JP2609764B2 - Ｈｉｖ―１ワクチンのための合成ペプチド - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）によって起
きる後天性免疫不全症候群（AIDS）に対する合成ペプチ
ドワクチンのデザインおよび調製に関する。特に、本発
明は、HIV−１のコアタンパク質、p24の、対Ｔ−細胞用
エピトープの同定と特徴づけ、およびHIVに対する効果
的な免疫性を誘導することができる自己（autologous）
（p24）およびいくつかの異種（heterologous）（p24以
外のHIVタンパク質）対Ｂ−細胞エピトープを用いて免
疫原性オリゴペプチドを構築するためにこのエピトープ
を利用する方法論に関する。

発明の背景 AIDSは、HIV感染の最終結果であって、この疾患のた
めの治療手段は現在まだなく、したがってHIV特異性ワ
クチンの開発が緊急に要請されている。これまでに、特
定疾患に対する防御抗体が、不活化されたまたは無毒性
株（種）を得るために弱毒化された生物体そのものを用
いなくても、その疾患を起こす生物の特定構成成分を投
与することによって誘導され得ることが証明された。HI
V−１のエンベローブ（envelope）タンパク質（gp160）
は、AIDSに対するワクチンの候補として用いられてき
た。ワクシニアのベクター中に調製されたこの免疫原が
ウイルスを無力化する抗体を誘導できることが示されて
はいるが、全てのワクチン試験は、霊長類を野生型HIV
単離株の攻撃から防御することにおいて失敗した。さら
に、タンパク質gp160の残基735〜752および846〜860の
二つの領域が、キャリアタンパク質に接合されたこれら
ペプチドで免疫された動物において、分裂促進因子に対
する正常ヒトリンパ球の増殖応答を、抑制することが示
された。このペプチドに介在される免疫抑制は、疾患の
病因に関して重要な役割を果たしているかもしれない。
これらの結果もまた、AIDSに対する何らかの合成ワクチ
ンの合理的な設計の必要性を強調している。AIDSに対す
る最良の合成ワクチンの候補の設計においては、強力で
長持ちする交差防御抗体応答を誘導するために、ウイル
ス単離株間に高度に保存された配列を含む免疫原性のき
わめて強いＢ−細胞を無力化するウイルスエピトープ
（BE）を強力なＴ−ヘルパー細胞決定因子（Ｔ−helper
cell determinant:THD）に結合させる必要がある。ま
た、HIV疾患に対する必要な細胞性免疫を提供するため
に、対HIV特異性細胞障害性Ｔ−リンパ球エピトープ（c
ytotoxic T−lymphocyte epitope;CTL）を合成する構造
中に含ませねばならない。

対Ｔ−細胞エピトープおよび対Ｂ−細胞エピトープの
間の特異的および優先的な空間的位置関係が、タンデム
エピトープが効果的に処理されて免疫原性を発揮するた
めに必要なのかもしれない。したがって、提案される設
計ワクチン中の対Ｔ−細胞エピトープおよび対Ｂ−細胞
エピトープにおいては、Ｔ−およびＢ−細胞双方のメモ
リーが効果的に引き出されて所望の特異性の抗体が産生
され得るような最適の構造に組み立てられるかどうかを
決定することが重要である。THDは、共通的なものでは
なく、適切な主要組織適合複合体（MHC）クラスII抗原
との関連で提示される場合にのみ免疫学的に機能するこ
とが見出された。対Ｔ−細胞エピトープ優性の特徴的な
クラスがある。したがって、合成AIDSワクチンを開発す
るためには、種々のHIVgp160、gag、polおよび他の遺伝
子産生物中の最も効力のあるTHDを確認することが重要
である。gp160タンパク質の多数のTHDおよびBEが完全に
特徴づけされ、gagおよびpolタンパク質の対Ｂ−細胞お
よび対Ｔ−細胞エピトープが標準的アルゴリズム（algo
rithsm）によって予測されたが、これらエピトープの構
造は実験的に決定されねばならない。近年の研究によっ
て、gag遺伝子産生物がHIV感染に対する免疫応答を引き
出す際に決定的な役割を果たすかもしれないことが示さ
れた。したがって、AIDSの臨床的進行は、gagp24に対す
る循環性抗体の減少を伴っており、免疫優性のgagp17ペ
プチドに対して作られる抗体はインビトロでHIV−１感
染を防御することができる。さらに、Ｂ型肝炎ウイルス
のコアTHDは、Ｓ表面抗原に対する抗体反応の誘導の補
助においてエンベロープTHDよりも効果的であることが
示された。Ｂ型肝炎ウイルス系と同様に、HIV中の有効
なgag−THDの同定が注目された。対Ｔ−細胞および対Ｂ
−細胞エピトープのための従来の構造予測アルゴリズム
を用いて、本発明者らは潜在的に免疫原性を有する一連
のgagペプチド（表１）を同定して化学的に合成して、
それらのうちの一つ、p24E、の免疫学的性質を広く研究
した。

発明の概要 本発明の一態様に従い、本発明者らは、タンデム（ta
ndem）gag−p24の対Ｔ−および対Ｂ−細胞エピトープを
含む効力のある合成HIV−１免疫原（HIV−１−p24）を
見出した。フロインドの完全アジュバント中の遊離HIV
−１−p24ペプチドで初回抗原刺激を行ってからフロイ
ンドの不完全アジュバント中の同じペプチドでブースタ
ーしたマウスの近交系においては、ペプチド特異性酵素
免疫法（EIA）による判定による強力な抗HIV−１−p24
抗体による24次免疫応答が誘導された。この抗−ペプチ
ド抗体はイムノブロッティングにおいてウイルスp24タ
ンパク質を認識した。さらに、適当なMHCコンテキスト
（MHC contexst）に提示された該ペプチドは、p24特異
性ネズミＴ−細胞株に対する著しい刺激性を有すること
が示された。

本発明者らはまた、HIV−１−p24の対Ｔ−細胞エピト
ープ、p24E、が異種Ｂ−細胞決定因子（例えばエンベロ
ープＢ−細胞決定因子）に対する抗体応答を仲介し得る
ことを示し、そして抗エンベロープ抗体応答を誘導する
ことができるいくつかの免疫原性キメラp24/gp160オリ
ゴペプチドを構築した。

本発明者らはさらに、対Ｔ−および対Ｂ−細胞エピト
ープの極性がキメラペプチドの免疫原性に影響するこ
と、および二つのエピトープ間へのリンカーの組み入れ
がペプチドの免疫原性を調節し得ることを示した。

図面の簡単な説明 図１は、p24Eタンパク質の構造を示す略図である。

発明の説明 Ｔ−細胞抗原決定基を予測するために、一次配列に基
づいて二つのモデルが最近提唱された。対Ｔ−細胞エピ
トープが、ヘリックス構造の一方に親水性基が位置し、
他方に疎水性基が位置するような安定した両親媒性のα
−ヘリックス構造をとり得るタンパク質配列を含む可能
性があることが提唱された（参考文献Ｉ）。これとは別
に、一次配列のパターンがＴ−細胞抗原部位にしばしば
見い出されることが述べられている。このＴ−細胞結合
主要素は、通常、荷電基またはグリシンとそれに続く二
つまたは三つの疎水性基とそれに続く親水性基からなる
（参考文献２）。

HIV−１−p24タンパク質の潜在的対Ｔ−細胞エピトー
プの位置は、構造に関するアルゴリズムによって予測さ
れた（表１）。予測されたp24対Ｔ−細胞エピトープの
一つであるp24Eの配列GPKEPFRDYVDRFYKは、単離された
種々のHIV−１株において高度に保存されているもので
あり、図１に示されるような両親媒性α−ヘリックス構
造を有すると考えられる。

p24Eが対Ｔ−細胞エピトープを確かに含んでいるとい
うことを示すインビトロ増殖実験の結果を表２に示す。
p24特異性ネズミＴ−細胞株であるTp241は合成ペプチド
p24Eにのみ応答するが、p24Eの部分配列をそれぞれ含む
TElEまたはTB8ペプチドのいずれに対しても応答しない
ことが見出された。

p24Eの対Ｔ−細胞キャリアとしての機能は、p24E（残
基292〜306）を含む非接合オリゴペプチドHIV−１−p2
4、およびgagタンパク質p24の推定上のp24対Ｂ−細胞エ
ピトープＢ（残基307〜316）のそれぞれの免疫原性を研
究することによって示された。HIV−１−p24EおよびＢ
−p24ペプチドを個々にその量を増加して、フロインド
の完全アジュバントに溶かして、異なる主要組織適合複
合体（MHC）ハプロタイプの５つのマウス近交系に注射
した。３週間後、フロインドの不完全アジュバントに溶
かした初めの半分量のペプチドをマウスにブースター注
射した。チャレンジ後９日目に血清を集めて、ペプチド
特異性IgG抗体の存在を分析した。

表３にまとめた酵素免疫分析の結果は、切り離された
p24対Ｂ−細胞エピトープＢペプチドが試験した三つの
免疫投与量（４、20および100μｇ）で免疫原性となら
なかったことを示している。しかし、この対Ｂ−細胞エ
ピトープは、p24E（ペプチドHIV−１−p24）のＣ末端に
結合された場合には免疫原性となる。抗ーHIV−１−p24
IgGの高力価が五つの近交系統のうちの四つの系統、す
なわち、Balb/c（Ｈ−2d）、SWR/J（Ｈ−2q）、C3H（Ｈ
−2kおよびC57BL/6（Ｈ−2b）、の免疫されたマウスの
血清中に検出された。C57BL/6およびBalb/cマウスはそ
れらの血清中でのペプチドIgGに対する高力価（それぞ
れ、12000および4000）から判断して最良の応答を示す
ようであり、一方、1/1200のHIV−１−p24に対する力価
を示すSWR/JとC3H系統、および1/150の力価を示すSJL/J
系統は、ペプチドに対して中位および乏しい応答をそれ
ぞれ示した。

対Ｂ−細胞エピトープの免疫原性は、Ｂおよびp24Eペ
プチドの極性に依存することが見出された。対Ｂ−細胞
エピトープＢがp24EのＮ末端に結合しているオリゴペプ
チドは、そのＢ−細胞決定因子に対する抗体応答を誘導
することはできなかった（表３）。

抗HIV−１−p24IgG抗体の特異性は、標的抗原として
組換えp24またはgp41（デュポン社）またはgp160（レプ
リゲン社（Repligen Corp.））を用いるEIAにおいて、B
alb/c（Ｈ−2d）抗HIV−１−p24抗血清がp24に対しての
み反応し、他のウイルスタンパク質に対しては反応しな
いことを示すことによって明らかとされた。同じ抗血清
はまた、市販のHIV−１ウエスタンプロッティング細片
（パン・データ・システムズ、バイオ・ラド社（pan.Da
ta Systems、Bio Rad））を用いるイムノブロッティン
グにおいてウイルスp24タンパク質を特異的に認識し
た。したがって、これらの結果は、p24Eが、外来性キャ
リアタンパク質の存在しない状態で自己p24対Ｂ−細胞
エピトープに対する抗体応答の産生を誘導するために
「免疫学的な補助」を提供することができる有効な対Ｔ
−ヘルパー用エピトープ（Th）であることを示す。

対Ｔ−ヘルパーエピトープ（Th）p24Eがまた、異種Ｂ
−細胞決定因子に対する抗体応答を仲介することができ
るかどうかを調べるために、発明者らは、p24EのＣ末端
に縦に直列して連結したHIV−Igp160エンベロープタン
パク質（参考文献３）のアミノ酸残基727〜751（LPTPRG
PNRPEGIEEEGGERDRDRS）を有する非免疫原性対Ｂ−細胞
エピトープ配列BE3を含むキメラオリゴペプチドp24E−B
E3を合成した。

HIV−１−p24ペプチドでの免疫のために用いるプロト
コールに従って遊離の上記キメラペプチドで免疫した五
つのマウス近交系（Balb/c、SJL/J、A/J、C3HおよびC57
BL/6）は、表４に示すように、エンベロープ（BE3）に
対する２次抗体応答を生じさせることができた。抗BE3
血清IgGの最高力価（1/1600）は、100μｇのp24E−BE3
ペプチドで免疫したBalb/cおよびC57BL/6系統マウスに
おいて得られたが、これはこれら二つのハプロ型がキメ
ラタンパク質に対する最良の応答をするものであること
を示唆する。

発明者らは、対Ｔ−細胞エピトープと対Ｂ−細胞エピ
トープの間にスペーサー配列を導入して、キメラペプチ
ドBE3−p24Eの免疫原性を調節した。p24E−BE3の場合と
異なり、BE3−p24EペプチドのBE3配列はp24EのＮ末端に
位置している。このBE3−p24Eペプチドは、試験した五
つの近交系マウス系統種においては免疫原性を示さなか
った（表５）。これとは対照的に、二つのプロリン残基
（PP）が対Ｔ−細胞エピトープと対Ｂ−細胞エピトープ
との間に挿入されているキメラペプチドBE3−pp−p24E
は免疫原性であり、試験された五つの近交系マウス系統
種（SJL/J、A/J、C57BL/6、Balb/cおよびC3H）において
抗−BE3抗体産生を誘導することができた。以上の結果
を総合すると、Ｔ−細胞キャリアとしてp24Eを用いての
BE3の免疫原性の増強は、エピトープの極性に依存する
ことが示唆される。合成構築物の非免疫原性型である場
合の形態、すなわちBE3−p24Eは、エピトープ間にプロ
リン−プロリンのようなリンカーを挿入することによっ
て免疫原性になり得る。

p24Eペプチドはまた、他の異種対Ｂ−細胞エピトープ
の免疫原性の増強にも用いられた。キメラペプチドENV
−PP−p24Eおよびp24E−PP−ENVは、プロリン−プロリ
ンリンカーを介して、p24EのＮまたはＣ末端のいずれか
に縦に直列にそれぞれ連結されるエンベロープタンパク
質gp120（参考文献４）のアミノ酸残基256〜273（GIRPV
VSTQLLLNGSLAE）を含む他のHIV−１対Ｂ−細胞エピトー
プENVを用いて合成された。構築物p24E−PP−ENVは、EN
Vペプチドに対する体液性応答によって判断して、調べ
た五つの近交系系統種において免疫原性であることが見
出された（表６）。これに対して、ENV−PP−p24Eは、
五つの系統のうち三つのみにおいて免疫原性であった。
これらの結果から、対Ｂ−および対Ｔ−細胞エピトープ
の極性がキメラペプチドの免疫原性の決定において重大
的要因であることが確認される。

p24Eペプチドのキャリア機能は、他のキメラペプチド
V3A−PP−p24Eの免疫原性を研究することによってさら
に評価された。主要無力化Ｂ−細胞エピトープ（参考文
献５）を含むHIV−lgp120における可変ループのV3A配列
NTRKSIRIQRGPGRAFVTIG（残基308〜327）は、近交系マウ
スにおいて免疫原性を示さない（表７）。V3Aペプチド
は、プロリン−プロリンリンカーを介してp24EのＮ末端
に連結されることによって免疫原性となる。最高の抗−
V3AペプチドIgGの最大力価は、V3A−PP−p24Eで免疫さ
れたSTL/Jマウスの血清中で測定された。

本発明は、以下の実施例によってさらに説明される。

実施例 上記の記載および実施例中で特に記載のないペプチド
合成の方法、酵素免疫分析（EIA）および他の免疫学的
な試験方法は、科学的文献において広く報告されている
もので、当業者によく知られたものである。

実施例Ｉ 本実施例はペプチドの合成を説明するものである。表
１に示されたオリゴペプチドを、ABI（Applied Biosyst
ems Inc）430Aペプチド合成機を用いてHIV/LAV単離株に
ついて報告されたアミノ酸配列にしたがって合成した。
固体相合成のプロトコール（protocol）は、ヒスチジン
添加を二重カップリングによって行ったこと以外は、入
手先（メーカー）の説明書に従った。粗ペプチドを、ア
ニソール、チオクレゾールおよび流化ジメチルの存在下
でフッ化水素酸で処理し、続いてジエチルエーテルで沈
澱させることによって樹脂から除去した。このペプチド
を、バイダック（Vydac）C4カラムおよび0.1％のトリフ
ルオロ酢酸中のアセトニトリル濃度勾配を用いる逆相高
速度液体クロマトグラフィー（RP−HPLC）によって精製
した。アミノ酸分析によって、それぞれの精製ペプチド
のアミノ酸組成が正しいことが示された。

実施例II 本実施例は、p24Eペプチドが機能性対Ｔ−細胞エピト
ープであることを示すために用いられる方法を説明する
ものである。

ペプチドHIV−１−p24に特異的なネズミＴ−細胞株
を、Sia（参考文献６）による既述と同様の方法によっ
て作出した。HIV−１−p24ペプチドの最適濃度（100μg
/ml）を、組換えインターロイキン−２（20u/ml）の存
在下で抗原特異性Balb/cT−細胞株の増殖に用いた。同
一遺伝子系の脾臓細胞によって供給されたp24Eペプチド
のインビトロでのＴ−細胞株の増殖誘導能は、標準トリ
チウム化チミジンの取り込みを分析することによって判
定され、p24Eが機能性対Ｔ−細胞エピトープを含んでい
たことが明確に示された（表２）。加えて、フロインド
のアジュバント中に乳化された遊離p24Eペプチドによる
Balb/cマウスの免疫は、抗p24E抗体応答を誘導しなかっ
た。

実施例III 本実施例は、HIV−１−p24ペプチドおよびキメラオリ
ゴペプチドの免疫原性を試験するために用いるプロトコ
ールを記述するものである。

異なるMHCハプロ型の五つの近交系マウス系統、すな
わち、Balb/c（Ｈ−2d）、SJL/J（Ｈ−2s）、A/J（Ｈ−
2a）、C3H（Ｈ−2k）およびC57BL/6（Ｈ−2b）を免疫原
性の研究に用いた。各系統からの４匹のマウスをそれぞ
れ４、20または100μｇの遊離オリゴペプチドで次のよ
うにして免疫した。フロインドの完全アジュバント（CF
A）中で一定量のペプチドを動物に皮下注射した。これ
に続いて３週間後に、フロインドの不完全アジュバント
（IFA）中に乳化させた同ペプチドの半分量を注射によ
りチャレンジ投与した。チャレンジ後９日目に集めた実
験動物の血清について、標準EIAを用いてペプチド特異
性IgG抗体を分析した。

実施例IV 本実施例は酵素免疫分析（EIA）を用いる抗ペプチド
抗体の試験を説明するものである。

EIAプレート（マキシソープ（Maxisorp）、NUNC、デ
ンマーク）を１μg/ウェルの燐酸緩衝生理食塩水（PB
S。pH7.0）中のHIV−１−p24でコートすることにより抗
−HIV−１−p24抗体の検出のためのEIAを作成した。ペ
プチドの吸着を４℃で一晩行わせた。ペプチド溶液をウ
ェルから吸引して、ウェル当り300μｌの２％（w/v）脱
脂乳（カーネーション、英国）を添加して、プレートを
ブロックした。室温で２時間インキュベートした後、洗
浄用緩衝液（0.025％のツイーン20（Bio−rad Laborato
ries、Richmond、CA）を含むPBS、pH7.0）でプレートを
３回洗浄することによってプレートに結合しなかったペ
プチドを除去した。次いで、0.1％脱脂乳を含むPBSを用
いて、試験血清サンプルの50倍希釈液を得た後その各々
の３倍希釈を順次行って、次いでこれらの希釈血清の10
0μｌをペプチドコートしたウェルに加えた。血清サン
プルの各希釈を二重に分析した。血清抗−HIV−１−p24
抗体の固定化ペプチドへの結合を、プレートを室温で１
時間インキュベートすることによって行わせた。洗浄用
緩衝液でプレートを３回洗浄することによって結合しな
かった抗体を除去した。次いで、抗−HIV−１−p24IgG
の標的ペプチドとの特異的結合を検出するために、入手
先（メーカー）の処方に従って洗浄用緩衝液で5000倍に
希釈したホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ（Jack
son Lab.）が接合された100μｌのヤギ抗−マウスIgG抗
体を、各ウェルに加えた。室温で１時間インキュベート
した後、洗浄用緩衝液でプレートを４回洗浄することに
よって結合しなかった抗体接合体を除去した。100μｌ
のテトラメチルベンジジン（TMB）と過酸化水素の混合
物（１部のTMBに対して９部の過酸化水素）を加えるこ
とによって結合した接合体の量を分析した。発色を室温
で暗所で10〜15分間行わせて、100μｌの1N硫酸の添加
によって停止させた。酵素反応の光学濃度を、タイター
テック・マルチ・スカン（Titertek Multi Skan）分光
光度計（MCC/340型）で450nmで測定した。結果は表３に
示される通りで、力価の平均値の逆数で表されている。
正常マウス血清の力価の逆数は、ハプロ型にかかわら
ず、常に＜50であった。

実施例Ｖ 本実施例は、抗−HIVエンベロープペプチド抗体の検
出をさらに説明するものである。

抗−エンベロープペプチド抗体を、上記と同様のEIA
で以下の変法を行って検出した。EIAプレートを、PBSに
溶かしたストレプトアビジンの３μg/ウェルでコートし
た。プレートを２％脱脂乳でブロックした後、次いで、
0.1μｇのビオチン化（biotinylated）エンベロープペ
プチド（BE3、ENVまたはV3A）をストレプトアビジン−
コートしたウェルのそれぞれに加えた。ビオチン化ペプ
チドのストレプトアビジンへの結合を、２時間室温で行
わせた。結合しなかったペプチドをプレートを３回洗浄
用緩衝液（0.25％のツイーン20を含むPBS、pH7.0）で洗
浄することによって除去した。次いで、抗−エンベロー
プIgG活性を、ストレプトアビジンと結合したビオチン
化ペプチドでコートされている各ウェルに、１％脱脂乳
を含むPBSで連続希釈した試験血清100μｌを加えて分析
した。次いで、抗−エンベロープ抗体の結合を、ホース
ラッディッシュ・ペルオキシダーゼに接合させたアフィ
ニティー精製ヤギ抗−マウスIgG抗体を用いて実施例IV
の記載のようにして検出した。結果は表４、５、６およ
び７に示される通りであった。

実施例VI 本実施例はペプチドのビオチン化（biotinylation）
を説明するものである。

100μｌのNHS−ビオチン（1mlジメチルホルムアミド
（DMF）に溶かした10mgのNHS−ビオチン）および0.2ml
の1M重炭酸ナトリウムを2mlのDMFまたは6Mグアニジン塩
酸のPBS（pH7.5）溶液のいずれかに溶かした1mgのペプ
チドに加えた。ペプチドを室温で２〜６時間NHS−ビオ
チンと反応させた。修飾の後、ビオチン化ペプチドを逆
相HPLCまたはゲル濾過クロマトグラフィーによって精製
した。

実施例VII 本実施例は、対Ｔ−細胞キャリアペプチドとしての対
Ｔ−細胞エピトープp24Eの使用を説明するものである。

実施例IIIにおいてHIV−１−p24ペプチドのために
記述されたプロトコールを用いて免疫原性を調べたとこ
ろ、非接合型のキメラペプチドで免疫した五つの近交系
マウス系統（Balb/c、SJL/J、A/J、C3HおよびC57BL/6）
は二次抗−エンベロープペプチド（抗−BE3）抗体反応
を生じさせ得ることが見出された（表４）。

実施例VIII 本実施例は、キメラペプチドの免疫原性を変化させる
ためのプロリン−プロリンリンカーの使用を説明するも
のである。

ペプチドBE3−p24E、および二つのプロリン基を対Ｔ
−細胞エピトープと対Ｂ−細胞エピトープの間に含むBE
3−PP−p24Eを用いて、実施例IIIに記載と同様にして免
疫原性実験を行った。標的抗原としてビオチン化BE3を
用いるEIAによって、抗−BE3抗体を測定した。結果は表
５に示す通りである。

実施例XI 本実施例は、他の異種対Ｂ−細胞エピトープのため
に、Ｔ−細胞キャリアとしてp24Eを使用することを説明
するものである。

キメラペプチドENV−PP−p24E、p24E−PP−ENVおよび
V3A−PP−p24Eを用いて、実施例IIIと同様の免疫原性実
験を行った。結果は、それぞれ表６および７に示す通り
である。

実施例Ｘ 本実施例は、イムノブロッティング法の使用を説明す
るものである。

合成ペプチドに対してマウスにおいて作られた抗体に
ついて、イムノ−ブロット法を用いてそれらの免疫特異
性を試験した。ニトロセルロース細片に固定化されたHI
V−１ウイルスタンパク質をPan Data System Inc.およ
びBio−radから購入し、それを用いてイムノブロッティ
ングを入手先（メーカー）の説明書に従って行った。マ
ウス血清を1/100の希釈で分析した。

参考文献： 1.Delisi and Bersofsky,P.N.A.S.,82,7048,（1985） 2.Rothbard and Taylor,EMBO,７,93（1988） 3.Kennedy et al.,Science,231,556,（1986） 4.Ho et al.,Science,239,1021,（1988） 5.Matsushita et al.,J.Virology,62（６）,2107,（198
8） 6.Sia et al.,Immunology,51,755,（1984）

フロントページの続き (72)発明者 チョン、ペレ カナダ国 エル４ジェイ ２エス４ オ ンタリオ州 ソーンヒル ボローズ ス トリート 20 (72)発明者 クレイン、マイケル カナダ国 エム５エイ ３エム２ オン タリオ州 ウィローデイル マンロー ブールヴァード 16 (56)参考文献 特表 昭62−502617（ＪＰ，Ａ) 特表 昭63−503227（ＪＰ，Ａ) 欧州公開284383（ＥＰ，Ａ１) 欧州公開290893（ＥＰ，Ａ２)

Claims (6)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】HIVに特異的な抗体を引き出すことのでき
   る免疫原性の合成キメラペプチドであって、 （ａ）HIV−１のgagタンパク質の機能性対Ｔ−細胞エピ
   トープであるペプチドp24E（アミノ酸残基292〜306）
   と、 （ｂ）該機能性対Ｔ−細胞エピトープに連結された、HI
   V−１のエンベロープタンパク質の対Ｂ−細胞エピトー
   プまたはgagタンパク質の対Ｂ−細胞エピトープと を有し、 前記対Ｂ−細胞エピトープは、前記機能性対Ｔ−細胞エ
   ピトープのＣ末端及びＮ末端のうちの該対Ｂ−細胞エピ
   トープに対して増強された免疫応答が得られる末端に連
   結されている ことを特徴とする合成キメラペプチド。
2. 【請求項２】前記対Ｂ−細胞エピトープがgag蛋白質の
   アミノ酸残基307〜316からなる対Ｂ−細胞エピトープで
   あり、該対Ｂ−細胞エピトープが前記ペプチドp24EのＣ
   末端に直接連結してなるHIV−１−p24である請求項１に
   記載の合成キメラペプチド。
3. 【請求項３】前記対Ｂ−細胞エピトープがHIV−１エン
   ベロープタンパク質のアミノ酸残基727から751までのBE
   3配列であり、該BE配列が前記ペプチドp24EのＣ末端に
   直接連結してなるp24E−BE3である請求項１に記載の合
   成キメラペプチド。
4. 【請求項４】前記対Ｂ−細胞エピトープがHIV−１エン
   ベロープタンパク質のアミノ酸残基727から751までのBE
   3配列であり、該BE配列が−Pro−Pro−からなるリンカ
   ー配列によって前記タンパク質p24EのＮ末端に連結して
   なるBE3−PP−p24Eである請求項１に記載の合成キメラ
   ペプチド。
5. 【請求項５】前記対Ｂ−細胞エピトープが、HIV−１の
   エンベロープタンパク質のアミノ酸残基256から273まで
   のENV配列であり、該ENV配列が−Pro−Pro−からなるリ
   ンカー配列によって前記タンパク質p24EのＮ末端または
   Ｃ末端に連結してなるp24E−PP−ENVまたはENV−PP−p2
   4Eである請求項１に記載の合成キメラペプチド。
6. 【請求項６】前記対Ｂ−細胞エピトープが、HIV−1 gp1
   20タンパク質の可変ループのアミノ酸残基308〜327から
   なるV3A配列であり、該V3A配列が−Pro−Pro−からなる
   リンカー配列によって前記タンパク質p24EのＮ末端に連
   結してなるp24E−PP−V3Aである請求項１に記載の合成
   キメラペプチド。