JP2879698B2 - 大腸菌群検出用培地 - Google Patents
大腸菌群検出用培地Info
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- JP2879698B2 JP2879698B2 JP15706390A JP15706390A JP2879698B2 JP 2879698 B2 JP2879698 B2 JP 2879698B2 JP 15706390 A JP15706390 A JP 15706390A JP 15706390 A JP15706390 A JP 15706390A JP 2879698 B2 JP2879698 B2 JP 2879698B2
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- Japan
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- escherichia coli
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はラクトース分解微生物である大腸菌群を迅速
かつ正確に検出することのできる大腸菌群検出用培地に
関する。
かつ正確に検出することのできる大腸菌群検出用培地に
関する。
近年、微生物の汚染を防止するという社会的要請の強
まりによって、食品、医薬品、化粧品、飲料水、尿等中
に存在する大腸菌群を検出することが盛んになってき
た。
まりによって、食品、医薬品、化粧品、飲料水、尿等中
に存在する大腸菌群を検出することが盛んになってき
た。
従来から行われている大腸菌群の検査法としては、デ
ゾキシコレート培地を用いて24時間培養した後、発育し
た菌のコロニー数を算出する方法、あるいはブリリアン
トグリーン乳糖ブイヨン（BGLB）、乳糖ブイヨン等を用
いて24〜48時間培養した後、ガスの産生が認められる試
験管の本数を数えて菌数を算定する方法が知られてい
る。
ゾキシコレート培地を用いて24時間培養した後、発育し
た菌のコロニー数を算出する方法、あるいはブリリアン
トグリーン乳糖ブイヨン（BGLB）、乳糖ブイヨン等を用
いて24〜48時間培養した後、ガスの産生が認められる試
験管の本数を数えて菌数を算定する方法が知られてい
る。
しかし、これらの方法は長時間を要し、現在の流通体
制に適合するためには迅速な検査法が望まれ、微生物が
増殖する際に変化する電気的抵抗を利用した迅速検出法
や、微生物のもつATPを測定する方法等が開発された。
しかし、これらの方法は、選択性及び精度性の点で必ず
しも満足できるものではなかった。
制に適合するためには迅速な検査法が望まれ、微生物が
増殖する際に変化する電気的抵抗を利用した迅速検出法
や、微生物のもつATPを測定する方法等が開発された。
しかし、これらの方法は、選択性及び精度性の点で必ず
しも満足できるものではなかった。
また、近年、４−メチル−ウンベリフェリル−β−Ｄ
−ガラクトシド（４−MUG）を含む培地を使用して、大
腸菌群が産生するβ−ガラクトシダーゼによって４−MU
Gを４−メチル−ウンベリフェロン（４−MU）に変化さ
せ、この４−MUの蛍光を測定する大腸菌群の迅速検出法
が報告された（特開昭56−64797号）。しかし、この方
法も、その蛍光を部屋を暗くしてUVランプを用いて肉眼
で観察するか、あるいは蛍光測定リーダーを用いて測定
しなければならず、操作が厄介であるという欠点があっ
た。
−ガラクトシド（４−MUG）を含む培地を使用して、大
腸菌群が産生するβ−ガラクトシダーゼによって４−MU
Gを４−メチル−ウンベリフェロン（４−MU）に変化さ
せ、この４−MUの蛍光を測定する大腸菌群の迅速検出法
が報告された（特開昭56−64797号）。しかし、この方
法も、その蛍光を部屋を暗くしてUVランプを用いて肉眼
で観察するか、あるいは蛍光測定リーダーを用いて測定
しなければならず、操作が厄介であるという欠点があっ
た。
更にまた、３−（ｐ−ヨードフェニル）−２−（ｐ−
ニトロフェニル）−５−フェニル−2Hテトラゾリウムク
ロライド〔INT〕、３−（4,5−ジメチル−２−チアゾリ
ル）−2,5−ジフェニル−2Hテトラゾリウムクロライド
〔MTT〕又は2,3,5−トリフェニルテトラゾリウムクロラ
イド〔TTC〕を含む培地を使用し、これらの化合物が微
生物の細胞壁に取り込まれると、微生物がもつ脱水素酵
素によって赤色〜紫色のホルマザンを生成することを利
用して大腸菌群を検出する方法が知られている。しかし
ながら、この方法も、脱水素酵素をもつ微生物であれば
着色を生ずるので、選択性に欠けると共に、その着色の
範囲はコロニーの大きさに限られるという欠点があっ
た。
ニトロフェニル）−５−フェニル−2Hテトラゾリウムク
ロライド〔INT〕、３−（4,5−ジメチル−２−チアゾリ
ル）−2,5−ジフェニル−2Hテトラゾリウムクロライド
〔MTT〕又は2,3,5−トリフェニルテトラゾリウムクロラ
イド〔TTC〕を含む培地を使用し、これらの化合物が微
生物の細胞壁に取り込まれると、微生物がもつ脱水素酵
素によって赤色〜紫色のホルマザンを生成することを利
用して大腸菌群を検出する方法が知られている。しかし
ながら、この方法も、脱水素酵素をもつ微生物であれば
着色を生ずるので、選択性に欠けると共に、その着色の
範囲はコロニーの大きさに限られるという欠点があっ
た。
従って、簡単な操作で短時間に、選択性をもって正確
に大腸菌群を検出する方法が望まれていた。
に大腸菌群を検出する方法が望まれていた。
斯かる実情において、本発明者は鋭意研究を行った結
果、上記目的にあった培地を得ることに成功した。
果、上記目的にあった培地を得ることに成功した。
すなわち、本発明は、ブレインハートインフュージョ
ン寒天培地（BHI）、トリプトソーヤ寒天培地（TSA）及
びK3培地からなる群より選ばれる１の大腸菌群増殖用培
地に、５−ブロモ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクト
シド（以下、Blugalと称する）または５−ブロモ−４−
クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド（以
下、Xgalと称する）を添加したことを特徴とする、エシ
ャリキヤ属に属する菌を含む大腸菌群を検出するための
培地を提供するものである。
ン寒天培地（BHI）、トリプトソーヤ寒天培地（TSA）及
びK3培地からなる群より選ばれる１の大腸菌群増殖用培
地に、５−ブロモ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクト
シド（以下、Blugalと称する）または５−ブロモ−４−
クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド（以
下、Xgalと称する）を添加したことを特徴とする、エシ
ャリキヤ属に属する菌を含む大腸菌群を検出するための
培地を提供するものである。
本発明で大腸菌群とは、ラクトースを分解する能力を
有する一群の微生物で、エシャリキヤ属、サイトロバク
ター属、クレブシエラ属、エンテロバクター属、セラチ
ヤ属に属するものである。
有する一群の微生物で、エシャリキヤ属、サイトロバク
ター属、クレブシエラ属、エンテロバクター属、セラチ
ヤ属に属するものである。
本発明で用いられる大腸菌群増殖用培地は、生育速度
の高い培地、すなわちBEI、TSA及び本発明者によって新
たに調製されたK3倍地である。
の高い培地、すなわちBEI、TSA及び本発明者によって新
たに調製されたK3倍地である。
本発明のβ−ガラクトシダーゼの基質であるBlugal及
びXgalは培地中に10-3M〜10-4M程度添加するのが好まし
い。
びXgalは培地中に10-3M〜10-4M程度添加するのが好まし
い。
本発明のエシャリキヤ属に属する菌を含む大腸菌群を
検出するための培地を用いて、被検体中のエシャリキヤ
属に属する菌を含む大腸菌群の存在を検出するには、当
該培地に被検体を加えて約37℃で約18時間培養する。被
検体中にエシャリキヤ属に属する菌を含む大腸菌群が存
在すると、この微生物が発育する段階で特異的に酵素
（β−ガラクトシダーゼ）を産生し、これと基質が反応
して着色するのでエシャリキヤ属に属する菌を含む大腸
菌群の存在を確認することができる。
検出するための培地を用いて、被検体中のエシャリキヤ
属に属する菌を含む大腸菌群の存在を検出するには、当
該培地に被検体を加えて約37℃で約18時間培養する。被
検体中にエシャリキヤ属に属する菌を含む大腸菌群が存
在すると、この微生物が発育する段階で特異的に酵素
（β−ガラクトシダーゼ）を産生し、これと基質が反応
して着色するのでエシャリキヤ属に属する菌を含む大腸
菌群の存在を確認することができる。
次に実施例を挙げて説明する。
実施例１ TSAに１×10-3M Blugal、１×10-3M Xgal、0.01％IN
T、TTC又はMTTを添加し、これに７種の大腸菌群を接種
し、37℃で18時間培養を行い、このときに形成されたコ
ロニーの染色斑の直径を実体顕微鏡を用いて測定した。
その結果を表−１に示した。
T、TTC又はMTTを添加し、これに７種の大腸菌群を接種
し、37℃で18時間培養を行い、このときに形成されたコ
ロニーの染色斑の直径を実体顕微鏡を用いて測定した。
その結果を表−１に示した。
実施例２ 大腸菌群の増殖に適した各種培地に１×10-3M Blugal
を添加し、これにそれぞれ７種の大腸菌群を接種し、37
℃で18時間培養を行い、このときに形成されたコロニー
の染色斑の直径を実体顕微鏡を用いて測定した。なお、
対照として従来から用いられているデゾキシコレート培
地（デソ）と比較した。その結果を表−２に示した。
を添加し、これにそれぞれ７種の大腸菌群を接種し、37
℃で18時間培養を行い、このときに形成されたコロニー
の染色斑の直径を実体顕微鏡を用いて測定した。なお、
対照として従来から用いられているデゾキシコレート培
地（デソ）と比較した。その結果を表−２に示した。
デゾキシコレート培地： ペプトン 10g 乳糖 10g 塩化ナトリウム 5g リン酸−水素カリウム 2g クエン酸鉄アンモニウム 2g デオキシコール酸ナトリウム 1g ニュートラルレッド 0.033g 寒天 15g 精製水 1000ml （pH7.4±0.1） 実施例３ 大腸菌群の増殖に適した培地に１×10-3M Blugalを添
加し、これにそれぞれ７種の大腸菌群を接種し、37℃で
培養を行い、このときに形成されたコロニーの染色斑の
直径を実体顕微鏡を用いて経時的に測定した。なお、対
照として従来から用いられているデゾキシコレート培地
（デソ）と比較した。その結果を表−３に示した。その
結果、どの菌種においても本発明培地の方がデソ培地に
比べ、見かけ上のコロニーの大きさが同一時間で大きい
ことが認められ、より早い時間からコロニー計測が可能
となった。
加し、これにそれぞれ７種の大腸菌群を接種し、37℃で
培養を行い、このときに形成されたコロニーの染色斑の
直径を実体顕微鏡を用いて経時的に測定した。なお、対
照として従来から用いられているデゾキシコレート培地
（デソ）と比較した。その結果を表−３に示した。その
結果、どの菌種においても本発明培地の方がデソ培地に
比べ、見かけ上のコロニーの大きさが同一時間で大きい
ことが認められ、より早い時間からコロニー計測が可能
となった。
W:白コロニー、B:青コロニー、WB:薄い青K3培地： トリブチケースペプトン 10g フィトンペプトン 5g 塩化ナトリウム 5g 酵母エキス（Difco） 5g リン酸−水素二カリウム 2.5g ピルビン酸ナトリウム 1g 硝酸カリウム 1g ラウリル硫酸ナトリウム 0.1g 寒天 3g 精製水 1000ml 〔発明の効果〕 本発明のエシャリキヤ属に属する菌を含む大腸菌群を
検出するための培地を使用すると、エシャリキヤ属に属
する菌を含む大腸菌群の産生した酵素が存在する範囲が
全て着色し、寒天平板に形成された実際のコロニーの大
きさよりも大きく見えるので、より早い時間に正確にコ
ロニーの計測が可能であるという特長を有する
検出するための培地を使用すると、エシャリキヤ属に属
する菌を含む大腸菌群の産生した酵素が存在する範囲が
全て着色し、寒天平板に形成された実際のコロニーの大
きさよりも大きく見えるので、より早い時間に正確にコ
ロニーの計測が可能であるという特長を有する
Claims (1)
- 【請求項１】ブレインハートインフュージョン寒天培
地、トリプトソーヤ寒天培地及びK3培地からなる群より
選ばれる１の大腸菌群増殖用培地に、５−ブロモ−３−
インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド又は５−ブロモ−４
−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシドを添
加したことを特徴とする、エシェリキヤ属に属する菌を
含む大腸菌群を検出するための培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15706390A JP2879698B2 (ja) | 1990-06-15 | 1990-06-15 | 大腸菌群検出用培地 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15706390A JP2879698B2 (ja) | 1990-06-15 | 1990-06-15 | 大腸菌群検出用培地 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0451900A JPH0451900A (ja) | 1992-02-20 |
| JP2879698B2 true JP2879698B2 (ja) | 1999-04-05 |
Family
ID=15641405
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15706390A Expired - Lifetime JP2879698B2 (ja) | 1990-06-15 | 1990-06-15 | 大腸菌群検出用培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2879698B2 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2747394B1 (fr) * | 1996-04-15 | 1998-07-03 | Rambach Alain | Milieu de culture pour la mise en evidence des bacteries e. coli enterohemorragiques, et procede pour sa mise en evidence |
| US6391578B2 (en) | 1997-04-09 | 2002-05-21 | 3M Innovative Properties Company | Method and devices for partitioning biological sample liquids into microvolumes |
| FR2789086B1 (fr) * | 1999-02-03 | 2003-01-31 | Alain Rambach | Procede de detection de bacteries cultivees en condition anaerobie |
| US6174699B1 (en) | 1999-03-09 | 2001-01-16 | 3M Innovative Properties Company | Disc assay device with inoculation pad and methods of use |
| CN102311990B (zh) * | 2011-09-16 | 2013-04-17 | 广州绿洲生化科技股份有限公司 | 一种大肠菌群的显色培养基及其快速检测卡 |
| CN111118107A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-05-08 | 成都海关技术中心 | 用于大肠菌群快速显示检测的培养基、制备方法及应用 |
| CN111304280A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-06-19 | 成都海关技术中心 | 用于含辣椒食品、调味品中大肠菌群显色检测的培养基 |
-
1990
- 1990-06-15 JP JP15706390A patent/JP2879698B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｚ６１． Ｈｙｇ．，Ｖｏｌ．１８９（１９８９）ｐ．２２５−２３４ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0451900A (ja) | 1992-02-20 |
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