JP2831535B2 - アリウム属植物再分化植物体の調製法 - Google Patents
アリウム属植物再分化植物体の調製法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、再分化植物体の調製法
に関する。さらに具体的には、本発明は、アリウム（Ａ
llium ）属植物を人工培養により増殖させる際に用いる
再分化植物体の調製法に関するものである。
に関する。さらに具体的には、本発明は、アリウム（Ａ
llium ）属植物を人工培養により増殖させる際に用いる
再分化植物体の調製法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】アリウム属植物としては、ニンニク、タ
マネギ、ラッキョウ、ネギ、ワケギ、ニラ、アサツキ等
が挙げられる。これらの植物は食用、香辛料として広く
利用されている。また、ニンニクは古くから薬効も認め
られていて、強精、強壮薬としても利用されている。栽
培は日本各地で行われているが、近年、ウイルスによる
被害が問題となっている。
マネギ、ラッキョウ、ネギ、ワケギ、ニラ、アサツキ等
が挙げられる。これらの植物は食用、香辛料として広く
利用されている。また、ニンニクは古くから薬効も認め
られていて、強精、強壮薬としても利用されている。栽
培は日本各地で行われているが、近年、ウイルスによる
被害が問題となっている。
【０００３】このようなウイルスとして、例えばニンニ
クでは、ニンニクモザイクウイルス（Ｇarlic mosaic v
irus ＧＭＶ）とニンニク潜在ウイルス（Ｇarlic late
nt virus ＧＬＶ）の２種が知られており、特に前者の
被害が著しく、モザイク症状を呈するのが特徴である。
ニンニクは栄養繁殖性の作物であるため、一度ウイルス
に感染すると後代にまで伝搬してウイルス汚染が広がる
ことが知られている。ニンニク以外のアリウム属植物で
も同様の被害が知られており、このようなウイルス汚染
に対する根本的な防除対策を講ずる必要に迫られてい
る。
クでは、ニンニクモザイクウイルス（Ｇarlic mosaic v
irus ＧＭＶ）とニンニク潜在ウイルス（Ｇarlic late
nt virus ＧＬＶ）の２種が知られており、特に前者の
被害が著しく、モザイク症状を呈するのが特徴である。
ニンニクは栄養繁殖性の作物であるため、一度ウイルス
に感染すると後代にまで伝搬してウイルス汚染が広がる
ことが知られている。ニンニク以外のアリウム属植物で
も同様の被害が知られており、このようなウイルス汚染
に対する根本的な防除対策を講ずる必要に迫られてい
る。
【０００４】一方、近年、植物の組織培養法が確立さ
れ、この技術を応用して各種栄養繁殖性植物のウイルス
除去が可能となってきている。一般に、ウイルスに汚染
された植物であっても茎頂組織（生長点、meristem）に
はウイルスが存在していないことが知られている。従っ
て、この茎頂組織を培養して植物体を再分化させること
により、ウイルス無感染の植物（ウイルスフリー株）を
得ることができる。また、植物組織を培養してカルスを
形成させ、そのカルスを継代培養していくことによりウ
イルスが除去されることも知られている。こうしてウイ
ルスが除去されたカルスより植物体を再分化させること
により、ウイルス無感染の植物を得ることもできる。
れ、この技術を応用して各種栄養繁殖性植物のウイルス
除去が可能となってきている。一般に、ウイルスに汚染
された植物であっても茎頂組織（生長点、meristem）に
はウイルスが存在していないことが知られている。従っ
て、この茎頂組織を培養して植物体を再分化させること
により、ウイルス無感染の植物（ウイルスフリー株）を
得ることができる。また、植物組織を培養してカルスを
形成させ、そのカルスを継代培養していくことによりウ
イルスが除去されることも知られている。こうしてウイ
ルスが除去されたカルスより植物体を再分化させること
により、ウイルス無感染の植物を得ることもできる。
【０００５】ニンニクに代表されるようなアリウム属植
物についても上記方法によりウイルスを除去することが
行われており、ウイルス無感染のアリウム属植物が実際
に栽培されている。ところで、上記のウイルス除去法に
は以下のような問題点がある。例えば、茎頂組織を培養
してウイルス無感染のアリウム属植物を得る方法では、
通常、一つの茎頂組織からは一個体もしくは数個体の植
物体しか得ることはできないので、多数の植物体を得る
には、それと同等数の茎頂組織を摘出することが必要で
ある。
物についても上記方法によりウイルスを除去することが
行われており、ウイルス無感染のアリウム属植物が実際
に栽培されている。ところで、上記のウイルス除去法に
は以下のような問題点がある。例えば、茎頂組織を培養
してウイルス無感染のアリウム属植物を得る方法では、
通常、一つの茎頂組織からは一個体もしくは数個体の植
物体しか得ることはできないので、多数の植物体を得る
には、それと同等数の茎頂組織を摘出することが必要で
ある。
【０００６】最近、植物ホルモン、特にサイトカイニン
を用いることによって茎頂から十数個体の植物体を再分
化させる培養法が報告されている。しかし、いずれにし
ても培養を行うためにはまず相当数の茎頂を摘出する必
要がある。茎頂組織はニンニク鱗片の基部にあり大きさ
は約０．５mm以下である。そのため茎頂の摘出には顕微
鏡下での作業が必須である。従って、茎頂摘出作業は煩
雑であり、また、作業効率が非常に低い。
を用いることによって茎頂から十数個体の植物体を再分
化させる培養法が報告されている。しかし、いずれにし
ても培養を行うためにはまず相当数の茎頂を摘出する必
要がある。茎頂組織はニンニク鱗片の基部にあり大きさ
は約０．５mm以下である。そのため茎頂の摘出には顕微
鏡下での作業が必須である。従って、茎頂摘出作業は煩
雑であり、また、作業効率が非常に低い。
【０００７】これらの問題点の解決策の一つとしては、
カルスから植物体を再分化させて大量に再分化植物体を
得る方法の利用が考えられる。すなわち、一度カルスを
誘導すればそのカルスを大量に増殖させることが可能で
あり、従って再分化植物体も大量に得ることができる。
しかし、カルス培養の際に頻発する変異のため、均一な
遺伝的性質を持ったアリウム属植物を得る上で依然とし
て解決すべき問題点が存在する。
カルスから植物体を再分化させて大量に再分化植物体を
得る方法の利用が考えられる。すなわち、一度カルスを
誘導すればそのカルスを大量に増殖させることが可能で
あり、従って再分化植物体も大量に得ることができる。
しかし、カルス培養の際に頻発する変異のため、均一な
遺伝的性質を持ったアリウム属植物を得る上で依然とし
て解決すべき問題点が存在する。
【０００８】他方、植物の組織培養技術の発展は遺伝子
の導入による形質転換植物、異種の植物細胞を融合させ
て得る体細胞雑種植物の作出も可能とし、いくつかの植
物では成功例が報告されている。しかし、このような技
術を利用するためには、まず、効率よく、再現性のある
再分化植物体調製法の確立が必須である。すなわち、形
質転換を行うためにはプロトプラストを調製し、遺伝子
を導入する方法や、植物の組織に細菌を感染させて遺伝
子を導入する方法などがあるが、いずれの場合も遺伝子
を導入した細胞、組織から植物体を再分化させる必要が
ある。同様に細胞融合においても融合させた細胞から植
物体を再分化させる必要がある。
の導入による形質転換植物、異種の植物細胞を融合させ
て得る体細胞雑種植物の作出も可能とし、いくつかの植
物では成功例が報告されている。しかし、このような技
術を利用するためには、まず、効率よく、再現性のある
再分化植物体調製法の確立が必須である。すなわち、形
質転換を行うためにはプロトプラストを調製し、遺伝子
を導入する方法や、植物の組織に細菌を感染させて遺伝
子を導入する方法などがあるが、いずれの場合も遺伝子
を導入した細胞、組織から植物体を再分化させる必要が
ある。同様に細胞融合においても融合させた細胞から植
物体を再分化させる必要がある。
【０００９】しかし、アリウム属植物では、効率よい再
分化植物体調製法が確立されたものが少ないため、形質
転換植物、体細胞雑種植物の作成に成功した例は少な
い。
分化植物体調製法が確立されたものが少ないため、形質
転換植物、体細胞雑種植物の作成に成功した例は少な
い。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】以上のように、ウイル
ス無感染（またはウイルスフリー）化、形質転換植物の
作出、体細胞雑種植物の作出等のいずれにおいても効率
よく再分化植物体を調製する方法の確立が望まれるであ
ろう。従って、本発明の目的はアリウム属植物の効率の
よい再分化植物体の調製法を提供することにある。
ス無感染（またはウイルスフリー）化、形質転換植物の
作出、体細胞雑種植物の作出等のいずれにおいても効率
よく再分化植物体を調製する方法の確立が望まれるであ
ろう。従って、本発明の目的はアリウム属植物の効率の
よい再分化植物体の調製法を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明は、アリウム属植
物の特定の植物体部分を器内で培養することにより対応
する植物の再分化植物体が効率よく得られることを見い
出し完成するに至った。従って、上記課題は、アリウム
属植物の普通葉下部および／または普通葉基部を外植片
として用いることを特徴とする前記植物の再分化植物体
の調製法の提供により解決される。
物の特定の植物体部分を器内で培養することにより対応
する植物の再分化植物体が効率よく得られることを見い
出し完成するに至った。従って、上記課題は、アリウム
属植物の普通葉下部および／または普通葉基部を外植片
として用いることを特徴とする前記植物の再分化植物体
の調製法の提供により解決される。
【００１２】さらに、本発明の好ましい態様としては、
アリウム属植物の普通葉として、特に普通葉基部を用い
る前記植物の再分化植物体の調製法を提供する。
アリウム属植物の普通葉として、特に普通葉基部を用い
る前記植物の再分化植物体の調製法を提供する。
【００１３】
【具体的な態様】（ａ）アリウム属植物体 本発明でいうアリウム属植物とは、ゆり科（Ｌiliacea
e）アリウム属に属する植物を指し、例えばアリウム・
サチバム〔Ａllium sativum Ｌ. Ｍakino 、一般名ニン
ニク〕、アリウム・セパ〔Ａllium cepa、一般名タマネ
ギ〕、アリウム・シネンセ〔Ａllium chinense、一般名
ラッキョウ〕、アリウム・アムペロプラズム〔Ａllium
ampeloprasum、一般英名great headed garlic あるいは
elephant garlic （エレファントガーリック）〕等が挙
げられる。
e）アリウム属に属する植物を指し、例えばアリウム・
サチバム〔Ａllium sativum Ｌ. Ｍakino 、一般名ニン
ニク〕、アリウム・セパ〔Ａllium cepa、一般名タマネ
ギ〕、アリウム・シネンセ〔Ａllium chinense、一般名
ラッキョウ〕、アリウム・アムペロプラズム〔Ａllium
ampeloprasum、一般英名great headed garlic あるいは
elephant garlic （エレファントガーリック）〕等が挙
げられる。
【００１４】（ｂ）外植片の調製 本発明では外植片（植え込みに用いる組織片）として、
普通葉下部、普通葉基部を用いる。これらの外植片はア
リウム属植物の鱗茎より摘出する。ここで、普通葉下部
とは普通葉の付け根より０．５〜１．０cm上部までをい
い、普通葉基部とは普通葉の付け根より０．１〜０．３
cm下部までをいう。なお、普通葉基部を外植片として使
用する場合、普通葉と普通葉との間の部分（図１におけ
るａの部分）を残すようにするのが好ましい。
普通葉下部、普通葉基部を用いる。これらの外植片はア
リウム属植物の鱗茎より摘出する。ここで、普通葉下部
とは普通葉の付け根より０．５〜１．０cm上部までをい
い、普通葉基部とは普通葉の付け根より０．１〜０．３
cm下部までをいう。なお、普通葉基部を外植片として使
用する場合、普通葉と普通葉との間の部分（図１におけ
るａの部分）を残すようにするのが好ましい。
【００１５】鱗茎から普通葉下部および／または普通葉
基部を摘出する方法としては、例えば、鱗茎または適当
な大きさに切断した鱗茎を次亜塩素酸ナトリウム、塩化
ベンザルコニウム、エチルアルコール等の植物細胞に影
響が少ない殺菌剤で殺菌し、ついで殺菌水で十分洗浄
後、貯蔵葉を取り除き、普通葉を露出させ上部を切断除
去した後、この普通葉下部および／または普通葉基部を
直接または適当な大きさに切りとり、培養に供する。本
発明ではこのように一つの鱗茎から普通葉下部および／
または普通葉基部を摘出し、多数の外植片を調製して培
養に供することが可能である。
基部を摘出する方法としては、例えば、鱗茎または適当
な大きさに切断した鱗茎を次亜塩素酸ナトリウム、塩化
ベンザルコニウム、エチルアルコール等の植物細胞に影
響が少ない殺菌剤で殺菌し、ついで殺菌水で十分洗浄
後、貯蔵葉を取り除き、普通葉を露出させ上部を切断除
去した後、この普通葉下部および／または普通葉基部を
直接または適当な大きさに切りとり、培養に供する。本
発明ではこのように一つの鱗茎から普通葉下部および／
または普通葉基部を摘出し、多数の外植片を調製して培
養に供することが可能である。
【００１６】（ｃ）使用培地 ここで培地としては少なくとも無機塩類、ビタミン等の
有機成分、炭素源、植物生長調節物質等の植物の生育に
必要な成分を含む任意の培地を用いることができる。本
発明で用いる基本培地としては、ムラシゲ・スクーグ培
地、リンスマイヤー・スクーグ培地が望ましい。そして
特に外植片として普通葉下部を用いる場合、この基本培
地に植物生長調節物質を添加することもできる。植物生
長調節物質としては、オーキシン（インドール−３−酢
酸、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸、１−ナフタレン
酢酸等）とサイトカイニン類（カイネチン、６−ベンジ
ルアミノプリン、ゼアチン等）とを組み合わせて用い
る。
有機成分、炭素源、植物生長調節物質等の植物の生育に
必要な成分を含む任意の培地を用いることができる。本
発明で用いる基本培地としては、ムラシゲ・スクーグ培
地、リンスマイヤー・スクーグ培地が望ましい。そして
特に外植片として普通葉下部を用いる場合、この基本培
地に植物生長調節物質を添加することもできる。植物生
長調節物質としては、オーキシン（インドール−３−酢
酸、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸、１−ナフタレン
酢酸等）とサイトカイニン類（カイネチン、６−ベンジ
ルアミノプリン、ゼアチン等）とを組み合わせて用い
る。
【００１７】培地は上記したような基本培地と必要な成
分とからなるが、アリウム属植物から再分化植物体を得
る場合は、基本培地としてリンスマイヤー・スクーグ培
地を用い、植物生長調節物質として１−ナフタレン酢酸
と６−ベンジルアミノプリンを０〜１０mg／Ｌ好ましく
は０〜１．０mg／Ｌ程度含有するものが好ましい。
分とからなるが、アリウム属植物から再分化植物体を得
る場合は、基本培地としてリンスマイヤー・スクーグ培
地を用い、植物生長調節物質として１−ナフタレン酢酸
と６−ベンジルアミノプリンを０〜１０mg／Ｌ好ましく
は０〜１．０mg／Ｌ程度含有するものが好ましい。
【００１８】（ｄ）培養 上記培地に（ａ）で示したようにして調製した外植片を
植え込み、植物のよく生育できる温度下（１０〜３０℃
好ましくは２０〜２６℃）５００〜１５０００ルクス、
好ましくは３０００〜８０００ルクスの照明下（１日あ
たり９〜１８時間好ましくは１２〜１６時間）で培養を
行うことにより１〜２ケ月で再分化植物体を得ることが
できる。なお（ｂ）においてウイルスフリーのアリウム
属植物の鱗茎を用いれば、得られる再分化植物体もウイ
ルスフリーである。
植え込み、植物のよく生育できる温度下（１０〜３０℃
好ましくは２０〜２６℃）５００〜１５０００ルクス、
好ましくは３０００〜８０００ルクスの照明下（１日あ
たり９〜１８時間好ましくは１２〜１６時間）で培養を
行うことにより１〜２ケ月で再分化植物体を得ることが
できる。なお（ｂ）においてウイルスフリーのアリウム
属植物の鱗茎を用いれば、得られる再分化植物体もウイ
ルスフリーである。
【００１９】
【実施例】以下実施例により本発明をさらに具体的に説
明するが、これらのいずれかの態様に本発明を限定する
ことを意図するものではない。実施例１ 本実施例では、アリウム属植物のうちニンニク（Ａlliu
m sativum Ｌ．）の普通葉下部を外植体とした再分化培
養についてその培養方法を示す。
明するが、これらのいずれかの態様に本発明を限定する
ことを意図するものではない。実施例１ 本実施例では、アリウム属植物のうちニンニク（Ａlliu
m sativum Ｌ．）の普通葉下部を外植体とした再分化培
養についてその培養方法を示す。
【００２０】培養の材料としては、福地ホワイト種のニ
ンニクを用いた。 １．材料の殺菌 まず、ニンニクの鱗茎を小鱗茎に分解した後、外皮を除
去した。次いで、塩化ベンザルコニウム溶液及び水で洗
浄後、小鱗茎の基部を約１cmの立方体状に切断した。こ
の切片を７０％エタノールに５分間浸漬した後、滅菌水
で洗浄した。
ンニクを用いた。 １．材料の殺菌 まず、ニンニクの鱗茎を小鱗茎に分解した後、外皮を除
去した。次いで、塩化ベンザルコニウム溶液及び水で洗
浄後、小鱗茎の基部を約１cmの立方体状に切断した。こ
の切片を７０％エタノールに５分間浸漬した後、滅菌水
で洗浄した。
【００２１】２．外植片の調製 材料の殺菌後、残っている貯蔵葉部分を取り除き、普通
葉を露出させた。普通葉の高さが０．５cm程度になるよ
うに上部を切りとり、残った普通葉下部をはぎ取って外
植片とした。
葉を露出させた。普通葉の高さが０．５cm程度になるよ
うに上部を切りとり、残った普通葉下部をはぎ取って外
植片とした。
【００２２】３．培地 リンスマイヤーとスクーグの培地（以下、ＬＳ培地）を
基本培地とし、これに植物ホルモンのナフタレン酢酸
（以下、ＮＡＡ）とベンジルアデニン（以下、ＢＡ）を
それぞれ０，０．０１，０．１，１．０mg／Ｌの濃度で
添加し、１６通りのホルモン条件を作製し（表１）、培
養に用いた。 ４．培養 調製済みの外植片を１６通りのホルモン条件の培地に基
部より挿し込み、２５℃、１６時間照明で静置培養を行
った。
基本培地とし、これに植物ホルモンのナフタレン酢酸
（以下、ＮＡＡ）とベンジルアデニン（以下、ＢＡ）を
それぞれ０，０．０１，０．１，１．０mg／Ｌの濃度で
添加し、１６通りのホルモン条件を作製し（表１）、培
養に用いた。 ４．培養 調製済みの外植片を１６通りのホルモン条件の培地に基
部より挿し込み、２５℃、１６時間照明で静置培養を行
った。
【００２３】５．植物体の再分化 培養を開始して２〜３週間目に、外植片基部からの再分
化が始まった。その後、２ケ月以内に発根した再分化植
物体を得ることができた。表１に各ホルモン条件下での
再分化の効率（外植片数に対する再分化植物体数の割
合）を示した。表に示したようにすべてのホルモン条件
下で再分化植物体が得られた。
化が始まった。その後、２ケ月以内に発根した再分化植
物体を得ることができた。表１に各ホルモン条件下での
再分化の効率（外植片数に対する再分化植物体数の割
合）を示した。表に示したようにすべてのホルモン条件
下で再分化植物体が得られた。
【００２４】特に、ＮＡＡ０．０１mg／Ｌ＋ＢＡ０．１
mg／ＬおよびＮＡＡ０．１mg／Ｌ＋ＢＡ１．０mg／Ｌ添
加培地では８０％以上の再分化効率を示した。この条件
では１鱗茎から約１５個体、１個体から約１００個体の
再分化植物体が得られることになる。また、再分化植物
体には小球を形成するものもあり、特にＢＡ０．０１mg
／Ｌ添加培地では再分化植物体の５０％が小球を形成し
た。
mg／ＬおよびＮＡＡ０．１mg／Ｌ＋ＢＡ１．０mg／Ｌ添
加培地では８０％以上の再分化効率を示した。この条件
では１鱗茎から約１５個体、１個体から約１００個体の
再分化植物体が得られることになる。また、再分化植物
体には小球を形成するものもあり、特にＢＡ０．０１mg
／Ｌ添加培地では再分化植物体の５０％が小球を形成し
た。
【００２５】
【表１】
【００２６】実施例２ 本実施例では、アリウム属植物のうちタマネギ（Ａlliu
m cepa）を用いた再分化培養法についてその培養法を示
す。培養は実施例１と同様に行った。すなわち普通葉外
植片を調製し、１６通りのホルモン条件下のＬＳ培地に
植え込んで培養を行った。
m cepa）を用いた再分化培養法についてその培養法を示
す。培養は実施例１と同様に行った。すなわち普通葉外
植片を調製し、１６通りのホルモン条件下のＬＳ培地に
植え込んで培養を行った。
【００２７】その結果を表２に示した。１６通りのホル
モン条件のうち２通りの条件で再分化植物体が得られ
た。そのうちＮＡＡ，ＢＡとも１．０mg／Ｌ添加では４
７％の再分化効率を示した。この条件ではタマネギ１個
体から約１５個体の再分化植物体が得られることにな
る。
モン条件のうち２通りの条件で再分化植物体が得られ
た。そのうちＮＡＡ，ＢＡとも１．０mg／Ｌ添加では４
７％の再分化効率を示した。この条件ではタマネギ１個
体から約１５個体の再分化植物体が得られることにな
る。
【００２８】
【表２】
【００２９】実施例３ 本実施例では、アリウム属植物のうちラッキョウ（Ａll
ium chinense）を用いた再分化培養法についてその培養
法を示す。培養は実施例１と同様に行った。すなわち普
通葉外植片を調製し、１６通りのホルモン条件下のＬＳ
培地に植え込んで培養を行った。
ium chinense）を用いた再分化培養法についてその培養
法を示す。培養は実施例１と同様に行った。すなわち普
通葉外植片を調製し、１６通りのホルモン条件下のＬＳ
培地に植え込んで培養を行った。
【００３０】その結果を表３に示した。１６通りのホル
モン条件のうち８通りの条件で再分化植物体が得られ
た。特に、ＮＡＡ１．０mg／Ｌ＋ＢＡ０．１mg／ＬとＮ
ＡＡ１．０mg／Ｌ＋ＢＡ１．０mg／Ｌの２通りのホルモ
ン条件下では１００％の再分化効率を示した。この条件
下ではラッキョウ１個体から約７０個体の再分化植物体
が得られることになる。
モン条件のうち８通りの条件で再分化植物体が得られ
た。特に、ＮＡＡ１．０mg／Ｌ＋ＢＡ０．１mg／ＬとＮ
ＡＡ１．０mg／Ｌ＋ＢＡ１．０mg／Ｌの２通りのホルモ
ン条件下では１００％の再分化効率を示した。この条件
下ではラッキョウ１個体から約７０個体の再分化植物体
が得られることになる。
【００３１】
【表３】
【００３２】実施例４ 本実施例では、アリウム属植物のうちワケギ（Ａllium
fistulosum Ｌ．var.caespitosum Ｍakino ）を用いた
再分化培養法についてその培養法を示す。培養は実施例
１と同様に行った。すなわち普通葉外植片を調製し、１
６通りのホルモン条件のＬＳ培地に植え込んで培養を行
った。
fistulosum Ｌ．var.caespitosum Ｍakino ）を用いた
再分化培養法についてその培養法を示す。培養は実施例
１と同様に行った。すなわち普通葉外植片を調製し、１
６通りのホルモン条件のＬＳ培地に植え込んで培養を行
った。
【００３３】その結果、１６通りのホルモン条件下のう
ち２通りの条件で再分化植物体が得られた。その内、最
適条件では４７％の再分化率を示した。この条件下では
ワケギ１個体から約３０個体の再分化植物体が得られる
ことになる。
ち２通りの条件で再分化植物体が得られた。その内、最
適条件では４７％の再分化率を示した。この条件下では
ワケギ１個体から約３０個体の再分化植物体が得られる
ことになる。
【００３４】
【００３５】実施例５ 本実施例では、アリウム属植物のうちニンニク（Ａlliu
m sativum Ｌ．）を用い、普通葉基部を外植片とした再
分化培養についてその培養方法を示す。培養の材料とし
ては、福地ホワイト種のニンニクを用いた。 １．材料の殺菌 まず、ニンニクの鱗茎を小鱗茎に分解した後、外皮を除
去した。次いで、塩化ベンザルコニウム溶液及び水で洗
浄後、小鱗茎の基部を約１cmの立方体状に切断した。こ
の切片を７０％エタノールに５分間浸漬した後、滅菌水
で洗浄した。
m sativum Ｌ．）を用い、普通葉基部を外植片とした再
分化培養についてその培養方法を示す。培養の材料とし
ては、福地ホワイト種のニンニクを用いた。 １．材料の殺菌 まず、ニンニクの鱗茎を小鱗茎に分解した後、外皮を除
去した。次いで、塩化ベンザルコニウム溶液及び水で洗
浄後、小鱗茎の基部を約１cmの立方体状に切断した。こ
の切片を７０％エタノールに５分間浸漬した後、滅菌水
で洗浄した。
【００３６】２．外植片の調製 材料の殺菌後、残っている貯蔵葉部分を取り除き、普通
葉を露出させ、普通葉をはぎ取った。そして普通葉をは
ぎ取った後の基部を約２mmの厚さに切りとり外植片とし
た。
葉を露出させ、普通葉をはぎ取った。そして普通葉をは
ぎ取った後の基部を約２mmの厚さに切りとり外植片とし
た。
【００３７】３．培地 リンスマイヤーとスクーグの培地（以下ＬＳ培地）を基
本培地とし、これに植物ホルモンのナフタレン酢酸（以
下ＮＡＡ）とベンジルアデニン（以下ＢＡ）をそれぞれ
０，０．１、または１．０mg／ｌの濃度で添加し、９通
りのホルモン条件を作製し培養に用いた。 ４．培養 調製済みの外植片を９通りのホルモン条件の培地に置床
し、２５℃、１６時間照明で静置培養を行った。
本培地とし、これに植物ホルモンのナフタレン酢酸（以
下ＮＡＡ）とベンジルアデニン（以下ＢＡ）をそれぞれ
０，０．１、または１．０mg／ｌの濃度で添加し、９通
りのホルモン条件を作製し培養に用いた。 ４．培養 調製済みの外植片を９通りのホルモン条件の培地に置床
し、２５℃、１６時間照明で静置培養を行った。
【００３８】５．植物体の再分化 培養を開始して５日目に、外植片からの再分化が始まっ
た。まず、外植片とした普通葉基部のうち、普通葉を除
いた後に残る普通葉と普通葉の間の組織から茎頂組織に
類似したドーム状の組織が形成された。このドーム状組
織は外部形態が茎頂に類似していた。また、組織切片の
観察の結果、ドーム状組織の内部構造も茎頂の内部構造
に類似しているものと考えられた。このドーム状組織が
緑化、生長し植物体となった。培養を開始して３週間目
には１cm以上の植物体となり、さらに培養を継続すると
発根し、鉢上げ可能な植物体となった。
た。まず、外植片とした普通葉基部のうち、普通葉を除
いた後に残る普通葉と普通葉の間の組織から茎頂組織に
類似したドーム状の組織が形成された。このドーム状組
織は外部形態が茎頂に類似していた。また、組織切片の
観察の結果、ドーム状組織の内部構造も茎頂の内部構造
に類似しているものと考えられた。このドーム状組織が
緑化、生長し植物体となった。培養を開始して３週間目
には１cm以上の植物体となり、さらに培養を継続すると
発根し、鉢上げ可能な植物体となった。
【００３９】前述した９通りのホルモン条件では、ホル
モンを含まない培地での再分化が最も効率が高く、１鱗
茎から２０−３０本の再分化植物体が得られた。通常、
ホワイト種ニンニク１個体は６個の小鱗茎を持っている
ので、１個体から１２０−１８０本の再分化植物体が得
られることになる。ＮＡＡおよびＢＡを含む培地では再
分化の効率はホルモンを含まない培地よりも低く、ま
た、ホルモンの濃度が高くなるにつれて再分化は抑制さ
れていた。結果を次の表５に示す。
モンを含まない培地での再分化が最も効率が高く、１鱗
茎から２０−３０本の再分化植物体が得られた。通常、
ホワイト種ニンニク１個体は６個の小鱗茎を持っている
ので、１個体から１２０−１８０本の再分化植物体が得
られることになる。ＮＡＡおよびＢＡを含む培地では再
分化の効率はホルモンを含まない培地よりも低く、ま
た、ホルモンの濃度が高くなるにつれて再分化は抑制さ
れていた。結果を次の表５に示す。
【００４０】
【表５】 このように普通葉の基部を外植片とした再分化培養は、
短期間で再分化植物体が得られること、再分化効率が高
いこと、再分化に植物ホルモンの添加を必要としないこ
となどの特徴をもっている。
短期間で再分化植物体が得られること、再分化効率が高
いこと、再分化に植物ホルモンの添加を必要としないこ
となどの特徴をもっている。
【００４１】６．小球形成 ここに示した培養法において、材料とするニンニクを予
め低温処理することにより、再分化植物体に小球を形成
させることができた。すなわち、２週間以上４℃前後の
低温下でニンニクを貯蔵した後に培養に用いることによ
って得られる再分化植物体は高率で小球を形成した。特
に２か月以上低温処理をしたニンニク鱗茎から得られた
再分化植物体は９０％以上のものが小球を形成した。
め低温処理することにより、再分化植物体に小球を形成
させることができた。すなわち、２週間以上４℃前後の
低温下でニンニクを貯蔵した後に培養に用いることによ
って得られる再分化植物体は高率で小球を形成した。特
に２か月以上低温処理をしたニンニク鱗茎から得られた
再分化植物体は９０％以上のものが小球を形成した。
【００４２】この小球は培養容器から取り出して、保存
することが可能で、また通常の用土に植え付けることに
よって発芽し、栽培を行うことが可能である。したがっ
て、通常、培養によって得られた再分化植物体を培養容
器から取り出して栽培する際に必要である順化作業が不
要である。
することが可能で、また通常の用土に植え付けることに
よって発芽し、栽培を行うことが可能である。したがっ
て、通常、培養によって得られた再分化植物体を培養容
器から取り出して栽培する際に必要である順化作業が不
要である。
【００４３】
【発明の効果】本発明による再分化植物体の調製法によ
れば、アリウム属再分化植物体を大量に得ることができ
る。すなわち、従来のアリウム属植物の茎頂培養および
カルス培養により再分化植物体を得る方法には、前記し
たような問題があったのであるが、これに対して本発明
は普通葉を外植片とするため煩雑な茎頂摘出作業を行う
必要がなく、容易に、大量の外植片を調製することが可
能である。
れば、アリウム属再分化植物体を大量に得ることができ
る。すなわち、従来のアリウム属植物の茎頂培養および
カルス培養により再分化植物体を得る方法には、前記し
たような問題があったのであるが、これに対して本発明
は普通葉を外植片とするため煩雑な茎頂摘出作業を行う
必要がなく、容易に、大量の外植片を調製することが可
能である。
【００４４】従って、効率よく大量の再分化植物体を得
ることができる。また外植片から直接植物体が再分化す
るため、培養に要する期間が１〜２ケ月と短く、変異も
少ない。ここで、培養に用いるアリウム属植物としてウ
イルスフリー株を用いれば、再分化植物体もウイルスフ
リーであり、ウイルスフリー株の大量増殖も可能であ
る。
ることができる。また外植片から直接植物体が再分化す
るため、培養に要する期間が１〜２ケ月と短く、変異も
少ない。ここで、培養に用いるアリウム属植物としてウ
イルスフリー株を用いれば、再分化植物体もウイルスフ
リーであり、ウイルスフリー株の大量増殖も可能であ
る。
【００４５】また普通葉下部、普通葉基部に遺伝子を導
入した後、本発明による再分化植物体の調製法に供すれ
ばアリウム属の形質転換植物体を得ることができる。更
に、再分化植物体に発芽可能な小球を形成させることが
できるため、順化作業を必要とせず、また小球は保存も
可能で任意の時期に植えこみを行うことができる。
入した後、本発明による再分化植物体の調製法に供すれ
ばアリウム属の形質転換植物体を得ることができる。更
に、再分化植物体に発芽可能な小球を形成させることが
できるため、順化作業を必要とせず、また小球は保存も
可能で任意の時期に植えこみを行うことができる。
【図１】ニンニク鱗茎の断面を略図的に示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 育種学雑誌，第38巻別冊２号 （1988），ｐ76−77 育種学雑誌，第39巻別冊１号 （1989），ｐ26−27 植物組織培養，第８巻第３号 （1991），ｐ166−170 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A01H 4/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (3)
- 【請求項１】 アリウム（Ａllium ）属植物の茎頂並び
に普通葉を除いた普通葉基部から成る外植片を植物ホル
モン非存在下で培養し、該外植片から再分化を開始させ
ることを特徴とする再分化植物体の調製法。 - 【請求項２】 普通葉基部が普通葉の付け根から０．１
〜０．３cm下部までから成る請求項１に記載の調製法。 - 【請求項３】 アリウム（Ａllium ）属植物がニンニク
である請求項１または２に記載の調製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5175577A JP2831535B2 (ja) | 1992-11-13 | 1993-07-15 | アリウム属植物再分化植物体の調製法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30402792 | 1992-11-13 | ||
| JP4-304027 | 1992-11-13 | ||
| JP5175577A JP2831535B2 (ja) | 1992-11-13 | 1993-07-15 | アリウム属植物再分化植物体の調製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06197650A JPH06197650A (ja) | 1994-07-19 |
| JP2831535B2 true JP2831535B2 (ja) | 1998-12-02 |
Family
ID=26496811
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5175577A Expired - Lifetime JP2831535B2 (ja) | 1992-11-13 | 1993-07-15 | アリウム属植物再分化植物体の調製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2831535B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1209007C (zh) * | 1999-06-22 | 2005-07-06 | 湧永制药株式会社 | 制备无病毒植物的方法 |
-
1993
- 1993-07-15 JP JP5175577A patent/JP2831535B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 植物組織培養，第８巻第３号（１９９１），ｐ１６６−１７０ |
| 育種学雑誌，第３８巻別冊２号（１９８８），ｐ７６−７７ |
| 育種学雑誌，第３９巻別冊１号（１９８９），ｐ２６−２７ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06197650A (ja) | 1994-07-19 |
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