JP2547713B2 - ジオールを製造する培養物および混合物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【従来の技術】ドデカハイドロ−３ａ，６，６，９ａ−
テトラメチルナフト〔２，１−ｂ〕フラン(1) は重要な
芳香性化学製品である（米国特許第3,029,255 号参
照）。それは例えば化粧品、家庭用品のような高級香料
組成物や官能性製品において持続的な龍涎香効果が望ま
れる場合に用いられて来た。化合物(1) はまた龍涎香チ
ンキの成分であり（ビー．デー．ムークハージーとアー
ル．アール．パーテル，第７回精油国際会議，日本，京
都，論文番号１３６参照）、そして化合物(1) は人工龍
涎香処方において用いられて来た。化合物(1) はサルビ
アセージ（サルビア・スクラレア(Salvia Sclarea)）か
ら得られるスクラレオールとして一般に言われている２
−エテニルデカハイドロ−２−ハイドロキシ−α−２，
５，５，８ａ−ペンタメチル−１−ナフタレンプロパノ
ール(4) から製造されるであろう。米国特許第3,050,53
2 号は二段階酸化過程を用いて化合物(4) をドデカハイ
ドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト〔２，
１−ｂ〕フラン−２（１Ｈ）−オン(2) に変換する方法
を開示している。第１段階ではスクラレオールの水性分
散物がアルカリ条件下において過マンガン酸アルカリ金
属塩酸化試薬と密接に接触せられて該スクラレオールが
部分的に酸化せられる。第２段階において、第１段階で
得られた水性反応混合物は酸性にされそして酸性条件下
で過マンガン酸塩またはクロム酸酸化試薬と密接に接触
せられることにより酸化を完全に行なう。化合物(2) は
既知の方法によって化合物(1) に容易に変換されるであ
ろう。例えば水素化物試薬による化合物(2) の還元は環
化によって化合物(1) に容易に変換されるデカハイドロ
−２−ハイドロキシ−２，５，５，８ａ−テトラメチル
ナフタレンエタノール(3) を与える（例えばヘルベチ
カ．ヒミア．アクタ１９５０年，第３３巻, 第１３０８
頁参照）。米国特許第3,029,255 号は２００〜２２５℃
においてＡl₂Ｏ₃ で化合物(3) を脱水し、次いでβ−ナ
フタレンスルホン酸の存在で真空下に加熱することによ
り（１３０℃から１６０℃まで）化合物(1) に環化せし
める化合物(1) の製造方法を開示している。それに代え
て、キャンビー等によって開示されるように（オースト
ラリア，ジャーナル オブ ケミカル，１９７１年，第
２４巻，第５９１頁参照）、化合物(1) はピリジン中で
トルエン−パラ−スルホニルクロライドを用いて化合物
(3)を環化することによって得られるであろう。

【０００２】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら上記従来
の方法では目的とする化合物(1) の前駆物質である化合
物(3) を営利効果をともなって製造することが困難であ
った。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明は上記従来の課題
を解決するための手段として、

【化１０】 を有するジオールを

【化１１】 ここにＲは

【化１２】 である。からなるグループからの化合物の水性栄養培地
中での好気性下における変換によって回収可能な量で製
造することが出来る寄託番号ＡＴＣＣ２０６２４の微生
物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseonige
r）を水性栄養培地中で好気性下に培養した培養物を提
供するものであり、更に該培養物は凍結乾燥状態である
請求項１に記載の培養物を提供するものであり、更に該
微生物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphzima roseoni
ge）を該ジオールを含む水性培地中で好気的に培養する
ことによって調整された混合物を提供するものであり、
更に上記培養は（ｉ）ｐＨは約２．５から約９．０の間
で（ｉｉ）温度は約１２℃から約３０℃の間で行われる
請求項３に記載の混合物を提供するものである。

【０００４】〔詳細な説明〕図１には本発明にかかる化
合物のいくつかのものの構造が示される。本発明の培養
物は化合物(4) から(14)を所望の製造物を製造するため
の基質として用いて培養された。化合物(6),(11)および
(13)は本発明の培養物を培養した際スクラレオールの変
態過程での中間物質として観察されている。本発明の培
養物は化合物(4) から(14)を含む水性栄養培地中で微生
物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseonige
r）、ＣＢＳ２１４．８３およびＡＴＣＣ２０６２４を
好気性下に培養することによってジオールを(3) の生成
を伴って形成される。これらの化合物は単一でもしくは
該化合物の任意の数を含む混合物として用いられるであ
ろう。

【０００５】懸濁された培養混合物は微生物の存在する
適当な水性栄養培地の接種によって調製される。適当な
栄養培地は窒素源、無機塩、成長因子、所望の基質、お
よび所望なれば他の炭素源を含むものである。本発明の
培養物の培養に用いられたいくらかの炭素源は、例えば
グルコース、ガラクトース、Ｌ−ソルボース、マルトー
ス、蔗糖、セロビオース、トレハロース、Ｌ−アラビノ
ース、Ｌ−ラムノース、エタノール、グリセロール、Ｌ
−エリスリトール、Ｄ−マンニトール、ラクトース、メ
リビオース、ラフィノース、メレチトース、澱粉、Ｄ−
キシロース、Ｄ−ソルビトール、α−メチル−Ｄ−グル
コシド、乳酸、クエン酸、およびコハク酸を含む。適当
な窒素源は例えばペプトン、肉抽出物、イースト抽出
物、コーン浸漬液、カゼイン、尿素、アミノ酸のような
窒素含有有機物質、または硝酸塩、亜硝酸塩、および無
機アンモニウム塩のような窒素含有無機化合物を含む。
適当な無機塩は例えばマグネシウム、カリウム、カルシ
ウム、またはナトリウムの燐酸塩を含む。上記培養基栄
養素は例えば所望なればＢグループのビタミン類の１種
もしくはそれ以上、および（または）Ｆｅ，Ｍｏ，Ｃ
ｕ，Ｍｎ、およびＢのような痕跡ミネラルの１種もしく
はそれ以上によって補強されるであろう。クロロアンフ
イニカルまたはクロロテトラサイクリンのような抗生物
質の添加はバクテリア汚染が問題である時には望ましい
ものである。

【０００６】本発明の培養物は好気性条件下において固
定培養もしくは水中培養（例えば振盪培養、動揺培養）
された。約２．５から約９．０のｐＨ範囲、望ましくは
約３．０から約７．５の範囲、更に望ましくは約３．０
から約６．５の範囲において本発明の培養物の培養は好
適に行われた。該ｐＨは例えば塩酸、酢酸、修酸のよう
な無機もしくは有機酸の添加、または例えば苛性ソー
ダ、水酸化アンモニウムのような塩基の添加、または例
えば燐酸塩、フタラートのようなバッファーの添加によ
って調節されるであろう。孵置温度は約１２℃から約３
３℃の間、更に望ましくは約１５℃から約３０℃の間、
最も望ましくは約１８℃から約２８℃の間に維持される
のが適当であろう。

【０００７】本発明の培養物は単一の炭素源として培養
の初めに栄養培地に化合物(4) から(14)までの基質の一
種またはそれ以上を与えられた。また、該基質は例えば
デキストローズのような他の炭素源と組み合わせて培養
の間もしくは炭素源がなくなってしまった時のいづれか
に添加されるであろう。培養中の基質の濃度に関する唯
一の限定は効果的に曝気することが出来ることである。
しかしながら基質濃度は望ましくは約０．１ｇ／ｌから
約１００ｇ／ｌの間の範囲、更に望ましくは約０．５ｇ
／ｌから約５０ｇ／ｌの間の範囲、最も望ましくは約
１．５ｇ／ｌから約３０ｇ／ｌの範囲である。変態は上
記のいかなる濃度下においても好適に行われる。全変態
時間（最初の培養期の後）は栄養培地の組成と基質濃度
とに大幅に依存するであろう。一般に振盪フラスコ培養
は約１２時間から約２４時間を要する。しかしながら、
動揺器が用いられた場合には培養時間は約４８時間かそ
れ以下に減小せしめられるであろう。変態は培養溶液か
ら単離された微生物の細胞を用いるか周知の方法で該細
胞から単離された酵素によって行われるであろう。この
場合、変態は例えばバッファー溶液、生理学的食塩溶
液、新鮮な栄養溶液、または水のような種々の水性栄養
培地中で好都合に行われることが出来る。単離された細
胞または酵素抽出物は固形支持体に固定されそして所望
の変態が行われる。また基質の変態はこの生物の変種に
よってももたらせられるであろう。このような変種は例
えば細胞をＵＶまたはＸ線に曝露することのような周知
の方法、または例えばアクリジンオレンジのような公知
の突然変異を起こす物質によって容易に得ることが出来
る。

【０００８】基質は粉末、またはツイーン８０（ポリオ
キシエチレンソルビタンモノステアレート）のような乳
化剤中でのスラリーとして、または乳化剤中での溶液と
して、または例えばアセトン、メタノール、エタノー
ル、エチレングリコール、あるいはジオキサンのような
親水性溶媒中の溶液として培地に添加され得る。界面活
性剤または分散剤はまた基質の水性懸濁液に添加される
ことが出来、あるいは基質は超音波を用いて乳化せられ
ることも出来る。例えばシリコンオイル（例えばＵＣＯ
Ｎ）、ポリアルキレングリコール誘導体、トウモロコシ
油、または大豆油のような一般的な消泡剤は泡の調整に
用いられ得る。基質の変態は例えばＧＬＣ，ＴＬＣ，Ｈ
ＰＬＣ，ＩＲ，そしてＮＭＲのような標準分析手法を用
いて監視されることが出来る。もし基質の急速な消失が
観測されたならば微生物の変態能力を最大にするために
更に基質が添加され得る。該過程は通常基質の殆どが培
地から消失した時に終了する。化合物(3) は水性栄養培
地から回収されるかまたは水性栄養培地中か回収後かい
ずれかにおいてフラン化合物(2) に環化されるであろ
う。動揺肉汁から化合物(1) または(3) を単離し精製す
ることは濾過または遠心分離、溶媒抽出、蒸溜、結晶化
等の通常の手法によって達成されるであろう。化合物
(3) は周知の一般的環化方法によってフラン化合物(1)
に変換されるであろう。例えば、キャンビー等によって
記載されている方法（オーストラリア ジャーナル オ
ブ ケミカル，１９７１年，第２４巻，第５９１頁参
照）によるピリジン中０℃でジオール(3) とトルエン−
ｐ−スルホニルクロライドとの反応はここに参照として
取り入れられる。この方法は変態混合物または回収され
たジオール化合物(3) のいづれかにおいて任意に用いら
れるであろう。他の環化方法の例は「有機合成化学」ジ
ョン ウィリー，１９６５年，第８３８〜８３９頁にお
いてアール．ビー．ワグナーとエッチ．デー．ツックに
よって記載されており、それらはここに参照によって取
り入れられる。

【０００９】本発明において得られる培養物中の微生物
はセントラルニュージャージィ，米国から得られた土壌
サンプルから単離された。この種族は加入番号ＣＢＳ２
１４．８３およびＡＴＣＣ２０６２４としてセントラル
ビューロー ブア シンメルカルチャーとアメリカン
タイプ カルチャー コレクションに寄託されている。
該生物はセントラルビューロー ブア シンメルカルチ
ャーによって研究され特徴づけられた。その集団のピン
ク色と形態学上そして物理化学的に特有な性質を有する
ために、ＣＢＳは本発明の微生物をハイホジーマ・ロセ
オニガー（Hyphozyma roseoniger）と命名した。この生
物は明瞭なイースト形状と糸状形状とを有する。両方の
形状とも同様な生物学的性質を示しそしてここに記載さ
れる変態を行なう。該微生物のイースト相の性質は下記
に記述される。

【００１０】１ 形と寸法 ＹＭアガー上の成長物： ピンク，光輝を有し滑らかな
集団。現在の糸状成長細胞は発芽しかけておりおよそ２
×７μｍまたは時にはそれより大きい円形または円筒
状。 麦芽抽出アガー上の成長物： ２ないし３週間後真菌糸
の形成をともないからまりあった固まりのない光輝ある
ピンク、時々茶色がかかる。 コーンミールアガー上の成長物： 明るいオレンジ−ピ
ンク，光輝を有する、菌糸体で縁取られた滑らかな集
団。 ポテトデキストロースアガーとディフコ麦芽アガー上の
成長物： 室温で２〜３週間後ピンク、滑らかな光輝あ
るそして時々黒色に変化する。 ＹＰＣＡアガー上の成長物： １０日以内で８ｍｍ径に
達し、平坦なぬるぬるした淡いオレンジ色（６Ａ３；コ
ーネラップス ワンシャー，１９７８年）、シャープな
いくらか分裂した縁を有する。 ＣｈＡアガー上の成長物： １０日以内に４ｍｍ径にな
る。３週間後中央部が明るい茶色（６Ｄ６）から濃い茶
色までのオリーブ色になり、最後に粘液集団から延び、
濃いオリーブブラウン（４Ｆ４）集団，局部的に薄いく
すんだ白色の中央斑点を有する、もっと先へ行って淡い
菌糸体の密集した束になる。 該生物はポテトおよび米スライド上で観察される吻合を
有する真菌糸を生産する。そのライフサイクルにおいて
明瞭なイースト相を有するヒホミセット菌であると思わ
れる。 ２ 糖での発酵（表１参照）

【表１】 ３．炭素化合物の消化吸収（表２参照）

【表２】 ４ 分裂アルブチン： 正 ５ ＮＨ₄ ＮＯ₃ の消化吸収： 正 ６ ＫＮＯ₃ の消化吸収： 正 ７ ＫＮＯ₂ の消化吸収： 正 ８ エチルアミン上の成長物： 正 ９ ビタミン^- フリー培地上の成長物： 正 １０ １２℃における成長物： 正 １１ ２６℃における成長物： 正 １２ ３０℃における成長物： 正 １３ ３７℃における成長物： 負 １４ ４５℃における成長物： 負 該生物の糸状形状の性質は下記の例外を除いてはイース
ト相と同一である。 ＹＭアガー上の成長物： ピンクの粗な集団真菌糸を有
する糸状成長を示す。 麦芽アガーまたはポテトデキストロースアガー上の成長
物： ピンクの粗な集団、室温で２週間後糸状成長を示
し集団は黒色に変化する。 ポテトおよび米スライド上の成長物： 吻合を有する真
菌糸を生産する。 ＹＭ肉汁のような液状培地中の成長物：ピンクでイース
ト様成長および時々菌糸体を示す。 ポテト蔗糖アガー上の成長物： イースト相の証拠であ
る糸状 下記の実施例は本発明を実施するためにここに選択され
た本発明の実施の態様を説明するために役立つものであ
るが、本発明の範囲を限定するためのものではない。特
に記述のない場合は重量はグラム、温度は摂氏、圧力は
ｍｍＨｇで表される。

【００１１】

【作用】本発明の寄託番号ＡＴＣＣ２０６２４の微生物
ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseoniger）
は水性栄養培地中で

【化１３】 ここにＲは

【化１４】 からなるグループからの化合物を好気性下において、下
記の構造

【化１５】 を有するジオールに変換させる。

【００１２】

【実施例】

〔実施例１〕基質として２−エテニルデカハイドロ−２
−ハイドロキシ−α，２，５，５，８ａ−ペンタメチル
−１−ナフタレンプロパノール(4) を用いることによっ
て水性栄養培地中で好気性条件下にハイホジーマ・ロセ
オニガー（Hyphozima roseonigerを培養することによっ
て、該基質がデカハイドロ−２−ハイドロキシ−２，
５，５，８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール(3)
に変換され、該化合物(3) を含む本発明の培養物が得ら
れる。各々に０．１％ＮＨ₄ ＮＯ₃ ，０．１％Ｈ₂ ＫＰ
Ｏ₄ ，０．０５％ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂ Ｏ、痕跡ミネラル
およびビタミンＢ複合体の水性溶液（１００ｍｌ）が入
っている４個のフラスコは１２０℃，２０分間殺菌され
た。デキストロースの５０％水性溶液（５ｍｌ）とスク
ラレオール(4) （１０ｍｇ）を含むツィーン−８０
（０．１ｍｌ）が各々のフラスコに添加された。各々の
フラスコは３日間成長細胞ＣＢＳ２１４．８３（ＡＴＣ
Ｃ２０６２４）の５容量％により接種された。該夫々の
フラスコはそれから３〜４日間回転振盪器（２００ｒｐ
ｍ）上で２５±１℃で孵置された。初期孵置期間の後、
ツィーン８０（８．０ｇ）中に溶解されているスクラレ
オールの混合物が次の５日間にわたって少しずつ添加さ
れ、その後更に４日間孵置が継続された。孵置期間の終
わりに４個のフラスコの内容物は一緒にされ酢酸エチル
（３×１００ｍｌ）によって抽出されそしてＮａ₂ ＳＯ
₄ により乾燥される。溶媒を蒸発して粗抽出物（４．０
ｇ）を得、該粗抽出物はヘキサン／クロロホルムから結
晶化せられて下記のデカハイドロ−２−ハイドロキシ−
２，５，５，８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール
(3) （２．４ｇ）を得る。融点１３０．５−１３１．５
℃（文献値１３２−１３３℃）、ＧＬＣ純度１００％、
Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣl₃）δ０．７９（６Ｈ，２Ｓ），
０．８７（３Ｈ，２），（３Ｈ，２），０．９−２０
（１６Ｈ，ｍ），３．４１−３．４９（１Ｈ，ｍ），
３．７２−３．７９（１Ｈ，ｍ）、ＩＲ（ＣＨＣl₃）ν
_max ３５８０，３３６０，２９５０，１４６０，１３８
０ｃｍ^-1、ＭＳ，ｍ／ｅ２３６，２２１，１１７，１
３７，１０９、〔α〕²² _D ＝−１６．８°（ＣＨＣ
l₃）、〔文献値１３２−１３３℃，〔α〕^22.5 _D ＝−１
７．３°（ＣＨＣl₃）〕〔Ｍ．ＳｔｏｌｌとＭ．Ｈｉｎ
ｄｅｒ、ヘルベチカ，ヒミア，アクタ，１９５３年，第
３６巻，第１９５５頁〜２００８頁参照）。

【００１３】〔実施例２〕この実施例においては基質と
して実施例１と異なった水準のスクラレオール(4) を用
いて該培養物が得られたイースト抽出物（０．１ｇ）が
痕跡ミネラルとビタミンに対して置き換えられたこと、
およびスクラレオール(4) がヘキサンから抽出され、粉
末にされ、５０−メッシュの篩を通され、その後ツィー
ン−８０の等量と混合されたこと以外は実施例１に記載
されたと同様な方法が用いられた。４日間の初期孵置期
間の後、スクラレオール(4) とツィーン−８０の混合物
は５日間の期間にわたって次第に量を増やしつつ各々の
フラスコに添加され、その後更に４日間孵置された。下
記の表３は各々のフラスコに添加されたスクラレオール
(4) の量と単離されたジオール(3) の収率とを示す。各
々の生成物は実施例１において報告されたと同一のスペ
クトルデーターを示した。

【００１４】

【表３】

【００１５】〔実施例３〕この実施例においては微生物
としてハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphozymaroseoni
ger）の休止細胞（洗浄された）をもちいて該培養物が
得られた この実施例は培養する細胞を休止細胞とした場合の２−
エテニルデカハイドロ−２−ハイドロキシ−α，２，
５，５，８ａ−ペンタメチル−１−ナフタレンプロパノ
ール(4) を用いて水性栄養培地中で好気性条件下に培養
することによって、デカハイドロ−２−ハイドロキシ−
２，５，５，８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール
(3) に変換された該化合物(3) を含む本発明の培養物を
説明するものである。３日間の初期孵置期間の後、培地
肉汁の１００ｍｌからの細胞が収穫されそして０．３×
１０^-4Ｍ燐酸バッファー（ｐＨ＝７．２）（３×２５ｍ
ｌ）で洗浄されそして遠心分離されたこと以外は実施例
１において記述されたと同様な方法が用いられた。洗浄
された細胞は上記バッファー（１００ｍｌ）中に分散さ
れそして７日間回転振盪器（２００ｒｐｍ）上で２５±
１℃で孵置された。ツィーン−８０（５ｇ）中に溶解さ
れたスクラレオール（０．５ｇ）が孵置の最初の４日間
において細胞の懸濁液に次第に量を増やしつつ添加され
た。孵置期間の終わりにおいてＴＬＣ監視は該スクラレ
オール(4) のすべてがジオール(3) に変わったことを示
した。通常の方法において、浮上物は９８％収率でそし
て９９％ＧＬＣ純度でジオールを提供した。この生成物
のスぺクトルデーターは実施例１で報告されたものと同
一である。

【００１６】〔実施例４〕この実施例においては基質と
して化合物(4) から(14)までを用いて該培養物が得られ
た。実施例２において記述された培地の水性溶液（１０
０ｍｌ）が各々に入っている１１個のフラスコは１２０
℃，２０分間殺菌された。各基質の１０ｍｇを含むデキ
ストロース（４ｍｌ）とツィーン−８０（０．１ｍｌ）
の５０％水性溶液が各々のフラスコに添加された。各々
のフラスコはその後ＣＢＳ２１４．８３（ＡＴＣＣ２０
６２４）の３日間成長細胞の５容量％によって接種さ
れ、その後培養物は３日間、回転振盪器（２００ｒｐ
ｍ）上で２４±１℃で孵置された。初期孵置期間の後ツ
ィーン−８０中に溶解された基質の混合物（１：７重量
比）が孵置が数日間継続されたあと各々フラスコに添加
された。変態の進行はＴＬＣによって監視された。孵置
期間の終わりにおいて、各々のフラスコの内容物は酢酸
エチル（３×７５ｍｌ）で抽出され、該抽出物はＮa₂Ｓ
Ｏ₄ で乾燥され、そして溶媒は蒸発された。残渣は溶媒
としてヘキサン／イソプロパン（９５／５）を用いてシ
リカゲル上カラムクロマトグラフィーによって別々に精
製されそしてジオール(3) の収率が測定された。該１１
個の実験のデーターは表４に要約される。

【００１７】

【表４】

【００１８】〔実施例５〕この実施例は基質として使用
される化合物(7),(8) および(9）を調製するための方法
を説明するものである。メチレンクロライド（４０ｍ
ｌ) 中のスクラレオール（９．２４ｇ，０．０３モル）
の溶液はピリジニウムクロロクロメート（１２．９３ｇ
０．０６モル）、酢酸ソーダ（２．４６ｇ．０．０３
モル）、およびメチレンクロライド（１００ｍｌ）の混
合物に少しずつ添加された。該混合物は４時間２５℃攪
拌された。エーテル（２００ｍｌ）が添加されそして上
澄はゴム状沈澱物から分離された。該沈澱物はエーテル
（３×５０ｍｌ）で洗浄された。該エーテル溶液はシリ
カゲル６０（４０ｇ）に通されそして溶媒は蒸発され
た。該残渣はエタノール（２ｍｌ）およびエーテル（４
ｍｌ）中に溶解されそして水（６０ｍｌ）中重亜硫酸ソ
ーダ（１５ｇ）の溶液とともに２５℃、３時間攪拌され
た。該混合物はエーテル（２×３０ｍｌ）によって抽出
された。水層は１０％カセイソーダで塩基性にせられそ
してエーテル（４×５０ｍｌ）で抽出された。該エーテ
ル抽出物はＮa₂ＳＯ₄ で乾燥されそして溶媒は蒸発せら
れて残渣の２．７２g を得た。シリカゲル６０上のクロ
マトグラフィー（７０g 流出液、ヘキサン：酢酸エチ
ル；４：１）は下記の０．７４g のトランス−アルデヒ
ド(7) 、０．６９ｇのシス−アルデヒド(8) 、および
０．６４ｇの環状アルデヒ ド(9) を与えた。
〔(E) −１Ｒ−（１α，２β，４ａβ，−８ａα）〕−
５−（デカハイドロ−２−ヒドロキシ−２，５，５，８
ａ−テトラメチル−１−ナフタレニル）−３−メチル−
２−ペンテナール(7) 融点８３−８５℃、〔α〕_D ＋１
４．２°（ｃ，５．７６，ＣＨＣl₃）； ¹Ｈ−ＮＭＲ
（ＣＤＣl₃）δ０．７８（６Ｈ，ｓ），０．８６（３
Ｈ，ｓ），１．１７（３Ｈ，ｓ），２．１５（３Ｈ，ブ
ロードｓ），０．８−２．５（１７Ｈ，ｍ），５．８２
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈz ），９．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８Ｈz)；ＩＲ（ＣＨＣl₃）ν_max ３５７０，３４４０，
２９４０，２８５０，１６７０，１６３０，１４６０，
１４４０，１３９０ｃｍ^-1；ＭＳ，ｍ／ｅ３０６，２９
１，２７３，１０９，９５，８４；ＵＶν_max （９５％
エタノール）２４１ｎｍ（計算値２３１ｎｍ）（ε, １
７，３００）。元素分析、Ｃ₂₀Ｈ₃₄Ｏ₂ ：計算値Ｃ，７
８．３７；Ｈ，１１．１８。実測値Ｃ，７７．９２，
Ｈ，１１．０２。〔(Z) −１Ｒ−（１α，２β，４ａ
β，８ａα）〕−５−（デカハイドロ−２−ヒドロキシ
−２，５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフタレニ
ル）−３−メチル−２−ペンタナール(8) 、融点９１−
９３．５℃、〔α〕_D ＋８．９（ｃ，３．１３，ＣＨＣ
l₃）； ¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣl₃）δ０．７８（６Ｈ，
ｓ），０．８７（３Ｈ，Ｓ），１．１４（３Ｈ，Ｓ）
１．９８（３Ｈ，ブロードｓ），０．９−２．８（１７
Ｈ，ｍ），５．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈz ）；１０，
０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈz ），ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３５
７０，３４５０，２９４０，２８４０，１６７０，１６
３０，１４６０，１４４０，１３９０ｃｍ^-1；ＭＳ，ｍ
／ｅ３０６，２７３，１０９，９５，８４；ＵＶλ_max
（９５％エタノール） ２４２ｎｍ（計算値２３１ｎ
ｍ）（ε，１３，０００）。元素分析，Ｃ₂₀Ｈ₃₄Ｏ₂ ：
計算値Ｃ，７８．３７；Ｈ，１１．１８。実測値Ｃ，７
８．３４；Ｈ，１１．０２。〔４ａＲ−（４ａα，６ａ
β，１０ｂβ）〕−ドデカハイドロ−３，４ａ，７，
７，７，１０ａ−ペンタチメチル−１Ｈ−ナフト〔２，
１−ｂ〕ピラン−１−アセトアルデヒド(9) 、 ¹Ｈ−Ｎ
ＭＲ（ＣＤＣl₃）δ０．７８（６Ｈ，ｓ），０．８５
（３Ｈ，ｓ），１．２５（３Ｈ，ｓ），１．２７（３
Ｈ，ｓ）。０．９−２．６（１８Ｈ，ｍ），９．８−１
０．０（１Ｈ，ｍ）；ＩＲ（フィルム）ν_max ２９４
０，２８５０，１７２０，１４６０，１４４０，１３８
０，１３７０ｃｍ^-1；ＭＳ，ｍ／ｅ（類似質量の２本の
ピーク）２９１，２７３，２６２，２４５，１０９，４
３。

【００１９】〔実施例６〕この実施例は基質として使用
される化合物(10)を調製するための方法を説明するもの
である。水素化ソーダの懸濁液（５０％懸濁液の０．７
２ｇ，０．０１５モル，ヘキサンによって洗浄してミネ
ラルオイルを除去された）に対して、１０分間にわたっ
てエチルジイソプロピルホスホノノアセテート（３．７
８ｇ，０．０１５モル）のジメトキシエタン（３０ｍ
ｌ）中溶液が添加された。水素の発生が終わった後〔１
Ｒ−（１α，２β，４ａβ，８ａα）〕−４−（２−
アセチロキシ−デカヒドロ−２，５，５，８ａ−テトラ
メチル−１−ナフタレニル）−２−ブタノン（３．２２
ｇ，０．０１モル，ジェー．エー．バートロップ等によ
りジャーナルオブ ケミカルソサエティー，１９６０
年，４６１３中に記述されるようにして調製される）が
一度に全部添加された。該混合物は２１時間加熱還流さ
れその後冷却されそして氷水（１００ｍｌ）上に満たさ
れた。該混合物は６Ｎ塩酸で酸性化され、ヘキサン／酢
酸エチル（４：１，４×１０ｍｌ）で抽出された。該有
機抽出物は水（２×１０ｍｌ）、重炭酸ソーダ飽和溶液
（２×１５ｍｌ）で洗浄され、そしてＮa₂ＳＯ₄ で乾燥
された。溶媒は蒸発せられそして残渣はクロマトグラフ
ィー（シリカゲル６０；流出液，ヘキサン：酢酸エチ
ル，９：１）にかけられて無色粘濶油として３．０２ｇ
のエチル〔（Ｅ，Ｚ）−１Ｒ−（１α，２β，４ａβ，
８ａα）〕−５−（２−アセチロキシ−デカヒドロ−
２，５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフタレニル）
−３−メチル−２−ペンタノエートが得られた。

【００２０】エチル〔（Ｅ，Ｚ）−１Ｒ−（１α，２
β，４ａβ，８ａα）〕−５−（２−アセチロキシ−デ
カヒドロ−２，５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフ
タレニル）−３−メチル−２−ペンタノエート（２．１
９ｇ，０，００５５７モル），イソプロパノール（６５
ｍｌ），水（１０ｍｌ）およびカセイカリ（１．４７
ｇ，０．０２２３モル）の混合物は２４時間加熱還流さ
れた。該混合物は２０ｍｌに濃縮され、水（５０ｍｌ）
が添加され、そして該混合物はエーテルで抽出された。
水相は６ＮＨＣｌで酸性化されそしてエーテル（５×２
０ｍｌ）で抽出された。該エーテル抽出物はブラインで
洗浄されＮａ₂ ＳＯ₄ で乾燥せられ、そして溶媒が蒸発
せられて１．７８１ｇの粗生成物が得られた。シリカゲ
ル６０上のクロマトグラフィー（展開溶媒、ヘキサン：
イソプロパノール，９：１）はシス−イソマーの０．４
５５ｇとトランスイソマー(10)の１．２２３ｇを与え
た。ヘキサン／酢酸エチルからの再結晶は〔(Z) −１Ｒ
−（１α，２β，４ａβ，８ａα）〕−５−（デカヒド
ロ−２−ハイドロキシ−２，５，５，８ａ−テトラメチ
ル−１−ナフタレニル）−３−メチル−２−ペンテノイ
ックアシドの下記の分析化学的試料を与えた。融点１４
７−１４９℃；〔α〕_D ＋６２．９６°（ｃ，４．６
６，ＣＨＣl₃）； ¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＨＣl₃）δ０．８１
（６Ｈ，ｓ），０．８８（３Ｈ，Ｓ），１．２１（３
Ｈ，Ｓ），１．９２（３Ｈ，ブロードＳ），０．９−
２．４（１７Ｈ，ｍ），５．７２（１Ｈ，ブロード
Ｓ），６．８−７．３（１Ｈ，Ｖ．ブロードｓ）；ＩＲ
（ＣＨＣl₃）ν_max ３５００，３４００，２９４０，２
５５０，１６９０，１６４０，１４６０，１４４０ｃｍ
^-1；ＭＳ，ｍ／ｅ３２２，３０４，２８９，２７６，１
０９；ＵＶλ_max （９５％Ｅt ＯＨ）２２８ｎｍ（計算
値２１７ｎｍ）（ε，７３００）；元素分析、 Ｃ₂₀Ｈ
₃₄Ｏ₃ ：計算値 Ｃ，７４．４９，Ｈ，１０．６３，実
測値Ｃ．７４．２０，Ｈ，１０．４０。〔(E)-１Ｒ−
（１α，２β，４ａβ，８ａα）〕−５−（デカハイド
ロ−２−ヒドロキシ−２，５，５，８ａ−テトラメチル
−１−ナフタレニル）−３−メチル−２−ペンテノイッ
クアシド、融点１５１−１５３℃、〔α〕_D ９．４４°
（ｃ，４．８３，ＣＨＣl₃) ； ¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ
l₃）δ０．７９（６Ｈ，ｓ），０．８７（３Ｈ，ｓ），
１．１５（３Ｈ，ｓ），２．１７ （３Ｈ，ブロード
ｓ），０．９−２．４（１７Ｈ，ｍ），５．７０（１
Ｈ，ブロードＳ），５．８−６．１（１Ｈ，ブロード
Ｓ）；ＩＲ（ＣＨＣl₃）ν_max ３６５０，３４００，２
９４０，２５５０，１６９０，１６４０，１４６０，１
４４０ｃｍ^-1；ＭＳ，ｍ／ｅ３２２，３０４，２８９，
２７６，１０９；ＵＶλ_max （９５％ ＥtＯＨ）２３
０ｎｍ（計算値２１７ｎｍ）（ε，５７００）；元素分
析、Ｃ₂₀Ｈ₃₄Ｏ₃ ：計算値Ｃ，７４．４９，Ｈ，１０．
６３、実測値Ｃ，７４．１２，Ｈ，１０．５２

【００２１】〔実施例７〕この実施例は基質として使用
される化合物(11)を調製するための方法を説明するもの
である。テトラヒドロフラン（９０ｍｌ）中ジイソプロ
ピルアミン（８．４８４ｇ，０．０８４モル）の溶液に
０℃においてｎ−ブチルリチウム（２．２Ｍヘキサン溶
液の３８. ２ｍｌ，０．０８４モル）が２０分間にわた
って滴下された。テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中の
酢酸（２．５２ｇ，０．０４２モル）溶液が１５分間に
わたって添加された。該混合物はその後５０℃，４５分
間加熱された。該混合物は２５℃に冷却されそしてテト
ラヒドロフラン（３５ｍｌ）中の〔１Ｒ−（１α，２
β，４αβ，８ａα）−４−（２−アセチロキシ−デカ
ヒドロ−２，５，５，８ａ−テトラメチル−１−ナフタ
レニル）−２−ブタノン（４．５０８ｇ，０．０１４モ
ル，ジェー．エー．バールトロップ等によりジャーナル
オブケミカル ソサエティー，１９６０年，４６１３
中に記述されるようにして調製される）が１０分間にわ
たって添加された。該混合物は２５℃，１７時間攪拌さ
れそしてその後３０分間加熱還流された。該混合物は２
５℃に冷却されその後水（４０ｍｌ）とカセイカリ（５
ｇ）が添加された。該混合物は４時間加熱還流されその
後冷却され水（１００ｍｌ）に添加され、そしてヘキサ
ン・酢酸エチル（４：１）（３×３０ｍｌ）によって抽
出された。水層は０℃に冷却され、６ＮＨＣl により酸
性化され、そしてヘキサン／酢酸エチル（４：１）（４
×５０ｍｌ）によって抽出された。合一された抽出物は
ブラインによって洗浄され、Ｎa₂ＳＯ₄ により乾燥さ
れ、その後溶媒は蒸発されて粗生成物の２．０７１ｇを
得た。シリカゲル６０上のクロマトグラフ（展開溶媒，
ヘキサン：酢酸エチル：酢酸，１０：１０：０．１）は
酸(11)の１．４３４ｇを与えた。ヘキサン／酢酸エチル
からの結晶化は下記の分析化学的試料を与えた。融点１
３６−１３７．５℃，¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣl₃）δ０．
７６（６Ｈ，Ｓ），０．８５（３Ｈ，Ｓ），１．１６と
１．１９（３Ｈ，２Ｓ），１．２８（３Ｈ，Ｓ），０．
８−１．９（１６Ｈ，ｍ），２．４−２．８（２Ｈ，
ｍ），６．１−６．６（２Ｈ，ブロードＳ）；ＩＲ（Ｃ
ＨＣl₃）ν_max ３５５０，２９３０，２７００，１７１
０，１４５５，１３８５cm^-1；ＭＳ, ｍ／ｅ３４０，３
０４，２８９，１０９，９５，４３、元素分析、Ｃ₂₀Ｈ
₃₆Ｏ₄ ：計算値Ｃ，７０．５４，Ｈ，１０．６６，実測
値Ｃ，７０．９９，Ｈ，１０．６３。

【００２２】〔実施例８〕この実施例はα−エテニル−
デカヒドロ−２−ハイドロキシ−α，２，５，５，８ａ
−ペンタメチル−１−ナフタレンプロパノール(4) のド
デカヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト
〔２，１−ｂ〕フラン(1) への２段階工程を用いた変換
を説明するものである。７個のフラスコが用いられたこ
と、各フラスコにはスクラレオール(4) の総計が添加さ
れそして孵置期間が変えられたこと（表５をみよ）を除
いては実施例２において記述されたと同様な方法が用い
られた。孵置が完了した時、フラスコは別々に浮遊せら
れて粗ジオール(3) の７個のサンプルが得られた。各サ
ンプルは別々にキャンビー等の方法（オーストラリア
ジャーナル オブ ケミカル，１９７１年，第２４巻，
第５９１頁をみよ）によってピリジン中でトルエン−ｐ
−スルホニルクロライドと反応せられ、そして各反応生
成物はクゲルロール蒸留されてフラン(1) を与えた。 ¹
Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣl₃）δ０．８３（６Ｈ，２Ｓ），
０．８８（３Ｈ，s ），０．９−１．８（１３Ｈ，
ｍ），１．９−２．０（１Ｈ，ｍ），３．７７−３．９
２（２Ｈ，ｍ）；ＩＲ（メルト）ν_max ２９４０，１４
６０，１３８５，１３６５ｃｍ^-1；ＭＳ，ｍ／ｅ２３
６，２２１，２０４，１７７，１３７，９７。該７個の
実験のデータは表５に要約される。

【００２３】

【表５】

【００２４】〔実施例９〕この実施例は培養することに
よって調整された混合物は水性栄養培地から分離される
ことなく変態生成物デカヒドロ−２−ハイドロキシ−
２，５，５，８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール
(3) をドデカヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチ
ルナフト〔２，１−ｂ〕フラン(1) へ直接環化されるこ
とが可能であることを示すものである 発酵肉汁の１００ｍｌ中の基質としてスクラレオール
（２．０ｇ）を用いて実施例２に記述されたと同様な方
法が用いられた。１４日の全孵置時間の後、フラスコの
内容物は反応容器に移されそして攪拌、加熱還流せられ
た。トルエン−ｐ−スルホニルクロライド（２．４８
ｇ）、カセイソーダペレット（２５ｇ）およびテトラヒ
ドロフラン（２００ｍｌ）が添加されそして混合物は２
０℃で攪拌された。５時間後トルエン−ｐ−スルホニル
クロライド（１．５０ｇ）が更に添加せられそして該反
応混合物は一晩攪拌された。次の日、該混合物は３０分
間加熱還流され、冷却され、そして酢酸エチル（３×１
００ｍｌ）で抽出された。合一された抽出物はＮa₂ＳＯ
₄ により乾燥された。該溶媒は蒸発されそして残渣はク
ーゲルロール蒸溜されて固形分の１．３８ｇを与え、該
固形分は機器分析によれば８５％のドデカヒドロ−３
ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト〔２，１−ｂ〕
フラン(1) を含んでいた。

【００２５】〔実施例１０〕この実施例は培養すること
によって調整された混合物は水性栄養培地から分離され
ることなく変態生成物デカヒドロ−２−ハイドロキシ−
２，５，５，８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール
(3) をドデカヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチ
ルナフト〔２，１−ｂ〕フラン(1) に直接環化されるこ
とが可能であることを示す実施例１０とは別の態様のも
のである。発酵肉汁の１００ｍｌ中の基質としてスクラ
レオール（２．０ｇ）を用いて実施例２に記述されたと
同様な方法が用いられた。１４日間の全孵置時間の後、
フラスコの内容物は反応容器に移され攪拌および加熱還
流せられた。発酵肉汁は６Ｎ塩酸で酸性化され（約ｐＨ
１）、酢酸エチル（１００ｍｌ）が添加され、そして該
混合物は６時間攪拌、加熱還流された。冷却後、酢酸エ
チル層は分離され、中性になるまで洗浄され、そして乾
燥された。該溶媒は蒸発されそして残渣はクーゲルロー
レル蒸留されて１．４ｇの固形分を与え、該固形分は機
器分析によれば３８％のドデカヒドロ−３ａ，６，６，
９ａ−テトラメチルナフト〔２，１−ｂ〕フラン(1) を
含んでいた。

【００２６】〔実施例１１〕この実施例は培養すること
によって調整された混合物は水性栄養培地から分離され
ることなく変態生成物デカヒドロ−２−ハイドロキシ−
２，５，５，８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール
(3) をドデカヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチ
ルナフト〔２，１−ｂ〕フラン(1) に直接環化されるこ
とが可能であることを示す更に別の態様のものである。
イオン交換樹脂ドウェックス５０×２４００（１０ｇ）
が６Ｎ塩酸の代わりに発酵肉汁へ添加されたことを除い
ては実施例８において記述されたと同様な方法が用いら
れた。浮遊、そしてクーゲルロール蒸留は１．３２ｇの
固形分を与え、該固形分は化合物(1) の３７％を含んで
いた。

【００２７】

【発明の効果】したがって本発明では芳香性化学製品で
あるドデカハイドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチ
ルナフト〔２，１−ｂ〕フランに変換するための前駆物
質であるデカハイドロ−２−ハイドロキシ−２，５，
５，８ａ−テトラメチルナフタレンエタノール(3) を営
利的に製造することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明における重要な化合物のいくつかのもの
の構造を示すものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 フィリップ エイ．クリステンソン アメリカ合衆国 07432 ニュージャー ジー，ミドランド パーク，バスティー ド ドライブ 118

Claims (4)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記の構造 【化１】 を有するジオールを 【化２】 ここにＲは 【化３】 である。からなるグループからの化合物の水性栄養培地
   中での、好気性下における変換によって回収可能な量で
   製造することが出来る寄託番号ＡＴＣＣ２０６２４の微
   生物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseonig
   er）と、該微生物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphoz
   yma roseoniger）が好 気性下で培養されている水性栄養
   培地とからなることを特徴とする培養物
2. 【請求項２】該培養物は凍結乾燥形態である請求項１に
   記載の培養物
3. 【請求項３】下記の構造 【化４】 を有するジオールを 【化５】 ここにＲは 【化６】 からなるグループから選抜された化合物の水性栄養培地
   中での好気性下における変換によって回収可能な量で製
   造するための寄託番号ＡＴＣＣ２０６２４の微生物ハイ
   ホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma roseoniger）と、
   該微生物ハイホジーマ・ロセオニガー（Hyphozyma rose
   oniger）が好 気性下に培養されている水性栄養培地と、
   該微生物ハイホジーマ・ロセオ ニガー（Hyphozyma rose
   oniger）を好気性下に培養することによって該化 合物か
   ら変換されたジオールとからなることを特徴とする混合
   物
4. 【請求項４】下記の構造 【化７】 を有するジオールを 【化８】 ここにＲは 【化９】 である。からなるグループから選択された化合物の水性
   栄養培地中で（ｉ）ｐＨは約２．５から約９．０の間で
   （ｉｉ）温度は約１２℃から約３０℃の間の条件で好気
   性下における変換によって回収可能な量で製造するため
   の寄託番号ＡＴＣＣ２０６２４の微生物ハイホジーマ・
   ロセオニガー（Hyphozyma roseoniger）を培養すること
   によって調整された請求項３に記載の混合物