JP2534470B2 - 免疫グロブリンｇ含有製剤及びその製造方法 - Google Patents
免疫グロブリンｇ含有製剤及びその製造方法Info
- Publication number
- JP2534470B2 JP2534470B2 JP7211624A JP21162495A JP2534470B2 JP 2534470 B2 JP2534470 B2 JP 2534470B2 JP 7211624 A JP7211624 A JP 7211624A JP 21162495 A JP21162495 A JP 21162495A JP 2534470 B2 JP2534470 B2 JP 2534470B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- flagella
- pseudomonas aeruginosa
- antigen
- threonine
- alanine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 title claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 8
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 claims abstract description 75
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 61
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 61
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 208000032536 Pseudomonas Infections Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 5
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims description 32
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 19
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 19
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 16
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 16
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 15
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 15
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 15
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 15
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 15
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 15
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 12
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 12
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 12
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 12
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 12
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 claims description 12
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 11
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 10
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 8
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000004899 motility Effects 0.000 claims description 8
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 claims description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical group N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 19
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract description 13
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 abstract description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 25
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 12
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 9
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 8
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 230000000610 leukopenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- -1 0.9% Chemical compound 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150003886 CRYZ gene Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 229910001006 Constantan Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 125000000899 L-alpha-glutamyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001314440 Triphora trianthophoros Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000003453 ammonium sulfate precipitation method Methods 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000009529 body temperature measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000004565 granule cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004457 myocytus nodalis Anatomy 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1214—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Pseudomonadaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/21—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Pseudomonadaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Vessels, Lead-In Wires, Accessory Apparatuses For Cathode-Ray Tubes (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は緑膿菌(シュードモ
ナス・アエルギノサ、psudomonas aeruginosa)感染症
に有効なワクチンに関するものである。さらに詳しく
は、本発明は、緑膿感染症に有効な、能動免疫のための
防御的緑膿菌鞭毛(Ｈ)抗原を含有するワクチン、ならび
に、受動免疫のための免疫グロブリンＧ含有製剤を提供
するものである。
ナス・アエルギノサ、psudomonas aeruginosa)感染症
に有効なワクチンに関するものである。さらに詳しく
は、本発明は、緑膿感染症に有効な、能動免疫のための
防御的緑膿菌鞭毛(Ｈ)抗原を含有するワクチン、ならび
に、受動免疫のための免疫グロブリンＧ含有製剤を提供
するものである。
【０００２】
【従来の技術】緑膿菌は、主として火傷を負った人々、
嚢胞性線維症患者または器質機能欠損患者、並びに腫瘍
患者等の免疫防御を損傷されている患者の院内感染に伴
ってしばしば見出される日和見感染性病原体である。シ
ュードモナス属による感染に対する抗生物質の効果は、
耐性菌が出現することによって制限されており、緑膿菌
感染症に対して有効な免疫学的手段の開発が試みられて
いた。
嚢胞性線維症患者または器質機能欠損患者、並びに腫瘍
患者等の免疫防御を損傷されている患者の院内感染に伴
ってしばしば見出される日和見感染性病原体である。シ
ュードモナス属による感染に対する抗生物質の効果は、
耐性菌が出現することによって制限されており、緑膿菌
感染症に対して有効な免疫学的手段の開発が試みられて
いた。
【０００３】感染の引き金となるのは種々の、Ｏ群抗原
を産生する菌株またはＨ−抗原を産生する菌株である。
アンソーグ(Ａnsorg．(Ｚbl．Ｂakt．Ｈyg．Ｉ．Ａbt．
orig．)Ａ２４２,２２８−２３８(１９７８))による
と、緑膿菌は、免疫蛍光法によって、部分抗原類a0・a1
・a2・a3・a4からなる複合体鞭毛(Ｈ)抗原 a と、単一
の鞭毛(Ｈ)抗原 b に分類することができる。部分因子a
0〜a4は独立の決定基であるので、数個のＨ型を有する
抗原パターンが得られる。Ｏ群とＨ群とは自由な組み合
わせを示す。
を産生する菌株またはＨ−抗原を産生する菌株である。
アンソーグ(Ａnsorg．(Ｚbl．Ｂakt．Ｈyg．Ｉ．Ａbt．
orig．)Ａ２４２,２２８−２３８(１９７８))による
と、緑膿菌は、免疫蛍光法によって、部分抗原類a0・a1
・a2・a3・a4からなる複合体鞭毛(Ｈ)抗原 a と、単一
の鞭毛(Ｈ)抗原 b に分類することができる。部分因子a
0〜a4は独立の決定基であるので、数個のＨ型を有する
抗原パターンが得られる。Ｏ群とＨ群とは自由な組み合
わせを示す。
【０００４】緑膿菌培養物の調製に用いられた菌株、お
よび生産された抗原類を下記の表１に示す。
よび生産された抗原類を下記の表１に示す。
【表１】 菌株 Ｈ−型 １ １７０００１ − b Ｍ−２ − b ２ ５１４２ − a0 ３ ５９４０ − a0・a2 ４ ５９３９ − a0・a3 ５ ５９３３ − a0・a1・a2 １２１０ − a0・a1・a2 １６９９０ − a0・a1・a2 ６ １７００１８ − a0・a3・a4
【０００５】振盪、ホモジネーションおよび遠心分離に
よって単離された鞭毛抗原のフィラメント[アンソーグ
(Ｒ．Ａnsorg)、シュミット(Ｗ．Ｓchmitt)メド・マイ
クロバイオロ・イムノロ(Ｍed．Ｍicrobiol．Ｉmmuno
l．)]は鞭毛と鞭毛フラクションからなると共に、リポ
多糖類(ＬＰＳ)と栄養培地由来の不純物とを伴ってい
る。そのような製剤は本来発熱性であり、ヒトに投与す
るには不適当である。
よって単離された鞭毛抗原のフィラメント[アンソーグ
(Ｒ．Ａnsorg)、シュミット(Ｗ．Ｓchmitt)メド・マイ
クロバイオロ・イムノロ(Ｍed．Ｍicrobiol．Ｉmmuno
l．)]は鞭毛と鞭毛フラクションからなると共に、リポ
多糖類(ＬＰＳ)と栄養培地由来の不純物とを伴ってい
る。そのような製剤は本来発熱性であり、ヒトに投与す
るには不適当である。
【０００６】ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ８６／０３９７４
には１つの精製工程によって得られた、発熱物質不含の
多分散形の天然の緑膿菌鞭毛(Ｈ)抗原(ＦＡＧ)の構造が
記載されている。それらの抗原は、それぞれ、以下の単
量体成分: a) アミノ酸類:アスパラギン酸またはアスパラギン(Ａ
sp／Ａsn)、スレオニン(Ｔhr)、セリン(Ｓer)、グルタ
ミン酸またはグルタミン(Ｇlu／Ｇln)、グリシン(Ｇl
y)、アラニン(Ａla)、バリン(Ｖal)、イソロイシン(Ｉl
e)、ロイシン(Ｌeu)、チロシン(Ｔyr)、フェニルアラニ
ン(Ｐhe)、リジン(Ｌys)、アルギニン(Ａrg)、および場
合によりトリプトファン(Ｔrp)を含有しており、 b) Ｎ末端アミノ酸配列:アラニン−ロイシン−スレオ
ニン−バリン−アスパラギン−スレオニン−アスパラギ
ン−イソロイシン−アラニン−を含有しており、 c) 分子量が４３,５００〜５３,０５０であって、 d) プロリン(Ｐro)、メチオニン(Ｍet)セミシステイン
(１／２Ｃys)およびヒスチジンを含んでいない単量体成
分を含有している。
には１つの精製工程によって得られた、発熱物質不含の
多分散形の天然の緑膿菌鞭毛(Ｈ)抗原(ＦＡＧ)の構造が
記載されている。それらの抗原は、それぞれ、以下の単
量体成分: a) アミノ酸類:アスパラギン酸またはアスパラギン(Ａ
sp／Ａsn)、スレオニン(Ｔhr)、セリン(Ｓer)、グルタ
ミン酸またはグルタミン(Ｇlu／Ｇln)、グリシン(Ｇl
y)、アラニン(Ａla)、バリン(Ｖal)、イソロイシン(Ｉl
e)、ロイシン(Ｌeu)、チロシン(Ｔyr)、フェニルアラニ
ン(Ｐhe)、リジン(Ｌys)、アルギニン(Ａrg)、および場
合によりトリプトファン(Ｔrp)を含有しており、 b) Ｎ末端アミノ酸配列:アラニン−ロイシン−スレオ
ニン−バリン−アスパラギン−スレオニン−アスパラギ
ン−イソロイシン−アラニン−を含有しており、 c) 分子量が４３,５００〜５３,０５０であって、 d) プロリン(Ｐro)、メチオニン(Ｍet)セミシステイン
(１／２Ｃys)およびヒスチジンを含んでいない単量体成
分を含有している。
【０００７】また、個々の型の鞭毛(Ｈ)抗原は、アミノ
酸:アスパラギン酸またはアスパラギン、スレオニン、
セリン、グルタミン酸またはグルタミン、グリシン、ア
ラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、
フェニルアラニン、リジンおよびアルギニンをそれぞれ
ある比率で含有している単量体からなることを特徴とす
る。単量体形鞭毛(Ｈ)抗原の上記の比率および分子量を
表２に示す。
酸:アスパラギン酸またはアスパラギン、スレオニン、
セリン、グルタミン酸またはグルタミン、グリシン、ア
ラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、
フェニルアラニン、リジンおよびアルギニンをそれぞれ
ある比率で含有している単量体からなることを特徴とす
る。単量体形鞭毛(Ｈ)抗原の上記の比率および分子量を
表２に示す。
【０００８】
【表２】 アミノ酸／フラジエリン分子 関連のＨ−血清型を有する株 アミノ酸 170018 5939 5142 M-2 1210 5940 アスパラギン酸 ６４ ６９ ７４ ７４ ７６ ６８ スレオニン ３３ ３５ ５０ ４８ ４４ ４１ セリン ３５ ３８ ４９ ４８ ４０ ３７ グルタミン酸 ４２ ４４ ４９ ４９ ５２ ４６ グリシン ４４ ４７ ４９ ５１ ５０ ４４ アラニン ６８ ７３ ８９ ９１ ８１ ７３ バリン ２９ ３０ ３７ ３８ ３２ ２９ イソロイシン ２９ ３０ ２９ ３０ ３２ ２９ ロイシン ３７ ６０ ４４ ４３ ４１ ３７ チロシン ３ ３ ５ ４ ４ ３ フェニルアラニン １０ １２ １４ １３ １２ １０ リジン １９ ２１ １７ １８ ２０ １６ アルギニン １５ １６ １６ １８ １８ １６ Σ＝ ４５０ ４７８ ５２２ ５２５ ５０２ ４４９ ＭＷ＝ 43,500 46,700 52,720 53,050 51,250 45,900
【０００９】発明の構成および目的 多分散形の天然の緑膿菌鞭毛(Ｈ)抗原を得るために、Ｐ
ＣＴ特許出願公開ＷＯ８６／０３９７４に従って最小培
地中で細胞培養を開始して増殖させた後、界面活性剤で
処理して鞭毛(Ｈ)抗原を培養から分離した。この場合、
界面活性剤処理の前に細胞培養を壊し、剪断処理に付す
か、あるいは界面活性剤の存在下で剪断力を課してもよ
い。界面活性剤を加えることにより細胞塊から抗原を分
離し易くなる。ついで、溶液中の抗原を分離する。
ＣＴ特許出願公開ＷＯ８６／０３９７４に従って最小培
地中で細胞培養を開始して増殖させた後、界面活性剤で
処理して鞭毛(Ｈ)抗原を培養から分離した。この場合、
界面活性剤処理の前に細胞培養を壊し、剪断処理に付す
か、あるいは界面活性剤の存在下で剪断力を課してもよ
い。界面活性剤を加えることにより細胞塊から抗原を分
離し易くなる。ついで、溶液中の抗原を分離する。
【００１０】次に、クロマトグラフィー精製法により、
上記の如くにして細胞塊から分離した抗原を、それに付
着しているリポ多糖類、核酸、塩類、多糖類等の不純物
から分離することができる。さらに、残っている界面活
性剤をカラムクロマトグラフィーによる精製工程を経て
除去する。
上記の如くにして細胞塊から分離した抗原を、それに付
着しているリポ多糖類、核酸、塩類、多糖類等の不純物
から分離することができる。さらに、残っている界面活
性剤をカラムクロマトグラフィーによる精製工程を経て
除去する。
【００１１】これまでは、これらの抗原が防御作用を有
しているか否かは知られていなかった。しかし、本発明
者らは、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ８６／０３９７４に記
載されている全ての型の鞭毛(Ｈ)抗原に、防御作用のあ
ることを見い出した。従って、これを用いて一価または
多価ワクチンを製造し、利用することができる。これが
本発明の目的である。
しているか否かは知られていなかった。しかし、本発明
者らは、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ８６／０３９７４に記
載されている全ての型の鞭毛(Ｈ)抗原に、防御作用のあ
ることを見い出した。従って、これを用いて一価または
多価ワクチンを製造し、利用することができる。これが
本発明の目的である。
【００１２】特に本発明は緑膿菌感染症、とりわけ火傷
の危険性の高い人々、例えば消防隊員や軍人等、並びに
免疫抑制治療を受けている人々において有効な緑膿菌感
染症の免疫予防法を得ることを目的とするものである。
の危険性の高い人々、例えば消防隊員や軍人等、並びに
免疫抑制治療を受けている人々において有効な緑膿菌感
染症の免疫予防法を得ることを目的とするものである。
【００１３】また本発明は、免疫グロブリンＧ含有製剤
であって、緑膿菌感染症に対する受動免疫に適した製剤
を提供することを目的とするものである。
であって、緑膿菌感染症に対する受動免疫に適した製剤
を提供することを目的とするものである。
【００１４】本発明のワクチンは、血清型 a および b
の防御的鞭毛(Ｈ)抗原であって、それぞれ、以下の単量
体成分: a) アミノ酸類:アスパラギン酸(Ａsp)、スレオニン(Ｔ
hr)、セリン(Ｓer)、グルタミン酸(Ｇlu)、グリシン(Ｇ
ly)、アラニン(Ａla)、バリン(Ｖal)、イソロイシン(Ｉ
le)、ロイシン(Ｌeu)、チロシン(Ｔyr)、フェニルアラ
ニン(Ｐhe)、リジン(Ｌys)、アルギニン(Ａrg)、および
おそらくトリプトファン(Ｔrp)およびメチオニン(Ｍet)
を含有しており、 b) Ｎ末端アミノ酸配列:アラニン(Ａla)−ロイシン(Ｌ
eu)−スレオニン(Ｔhr)−バリン(Ｖal)−アスパラギン
(Ａsn)−スレオニン(Ｔhr)−アスパラギン(Ａsn)−イソ
ロイシン(Ｉle)−アラニン(Ａla)を含有しており、 c) 分子量が４３,５００〜５３,０５０であって、 d) プロリン、セミシステインおよびヒスチジンを含ん
でいない単量体成分からなる鞭毛(Ｈ)抗原を含有してお
り、発熱成分を含有していないことを特徴としている。
の防御的鞭毛(Ｈ)抗原であって、それぞれ、以下の単量
体成分: a) アミノ酸類:アスパラギン酸(Ａsp)、スレオニン(Ｔ
hr)、セリン(Ｓer)、グルタミン酸(Ｇlu)、グリシン(Ｇ
ly)、アラニン(Ａla)、バリン(Ｖal)、イソロイシン(Ｉ
le)、ロイシン(Ｌeu)、チロシン(Ｔyr)、フェニルアラ
ニン(Ｐhe)、リジン(Ｌys)、アルギニン(Ａrg)、および
おそらくトリプトファン(Ｔrp)およびメチオニン(Ｍet)
を含有しており、 b) Ｎ末端アミノ酸配列:アラニン(Ａla)−ロイシン(Ｌ
eu)−スレオニン(Ｔhr)−バリン(Ｖal)−アスパラギン
(Ａsn)−スレオニン(Ｔhr)−アスパラギン(Ａsn)−イソ
ロイシン(Ｉle)−アラニン(Ａla)を含有しており、 c) 分子量が４３,５００〜５３,０５０であって、 d) プロリン、セミシステインおよびヒスチジンを含ん
でいない単量体成分からなる鞭毛(Ｈ)抗原を含有してお
り、発熱成分を含有していないことを特徴としている。
【００１５】さらに詳しくは、本発明のワクチンの構成
成分である６種類の特異的なＨ−血清型は下記の特徴を
有する。
成分である６種類の特異的なＨ−血清型は下記の特徴を
有する。
【００１６】Ｈ−血清型a0・a3・a4の鞭毛(Ｈ)抗原であ
って、その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレ
オニン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、
バリン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニル
アラニン、リジンおよびアルギニンを６４:３３:３５:
４２:４４:６８:２９:２９:３７:３:１０:１９:１５の
比率で含有しておりその分子量は４３,５００である。
って、その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレ
オニン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、
バリン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニル
アラニン、リジンおよびアルギニンを６４:３３:３５:
４２:４４:６８:２９:２９:３７:３:１０:１９:１５の
比率で含有しておりその分子量は４３,５００である。
【００１７】Ｈ−血清型a0・a3の鞭毛(Ｈ)抗原であっ
て、その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレオ
ニン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、バ
リン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルア
ラニン、リジンおよびアルギニンを６９:３５:３８:４
４:４７:７３:３０:３０:６０:３:１２:２１:１６の比
率で含有しておりその分子量は４６,７００である。
て、その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレオ
ニン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、バ
リン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルア
ラニン、リジンおよびアルギニンを６９:３５:３８:４
４:４７:７３:３０:３０:６０:３:１２:２１:１６の比
率で含有しておりその分子量は４６,７００である。
【００１８】Ｈ−血清型a0の鞭毛(Ｈ)抗原であってその
単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレオニン、セ
リン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、バリン、イ
ソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラニン、
リジンおよびアルギニンを７４:５０:４９:４９:４９:
８９:３７:２９:４４:５:１４:１７:１６の比率で含有
しており、その分子量は５２,７２０である。
単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレオニン、セ
リン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、バリン、イ
ソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラニン、
リジンおよびアルギニンを７４:５０:４９:４９:４９:
８９:３７:２９:４４:５:１４:１７:１６の比率で含有
しており、その分子量は５２,７２０である。
【００１９】Ｈ−血清型 b の鞭毛(Ｈ)抗原であって、
その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレオニ
ン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、バリ
ン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラ
ニン、リジンおよびアルギニンを７４:４８:４８:４９:
５１:９１:３８:３０:４３:４:１３:１８:１８の比率で
含有しておりその分子量は５３,０５０である。
その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレオニ
ン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、バリ
ン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラ
ニン、リジンおよびアルギニンを７４:４８:４８:４９:
５１:９１:３８:３０:４３:４:１３:１８:１８の比率で
含有しておりその分子量は５３,０５０である。
【００２０】Ｈ−血清型a0、a1、a2の鞭毛(Ｈ)抗原であ
って、その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレ
オニン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、
バリン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニル
アラニン、リジンおよびアルギニンを７６:４４:４０:
５２:５０:８１:３２:３２:４１:４:１２:２０:１８の
比率で含有しておりその分子量は５１,２５０である。
って、その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレ
オニン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、
バリン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニル
アラニン、リジンおよびアルギニンを７６:４４:４０:
５２:５０:８１:３２:３２:４１:４:１２:２０:１８の
比率で含有しておりその分子量は５１,２５０である。
【００２１】Ｈ−血清型a0、a2の鞭毛(Ｈ)抗原であっ
て、その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレオ
ニン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、バ
リン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルア
ラニン、リジンおよびアルギニンを６８:４１:３７:４
６:４４:７３:２９:２９:３７:３:１０:１６:１６の比
率で含有しておりその分子量は４５,９００である。
て、その単量体型はアミノ酸:アスパラギン酸、スレオ
ニン、セリン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、バ
リン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルア
ラニン、リジンおよびアルギニンを６８:４１:３７:４
６:４４:７３:２９:２９:３７:３:１０:１６:１６の比
率で含有しておりその分子量は４５,９００である。
【００２２】本発明のワクチンの製造方法は、緑膿菌の
培養物から得、精製した鞭毛(Ｈ)抗原を滅菌濾過し、随
意、Ａl(ＯＨ)3等のアジュバント、並びに所望により、
マーチオレート(merthiolate)等の保存剤等を加えるこ
とからなる。
培養物から得、精製した鞭毛(Ｈ)抗原を滅菌濾過し、随
意、Ａl(ＯＨ)3等のアジュバント、並びに所望により、
マーチオレート(merthiolate)等の保存剤等を加えるこ
とからなる。
【００２３】さらに本発明は、緑膿菌感染症の予防およ
び治療に有効な免疫グロブリン−Ｇ−含有製剤であっ
て、防御的鞭毛(Ｈ)抗原によって免疫されたヒト供与体
または哺乳類の血漿から得た鞭毛(Ｈ)抗体を含有するこ
とを特徴とする製剤を提供するものである。
び治療に有効な免疫グロブリン−Ｇ−含有製剤であっ
て、防御的鞭毛(Ｈ)抗原によって免疫されたヒト供与体
または哺乳類の血漿から得た鞭毛(Ｈ)抗体を含有するこ
とを特徴とする製剤を提供するものである。
【００２４】これらの鞭毛(Ｈ)抗体は、緑膿菌の能動運
動を阻害するとともに、該菌に対する食細胞作用および
細胞内殺菌作用を促進し得る。
動を阻害するとともに、該菌に対する食細胞作用および
細胞内殺菌作用を促進し得る。
【００２５】本発明の好ましい実施態様においては、防
御的な鞭毛(Ｈ)抗原によって免疫されたヒト供与体また
は哺乳類の血漿を硫酸アンモニウム等のタンパク沈降剤
で処理し、析出した免疫グロブリン−Ｇ−含有画分を溶
解させた後、精製し(精製は、該溶液を単量体または重
合体の形の精製鞭毛抗原を共有結合させた担体媒質に通
し、pＨを変化させるか、またはＮＨ4ＳＣＮのようなカ
オトロピック試薬を用いることによってゲルから鞭毛特
異的抗体を溶離することによって都合よく行なえる)、
これを生薬製剤に製剤化することにより、緑膿菌感染症
の予防および治療に有効な免疫グロブリン−Ｇ−含有製
剤を製造する。
御的な鞭毛(Ｈ)抗原によって免疫されたヒト供与体また
は哺乳類の血漿を硫酸アンモニウム等のタンパク沈降剤
で処理し、析出した免疫グロブリン−Ｇ−含有画分を溶
解させた後、精製し(精製は、該溶液を単量体または重
合体の形の精製鞭毛抗原を共有結合させた担体媒質に通
し、pＨを変化させるか、またはＮＨ4ＳＣＮのようなカ
オトロピック試薬を用いることによってゲルから鞭毛特
異的抗体を溶離することによって都合よく行なえる)、
これを生薬製剤に製剤化することにより、緑膿菌感染症
の予防および治療に有効な免疫グロブリン−Ｇ−含有製
剤を製造する。
【００２６】以下、実施例を挙げ本発明をさらに詳しく
説明する。実施例１〜３はワクチンの製造法に関し、実
施例４は免疫グロブリン−Ｇ−含有製剤の製造に関す
る。
説明する。実施例１〜３はワクチンの製造法に関し、実
施例４は免疫グロブリン−Ｇ−含有製剤の製造に関す
る。
【００２７】
【実施例】実施例１ 緑膿菌Ｍ−２鞭毛ワクチンの製造 緑膿菌Ｍ−２培養から得、上記の如く界面活性剤処理、
せん断処理、並びにクロマト処理によって精製した鞭毛
溶液を発熱物質不含の蒸留水でタンパク質濃度が１００
μg／mlになるように希釈し、固形塩化ナトリウムとマ
ーチオレートとを加えて(終濃度、ＮaＣl ０.９％, マ
ーチオレート０.０１％)等張性にした。次いでこの溶液
をサルトリウス(Ｓartoriusu)の使い捨てフイルター
(０.２μm)によって滅菌濾過した。
せん断処理、並びにクロマト処理によって精製した鞭毛
溶液を発熱物質不含の蒸留水でタンパク質濃度が１００
μg／mlになるように希釈し、固形塩化ナトリウムとマ
ーチオレートとを加えて(終濃度、ＮaＣl ０.９％, マ
ーチオレート０.０１％)等張性にした。次いでこの溶液
をサルトリウス(Ｓartoriusu)の使い捨てフイルター
(０.２μm)によって滅菌濾過した。
【００２８】滅菌濾過した試料のタンパク質を測定した
後、鞭毛浮遊液を、滅菌ＮaＣl−マーチオレート溶液
(０.９％／０.０１％)でタンパク質濃度２５μg／mlに
調節し、さらに滅菌ＮaＣl−／マーチオレート溶液中１
％水酸化アルミニウム懸濁液を加えてタンパク質濃度２
０μg／mlに調節した。
後、鞭毛浮遊液を、滅菌ＮaＣl−マーチオレート溶液
(０.９％／０.０１％)でタンパク質濃度２５μg／mlに
調節し、さらに滅菌ＮaＣl−／マーチオレート溶液中１
％水酸化アルミニウム懸濁液を加えてタンパク質濃度２
０μg／mlに調節した。
【００２９】補助薬を加えて得られた完全なワクチン
は、１ml中に、 鞭毛タンパク質 ２０μg Ａl(ＯＨ)3 ２mg ＮaＣl ９mg マーチオレート ０.１mg を含有していた。
は、１ml中に、 鞭毛タンパク質 ２０μg Ａl(ＯＨ)3 ２mg ＮaＣl ９mg マーチオレート ０.１mg を含有していた。
【００３０】実施例２ 緑膿菌１２１０鞭毛ワクチンの製造 緑膿菌１２１０培養から得、上記の如く界面活性剤処
理、せん断処理、並びにクロマト処理によって精製した
鞭毛溶液を発熱物質不含の蒸留水でタンパク質濃度が１
００μg／mlになるように希釈し、固形塩化ナトリウム
とマーチオレートとを加えて(終濃度、ＮaＣl ０.９
％, マーチオレート０.０１％)等張性にした。次いでこ
の溶液をサルトリウス(Ｓartoriusu)の使い捨てフイル
ター(０.２μm)によって滅菌濾過した。
理、せん断処理、並びにクロマト処理によって精製した
鞭毛溶液を発熱物質不含の蒸留水でタンパク質濃度が１
００μg／mlになるように希釈し、固形塩化ナトリウム
とマーチオレートとを加えて(終濃度、ＮaＣl ０.９
％, マーチオレート０.０１％)等張性にした。次いでこ
の溶液をサルトリウス(Ｓartoriusu)の使い捨てフイル
ター(０.２μm)によって滅菌濾過した。
【００３１】滅菌濾過した試料のタンパク質を測定した
後、鞭毛浮遊液を、滅菌ＮaＣl−マーチオレート溶液
(０.９％／０.０１％)でタンパク質濃度２５μg／mlに
調節し、さらに滅菌ＮaＣl−／マーチオレート溶液中１
％水酸化アルミニウム懸濁液を加えてタンパク質濃度２
０μg／mlに調節した。
後、鞭毛浮遊液を、滅菌ＮaＣl−マーチオレート溶液
(０.９％／０.０１％)でタンパク質濃度２５μg／mlに
調節し、さらに滅菌ＮaＣl−／マーチオレート溶液中１
％水酸化アルミニウム懸濁液を加えてタンパク質濃度２
０μg／mlに調節した。
【００３２】補助薬を加えて得られた完全なワクチン
は、１ml中に、 鞭毛タンパク質 ２０μg Ａl(ＯＨ)3 ２mg ＮaＣl ９mg マーチオレート ０.１mg を含有していた。
は、１ml中に、 鞭毛タンパク質 ２０μg Ａl(ＯＨ)3 ２mg ＮaＣl ９mg マーチオレート ０.１mg を含有していた。
【００３３】実施例３ 緑膿菌鞭毛多価ワクチンの製造 緑膿菌Ｍ−２、１２１０、５１４２、５９３９、５９４
０および１７００１８各型の緑膿菌培養から得、上記の
如く界面活性剤処理、剪断処理、並びにクロマト処理に
よって精製した鞭毛溶液を、それぞれ発熱物質不含の蒸
留水でタンパク質濃度が１００μg／mlになるように希
釈し、同じ割合で混合し、固形塩化ナトリウムとマーチ
オレートとを加えて(終濃度、ＮaＣl、０.９％, マーチ
オレート０.０１％)等張性にした。次いでこの溶液をサ
ルトリウス(Ｓartoriusu)の使い捨てフイルター(０.２
μm)によって滅菌濾過した。
０および１７００１８各型の緑膿菌培養から得、上記の
如く界面活性剤処理、剪断処理、並びにクロマト処理に
よって精製した鞭毛溶液を、それぞれ発熱物質不含の蒸
留水でタンパク質濃度が１００μg／mlになるように希
釈し、同じ割合で混合し、固形塩化ナトリウムとマーチ
オレートとを加えて(終濃度、ＮaＣl、０.９％, マーチ
オレート０.０１％)等張性にした。次いでこの溶液をサ
ルトリウス(Ｓartoriusu)の使い捨てフイルター(０.２
μm)によって滅菌濾過した。
【００３４】滅菌濾過した試料のタンパク質を測定した
後、鞭毛浮遊液を、滅菌ＮaＣl−マーチオレート溶液
(０.９％／０.０１％)でタンパク質濃度２５μg／mlに
調節し、さらに滅菌ＮaＣl−／マーチオレート溶液中１
％水酸化アルミニウム懸濁液を加えてタンパク質濃度２
０μg／mlに調節した。
後、鞭毛浮遊液を、滅菌ＮaＣl−マーチオレート溶液
(０.９％／０.０１％)でタンパク質濃度２５μg／mlに
調節し、さらに滅菌ＮaＣl−／マーチオレート溶液中１
％水酸化アルミニウム懸濁液を加えてタンパク質濃度２
０μg／mlに調節した。
【００３５】補助薬を加えて得られた完全なワクチン
は、１ml中に、 鞭毛タンパク質 ２０μg Ａl(ＯＨ)3 ２mg ＮaＣl ９mg マーチオレート ０.１mg を含有していた。
は、１ml中に、 鞭毛タンパク質 ２０μg Ａl(ＯＨ)3 ２mg ＮaＣl ９mg マーチオレート ０.１mg を含有していた。
【００３６】実施例４ 発熱性テスト 上記の方法で得られたワクチンが発熱物質を含有してい
ないことを下記の如くにしてテストした。このテスト
は、基本的に、３またはそれ以上の成体家兎に生産物を
静注投与した後、各兎の体温を８時間測定し(Ｅur．Ｐ
h．,第２版、１９８０、パート１、Ｖ．２．１．４)、
それぞれの体温の最大上昇を記録してその値を生産物の
発熱性の目安とするものである。
ないことを下記の如くにしてテストした。このテスト
は、基本的に、３またはそれ以上の成体家兎に生産物を
静注投与した後、各兎の体温を８時間測定し(Ｅur．Ｐ
h．,第２版、１９８０、パート１、Ｖ．２．１．４)、
それぞれの体温の最大上昇を記録してその値を生産物の
発熱性の目安とするものである。
【００３７】このテストの実施に際して使用したものを
次に示す:サーモデス(thermodes)(Ｃu−コンスタンタ
ン、兎用熱電対、Ｐhシエンク(Ｓchenk));温度記録計
(６カラーポイントプリンターＳＴＤ６２Ａ型、測定範
囲３６〜４２℃、測定精度±０.０８℃);合成材料製の
滅菌した発熱物質不含注射用シリンジ;滅菌した発熱物
質不含注射針;首固定器の付いたスチール製の発熱試験
用の箱;６個の発熱試験用の箱のためのハカリ;サーモス
タット付きの水浴;温度計;ハカリ;サウター(Ｓauter)Ｅ
Ｓ１２０。
次に示す:サーモデス(thermodes)(Ｃu−コンスタンタ
ン、兎用熱電対、Ｐhシエンク(Ｓchenk));温度記録計
(６カラーポイントプリンターＳＴＤ６２Ａ型、測定範
囲３６〜４２℃、測定精度±０.０８℃);合成材料製の
滅菌した発熱物質不含注射用シリンジ;滅菌した発熱物
質不含注射針;首固定器の付いたスチール製の発熱試験
用の箱;６個の発熱試験用の箱のためのハカリ;サーモス
タット付きの水浴;温度計;ハカリ;サウター(Ｓauter)Ｅ
Ｓ１２０。
【００３８】用いた被検動物は、体重１,５００g以上の
健康な雌雄両性の成体家兎であって、これらは、抗生物
質不含の栄養価の高い標準食を与えられており、試験前
数週間、体重減少を示していなかった。
健康な雌雄両性の成体家兎であって、これらは、抗生物
質不含の栄養価の高い標準食を与えられており、試験前
数週間、体重減少を示していなかった。
【００３９】使用した試料は、補助薬不含のＭ−２鞭毛
ワクチンであって、これを注射に先立って約３８℃に加
温しておいた。テストは３羽の兎を一群として行ない、
これらを少なくとも試験開始９０分前に発熱試験の箱に
入れておいた。
ワクチンであって、これを注射に先立って約３８℃に加
温しておいた。テストは３羽の兎を一群として行ない、
これらを少なくとも試験開始９０分前に発熱試験の箱に
入れておいた。
【００４０】被検溶液の投与前４０分以内に、３０分の
間隔をおいて各兎の体温を２回測定して得た温度の平均
値に基づいて初期値を定めた。この初期値測定時に、２
回の連続した温度測定値の開きが０.２℃以上あった兎
は、以後のテストから外した。初期値の変化が０.１℃
を越えなかった兎のみをテストに用いた。主要なテスト
には、初期体温が３９.８℃以上、または３８℃以下の
兎を用いなかった。各兎の周縁耳静脈に試料を１ml／kg
体重の割合で徐々に注射した。注射時間は多くとも４分
間であった。注射後３時間目に記録した最高体温に基づ
き各兎の最大体温を決定した。各兎の体温測定は被検物
質投与の少なくとも９０分前に開始し、注射後３時間目
に終了し、その間、大抵の場合、３０分おきに行なっ
た。各兎の最大体温と初期値との差を結果とした。負の
変化をゼロと評価した。
間隔をおいて各兎の体温を２回測定して得た温度の平均
値に基づいて初期値を定めた。この初期値測定時に、２
回の連続した温度測定値の開きが０.２℃以上あった兎
は、以後のテストから外した。初期値の変化が０.１℃
を越えなかった兎のみをテストに用いた。主要なテスト
には、初期体温が３９.８℃以上、または３８℃以下の
兎を用いなかった。各兎の周縁耳静脈に試料を１ml／kg
体重の割合で徐々に注射した。注射時間は多くとも４分
間であった。注射後３時間目に記録した最高体温に基づ
き各兎の最大体温を決定した。各兎の体温測定は被検物
質投与の少なくとも９０分前に開始し、注射後３時間目
に終了し、その間、大抵の場合、３０分おきに行なっ
た。各兎の最大体温と初期値との差を結果とした。負の
変化をゼロと評価した。
【００４１】評価: 評価に際しては、温度変化を合計
した。３羽の兎からなる群の場合は、個々の値の合計が
１.１５℃以下であれば、その試料は要求を満たすもの
とする。また、合計が２.６５℃以上であれば、その試
料は要求を満たさないものとする。
した。３羽の兎からなる群の場合は、個々の値の合計が
１.１５℃以下であれば、その試料は要求を満たすもの
とする。また、合計が２.６５℃以上であれば、その試
料は要求を満たさないものとする。
【００４２】結果が上記の値の中間にある時は、既述の
方法によって再試験する必要がある。最大限３回繰り返
して行なった。
方法によって再試験する必要がある。最大限３回繰り返
して行なった。
【００４３】繰り返し試験後の評価には全被検動物(３,
６,９,または最高１２羽)を用いた。試験基準を下記の
表３に示す。
６,９,または最高１２羽)を用いた。試験基準を下記の
表３に示す。
【表３】 個々の値の合計が下記の 個々の値の合計が下記の 兎の数 値以下であれば、その物 場合より大きい場合には 質は発熱物質不含テスト 試験に不合格である に合格である ３ １.１５° ２.６５° ６ ２.８０° ４.３０° ９ ４.４５° ５.５９° １２ ６.６０° ６.６０° 三羽の個々の合計が１.１５℃以下であるか、または繰
り返し実験の場合には、上記の表３の条件を満たしてお
れば、試料は試験に合格したものとする。
り返し実験の場合には、上記の表３の条件を満たしてお
れば、試料は試験に合格したものとする。
【００４４】Ｍ−２型鞭毛ワクチン１ml／kg(兎)を注射
した後、得られた三羽の兎それぞれの△tを以下に示
す。
した後、得られた三羽の兎それぞれの△tを以下に示
す。
【００４５】 ワクチン濃度 １０μg／ml ０.１° ０.１° ０.３° Σ△t ０.５℃ １０μg／ml ０.３° ０.４° ０.２° Σ△t ０.９℃ ２０μg／ml ０.３° ０.５° ０.２° Σ△t １.０℃ ２０μg／ml ０.２° ０.１° ０.２° Σ△t ０.５℃ ２０μg／ml ０.１° ０.４° ０.２° Σ△t ０.７℃ このように、テストに用いた製剤は発熱物質を含有して
いないと考えられる。
いないと考えられる。
【００４６】実施例５ 受動免疫に用いるためのＩgＧ
の、マウス超免疫血漿からの単離 防御的Ｍ−２型鞭毛(Ｈ)抗原で免疫された、マウス血漿
を採取し、振盪下、５６℃で３０分間加温し、フィブリ
ンを沈澱させた。１０,０００xgで３０分間遠心した
後、固形硫酸アンモニウムを濃度２５(w／v)％まで加え
て沈澱を析出させた。得られた懸濁液を２０分間攪拌し
た後、室温で１時間放置した。次いで、この懸濁液を、
１０,０００xgで３０分間遠心した後、飽和硫酸アンモ
ニウム溶液で１回洗浄した。沈澱を１０mＭりん酸ナト
リウム緩衝液(pＨ７.５)、５０mＭＮaＣlに溶かし、次
いで、該緩衝液に対して一夜透析した。
の、マウス超免疫血漿からの単離 防御的Ｍ−２型鞭毛(Ｈ)抗原で免疫された、マウス血漿
を採取し、振盪下、５６℃で３０分間加温し、フィブリ
ンを沈澱させた。１０,０００xgで３０分間遠心した
後、固形硫酸アンモニウムを濃度２５(w／v)％まで加え
て沈澱を析出させた。得られた懸濁液を２０分間攪拌し
た後、室温で１時間放置した。次いで、この懸濁液を、
１０,０００xgで３０分間遠心した後、飽和硫酸アンモ
ニウム溶液で１回洗浄した。沈澱を１０mＭりん酸ナト
リウム緩衝液(pＨ７.５)、５０mＭＮaＣlに溶かし、次
いで、該緩衝液に対して一夜透析した。
【００４７】遠心後、イオン交換クロマトグラフィー
(ＤＥ−５２セルロース(Ｗhatman))にかけた。通過した
容積中には免疫グロブリンＧ(ＩgＧ)が含有されてい
る。ＩgＧ試験の後、アミコンセル(amicon cell)を用
いて溶液をもとの容量まで濃縮し、０.９％ＮaＣlに対
して一夜透析した。次いで、セファデックス(Ｓephade
x)Ｇ−２００を用いてゲルクロマトグラフィーを行なっ
た。アミコンセルを用い、ＩgＧ陽性画分を初期容量ま
で濃縮した。
(ＤＥ−５２セルロース(Ｗhatman))にかけた。通過した
容積中には免疫グロブリンＧ(ＩgＧ)が含有されてい
る。ＩgＧ試験の後、アミコンセル(amicon cell)を用
いて溶液をもとの容量まで濃縮し、０.９％ＮaＣlに対
して一夜透析した。次いで、セファデックス(Ｓephade
x)Ｇ−２００を用いてゲルクロマトグラフィーを行なっ
た。アミコンセルを用い、ＩgＧ陽性画分を初期容量ま
で濃縮した。
【００４８】この方法はウェアー(Ｄ．Ｍ．Ｗeir)の実
験免疫学便覧(Ｅdition Ｈandbookof Ｅxperimental
Ｉmmunology)第３版、１９７８、第ＶＩＩ、ＶＩＩＩ
章記載の方法に改良を加えたものである。
験免疫学便覧(Ｅdition Ｈandbookof Ｅxperimental
Ｉmmunology)第３版、１９７８、第ＶＩＩ、ＶＩＩＩ
章記載の方法に改良を加えたものである。
【００４９】緑膿菌の鞭毛抗原に単一特異的に活性な免
疫グロブリン類を生産するためには、硫酸アンモニウム
沈降法以外の既知の方法、ＤＥＡＥクロマトグラフィ
ー、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、
あるいは当業者にとって既知の組み合わせを用いること
ができる。さらに、免疫グロブリンＧ製品をイムノアフ
ィニティークロマトグラフィーにかけて精製し、単一特
異的免疫グロブリンを得ることができる。
疫グロブリン類を生産するためには、硫酸アンモニウム
沈降法以外の既知の方法、ＤＥＡＥクロマトグラフィ
ー、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、
あるいは当業者にとって既知の組み合わせを用いること
ができる。さらに、免疫グロブリンＧ製品をイムノアフ
ィニティークロマトグラフィーにかけて精製し、単一特
異的免疫グロブリンを得ることができる。
【００５０】単一特異的免疫グロブリンの調製は免疫吸
着剤として担体媒質(好ましくはセファロース４Ｂ)を用
いて好都合に行なうことができ、単量体または重合体形
の純化鞭毛抗原をこの吸着剤に共有結合的に結合させ
る。次いで、好ましくは流速１〜２カラム容量／時間で
アフィニティー樹脂上にＩgＧ含有溶液をポンプで通過
させる。高イオン強度の緩衝液(例、０.５Ｍ ＮaＣl)
で樹脂を洗浄した後、pＨ変化またはカオトロピック試
薬(例、３Ｍ ＮＨ4ＳＣＮ)によりゲルから鞭毛特異抗
体を溶離することができる。
着剤として担体媒質(好ましくはセファロース４Ｂ)を用
いて好都合に行なうことができ、単量体または重合体形
の純化鞭毛抗原をこの吸着剤に共有結合的に結合させ
る。次いで、好ましくは流速１〜２カラム容量／時間で
アフィニティー樹脂上にＩgＧ含有溶液をポンプで通過
させる。高イオン強度の緩衝液(例、０.５Ｍ ＮaＣl)
で樹脂を洗浄した後、pＨ変化またはカオトロピック試
薬(例、３Ｍ ＮＨ4ＳＣＮ)によりゲルから鞭毛特異抗
体を溶離することができる。
【００５１】本発明の防御的な抗原および抗体の有効性
を以下に示す。本発明のワクチンに用いる抗原の防御効
果を緑膿菌感染症患者の血清中鞭毛(Ｈ)抗体を解明する
ことによって行なった。
を以下に示す。本発明のワクチンに用いる抗原の防御効
果を緑膿菌感染症患者の血清中鞭毛(Ｈ)抗体を解明する
ことによって行なった。
【００５２】抗鞭毛抗体の測定には免疫吸収分析(イム
ノアブソーベントアッセイ、immunoabsorbent assay)
即ち酵素結合吸収分析(ＥＬＩＳＡ)またはラジオイムノ
アッセイ(ＲＩＡ)を採用した。本明細書に記載の方法で
得た高純度の鞭毛(Ｈ)抗原を強い界面活性剤で解重合し
た後、合成表面に非特異的な相互作用に基いて結合さ
せ、ヒト血清試料と接触させる。ヒト血清中に鞭毛(Ｈ)
抗体が存在していれば、それらは固相に固定化された抗
原と特異的に結合する。標識した抗ヒトＩgＧ抗体を用
い合成表面上に形成された鞭毛(Ｈ)抗原−抗体コンプレ
ックスを検出することができる。
ノアブソーベントアッセイ、immunoabsorbent assay)
即ち酵素結合吸収分析(ＥＬＩＳＡ)またはラジオイムノ
アッセイ(ＲＩＡ)を採用した。本明細書に記載の方法で
得た高純度の鞭毛(Ｈ)抗原を強い界面活性剤で解重合し
た後、合成表面に非特異的な相互作用に基いて結合さ
せ、ヒト血清試料と接触させる。ヒト血清中に鞭毛(Ｈ)
抗体が存在していれば、それらは固相に固定化された抗
原と特異的に結合する。標識した抗ヒトＩgＧ抗体を用
い合成表面上に形成された鞭毛(Ｈ)抗原−抗体コンプレ
ックスを検出することができる。
【００５３】この方法はそのまま定量にも容易に利用で
きる。種々の型の鞭毛抗原に対する抗体を用いて血清試
料をスクリーニングした結果を表４に示す。
きる。種々の型の鞭毛抗原に対する抗体を用いて血清試
料をスクリーニングした結果を表４に示す。
【００５４】
【表４】 ヒト血清中の鞭毛(Ｈ)抗体力価 緑膿菌 (Pseudomonas aeruginosa) 株 M2 1210 5939 5940 5142 170018 Ｈ−血清型 b a0a1a2 a0a3 a0a2 a0 a0a3a4 血清 ＃ １ - - + - - + ２ (+) (+) ++++ + + ++++ ３ ++ ++++ ++++ ++++ ++ ++++ ４ - - - - - - ５ + (+) ++ + - + ６ ++ - (+) - + - ７ - - - - - - ８ - - ++ - - ++ ９ - - - - - - １０ - + + + - + １１ - - - - - - １２ - - - - - - １３ - + (+) (+) - ++ １４ + - - - + - １５ + + + + + ++ − 抗体検出されず (+) 検出限界よりやや高い値 ++力価＞1:100 ++++力価＞1:300 + 力価＞1:20＞1:100 +++力価＞1:200
【００５５】天然の緑膿菌鞭毛(Ｈ)抗原の免疫原性は、
無作為に選出した供与体の血清中鞭毛(Ｈ)抗体の検出結
果を示した表４により証明されている。
無作為に選出した供与体の血清中鞭毛(Ｈ)抗体の検出結
果を示した表４により証明されている。
【００５６】体内に侵入してきた外来の細菌に対する戦
いは、抗体によって様々な方法で開始される。体液性防
御システム(補体系)によると、抗体によって認識された
外来生物は一連の溶菌作用を受けて死滅する。さらに、
外来生物と結合した抗体は、補体系の構成成分と協力し
て、外来生物の、免疫系の防御細胞(例、顆粒細胞)への
取り込み(食細胞作用)を誘導し得る。通常、顆粒球に取
り込まれた外来細胞は死滅する。
いは、抗体によって様々な方法で開始される。体液性防
御システム(補体系)によると、抗体によって認識された
外来生物は一連の溶菌作用を受けて死滅する。さらに、
外来生物と結合した抗体は、補体系の構成成分と協力し
て、外来生物の、免疫系の防御細胞(例、顆粒細胞)への
取り込み(食細胞作用)を誘導し得る。通常、顆粒球に取
り込まれた外来細胞は死滅する。
【００５７】有鞭毛細菌の場合には、抗体の防御作用は
運動性の阻害、即ち感染中心の拡散の阻止を目的とし
て、細菌の運動系に向けられる。
運動性の阻害、即ち感染中心の拡散の阻止を目的とし
て、細菌の運動系に向けられる。
【００５８】鞭毛(Ｈ)抗体の運動性阻害作用は、表１に
記載した血清型の鞭毛(Ｈ)抗原で免疫したマウスから得
た抗鞭毛(Ｈ)血清を用いて証明することができる。抗血
清に浸漬したリング状濾紙を運動性寒天プレート上にお
き、該リング内部の寒天にホモローガス(同質)なシュー
ドモナス株の浮遊液を接種する。２４時間インキュベー
ションした後、濾紙のリング外側に認められる細胞の量
によって運動性阻害作用を分析する。鞭毛(Ｈ)抗原によ
って得られたマウスの抗血清がホモローガスなシュード
モナス菌株の運動性を阻害することが分かった。結果を
表５に示す。
記載した血清型の鞭毛(Ｈ)抗原で免疫したマウスから得
た抗鞭毛(Ｈ)血清を用いて証明することができる。抗血
清に浸漬したリング状濾紙を運動性寒天プレート上にお
き、該リング内部の寒天にホモローガス(同質)なシュー
ドモナス株の浮遊液を接種する。２４時間インキュベー
ションした後、濾紙のリング外側に認められる細胞の量
によって運動性阻害作用を分析する。鞭毛(Ｈ)抗原によ
って得られたマウスの抗血清がホモローガスなシュード
モナス菌株の運動性を阻害することが分かった。結果を
表５に示す。
【００５９】
【表５】 種々の量のホモローガスな抗鞭毛血清による運動性阻害作用 ホモローガスな抗鞭毛血清 ＊ 株 (血清μl／病原体浮遊液 μl) ３０／５ ２０／１０ １０／１０ ５／１０ Ｍ−２ − − ＋− ＋− １２１０ − ＋ ＋ ＋ ５９３９ − − − − ５９４０ − − − − ５１４２ − ＋− ＋− ＋− １７００１８ − ＋− ＋− ＋− ＊ : 病原体浮遊液、病原体１０3／ml − : 濾紙の輪の外側に細胞認めず。 ＋−: 濾紙の輪の外側の数個のスポットにのみ細胞が存在。 ＋ : 濾紙の輪の外側に僅かに細胞が増殖。 ＋＋: 濾紙の輪の外側に著しい細胞増殖が存在。 正常なマウスの血清は常に細胞増殖(＋＋)を示した。
【００６０】感染中心に存在する細胞の運動性を阻害す
ることによって、患者の体内でコロニーを形成した後の
伝播を防止することはできるが、該中心に存在している
細菌は毒素やプロテアーゼ類を遊離することによって尚
も患者の器官に影響を及ぼし得る位置にある。従って、
感染に対する真の防御は、能動免疫によって形成された
抗体が迅速に侵入細菌を死滅させることによって、始め
て保障される。
ることによって、患者の体内でコロニーを形成した後の
伝播を防止することはできるが、該中心に存在している
細菌は毒素やプロテアーゼ類を遊離することによって尚
も患者の器官に影響を及ぼし得る位置にある。従って、
感染に対する真の防御は、能動免疫によって形成された
抗体が迅速に侵入細菌を死滅させることによって、始め
て保障される。
【００６１】本発明の鞭毛(Ｈ)抗体のホモローガスなシ
ュードモナス菌株に対する食細胞作用の誘導作用、並び
に細胞内殺菌の促進作用を以下に示す。
ュードモナス菌株に対する食細胞作用の誘導作用、並び
に細胞内殺菌の促進作用を以下に示す。
【００６２】食細胞作用を試験するために、表４の血清
＃３および＃５、並びに表４に記載されていない血清＃
１６を緑膿菌株Ｍ−２非鞭毛性突然変異体(fla-)[モン
チエ(Ｍontie, Ｔ．Ｃ．)、ドイルハンチンガー(Ｄ．Ｄ
oyle−Ｈuntzinger)、グラヴエン(Ｒ．Ｃ．Ｇraven)、
ホルダー(Ｉ．Ａ．Ｈolder)(１９８２)インフェクトイ
ミューン(Ｉnfect．Ｉmmun．)]と一緒にインキュベート
し、血清から全ての非鞭毛−特異的抗体を除去した。単
離したヒト顆粒球を用い、未処理の、並びに予め吸収処
理(プレアブソーブド)した血清中での緑膿菌株Ｍ−２お
よびアイソジェニックな非鞭毛性突然変異体に対する細
胞内殺菌作用を調べた。その結果、表６に示すように、
鞭毛(Ｈ)抗体は緑膿菌の鞭毛性株の食細胞作用を誘発し
次いで、細胞内殺菌作用を誘導することが示され、該抗
体は本発明にかかる病原体による感染症の予防効果を有
することが分かった。
＃３および＃５、並びに表４に記載されていない血清＃
１６を緑膿菌株Ｍ−２非鞭毛性突然変異体(fla-)[モン
チエ(Ｍontie, Ｔ．Ｃ．)、ドイルハンチンガー(Ｄ．Ｄ
oyle−Ｈuntzinger)、グラヴエン(Ｒ．Ｃ．Ｇraven)、
ホルダー(Ｉ．Ａ．Ｈolder)(１９８２)インフェクトイ
ミューン(Ｉnfect．Ｉmmun．)]と一緒にインキュベート
し、血清から全ての非鞭毛−特異的抗体を除去した。単
離したヒト顆粒球を用い、未処理の、並びに予め吸収処
理(プレアブソーブド)した血清中での緑膿菌株Ｍ−２お
よびアイソジェニックな非鞭毛性突然変異体に対する細
胞内殺菌作用を調べた。その結果、表６に示すように、
鞭毛(Ｈ)抗体は緑膿菌の鞭毛性株の食細胞作用を誘発し
次いで、細胞内殺菌作用を誘導することが示され、該抗
体は本発明にかかる病原体による感染症の予防効果を有
することが分かった。
【００６３】
【表６】 緑膿菌Ｍ−２およびアイソジェニックな非鞭毛性突然変異体 に対する食細胞作用および細胞内殺菌作用 血清 希釈率 細胞内殺菌作用 ＃ 緑膿菌M−2 緑膿菌M−2 fla- 血清 吸収 顆粒球不 血清 血清 顆粒球不 血清 含血清 吸収 含血清 3 1:25 94% 59% 測定せず 92% 0% 測定せず 1:100 52% 24% 測定せず 36% 0% 測定せず 1:250 19% 13% 測定せず 16% 3% 測定せず 5 1:25 95% 51% 0% 92% 1% 0% 1:100 72% 29% 0% 58% 2% 0% 1:250 35% 25% 0% 21% 0% 0% 16 1:25 95% 57% 0% 93% 0% 0% 1:100 78% 24% 測定せず 70% 0% 測定せず 1:250 5% 0% 測定せず 10% 0% 測定せず
【００６４】能動免疫に用いる抗原の防御作用を直接証
明する唯一の方法は、動物をモデルとする実験である。
緑膿菌感染症にかかり易い患者、という状況を設定する
ために文献記載の２種類の動物モデルを採用した:火傷
マウス[スチーリッツ(Ｓtieritz,Ｄ．Ｄ．)およびホル
ダー(Ｉ．Ａ．Ｈolder)(１９７５)インフェクト・デイ
ス)(Ｊ．Ｉnfect．Ｄis．)１３１、６８８−６９１]お
よびエンドキサン(Ｅndxan)マウスモデル:[クライツ(Ｃ
ryz．Ｓ．Ｊ．Ｊr．)、フューレル(Ｆurer．Ｅ．)、ゲ
ルマニエル(Ｇermanier．Ｒ．)(１９８３)インフェクト
・イムニティー(Ｉnfect Ｉmmunity)４０、６５９−６
６４)。両モデルの非免疫動物における緑膿菌のＬＤ50
用量を求めた。エンドキサンモデルの場合には動物は免
疫抑制下にあり、火傷マウスモデルの場合には、火傷の
大きさを一定にした。表７記載の鞭毛(Ｈ)抗原で免疫し
た後、火傷または免疫抑制動物それぞれを、ホモローガ
スな緑膿菌株の予め定めたＬＤ50病原体数で多重感染さ
せた。表７に、各濃度の抗原で免疫されたエンドキサン
マウスモデルおよび火傷マウスモデルにおいて、１００
％の動物が耐容性を示した。多重感染のＬＤ50病原体数
を示す。
明する唯一の方法は、動物をモデルとする実験である。
緑膿菌感染症にかかり易い患者、という状況を設定する
ために文献記載の２種類の動物モデルを採用した:火傷
マウス[スチーリッツ(Ｓtieritz,Ｄ．Ｄ．)およびホル
ダー(Ｉ．Ａ．Ｈolder)(１９７５)インフェクト・デイ
ス)(Ｊ．Ｉnfect．Ｄis．)１３１、６８８−６９１]お
よびエンドキサン(Ｅndxan)マウスモデル:[クライツ(Ｃ
ryz．Ｓ．Ｊ．Ｊr．)、フューレル(Ｆurer．Ｅ．)、ゲ
ルマニエル(Ｇermanier．Ｒ．)(１９８３)インフェクト
・イムニティー(Ｉnfect Ｉmmunity)４０、６５９−６
６４)。両モデルの非免疫動物における緑膿菌のＬＤ50
用量を求めた。エンドキサンモデルの場合には動物は免
疫抑制下にあり、火傷マウスモデルの場合には、火傷の
大きさを一定にした。表７記載の鞭毛(Ｈ)抗原で免疫し
た後、火傷または免疫抑制動物それぞれを、ホモローガ
スな緑膿菌株の予め定めたＬＤ50病原体数で多重感染さ
せた。表７に、各濃度の抗原で免疫されたエンドキサン
マウスモデルおよび火傷マウスモデルにおいて、１００
％の動物が耐容性を示した。多重感染のＬＤ50病原体数
を示す。
【００６５】表８は、Ｍ−２鞭毛抗原の防御作用の用量
依存性に関するものである。この場合には２種類のモデ
ルの動物を用い、漸増量の鞭毛抗原で免疫し、テストを
行なった。いずれの場合にも、免疫に用いた鞭毛抗原の
用量に依存した防御作用を明確に認めることができる。
依存性に関するものである。この場合には２種類のモデ
ルの動物を用い、漸増量の鞭毛抗原で免疫し、テストを
行なった。いずれの場合にも、免疫に用いた鞭毛抗原の
用量に依存した防御作用を明確に認めることができる。
【００６６】
【表７】 緑膿菌鞭毛(Ｈ)抗原を用いた能動的な防御テスト 抗原 量／マウス チャレンジ前 エンドキサン 火傷マウス (アシ゛ュハ゛ントとして の免疫化の モデル モデル Al(OH)3を含む) 日数 x ＬＤ50 x ＬＤ50 M-2 1 μg 14 10 ＞103 3 μg 14 30 ＞104 3 μg 14+7 30 ＞104 1210 3 μg 14+7 30 ＞104 M-2+ 各1.5μg 14 102M-2 ＞104M-2 1210 10 1210 ＞1041210 多価 各3 μg 14+7 102M-2 104M-2 (6タイフ゜) 10 1210 1041210
【００６７】
【表８】 Ｍ−２鞭毛(Ｈ)抗原の用量依存性防御作用 チャレンジ 生存動物 した病原体 3μg 1μg 0.3μg 0.1μg 0.03μg 0.01μg 数(x LD50) a) b) a) b) a) b) a) b) a) b) a) b) 10 100% 80% 89% 90% 100% 90% 89% 40% 100% 60% 70% 78% 30 100% 80% 100% 30% 90% 20% 80% 10% 50% 20% 40% 20% 100 80% 60% 90% 20% 90% 10% 90% 0% 100% 0% 30% 20% 300 90% 50% 90% 10% 100% 0% 90% 10% 80% 20% 20% 0% 1000 100% 30% 100% 20% 70% 0% 100% 10% 90% 20% 20% 0% :a)エント゛キサンモテ゛ル b)火傷マウスモテ゛ル
【００６８】受動免疫に用いる抗体の防御作用を直接証
明する唯一の方法は、動物をモデルとする実験である。
緑膿菌感染症にかかり易い患者、という状況を設定する
ために文献記載のエンドキサンマウスモデル:[クライツ
(Ｃryz．Ｓ．Ｊ．Ｊr．)．,フューレル:(Ｆurer．
Ｅ．)、ゲルマニエル(Ｇermanier．Ｒ．)(１９８３):実
験的白血球減少症マウスにおける、緑膿菌感染症に対す
る受動的な防御作用(Ｐassive Ｐrotection Ａgainst
Ｐseudomonas aeruginosa Ｉnfection in anＥxp
erimental Ｌeukopenic Ｍouse Ｍodel)インフェク
ト・イムニティー(Ｉnfect．Ｉmmunity)４０、６５９−
６６４)を用いた。この場合には免疫抑制動物における
緑膿菌病原体のＬＤ50用量を求めた。
明する唯一の方法は、動物をモデルとする実験である。
緑膿菌感染症にかかり易い患者、という状況を設定する
ために文献記載のエンドキサンマウスモデル:[クライツ
(Ｃryz．Ｓ．Ｊ．Ｊr．)．,フューレル:(Ｆurer．
Ｅ．)、ゲルマニエル(Ｇermanier．Ｒ．)(１９８３):実
験的白血球減少症マウスにおける、緑膿菌感染症に対す
る受動的な防御作用(Ｐassive Ｐrotection Ａgainst
Ｐseudomonas aeruginosa Ｉnfection in anＥxp
erimental Ｌeukopenic Ｍouse Ｍodel)インフェク
ト・イムニティー(Ｉnfect．Ｉmmunity)４０、６５９−
６６４)を用いた。この場合には免疫抑制動物における
緑膿菌病原体のＬＤ50用量を求めた。
【００６９】この実験においてはその値は９.５×１０2
病原体である。免疫抑制動物を、マウスの抗緑膿菌Ｍ−
２超免疫血漿(該血漿のＥＬＩＳＡにおける抗体力価は
１:１,６００の希釈段階である)で受動免疫処理した
後、ホモローガスな緑膿菌株の予め定めたＬＤ50病原体
数で多重感染させた。
病原体である。免疫抑制動物を、マウスの抗緑膿菌Ｍ−
２超免疫血漿(該血漿のＥＬＩＳＡにおける抗体力価は
１:１,６００の希釈段階である)で受動免疫処理した
後、ホモローガスな緑膿菌株の予め定めたＬＤ50病原体
数で多重感染させた。
【００７０】表９は、受動免疫処理を受けた動物がＬＤ
50用量の３０倍の量の病原体に対するチャレンジにおい
て保護されていることを示すものである。
50用量の３０倍の量の病原体に対するチャレンジにおい
て保護されていることを示すものである。
【００７１】
【表９】 受動的シュードモナス防御テスト エンドキサンモデル 感染2時間前に接種 ３日後の生存動物数(テストに用いた動物数) コントロール血漿の静注(0.1ml) 超免疫血漿の静注(0.1ml) ３ＬＤ50(Ｍ−２) ０(１０) ９(１０) １０ＬＤ50(Ｍ−２) ０(１０) ８(１０) ３０ＬＤ50(Ｍ−２) ０(１０) ６(１０) １００ＬＤ50(Ｍ−２) ０(１０) ０(１０) ３００ＬＤ50(Ｍ−２) ０(１０) ０(１０）
Claims (11)
- 【請求項１】 緑膿菌感染症の予防および治療に有効な
免疫グロブリンＧ含有製剤であって、血清型 a および
b のシュードモナス・アエルギノサの防御的鞭毛(Ｈ)抗
原であり、それぞれ、以下の単量体成分: a) アミノ酸類:アスパラギン酸(Ａsp)、スレオニン(Ｔ
hr)、セリン(Ｓer)、グルタミン酸(Ｇlu)、グリシン(Ｇ
ly)、アラニン(Ａla)、バリン(Ｖal)、イソロイシン(Ｉ
le)、ロイシン(Ｌeu)、チロシン(Ｔyr)、フェニルアラ
ニン(Ｐhe)、リジン(Ｌys)、アルギニン(Ａrg)、およ
び、場合によりトリプトファン(Ｔrp)およびメチオニン
(Ｍet)を含有しており、 b) Ｎ末端アミノ酸配列:アラニン(Ａla)−ロイシン(Ｌ
eu)−スレオニン(Ｔhr)−バリン(Ｖal)−アスパラギン
(Ａsn)−スレオニン(Ｔhr)−アスパラギン(Ａsn)−イソ
ロイシン(Ｉle)−アラニン(Ａla)を含有しており、 c) 分子量が４３,５００〜５３,０５０であって、 d) プロリン、セミシステインおよびヒスチジンを含ん
でいない単量体成分からなる鞭毛(Ｈ)抗原、によって免
疫されたヒト供与体または哺乳類の血漿から得た鞭毛
(Ｈ)抗体を含有している製剤。 - 【請求項２】 シュードモナス・アエルギノサの鞭毛
(Ｈ)抗体が緑膿菌に対して運動阻害作用、高められた食
細胞作用、並びに高められた細胞内殺菌作用を有する請
求項１記載の製剤。 - 【請求項３】 血清型 a および b のシュードモナス・
アエルギノサの防御的鞭毛(Ｈ)抗原であってそれぞれ、
以下の単量体成分: a) アミノ酸類:アスパラギン酸(Ａsp)、スレオニン(Ｔ
hr)、セリン(Ｓer)、グルタミン(Ｇlu)、グリシン(Ｇl
y)、アラニン(Ａla)、バリン(Ｖal)、イソロイシン(Ｉl
e)、ロイシン(Ｌeu)、チロシン(Ｔyr)、フェニルアラニ
ン(Ｐhe)、リジン(Ｌys)、アルギニン(Ａrg)、および、
場合によりトリプトファン(Ｔrp)およびメチオニン(Ｍe
t)を含有しており、 b) Ｎ末端アミノ酸配列:アラニン(Ａla)−ロイシン(Ｌ
eu)−スレオニン(Ｔhr)-ハ゛リン(Ｖal)−アスパラギン(Ａs
n)−スレオニン(Ｔhr)−アスパラギン(Ａsn)−イソロイ
シン(Ｉle)−アラニン(Ａla)を含有しており、 c) 分子量が４３,５００〜５３,０５０であって、 d) プロリン、セミシステインおよびヒスチジンを含ん
でいない単量体成分からなる鞭毛(Ｈ)抗原によって免疫
されたヒト供与体または哺乳類の血漿から得られる鞭毛
(Ｈ)抗体を含有している緑膿菌感染症の予防および治療
に有効な免疫グロブリンＧ含有製剤の製造方法であっ
て、該血漿をタンパク沈降剤で処理した後、溶解させ、
沈澱した免疫グロブリンＧ含有画分を精製することから
なる方法。 - 【請求項４】 鞭毛(Ｈ)抗体が緑膿菌に対して運動阻害
作用、食細胞作用の推進能、並びに細胞内殺菌の昂進作
用を有する請求項３記載の免疫グロブリンＧ含有製剤の
製造方法。 - 【請求項５】 タンパク質沈降剤が硫酸アンモニウムで
ある請求項３記載の方法。 - 【請求項６】 沈澱した免疫グロブリンＧ含有画分の精
製が、純化鞭毛抗原を共有結合的に結合させた担体媒質
に溶液を通し、次いで、ゲルから鞭毛特異的抗体を溶離
することからなり、それをガレヌス製剤に製剤化するこ
とからなる請求項３記載の方法。 - 【請求項７】 単量体形の純化鞭毛抗原を共有結合的に
結合させた担体媒質に溶液を通す請求項６記載の方法。 - 【請求項８】 重合体形の純化鞭毛抗原を共有結合的に
結合させた担体媒質に溶液を通す請求項６記載の方法。 - 【請求項９】 pＨ変化によってゲルから鞭毛特異的抗
体を溶離する請求項６記載の方法。 - 【請求項１０】 カオトロピック試薬を用いてゲルから
鞭毛特異的抗体を溶離する請求項６記載の方法。 - 【請求項１１】 カオトロピック試薬がＮＨ4ＳＣＮで
ある請求項１０記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT1716/86 | 1986-06-24 | ||
| AT1716/86A AT391080B (de) | 1986-06-24 | 1986-06-24 | Verfahren zur herstellung von gegen pseudomonas aeruginosa infektionen wirksamen praeparationen |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62157475A Division JPH0830011B2 (ja) | 1986-06-24 | 1987-06-24 | 緑膿菌感染症ワクチンおよびその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0853367A JPH0853367A (ja) | 1996-02-27 |
| JP2534470B2 true JP2534470B2 (ja) | 1996-09-18 |
Family
ID=3519452
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62157475A Expired - Fee Related JPH0830011B2 (ja) | 1986-06-24 | 1987-06-24 | 緑膿菌感染症ワクチンおよびその製造方法 |
| JP7211624A Expired - Fee Related JP2534470B2 (ja) | 1986-06-24 | 1995-08-21 | 免疫グロブリンｇ含有製剤及びその製造方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62157475A Expired - Fee Related JPH0830011B2 (ja) | 1986-06-24 | 1987-06-24 | 緑膿菌感染症ワクチンおよびその製造方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4946677A (ja) |
| EP (1) | EP0252064B1 (ja) |
| JP (2) | JPH0830011B2 (ja) |
| AT (2) | AT391080B (ja) |
| CA (1) | CA1306690C (ja) |
| DE (1) | DE3782771D1 (ja) |
| DK (1) | DK173123B1 (ja) |
| ES (1) | ES2044976T3 (ja) |
| FI (1) | FI86508C (ja) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5237053A (en) * | 1986-06-24 | 1993-08-17 | Immuno Aktiengesellschaft | Preparation active against Pseudomonas aeruginosa infections and methods of producing them |
| AT390192B (de) * | 1988-08-29 | 1990-03-26 | Immuno Ag | Gegen pseudomonas aeruginosa-infektionen wirksame praeparationen sowie immunglobuling-h|ltige, gegen bakterium pseudomonas aeruginosa wirksame praeparationen |
| WO1994008617A1 (en) * | 1992-10-16 | 1994-04-28 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | O-derivatized alginic acid antigens |
| GB9701489D0 (en) * | 1997-01-24 | 1997-03-12 | Auspharm Int Ltd | Antigen |
| US6749831B1 (en) * | 1997-05-16 | 2004-06-15 | Medical Defense Technology, Llc | Vaccine against lipopolysaccharide core |
| US7405039B2 (en) | 2002-02-07 | 2008-07-29 | Austin Health | Viral variants with altered susceptibility to nucleoside analogs and uses thereof |
| WO2003087351A1 (en) * | 2002-04-12 | 2003-10-23 | Melbourne Health | Hepatitis b viral variants with redused susceptibility to nucleoside analogs and uses thereof |
| JP2007530029A (ja) * | 2004-03-26 | 2007-11-01 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | アネキシンｉｉ及びその使用 |
| AU2006230802A1 (en) | 2005-04-08 | 2006-10-12 | Austin Health | Variants of hepatitis B virus with resistance to anti-viral nucleoside agents and applications thereof |
| WO2006105597A1 (en) | 2005-04-08 | 2006-10-12 | Melbourne Health | Variants of hepatitis b virus with resistance to anti-viral nucleoside agents and applications thereof |
| US8263078B2 (en) | 2007-09-05 | 2012-09-11 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Antibodies against flagellin and uses thereof |
| US20100239583A1 (en) * | 2009-03-04 | 2010-09-23 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Antibodies against flagellin and uses thereof |
| EP2488228A4 (en) * | 2009-10-18 | 2018-03-21 | Glycorex AB | Method and product for blood treatment and purification |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3674863A (en) * | 1969-12-08 | 1972-07-04 | Parke Davis & Co | Polyvalent immunizing agents and methods for their production |
| US3987164A (en) * | 1970-10-20 | 1976-10-19 | Yuzuru Homma | Method for prevention of pseudomonas aeruginosa infections |
| US3928565A (en) * | 1971-10-19 | 1975-12-23 | Yuzuru Homma | Pharmaceutical preparation of pseudomonas aeruginosa bacterial component possessing anti-tumor and anti-infection properties |
| FR2227861B1 (ja) * | 1973-05-04 | 1976-07-02 | Anvar | |
| US4070454A (en) * | 1973-05-04 | 1978-01-24 | Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) | Vaccines, the process for preparing the same and the applications thereof |
| JPS51133489A (en) * | 1975-05-14 | 1976-11-19 | Tokyo Daigaku | Process for producing microbial components of pseudomonas aeruginosa h aving antimicrobial and antitumor activities |
| US4298597A (en) * | 1979-09-04 | 1981-11-03 | University Of Saskatchewan | Vaccine for diarrhea caused by E. coli |
| JPS60248625A (ja) * | 1984-05-25 | 1985-12-09 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 抗緑膿菌モノクロ−ナル抗体、その製法ならびに用途 |
| AT384032B (de) * | 1985-01-14 | 1987-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von polydispersen nativen pseudomonas-flagella(h)-antigenen (fag) |
| US4693891A (en) * | 1985-09-09 | 1987-09-15 | Miles Laboratories, Inc. | Vaccine for Pseudomonas aeruginosa |
| FR2597344B1 (fr) * | 1986-04-16 | 1989-06-23 | Merieux Inst | Perfectionnement au procede de purification d'antigenes proteiques de bacteries appartenant au genre bordetella, en vue de l'obtention d'un vaccin acellulaire. |
-
1986
- 1986-06-24 AT AT1716/86A patent/AT391080B/de active
-
1987
- 1987-06-09 CA CA000539163A patent/CA1306690C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-15 EP EP87890135A patent/EP0252064B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-15 AT AT87890135T patent/ATE82687T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-06-15 ES ES87890135T patent/ES2044976T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-15 DE DE8787890135T patent/DE3782771D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-06-17 US US07/063,094 patent/US4946677A/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-22 FI FI872750A patent/FI86508C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-06-24 JP JP62157475A patent/JPH0830011B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1987-06-24 DK DK198703222A patent/DK173123B1/da not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-08-21 JP JP7211624A patent/JP2534470B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI872750A (fi) | 1987-12-25 |
| EP0252064A3 (en) | 1989-03-15 |
| JPH0830011B2 (ja) | 1996-03-27 |
| DE3782771D1 (de) | 1993-01-07 |
| US4946677A (en) | 1990-08-07 |
| AT391080B (de) | 1990-08-10 |
| JPS635029A (ja) | 1988-01-11 |
| CA1306690C (en) | 1992-08-25 |
| ATE82687T1 (de) | 1992-12-15 |
| DK173123B1 (da) | 2000-01-31 |
| EP0252064A2 (de) | 1988-01-07 |
| FI86508B (fi) | 1992-05-29 |
| JPH0853367A (ja) | 1996-02-27 |
| EP0252064B1 (de) | 1992-11-25 |
| ES2044976T3 (es) | 1994-01-16 |
| FI872750A0 (fi) | 1987-06-22 |
| DK322287A (da) | 1987-12-25 |
| ATA171686A (de) | 1990-02-15 |
| FI86508C (fi) | 1992-09-10 |
| DK322287D0 (da) | 1987-06-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Une et al. | Roles of V antigen in promoting virulence and immunity in yersiniae. | |
| JP2534470B2 (ja) | 免疫グロブリンｇ含有製剤及びその製造方法 | |
| Baumgartner | Immunotherapy with antibodies to core lipopolysaccharide: a critical appraisal | |
| Howard et al. | Studies on immunological paralysis IV. The relative contributions of continuous antibody neutralization and central inhibition to paralysis with type III pneumococcal polysaccharide | |
| Beachey et al. | Delayed hypersensitivity to purified streptococcal M protein in guinea pigs and in man | |
| EP0432203A1 (en) | Legionellosis vaccines and methods for their production | |
| JP2690215B2 (ja) | 無細胞抗百日咳菌ワクチン | |
| Asherson | The role of micro-organisms in autoimmune responses | |
| US5237053A (en) | Preparation active against Pseudomonas aeruginosa infections and methods of producing them | |
| Baumgartner et al. | Immunotherapy of endotoxemia and septicemia | |
| Muthukkumar et al. | Mechanism of protective immunity induced by porin-lipopolysaccharide against murine salmonellosis | |
| Verwey et al. | Studies on the antigenicity of toxic extracts of Hemophilus pertussis | |
| Blanco et al. | The antigenic interrelationship between the endoflagella of Treponema phagedenis biotype Reiter and Treponema pallidum Nichols strain. I. Treponemicidal activity of cross-reactive endoflagellar antibodies against T. pallidum. | |
| Seed | Trypanosoma gambiense and T. equiperdum: Characterization of variant specific antigens | |
| JP2703341B2 (ja) | 治療学的ＩｇＭ濃厚物 | |
| McCABE et al. | Common enterobacterial antigen II. Effect of immunization on challenge with heterologous Bacilli | |
| GB2182937A (en) | Common antigen (psc-a)to pseudomonas aeruginosa | |
| AU6857194A (en) | Novel attenuated pseudomonas aeruginosa strains | |
| Ferreira et al. | Purification, and biochemical and biological characterization of an immunosuppressive and lymphocyte mitogenic protein secreted by Streptococcus sobrinus. | |
| Dolby et al. | The antibody activities of 19S and 7S fractions from rabbit antisera to Bordetella pertussis | |
| US5824310A (en) | Lipopplysaccharide conjugate vaccines | |
| US5324511A (en) | Vaccines and immunoglobulin G-containing preparations active against pseudomonas aeruginosa | |
| Traub et al. | Active immunization of NMRI mice against Serratia marcescens | |
| Zúñiga et al. | Antibodies against Trypanosoma cruzi alkaline antigens are elicited in sera from acute but not chronic human chagasic patients | |
| Yokomizo et al. | The characterization of antibacterial antibodies in bovine immune sera to Staphylococcus aureus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |