JP2753473B2 - 細胞又は組織培養物を成長させる組立体 - Google Patents
細胞又は組織培養物を成長させる組立体Info
- Publication number
- JP2753473B2 JP2753473B2 JP8142725A JP14272596A JP2753473B2 JP 2753473 B2 JP2753473 B2 JP 2753473B2 JP 8142725 A JP8142725 A JP 8142725A JP 14272596 A JP14272596 A JP 14272596A JP 2753473 B2 JP2753473 B2 JP 2753473B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- assembly
- growing
- tissue culture
- well
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
- B01L3/5085—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5025—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures for parallel transport of multiple samples
- B01L3/50255—Multi-well filtration
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
- B01L3/5085—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates
- B01L3/50853—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates with covers or lids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/10—Petri dish
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/12—Well or multiwell plates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/38—Caps; Covers; Plugs; Pouring means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/02—Membranes; Filters
- C12M25/04—Membranes; Filters in combination with well or multiwell plates, i.e. culture inserts
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/809—Incubators or racks or holders for culture plates or containers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、生体外で細胞又は
組織培養物を成長させる組立体及び組立体基部、より具
体的には、栄養培地内に細胞又はその他の生物物質を垂
下させた容器及び組立体に関する。
組織培養物を成長させる組立体及び組立体基部、より具
体的には、栄養培地内に細胞又はその他の生物物質を垂
下させた容器及び組立体に関する。
【０００２】
【従来の技術】細胞を培養する各種型式の組立体が開発
されている。かかる組立体は、一以上のウェルを画成す
る基部と、ウェル内に取り外し可能に配置された細胞培
養インサートと、ウェルの一部分を、又は完全に覆い得
るように該基部に取り付けられたカバーとを備えること
が多い。米国特許第４，６８６，１９０号、同第４，８
７１，６７４号、同第５，０２６，６４９号、同第５，
３５８，８７１号及び同第５，３６６，８９３号には、
細胞を培養する各種の組立体が開示されている。こうし
た特許に係る全ての組立体は、透過性のある底部を有す
る細胞培養インサートを採用する。この細胞培養インサ
ートの底部は、インサートの頂部分から周方向に伸長す
るフランジによりウェル内に垂下される。その他の型式
のインサートは、ウェルの底面にインサートを支持し、
該インサートの透過性のある底部が底面の上方に垂下さ
れるようにする。
されている。かかる組立体は、一以上のウェルを画成す
る基部と、ウェル内に取り外し可能に配置された細胞培
養インサートと、ウェルの一部分を、又は完全に覆い得
るように該基部に取り付けられたカバーとを備えること
が多い。米国特許第４，６８６，１９０号、同第４，８
７１，６７４号、同第５，０２６，６４９号、同第５，
３５８，８７１号及び同第５，３６６，８９３号には、
細胞を培養する各種の組立体が開示されている。こうし
た特許に係る全ての組立体は、透過性のある底部を有す
る細胞培養インサートを採用する。この細胞培養インサ
ートの底部は、インサートの頂部分から周方向に伸長す
るフランジによりウェル内に垂下される。その他の型式
のインサートは、ウェルの底面にインサートを支持し、
該インサートの透過性のある底部が底面の上方に垂下さ
れるようにする。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上述の特許に開示され
た従来技術の組立体の殆どは、略円筒状のウェルと、該
ウェル内に配置された略円筒状又は截頭円錐形のインサ
ートとを備えている。従って、ピペット等を使用してウ
ェル内へ操作（アクセス）することは、比較的困難であ
る。ある種の従来技術の組立体において、インサートの
側壁にピペット開口部が形成されている。かかるピペッ
ト開口部の寸法は、インサートの寸法により制限され
る。その他の組立体において、インサートとウェルの外
壁との間におけるスペースは狭い。このインサートは、
ウェル内へ操作するためには、移動させるか、又は完全
に取り外さなければならないことが多い。多くの従来技
術の組立体の個々のウェル間のスペースも又、極めて狭
い。
た従来技術の組立体の殆どは、略円筒状のウェルと、該
ウェル内に配置された略円筒状又は截頭円錐形のインサ
ートとを備えている。従って、ピペット等を使用してウ
ェル内へ操作（アクセス）することは、比較的困難であ
る。ある種の従来技術の組立体において、インサートの
側壁にピペット開口部が形成されている。かかるピペッ
ト開口部の寸法は、インサートの寸法により制限され
る。その他の組立体において、インサートとウェルの外
壁との間におけるスペースは狭い。このインサートは、
ウェル内へ操作するためには、移動させるか、又は完全
に取り外さなければならないことが多い。多くの従来技
術の組立体の個々のウェル間のスペースも又、極めて狭
い。
【０００４】本発明の一つの目的は、細胞又は組織の培
養に使用される組立体を提供することである。本発明に
よるこの組立体は、一以上のウェルを画成する基部と、
少なくとも一つのウェル内に取り外し可能に配置された
細胞培養インサートとを備えている。ウェルの各々は、
複数のコーナ部分を有する略矩形の上方開口部を備えて
いる。細胞培養インサートをウェル内に配置したとき、
ウェル開口部の一以上のコーナ部分を通じてウェル内へ
の操作が可能となる。
養に使用される組立体を提供することである。本発明に
よるこの組立体は、一以上のウェルを画成する基部と、
少なくとも一つのウェル内に取り外し可能に配置された
細胞培養インサートとを備えている。ウェルの各々は、
複数のコーナ部分を有する略矩形の上方開口部を備えて
いる。細胞培養インサートをウェル内に配置したとき、
ウェル開口部の一以上のコーナ部分を通じてウェル内へ
の操作が可能となる。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明の好適な実施例に
よれば、該ウェルは、４つのコーナ部分を画成する、対
向し且つ略平行な壁を二対、備えている。この細胞培養
インサートは、該インサートの頂部分と少なくとも一つ
のコーナ部分との間に開口部が画成されるようにウェル
内に配置される。この開口部は、ウェルの底部への操作
を可能にする。これらの操作用開口部は、ウェルの４つ
のコーナ部分の全てに形成されることが好ましい。
よれば、該ウェルは、４つのコーナ部分を画成する、対
向し且つ略平行な壁を二対、備えている。この細胞培養
インサートは、該インサートの頂部分と少なくとも一つ
のコーナ部分との間に開口部が画成されるようにウェル
内に配置される。この開口部は、ウェルの底部への操作
を可能にする。これらの操作用開口部は、ウェルの４つ
のコーナ部分の全てに形成されることが好ましい。
【０００６】各ウェルの壁は、細胞インサートの対向す
る一対のフランジを支持する段付き部分を備えている。
これらの段付き部分は、インサートがウェルに関して回
転するのを防止する。このインサートは、該インサート
の本体から反対方向に伸長する一対のフランジを備える
ことが好ましい。これらのフランジは、ウェルの側壁の
段付き部分上に配置されている。
る一対のフランジを支持する段付き部分を備えている。
これらの段付き部分は、インサートがウェルに関して回
転するのを防止する。このインサートは、該インサート
の本体から反対方向に伸長する一対のフランジを備える
ことが好ましい。これらのフランジは、ウェルの側壁の
段付き部分上に配置されている。
【０００７】また、本発明により、細胞培養インサート
を支持する基部が提供される。該基部は、一以上のウェ
ルを備えており、そのウェルの各々は、対向する二対の
側壁と、底壁とを備えている。突起が側壁から内方に伸
長している。該突起の各々は、細胞培養インサートの縁
部を支持する段部分を含む。この段部分の各々は、隣接
する側壁に関して斜めの角度で伸長する垂直面を備えて
いる。このことは、インサートをウェルに関して対角状
に取り付けることを可能にする。各突起からウェルの中
央に向けて細長のリッジ（うね状突起部）が伸長するこ
とが好ましい。該リッジの高さは、側壁よりも実質的に
低い。
を支持する基部が提供される。該基部は、一以上のウェ
ルを備えており、そのウェルの各々は、対向する二対の
側壁と、底壁とを備えている。突起が側壁から内方に伸
長している。該突起の各々は、細胞培養インサートの縁
部を支持する段部分を含む。この段部分の各々は、隣接
する側壁に関して斜めの角度で伸長する垂直面を備えて
いる。このことは、インサートをウェルに関して対角状
に取り付けることを可能にする。各突起からウェルの中
央に向けて細長のリッジ（うね状突起部）が伸長するこ
とが好ましい。該リッジの高さは、側壁よりも実質的に
低い。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明の好適な実施例が、図１乃
至図８に図示されている。６つのウェルを有する透明な
基部１１２と、該基部に取り外し可能に取り付けること
のできる一以上の細胞培養インサート１１４とを含む組
立体１１０が提供される。基部及びインサートの上に嵌
まり得るようにカバー１１６が配置される。
至図８に図示されている。６つのウェルを有する透明な
基部１１２と、該基部に取り外し可能に取り付けること
のできる一以上の細胞培養インサート１１４とを含む組
立体１１０が提供される。基部及びインサートの上に嵌
まり得るようにカバー１１６が配置される。
【０００９】この組立体の基部１１２は、複数の略垂直
壁１１８と、略水平な底部壁１２０とを備えている。こ
れらの壁は、多数ウェルの構造体を画成し、そのウェル
の開口部の各々は、略方形の形状をしている。ウェルの
各々は、水平方向の壁部分１２２により隣接するウェル
から分離されている。周縁フランジ１２４が水平方向壁
部分から伸長している。該周縁フランジ１２４は、個々
のウェルを分離する壁部分１２２と同一面状の水平部分
１２４Ａと、垂直部分１２４Ｂと、外方に伸長する張出
し部１２４Ｃとを備えている。壁部分の各々は、少なく
とも約１０ｍｍの幅であることが好ましい。
壁１１８と、略水平な底部壁１２０とを備えている。こ
れらの壁は、多数ウェルの構造体を画成し、そのウェル
の開口部の各々は、略方形の形状をしている。ウェルの
各々は、水平方向の壁部分１２２により隣接するウェル
から分離されている。周縁フランジ１２４が水平方向壁
部分から伸長している。該周縁フランジ１２４は、個々
のウェルを分離する壁部分１２２と同一面状の水平部分
１２４Ａと、垂直部分１２４Ｂと、外方に伸長する張出
し部１２４Ｃとを備えている。壁部分の各々は、少なく
とも約１０ｍｍの幅であることが好ましい。
【００１０】垂直壁１１８の各々は、柱状体の形態によ
る内方伸長突起１２６を備えている。該突起の各々は、
各ウェルと境を接する各垂直壁の略中間点に配置されて
いる。従って、これらの突起は、対向する対として形成
されている。該突起の各々は、反対側の突起の平坦面に
対して平行な平坦面１２６Ａを備えている。これらの突
起は、略台形の断面形状をしている。図７には、これら
の特徴が最も明確に図示されている。各ウェルの外面に
は、対応する台形の凹部が形成されている。
る内方伸長突起１２６を備えている。該突起の各々は、
各ウェルと境を接する各垂直壁の略中間点に配置されて
いる。従って、これらの突起は、対向する対として形成
されている。該突起の各々は、反対側の突起の平坦面に
対して平行な平坦面１２６Ａを備えている。これらの突
起は、略台形の断面形状をしている。図７には、これら
の特徴が最も明確に図示されている。各ウェルの外面に
は、対応する台形の凹部が形成されている。
【００１１】図５に図示するように、各突起の頂部に
は、水平面１２８及び垂直面１３０を含む段状部が形成
されている。該垂直面１３０は、垂直壁１１８に関して
斜めの角度で伸長する部分を備えており、これらの垂直
面及び垂直壁は、図６に最も良く図示するように、それ
ぞれ隣接している。
は、水平面１２８及び垂直面１３０を含む段状部が形成
されている。該垂直面１３０は、垂直壁１１８に関して
斜めの角度で伸長する部分を備えており、これらの垂直
面及び垂直壁は、図６に最も良く図示するように、それ
ぞれ隣接している。
【００１２】別個の複数のリッジ状（うね状）突起１３
４が各ウェルの底部壁１２０から上方に伸長している。
これらの突起１３４は、該突起１３４が隣接するそれぞ
れの突起１２６に関して略垂直に伸長している。突起１
３４は高さが等しく、また、側壁１１８の高さよりも実
質的に低い。これら突起はウェルの中心に向けて伸長し
ている。
４が各ウェルの底部壁１２０から上方に伸長している。
これらの突起１３４は、該突起１３４が隣接するそれぞ
れの突起１２６に関して略垂直に伸長している。突起１
３４は高さが等しく、また、側壁１１８の高さよりも実
質的に低い。これら突起はウェルの中心に向けて伸長し
ている。
【００１３】細胞培養インサート１１４は、米国特許第
５，３５８，８７１号及び同第５，３６６，８９３号に
開示されたインサートと略同一である。インサートの各
々は、略円筒状又は截頭円錐形の壁１３８を有する透明
な本体１３６を備えている。微孔性の薄膜１４０が壁１
３８の底縁部に固定されている。一対のフランジ１４２
が該本体の頂縁部の直径方向に対向する部分から外方に
伸長している。縁部とも称することのできるこれらのフ
ランジ１４２は、基部にインサートを取り付けたとき、
それぞれの段状部の水平面１２８の上に定着する。フラ
ンジの縁部の部分は、段状部の垂直面１３０に隣接して
おり、これにより、インサートが著しく水平方向に動い
たり、回転しないようにする。フランジの各々は、米国
特許第５，３５８，８７１号に示された培養容器内で使
用し易くする、中央に形成された切欠きを備えている。
このインサートの本体は、円筒状ウェル内でインサート
を使用するときに安定性を付与する、外方に突出する一
対のタブ１４５を更に備えている。本明細書に開示した
ように、方形のウェルを有する基部でのみインサート１
１４を使用する場合には、切欠き及びタブの双方を省略
することができる。こうした特徴は、簡単に、多数の異
なる基部で使用するときの適応性を増す。
５，３５８，８７１号及び同第５，３６６，８９３号に
開示されたインサートと略同一である。インサートの各
々は、略円筒状又は截頭円錐形の壁１３８を有する透明
な本体１３６を備えている。微孔性の薄膜１４０が壁１
３８の底縁部に固定されている。一対のフランジ１４２
が該本体の頂縁部の直径方向に対向する部分から外方に
伸長している。縁部とも称することのできるこれらのフ
ランジ１４２は、基部にインサートを取り付けたとき、
それぞれの段状部の水平面１２８の上に定着する。フラ
ンジの縁部の部分は、段状部の垂直面１３０に隣接して
おり、これにより、インサートが著しく水平方向に動い
たり、回転しないようにする。フランジの各々は、米国
特許第５，３５８，８７１号に示された培養容器内で使
用し易くする、中央に形成された切欠きを備えている。
このインサートの本体は、円筒状ウェル内でインサート
を使用するときに安定性を付与する、外方に突出する一
対のタブ１４５を更に備えている。本明細書に開示した
ように、方形のウェルを有する基部でのみインサート１
１４を使用する場合には、切欠き及びタブの双方を省略
することができる。こうした特徴は、簡単に、多数の異
なる基部で使用するときの適応性を増す。
【００１４】カバー１１６は、頂部壁１４６と、下方に
伸長するフランジ１４８とを備えている。基部と同様
に、該カバー１１６は、ポリスチレン又はＰＥＴＧのよ
うな透明で略剛性なプラスチック材料で出来たものであ
ることが好ましい。該カバーの頂部壁は、カバーをした
組立体の積み重ねを容易にする一対の平行なリッジ（う
ね状突起部）１５０を備えている。該カバーは、図３及
び図４に図示するように、基部の上面に係合する、下方
に延びている凹部１５２を更に備えている。該カバーの
フランジ１４８は、図２に最も良く図示するように、カ
バーの縁端部分の凹部１５２に接続する、内方に伸長す
る凹部１５４を備えている。これらの内方伸長凹部１５
４は、基部１１２のフランジの垂直部分１２４Ｂに係合
可能である。最後に、カバー・フランジ１４８のコーナ
部分には、三角形のへこみ部１５６が形成されている。
図８に図示するように、これらのへこみ部は、フランジ
１２４のコーナ部分に係合する。凹部１５２、１５４及
びへこみ部１５６は、カバー１１６が基部１１２に固着
するのを防止する。
伸長するフランジ１４８とを備えている。基部と同様
に、該カバー１１６は、ポリスチレン又はＰＥＴＧのよ
うな透明で略剛性なプラスチック材料で出来たものであ
ることが好ましい。該カバーの頂部壁は、カバーをした
組立体の積み重ねを容易にする一対の平行なリッジ（う
ね状突起部）１５０を備えている。該カバーは、図３及
び図４に図示するように、基部の上面に係合する、下方
に延びている凹部１５２を更に備えている。該カバーの
フランジ１４８は、図２に最も良く図示するように、カ
バーの縁端部分の凹部１５２に接続する、内方に伸長す
る凹部１５４を備えている。これらの内方伸長凹部１５
４は、基部１１２のフランジの垂直部分１２４Ｂに係合
可能である。最後に、カバー・フランジ１４８のコーナ
部分には、三角形のへこみ部１５６が形成されている。
図８に図示するように、これらのへこみ部は、フランジ
１２４のコーナ部分に係合する。凹部１５２、１５４及
びへこみ部１５６は、カバー１１６が基部１１２に固着
するのを防止する。
【００１５】使用時、基部１１２のウェル内に一以上の
細胞培養インサート１１４を配置する。これらのウェル
は、識別が容易であるように番号を付けることが好まし
い。インサートが所定の位置にあるときでも見えるよう
に、各底部壁１２０のコーナ部分に番号を付すことがで
きる。
細胞培養インサート１１４を配置する。これらのウェル
は、識別が容易であるように番号を付けることが好まし
い。インサートが所定の位置にあるときでも見えるよう
に、各底部壁１２０のコーナ部分に番号を付すことがで
きる。
【００１６】壁の突起１２６により画成される段状部
は、各インサートの半径方向伸長フランジ１４２が各ウ
ェルの対角状に対向するコーナ部分付近に配置されるよ
うな構造とされる。この結果、インサートの上方縁部
と、ウェルの対角状に対向するコーナ部分との間に比較
的大きい開口部が二つ形成され、また、各フランジの外
縁部とウェルの対角状に対向する他のコーナ部分との間
により小さい開口部が二つ形成される。これらの開口部
は全て、その内部にピペットを挿入するのに十分な大き
さであることが好ましいが、この目的のため、より大き
い開口部を採用することも容易である。
は、各インサートの半径方向伸長フランジ１４２が各ウ
ェルの対角状に対向するコーナ部分付近に配置されるよ
うな構造とされる。この結果、インサートの上方縁部
と、ウェルの対角状に対向するコーナ部分との間に比較
的大きい開口部が二つ形成され、また、各フランジの外
縁部とウェルの対角状に対向する他のコーナ部分との間
により小さい開口部が二つ形成される。これらの開口部
は全て、その内部にピペットを挿入するのに十分な大き
さであることが好ましいが、この目的のため、より大き
い開口部を採用することも容易である。
【００１７】これらの段状部は、インサートのフランジ
１４２を受け入れ且つ該インサートをウェルに関して略
一定の位置に保ち得るように設計されている。水平面で
はある程度の自由度が許容されるが、これらの段状部の
垂直面１３０は、インサートが著しく並進したり、又は
回転動作するのを防止する。
１４２を受け入れ且つ該インサートをウェルに関して略
一定の位置に保ち得るように設計されている。水平面で
はある程度の自由度が許容されるが、これらの段状部の
垂直面１３０は、インサートが著しく並進したり、又は
回転動作するのを防止する。
【００１８】微孔性の薄膜１４０がリッジ状突起１３４
の上面の真上（例えば、１乃至３ｍｍ）で且つウェルの
底部壁１２０から十分に上方の位置にあるように、イン
サート本体の高さが設定される。本発明の好適な実施例
において、これらのリッジ状突起の高さは、約８ｍｍで
ある。これらのインサートの高さは、約１５ｍｍ乃至２
０ｍｍの範囲とすることができる。本発明の好適な実施
例におけるインサート本体の直径は、約３０ｍｍであ
る。インサート本体の縁部とウェルの２つのコーナ部分
の各々との間における約１０ｍｍの距離のため、インサ
ートを移動させずに、ピペット又はその他の器具をウェ
ル内に挿入するのに十分であるスペースが提供される。
の上面の真上（例えば、１乃至３ｍｍ）で且つウェルの
底部壁１２０から十分に上方の位置にあるように、イン
サート本体の高さが設定される。本発明の好適な実施例
において、これらのリッジ状突起の高さは、約８ｍｍで
ある。これらのインサートの高さは、約１５ｍｍ乃至２
０ｍｍの範囲とすることができる。本発明の好適な実施
例におけるインサート本体の直径は、約３０ｍｍであ
る。インサート本体の縁部とウェルの２つのコーナ部分
の各々との間における約１０ｍｍの距離のため、インサ
ートを移動させずに、ピペット又はその他の器具をウェ
ル内に挿入するのに十分であるスペースが提供される。
【００１９】一以上のウェル内に培地を投入し、また、
薄膜１４０上に組織又は細胞を載せたならば、その培地
により細胞又は細胞培養物を培養することができる。組
立体の汚染を防止するため、カバー１１６を基部に取り
付ける。組立体の全ての構成部品は略透明であるため、
スペースを取り外さずに組立体内で行われる実験を観察
することができる。上述したように、カバーにおける各
種の凹部１５２、１５４、及びへこみ部１５６のため、
基部の上に比較的ゆるく取り付けることが確実となる。
このことは、基部又はウェルを妨害せずに、カバーを容
易に取り外すことを可能にする。
薄膜１４０上に組織又は細胞を載せたならば、その培地
により細胞又は細胞培養物を培養することができる。組
立体の汚染を防止するため、カバー１１６を基部に取り
付ける。組立体の全ての構成部品は略透明であるため、
スペースを取り外さずに組立体内で行われる実験を観察
することができる。上述したように、カバーにおける各
種の凹部１５２、１５４、及びへこみ部１５６のため、
基部の上に比較的ゆるく取り付けることが確実となる。
このことは、基部又はウェルを妨害せずに、カバーを容
易に取り外すことを可能にする。
【００２０】添付図面に関して、本発明の一例としての
実施例に関して説明したが、本発明は、これらの実施例
にのみ限定されるものではなく、本発明の範囲又は精神
から逸脱せずに、当業者により各種のその他の変更及び
応用例が可能であることが理解される。
実施例に関して説明したが、本発明は、これらの実施例
にのみ限定されるものではなく、本発明の範囲又は精神
から逸脱せずに、当業者により各種のその他の変更及び
応用例が可能であることが理解される。
【図１】本発明による細胞培養組立体の平面斜視図であ
る。
る。
【図２】図１の組立体の分解平面斜視図である。
【図３】図１の線３−３に沿った断面図である。
【図４】図１の線４−４に沿った断面図である。
【図５】組立体のカバーの基部及び端部分の拡大断面図
である。
である。
【図６】組立体の基部のコーナ部分の平面図である。
【図７】ウェル内に配置された細胞培養インサートを示
す、基部のコーナ部分の平面図である。
す、基部のコーナ部分の平面図である。
【図８】図１の線８−８に沿った拡大断面図である。
【図９】組立体のカバーの平面図である。
１１０ 細胞培養組立体 １１２ 細胞培養組
立体の基部 １１４ 細胞培養インサート １１６ カバー １１８ 基部の垂直壁 １２０ 基部の底壁 １２２ 壁部分 １２４ 周縁フラン
ジ １２４Ａ 周縁フランジの水平部分 １２４Ｂ 周縁フランジの垂直部分 １２４Ｃ 周縁フランジの張出し部 １２６ 垂直壁の内方伸長突起 １２６Ａ 突起の平
坦面 １２８ 突起の水平面 １３０ 突起の垂直
面 １３４ リッジ状突起 １３６ インサート
の本体 １３８ インサートの壁 １４０ 薄膜 １４２ フランジ １４５ タブ １４６ 頂部壁 １４８ フランジ １５０ リッジ １５２ カバーの下
方伸長凹部 １５４ カバーの内方伸長凹部 １５６ カバーのへ
こみ部
立体の基部 １１４ 細胞培養インサート １１６ カバー １１８ 基部の垂直壁 １２０ 基部の底壁 １２２ 壁部分 １２４ 周縁フラン
ジ １２４Ａ 周縁フランジの水平部分 １２４Ｂ 周縁フランジの垂直部分 １２４Ｃ 周縁フランジの張出し部 １２６ 垂直壁の内方伸長突起 １２６Ａ 突起の平
坦面 １２８ 突起の水平面 １３０ 突起の垂直
面 １３４ リッジ状突起 １３６ インサート
の本体 １３８ インサートの壁 １４０ 薄膜 １４２ フランジ １４５ タブ １４６ 頂部壁 １４８ フランジ １５０ リッジ １５２ カバーの下
方伸長凹部 １５４ カバーの内方伸長凹部 １５６ カバーのへ
こみ部
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ティモシー・エイ・スティーブンス アメリカ合衆国ニュージャージー州 07940，マディソン，メイン・ストリー ト 171，アパートメント 57 (56)参考文献 米国特許4686190（ＵＳ，Ａ) 米国特許4871674（ＵＳ，Ａ) 米国特許5026649（ＵＳ，Ａ) 米国特許5358871（ＵＳ，Ａ) 米国特許5366893（ＵＳ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12M 1/00 - 3/10
Claims (10)
- 【請求項１】 細胞又は組織培養物を成長させる組立体
にして、 底壁と、複数の側壁とによって囲まれたウェルであっ
て、該側壁が、複数のコーナ部分を含む略矩形のウェル
開口部を画成している、前記ウェルを画成する基部と、 該基部により画成された複数の支持面と、 前記基部に取り外し可能に取り付けられた細胞培養イン
サートであって、包囲体と、上端部と、底端部とを画成
する本体と、該本体の前記底端部に固着された透過性の
薄膜と、該本体の直径方向において互いに対向する部分
から各々半径方向外方に伸長する一対のフランジと、を
備える前記細胞培養インサートとを備え、 前記フランジが、前記支持面により支持され且つ前記ウ
ェル開口部の対角状に対向するコーナ部分に向けて伸長
しており、これにより、前記本体と前記ウェル開口部の
対角状に対向する一対のコーナ部分との間に比較的大き
い一対の開口部が画成され、 前記フランジと前記ウェル開口部の対角状に対向する第
二の対のコーナ部分との間に比較的小さい一対の開口部
が画成され、 前記透過性のある薄膜が、前記ウェルの底壁の上方で前
記ウェル内に垂下されることを特徴とする、細胞又は組
織培養物を成長させる組立体。 - 【請求項２】 請求項１に記載の細胞又は組織培養物を
成長させる組立体にして、前記基部が、複数のウェルを
画成し、該ウェルの各々が、略矩形のウェル開口部を備
えることを特徴とする、細胞又は組織培養物を成長させ
る組立体。 - 【請求項３】 請求項１に記載の細胞又は組織培養物を
成長させる組立体にして、前記ウェルが、対向する略平
行な二対の側壁と前記底壁とによって包囲され、前記側
壁の各々が、前記ウェル内に伸長する突出部分を備え、 該突出部分の各々が、垂直面と、水平面とを有する段状
部を備え、 前記インサートの前記フランジが前記水平面により支持
されることを特徴とする、細胞又は組織培養物を成長さ
せる組立体。 - 【請求項４】 請求項３に記載の細胞又は組織培養物を
成長させる組立体にして、前記段状部の前記垂直面の各
々が、前記側壁の一つの壁の隣接する部分に関して斜め
に伸長する部分を備えることを特徴とする、細胞又は組
織培養物を成長させる組立体。 - 【請求項５】 請求項３に記載の細胞又は組織培養物を
成長させる組立体にして、前記段状部の前記垂直面が、
前記フランジに隣接していて前記インサートが前記ウェ
ルに関して並進し且つ回転動作するのを制限することを
特徴とする、細胞又は組織培養物を成長させる組立体。 - 【請求項６】 請求項１に記載の細胞又は組織培養物を
成長させる組立体にして、前記底壁から上方に伸長して
いるリッジ状突起を複数備え、該リッジ状突起の各々が
前記側壁の一つの壁に隣接し、該リッジ状突起の高さ
が、前記側壁よりも実質的に低いことを特徴とする、細
胞又は組織培養物を成長させる組立体。 - 【請求項７】 請求項２に記載の細胞又は組織培養物を
成長させる組立体にして、前記基部が、水平部分と、略
垂直部分とを有する周縁フランジを備え、該略垂直部分
が複数の前記ウェルに関して対向する関係にあることを
特徴とする、細胞又は組織培養物を成長させる組立体。 - 【請求項８】 請求項７に記載の細胞又は組織培養物を
成長させる組立体にして、前記基部に取り付けられたカ
バーであって、頂部壁と、該頂部壁から下方に伸長する
フランジとを有する前記カバーを備え、 前記頂部壁が、前記基部に係合する複数の凹部を有し、 前記カバーの前記フランジが、前記基部の前記フランジ
の前記略垂直部分に係合する内方伸長凹部を備えること
を特徴とする、細胞又は組織培養物を成長させる組立
体。 - 【請求項９】 請求項８に記載の細胞又は組織培養物を
成長させる組立体にして、前記カバーの前記頂部壁が略
矩形であり、該頂部壁が、該頂部壁を横断して伸長する
細長で且つ平行な一対のリッジを備えることを特徴とす
る、細胞又は組織培養物を成長させる組立体。 - 【請求項１０】 複数の細胞培養インサートを受け入れ
る基部にして、 複数のウェルであって、その各々が底壁と、対向する一
対の側壁とを備え、その各々が略矩形のウェル開口部を
有する前記複数のウェルを備え、 前記それぞれのウェルの前記側壁の各々が、該ウェルに
形成された段状部を備え、該段状部の各々が、略水平面
と、略垂直面とを備え、各段状部の該垂直面が前記側壁
の一つの壁に関して斜めに伸長する部分を備え、これに
より、直径方向に対向する一対のフランジを有する細胞
培養インサートが前記ウェル内に配置され、前記フラン
ジが前記水平面により支持され且つ前記ウェルの開口部
の直径方向に対向するコーナ部分付近の位置に配置され
ることを特徴とする、複数の細胞培養インサートを受け
入れる基部。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/462,932 US5534227A (en) | 1995-06-05 | 1995-06-05 | Thermoform dish insert |
| US462932 | 1995-06-05 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08332078A JPH08332078A (ja) | 1996-12-17 |
| JP2753473B2 true JP2753473B2 (ja) | 1998-05-20 |
Family
ID=23838284
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8142725A Expired - Lifetime JP2753473B2 (ja) | 1995-06-05 | 1996-06-05 | 細胞又は組織培養物を成長させる組立体 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5534227A (ja) |
| EP (1) | EP0747476B1 (ja) |
| JP (1) | JP2753473B2 (ja) |
| DE (1) | DE69635398T2 (ja) |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX9705540A (es) * | 1996-01-30 | 1997-10-31 | Organogenesis Inc | Metodo y diseño de empaque para la crioconservacion y almacenamiento de equivalentes de tejido cultivado. |
| US5795775A (en) * | 1996-09-26 | 1998-08-18 | Becton Dickinson And Company | Culture vessel and assembly |
| US5801055A (en) * | 1997-09-10 | 1998-09-01 | Becton Dickinson And Company | Multi-well culture dish assembly |
| GB2344420B (en) * | 1998-12-01 | 2001-08-01 | Advanced Biotech Ltd | Improved sealing mat for multiwell plates |
| AU754172B2 (en) * | 1999-05-27 | 2002-11-07 | Applera Corporation | Apparatus and method for the precise location of reaction plates |
| ES2270212T3 (es) | 2001-06-14 | 2007-04-01 | Millipore Corporation | Aparato multipocillo de cultivo de celulas. |
| JP3960969B2 (ja) | 2001-06-14 | 2007-08-15 | ミリポア・コーポレイション | 突出部を備えるトレイ |
| US6730510B2 (en) | 2002-07-02 | 2004-05-04 | Organogenesis, Inc. | Culture dish and bioreactor system |
| DE10240787B4 (de) * | 2002-08-30 | 2004-07-22 | Oxyphen Ag | Zellkultureinsatz |
| US7128878B2 (en) * | 2002-10-04 | 2006-10-31 | Becton, Dickinson And Company | Multiwell plate |
| EP1516919B1 (en) * | 2003-09-19 | 2007-04-11 | The Automation Partnership (Cambridge) Limited | Cell culture vessel for the automated processing of cell cultures |
| EP1516920A1 (en) * | 2003-09-19 | 2005-03-23 | The Automation Partnership | Cell culture vessel for the automated processing of cell cultures |
| US7219800B2 (en) * | 2004-02-20 | 2007-05-22 | Eppendorf Ag | Modular array arrangements |
| US20050186578A1 (en) * | 2004-02-20 | 2005-08-25 | Sven Bulow | Chamber array arrangement |
| ES2704039T3 (es) * | 2005-06-10 | 2019-03-13 | Nunc As | Soporte de elemento de inserción de cultivo, elemento de inserción de cultivo y sistema de elemento de inserción de cultivo |
| US20060286003A1 (en) * | 2005-06-16 | 2006-12-21 | Desilets Kenneth G | Multi-well filter plate with shifted wells and U-bottom receiver plate |
| US7922672B2 (en) * | 2006-06-08 | 2011-04-12 | Lincoln Diagnostics, Inc. | Skin testing-device system |
| JP4403169B2 (ja) * | 2006-12-15 | 2010-01-20 | 株式会社日立製作所 | 細胞培養装置及びその制御方法 |
| US8118962B2 (en) * | 2007-12-27 | 2012-02-21 | Cytyc Corporation | Method and apparatus for spacing cellular matter in a cell block |
| KR101066106B1 (ko) * | 2008-12-24 | 2011-09-20 | 전자부품연구원 | 세포 대사정보 측정 장치 |
| BR112013008442A2 (pt) * | 2010-10-08 | 2016-06-28 | Naturin Viscofan Gmbh | inserto de cultura celular |
| DE202011003049U1 (de) * | 2011-02-22 | 2011-04-28 | Sabeu Kunststoffwerk Northeim Gmbh | Einsatz für Zellkulturen |
| US9200246B2 (en) | 2011-12-01 | 2015-12-01 | Acea Biosciences, Inc. | Co-culture device assembly |
| EP2653531A1 (de) * | 2012-04-18 | 2013-10-23 | Oxyphen AG | Kulturanordnung |
| MY174743A (en) * | 2013-01-11 | 2020-05-13 | Regeneron Pharma | Systems and devices for sample handling |
| US9388945B2 (en) * | 2013-02-01 | 2016-07-12 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for emulsion aspiration |
| CN103436442A (zh) * | 2013-08-27 | 2013-12-11 | 浙江硕华医用塑料有限公司 | 细胞培养瓶的瓶体 |
| DE102015202402B3 (de) * | 2015-02-11 | 2015-08-27 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Zellkulturplatte |
| DE102017007169A1 (de) | 2016-08-18 | 2018-02-22 | Brand Gmbh + Co Kg | Zellkultureinsatz und Vorrichtung zum Kultivieren von Zellen |
| DE202017003978U1 (de) | 2016-08-18 | 2017-08-28 | Brand Gmbh + Co Kg | Zellkultureinsatz und Vorrichtung zum Kultivieren von Zellen |
| KR101981053B1 (ko) * | 2018-05-18 | 2019-05-22 | 주식회사 티앤알바이오팹 | 높이조절이 가능한 분리형 구조의 배양구조체 |
| DE102021132560A1 (de) * | 2021-12-09 | 2023-06-15 | Sabeu Gmbh & Co. Kg | Probenvorrichtung für Zellkulturen |
| WO2023224099A1 (ja) * | 2022-05-20 | 2023-11-23 | 公立大学法人名古屋市立大学 | 細胞培養基材および細胞培養方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4407943A (en) * | 1976-12-16 | 1983-10-04 | Millipore Corporation | Immobilized antibody or antigen for immunoassay |
| US4686190A (en) * | 1986-02-19 | 1987-08-11 | The Research Foundation Of State University Of New York | Device useful for growing and/or testing biological materials |
| US5026649A (en) * | 1986-03-20 | 1991-06-25 | Costar Corporation | Apparatus for growing tissue cultures in vitro |
| JPH051280Y2 (ja) * | 1987-10-12 | 1993-01-13 | ||
| US4988302A (en) * | 1989-06-08 | 1991-01-29 | Difco Laboratories Incorporated | Culture media package |
| US5272083A (en) * | 1990-10-10 | 1993-12-21 | Costar Corporation | Culture device and method of use having a detachable cell or tissue growth surface |
| US5139951A (en) * | 1990-10-10 | 1992-08-18 | Costar Corporation | Culture device having a detachable cell or tissue growth surface |
| US5468638A (en) * | 1992-09-28 | 1995-11-21 | Becton, Dickinson And Company | Cell culture insert |
| US5366893A (en) * | 1993-01-13 | 1994-11-22 | Becton, Dickinson And Company | Culture vessel |
-
1995
- 1995-06-05 US US08/462,932 patent/US5534227A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-04-17 DE DE69635398T patent/DE69635398T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-04-17 EP EP96105999A patent/EP0747476B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 JP JP8142725A patent/JP2753473B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0747476B1 (en) | 2005-11-09 |
| EP0747476A2 (en) | 1996-12-11 |
| DE69635398D1 (de) | 2005-12-15 |
| JPH08332078A (ja) | 1996-12-17 |
| US5534227A (en) | 1996-07-09 |
| EP0747476A3 (en) | 2002-07-17 |
| DE69635398T2 (de) | 2006-08-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2753473B2 (ja) | 細胞又は組織培養物を成長させる組立体 | |
| CA2113154C (en) | Culture vessel | |
| JP2638738B2 (ja) | 細胞培養物インサート | |
| US5652142A (en) | Cell culture insert | |
| US5801055A (en) | Multi-well culture dish assembly | |
| EP0183973B1 (en) | Multiwell tissue culture assembly with features for reduced media evaporation | |
| US5795775A (en) | Culture vessel and assembly | |
| EP0790300B1 (en) | Culture vessel and assembly | |
| US5578492A (en) | Cell culture insert | |
| EP0638640B1 (en) | Culture vessel | |
| US6939709B2 (en) | Multi-well device | |
| JP2862170B2 (ja) | 細胞成長又は組織培養のためのアセンブリ | |
| JP2004298191A (ja) | 培養皿アセンブリ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 19980127 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090227 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090227 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100227 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100227 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110227 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120227 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130227 Year of fee payment: 15 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130227 Year of fee payment: 15 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140227 Year of fee payment: 16 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
| R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D02 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |