
内障薬を含む脂溶性陽性荷電負荷微粒子状担体は通常の
製剤技術により、水性点眼剤、水性懸濁点眼剤、非水性
点眼剤、非水性懸濁点眼剤、眼軟膏剤に調製することが
できる。１回当たりの投与量は、白内障の症状の重さ、
患者の年令などによって変化するが、本発明に用いられ
る薬物の毒性が非常に低いことから、特に制限はない
が、１μｇ〜１ｍｇである。また１日当たりの投与量は
１μｇ〜５０ｍｇである。
【００３１】
実施例１ ＤＳＦ含有リポソームの調製法 逆相溶媒蒸発法を一部修正した方法を用いた。すなわ
ち、ジクロロメタン１０mlにＤＳＦ１０mg、ＤＰＰＣ
（ジパルミトイルホスファチジルコリン）、ＤＭＰＣ
（ジミリストイルホスファチジルコリン）およびＣＰＣ
（セチルピリジニウムクロリド）を溶解させ溶媒相とし
た。この溶媒相と、緩衝液(Ａ:ヒンド−ゴーヤン緩衝液
pＨ６．５、Ｂ:ギフォード緩衝液 pＨ８．０)１０ml
を三頸フラスコに入れ、窒素気流中で浴槽型ソニケータ
ーにより１０分間超音波処理を行った。次に２０分間撹
拌し、乳剤とした後、３０分間アスピレーターで減圧
し、ジクロロメタンを除去した。調製温度は３７℃で行
った。このようにして調製したリポソームを１.０、０.
６、０.２、０.１μmの異なる４種のポアサイズを有す
るメンブランフィルターを装着したエクストルーダーに
それぞれ１０回ずつ通し、粒子径の均一な一重線リポソ
ーム(平均粒子径約８０nm)とした。 セフメタゾン含有リポソームの調製 ＤＳＦをセフメタゾンに代替して実施例１同様にしてセ
フメタゾン含有リポソームを調製した。
ち、ジクロロメタン１０mlにＤＳＦ１０mg、ＤＰＰＣ
（ジパルミトイルホスファチジルコリン）、ＤＭＰＣ
（ジミリストイルホスファチジルコリン）およびＣＰＣ
（セチルピリジニウムクロリド）を溶解させ溶媒相とし
た。この溶媒相と、緩衝液(Ａ:ヒンド−ゴーヤン緩衝液
pＨ６．５、Ｂ:ギフォード緩衝液 pＨ８．０)１０ml
を三頸フラスコに入れ、窒素気流中で浴槽型ソニケータ
ーにより１０分間超音波処理を行った。次に２０分間撹
拌し、乳剤とした後、３０分間アスピレーターで減圧
し、ジクロロメタンを除去した。調製温度は３７℃で行
った。このようにして調製したリポソームを１.０、０.
６、０.２、０.１μmの異なる４種のポアサイズを有す
るメンブランフィルターを装着したエクストルーダーに
それぞれ１０回ずつ通し、粒子径の均一な一重線リポソ
ーム(平均粒子径約８０nm)とした。 セフメタゾン含有リポソームの調製 ＤＳＦをセフメタゾンに代替して実施例１同様にしてセ
フメタゾン含有リポソームを調製した。
【００３２】ＤＳＦ含有リポソームの封入率測定 リポソーム中のＤＳＦ濃度は、前述の調製法により得ら
れたリポソーム標品にメタノールを加え、脂質膜を破壊
したものに内標溶液を加えてＨＰＬＣ法により測定し
た。また、リポソームを緩衝液(Ａ：ヒンド−ゴーヤン
緩衝液 pＨ６.５Ｂ：ギフォード緩衝液 pＨ８.０)で
５倍希釈したものをセントリザルトＩを用いて限外ろ過
し、得られたリポソーム外液に内標を加え、ＨＰＬＣ法
により外液中の薬物濃度を測定した。外液に薬物を検出
しないことを確認し、リポソーム調製時に添加したＤＳ
Ｆ量を１００％として封入率を算出した。
れたリポソーム標品にメタノールを加え、脂質膜を破壊
したものに内標溶液を加えてＨＰＬＣ法により測定し
た。また、リポソームを緩衝液(Ａ：ヒンド−ゴーヤン
緩衝液 pＨ６.５Ｂ：ギフォード緩衝液 pＨ８.０)で
５倍希釈したものをセントリザルトＩを用いて限外ろ過
し、得られたリポソーム外液に内標を加え、ＨＰＬＣ法
により外液中の薬物濃度を測定した。外液に薬物を検出
しないことを確認し、リポソーム調製時に添加したＤＳ
Ｆ量を１００％として封入率を算出した。
【００３３】ＤＳＦ含量リポソームの封入率 リポソームは表１に示す相転移温度の異なる脂質組成
で、リポソーム外液pＨを６.５、８.０として合計５種
の標品を調製した。いずれのリポソームも封入率は約９
０％以上と良好であった。また、リポソーム外液に薬物
は検出されなかった。
で、リポソーム外液pＨを６.５、８.０として合計５種
の標品を調製した。いずれのリポソームも封入率は約９
０％以上と良好であった。また、リポソーム外液に薬物
は検出されなかった。
【００３４】ＤＳＦ含有リポソーム膜ゼータ電位測定 ゼータ電位測定には米国ペン・ケム(PEN KEM)社製レー
ザー回転プリズム方式ゼータ電位測定装置ラザー・ジー
・メーター(LAZAR ZEE METER)型５０１を使用した。試
料にリポソームをリン酸カリウム緩衝液(５mＭ Ｋ2Ｈ
ＰＯ4、５mＭＫＨ2ＰＯ4 pＨ６.５)で１５０倍希釈し
たものを用い、電圧１５０Ｖで測定した。温度変化によ
るゼータ電位の補正は次のようにして行った。 ゼータ電位(補正値)＝ゼータ電位(測定値)×(１−０.０
２Ｔ) Ｔ：測定温度−２０℃
ザー回転プリズム方式ゼータ電位測定装置ラザー・ジー
・メーター(LAZAR ZEE METER)型５０１を使用した。試
料にリポソームをリン酸カリウム緩衝液(５mＭ Ｋ2Ｈ
ＰＯ4、５mＭＫＨ2ＰＯ4 pＨ６.５)で１５０倍希釈し
たものを用い、電圧１５０Ｖで測定した。温度変化によ
るゼータ電位の補正は次のようにして行った。 ゼータ電位(補正値)＝ゼータ電位(測定値)×(１−０.０
２Ｔ) Ｔ：測定温度−２０℃
【００３５】ＤＳＦ含量リポソーム膜ゼータ電位測定結
果 ＣＰＣはリポソームの保持効率や膜透過性の向上を図る
ため、膜に正荷電を与えることを目的として加えたが、
ゼータ電位測定結果より、脂質に対して１モル比のＣＰ
Ｃを添加したリポソーム膜は正荷電(４０〜５０mＶ)を
持ち、無添加のものは負荷電(約−１３mＶ)を持つこと
がわかった。
果 ＣＰＣはリポソームの保持効率や膜透過性の向上を図る
ため、膜に正荷電を与えることを目的として加えたが、
ゼータ電位測定結果より、脂質に対して１モル比のＣＰ
Ｃを添加したリポソーム膜は正荷電(４０〜５０mＶ)を
持ち、無添加のものは負荷電(約−１３mＶ)を持つこと
がわかった。
【表１】
【００３６】ＤＳＦ含有リポソームからのＤＤＣの放出
試験 リポソームを緩衝液((1)ギフォード緩衝液 pＨ８.０、
(2)ギフォード緩衝液pＨ６.５)で２.５倍希釈したもの
と、同じ緩衝液でウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)を溶解し
た液を０.２５mlずつ混合し、０〜６時間、３５℃で加
温したのち氷冷する。セントリザルトＩを用いて限外ろ
過を行い、内標を加えてＨＰＬＣ法によりＤＤＣ放出量
を測定した。
試験 リポソームを緩衝液((1)ギフォード緩衝液 pＨ８.０、
(2)ギフォード緩衝液pＨ６.５)で２.５倍希釈したもの
と、同じ緩衝液でウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)を溶解し
た液を０.２５mlずつ混合し、０〜６時間、３５℃で加
温したのち氷冷する。セントリザルトＩを用いて限外ろ
過を行い、内標を加えてＨＰＬＣ法によりＤＤＣ放出量
を測定した。
【００３７】 ＤＳＦ含量リポソームからのＤＤＣの放出性 (1) ＤＰＰＣ／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ(２／８／１) リポソーム外液：ギフォード緩衝液、pＨ８.０ 図１にリポソーム外液をpＨ８.０にした場合のＤＤＣ放
出量を示した。pＨ９.５の場合と比べ、放出量は減少し
たが、ＤＰＰＣ／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ(２／８／１)および
(５／５／１)の両リポソームともに３.５％ ＢＳＡ添
加の場合のＤＤＣ放出量が最高値を示した。
出量を示した。pＨ９.５の場合と比べ、放出量は減少し
たが、ＤＰＰＣ／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ(２／８／１)および
(５／５／１)の両リポソームともに３.５％ ＢＳＡ添
加の場合のＤＤＣ放出量が最高値を示した。
【００３８】 (2) ＤＰＰＣ／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ(２／８／１) リポソーム外液：ヒンド−ゴーヤン緩衝液、pＨ６.５ リポソーム外液をpＨ６.５にした場合の放出試験を行っ
た結果、ＤＤＣの放出は認められなかった。ＢＳＡ溶液
は１.０、１.７５、３.５％の３種類の濃度のものを使
用した。
た結果、ＤＤＣの放出は認められなかった。ＢＳＡ溶液
は１.０、１.７５、３.５％の３種類の濃度のものを使
用した。
【００３９】イン・ビトロ角膜透過試験 体重約２.０kgの雄性白色家兎に、致死量のペントバル
ビタール注射液を耳静脈より注入することにより安楽死
させた後、眼球を注意して取り出し、角膜部分を強膜の
１〜２mmを残して傷つけないように摘出した。この角膜
を図２に示すようなアクリル樹脂製角膜透過セルに装着
し、房水側には等張のＨＥＰＥＳ緩衝液(１０mＭ ＨＥ
ＰＥＳ、１３６.２mＭ ＮaＣl、５.３mＭ ＫＣl、１.
０mＭＫ2ＨＰＯ4、１.７mＭ ＣaＣl2・２Ｈ2Ｏ、５.５
mＭ ブドウ糖 pＨ７.４)、涙液側にはＤＳＦリポソー
ム・ＢＳＡ混合液を加え、角膜表面温度である３５℃で
加温した。実験開始から６時間後まで経時的に５０μl
ずつ房水側液を採取し、ＨＰＬＣ法により透過薬物量を
測定した。
ビタール注射液を耳静脈より注入することにより安楽死
させた後、眼球を注意して取り出し、角膜部分を強膜の
１〜２mmを残して傷つけないように摘出した。この角膜
を図２に示すようなアクリル樹脂製角膜透過セルに装着
し、房水側には等張のＨＥＰＥＳ緩衝液(１０mＭ ＨＥ
ＰＥＳ、１３６.２mＭ ＮaＣl、５.３mＭ ＫＣl、１.
０mＭＫ2ＨＰＯ4、１.７mＭ ＣaＣl2・２Ｈ2Ｏ、５.５
mＭ ブドウ糖 pＨ７.４)、涙液側にはＤＳＦリポソー
ム・ＢＳＡ混合液を加え、角膜表面温度である３５℃で
加温した。実験開始から６時間後まで経時的に５０μl
ずつ房水側液を採取し、ＨＰＬＣ法により透過薬物量を
測定した。
【００４０】イン・ビトロ角膜透過試験結果 (1) ＤＰＰＣ／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ(２／８／１) リポソーム外液：ギフォード緩衝液、pＨ８.０ リポソーム外液をpＨ８.０とし、脂質組成ＤＰＰＣ／Ｄ
ＭＰＣ／ＣＰＣ(２／８／１)のリポソームを用いた場合
の角膜透過量を図３に示す。外液に１.７５％ＢＳＡを
添加した場合と、無添加の場合について試験したが、両
者とも同等のＤＤＣの透過が認められ、これはＤＰＰＣ
／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ(５／５／１)の透過量と比較すると
約２倍の量であった。
ＭＰＣ／ＣＰＣ(２／８／１)のリポソームを用いた場合
の角膜透過量を図３に示す。外液に１.７５％ＢＳＡを
添加した場合と、無添加の場合について試験したが、両
者とも同等のＤＤＣの透過が認められ、これはＤＰＰＣ
／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ(５／５／１)の透過量と比較すると
約２倍の量であった。
【００４１】 (2) ＤＰＰＣ／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ(２／８／１) リポソーム外液：ヒンド−ゴーヤン緩衝液、pＨ６.５ 図４にリポソーム外液をpＨ６.５とした場合のＤＤＣの
角膜透過量を示す。１.７５％ ＢＳＡを添加したもの
と無添加のものについて試験を行った。ＢＳＡの有無に
関わらずＤＤＣの角膜透過が認められたが、pＨ８.０の
場合の１／２程度まで透過量が低下した。
角膜透過量を示す。１.７５％ ＢＳＡを添加したもの
と無添加のものについて試験を行った。ＢＳＡの有無に
関わらずＤＤＣの角膜透過が認められたが、pＨ８.０の
場合の１／２程度まで透過量が低下した。
【００４２】実施例２ 乳酸−グリコール酸共重合ポリマーを用いたＤＳＦマイ
クロスフェアーの調製方法 ＬＧＡ−７５１５(乳酸−グリコール酸共重合ポリマ
ー、和光純薬）８５０mg、ＤＳＦ１００mg、塩化セチル
ピリジニウム(ＣＰＣ)５０ｍgを２.５mlの塩化メチレン
に溶解し、１リッターの三頚フラスコに蓄えた０.５％
ポリビニルアルコール(ＰＶＡ）１５０ml中に全量を添
加する。溶液の温度を２５℃に保ちながら、テフロン回
転子を用いて５００rpmの回転速度で２時間撹拌する。
上記の溶液を水流ポンプを用いて２時間減圧し、塩化メ
チレンを除去する。このようにして調製したマイクロス
フェアーは２９７、１７７、７５μmの網目を持った篩
を通過させ、得られたろ液中のマイクロスフェアーをガ
ラスフィルター(１７Ｇ４）により集める。ガラスフィ
ルター上のマイクロスフェアーは精製水にてＰＶＡが完
全に除去されるまで洗浄する。ガラスフィルター上に集
められたマイクロスフェアーはデシケーター中で減圧下
乾燥する。このようにして調製されたマイクロスフェア
ー中のＤＳＦの封入率は約９０％であった。また、この
マイクロスフェアーの粒子径は約１μmであった。
クロスフェアーの調製方法 ＬＧＡ−７５１５(乳酸−グリコール酸共重合ポリマ
ー、和光純薬）８５０mg、ＤＳＦ１００mg、塩化セチル
ピリジニウム(ＣＰＣ)５０ｍgを２.５mlの塩化メチレン
に溶解し、１リッターの三頚フラスコに蓄えた０.５％
ポリビニルアルコール(ＰＶＡ）１５０ml中に全量を添
加する。溶液の温度を２５℃に保ちながら、テフロン回
転子を用いて５００rpmの回転速度で２時間撹拌する。
上記の溶液を水流ポンプを用いて２時間減圧し、塩化メ
チレンを除去する。このようにして調製したマイクロス
フェアーは２９７、１７７、７５μmの網目を持った篩
を通過させ、得られたろ液中のマイクロスフェアーをガ
ラスフィルター(１７Ｇ４）により集める。ガラスフィ
ルター上のマイクロスフェアーは精製水にてＰＶＡが完
全に除去されるまで洗浄する。ガラスフィルター上に集
められたマイクロスフェアーはデシケーター中で減圧下
乾燥する。このようにして調製されたマイクロスフェア
ー中のＤＳＦの封入率は約９０％であった。また、この
マイクロスフェアーの粒子径は約１μmであった。
【００４３】実施例３ ＤＳＦ含有アルブミン・マイクロスフェアーの調製方法 ウシ血清アルブミン２５０mgを精製水１mlに溶解し、こ
こへＤＳＦ２５０mgを懸濁させる。次にこのアルブミン
−ＤＳＦ懸濁液をスパン８５を１０％(ｖ／ｖ）含む綿
実油中(１００ml）に加え、ガラススタラーで回転速度
２５０rpm、１０分間撹拌後、超音波発生装置(島津ＵＳ
Ｐ−６００）を用いて乳化(１００ｗ、３０分間）し、
油中水型(Ｗ／Ｏ型）のマイクロエマルジョンとする。
これを１００℃のグリセリン油浴中に添加しマイクロス
フェアーとする。以後、エーテル等の有機溶媒を使って
油分を除去し、デシケーター中で減圧乾燥する。このよ
うにして調製されたマイクロスフェアー中のＤＳＦの封
入率は約９５％であった。このＤＳＦ含有アルブミン・
マイクロスフェアーの粒子径範囲は０.６〜１.５μmで
あり、平均粒子径は約１μmであった。
こへＤＳＦ２５０mgを懸濁させる。次にこのアルブミン
−ＤＳＦ懸濁液をスパン８５を１０％(ｖ／ｖ）含む綿
実油中(１００ml）に加え、ガラススタラーで回転速度
２５０rpm、１０分間撹拌後、超音波発生装置(島津ＵＳ
Ｐ−６００）を用いて乳化(１００ｗ、３０分間）し、
油中水型(Ｗ／Ｏ型）のマイクロエマルジョンとする。
これを１００℃のグリセリン油浴中に添加しマイクロス
フェアーとする。以後、エーテル等の有機溶媒を使って
油分を除去し、デシケーター中で減圧乾燥する。このよ
うにして調製されたマイクロスフェアー中のＤＳＦの封
入率は約９５％であった。このＤＳＦ含有アルブミン・
マイクロスフェアーの粒子径範囲は０.６〜１.５μmで
あり、平均粒子径は約１μmであった。
【００４４】実施例４ 製剤例 実施例１で製造されたＤＳＦ封入リポソームはそのまま
で水性分散製剤として使用が可能であるが、必要に応じ
て保存剤、等張化剤などの通常用いられる添加剤を加え
点眼用の製剤にする。
で水性分散製剤として使用が可能であるが、必要に応じ
て保存剤、等張化剤などの通常用いられる添加剤を加え
点眼用の製剤にする。
【００４５】イン・ビトロ白内障惹起及び水晶体中ＧＳ
Ｈ測定による抗白内障薬活性試験 (1) 試験法 ５〜６週齢のddＹ系マウス(雄性)の頸部を脱臼させて安
楽死させた後、眼球から水晶体を実体顕微鏡下で摘出
後、Ｄ−ＭＥＭ(低ブドウ糖)培地で３７℃、２時間予備
加温した。その後、無傷の水晶体を実体顕微鏡下で選別
し、１mＭのダイアミド(diamide)を含むブドウ糖無添加
のＨＥＰＥＳ緩衝液(組成：１０mＭ ＨＥＰＥＳ、１３
８.８５mＭ ＮaＣl、５.４mＭ ＫＣl、１mＭ Ｋ2Ｈ
ＰＯ4、１.７mＭ ＣaＣl2 ２Ｈ2Ｏ pＨ７.４ ３７
℃)３ml中で３７℃、１.５時間加温により白内障を誘発
させ、薬物効果を見るために、１mＭのグルタチオンイ
ソプロピルエステル(ＧＥ)またはＤＤＣ−Ｎaを含むＨ
ＥＰＥＳ緩衝液(組成：１０mＭ ＨＥＰＥＳ、１３６.
２mＭ ＮaＣl、５.３mＭ ＫＣl、１.０mＭ Ｋ2ＨＰ
Ｏ4、１.７mＭ ＣaＣl2・２Ｈ2Ｏ、５.５mＭ ブドウ
糖 pＨ７.４)３ml中で３７℃、５時間加温する群と、
白内障の進行を見るためにＨＥＰＥＳ緩衝液３ml中で３
７℃、５時間加温する群(ダイアミド(＋)群)とに分けて
処理を行った。対照群は、ブドウ糖無添加のＨＥＰＥＳ
緩衝液３ml中で３７℃、１.５時間加温、その後ＨＥＰ
ＥＳ緩衝液３ml中で３７℃、５時間加温した(ダイアミ
ド(−)群)。ここまで処理された水晶体の全てについて
湿潤重量を測定した。
Ｈ測定による抗白内障薬活性試験 (1) 試験法 ５〜６週齢のddＹ系マウス(雄性)の頸部を脱臼させて安
楽死させた後、眼球から水晶体を実体顕微鏡下で摘出
後、Ｄ−ＭＥＭ(低ブドウ糖)培地で３７℃、２時間予備
加温した。その後、無傷の水晶体を実体顕微鏡下で選別
し、１mＭのダイアミド(diamide)を含むブドウ糖無添加
のＨＥＰＥＳ緩衝液(組成：１０mＭ ＨＥＰＥＳ、１３
８.８５mＭ ＮaＣl、５.４mＭ ＫＣl、１mＭ Ｋ2Ｈ
ＰＯ4、１.７mＭ ＣaＣl2 ２Ｈ2Ｏ pＨ７.４ ３７
℃)３ml中で３７℃、１.５時間加温により白内障を誘発
させ、薬物効果を見るために、１mＭのグルタチオンイ
ソプロピルエステル(ＧＥ)またはＤＤＣ−Ｎaを含むＨ
ＥＰＥＳ緩衝液(組成：１０mＭ ＨＥＰＥＳ、１３６.
２mＭ ＮaＣl、５.３mＭ ＫＣl、１.０mＭ Ｋ2ＨＰ
Ｏ4、１.７mＭ ＣaＣl2・２Ｈ2Ｏ、５.５mＭ ブドウ
糖 pＨ７.４)３ml中で３７℃、５時間加温する群と、
白内障の進行を見るためにＨＥＰＥＳ緩衝液３ml中で３
７℃、５時間加温する群(ダイアミド(＋)群)とに分けて
処理を行った。対照群は、ブドウ糖無添加のＨＥＰＥＳ
緩衝液３ml中で３７℃、１.５時間加温、その後ＨＥＰ
ＥＳ緩衝液３ml中で３７℃、５時間加温した(ダイアミ
ド(−)群)。ここまで処理された水晶体の全てについて
湿潤重量を測定した。
【００４６】(2) 水晶体中ＧＳＨの定量 Ａ．ＤＴＮＢ法 処理した水晶体及び精製水０.５mlを加えテフロンホモ
ゲナイザーでホモゲナイズした。このホモジネイト１０
０μlをサンプルチューブに入れ、更にメタリン酸溶液
１５０μlを加え５分間放置後、１２０００×gで１５分
間低温遠心分離を行い、その上清２００μlに０.３Ｍ
Ｎa2ＨＰＯ4液８００μl、ＤＴＮＢ液(ＤＴＮＢは、ビ
ュトラー（BEUTLER）によって提唱され、試薬自体水溶
性で扱い易く、再良性も良い。ＤＴＮＢの存在下、還元
グルタチオンは酸化型グルタチオンとなり、一方ＤＴＮ
Ｂは、定量的に還元され、４１２nmに吸収をもつ色素と
なる)を１００μl加え、水晶体中のＧＳＨ量を定量し
た。定量は、島津製作所ＵＶ−２２００吸光度計を用い
て、吸収波長４１２nmで行った。検量線はＧＳＨ標準品
であるＧＳＨを精製水で希釈し、濃度０〜１００μg／m
lの範囲で作成した。試料は検量線の濃度範囲になるよ
うにし定量を行った。水晶体１個あたりのＧＳＨ量は次
式により求めた)。 水晶体中ＧＳＨ量(μg／レンズ)＝(412nmの吸光度値／
検量線の傾き)×０.５
ゲナイザーでホモゲナイズした。このホモジネイト１０
０μlをサンプルチューブに入れ、更にメタリン酸溶液
１５０μlを加え５分間放置後、１２０００×gで１５分
間低温遠心分離を行い、その上清２００μlに０.３Ｍ
Ｎa2ＨＰＯ4液８００μl、ＤＴＮＢ液(ＤＴＮＢは、ビ
ュトラー（BEUTLER）によって提唱され、試薬自体水溶
性で扱い易く、再良性も良い。ＤＴＮＢの存在下、還元
グルタチオンは酸化型グルタチオンとなり、一方ＤＴＮ
Ｂは、定量的に還元され、４１２nmに吸収をもつ色素と
なる)を１００μl加え、水晶体中のＧＳＨ量を定量し
た。定量は、島津製作所ＵＶ−２２００吸光度計を用い
て、吸収波長４１２nmで行った。検量線はＧＳＨ標準品
であるＧＳＨを精製水で希釈し、濃度０〜１００μg／m
lの範囲で作成した。試料は検量線の濃度範囲になるよ
うにし定量を行った。水晶体１個あたりのＧＳＨ量は次
式により求めた)。 水晶体中ＧＳＨ量(μg／レンズ)＝(412nmの吸光度値／
検量線の傾き)×０.５
【００４７】 Ｂ．高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ法) 本測定法の概略を以下に示す。イン・ビトロ法で白内障
惹起した水晶体及び精製水をラットでは１ml、マウスで
は０.５mlを加え、テフロンホモゲナイザーでホモゲナ
イズした。このホモジネイト５０μlに内標１００μlを
加え１２０００×g、１５分間低温遠心分離を行い、上
清をポアーサイズ０.４５μmのクロマトディスク４Ｎで
ろ過後、ＨＰＬＣで定量した、ＨＰＬＣ装置は島津製作
所ＬＣ−１０ＡＤに可視紫外部検出器ＳＰＤ−１０Ａを
接続しデータ処理にＣ−Ｒ５Ａを用いた。移動相として
０.１％ＴＦＡを含む５％メタノールを用い検出波長は
２１０nm、流速は１.０ml／分で行った。カードカラム
を接続した分離カラムは、メルク(Ｍerk)社スーパース
フェア(Ｓuperspher)１００ＲＰ−１８(４μm、４.０×
２５０mm)を用いた。内部標準物質として１００μg／ml
パントテン酸ナトリウムのメタノール溶液を調製し、採
取液：内標を１：２の割合で混合したものを１０μlＨ
ＰＬＣに注入して定量を行った。検量線の作成は試料と
同じ条件で１０−５００μg／mlの濃度範囲で行った。
これより得られた検量線の傾きからＧＳＨ量を算出し
た。ＨＰＬＣ法では、水晶体標品、ＧＳＨ標準品ともに
ピークがきれいに分離していることより、正確で安定し
た測定が可能であった。
惹起した水晶体及び精製水をラットでは１ml、マウスで
は０.５mlを加え、テフロンホモゲナイザーでホモゲナ
イズした。このホモジネイト５０μlに内標１００μlを
加え１２０００×g、１５分間低温遠心分離を行い、上
清をポアーサイズ０.４５μmのクロマトディスク４Ｎで
ろ過後、ＨＰＬＣで定量した、ＨＰＬＣ装置は島津製作
所ＬＣ−１０ＡＤに可視紫外部検出器ＳＰＤ−１０Ａを
接続しデータ処理にＣ−Ｒ５Ａを用いた。移動相として
０.１％ＴＦＡを含む５％メタノールを用い検出波長は
２１０nm、流速は１.０ml／分で行った。カードカラム
を接続した分離カラムは、メルク(Ｍerk)社スーパース
フェア(Ｓuperspher)１００ＲＰ−１８(４μm、４.０×
２５０mm)を用いた。内部標準物質として１００μg／ml
パントテン酸ナトリウムのメタノール溶液を調製し、採
取液：内標を１：２の割合で混合したものを１０μlＨ
ＰＬＣに注入して定量を行った。検量線の作成は試料と
同じ条件で１０−５００μg／mlの濃度範囲で行った。
これより得られた検量線の傾きからＧＳＨ量を算出し
た。ＨＰＬＣ法では、水晶体標品、ＧＳＨ標準品ともに
ピークがきれいに分離していることより、正確で安定し
た測定が可能であった。
【００４８】 (3) 水晶体中ＧＳＨ測定における抗白内障薬活性効果 ＤＴＮＢ法による水晶体中のＧＳＨ量を表２と図５で示
す。
す。
【表２】 ＤＴＮＢ法による水晶体中ＧＳＨ量 水晶体１個当たりのＧＳＨ量(μg／レンス゛) 偏差 ダイアミド(−) １０.３ ０.５ ダイアミド(＋) ７.６ ０.３ １mＭ ＧＥ １０.３ ０.８ １mＭ ＤＤＣ−Ｎa ９.８ ０.８ ダイアミド(−)とダイアミド(＋)を比較すると、１０.
３±０.５μg／レンズ、７.６±０.３μg／レンズと減
少が認められた。１mＭ ＧＥ、ＤＤＣ−Ｎaの処理によ
り、それぞれ１０.３±０.８μg／レンズ、９.８±０.
８μg／レンズとなり、ダイアミド(−)の値まで回復し
ている。
３±０.５μg／レンズ、７.６±０.３μg／レンズと減
少が認められた。１mＭ ＧＥ、ＤＤＣ−Ｎaの処理によ
り、それぞれ１０.３±０.８μg／レンズ、９.８±０.
８μg／レンズとなり、ダイアミド(−)の値まで回復し
ている。
【００４９】ＨＰＬＣ法による水晶体中のＧＳＨ量を表
３と図５で示す。
３と図５で示す。
【表３】 ＨＰＬＣ法による水晶体中ＧＳＨ量 水晶体１個当たりのＧＳＨ量(μg／レンス゛) 偏差 ダイアミド(−) ４.４ ０.３ ダイアミド(＋) ３.１ ０.２ １mＭ ＧＥ ４.０ ０.２ １mＭ ＤＤＣ−Ｎa ３.９ ０.４ ダイアミド(−)とダイアミド(＋)を比較すると、４.４
±０.３μg／レンズ、３.１±０.２μg／レンズと減少
が認められた。有意に水晶体混濁が誘発されていること
が明らかである。１mＭ ＧＥまたはＤＤＣ−Ｎaの処理
により、それぞれ４.０±０.２μg／レンズ、３.９±
０.４μg／レンズとなり、ダイアミド(−)の値まで回復
している。
±０.３μg／レンズ、３.１±０.２μg／レンズと減少
が認められた。有意に水晶体混濁が誘発されていること
が明らかである。１mＭ ＧＥまたはＤＤＣ−Ｎaの処理
により、それぞれ４.０±０.２μg／レンズ、３.９±
０.４μg／レンズとなり、ダイアミド(−)の値まで回復
している。
【００５０】イン・ビトロ白内障治療実験におけるマウ
ス摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比およびＣa2＋含量の変化によ
る抗白内障薬活性試験 (1) 試験法 ５週齢のddＹ系マウスの水晶体を実体顕微鏡下で摘出
後、２４穴組織培養用カルスター(24-WELL TISSUE CULT
URE CLUSTERS)に個々に分け入れ、低ブドウ糖のＤ−Ｍ
ＥＭ培地で３７℃、１８−２０時間、ＣＯ2インキュベ
ーター中で予備加温する。その後水晶体に懸濁を認めな
いものを選び出して１mＭ ダイアミドのＨＥＰＥＳ(ブ
ドウ糖無添加)緩衝液３ml中で３７℃、１.５時間加温し
白内障を誘発させた。薬物の治療効果を見るために１m
Ｍ治療薬のＨＥＰＥＳ(ブドウ糖添加（１０mＭ ＨＥＰ
ＥＳ、１３６.２mＭ ＮaＣl、５.３mＭ ＫＣl、１.０
mＭＫ2ＨＰＯ4、１.７mＭ ＣaＣl2・２Ｈ2Ｏ、５.５m
Ｍ ブドウ糖、pＨ７.４）緩衝液３ml中で、一方、白内
障の進行を見るためにＨＥＰＥＳ(ブドウ糖添加)緩衝液
３ml内で３７℃、５時間加温した。これをダイアミド
(＋)とする。コントロール群の処理はダイアミド(−)と
した。ここまで処理された水晶体全ての湿潤重量を測定
後、真空乾燥器を用いて、１００℃で７時間以上減圧乾
燥し、乾燥重量を測定する。６０％硝酸１００μlを加
え、水晶体が溶解するまで８０℃、約２０分灰化後、精
製水１mlを加えて３０００×gで１０分間遠心分離し、
その上清を２００μl分取し、精製水３mlを加えてＮa−
Ｋ測定用サンプルとする。上清の残り全量に塩化ランタ
ン１００μlを加え、３０００×gで１０分間遠心分離し
た上清をＣa測定用サンプルとした。
ス摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比およびＣa2＋含量の変化によ
る抗白内障薬活性試験 (1) 試験法 ５週齢のddＹ系マウスの水晶体を実体顕微鏡下で摘出
後、２４穴組織培養用カルスター(24-WELL TISSUE CULT
URE CLUSTERS)に個々に分け入れ、低ブドウ糖のＤ−Ｍ
ＥＭ培地で３７℃、１８−２０時間、ＣＯ2インキュベ
ーター中で予備加温する。その後水晶体に懸濁を認めな
いものを選び出して１mＭ ダイアミドのＨＥＰＥＳ(ブ
ドウ糖無添加)緩衝液３ml中で３７℃、１.５時間加温し
白内障を誘発させた。薬物の治療効果を見るために１m
Ｍ治療薬のＨＥＰＥＳ(ブドウ糖添加（１０mＭ ＨＥＰ
ＥＳ、１３６.２mＭ ＮaＣl、５.３mＭ ＫＣl、１.０
mＭＫ2ＨＰＯ4、１.７mＭ ＣaＣl2・２Ｈ2Ｏ、５.５m
Ｍ ブドウ糖、pＨ７.４）緩衝液３ml中で、一方、白内
障の進行を見るためにＨＥＰＥＳ(ブドウ糖添加)緩衝液
３ml内で３７℃、５時間加温した。これをダイアミド
(＋)とする。コントロール群の処理はダイアミド(−)と
した。ここまで処理された水晶体全ての湿潤重量を測定
後、真空乾燥器を用いて、１００℃で７時間以上減圧乾
燥し、乾燥重量を測定する。６０％硝酸１００μlを加
え、水晶体が溶解するまで８０℃、約２０分灰化後、精
製水１mlを加えて３０００×gで１０分間遠心分離し、
その上清を２００μl分取し、精製水３mlを加えてＮa−
Ｋ測定用サンプルとする。上清の残り全量に塩化ランタ
ン１００μlを加え、３０００×gで１０分間遠心分離し
た上清をＣa測定用サンプルとした。
【００５１】 (2) Ｃ．Ｎa、Ｋ及びＣaイオンの原子吸光測定法 Ｎa、Ｋ及びＣaイオン含量の定量は、日立１８０−８０
型原子吸光測定装置により測定した。 原子吸光測定条件 Ｎa Ｋ Ｃa ランプ電流 １０mＡ １０mＡ １０mＡ 波長 ５８９.０nm ７６６.５nm ４２２.７nm スリット ０.４nm ２.６nm ２.６nm バーナーヘッド 標準形 標準形 標準形 バーナー高さ ７.５mm ７.５mm １２.５mm フレーム 空気-アセチレン 空気-アセチレン 空気-アセチレン 助燃ガス圧力 １.６kg/cm2 １.６kg/cm2 １.６kg/cm2 燃料ガス圧力 ０.２５kg/cm2 ０.３kg/cm2 ０.４kg/cm2
型原子吸光測定装置により測定した。 原子吸光測定条件 Ｎa Ｋ Ｃa ランプ電流 １０mＡ １０mＡ １０mＡ 波長 ５８９.０nm ７６６.５nm ４２２.７nm スリット ０.４nm ２.６nm ２.６nm バーナーヘッド 標準形 標準形 標準形 バーナー高さ ７.５mm ７.５mm １２.５mm フレーム 空気-アセチレン 空気-アセチレン 空気-アセチレン 助燃ガス圧力 １.６kg/cm2 １.６kg/cm2 １.６kg/cm2 燃料ガス圧力 ０.２５kg/cm2 ０.３kg/cm2 ０.４kg/cm2
【００５２】検量線の作成はＮa標準品、Ｋ標準品、６
０％硝酸に精製水を加え、Ｎa−Ｋ原液とし希釈してＮa
濃度：０〜２.５μg、Ｋ濃度：０〜５μgの範囲となる
ように作成した。またＣaも同様にしてＣa原液とし、希
釈し塩化ランタン１００μlを加えＣa濃度：０〜２５μ
gの範囲で作成した。水晶体中のＮa、Ｋ及びＣa量は次
の式により求めた。 水晶体中のイオン量＝（吸光度／検量線の傾き）×（１
１００／２００）÷ 原子量 ÷ 水分含量 ここで示す水分含量は、湿潤重量から乾燥重量を引くこ
とによって得られる水晶体の水分量のことである。
０％硝酸に精製水を加え、Ｎa−Ｋ原液とし希釈してＮa
濃度：０〜２.５μg、Ｋ濃度：０〜５μgの範囲となる
ように作成した。またＣaも同様にしてＣa原液とし、希
釈し塩化ランタン１００μlを加えＣa濃度：０〜２５μ
gの範囲で作成した。水晶体中のＮa、Ｋ及びＣa量は次
の式により求めた。 水晶体中のイオン量＝（吸光度／検量線の傾き）×（１
１００／２００）÷ 原子量 ÷ 水分含量 ここで示す水分含量は、湿潤重量から乾燥重量を引くこ
とによって得られる水晶体の水分量のことである。
【００５３】イン・ビトロ白内障治療実験におけるマウ
ス摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比およびＣa2＋含量の変化によ
る抗白内障薬活性効果 ダイアミド処理後マウス摘出水晶体を用いたイン・ビト
ロ白内障治療実験の結果をＮa／Ｋ比として表４および
図６に示す。
ス摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比およびＣa2＋含量の変化によ
る抗白内障薬活性効果 ダイアミド処理後マウス摘出水晶体を用いたイン・ビト
ロ白内障治療実験の結果をＮa／Ｋ比として表４および
図６に示す。
【表４】 水晶体中のＮa、ＫおよびＣa量とＮa／Ｋ比 Ｎa Ｋ Ｃa Ｎa／Ｋ比 ダイアミド(−) 22.03±3.39 95.90±3.49 1.20±0.27 0.23±0.04 ダイアミド(＋) 60.38±13.49 61.29±13.78 1.98±0.27 1.11±0.04 DDC-Na 36.56±4.38 86.25±4.02 1.09±0.33 0.43±0.07 GE 51.60±9.57 79.67±8.63 1.39±0.30 0.67±0.20 CMZ 40.59±10.16 84.91±10.06 1.11±0.36 0.50±0.19
【００５４】ダイアミド(−)は細胞内Ｎa／Ｋ比と同様
の値を示し、０.２３±０.０４mmol／kg Ｈ2Ｏとな
り、白内障が誘発されたダイアミド(＋)では１.１１±
０.５６mmol／kg Ｈ2Ｏまで増加した。治療薬物はＳＨ
基を有するＧＥ、ＣＭＺそしてＤＳＦの還元体であるＤ
ＤＣ−Ｎaの３種の薬物と、比較物質として強力な還元
作用を有するＤＴＴ（ジチオスレイトール）を用いた。
この薬物処理はいずれも、ダイアミド(＋)に比較し有意
にＮa／Ｋ比が低値を示し、特に、ＤＤＣ−Ｎaで顕著な
治療効果が認められ、０.４３±０.０７mmol／kg Ｈ2
Ｏとコントロール値に近づき、続いてＣＭＺ、ＤＴＴ、
ＧＥの順に効果が認められた。
の値を示し、０.２３±０.０４mmol／kg Ｈ2Ｏとな
り、白内障が誘発されたダイアミド(＋)では１.１１±
０.５６mmol／kg Ｈ2Ｏまで増加した。治療薬物はＳＨ
基を有するＧＥ、ＣＭＺそしてＤＳＦの還元体であるＤ
ＤＣ−Ｎaの３種の薬物と、比較物質として強力な還元
作用を有するＤＴＴ（ジチオスレイトール）を用いた。
この薬物処理はいずれも、ダイアミド(＋)に比較し有意
にＮa／Ｋ比が低値を示し、特に、ＤＤＣ−Ｎaで顕著な
治療効果が認められ、０.４３±０.０７mmol／kg Ｈ2
Ｏとコントロール値に近づき、続いてＣＭＺ、ＤＴＴ、
ＧＥの順に効果が認められた。
【００５５】図７はＣaイオンの挙動について調べた結
果を示した。ダイアミド(−)で１.２０±０.２７mmol／
kg Ｈ2Ｏ、ダイアミド(＋)では１.９８±１.００mmol
／kgＨ2ＯまでＣa含量が増加した。このＣa含量に対し
てもＤＤＣ−Ｎaは最も優れた低下作用を示し、またＤ
ＤＣ−Ｎaに次いでＣＭＺにおいても有意なＣaイオン低
下作用が認められた。一方、他の２種の薬物でもＣaイ
オン低下作用を示したが、有意な差が認められなかっ
た。
果を示した。ダイアミド(−)で１.２０±０.２７mmol／
kg Ｈ2Ｏ、ダイアミド(＋)では１.９８±１.００mmol
／kgＨ2ＯまでＣa含量が増加した。このＣa含量に対し
てもＤＤＣ−Ｎaは最も優れた低下作用を示し、またＤ
ＤＣ−Ｎaに次いでＣＭＺにおいても有意なＣaイオン低
下作用が認められた。一方、他の２種の薬物でもＣaイ
オン低下作用を示したが、有意な差が認められなかっ
た。
【００５６】アルドースレダクターゼ(ＡＲ)阻害による
抗白内障薬活性試験 (1) 試験法 ラットの水晶体を摘出し重量を測り、これに２０倍量の
５mＭリン酸ナトリウム緩衝液（５mＭ ＮaＨ2ＰＯ4・
２Ｈ2Ｏを２００ml、５mＭ Ｎa2ＨＰＯ4、ｐＨ７.４）
を加えホモジナイズし、１８０００×gで５分間遠心分
離し上清とする。これに７６０g／l(１００％飽和)硫安
を加えて３０〜７５％飽和硫安画分を集め、最終的に
３.２Ｍ硫安に懸濁させＡＲ酵素液(約４５単位／ml)と
する。反応系濃度は１.０ml中当たりに０.１Ｍ ＮaＨ2
ＰＯ4緩衝液(pＨ６.２)、０.４ＭＮＨ4ＳＯ4、１０mＭ
ＤＬ−グリセルアルデヒド、０.１６mＭ ＮＡＤＰ
Ｈ、ＡＲ酵素液を含有した。このため試薬は０.８Ｍ(Ｎ
Ｈ4)2ＳＯ4含む０.２Ｍ ＮaＨ2ＰＯ4(pＨ６.２)、１０
０mＭ ＤＬ−グリセルアルデヒド(精製水で溶解)、１.
６mＭ ＮＡＤＰＨ(５mＭリン酸ナトリウム緩衝液で溶
解)、ＡＲ酵素液を用意した。ＡＲ酵素液の濃度はＮＡ
ＤＰＨのモル吸光度係数が６２２０ Ｏ.Ｄ.／Ｍである
ことから、０.０６２５〜０.１ Ｏ.Ｄ.／分の範囲にな
るように５mＭリン酸ナトリウム緩衝液で希釈し、コン
トロールをとって調整した。
抗白内障薬活性試験 (1) 試験法 ラットの水晶体を摘出し重量を測り、これに２０倍量の
５mＭリン酸ナトリウム緩衝液（５mＭ ＮaＨ2ＰＯ4・
２Ｈ2Ｏを２００ml、５mＭ Ｎa2ＨＰＯ4、ｐＨ７.４）
を加えホモジナイズし、１８０００×gで５分間遠心分
離し上清とする。これに７６０g／l(１００％飽和)硫安
を加えて３０〜７５％飽和硫安画分を集め、最終的に
３.２Ｍ硫安に懸濁させＡＲ酵素液(約４５単位／ml)と
する。反応系濃度は１.０ml中当たりに０.１Ｍ ＮaＨ2
ＰＯ4緩衝液(pＨ６.２)、０.４ＭＮＨ4ＳＯ4、１０mＭ
ＤＬ−グリセルアルデヒド、０.１６mＭ ＮＡＤＰ
Ｈ、ＡＲ酵素液を含有した。このため試薬は０.８Ｍ(Ｎ
Ｈ4)2ＳＯ4含む０.２Ｍ ＮaＨ2ＰＯ4(pＨ６.２)、１０
０mＭ ＤＬ−グリセルアルデヒド(精製水で溶解)、１.
６mＭ ＮＡＤＰＨ(５mＭリン酸ナトリウム緩衝液で溶
解)、ＡＲ酵素液を用意した。ＡＲ酵素液の濃度はＮＡ
ＤＰＨのモル吸光度係数が６２２０ Ｏ.Ｄ.／Ｍである
ことから、０.０６２５〜０.１ Ｏ.Ｄ.／分の範囲にな
るように５mＭリン酸ナトリウム緩衝液で希釈し、コン
トロールをとって調整した。
【００５７】(2) ＮＡＤＰＨの吸光度測定法 ＮＡＤＰＨの減少する速度を吸収波長３４０nmで島津自
記分光光度計ＵＶ−２２００を用いて行った。測定条件
は、次に示すとおりである。 時間におけるパラメーター 測定モード：ＡＢＳ サンプリングピッチ(デルタt)：自動(０.５秒) 波長：３４０.０nm スリット幅：２.０ｎｍ 測定時間：３００秒 石英セル（１.０ml)に、０.８Ｍ(ＮＨ4)2ＳＯ4を含む
０.２Ｍ ＮaＨ2ＰＯ4(pＨ６.２)緩衝液０.５ml、ＡＲ
酵素液０.１ml、１.６mＭまたは２mＭ ＮＡＤＰＨ溶液
０.１ml、精製水０.１ml、５％ＤＭＳＯまたは精製水
０.１ml、１００mＭＤＬ−グリセルアルデヒド溶液０.
１mlの順に加えすばやく攪拌し測定した。これをコント
ロールとし、検索薬物はクエルシトリン、ＤＳＦは５％
ＤＭＳＯ、他の薬物は精製水に溶解し、濃度をかえて測
定した。この時恒温槽を用いて３０℃に保ち、５分間反
応を見る。
記分光光度計ＵＶ−２２００を用いて行った。測定条件
は、次に示すとおりである。 時間におけるパラメーター 測定モード：ＡＢＳ サンプリングピッチ(デルタt)：自動(０.５秒) 波長：３４０.０nm スリット幅：２.０ｎｍ 測定時間：３００秒 石英セル（１.０ml)に、０.８Ｍ(ＮＨ4)2ＳＯ4を含む
０.２Ｍ ＮaＨ2ＰＯ4(pＨ６.２)緩衝液０.５ml、ＡＲ
酵素液０.１ml、１.６mＭまたは２mＭ ＮＡＤＰＨ溶液
０.１ml、精製水０.１ml、５％ＤＭＳＯまたは精製水
０.１ml、１００mＭＤＬ−グリセルアルデヒド溶液０.
１mlの順に加えすばやく攪拌し測定した。これをコント
ロールとし、検索薬物はクエルシトリン、ＤＳＦは５％
ＤＭＳＯ、他の薬物は精製水に溶解し、濃度をかえて測
定した。この時恒温槽を用いて３０℃に保ち、５分間反
応を見る。
【００５８】(3) アルドースレダクターゼ(ＡＲ)阻害
活性効果 ＡＲ阻害実験を行った全薬物と測定濃度範囲は表５に示
す通りである。強力なＡＲ阻害活性を認めた薬物の阻害
プロファイルを図８に示す。縦軸に阻害％、横軸に薬物
濃度μＭを取り、それぞれの薬物についてプロットし、
このグラフから５０％阻害に値する濃度を求め、ＩＣ50
として表した。クエルシトリンをＡＲ阻害剤の基準化合
物とし、ピレノキシンは現在使用されている点眼薬成分
で比較物質として用いた。Ｓ−ＳまたはＳＨ基を有する
薬物ではＤＳＦ＞ＣＭＺ＞ＧＥの順で強力なＡＲ阻害活
性を示した。フルスルチアミンからＧＳＳＧのＳ−Ｓお
よびＳＨ化合物においては上記の薬物ほど顕著な阻害活
性は認められず、また塩酸チアミンおよびグルタチオン
チオールエステルであるＳ−メチルグルタチオンからＳ
−(n−プロピル)グルタチオンまでは阻害活性が認めら
れなかった。
活性効果 ＡＲ阻害実験を行った全薬物と測定濃度範囲は表５に示
す通りである。強力なＡＲ阻害活性を認めた薬物の阻害
プロファイルを図８に示す。縦軸に阻害％、横軸に薬物
濃度μＭを取り、それぞれの薬物についてプロットし、
このグラフから５０％阻害に値する濃度を求め、ＩＣ50
として表した。クエルシトリンをＡＲ阻害剤の基準化合
物とし、ピレノキシンは現在使用されている点眼薬成分
で比較物質として用いた。Ｓ−ＳまたはＳＨ基を有する
薬物ではＤＳＦ＞ＣＭＺ＞ＧＥの順で強力なＡＲ阻害活
性を示した。フルスルチアミンからＧＳＳＧのＳ−Ｓお
よびＳＨ化合物においては上記の薬物ほど顕著な阻害活
性は認められず、また塩酸チアミンおよびグルタチオン
チオールエステルであるＳ−メチルグルタチオンからＳ
−(n−プロピル)グルタチオンまでは阻害活性が認めら
れなかった。
【表５】
【００５９】イン・ビボにおけるジスルフィラム封入リ
ポソームの抗白内障活性試験 実施例１において調製したジスルフィラム（テトラエチ
ルチウラム＝ジスルフィド：ＤＳＦ）封入リポソームを
用いて、Ｘ線照射および亜セレン酸により人工的に惹起
された白内障に対する有効性の判定を行った。Ｘ線照射
により惹起された白内障は老人性白内障に病態が似てお
り、亜セレン酸による白内障は３週齢以前の幼若ラット
にのみ惹起される白内障である。 しかし、下記の結果に示されるように、亜セレン酸によ
る白内障ではＧＳＨの低下、Ｃａ量の増加が起こり、核
白内障が発症した。老人性白内障においてもＧＳＨ量の
低下、Ｃａ量の増加がみられるところから、老人性白内
障の動物実験モデルの１つとして使用が可能である。有
効性の判定には水晶体中のＮa／Ｋ比、Ｃa量、ＧＳＨ量
の測定と共に、前眼部画像診断装置ＥＡＳ−１０００
（ニデック社製）により撮影された画像を定量化するこ
とにより、動物を殺生せずに経時的に白内障進行状態の
判定を行った。
ポソームの抗白内障活性試験 実施例１において調製したジスルフィラム（テトラエチ
ルチウラム＝ジスルフィド：ＤＳＦ）封入リポソームを
用いて、Ｘ線照射および亜セレン酸により人工的に惹起
された白内障に対する有効性の判定を行った。Ｘ線照射
により惹起された白内障は老人性白内障に病態が似てお
り、亜セレン酸による白内障は３週齢以前の幼若ラット
にのみ惹起される白内障である。 しかし、下記の結果に示されるように、亜セレン酸によ
る白内障ではＧＳＨの低下、Ｃａ量の増加が起こり、核
白内障が発症した。老人性白内障においてもＧＳＨ量の
低下、Ｃａ量の増加がみられるところから、老人性白内
障の動物実験モデルの１つとして使用が可能である。有
効性の判定には水晶体中のＮa／Ｋ比、Ｃa量、ＧＳＨ量
の測定と共に、前眼部画像診断装置ＥＡＳ−１０００
（ニデック社製）により撮影された画像を定量化するこ
とにより、動物を殺生せずに経時的に白内障進行状態の
判定を行った。
【００６０】 Ｘ線照射による白内障惹起及び種々の薬物投与試験 (1) 白内障惹起方法 ９週齢（雄性）ＢＮラットをうつ伏せに固定し、１０Ｇ
yのＸ線を頭部に照射した。この時、全身へのＸ線障害
を防ぐ目的で頭部以外を鉛製の衣で覆った。
yのＸ線を頭部に照射した。この時、全身へのＸ線障害
を防ぐ目的で頭部以外を鉛製の衣で覆った。
【００６１】(2) 画像診断 (i) 投与法及び画像診断法 (1)で処理のラットを用いてＤＳＦ（１００mg/dl）懸濁
液、ＤＤＣ−Ｎa（Ｎ，Ｎジエチルジチオカルバミン酸
ナトリウム）（１００mg／dl）溶液、ＧＥ（グルタチオ
ンイソプロピルエステル）（２００mg／dl）溶液、ＣＭ
Ｚ（セフメタゾールナトリウム：セフメタゾン）（１０
０mg／dl）溶液の点眼液剤を１回１０μｌ上記ラットの
両眼に１日３回６カ月間投与し、白内障進行状態の判定
の為に１カ月毎にＥＡＳ−１０００によりスリット及び
徹照撮影による画像診断を行った。
液、ＤＤＣ−Ｎa（Ｎ，Ｎジエチルジチオカルバミン酸
ナトリウム）（１００mg／dl）溶液、ＧＥ（グルタチオ
ンイソプロピルエステル）（２００mg／dl）溶液、ＣＭ
Ｚ（セフメタゾールナトリウム：セフメタゾン）（１０
０mg／dl）溶液の点眼液剤を１回１０μｌ上記ラットの
両眼に１日３回６カ月間投与し、白内障進行状態の判定
の為に１カ月毎にＥＡＳ−１０００によりスリット及び
徹照撮影による画像診断を行った。
【００６２】(ii) 画像解析法 投与６カ月後のスリット画像をＥＡＳ−１０００（Dens
itmetory Integratedarea）により解析し、その混濁の
程度を水晶体の前極部、核部及び後極部の３つの部位に
ついて数値化した。
itmetory Integratedarea）により解析し、その混濁の
程度を水晶体の前極部、核部及び後極部の３つの部位に
ついて数値化した。
【００６３】(iii) 画像解析によるＤＳＦ投与の効果 図９はＸ線照射６カ月後のＤＳＦ投与ラットの画像診断
についてＭacintoshソフトＮＩＨＩmageにより解析した
結果を示す。Ｘ線照射により薬物非処理動物の前極、後
極、最後に核の順で白内障が進行した。図９から明らか
なように、ＤＳＦ投与ラットでは後極部の混濁はみられ
ず、前極部での混濁も抑制されている。
についてＭacintoshソフトＮＩＨＩmageにより解析した
結果を示す。Ｘ線照射により薬物非処理動物の前極、後
極、最後に核の順で白内障が進行した。図９から明らか
なように、ＤＳＦ投与ラットでは後極部の混濁はみられ
ず、前極部での混濁も抑制されている。
【００６４】 (iv) 画像解析結果の数値化による薬物効果の判定 投与６カ月後のスリット画像のＥＡＳ−１０００による
解析結果のグラフを以下に示す。図１０−Ａ、表１に水
晶体前極部における混濁の比較を示す。薬物非処理動物
群に比べ、ＤＳＦ、ＧＥ投与群ではわずかではあるが混
濁が少なかった。しかし、有意な差は認められなかっ
た。同様に図１０−Ｂ、表１に核部における比較を示
す。核部においては図２−Ｂ、表６から明らかなよう
に、混濁に対する薬物の効果は認められなかった。次
に、図１１、表６に後極部における比較を示す。後極部
ではＤＳＦ、ＤＤＣ−Ｎa、ＧＥ投与群で混濁の減少が
観察され、中でもＤＳＦ投与群が見かけ上最も低値を示
した。しかしここでも有意差は認められなかった。Ｘ線
照射による白内障惹起ではＸ線照射時に動物を固定する
ことが困難で、常に一定の位置への照射ができないとい
う問題点があり、データのばらつきの原因になる場合か
多い。
解析結果のグラフを以下に示す。図１０−Ａ、表１に水
晶体前極部における混濁の比較を示す。薬物非処理動物
群に比べ、ＤＳＦ、ＧＥ投与群ではわずかではあるが混
濁が少なかった。しかし、有意な差は認められなかっ
た。同様に図１０−Ｂ、表１に核部における比較を示
す。核部においては図２−Ｂ、表６から明らかなよう
に、混濁に対する薬物の効果は認められなかった。次
に、図１１、表６に後極部における比較を示す。後極部
ではＤＳＦ、ＤＤＣ−Ｎa、ＧＥ投与群で混濁の減少が
観察され、中でもＤＳＦ投与群が見かけ上最も低値を示
した。しかしここでも有意差は認められなかった。Ｘ線
照射による白内障惹起ではＸ線照射時に動物を固定する
ことが困難で、常に一定の位置への照射ができないとい
う問題点があり、データのばらつきの原因になる場合か
多い。
【表６】 画像解析結果の数値化による薬物効果 前極 核 後極 対照 1206± 759 203397±37889 1818± 1728 Ｘ線照射対照 4630±1736 259396±25752 12720± 9449 ＤＳＦ投与 3515±1656 279951±32227 5716± 3798 DDC-Ｎa投与 4707±1494 295824±42134 9347± 5658 ＧＥ投与 3897±2299 249074±55147 7787± 6704 ＣＭＺ投与 4578±2214 264612±52206 12304±10843
【００６５】 (3) 摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比、Ｃa量の測定法 前述の６カ月飼育後のＢＮラットの水晶体をクロロホル
ム麻酔下で摘出し、右眼水晶体を用いて次の操作を行っ
た。湿潤重量を測定し、真空乾燥器を用いて１００℃で
７時間以上減圧乾燥し、乾燥重量を測定した。この水晶
体１個につき６０％硝酸１００μｌを加え、乾燥器中で
８０℃、約３０分間灰化し水晶体を溶解した。これに超
純水２ml加え、３０００rpm、１５分間遠心分離を行っ
た。ここで得られた上清を２００μｌ採取し、超純水３
ml加え、Ｎa、Ｋ測定用サンプルとした。残渣に塩化ラ
ンタン（Ｃa：１０±０.３w／v％）を１００μｌを加
え、３０００rpm、１５分間遠心分離した上清をＣa測定
サンプルとした。このサンプルを日立１８０−８０型原
子吸光測定装置により測定した。
ム麻酔下で摘出し、右眼水晶体を用いて次の操作を行っ
た。湿潤重量を測定し、真空乾燥器を用いて１００℃で
７時間以上減圧乾燥し、乾燥重量を測定した。この水晶
体１個につき６０％硝酸１００μｌを加え、乾燥器中で
８０℃、約３０分間灰化し水晶体を溶解した。これに超
純水２ml加え、３０００rpm、１５分間遠心分離を行っ
た。ここで得られた上清を２００μｌ採取し、超純水３
ml加え、Ｎa、Ｋ測定用サンプルとした。残渣に塩化ラ
ンタン（Ｃa：１０±０.３w／v％）を１００μｌを加
え、３０００rpm、１５分間遠心分離した上清をＣa測定
サンプルとした。このサンプルを日立１８０−８０型原
子吸光測定装置により測定した。
【００６６】(4) 摘出水晶体中還元型グルタチオン
（ＧＳＨ）量測定法 先の摘出水晶体中左眼水晶体を用いてＨＰＬＣによりＧ
ＳＨ量の測定を行った。摘出水晶体１個につき０.１％
ＴＦＡin５％ＭeＯＨ０.５mlを加え、テフロンホモゲナ
イザーでホモゲナイズした。このホモジネイト５０μｌ
に１００μg／mlパントテン酸ナトリウムＭeＯＨ溶液１
００μｌを内標として加え１２,０００g１５分間低温遠
心分離を行った。次に上清をポアーサイズ０.４５μmの
クロマトディスク４Ａで濾過し、ＨＰＬＣにより測定し
た。ＨＰＬＣ装置は島津製作所製ＬＣ−１０ＡＤに可視
紫外部検出器ＳＰＤ−１０Ａを接続し、データ処理にＣ
−Ｒ５Ａを用いた。カラムはＭerk社のＳuperspher１０
０ＲＰ−１８（４μm、４×２５０mm）を用い、溶離液
０.１％ＴＦＡin５％ＭeＯＨ、stop time１９分、流速
１ml／min、波長２１０nm、圧力１５０kg／cm2の条件下
で１０μlＨＰＬＣに注入して測定した。検量線は同一
条件下で１０〜５００μg／mlの濃度範囲で作製した。
この検量線の傾きからＧＳＨ量を算出した。
（ＧＳＨ）量測定法 先の摘出水晶体中左眼水晶体を用いてＨＰＬＣによりＧ
ＳＨ量の測定を行った。摘出水晶体１個につき０.１％
ＴＦＡin５％ＭeＯＨ０.５mlを加え、テフロンホモゲナ
イザーでホモゲナイズした。このホモジネイト５０μｌ
に１００μg／mlパントテン酸ナトリウムＭeＯＨ溶液１
００μｌを内標として加え１２,０００g１５分間低温遠
心分離を行った。次に上清をポアーサイズ０.４５μmの
クロマトディスク４Ａで濾過し、ＨＰＬＣにより測定し
た。ＨＰＬＣ装置は島津製作所製ＬＣ−１０ＡＤに可視
紫外部検出器ＳＰＤ−１０Ａを接続し、データ処理にＣ
−Ｒ５Ａを用いた。カラムはＭerk社のＳuperspher１０
０ＲＰ−１８（４μm、４×２５０mm）を用い、溶離液
０.１％ＴＦＡin５％ＭeＯＨ、stop time１９分、流速
１ml／min、波長２１０nm、圧力１５０kg／cm2の条件下
で１０μlＨＰＬＣに注入して測定した。検量線は同一
条件下で１０〜５００μg／mlの濃度範囲で作製した。
この検量線の傾きからＧＳＨ量を算出した。
【００６７】(5) 摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比、Ｃa量、Ｇ
ＳＨ量に対する薬物の効果 図１２−Ａ、表７にＸ線照射によるＮa／Ｋ比に対する
各薬物の効果を示す。薬物非処理動物群のＮa／Ｋ比は
０.４３±０.１１であり、正常ラットの０.２６±０.０
６に比べ上昇した。薬物投与群中ＤＳＦ、ＤＤＣ−Ｎ
a、ＧＥにおいてＮa／Ｋ比の上昇を抑制する傾向が認め
られた。図１２−Ｂ、表７にＸ線照射によるＣa量に対
する各薬物の効果を示す。薬物非処理動物群のＣa量は
４.２±２.３、正常ラットでは１.２±０mmol／kgＨ2Ｏ
であり、Ｘ線照射によるＣa量の増加がみられる。また
薬物投与群中ＧＥはＣa量増加を抑制する傾向がみられ
たが、他の薬物群では認められなかった。図１３、表７
にＸ線照射によるＧＳＨ量に対する各薬物の効果を示
す。Ｘ線照射によりＧＳＨ量は１３５.２±１２.０から
１００.１±１２.０μmol／lensに減少したが、ＤＳ
Ｆ、ＤＤＣ−Ｎa、ＧＥの投与により、この減少を有意
に抑制することができた。また、ＣＭＺ投与では減少を
抑えることができなかった。
ＳＨ量に対する薬物の効果 図１２−Ａ、表７にＸ線照射によるＮa／Ｋ比に対する
各薬物の効果を示す。薬物非処理動物群のＮa／Ｋ比は
０.４３±０.１１であり、正常ラットの０.２６±０.０
６に比べ上昇した。薬物投与群中ＤＳＦ、ＤＤＣ−Ｎ
a、ＧＥにおいてＮa／Ｋ比の上昇を抑制する傾向が認め
られた。図１２−Ｂ、表７にＸ線照射によるＣa量に対
する各薬物の効果を示す。薬物非処理動物群のＣa量は
４.２±２.３、正常ラットでは１.２±０mmol／kgＨ2Ｏ
であり、Ｘ線照射によるＣa量の増加がみられる。また
薬物投与群中ＧＥはＣa量増加を抑制する傾向がみられ
たが、他の薬物群では認められなかった。図１３、表７
にＸ線照射によるＧＳＨ量に対する各薬物の効果を示
す。Ｘ線照射によりＧＳＨ量は１３５.２±１２.０から
１００.１±１２.０μmol／lensに減少したが、ＤＳ
Ｆ、ＤＤＣ−Ｎa、ＧＥの投与により、この減少を有意
に抑制することができた。また、ＣＭＺ投与では減少を
抑えることができなかった。
【表７】 水晶体中Ｎa／Ｋ比、Ｃa量、ＧＳＨ量 Ｎa／Ｋ比 Ｃa量 ＧＳＨ量 (mmol/kg H2O) (μmol／lens) 対照 0.26±0.06 1.2±0 135.2±12.0 Ｘ線照射対照 0.43±0.11 4.2±2.3 100.1±12.0 ＤＳＦ投与 0.35±0.08 4.4±1.6 137.3±22.6 ＤＤＣ-Ｎa投与 0.37±0.15 4.2±1.3 126.7±25.3 ＧＥ投与 0.30±0.06 2.7±1.3 130.6±29.9 ＣＭＺ投与 0.47±0.20 4.0±2.3 99.7±21.7
【００６８】亜セレン酸ナトリウムによる白内障惹起及
び種々の薬物点眼実験法 (1) 白内障惹起方法 亜セレン酸ナトリウムを３週齢Ｗistar系ラット頚部皮
下に注射（３.２８mg／kg）し、白内障を惹起させた。
び種々の薬物点眼実験法 (1) 白内障惹起方法 亜セレン酸ナトリウムを３週齢Ｗistar系ラット頚部皮
下に注射（３.２８mg／kg）し、白内障を惹起させた。
【００６９】(2)画像診断 (i)点眼法及び画像診断法 ＤＳＦ封入ＤＭＰＣ／ＤＰＰＣ／ＣＰＣ（８／２／１）
リポソーム（リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６.５、０.
６５mg／mlＤＳＦ）、ＤＳＦ懸濁液（リン酸ナトリウム
緩衝液、ｐＨ６.５、１mg／mlＤＳＦ）、ＣＭＺ封入Ｄ
ＭＰＣ／ＤＰＰＣ／ＣＰＣ（３／７／１）リポソーム
（Ｈind-Ｇoyan緩衝液、ｐＨ６.３１、１００mg／mlＣ
ＭＺ）の３種製剤を用いて、亜セレン酸投与時から１日
４回、１０μlずつ両眼に１週間点眼した。ＥＡＳ−１
０００によりスリット像、徹照像を撮影した後、クロロ
ホルム麻酔下で水晶体を摘出し、混濁を実体顕微鏡によ
り観察した。
リポソーム（リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６.５、０.
６５mg／mlＤＳＦ）、ＤＳＦ懸濁液（リン酸ナトリウム
緩衝液、ｐＨ６.５、１mg／mlＤＳＦ）、ＣＭＺ封入Ｄ
ＭＰＣ／ＤＰＰＣ／ＣＰＣ（３／７／１）リポソーム
（Ｈind-Ｇoyan緩衝液、ｐＨ６.３１、１００mg／mlＣ
ＭＺ）の３種製剤を用いて、亜セレン酸投与時から１日
４回、１０μlずつ両眼に１週間点眼した。ＥＡＳ−１
０００によりスリット像、徹照像を撮影した後、クロロ
ホルム麻酔下で水晶体を摘出し、混濁を実体顕微鏡によ
り観察した。
【００７０】(ii) 画像解析法 亜セレン酸処理１週間後の各製剤点眼による効果を判定
する為に、スリット像をＭacintoshソフトＮＩＨImage
により、徹照像をＥＡＳ−１０００（Ｒetroilluminati
on image）により解析した。 (iii)薬物効果における肉眼的判定 図１４は１週間点眼後のラット頭部写真である。非治療
ラットでは中心部が白く濁り、核白内障が起こっている
のが判明した。これに対しＤＳＦリポソーム、ＤＳＦ懸
濁液点眼ラットでは全く混濁が認められなかった。また
ＣＭＺリポソーム点眼ではわずかな混濁が認められた。
図１５に先の動物から摘出した水晶体の実体顕微鏡像を
示す。非治療ラットでは、著しい核混濁が起こっている
のに対し、ＤＳＦリポソーム点眼では明らかに混濁を抑
制した。一方、ＤＳＦ懸濁液、ＣＭＺリポソームでは効
果にばらつきが認められ、著効を示す動物とそうでない
ものが存在した。
する為に、スリット像をＭacintoshソフトＮＩＨImage
により、徹照像をＥＡＳ−１０００（Ｒetroilluminati
on image）により解析した。 (iii)薬物効果における肉眼的判定 図１４は１週間点眼後のラット頭部写真である。非治療
ラットでは中心部が白く濁り、核白内障が起こっている
のが判明した。これに対しＤＳＦリポソーム、ＤＳＦ懸
濁液点眼ラットでは全く混濁が認められなかった。また
ＣＭＺリポソーム点眼ではわずかな混濁が認められた。
図１５に先の動物から摘出した水晶体の実体顕微鏡像を
示す。非治療ラットでは、著しい核混濁が起こっている
のに対し、ＤＳＦリポソーム点眼では明らかに混濁を抑
制した。一方、ＤＳＦ懸濁液、ＣＭＺリポソームでは効
果にばらつきが認められ、著効を示す動物とそうでない
ものが存在した。
【００７１】(iv)画像解析における薬物の効果 図１６に亜セレン酸処理１週間後のＤＳＦ、ＣＭＺ各リ
ポソーム点眼ラットの画像診断結果を示す。非治療ラッ
トではスリット、徹照両画像において顕著な核混濁が認
められたが、ＤＳＦリポソーム点眼では核部の混濁が抑
制されていた。またＣＭＺリポソーム点眼でも、ＤＳＦ
リポソーム程顕著ではないが、核部の混濁を抑制してい
るのが認められた。
ポソーム点眼ラットの画像診断結果を示す。非治療ラッ
トではスリット、徹照両画像において顕著な核混濁が認
められたが、ＤＳＦリポソーム点眼では核部の混濁が抑
制されていた。またＣＭＺリポソーム点眼でも、ＤＳＦ
リポソーム程顕著ではないが、核部の混濁を抑制してい
るのが認められた。
【００７２】 (v)画像解析結果の数値化による薬物効果の判定 図１７−Ａ、表８にＭacintoshによる１週間点眼後のス
リット像混濁解析結果を示す。いずれの製剤も亜セレン
酸処理による水晶体混濁を抑制しており、中でもＤＳＦ
リポソームにおいてその効果が有意な差として認められ
た。図１７−Ｂ、表８に１週間点眼後の徹照画像をＥＡ
Ｓ−１０００により解析した透過率の比較を示す。亜セ
レン酸処理により、透過率は約４０％低下したが、ＤＳ
Ｆリポソームでは約８％、ＤＳＦ懸濁液、ＣＭＺリポソ
ームでは約２５％の低下に抑えていることが判明した。
リット像混濁解析結果を示す。いずれの製剤も亜セレン
酸処理による水晶体混濁を抑制しており、中でもＤＳＦ
リポソームにおいてその効果が有意な差として認められ
た。図１７−Ｂ、表８に１週間点眼後の徹照画像をＥＡ
Ｓ−１０００により解析した透過率の比較を示す。亜セ
レン酸処理により、透過率は約４０％低下したが、ＤＳ
Ｆリポソームでは約８％、ＤＳＦ懸濁液、ＣＭＺリポソ
ームでは約２５％の低下に抑えていることが判明した。
【表８】 スリット、徹照画像解析結果による薬物効果 混濁度 透過率(％) (Slit) (Retro) 対照 3301±1021 95.60± 4.01 亜セレン酸対照 20683±4659 56.24±17.08 ＤＳＦリポソーム 10170±6305 87.41± 9.72 ＤＳＦ懸濁液 17017±7195 69.74±15.26 ＣＭＺリポソーム 19617±6163 70.12±12.64
【００７３】(3) 摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比、Ｃa量の測
定法 右眼水晶体を用い、上記(3)と同様に測定した。
定法 右眼水晶体を用い、上記(3)と同様に測定した。
【００７４】(4) 摘出水晶体中ＧＳＨ量測定法 左眼水晶体を用い、第１項Ｅに記述した方法で試料の調
製を行った。
製を行った。
【００７５】(5) 摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比、Ｃa量、Ｇ
ＳＨ量に対する薬物の効果 図１８−Ａ、表９に摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比を測定した
結果を示す。Ｎa／Ｋ比についてはいずれも有意な変動
は認められなかった。図１８−Ｂ、表９に摘出水晶体中
Ｃa量を測定した結果を示す。亜セレン酸処理によりＣa
量は０.３±０.１から１.０±０.５mmol／kgＨ2Ｏに増
加したが、ＤＳＦリポソーム、ＤＳＦ懸濁液、ＣＭＺリ
ポソームの点眼いずれにおいても有意に増加を抑制し
た。図１９、表９に摘出水晶体中ＧＳＨ量を測定した結
果を示す。正常ラットでは１２５.１±１０.１、非治療
群９９.０±５.４μmol／lensであったが、各製剤点眼
においていずれもＧＳＨ量減少を有意に抑制した。
ＳＨ量に対する薬物の効果 図１８−Ａ、表９に摘出水晶体中Ｎa／Ｋ比を測定した
結果を示す。Ｎa／Ｋ比についてはいずれも有意な変動
は認められなかった。図１８−Ｂ、表９に摘出水晶体中
Ｃa量を測定した結果を示す。亜セレン酸処理によりＣa
量は０.３±０.１から１.０±０.５mmol／kgＨ2Ｏに増
加したが、ＤＳＦリポソーム、ＤＳＦ懸濁液、ＣＭＺリ
ポソームの点眼いずれにおいても有意に増加を抑制し
た。図１９、表９に摘出水晶体中ＧＳＨ量を測定した結
果を示す。正常ラットでは１２５.１±１０.１、非治療
群９９.０±５.４μmol／lensであったが、各製剤点眼
においていずれもＧＳＨ量減少を有意に抑制した。
【表９】 水晶体中Ｎa／Ｋ比、Ｃa量、ＧＳＨ量 Ｎa／Ｋ比 Ｃa量 ＧＳＨ量 (mmol/kg H2O) (μmol／lens) 対照 0.11±0.01 0.3±0.1 125.1±10.1 亜セレン酸対照 0.16±0.05 1.0±0.5 99.0± 5.4 ＤＳＦリポソーム 0.13±0.03 0.5±0.2 111.0±11.3 ＤＳＦ懸濁液 0.16±0.02 0.5±0.1 113.0±14.2 ＣＭＺリポソーム 0.14±0.02 0.5±0.1 110.7± 8.3
【図１】 ｐＨ８.０におけるＤＳＦ含有リポソームか
らのＤＤＣの放出性を示す折れ線グラフである。
らのＤＤＣの放出性を示す折れ線グラフである。
【図２】 用いられた角膜透過性実験装置である。
【図３】 ＤＳＦ含有ＤＰＰＣ／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ（２
／８／１）リポソームから放出されたＤＤＣの家兎角膜
の透過性（ｐＨ８.０）を示す折れ線グラフである。
／８／１）リポソームから放出されたＤＤＣの家兎角膜
の透過性（ｐＨ８.０）を示す折れ線グラフである。
【図４】 ＤＳＦ含有ＤＰＰＣ／ＤＭＰＣ／ＣＰＣ（２
／８／１）リポソームから放出されたＤＤＣの家兎角膜
の透過性（ｐＨ６.５）を示す折れ線グラフである。
／８／１）リポソームから放出されたＤＤＣの家兎角膜
の透過性（ｐＨ６.５）を示す折れ線グラフである。
【図５】 ダイアミド処理後のマウス水晶体中還元性グ
ルタチオン（ＧＳＨ）含量に対するＧＥおよびＤＤＣの
回復実験結果を示す棒グラフである。
ルタチオン（ＧＳＨ）含量に対するＧＥおよびＤＤＣの
回復実験結果を示す棒グラフである。
【図６】 抗白内障薬処理の有無におけるマウス摘出水
晶体中のＮa／Ｃa比に対する影響を示す棒グラフであ
る。
晶体中のＮa／Ｃa比に対する影響を示す棒グラフであ
る。
【図７】 抗白内障薬処理の有無におけるマウス摘出水
晶体中のＣa含量に対する影響を示す棒グラフである。
晶体中のＣa含量に対する影響を示す棒グラフである。
【図８】 ラット水晶体から精製されたアルドース還元
酵素に対する薬物の阻害活性を示すグラフである。
酵素に対する薬物の阻害活性を示すグラフである。
【図９】 Ｘ線照射による白内障に対するＤＳＦ投与の
効果を示すスリット像および徹照像を示す。
効果を示すスリット像および徹照像を示す。
【図１０】 各種薬物によるＸ線照射ラットの水晶体の
前極部（Ａ）および核部（Ｂ）の混濁度に対する効果を
示す棒グラフである。
前極部（Ａ）および核部（Ｂ）の混濁度に対する効果を
示す棒グラフである。
【図１１】 各種薬物によるＸ線照射ラットの水晶体の
後極部の混濁度に対する効果を示す棒グラフである。
後極部の混濁度に対する効果を示す棒グラフである。
【図１２】 各種薬物によるＸ線照射ラットの水晶体中
のＮa／Ｋ比（Ａ）およびＣa量（Ｂ）に対する抗白内障
効果を示す棒グラフである。
のＮa／Ｋ比（Ａ）およびＣa量（Ｂ）に対する抗白内障
効果を示す棒グラフである。
【図１３】 各種薬物によるＸ線照射ラットの水晶体中
のＧＳＨ量に対する抗白内障効果を示す棒グラフであ
る。
のＧＳＨ量に対する抗白内障効果を示す棒グラフであ
る。
【図１４】 ＤＳＦリポソーム、ＤＳＦ−懸濁液および
ＣＭＺ−リポソームの点眼による亜セレン酸処置ラット
の眼球写真である。
ＣＭＺ−リポソームの点眼による亜セレン酸処置ラット
の眼球写真である。
【図１５】 ＤＳＦリポソーム、ＤＳＦ−懸濁液および
ＣＭＺ−リポソームの点眼による亜セレン酸処置ラット
の水晶体写真である。
ＣＭＺ−リポソームの点眼による亜セレン酸処置ラット
の水晶体写真である。
【図１６】 各種薬物投与による亜セレン酸惹起白内障
ラットのスリット像および徹照像を示す。
ラットのスリット像および徹照像を示す。
【図１７】 各種薬物による亜セレン酸処置ラットの水
晶体中の混濁度（スリット像、Ａ）および透過率（徹照
像、Ｂ）に対する効果を示す棒グラフである。
晶体中の混濁度（スリット像、Ａ）および透過率（徹照
像、Ｂ）に対する効果を示す棒グラフである。
【図１８】 各種薬物による亜セレン酸処置ラットの水
晶体中のＮa／Ｋ比（Ａ）およびＣa量（Ｂ）に対する抗
白内障効果を示す棒グラフである。
晶体中のＮa／Ｋ比（Ａ）およびＣa量（Ｂ）に対する抗
白内障効果を示す棒グラフである。
【図１９】 各種薬物による亜セレン酸処置ラットの水
晶体中のＧＳＨ量に対する抗白内障効果を示す棒グラフ
である。
晶体中のＧＳＨ量に対する抗白内障効果を示す棒グラフ
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A61K 31/145 A61K 9/127 A61K 31/41 A61K 31/545 ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (15)
- 【請求項１】 下記式で示される還元性チオール： 【化１】 ［式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、同一または異なって、
ヒドロキシ基または低級アルキルオキシ基または低級ア
ルキルカルボニルオキシ基により置換されていてもよ
い、直鎖状または分枝状の低級アルキル基である］およ
びそのジスルフィド誘導体ならびにセフェム系スルフィ
ド誘導体から選ばれるラジカル捕捉物質を有効成分とす
る白内障処置剤。 - 【請求項２】 還元性チオール誘導体が、ジエチルジチ
オカルバメート、１−メチル−１Ｈ−テトラゾール−５
−イル−チオールおよび１−（２−ヒドロキシエチル）
−１Ｈ−テトラゾール−５−イル−チオールの誘導体か
ら選ばれる、請求項１記載の白内障処置剤。 - 【請求項３】 ジスルフィド誘導体が式： 【化２】 ［式中、Ｒ1およびＲ2は上記と同じ意味である］で示さ
れるものである、請求項１記載の白内障処置剤。 - 【請求項４】 ジスルフィド誘導体がジスルフィラムで
ある、請求項１記載の白内障処置剤。 - 【請求項５】 セフェム系スルフィド誘導体がセファマ
ンドール、セフォペラゾン、塩酸セフメノキシム、セフ
メタゾール、セフォテタン、ラタモキセフ、セフブペラ
ゾン、セフピラミド、フロモキセフから選ばれるもので
ある、請求項１記載の白内障処置剤。 - 【請求項６】 セフェム系スルフィド誘導体がセフメタ
ゾールである、請求項１または５記載の白内障処置剤。 - 【請求項７】 請求項１〜６項記載の白内障処置剤が、
エマルジョン、ナノカプセル、アルブミンマイクロスフ
ィアーおよびリポソームからなる群から選ばれ、表面に
脂溶性・陽性荷電膜を有する微粒子担体に担持されてい
る医薬製剤。 - 【請求項８】 有機相に担体構成成分および脂溶性陽性
荷電負荷物質を溶解させ、白内障処置剤が脂溶性の場合
は、該白内障処置剤をさらに有機相に溶解させ、白内障
処置剤が水溶性の場合は、水性相に該白内障処置剤を溶
解させ、微粒子を形成させて得られる、請求項７記載の
医薬製剤。 - 【請求項９】 有機相に担体構成成分、脂溶性陽性荷電
負荷物質および白内障処置剤を溶解させ、微粒子を形成
させて得られる、請求項８項記載の医薬製剤。 - 【請求項１０】 脂溶性陽性荷電負荷物質が担体構成成
分の約１〜３０モル％である、請求項８または９記載の
医薬製剤。 - 【請求項１１】 微粒子状担体がリポソームである、請
求項７〜１０のいずれか１項記載の医薬製剤。 - 【請求項１２】 請求項１〜８項記載の白内障処置剤を
担持させるための微粒子状担体であって、該微粒子担体
が、エマルジョン、ナノカプセル、アルブミンマイクロ
スフィアーおよびリポソームからなる群から選ばれ、表
面に脂溶性・陽性荷電膜を有することを特徴とする微粒
子担体。 - 【請求項１３】 脂溶性・陽性荷電負荷物質が担体構成
成分の約１〜３０モル％であることを特徴とする、請求
項１２記載の微粒子状担体。 - 【請求項１４】 リポソームである、請求項１２〜１３
のいずれか１項記載の微粒子状担体。 - 【請求項１５】 リポソームが天然または半合成リン脂
質を含む、請求項１４項記載の微粒子状担体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6271271A JP2891883B2 (ja) | 1993-11-05 | 1994-11-04 | 抗白内障医薬組成物 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5-277061 | 1993-11-05 | ||
| JP27706193 | 1993-11-05 | ||
| JP6271271A JP2891883B2 (ja) | 1993-11-05 | 1994-11-04 | 抗白内障医薬組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07233057A JPH07233057A (ja) | 1995-09-05 |
| JP2891883B2 true JP2891883B2 (ja) | 1999-05-17 |
Family
ID=26549620
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6271271A Expired - Fee Related JP2891883B2 (ja) | 1993-11-05 | 1994-11-04 | 抗白内障医薬組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2891883B2 (ja) |
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| WO2000044366A2 (en) * | 1999-01-27 | 2000-08-03 | Telik, Inc. | Therapeutic compositions containing glutathione analogs |
| JP4859283B2 (ja) * | 2001-05-23 | 2012-01-25 | 学校法人近畿大学 | 高安定性抗白内障医薬組成物 |
| US9463201B2 (en) | 2014-10-19 | 2016-10-11 | M.G. Therapeutics Ltd | Compositions and methods for the treatment of meibomian gland dysfunction |
| JP2018533622A (ja) * | 2015-09-28 | 2018-11-15 | アズーラ オフサルミックス エルティーディー． | マイボーム腺の脂質分泌を増加させるためのチオールおよびジスルフィド含有薬剤 |
| JP2023510499A (ja) | 2020-01-10 | 2023-03-14 | アズーラ オフサルミックス エルティーディー． | 組成物および過敏症のための指示 |
-
1994
- 1994-11-04 JP JP6271271A patent/JP2891883B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07233057A (ja) | 1995-09-05 |
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