JP2581347B2 - 化学発光測定方法 - Google Patents
化学発光測定方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は液体クロマトグラフィー
やフローインジェクション分析などの所謂フロー分析に
関し、特に検出装置として化学発光測定装置を用いる化
学発光測定方法に関するものである。
やフローインジェクション分析などの所謂フロー分析に
関し、特に検出装置として化学発光測定装置を用いる化
学発光測定方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】化学発光測定装置は流路中を流れている
物質に発光試薬を混合する混合部と、化学発光を検出す
る光検出器と、混合部で発光試薬と混合して化学発光反
応を起こしている混合物を前記光検出器に導く混合物流
路とを備えている。化学発光を用いた分析においては、
検出装置での課題はいかにして発光量を多くするかとい
う点、又はいかに多くの発光を検出するかという点にあ
り、それらの点だけが考慮されている。例えば、シュウ
酸エステルと過酸化水素を用いる所謂過シュウ酸エステ
ル化学反応においては、発光量を多くするために、
（１）触媒の濃度を高くするか、（２）シュウ酸エステ
ルや過酸化水素の濃度を高くするなどの方法が取られて
いる。これらの方法のうち、触媒濃度と過酸化水素濃度
を高くすることは、発光量を増やすことに関しては特に
効果的である。しかし、その場合は発光の反応速度か速
くなり、発光がピークに達するのは、反応条件にもよる
が、ほとんどの場合、反応開始後１０秒以内であり、通
常用いられる条件では２〜６秒である。したがって、よ
り多くの発光を検出するためには被測定物質と発光試薬
（この場合はシュウ酸エステルと過酸化水素の混合物）
が混合されて発光反応が開始する点（混合部）と光検出
器との間に、ある長さのチューブを混合物流路として挿
入し、発光強度が最高になったあたりの発光を検出する
ようにそのチューブの長さを調節するが、その時間が１
０秒以下のかなり短かい時間になるように設定して強い
発光を検出するようにするのが普通である。混合物流路
のチューブを短かくすることは、サンプルピークの広が
りを防ぐという観点からも有益であると考えられてい
る。
物質に発光試薬を混合する混合部と、化学発光を検出す
る光検出器と、混合部で発光試薬と混合して化学発光反
応を起こしている混合物を前記光検出器に導く混合物流
路とを備えている。化学発光を用いた分析においては、
検出装置での課題はいかにして発光量を多くするかとい
う点、又はいかに多くの発光を検出するかという点にあ
り、それらの点だけが考慮されている。例えば、シュウ
酸エステルと過酸化水素を用いる所謂過シュウ酸エステ
ル化学反応においては、発光量を多くするために、
（１）触媒の濃度を高くするか、（２）シュウ酸エステ
ルや過酸化水素の濃度を高くするなどの方法が取られて
いる。これらの方法のうち、触媒濃度と過酸化水素濃度
を高くすることは、発光量を増やすことに関しては特に
効果的である。しかし、その場合は発光の反応速度か速
くなり、発光がピークに達するのは、反応条件にもよる
が、ほとんどの場合、反応開始後１０秒以内であり、通
常用いられる条件では２〜６秒である。したがって、よ
り多くの発光を検出するためには被測定物質と発光試薬
（この場合はシュウ酸エステルと過酸化水素の混合物）
が混合されて発光反応が開始する点（混合部）と光検出
器との間に、ある長さのチューブを混合物流路として挿
入し、発光強度が最高になったあたりの発光を検出する
ようにそのチューブの長さを調節するが、その時間が１
０秒以下のかなり短かい時間になるように設定して強い
発光を検出するようにするのが普通である。混合物流路
のチューブを短かくすることは、サンプルピークの広が
りを防ぐという観点からも有益であると考えられてい
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来のように触媒濃度
を高くしたり過酸化水素濃度を高くして発光量を増や
し、被測定物質と発光試薬とを混合してから発光を検出
するまでの時間を１０秒以内の短かい時間に設定する方
法は、確かに高い発光強度を検出できる。しかし、本発
明者の研究によれば、被測定物質と発光試薬とを混合し
てから短かい時間では発光信号と同時に高いバックグラ
ウンドも観測されること、そしてその結果として必ずし
も高いＳ／Ｎ比は得られていないことがわかった。バッ
クグラウンドが高い場合は、ポンプの脈動や周囲温度の
ふらつきなどの種々の外乱の影響を受けやすくなり、安
定した測定が難しくなる。
を高くしたり過酸化水素濃度を高くして発光量を増や
し、被測定物質と発光試薬とを混合してから発光を検出
するまでの時間を１０秒以内の短かい時間に設定する方
法は、確かに高い発光強度を検出できる。しかし、本発
明者の研究によれば、被測定物質と発光試薬とを混合し
てから短かい時間では発光信号と同時に高いバックグラ
ウンドも観測されること、そしてその結果として必ずし
も高いＳ／Ｎ比は得られていないことがわかった。バッ
クグラウンドが高い場合は、ポンプの脈動や周囲温度の
ふらつきなどの種々の外乱の影響を受けやすくなり、安
定した測定が難しくなる。
【０００４】本発明者はバックグラウンドの発光に着目
し、その性質を種々究明した結果、バックグラウンドの
発光と被測定物質からの発光の反応速度の間には著しい
違いがあり、被測定物質からの発光の反応速度は遅く、
それに対してバックグラウンドの発光の反応速度はそれ
より遥かに速いことがわかった。この知見によれば、従
来のように反応時間を短かくするのではなく、むしろ１
０秒以上というように長く設定することにより、バック
グラウンドを大幅に低減できる。そこで、本発明はバッ
クグラウンドを十分低減させた状態で検出を行ない、Ｓ
／Ｎ比を高めることを目的とするものである。
し、その性質を種々究明した結果、バックグラウンドの
発光と被測定物質からの発光の反応速度の間には著しい
違いがあり、被測定物質からの発光の反応速度は遅く、
それに対してバックグラウンドの発光の反応速度はそれ
より遥かに速いことがわかった。この知見によれば、従
来のように反応時間を短かくするのではなく、むしろ１
０秒以上というように長く設定することにより、バック
グラウンドを大幅に低減できる。そこで、本発明はバッ
クグラウンドを十分低減させた状態で検出を行ない、Ｓ
／Ｎ比を高めることを目的とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明では、混合部で発
光試薬と混合して化学発光反応を起こしている混合物を
光検出器に導く混合物流路を、その混合物が混合部から
光検出器に到達するのに要する時間が１０秒以上になる
ように設定し、かつ発光試薬と被測定物質との混合から
１０秒以上経過後でも化学発光強度が検出に十分な強度
をもっているように反応条件を設定しておく。
光試薬と混合して化学発光反応を起こしている混合物を
光検出器に導く混合物流路を、その混合物が混合部から
光検出器に到達するのに要する時間が１０秒以上になる
ように設定し、かつ発光試薬と被測定物質との混合から
１０秒以上経過後でも化学発光強度が検出に十分な強度
をもっているように反応条件を設定しておく。
【０００６】
【作用】本発明によればバックグラウンドが著しく低減
することにより、ベースラインノイズが大幅に減少して
Ｓ／Ｎ比が向上する。その結果、外乱の影響を受けにく
くなり、安定したベースラインが得やすくなり、測定の
安定性が増す。
することにより、ベースラインノイズが大幅に減少して
Ｓ／Ｎ比が向上する。その結果、外乱の影響を受けにく
くなり、安定したベースラインが得やすくなり、測定の
安定性が増す。
【０００７】
【実施例】図１（Ａ）は一実施例が実施されているフロ
ーインジェクション分析装置を表わしている。移動相２
が送液ポンプ４でインジェクタ６を経てステンレスチュ
ーブ８へ送られる。ステンレスチューブ８の下流には被
測定物質に発光試薬を混合するミキサー１０が設けられ
ている。検出手段として過シュウ酸エステル化学発光を
用いた場合を例示すると、シュウ酸エステル１２と過酸
化水素１４がそれぞれの送液ポンプ１６，１８でミキサ
ー２０へ送られて混合し、高いエネルギーを持つ中間体
を生成し、この高エネルギー中間体がミキサー１０で被
測定物質と混合される。ミキサー１０で混合された混合
物は化学発光反応を起こしながら混合物流路としてのス
テンレスチューブ２２を経て光検出器２４へ導かれ、光
検出器２４で発光が検出され、ドレインへ排出される。
ステンレスチューブ２２は混合物がミキサー１０から光
検出器２４へ到達するのに１０秒以上かかるように設定
されている。
ーインジェクション分析装置を表わしている。移動相２
が送液ポンプ４でインジェクタ６を経てステンレスチュ
ーブ８へ送られる。ステンレスチューブ８の下流には被
測定物質に発光試薬を混合するミキサー１０が設けられ
ている。検出手段として過シュウ酸エステル化学発光を
用いた場合を例示すると、シュウ酸エステル１２と過酸
化水素１４がそれぞれの送液ポンプ１６，１８でミキサ
ー２０へ送られて混合し、高いエネルギーを持つ中間体
を生成し、この高エネルギー中間体がミキサー１０で被
測定物質と混合される。ミキサー１０で混合された混合
物は化学発光反応を起こしながら混合物流路としてのス
テンレスチューブ２２を経て光検出器２４へ導かれ、光
検出器２４で発光が検出され、ドレインへ排出される。
ステンレスチューブ２２は混合物がミキサー１０から光
検出器２４へ到達するのに１０秒以上かかるように設定
されている。
【０００８】このフローインジェクション分析装置で化
学発光のメカニズムを説明すると、ミキサー２０でシュ
ウ酸エステルと過酸化水素が混合されて、次式に従って
高いエネルギーの中間体を生成する。 シュウ酸エステル＋過酸化水素 → 高エネルギー中間
体 この中間体はインジェクタ６から注入された被測定物質
とミキサー１０で混合されて反応し、次式のように被測
定物質を励起する。 被測定物質＋高エネルギー中間体 → 被測定物質＊ ＊印は励起状態を表わしている。励起した被測定物質は
光を放出してもとの基底状態に戻る。 被測定物質＊ → 被測定物質＋光 この時放出される光は光検出器２４で検出される。この
時の光放出量は被測定物質の量に比例するから、この光
の量を測定することにより被測定物質の量を検出するこ
とができる。
学発光のメカニズムを説明すると、ミキサー２０でシュ
ウ酸エステルと過酸化水素が混合されて、次式に従って
高いエネルギーの中間体を生成する。 シュウ酸エステル＋過酸化水素 → 高エネルギー中間
体 この中間体はインジェクタ６から注入された被測定物質
とミキサー１０で混合されて反応し、次式のように被測
定物質を励起する。 被測定物質＋高エネルギー中間体 → 被測定物質＊ ＊印は励起状態を表わしている。励起した被測定物質は
光を放出してもとの基底状態に戻る。 被測定物質＊ → 被測定物質＋光 この時放出される光は光検出器２４で検出される。この
時の光放出量は被測定物質の量に比例するから、この光
の量を測定することにより被測定物質の量を検出するこ
とができる。
【０００９】化学発光の時間的経過を図１（Ｂ）に示
す。この発光反応は瞬時に起こるものではなく、その反
応速度はかなり遅い。（Ｂ）でｔ1はミキサー１０で発
光試薬と混合されて反応を開始した被測定物質がステン
レスチューブ２２を経て光検出器２４に到達するまでに
要する時間であり、ｔ2はその反応混合物が光検出器２
４内に留まっている時間である。ｔ2の間に光が検出さ
れる。ｔ1，ｔ2はそれぞれ次の式で表わされる。 ｔ1＝（ミキサー１０の容積＋チューブ２２の容積）／
総流量 ｔ2＝光検出器２４のセルの容積／総流量 光検出器２４は（Ｂ）の図で斜線で示された部分の発光
を検出する。ｔ1の式から明らかなように、ステンレス
チューブ２２の内径又は長さを調節することにより、発
光のどの部分を検出するかを調節することができる。高
いシグナル強度を得るためだけであれば、ｔ1は発光の
最高点近くにセットされるのが普通である。
す。この発光反応は瞬時に起こるものではなく、その反
応速度はかなり遅い。（Ｂ）でｔ1はミキサー１０で発
光試薬と混合されて反応を開始した被測定物質がステン
レスチューブ２２を経て光検出器２４に到達するまでに
要する時間であり、ｔ2はその反応混合物が光検出器２
４内に留まっている時間である。ｔ2の間に光が検出さ
れる。ｔ1，ｔ2はそれぞれ次の式で表わされる。 ｔ1＝（ミキサー１０の容積＋チューブ２２の容積）／
総流量 ｔ2＝光検出器２４のセルの容積／総流量 光検出器２４は（Ｂ）の図で斜線で示された部分の発光
を検出する。ｔ1の式から明らかなように、ステンレス
チューブ２２の内径又は長さを調節することにより、発
光のどの部分を検出するかを調節することができる。高
いシグナル強度を得るためだけであれば、ｔ1は発光の
最高点近くにセットされるのが普通である。
【００１０】過シュウ酸エステル化学発光の発光強度及
び反応速度は様々な因子の影響を受ける。下記の測定条
件で測定した触媒（イミダゾール）濃度変化によるダン
シルアラニンの発光反応の時間変化を図２に示す。 ダンシルアラニン：２５μＭ シュウ酸エステル：トリクロロフェニルシュウ酸エステ
ル０．５ｍＭ Ｈ2Ｏ2：２．５ｍＭ これらを（２００ｍｌＨ2Ｏ＋８００ｍｌアセトニトリ
ル）に溶解し、ＨＮＯ3によりｐＨ＝７．０に調節し
た。測定温度は３０℃とした。
び反応速度は様々な因子の影響を受ける。下記の測定条
件で測定した触媒（イミダゾール）濃度変化によるダン
シルアラニンの発光反応の時間変化を図２に示す。 ダンシルアラニン：２５μＭ シュウ酸エステル：トリクロロフェニルシュウ酸エステ
ル０．５ｍＭ Ｈ2Ｏ2：２．５ｍＭ これらを（２００ｍｌＨ2Ｏ＋８００ｍｌアセトニトリ
ル）に溶解し、ＨＮＯ3によりｐＨ＝７．０に調節し
た。測定温度は３０℃とした。
【００１１】従来の測定方法であれば、強い発光シグナ
ルを得ることが重要課題と考えられているので、図２の
場合にはイミダーゾールの濃度を１０〜５０ｍＭになる
ように測定条件を調節し、ｔ1が１．５〜５秒になるよ
うにステンレスチューブ２２の内径又は長さを調節して
測定するところである。しかし、そのような従来の測定
では、通常の光源励起による蛍光法に比べてバックグラ
ウンドレベルは著しく低いものの、まだかなりのバック
グラウンドが存在しており、測定のＳ／Ｎ比を下げ、測
定を不安定なものにする。そこで、本発明者は従来あま
り考慮されていなかったバックグラウンドの発光に着目
して、下記の条件でバックグラウンドの発光曲線を測定
した。 イミダーゾール：２ｍＭ シュウ酸エステル：トリクロロフェニルシュウ酸エステ
ル０．５ｍＭ Ｈ2Ｏ2：２．５ｍＭ これらを（２００ｍｌＨ2Ｏ＋８００ｍｌアセトニトリ
ル）に溶解し、ＨＮＯ3によりｐＨ＝７．０に調節し
た。測定温度は３０℃とした。そのバックグラウンドの
測定結果と同一条件化で測定したダンシルアラニンの発
光曲線を図３に示す。バックグラウンドの発光ＢＧはダ
ンシルアラニンの発光Ｓと比べて反応速度が非常に速
く、ｔ1を１０秒未満に設定した場合にはバックグラウ
ンドレベルはまだ高く、１０秒以上に設定すればバック
グラウンドレベルを低く抑えることができる。
ルを得ることが重要課題と考えられているので、図２の
場合にはイミダーゾールの濃度を１０〜５０ｍＭになる
ように測定条件を調節し、ｔ1が１．５〜５秒になるよ
うにステンレスチューブ２２の内径又は長さを調節して
測定するところである。しかし、そのような従来の測定
では、通常の光源励起による蛍光法に比べてバックグラ
ウンドレベルは著しく低いものの、まだかなりのバック
グラウンドが存在しており、測定のＳ／Ｎ比を下げ、測
定を不安定なものにする。そこで、本発明者は従来あま
り考慮されていなかったバックグラウンドの発光に着目
して、下記の条件でバックグラウンドの発光曲線を測定
した。 イミダーゾール：２ｍＭ シュウ酸エステル：トリクロロフェニルシュウ酸エステ
ル０．５ｍＭ Ｈ2Ｏ2：２．５ｍＭ これらを（２００ｍｌＨ2Ｏ＋８００ｍｌアセトニトリ
ル）に溶解し、ＨＮＯ3によりｐＨ＝７．０に調節し
た。測定温度は３０℃とした。そのバックグラウンドの
測定結果と同一条件化で測定したダンシルアラニンの発
光曲線を図３に示す。バックグラウンドの発光ＢＧはダ
ンシルアラニンの発光Ｓと比べて反応速度が非常に速
く、ｔ1を１０秒未満に設定した場合にはバックグラウ
ンドレベルはまだ高く、１０秒以上に設定すればバック
グラウンドレベルを低く抑えることができる。
【００１２】図４にｔ1を３秒にした場合（Ａ）と２０
秒にした場合のダンシルアミノ酸のクロマトグラムを示
す。それぞれの測定条件は下記のとおりである。 （Ａ）移動相：２ｍＭイミダーゾール（７５０ｍｌＨ2
Ｏ＋２５０ｍｌアセトニトリル中）、ｐＨ＝７．０、流
速＝０．８ｍｌ／分 シュウ酸エステル溶液：トリクロロフェニルシュウ酸エ
ステル０．５ｍＭ（１０００ｍｌアセトニトリル中）、
流速＝０．５ｍｌ／分 Ｈ2Ｏ2溶液：Ｈ2Ｏ2 １０ｍＭ（１０００ｍｌアセトニ
トリル中）、流速＝１．２ｍｌ／分 ｔ1＝３秒 （Ｂ）移動相：１．８ｍＭイミダーゾール（７５０ｍｌ
Ｈ2Ｏ＋２５０ｍｌアセトニトリル中）、ｐＨ＝７．
０、流速＝０．８ｍｌ／分 シュウ酸エステル溶液：（Ａ）のものと同じ Ｈ2Ｏ2溶液：Ｈ2Ｏ2 ４０ｍＭ（１０００ｍｌアセトニ
トリル中）、流速＝１．２ｍｌ／分 ｔ1＝２０秒 サンプルは：（Ａ）、（Ｂ）ともに共通であり、５０ｆ
ｍｏｌのダンシルアミノ酸である。ピーク（１）はアラ
ニン、（２）はバリン、（３）はイソロイシン、（４）
はフェニルアラニンである。 カラム：島津テクノ社製ＯＤＳ 内径４．６ｍｍ、長さ
１５ｍｍ 移動層の組成は各アミノ酸の良好な分離が得られるよう
に決定した。分離の関係でイミダゾールの濃度は２ｍＭ
以上にはできなかった。図４の結果から明らかなよう
に、ｔ1を長く設定した方がＳ／Ｎ比が良好である。
（Ａ）の場合バックグラウンドは約７０ｎＡ、（Ｂ）の
場合はバックグラウンドは約３．５ｎＡであった。
秒にした場合のダンシルアミノ酸のクロマトグラムを示
す。それぞれの測定条件は下記のとおりである。 （Ａ）移動相：２ｍＭイミダーゾール（７５０ｍｌＨ2
Ｏ＋２５０ｍｌアセトニトリル中）、ｐＨ＝７．０、流
速＝０．８ｍｌ／分 シュウ酸エステル溶液：トリクロロフェニルシュウ酸エ
ステル０．５ｍＭ（１０００ｍｌアセトニトリル中）、
流速＝０．５ｍｌ／分 Ｈ2Ｏ2溶液：Ｈ2Ｏ2 １０ｍＭ（１０００ｍｌアセトニ
トリル中）、流速＝１．２ｍｌ／分 ｔ1＝３秒 （Ｂ）移動相：１．８ｍＭイミダーゾール（７５０ｍｌ
Ｈ2Ｏ＋２５０ｍｌアセトニトリル中）、ｐＨ＝７．
０、流速＝０．８ｍｌ／分 シュウ酸エステル溶液：（Ａ）のものと同じ Ｈ2Ｏ2溶液：Ｈ2Ｏ2 ４０ｍＭ（１０００ｍｌアセトニ
トリル中）、流速＝１．２ｍｌ／分 ｔ1＝２０秒 サンプルは：（Ａ）、（Ｂ）ともに共通であり、５０ｆ
ｍｏｌのダンシルアミノ酸である。ピーク（１）はアラ
ニン、（２）はバリン、（３）はイソロイシン、（４）
はフェニルアラニンである。 カラム：島津テクノ社製ＯＤＳ 内径４．６ｍｍ、長さ
１５ｍｍ 移動層の組成は各アミノ酸の良好な分離が得られるよう
に決定した。分離の関係でイミダゾールの濃度は２ｍＭ
以上にはできなかった。図４の結果から明らかなよう
に、ｔ1を長く設定した方がＳ／Ｎ比が良好である。
（Ａ）の場合バックグラウンドは約７０ｎＡ、（Ｂ）の
場合はバックグラウンドは約３．５ｎＡであった。
【００１３】化学発光は実施例で説明した過シュウ酸エ
ステル化学反応に限らない。他の発光試薬としてはルミ
ノールと過酸化水素を用いるものや、ルシフェリンとル
シフェラーゼを用いるものなどがある。いずれの発光試
薬を用いる場合も発光反応でバックグラウンドの発光と
の間に反応速度に差があれば同様にしてバックグラウン
ドを低減し、Ｓ／Ｎ比の大きな状態で測定することがで
きる。
ステル化学反応に限らない。他の発光試薬としてはルミ
ノールと過酸化水素を用いるものや、ルシフェリンとル
シフェラーゼを用いるものなどがある。いずれの発光試
薬を用いる場合も発光反応でバックグラウンドの発光と
の間に反応速度に差があれば同様にしてバックグラウン
ドを低減し、Ｓ／Ｎ比の大きな状態で測定することがで
きる。
【００１４】
【発明の効果】本発明では被測定物質に発光試薬が混合
されてから１０秒以上経過後に光検出器で発光を検出す
るように混合物流路を設定し、かつ化学発光強度が発光
試薬と被測定物質との混合から１０秒以上経過後でも検
出に十分な強度を持っているように反応条件を設定して
おくので、バックグラウンドレベルが十分低下し、Ｓ／
Ｎ比の高い検出を行なうことができる。
されてから１０秒以上経過後に光検出器で発光を検出す
るように混合物流路を設定し、かつ化学発光強度が発光
試薬と被測定物質との混合から１０秒以上経過後でも検
出に十分な強度を持っているように反応条件を設定して
おくので、バックグラウンドレベルが十分低下し、Ｓ／
Ｎ比の高い検出を行なうことができる。
【図１】一実施例を示す図であり、（Ａ）は本発明が適
用されるフローシンジェクション分析装置を示す流路
図、（Ｂ）は化学発光強度と検出までの時間との関係を
示す図である。
用されるフローシンジェクション分析装置を示す流路
図、（Ｂ）は化学発光強度と検出までの時間との関係を
示す図である。
【図２】触媒（イミダゾール）濃度と化学発光の反応速
度との関係を示す図である。
度との関係を示す図である。
【図３】ダンシルアラニンの発光曲線とバックグラウン
ドの発光曲線を示す図である。
ドの発光曲線を示す図である。
【図４】化学発光反応開始から光検出までの時間を変え
た場合のクロマトグラムを示す図である。
た場合のクロマトグラムを示す図である。
２ 移動相 ６ インジェクタ ８ ステンレスチューブ １０ ミキサー １２ シュウ酸エステル １４ 過酸化水素 ２２ 混合物流路のステンレスチューブ ２４ 光検出器
Claims (1)
- 【請求項１】 流路中を流れている被測定物質に発光試
薬を混合する混合部と、化学発光を検出する光検出器
と、混合部で発光試薬と混合して化学発光反応を起こし
ている混合物を前記光検出器に導く混合物流路とを備え
た化学発光測定装置を用い、 前記混合物流路は混合物が前記混合部から前記光検出器
に到達するのに要する時間が１０秒以上になるように設
定し、 かつ前記発光試薬と被測定物質との混合から１０秒以上
経過後でも 化学発光強度が検出に十分な強度をもってい
るように反応条件を設定しておくことを特徴とする化学
発光測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3185437A JP2581347B2 (ja) | 1991-06-28 | 1991-06-28 | 化学発光測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3185437A JP2581347B2 (ja) | 1991-06-28 | 1991-06-28 | 化学発光測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0510937A JPH0510937A (ja) | 1993-01-19 |
| JP2581347B2 true JP2581347B2 (ja) | 1997-02-12 |
Family
ID=16170778
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3185437A Expired - Fee Related JP2581347B2 (ja) | 1991-06-28 | 1991-06-28 | 化学発光測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2581347B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7622198B2 (en) | 2001-12-28 | 2009-11-24 | Citizen Holdings Co., Ltd. | Decorative article having white coating and method for manufacture thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6373136A (ja) * | 1986-09-17 | 1988-04-02 | Showa Denko Kk | 液体クロマトグラフイ用化学発光検出器 |
| JPS6375540A (ja) * | 1986-09-18 | 1988-04-05 | Showa Denko Kk | 液体クロマトグラフイ用化学発光検出器 |
-
1991
- 1991-06-28 JP JP3185437A patent/JP2581347B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0510937A (ja) | 1993-01-19 |
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