JP2703341B2 - 治療学的ＩｇＭ濃厚物 - Google Patents
治療学的ＩｇＭ濃厚物Info
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A61P31/04—Antibacterial agents
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は一般に予防的又は治療学的効果を有する抗体
調製物に関する。特に本発明はIgM型の抗体に富む、相
同性のアイソアグルチニン（isoagglutinin）が低量で
あり、且つグラム陰性バクテリヤの感染の処置に有用で
あることが発見された上述のような調製物に関する。
調製物に関する。特に本発明はIgM型の抗体に富む、相
同性のアイソアグルチニン（isoagglutinin）が低量で
あり、且つグラム陰性バクテリヤの感染の処置に有用で
あることが発見された上述のような調製物に関する。
要するに本発明よれば、IgM型の抗体を少なくとも33
重量％含んでなり且つ同族体のアイソアグルチニンを実
質的に含まない保護的抗体組成物が哺乳動物のグラム陰
性病原菌に対して非常に活性がある。そのような組成物
は好ましくはポリクローナルであり、人間の血漿から調
製され、或いは異なるモノクローナル抗体の処方物であ
つてよい。非常に好適なIgM含量は少なくとも50重量％
であり、そしてアイソアグルチニン力価（titer）は約
1:4以下である。１つの具体例において、本組成物は、
水で再構成した時に約4.0〜8.0、好ましくは4.0〜7.0の
範囲のpHを有する溶液となり且つ静脈内投与しうるよう
な凍結乾燥した形で製造される。
重量％含んでなり且つ同族体のアイソアグルチニンを実
質的に含まない保護的抗体組成物が哺乳動物のグラム陰
性病原菌に対して非常に活性がある。そのような組成物
は好ましくはポリクローナルであり、人間の血漿から調
製され、或いは異なるモノクローナル抗体の処方物であ
つてよい。非常に好適なIgM含量は少なくとも50重量％
であり、そしてアイソアグルチニン力価（titer）は約
1:4以下である。１つの具体例において、本組成物は、
水で再構成した時に約4.0〜8.0、好ましくは4.0〜7.0の
範囲のpHを有する溶液となり且つ静脈内投与しうるよう
な凍結乾燥した形で製造される。
抗体は良く知られた種系（即ちIgG、IgM、IgA、IgD、
IgE）及びIgGの場合には亜種系（即ちIgG1、IgG2、IgG3
及びIgG4）に従つて分類することができる。
IgE）及びIgGの場合には亜種系（即ちIgG1、IgG2、IgG3
及びIgG4）に従つて分類することができる。
市販の抗体調製物（免疫血清グロブリン又はISGとし
て公知）は通常主に人間の血漿に見出されるものに順ず
るIgG亜種の分布をもつIgG種の抗体からなる。典型的に
はそのような調製物中のIgMの量は、存在するとしても
比較的少量である。
て公知）は通常主に人間の血漿に見出されるものに順ず
るIgG亜種の分布をもつIgG種の抗体からなる。典型的に
はそのような調製物中のIgMの量は、存在するとしても
比較的少量である。
IgMは人間に見出される免疫グロブリンの約７％をな
す良く知られた19S免疫グロブリンである。IgM抗体は少
くとも５の抗体の結合価（valence）を有すると言わ
れ、そしてそれらは免疫応答において生ずる最も早い抗
体である。IgM抗体は特にバクテリヤ感染の駆除に非常
に効果的であるけれど、それは約５日間という比較的短
い生体内半減期を有する。更にIgM抗体は凝集する傾向
をもち、特に精製形で安定化させるのが比較的困難であ
る。
す良く知られた19S免疫グロブリンである。IgM抗体は少
くとも５の抗体の結合価（valence）を有すると言わ
れ、そしてそれらは免疫応答において生ずる最も早い抗
体である。IgM抗体は特にバクテリヤ感染の駆除に非常
に効果的であるけれど、それは約５日間という比較的短
い生体内半減期を有する。更にIgM抗体は凝集する傾向
をもち、特に精製形で安定化させるのが比較的困難であ
る。
IgM抗体をかなりの量で有する今日までに知られてい
る唯一の市販の静脈内（IV）生成物は西独のバイオテス
ト社（Biotert）から入手しうるペンタグロビン（Penta
globinTM）として公知の生成物である。この生成物の使
用はK.D.タイムナー（Tympner）ら、「静脈内IgM適用
（IntravenoseIgM−Applikation）」、（Mschr.Kinderh
eilk）、123、400〜401（1975）の刊行物に記述されて
いるようである。この生成物は全蛋白質基準の重量％に
基づいてIgG約76％、IgA約12％及びIgM約12％を含んで
なる。
る唯一の市販の静脈内（IV）生成物は西独のバイオテス
ト社（Biotert）から入手しうるペンタグロビン（Penta
globinTM）として公知の生成物である。この生成物の使
用はK.D.タイムナー（Tympner）ら、「静脈内IgM適用
（IntravenoseIgM−Applikation）」、（Mschr.Kinderh
eilk）、123、400〜401（1975）の刊行物に記述されて
いるようである。この生成物は全蛋白質基準の重量％に
基づいてIgG約76％、IgA約12％及びIgM約12％を含んで
なる。
ISG生成物にIgMをより多くの量で用いることは逆の反
応に至るということが考えられた。例えばIgMは免疫反
応における補体を活性化させるのにIgGよりも多数倍有
能であることが知られている。これは抗原に結合したIg
Mの１分子が補体を活性化し、一方IgGの場合には補体を
活性化するには互いに近くに会合して抗原に結合しなけ
ればならないという理由による。
応に至るということが考えられた。例えばIgMは免疫反
応における補体を活性化させるのにIgGよりも多数倍有
能であることが知られている。これは抗原に結合したIg
Mの１分子が補体を活性化し、一方IgGの場合には補体を
活性化するには互いに近くに会合して抗原に結合しなけ
ればならないという理由による。
現存する生成物を製造する際に用いる製造法［例えば
W.ステフアン（Stephan）の米国特許第4,318,902号に教
示されている如く、生成物IVを投与しうるようにするた
めにβ−プロプリオラクトンを用いることを含む］は分
解反応のために存在するIgMの量を制限するように見え
る。斯くしてこのよう理由のために、例えIgMが非常に
効果的と認められたとしても、全蛋白質が約12重量％以
上の量の市販の静脈内に有用なISG生成物は現われてい
ない。IgM20重量％の生成物が過去に市販されていたけ
れど［ガンマ−Ｍ−コンセントラート（Gemma−Ｍ−Kon
zentrat）ベーリングベルケ社（Behlingwerke AG、Masb
urg、Germany）］それは筋肉内（IVでない）の用途のた
めに作られ、そしてそれに限定された。
W.ステフアン（Stephan）の米国特許第4,318,902号に教
示されている如く、生成物IVを投与しうるようにするた
めにβ−プロプリオラクトンを用いることを含む］は分
解反応のために存在するIgMの量を制限するように見え
る。斯くしてこのよう理由のために、例えIgMが非常に
効果的と認められたとしても、全蛋白質が約12重量％以
上の量の市販の静脈内に有用なISG生成物は現われてい
ない。IgM20重量％の生成物が過去に市販されていたけ
れど［ガンマ−Ｍ−コンセントラート（Gemma−Ｍ−Kon
zentrat）ベーリングベルケ社（Behlingwerke AG、Masb
urg、Germany）］それは筋肉内（IVでない）の用途のた
めに作られ、そしてそれに限定された。
血漿に由来するIgM及びごく最近ではモノクローナル
に由来するIgMに対して種々の精製法が提案されてき
た。血漿に由来するIgMの場合、比較的高濃度のIgMをコ
ーン（Cohn）画分IIIとして公知のものから得るために
アルコール分割技術が使用できるということは1940年代
以来公知であつた。参照、例えばW.ステフアンによる且
つ濃縮された（12％）IgMを静脈内（IV）投与に適当な
らしめるためにβ−プロプリオラクトンを使用すること
に関する上掲の米国特許第4,318,902号（及びその引用
文献）。更に、参照、ミトラ（Mitra）らのEPO願第0,03
8,667号（IgMのアシル化）。他のIgM精製又は製造技術
は、U.サグ（Sugg）ら、ボクス・サング（Vox Sang.）3
6;25〜28（1979）;M.スタインブツフ（Steinbuch）ら、
プレパラテイブ・バイオケミストリー（Preparative Bi
ochemistry）３（４）、363〜373（1973）及びA.ウイヒ
マン（Wichman）ら、バイオケム・バイオフイズ・アク
タ（Biochem.Biophys.Acta）490:363/69（1977）に開示
されている。更に参照、一般にイオン交換樹脂をアルカ
リ性pHで用いることによる免疫血清グロブリンの精製に
関するズツフィ（Zuffi）の米国特許第4,272,521号。種
々の技術的理由のために、血漿に由来するIgMは精製す
るのが比較的困難であつたし、今日まで最高の公知の純
度（分析用に使用されるもの）はIgM約90重量％であ
る。
に由来するIgMに対して種々の精製法が提案されてき
た。血漿に由来するIgMの場合、比較的高濃度のIgMをコ
ーン（Cohn）画分IIIとして公知のものから得るために
アルコール分割技術が使用できるということは1940年代
以来公知であつた。参照、例えばW.ステフアンによる且
つ濃縮された（12％）IgMを静脈内（IV）投与に適当な
らしめるためにβ−プロプリオラクトンを使用すること
に関する上掲の米国特許第4,318,902号（及びその引用
文献）。更に、参照、ミトラ（Mitra）らのEPO願第0,03
8,667号（IgMのアシル化）。他のIgM精製又は製造技術
は、U.サグ（Sugg）ら、ボクス・サング（Vox Sang.）3
6;25〜28（1979）;M.スタインブツフ（Steinbuch）ら、
プレパラテイブ・バイオケミストリー（Preparative Bi
ochemistry）３（４）、363〜373（1973）及びA.ウイヒ
マン（Wichman）ら、バイオケム・バイオフイズ・アク
タ（Biochem.Biophys.Acta）490:363/69（1977）に開示
されている。更に参照、一般にイオン交換樹脂をアルカ
リ性pHで用いることによる免疫血清グロブリンの精製に
関するズツフィ（Zuffi）の米国特許第4,272,521号。種
々の技術的理由のために、血漿に由来するIgMは精製す
るのが比較的困難であつたし、今日まで最高の公知の純
度（分析用に使用されるもの）はIgM約90重量％であ
る。
ケーラー（Ｋhler）及びミルスタイン（Milstei
n）、「予じめ定義した特異性の抗体を分泌する融合細
胞の連続培養（Continuous Cultures of Fused Cells S
ecreting Antibody of Predefined Specificity）」、
ネーチヤー（Natuve）、256:495〜497（1975）の刊行物
以来、モノクローナル抗体の製造は良く知られるように
なつた。与えられた特異性のモノクローナル抗体は、現
在体細胞の交雑［参照、例えばH.コプロウスキ（Koprow
ski）らによる米国特許第4,172,124号］を用いて、EBV
変形細胞［参照、例えばM.ロストロム（Lostrom）の米
国特許第4,446,465号］を用いて、これらの２つを組合
せて、或いは細胞の電気融合を用いて日常的に製造され
ている。IgG及びIgMクラスの両方のモノクローナルは製
造され、精製され且つ特徴づけられている。そのような
IgMの調製物は、D.ナウ（Nau）、バイオクロマトグラフ
イー（Biochromatography）、１（２）、83〜84（組織
培養から純度95％のIgM）;M.フイシユナー（Fishne
r）、米国特許第4,604,235号（マウスの腹水流体からの
且つ「本質的に純粋な抗体」として特徴づけられる純度
90％のIgM）;J.R.バンズ（Wands）ら、W082/01072号
（診断のための高親和性IgMモノクローナル抗体）;S.バ
チエル（Burchiel）ら、J.イミユノ・メト（Immuno.Met
h.）、69:33（1984）（マウスの腹水流体から精製され
るIgG）;J.デシヤンプス（Deschamps）ら、アナル・バ
イオケム（Anal.Biochem.）147;451（1985）（マウス及
び人間のIgG及びIgMからのIgG）に記述されている。し
かしながら上述の最近の研究があるとしても、本発明者
は今日まで本明細書に定義する如き安定であり且つグラ
ム陰性バクテリヤの感染の予防及び処置に非常に効果的
である濃度の高いIgM生成物について情報がない。
n）、「予じめ定義した特異性の抗体を分泌する融合細
胞の連続培養（Continuous Cultures of Fused Cells S
ecreting Antibody of Predefined Specificity）」、
ネーチヤー（Natuve）、256:495〜497（1975）の刊行物
以来、モノクローナル抗体の製造は良く知られるように
なつた。与えられた特異性のモノクローナル抗体は、現
在体細胞の交雑［参照、例えばH.コプロウスキ（Koprow
ski）らによる米国特許第4,172,124号］を用いて、EBV
変形細胞［参照、例えばM.ロストロム（Lostrom）の米
国特許第4,446,465号］を用いて、これらの２つを組合
せて、或いは細胞の電気融合を用いて日常的に製造され
ている。IgG及びIgMクラスの両方のモノクローナルは製
造され、精製され且つ特徴づけられている。そのような
IgMの調製物は、D.ナウ（Nau）、バイオクロマトグラフ
イー（Biochromatography）、１（２）、83〜84（組織
培養から純度95％のIgM）;M.フイシユナー（Fishne
r）、米国特許第4,604,235号（マウスの腹水流体からの
且つ「本質的に純粋な抗体」として特徴づけられる純度
90％のIgM）;J.R.バンズ（Wands）ら、W082/01072号
（診断のための高親和性IgMモノクローナル抗体）;S.バ
チエル（Burchiel）ら、J.イミユノ・メト（Immuno.Met
h.）、69:33（1984）（マウスの腹水流体から精製され
るIgG）;J.デシヤンプス（Deschamps）ら、アナル・バ
イオケム（Anal.Biochem.）147;451（1985）（マウス及
び人間のIgG及びIgMからのIgG）に記述されている。し
かしながら上述の最近の研究があるとしても、本発明者
は今日まで本明細書に定義する如き安定であり且つグラ
ム陰性バクテリヤの感染の予防及び処置に非常に効果的
である濃度の高いIgM生成物について情報がない。
驚くことに今回治療学的に効果的であり且つ非常に濃
度の高いIgM調製物の製造できることが発見された。こ
れらの調製物は安定であり、上述した現存するISG調製
物及び更に高濃度の静脈内IgM生成物でさえよりもかな
り効果的である。本IgM濃厚物、その製造及び使用法の
詳細をここに記述する。
度の高いIgM調製物の製造できることが発見された。こ
れらの調製物は安定であり、上述した現存するISG調製
物及び更に高濃度の静脈内IgM生成物でさえよりもかな
り効果的である。本IgM濃厚物、その製造及び使用法の
詳細をここに記述する。
本発明の治療学的IgM濃厚物は、IgM型の抗体少くとも
約33重量％及び約1:4以下のアイソアグルチニン力価を
有するIgM濃厚物を含んでなる実質的に純粋な抗体組成
物を含む。この調製物は安定であり、凍結乾燥形で製造
することができる。これは好ましくはポリクローナルで
あり、血漿源から得られる。他にポリクローナル性は、
生成物がIgM型の抗体に富んでいる限りにおいて、選択
したモノクローナル抗体の適切な混合によつて得ること
ができる。IgM濃厚物は広範囲の病原菌、特にグラム陰
性腸内バクテリヤに対して有効である。水での再構成時
に、凍結乾燥した調製物は約4.0〜8.0、好ましくは4.0
〜7.0の範囲の製薬学的に許容しうるIV溶液を与える。
実際に使用する場合には、濃厚物は相同性のアイソアグ
ルチニン力価が約1:4以下である限りにおいて異型のア
イソアグルチニンを含有していてもよい。IV投与に適当
な液体形において、IgMの濃度は少くとも5mg/mlであ
る。
約33重量％及び約1:4以下のアイソアグルチニン力価を
有するIgM濃厚物を含んでなる実質的に純粋な抗体組成
物を含む。この調製物は安定であり、凍結乾燥形で製造
することができる。これは好ましくはポリクローナルで
あり、血漿源から得られる。他にポリクローナル性は、
生成物がIgM型の抗体に富んでいる限りにおいて、選択
したモノクローナル抗体の適切な混合によつて得ること
ができる。IgM濃厚物は広範囲の病原菌、特にグラム陰
性腸内バクテリヤに対して有効である。水での再構成時
に、凍結乾燥した調製物は約4.0〜8.0、好ましくは4.0
〜7.0の範囲の製薬学的に許容しうるIV溶液を与える。
実際に使用する場合には、濃厚物は相同性のアイソアグ
ルチニン力価が約1:4以下である限りにおいて異型のア
イソアグルチニンを含有していてもよい。IV投与に適当
な液体形において、IgMの濃度は少くとも5mg/mlであ
る。
本開示のIgM濃厚物は下記の実施例のいずれかを用い
ることにより人間の血漿から次の如く製造することがで
きる。
ることにより人間の血漿から次の如く製造することがで
きる。
本開示の重要な観点は、本明細書に定義する如きアイ
ソアグルチニンを実質的に含有しないIgM濃厚物がグラ
ム陰性バクテリヤに対して驚くほど有効であるという本
発明者の発見に基づいている。
ソアグルチニンを実質的に含有しないIgM濃厚物がグラ
ム陰性バクテリヤに対して驚くほど有効であるという本
発明者の発見に基づいている。
ここに用いる如きIgM濃厚物又はその同等物はIgM型の
生物学的に活性な抗体を全重量の少くとも33重量％で含
んでなる抗体調製物を意味する。
生物学的に活性な抗体を全重量の少くとも33重量％で含
んでなる抗体調製物を意味する。
アイソアグルチニンを実質的に含まないとは、1:4以
下の相同性アイソアグルチニン力価を有することを意味
する。理想的には、すべてのアイソアグルチニンの力価
が1:4以下である。実際的な問題として、本開示のIgM濃
厚物は少くとも実質的に相同性のアイソアグルチニン
（即ちアイソアグルチニンが特異的である血液型をもつ
患者において錯合体を形成しうる種類のアイソアグルチ
ニン）を含んでいてはならない。
下の相同性アイソアグルチニン力価を有することを意味
する。理想的には、すべてのアイソアグルチニンの力価
が1:4以下である。実際的な問題として、本開示のIgM濃
厚物は少くとも実質的に相同性のアイソアグルチニン
（即ちアイソアグルチニンが特異的である血液型をもつ
患者において錯合体を形成しうる種類のアイソアグルチ
ニン）を含んでいてはならない。
製薬学的に許容しうるとは、有害な影響なしに哺乳動
物（例えば人間）に静脈内投与しうることを意味する。
患者に対して抗体を安全に静脈内投与するための多くの
水性賦形剤は良く知られている。参照、例えばテノール
ド（Tenold）の米国特許第4,396,608号及びランドブラ
ド（Lundblad）らの米国特許第4,186,192号。
物（例えば人間）に静脈内投与しうることを意味する。
患者に対して抗体を安全に静脈内投与するための多くの
水性賦形剤は良く知られている。参照、例えばテノール
ド（Tenold）の米国特許第4,396,608号及びランドブラ
ド（Lundblad）らの米国特許第4,186,192号。
上述のような有機体に対する保護効果は、本開示のIg
M濃厚物の予防的投与が（下記の保護作用の実施例にお
いて示されるように）感染した動物の死亡をかなり低下
させるということを意味する。
M濃厚物の予防的投与が（下記の保護作用の実施例にお
いて示されるように）感染した動物の死亡をかなり低下
させるということを意味する。
下記実施例において、本開示の濃度の高いIgM生成物
を、ガミミユン（Gamimune）−Ｎ［カツター・バイオロ
ジカル、マイルズ社（Cutter Biological,Miles Inc.）
として公知の市販されている静脈内免疫グロブリン（IV
IG）、及びペンタグロビン（Pentaglobin）（バイオテ
スト社）として公知の「IgMに富んだ」又は12重量％の
生成物と比較した。
を、ガミミユン（Gamimune）−Ｎ［カツター・バイオロ
ジカル、マイルズ社（Cutter Biological,Miles Inc.）
として公知の市販されている静脈内免疫グロブリン（IV
IG）、及びペンタグロビン（Pentaglobin）（バイオテ
スト社）として公知の「IgMに富んだ」又は12重量％の
生成物と比較した。
以下に用いる生成物の各々の各抗体種のそれぞれの量
を第１表に要約する。
を第１表に要約する。
下記実施例の血漿に由来するIgMは人間の血漿からの
ものであり、最初血液型に特異的な抗原と反応する抗体
（アイソアグルチニン）を含むことがわかつた。そのよ
うな抗体は深刻な副作用（即ち適当な赤血球と共に培養
するならば、補体の活性化又は細胞の溶解）を引き起こ
すことのあることが知られている。これは、上述したよ
うにIgMが抗体中介の免疫応答において補体を活性化す
るのにIgGよりも数倍能力があるから、高濃度のIgMにお
いて特に問題である。これを防止するために、更なる精
製工程によつて［例えば特異的吸着剤例えばシンソルブ
（Synsorb）Ａ又はシンソルブＢを用いることにより］
いずれかの相同性のアイソアグルチニン（及び好ましく
はすべてのアイソアグルチニン）を除去又は減じなけれ
ばならない。他にIgM濃厚物は普通の血液型（例えばＡ
型）の血液の貯めた供与物から調製し、次いで同様の血
液型の患者に対してだけ投与するのもよい。またIgM濃
厚物を、望しくないアイソアグルチニンが複合体化する
固定化されたRBC又はRBCストロマ（stroma）と単に接触
させてもよい。アイソアグルチニンを除去する又は特異
的なアイソアグルチニンの力価を1:4以下まで減ずる他
の方法も可能である。
ものであり、最初血液型に特異的な抗原と反応する抗体
（アイソアグルチニン）を含むことがわかつた。そのよ
うな抗体は深刻な副作用（即ち適当な赤血球と共に培養
するならば、補体の活性化又は細胞の溶解）を引き起こ
すことのあることが知られている。これは、上述したよ
うにIgMが抗体中介の免疫応答において補体を活性化す
るのにIgGよりも数倍能力があるから、高濃度のIgMにお
いて特に問題である。これを防止するために、更なる精
製工程によつて［例えば特異的吸着剤例えばシンソルブ
（Synsorb）Ａ又はシンソルブＢを用いることにより］
いずれかの相同性のアイソアグルチニン（及び好ましく
はすべてのアイソアグルチニン）を除去又は減じなけれ
ばならない。他にIgM濃厚物は普通の血液型（例えばＡ
型）の血液の貯めた供与物から調製し、次いで同様の血
液型の患者に対してだけ投与するのもよい。またIgM濃
厚物を、望しくないアイソアグルチニンが複合体化する
固定化されたRBC又はRBCストロマ（stroma）と単に接触
させてもよい。アイソアグルチニンを除去する又は特異
的なアイソアグルチニンの力価を1:4以下まで減ずる他
の方法も可能である。
実施例１ コーン（Cohn）／オンクリー（Oncley）冷エタノール
法を用いることにより、正常な人間の血漿から画分III
を得た。他に沈殿Ｂも同様に許容でき、これはキストラ
ー（Kistler）及びニツチユマン（Nitschmann）の方法
により正常な人間の血漿から得られる。このようにして
得た画分IIIのペースト1kgを、0.05M酢酸ナトリウム12.
5容量中に、pH4.8及び20℃で懸濁させた。次いでカプリ
ル酸を2.5v/w％の濃度まで添加した。約16時間５℃で熟
成した後、遠心分離及び濾過によつて不溶性の不純物を
除去した。この濾液を7.5％ポリエチレングリコールま
で調整し、得られたIgMの沈殿を遠心分離によつて集め
た。次いでIgMペーストを燐酸塩緩衝液にpH6.5で溶解
し、そして燐酸トリ−ｎ−ブチル及びツウイーン80の適
用によつてウイルスの不活性化を達成した。このウイル
スを含まない溶液を酢酸ナトリウム0.025M、グリシン0.
2M、塩化ナトリウム0.05M、pH4.8に調整した。このよう
に製造したIgMはIgM56.8％、IgG21.6％、及びIgA21.7％
の重量によるグロブリン組成と1:64の抗Ａに対する食塩
水力価及び1:64の食塩水抗Ｂ力価を有する。これらの抗
体は上述した技法によつて1:4より低い力価まで減少又
は除去することができる。
法を用いることにより、正常な人間の血漿から画分III
を得た。他に沈殿Ｂも同様に許容でき、これはキストラ
ー（Kistler）及びニツチユマン（Nitschmann）の方法
により正常な人間の血漿から得られる。このようにして
得た画分IIIのペースト1kgを、0.05M酢酸ナトリウム12.
5容量中に、pH4.8及び20℃で懸濁させた。次いでカプリ
ル酸を2.5v/w％の濃度まで添加した。約16時間５℃で熟
成した後、遠心分離及び濾過によつて不溶性の不純物を
除去した。この濾液を7.5％ポリエチレングリコールま
で調整し、得られたIgMの沈殿を遠心分離によつて集め
た。次いでIgMペーストを燐酸塩緩衝液にpH6.5で溶解
し、そして燐酸トリ−ｎ−ブチル及びツウイーン80の適
用によつてウイルスの不活性化を達成した。このウイル
スを含まない溶液を酢酸ナトリウム0.025M、グリシン0.
2M、塩化ナトリウム0.05M、pH4.8に調整した。このよう
に製造したIgMはIgM56.8％、IgG21.6％、及びIgA21.7％
の重量によるグロブリン組成と1:64の抗Ａに対する食塩
水力価及び1:64の食塩水抗Ｂ力価を有する。これらの抗
体は上述した技法によつて1:4より低い力価まで減少又
は除去することができる。
実施例２ 画分IIIを、血液Ａ型に特異的な血漿の貯留物（即ち
Ａ型の血液をもつ献血者からのもの）から得、これを実
施例１における如きカプリル酸での沈殿、清澄及び濾過
工程により処理した。濾液をpH6.5で0.16M燐酸ナトリウ
ムカリウムに調整し、そしてIgMを、同一のpH6.5の緩衝
液で平衡化されたアニオン交換体例えばＱセフアローズ
上に吸着させた。この吸着させたIgMを平衡化緩衝液で
洗浄した。IgMを、pH6.5において0.3M燐酸ナトリウムカ
リウムにより交換体から流出させた。ウイルスの不活性
化は燐酸トリ−ｎ−ブチル及びツウイーン80の適用によ
つて達成した。このウイルスを含まない溶液を、酢酸ナ
トリウム0.025M、グリシン0.2M、塩化ナトリウム0.05
M、pH4.8に調整した。このように製造したIgMはIgM96
％、IgG1.3％、IgA2.1％の重量によるグロブリン組成及
び１以下の抗Ａの食塩水力価を有する。
Ａ型の血液をもつ献血者からのもの）から得、これを実
施例１における如きカプリル酸での沈殿、清澄及び濾過
工程により処理した。濾液をpH6.5で0.16M燐酸ナトリウ
ムカリウムに調整し、そしてIgMを、同一のpH6.5の緩衝
液で平衡化されたアニオン交換体例えばＱセフアローズ
上に吸着させた。この吸着させたIgMを平衡化緩衝液で
洗浄した。IgMを、pH6.5において0.3M燐酸ナトリウムカ
リウムにより交換体から流出させた。ウイルスの不活性
化は燐酸トリ−ｎ−ブチル及びツウイーン80の適用によ
つて達成した。このウイルスを含まない溶液を、酢酸ナ
トリウム0.025M、グリシン0.2M、塩化ナトリウム0.05
M、pH4.8に調整した。このように製造したIgMはIgM96
％、IgG1.3％、IgA2.1％の重量によるグロブリン組成及
び１以下の抗Ａの食塩水力価を有する。
実施例３ 画分IIIのペーストを注射用の水５容量中に５℃で懸
濁させ、次いで6.5容量の緩衝液を添加してpH5.2に調整
し、酢酸ナトリウム0.03Mを達成した。この懸濁液を20
℃まで加熱し、２℃までゆつくり冷却し、pH4.8まで調
整し、そしてカプリル酸を２％まで添加することによつ
て不純物を沈殿させた。このように製造したIgM濾液を
Ｑセフアローズに吸着させ、更にアニオン交換体からの
IgMの流出をpH4.8以下に0.3M酢酸ナトリウムで達成する
以外実施例２における如く処理した。斯くして製造した
IgMはIgM約76.2％、IgG約13.8％及びIgA約8.3％の重量
によるグロブリン組成を有する。
濁させ、次いで6.5容量の緩衝液を添加してpH5.2に調整
し、酢酸ナトリウム0.03Mを達成した。この懸濁液を20
℃まで加熱し、２℃までゆつくり冷却し、pH4.8まで調
整し、そしてカプリル酸を２％まで添加することによつ
て不純物を沈殿させた。このように製造したIgM濾液を
Ｑセフアローズに吸着させ、更にアニオン交換体からの
IgMの流出をpH4.8以下に0.3M酢酸ナトリウムで達成する
以外実施例２における如く処理した。斯くして製造した
IgMはIgM約76.2％、IgG約13.8％及びIgA約8.3％の重量
によるグロブリン組成を有する。
下記の実施例４において動物試験に適用されるIgMは
主に実施例により、またそれより少程度には実施例２及
び３により製造した。好適な製造法は実施例２に示され
る。血漿の血液型に特異的な貯留体による相同性アイソ
アグルチニンの除去のほかに、合成の血液型に特異的な
吸着剤を使用することも好適であろう。
主に実施例により、またそれより少程度には実施例２及
び３により製造した。好適な製造法は実施例２に示され
る。血漿の血液型に特異的な貯留体による相同性アイソ
アグルチニンの除去のほかに、合成の血液型に特異的な
吸着剤を使用することも好適であろう。
初期の研究 実施例４ 下記のすべての動物試験において、IgM抗体を少くと
も33重量％含んでなる（即ち全抗体の33％がIgM型のも
のである）IgM濃厚物を希釈又は再構成することによつ
て作つた。最小IgM濃度は処置動物の1kg当り50mgであつ
た。間接的な免疫蛍光分析（IFA）による血漿に由来す
るIgMの病原バクテリヤに対する結合の評価 33の病原バクテリヤの標準的な懸濁液を準備した。細
胞を食塩水で寒天生長媒体から洗い除くことにより中間
対数相（mid−log phase）に収穫した。細胞を食塩水で
１回洗浄し、そして食塩水中に再懸濁させた。ホルマリ
ン（37％ホルムアルデコド）を1v/v％まで添加し、細胞
懸濁液を24時間４℃に保つた。次いで細胞を無菌の食塩
水で１回洗浄し、そして660nmにおいて0.20の光学密度
（OD）まで食塩水中に最懸濁させた。IFAのために、IgM
270μg/mlを含有するIgM溶液100μｌにバクテリヤの細
胞懸濁液100μｌを添加した。この混合物を37℃で30分
間培養した。細胞を遠心分離によつてペレツト化し、食
塩水で１回洗浄し、そして遠心分離によつて再ペレツト
化した。結合したIgMを検出するために、フルオレツセ
ンで標識したヤギの抗人間IgM［μ鎖特異性、ハイクロ
ン・ラボラトリーズ社（Hgclone Laboratories,Inc.,Lo
gan UT）］の希釈1:30の50μｌをバクテリヤ細胞ペレツ
トに添加した。この混合物の一部分を顕微鏡のスライド
グラスに移し、そして顕微鏡により510〜560nmで蛍光を
評価した。
も33重量％含んでなる（即ち全抗体の33％がIgM型のも
のである）IgM濃厚物を希釈又は再構成することによつ
て作つた。最小IgM濃度は処置動物の1kg当り50mgであつ
た。間接的な免疫蛍光分析（IFA）による血漿に由来す
るIgMの病原バクテリヤに対する結合の評価 33の病原バクテリヤの標準的な懸濁液を準備した。細
胞を食塩水で寒天生長媒体から洗い除くことにより中間
対数相（mid−log phase）に収穫した。細胞を食塩水で
１回洗浄し、そして食塩水中に再懸濁させた。ホルマリ
ン（37％ホルムアルデコド）を1v/v％まで添加し、細胞
懸濁液を24時間４℃に保つた。次いで細胞を無菌の食塩
水で１回洗浄し、そして660nmにおいて0.20の光学密度
（OD）まで食塩水中に最懸濁させた。IFAのために、IgM
270μg/mlを含有するIgM溶液100μｌにバクテリヤの細
胞懸濁液100μｌを添加した。この混合物を37℃で30分
間培養した。細胞を遠心分離によつてペレツト化し、食
塩水で１回洗浄し、そして遠心分離によつて再ペレツト
化した。結合したIgMを検出するために、フルオレツセ
ンで標識したヤギの抗人間IgM［μ鎖特異性、ハイクロ
ン・ラボラトリーズ社（Hgclone Laboratories,Inc.,Lo
gan UT）］の希釈1:30の50μｌをバクテリヤ細胞ペレツ
トに添加した。この混合物の一部分を顕微鏡のスライド
グラスに移し、そして顕微鏡により510〜560nmで蛍光を
評価した。
免疫グロブリンの微生物細胞表面への結合は、抗体中
介のオプソニン作用及び続くエングルフメント（engulf
ment）及び食細胞によるバクテリヤの死滅における最初
の段階である。第２表の結果は、血漿に由来するIgMが
試験したすべてのプソイドモナス種及び腸内球菌に結合
したことを示す。インフルエンザ菌及び腸内球菌に結合
するIgMは有用である。
介のオプソニン作用及び続くエングルフメント（engulf
ment）及び食細胞によるバクテリヤの死滅における最初
の段階である。第２表の結果は、血漿に由来するIgMが
試験したすべてのプソイドモナス種及び腸内球菌に結合
したことを示す。インフルエンザ菌及び腸内球菌に結合
するIgMは有用である。
実施例５ 血漿に由来するIgM及びIgGのオプソニン活性の比較 血漿に由来するIgMのオプソニン活性を、市販の血漿
に由来するIgG［ガミミユン（Gamimune）−Ｎ、マイル
ズ社（Mills Inc.,Barkeley,CA）］と比較するために食
細胞分析を用いた。この食細胞分析は組織培養流体に懸
濁させたバクテリヤ及び人間の食細胞（PMN）を用い
た。バクテリヤ:PMNの比は10:1であつた。補体源は2v/v
％のモルモツトの血清（GPS）であつた。加熱したGPSを
分析中に含有させて、免疫グロブリン単独又は他の熱安
定性の非抗体オプソニン血清因子の効果を評価した。37
℃で100分間培養した後、分析混合物の一部分を蒸留水
の９倍容量に添加してPMNを溶解し、生き残つているバ
クテリヤを複数の寒天プレートによつて数えた。大腸菌
K1の２種を分析で試験した。
に由来するIgG［ガミミユン（Gamimune）−Ｎ、マイル
ズ社（Mills Inc.,Barkeley,CA）］と比較するために食
細胞分析を用いた。この食細胞分析は組織培養流体に懸
濁させたバクテリヤ及び人間の食細胞（PMN）を用い
た。バクテリヤ:PMNの比は10:1であつた。補体源は2v/v
％のモルモツトの血清（GPS）であつた。加熱したGPSを
分析中に含有させて、免疫グロブリン単独又は他の熱安
定性の非抗体オプソニン血清因子の効果を評価した。37
℃で100分間培養した後、分析混合物の一部分を蒸留水
の９倍容量に添加してPMNを溶解し、生き残つているバ
クテリヤを複数の寒天プレートによつて数えた。大腸菌
K1の２種を分析で試験した。
新生児の髄膜炎と関連する大腸菌種の約84％はK1カプ
セル多糖類抗原を有する。［ロビンス（Robbins）、J.
B.ら、1974、新生児髄膜炎と関連する大腸菌カプセル多
糖類、N.イングル・Ｊ・メド（N.Engl.J.Med.）290、12
16〜1220］。第３巻に表わす結果は、血漿に由来するIg
Gが10.0mg/mlにおいてこの人間の重要な人間の病原菌の
２つのK1種に対してオプソニン活性を示さないというこ
とを示す。これに対し、血漿に由来するIgMはIgGよりも
20倍低い濃度（0.5mg/ml）において大腸菌K1接種物の＞
１og10減少を促進した。IgMのオプソニン活性は、加
熱したGPS（補体不活性化）が分析中に存在する場合接
種物のかなりの（280％）減少が起こらないというよう
に補体依存性であつた。加熱したGPS対照は、IgM中介
の、大腸菌K1接種物における減少がバクテリヤ凝集反応
のためでないということも示した。
セル多糖類抗原を有する。［ロビンス（Robbins）、J.
B.ら、1974、新生児髄膜炎と関連する大腸菌カプセル多
糖類、N.イングル・Ｊ・メド（N.Engl.J.Med.）290、12
16〜1220］。第３巻に表わす結果は、血漿に由来するIg
Gが10.0mg/mlにおいてこの人間の重要な人間の病原菌の
２つのK1種に対してオプソニン活性を示さないというこ
とを示す。これに対し、血漿に由来するIgMはIgGよりも
20倍低い濃度（0.5mg/ml）において大腸菌K1接種物の＞
１og10減少を促進した。IgMのオプソニン活性は、加
熱したGPS（補体不活性化）が分析中に存在する場合接
種物のかなりの（280％）減少が起こらないというよう
に補体依存性であつた。加熱したGPS対照は、IgM中介
の、大腸菌K1接種物における減少がバクテリヤ凝集反応
のためでないということも示した。
実施例６ IgG活性に対する血漿由来のIgM活性：ネズミモデルに
おける感染の予防 IgMの抗菌活性を種々の感染動物モデルにおいてIgGと
比較した。すべての感染モデルにおいて、バクテリヤ接
種物は、適当な寒天培地上、37℃で４〜５時間生長させ
た後に中間対数相（mid−log phase）細胞として準備し
た。試験接種物におけるバクテリヤの数は予じめ決めた
プレートのカウントと660nmにおける吸光度を関連づけ
ることによつて決定した。マウスに各種の約10の平均致
死投与量を与えた後、接種物の正確な細胞数を寒天培地
上の複数のプレートのカウントにより決定した。重さ22
〜26gの種CrL:CFW（SW）BRの雌のスイス−ウエブスター
・マウスをチヤールス・リバー・ブリーデイング・ラボ
ラトリーズ（Charles River Breeding Laboratories、W
ilmington、MA）から得た。各検討に対して、カゴ当り1
0匹のマウスを飼い、これに任意に水とマウスの餌を与
えた。すべての検討において、バクテリヤの接種２〜３
時間前に免疫グロブリン調製物を腹腔内経由で投与し
た。
おける感染の予防 IgMの抗菌活性を種々の感染動物モデルにおいてIgGと
比較した。すべての感染モデルにおいて、バクテリヤ接
種物は、適当な寒天培地上、37℃で４〜５時間生長させ
た後に中間対数相（mid−log phase）細胞として準備し
た。試験接種物におけるバクテリヤの数は予じめ決めた
プレートのカウントと660nmにおける吸光度を関連づけ
ることによつて決定した。マウスに各種の約10の平均致
死投与量を与えた後、接種物の正確な細胞数を寒天培地
上の複数のプレートのカウントにより決定した。重さ22
〜26gの種CrL:CFW（SW）BRの雌のスイス−ウエブスター
・マウスをチヤールス・リバー・ブリーデイング・ラボ
ラトリーズ（Charles River Breeding Laboratories、W
ilmington、MA）から得た。各検討に対して、カゴ当り1
0匹のマウスを飼い、これに任意に水とマウスの餌を与
えた。すべての検討において、バクテリヤの接種２〜３
時間前に免疫グロブリン調製物を腹腔内経由で投与し
た。
腹腔感染。無菌の食塩水に懸濁させた細胞の0.1ml容量
を腹腔内経由で注射した。
を腹腔内経由で注射した。
ムチンで高揚された腹腔感染。７％の無菌の豚の胃のム
チン［シグマ・ケミカル社（Sigma Chemical Co.,St.Lo
uis,Mo）］に懸濁させた細胞0.5ml容量を腹腔内経由で
注射した［テング（Teng）,N.H.ら（1985）、グラム陰
性バクテリア症及び内毒素症に対する人間のモノクロー
ナルIgM抗体での保護、プロク・ナトル・アカド・サイ
（Proc.Natl.Acad.Sci.）82、1790〜1794］。
チン［シグマ・ケミカル社（Sigma Chemical Co.,St.Lo
uis,Mo）］に懸濁させた細胞0.5ml容量を腹腔内経由で
注射した［テング（Teng）,N.H.ら（1985）、グラム陰
性バクテリア症及び内毒素症に対する人間のモノクロー
ナルIgM抗体での保護、プロク・ナトル・アカド・サイ
（Proc.Natl.Acad.Sci.）82、1790〜1794］。
肺炎。トツド（Todd）−ヒユーウイツト（Hewitt）汁
に懸濁させた肺炎桿菌ATCC 6303又は食塩水に懸濁させ
た緑膿菌ATCC 37316の0.05ml容量を、麻酔をかけたマウ
スの鼻孔に適用した［コリンズ（Collins）,M.S.及びド
ーシー（Dorsey）,J.H.（1985）、還元及びアルキル化
により或いは低pHにより調製した静脈内免疫グロブリン
間の生体内活性の比較、J.インフエクト・デイス（Infe
ct.Dis.）、151、1171〜1173］。
に懸濁させた肺炎桿菌ATCC 6303又は食塩水に懸濁させ
た緑膿菌ATCC 37316の0.05ml容量を、麻酔をかけたマウ
スの鼻孔に適用した［コリンズ（Collins）,M.S.及びド
ーシー（Dorsey）,J.H.（1985）、還元及びアルキル化
により或いは低pHにより調製した静脈内免疫グロブリン
間の生体内活性の比較、J.インフエクト・デイス（Infe
ct.Dis.）、151、1171〜1173］。
火傷敗血症。マウスの麻酔をかけ、ガス焔で体表面積の
10％の火傷を背中に作つた。無菌食塩水に懸濁させた細
胞の0.5ml容量を皮下経由により火傷に注射した。感染
していない外傷の対照マウスには食塩水0.5mlを与え、
体液のバランスを維持した［コリンズ（Collins）、M.
S.及びロビー（Roby）R.B.、（1983）、静脈内用の人間
のIgG調製物の、火傷したマウスにおける抗緑膿菌活
性、23、530〜534］。
10％の火傷を背中に作つた。無菌食塩水に懸濁させた細
胞の0.5ml容量を皮下経由により火傷に注射した。感染
していない外傷の対照マウスには食塩水0.5mlを与え、
体液のバランスを維持した［コリンズ（Collins）、M.
S.及びロビー（Roby）R.B.、（1983）、静脈内用の人間
のIgG調製物の、火傷したマウスにおける抗緑膿菌活
性、23、530〜534］。
この感染はマウスの場合致命的であつた；全体で、人
間の血清アルブミンで処置したマウスの92.5％が死亡し
た。IgGはS.アガラクチエ（agalactiae）（Ｂ群連鎖球
菌）の２つの種に対して保護作用を示した；しかしなが
ら肺炎桿菌の２つの種で試験したマウスの場合には、Ig
Gの保護は明らかでなかつた。これに対し、IgMはS.アガ
ラチエを試験したマウスには殆んど保護を示さなかつた
が、グラム陰性バチルス属の肺炎桿菌で試験したマウス
には非常に保護活性を示した。
間の血清アルブミンで処置したマウスの92.5％が死亡し
た。IgGはS.アガラクチエ（agalactiae）（Ｂ群連鎖球
菌）の２つの種に対して保護作用を示した；しかしなが
ら肺炎桿菌の２つの種で試験したマウスの場合には、Ig
Gの保護は明らかでなかつた。これに対し、IgMはS.アガ
ラチエを試験したマウスには殆んど保護を示さなかつた
が、グラム陰性バチルス属の肺炎桿菌で試験したマウス
には非常に保護活性を示した。
この感染は致命的であつた；全体で、アルブミン処置
した対照のマウスの86.7が死亡した。IgGは保護作用を
示さず、処置したマウスの86％が死亡した。これに対
し、IgMで処置したマウスの全死亡度は５％にすぎなか
つた。
した対照のマウスの86.7が死亡した。IgGは保護作用を
示さず、処置したマウスの86％が死亡した。これに対
し、IgMで処置したマウスの全死亡度は５％にすぎなか
つた。
肺炎桿菌に対して、IgGは40及び360mg/kgで保護的で
あつた（Ｐ＜0.05）。同様にIgGは100及び300mg/kgで緑
膿菌によつて誘導された肺炎に対して保護的であつた。
これに対し、1gMは鼻孔内経由により肺炎桿菌で誘発し
たマウスの場合保護的でなかつた。しかしながらIgMは
各投与量において肺炎桿菌に対して非常に保護的であつ
た（Ｐ＜0.01）。
あつた（Ｐ＜0.05）。同様にIgGは100及び300mg/kgで緑
膿菌によつて誘導された肺炎に対して保護的であつた。
これに対し、1gMは鼻孔内経由により肺炎桿菌で誘発し
たマウスの場合保護的でなかつた。しかしながらIgMは
各投与量において肺炎桿菌に対して非常に保護的であつ
た（Ｐ＜0.01）。
IgGは緑膿菌の１つの種（ATCC 27316）に対して保護
的であつた；しかしながら、奇怪変形菌の１つの種を含
む他の３つの試験種に対して殆んど又は全然保護は見ら
れなかつた。これに対しIgMは４つの試験種の各に対し
て非常に保護作用を示した。全体で火傷敗血症のうち1g
Mで処置したマウスは２％が死亡したにすぎなかつた。
的であつた；しかしながら、奇怪変形菌の１つの種を含
む他の３つの試験種に対して殆んど又は全然保護は見ら
れなかつた。これに対しIgMは４つの試験種の各に対し
て非常に保護作用を示した。全体で火傷敗血症のうち1g
Mで処置したマウスは２％が死亡したにすぎなかつた。
実施例７ IgMを低パーセント（12％）で含む濃厚物の活性に対す
るIgMを高パーセント（79％）で含む血漿に由来する
免疫グロブリン濃厚物の保護活性 血漿IgM（Pd−IgM）濃厚物の３つのロツトの抗感染性
活性を、12％IgM、16％IgA及び72％IgG（IgGMA）［ペン
タグロビン（Pentaglobin ）、バイオテスト・フアー
マ社（Biotest Pharma GmbH,Frankfurt/Main）］を含む
市販の濃厚物の活性と比較した。用いた実験法は実施例
３に示してある。
るIgMを高パーセント（79％）で含む血漿に由来する
免疫グロブリン濃厚物の保護活性 血漿IgM（Pd−IgM）濃厚物の３つのロツトの抗感染性
活性を、12％IgM、16％IgA及び72％IgG（IgGMA）［ペン
タグロビン（Pentaglobin ）、バイオテスト・フアー
マ社（Biotest Pharma GmbH,Frankfurt/Main）］を含む
市販の濃厚物の活性と比較した。用いた実験法は実施例
３に示してある。
この感染は致命的であつた。対照のマウスは100％死
亡した。30匹のPd−IgMで処置したマウスの11匹（X2＝
5.21、Ｐ＝0.22）に対して、30匹のIgGMAで処置したマ
ウスは全体で１匹が生存したにすぎなかつた。
亡した。30匹のPd−IgMで処置したマウスの11匹（X2＝
5.21、Ｐ＝0.22）に対して、30匹のIgGMAで処置したマ
ウスは全体で１匹が生存したにすぎなかつた。
プソイドモナス属による火傷の敗血症は致命的であ
る；対照のマウスの80％が死亡した。IgGMAの平均の保
護投薬量は40mg Ig/kgを越え、一方Pd−IgMの平均の保
護投薬量は1.5mg Ig/kg以下であつた。これらの結果はP
d−IgMがこの感染モデルにおいてIgGMAよりも少くとも2
7倍以上有効であることを示す。
る；対照のマウスの80％が死亡した。IgGMAの平均の保
護投薬量は40mg Ig/kgを越え、一方Pd−IgMの平均の保
護投薬量は1.5mg Ig/kg以下であつた。これらの結果はP
d−IgMがこの感染モデルにおいてIgGMAよりも少くとも2
7倍以上有効であることを示す。
多菌性種による火傷の敗血症を、黄色ブドウ球菌ATCC
14154の130細胞及び緑膿菌ATCC 27316の58細胞を含む
食塩水0.5mlを火傷に注射することによつて誘導した。
この感染は致命的であつた；対照のマウスの80％が死亡
した。IgGMAの平均の保護投薬量は45.1mg/kgであり、一
方Pd−IgMの平均の保護投薬量は8mg/kg以下であつた。
これはこの感染モデルにおいてPd−IgMがIgGMAより少く
とも６倍有効であることを示す。更にIgGMAで処置した3
0匹のマウスのうち13匹が生き残つたが、Pdで処置した3
0匹のマウスは29匹が生き残つた（X2−10.16、Ｐ＜0.0
1）。
14154の130細胞及び緑膿菌ATCC 27316の58細胞を含む
食塩水0.5mlを火傷に注射することによつて誘導した。
この感染は致命的であつた；対照のマウスの80％が死亡
した。IgGMAの平均の保護投薬量は45.1mg/kgであり、一
方Pd−IgMの平均の保護投薬量は8mg/kg以下であつた。
これはこの感染モデルにおいてPd−IgMがIgGMAより少く
とも６倍有効であることを示す。更にIgGMAで処置した3
0匹のマウスのうち13匹が生き残つたが、Pdで処置した3
0匹のマウスは29匹が生き残つた（X2−10.16、Ｐ＜0.0
1）。
上記開示により、同業者には今やその変化が想起され
ると思われる。従つてここに開示する本発明は特許請求
の範囲によつてのみ限定されるべきであることが意図さ
れる。
ると思われる。従つてここに開示する本発明は特許請求
の範囲によつてのみ限定されるべきであることが意図さ
れる。
本発明の特徴及び態様は以下の通りである： 1.実質的にアイソアグルチニンを含有しない人間のIgM
濃厚物の製薬学的に許容しうる水溶液を、治療学的又は
予防的効果を保証するのに十分な条件下に哺乳動物に静
脈内投与することを含んでなる、グラム陰性バクテリヤ
に対して治療学的又は予防的効果を付与するために哺乳
動物を処置する方法。
濃厚物の製薬学的に許容しうる水溶液を、治療学的又は
予防的効果を保証するのに十分な条件下に哺乳動物に静
脈内投与することを含んでなる、グラム陰性バクテリヤ
に対して治療学的又は予防的効果を付与するために哺乳
動物を処置する方法。
2.IgM濃厚物がIgM抗体を少くとも約33重量％含んでなり
且つ約1:4以下のアイソアグルチニン力価を有する上記
１の方法。
且つ約1:4以下のアイソアグルチニン力価を有する上記
１の方法。
3.哺乳動物の体重kg当りIgM抗体少くとも約50mgの割合
で水溶液を投与する上記１の方法。
で水溶液を投与する上記１の方法。
4.哺乳動物の体重kg当りIgM約50〜250mgの割合で水溶液
を投与する上記１の方法。
を投与する上記１の方法。
5.IgM抗体が人間の血漿に由来し、溶液のpHが約7.0以下
である上記２の方法。
である上記２の方法。
6.抗体が人間の血漿のコーン画分IIIから又は人間の血
漿キスラー（Kistler）−ニツチユマン沈殿Ｂから調製
される上記５の方法。
漿キスラー（Kistler）−ニツチユマン沈殿Ｂから調製
される上記５の方法。
7.グラム陰性バクテリヤが大腸菌を含んでなる上記１の
方法。
方法。
8.グラム陰性バクテリヤが霊菌を含んでなる上記１の方
法。
法。
9.グラム陰性バクテリヤが緑膿菌を含んでなる上記４の
方法。
方法。
10.グラム陰性バクテリヤが肺炎桿菌を含んでなる上記
４の方法。
４の方法。
11.グラム陰性バクテリヤが奇怪変形菌を含んでなる上
記４の方法。
記４の方法。
12.実質的にアイソアグルチニンを含まない凍結乾燥し
たIgM濃厚物。
たIgM濃厚物。
13.IgMの濃厚物が全抗体の少くとも33重量％であり、そ
してそのアイソアグルチニン力価が約1:4以下である上
記12の組成物。
してそのアイソアグルチニン力価が約1:4以下である上
記12の組成物。
14.IgMの濃度が少くとも50重量％である上記12の組成
物。
物。
15.実質的に抗Ａ抗体を含まない上記12の組成物。
16.実質的に抗Ｂ抗体を含まない上記12の組成物。
17.実質的に抗Ａ及び抗Ｂ抗体の双方を含まない上記12
の組成物。
の組成物。
18.水溶液への再構成時に約7.0以下のpHとなる上記16の
組成物。
組成物。
19.pHが約5.0である上記18の組成物。
20.pHが約4.8である上記19の組成物。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ハンス・ゲオルク・オピツツ アメリカ合衆国カリフオルニア州94526 ダンビル・クローバーヒルコート 140 (72)発明者 リチヤード・エル・セング アメリカ合衆国カリフオルニア州95446 ガーンビル・ピーオーボツクス2038
Claims (1)
- 【請求項１】実質的にアイソアグルチニンを含有しない
人間のIgMを活性成分として含んでなるグラム陰性バク
テリヤに対して治療学的又は予防的効果を付与するため
の製薬学的組成物。
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| US20337788A | 1988-06-06 | 1988-06-06 | |
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