JP2024524493A - カスパーゼ－２阻害剤化合物 - Google Patents

Abstract

本発明は、式（Ｉ）：

Description

本発明は、新規ペプチド誘導体、該誘導体を含む医薬組成物、ならびにカスパーゼ－２媒介疾患または障害の予防および／または処置におけるそれらの使用に関する。

カスパーゼは、進化的に保存されたシステイン依存性エンドプロテアーゼのファミリーであって、特定のアスパラギン酸残基の後のそれらの基質を加水分解するものである（Ｌａｍｋａｎｆｉ、２００２）。カスパーゼは、アポトーシス（Ｒａｍｉｒｅｚ ａｎｄ Ｓａｌｖｅｓｅｎ、２０１８）、炎症（Ｖａｎｄｅ Ｗａｌｌｅ、２０１６）、細胞分化（Ｆｅｒｎａｎｄｏ、２００２）および代謝（Ｓｈａｌｉｎｉ、２０１５）などの広範囲の生物学的活性に関連している。

カスパーゼは、炎症プロセスの調節に関与するもの（－１、－４、－５、－１１、－１２）と、アポトーシスの誘導および実行の中心にあるもの（２、－３、－７、－８、－９、－１０）との２つの主要な群に分類される（Ｓｈａｌｉｎｉ、２０１５）。アポトーシスカスパーゼ酵素前駆体は、アポトーシスプログラムにおけるそれらの役割に基づいて、イニシエーター（ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）またはエクセキューショナー（ｅｘｅｃｕｔｉｏｎｅｒ）カスパーゼのいずれかとして分類される。上流のシグナル伝達において重要であるイニシエーターカスパーゼ（例えば、カスパーゼ－２、－８、および－９）は、アダプタータンパク質がそれらのプロドメインに結合することによって活性化されるようになる。この結合は、高分子量タンパク質複合体へのオリゴマー化を促進し、これが二量体化および活性酵素へのプロセシングをトリガーする。活性になると、イニシエーターカスパーゼは、タンパク質分解開裂を介してエクセキューショナーカスパーゼ（例えば、カスパーゼ－３および－７）を活性化する。次いで、エクセキューショナーカスパーゼは、タンパク質基質の切断に進み、細胞の組織的解体、最終的には細胞死をもたらす。

アポトーシス中のイニシエーターカスパーゼ活性化は、ミトコンドリア経路または内因性経路と死受容体経路または外因性経路との２つの主要な経路によって媒介される。内因性経路は、細胞ストレスに応答して活性化され（例えば、ＲＯＳ、細胞傷害性薬物、ＤＮＡ損傷）、イニシエーターカスパーゼ－２の活性化をもたらす（Ｓｈａｌｉｎｉ、２０１５）。活性カスパーゼ－２はＢｉｄを切断し、切断型Ｂｉｄ（ｔＢｉｄ）はＢａｘおよびＢａｋの調節を介してミトコンドリア透過化を活性化する（Ｅｎｏｋｓｓｏｎ、２００４）。次いで、ミトコンドリアのシトクロムｃがサイトゾルに放出され、Ａｐａｆ－１のオリゴマー化を誘発し、アポトソームとして知られる大きな七量体複合体を形成する（Ｂａｏ、２００７）。アポトソームは、イニシエーターカスパーゼであるカスパーゼ－９を動員し活性化し、これは、エクセキューショナーカスパーゼであるカスパーゼ－３および－７を直接切断し活性化することができる（Ｂａｏ、２００７）。

外因性アポトーシス経路は、リガンドがその細胞外死受容体（例えば、ＴＮＦＲ、Ｆａｓ、ＴＲＡＩＬ）に結合することによって原形質膜で誘導される（Ｇａｕｒ、２００３）。これは、ＦＡＳ関連死ドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）および／またはＴＮＦＲ関連死ドメインタンパク質（ＴＲＡＤＤ）および他の成分を含む死誘発シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）を介して、カスパーゼ－８または－１０の動員および活性化を媒介する。カスパーゼ－８はまたＢＩＤを切断して切断型（ｔＢＩＤ）にし、これはミトコンドリア経路に関与してアポトーシス応答を増幅させる（Ｌｉ、１９９８）。イニシエーターカスパーゼが外因性または内因性アポトーシス経路を介して活性化されると、それらはエフェクターカスパーゼ－３、－６および－７の活性化を媒介する（Ｂａｏ、２００７）。

カスパーゼ－２は、元々Ｎｅｅｄ－２（マウスにおいて）またはＩｃｈ－１（ヒトにおいて）と命名されており、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ（Ｙｕａｎ、１９９３；Ｗａｎｇ、１９９４；Ｋｕｍａｒ、１９９４）と５５％の類似性を共有し、種全体で最も保存されたカスパーゼである。カスパーゼ－２は、Ｎ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）、続けて活性部位を含有する大サブユニット（ｐ１９）および小サブユニット（ｐ１２）を含有する。したがって、カスパーゼ－２は、アポトーシスの内因性経路のイニシエーターであるカスパーゼ－９に最も似ている（（Ｌｉ ａｎｄ Ｙｕａｎ、２００８）。しかしながら、カスパーゼ－９または外因性アポトーシスのアピカル（ａｐｉｃａｌ）カスパーゼ、カスパーゼ－８などの従来のイニシエーターカスパーゼとは対照的に、カスパーゼ－２は、カスパーゼ－３、－６または－７などのそれらの活性化のためにイニシエーターによって切断される必要があるアポトーシスエフェクターを処理しない（Ｇｕｏら、２００２；Ｖａｎ ｄｅ Ｃｒａｅｎら、１９９９）。他のイニシエーターカスパーゼとは対照的に、カスパーゼ－２は、二量体化後に自己触媒開裂を受け、その初期活性化のために開裂を必要としない（Ｂ．Ｃ．Ｂａｌｉｇａ ２００４）。

カスパーゼ－２は、いくつかの細胞モデルにおいてＤＮＡ損傷後のアポトーシス経路のトリガーにおいて中心的役割を果たす核局在化シグナルの存在を含む、いくつかの固有の特徴を有する。さらに、カスパーゼ－２は、ｄｅ ｎｏｖｏ脂質生成（Ｋｉｍ、２０１８）、代謝調節（Ｎｕｔｔ、２００５）、腫瘍抑制（Ｋｕｍａｒ、１９９５）、有糸分裂異常（Ｖｉｔａｌｅ、２０１１）、細胞周期調節（Ｓｉｄｉ、２００８）およびＤＮＡ修復（Ｖｉｇｎｅｓｗａｒａ、２０２０）を含む非アポトーシスシグナル伝達経路であることが報告されている。

アポトーシスの増加による健康な組織内の生細胞の喪失は、多くのヒト障害ならびに環境、医学的毒性および病原体の発生および進行に寄与する（Ｓｉｎｇｈ、２０１９）。

カスパーゼ－２誘発性アポトーシスの増加は、種々の疾患または病態で報告されている。
・視神経損傷後の網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の喪失は、虚血性視神経症としてのある特定のヒト眼疾患の特徴である。ラットの視神経切断モデルでは、カスパーゼ－２がＲＧＣにおいて発現および切断されることが見出された（Ａｈｍｅｄ、２０１１）。
・新生児虚血性脳損傷では、虚血損傷は、酸化ストレス、炎症、および興奮毒性の複数の経路をトリガーし、カスパーゼ２活性化によって媒介されるアポトーシスによって虚血領域で大量の細胞死につながる（Ｃａｒｌｓｓｏｎ、２０１１；Ｃｈａｕｖｉｅｒ、２０１１）。
・脳卒中では、脳ニューロンのアポトーシスが、虚血／再灌流（Ｉ／Ｒ）損傷を引き起こす、一過性全虚血後の梗塞周囲ゾーンに生じる主要な病理学的変化である。脳ニューロンのアポトーシスは、脳卒中後に片麻痺、死亡、または認知障害を引き起こす可能性がある（Ｔｕｒｋｍｅｎ、２０１１）。脳卒中の動物モデルでは、Ｉ／Ｒ後にカスパーゼ２の発現および活性化が増加した。
・アルツハイマー病（ＡＤ）および他のタウオパチーでは、タウタンパク質は原線維を形成し、これは神経毒性であると考えられている。カスパーゼ－２はＡｓｐ３１４でタウを切断し、これは動物および細胞モデルにおいて認知およびシナプス機能の障害をもたらす。切断産物Δｔａｕ３１４は、フィブリル化に抵抗性であり、認知障害マウスおよびＡＤを有するヒトの脳においてより高いレベルで存在する。カスパーゼ－２開裂に抵抗したタウ変異体の発現は、培養ニューロンにおいて、タウがスパインに浸潤し、グルタミン酸受容体の位置を変え、シナプス機能を損なうのを防ぎ、マウスの記憶障害および神経変性を防いだ（Ｚｈａｏ、２０１６）。
・カスパーゼ－２は、肥満、メタボリックシンドローム、および非アルコール性脂肪性肝疾患を促進する（Ｍａｃｈａｄｏ、２０１６；Ｋｉｍ、２０１８）。カスパーゼ－２の発現は、ＮＡＦＬＤを有する患者における肝疾患の重症度と強く相関していた（Ｍａｃｈａｄｏ、２０１５；Ｋｉｍ、２０１８）。

多くの疾患において役割を有するアポトーシスの増加の強い証拠が、治療的利益のためにこの経路を薬物処理する努力を促している。第一世代のカスパーゼ阻害剤は、選択性の欠如および使用される異なる弾頭（ｗａｒｈｅａｄｓ）のために限られた治療的利益を示す可逆的なアルデヒドペプチドであった。

第一世代の阻害剤では、異なるカスパーゼ、例えばＡｃ－ＤＥＶＤ－ＣＨＯ（カスパーゼ－３およびカスパーゼ－７の優先的阻害剤）およびＡｃ－ＶＤＶＡＤ－ＣＨＯ（カスパーゼ－２、－３および－７の優先的阻害剤）を選択的に阻害すると考えられるいくつかのペプチド配列が開発された。

アポトーシスを効果的に阻害するために、カスパーゼ－３に対する選択性は、ほとんど全ての組織における他のカスパーゼと比較してこのカスパーゼの濃度が高く、その乱雑な性質のために極めて重要である（ＭｃＳｔａｙ、２００８）。さらに、カスパーゼ２に対して非選択的な阻害剤は、それらがミトコンドリア外膜細孔の下流で作用し、カスパーゼ－２媒介細孔形成によって誘発されるミトコンドリア機能への大きな損傷を逆転させることができないので、直接的なアポトーシス阻害の臨床的利益は限られている（Ｓｉｎｇｈ、２０１９）。さらに、カスパーゼ－８（外因性アポトーシス）も活性化され、選択的なカスパーゼ－２（内因性アポトーシス）阻害が必要な状況では、選択性も重要であり得る。

阻害剤Ａｃ－ＶＤＶＡＤ－ＣＨＯは、カスパーゼ－２よりもカスパーゼ－３に対してより強力である。これは、「選択的」カスパーゼ－２阻害剤として細胞状況で使用される場合、この試薬を用いて生成されたデータの妥当性についていくつかの疑問を提起する。いくつかの刊行物は、既存の阻害剤に関する特異性の懸念を既に示しており、カスパーゼ分野におけるより選択的な阻害剤の緊急の必要性を強調している（Ｐｅｒｅｉｒａ、２００８；Ｂｅｒｇｅｒ、２００６；ＭｃＳｔａｙ、２００８；Ｂｅｎｋｏｖａ、２００９；Ｙｕｎ、２００７；Ｋｒｕｍｓｃｈｎａｂｅｌ、２００９；Ｋｉｔｅｖｓｋａ、２００９；Ｓｃｈｗｅｉｚｅｒ、２００７；Ｐｏｒｅｂａ、２０１９（「Ｃａｓｐａｓｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｍｃｈａｎｉｓｍｓ」、Ｐｏｒｅｂａら、Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）。この論文（主に補足セクション）では、本発明者らは、天然アミノ酸配列に基づいて作製されたカスパーゼ阻害剤／プローブの詳細な動態分析を提供した。

カスパーゼ阻害剤設計で使用される弾頭にはいくつかのタイプがある。しかしながら、それらは全て同様に機能する。それらの作用機序は、求電子中心上の活性部位システインの求核攻撃に依存しており、したがって、移行的（可逆的）または共有結合的（不可逆的）カスパーゼ－阻害剤複合体を形成する（Ｅｖａｎｓ、２００６）。特定の弾頭の最も重要な特徴は、活性部位のシステイン残基のみを標的とする能力であり、プロテオーム中の他の遊離求核剤を省略する。したがって、標的タンパク質分解酵素の触媒作用機序は、適切な弾頭の選択において重要な役割を果たす。

システインプロテアーゼ中の触媒システイン残基のチオール基は、触媒セリンまたはトレオニン上のヒドロキシル基よりも分極可能であることが重要であり、したがって、システインプロテアーゼの弾頭として使用される求電子剤は、セリンまたはトレオニンプロテアーゼのものよりも柔軟であり得る（Ｐｏｗｅｒｓ、２００２）。したがって、カスパーゼは、ジアゾメチルケトン、エポキシドならびにハロ－およびアシルオキシ－メチルケトンなどの弾頭を含有する阻害剤で最も広く研究されている。これらの弾頭の主な利点は、それらの合成の容易さ、良好なバイオアベイラビリティ、および活性部位Ｃｙｓ選択的反応性である。最も使用されている市販のカスパーゼ阻害剤弾頭は、フルオロ－（ＦＭＫまたは－ＣＨ２Ｆ）、クロロ－（ＣＭＫまたは－ＣＨ２Ｃｌ）、またはアシルオキシ－メチルケトン（ＡＯＭＫ）（Ｐｏｒｅｂａ、２０１５、（「Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｃｔｉｖｅ ｓｉｔｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｃａｓｐａｓｅｓ」Ｐｏｒｅｂａら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、２０１５））である。これらの弾頭の主な利点は、それらの合成の容易さ、良好なバイオアベイラビリティ、および活性部位のＣｙｓ選択的反応性である（Ｓａｎｍａｎ、２０１４；Ｐｏｗｅｒｓ、２００２）。

ＦＭＫベースの阻害剤が最初であり、これまでこの分野の研究を支配してきた。ＦＭＫの利点の１つは、ケトン試薬が原形質膜を透過し、細胞に対して比較的無毒であることである（Ｖａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ、２００１（「Ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ Ｚ－ＶＡＤ－ＦＭＫ，ａ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｃａｓｐａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ」Ｖａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ，Ａｃｔａ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａ、２００１））。ＦＭＫ阻害剤の使用はまた、レグマイン、カテプシンＢおよびカテプシンＨなどの他のシステインプロテアーゼとのそのようなプローブの交差反応性、ならびに反応性ＦＭＫ基の非特異的結合からの高い標識バックグラウンドの生成という、いくつかの欠点を有する：（Ｒｏｚｍａｎ－Ｐｕｎｇｅｒｃａｒ、２００３；Ｓｃｈｏｔｔｅ、１９９９）。ＦＭＫ弾頭を含有する阻害剤は、特にアコニターゼの阻害をもたらす肝臓におけるフルオロ酢酸基の放出のために、インビボで毒性であることが示されている。したがって、ＦＭＫ基を有する阻害剤の開発は、その肝毒性のために前臨床段階で中止された（Ｃｉｔａｒｅｌｌａ、２０２０）。

ＡＯＭＫは、この群の中で最も弱い求電子剤であるため、他の生物求核剤との交差反応性がほとんどないため、カスパーゼ阻害剤の開発に最も適している。したがって、より弱い求電子性は、それらがカスパーゼとより特異的に反応し、他のＣｙｓ依存性プロテアーゼとの交差反応性の低下を示すことを可能にする（Ｐｏｒｅｂａら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１５）ＢＩ－ＢＪ）。

カスパーゼ－２発現のダウンモジュレーションは、いくつかのモデルにおいてアポトーシスを効果的に防止している。
・視神経損傷後の網膜神経節細胞（ＲＧＣ）喪失のモデルにおいて、ｓｉＲＮＡによるカスパーゼ－２発現の阻害は、少なくとも３０日間にわたってＲＧＣ生存を有意に増強することによって神経保護効果を有した（Ａｈｍｅｄ、２０１１）。
・新生児虚血性脳損傷では、カスパーゼ２の遺伝的（Ｃａｒｌｓｓｏｎ、２０１１）または薬理学的（Ｃｈａｕｖｉｅｒ、２０１１）阻害は、興奮毒性、動脈発作、および低酸素後の新生児脳における皮質および白質損傷を減少させる。
・脳卒中のアポトーシスでは、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ－１２４７－３ｐ）による処置はカスパーゼ－２の発現を阻害し、ニューロンのアポトーシスを弱めた（Ｚｈａｎｇ、２０１９）。
・アルツハイマー病（ＡＤ）および他のタウオパチーの動物モデルでは、カスパーゼ－２のレベルを低下させると、既存の欠損を有するマウスにおいて長期記憶が回復した（Ｚｈａｏ、２０１６）。
・カスパーゼ－２枯渇は、メチオニン／コリン欠乏（ＭＣＤ）食餌誘発性脂肪性肝炎マウスを肝細胞アポトーシスおよび線維症進行から保護した（Ｍａｃｈａｄｏ、２０１５）。

カスパーゼ－２活性を阻害することができる化合物は、例えば国際公開第２００５／１０５８２９号および欧州特許第２６７０７７４号に報告されている。しかしながら、これらの公知のカスパーゼ－２阻害剤はまた、カスパーゼ－３に対して高すぎる活性を有する。これらは、選択的カスパーゼ－２阻害剤として適格ではない。より最近では、一連の可逆的カスパーゼ－２阻害剤が報告されている。ヒト組換えカスパーゼについてインビトロで評価した場合、これらの化合物は、カスパーゼ－２を優先的に阻害するが、細胞アッセイおよびインビボ使用に適合しない構造特性において中程度の効果を有することが見出された（Ｍａｉｌｌａｒｄ、２０１１）。国際公開第２０１７／１６２６７４号および国際公開第２０１９／０６８５３８号は、カスパーゼ－２阻害剤として５つのアミノ酸単位を含有するペプチド化合物を開示している。

Ｐｏｒｅｂａら（２０１９）はまた、Ｌ－立体化学における５つのアミノ酸単位によって構成されるカスパーゼ－２阻害剤を開示している。化合物ＮＨ－２３－Ｃ２（ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ）は、アッセイした化合物の中で最も高いカスパーゼ－２阻害活性を有するが、それでもなおカスパーゼ－３に対する選択性はなく、カスパーゼ－８に対する選択性は限られていることが見出された。

したがって、より具体的には、カスパーゼ－３／カスパーゼ－８に対する有意に低下した活性を有する強力かつ／または選択的なカスパーゼ－２阻害剤が依然として必要とされている。特に、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肥満、メタボリックシンドローム、肝硬変、新生児脳虚血、心虚血および例えばアルツハイマー病などの慢性変性疾患などのカスパーゼ－２活性が関与している疾患および／または損傷の予防および／または処置に使用するためのより選択的で効率的なカスパーゼ－２阻害剤を提供することが非常に有利であろう。

カスパーゼ－２活性を特異的に検出するための活性ベースのプローブとして使用するためのより効果的で選択的なカスパーゼ－２阻害剤を提供することも非常に有利であろう。

本発明の化合物は、これらの必要性を満たすことを目的とする。

カスパーゼ－２、カスパーゼ－３およびカスパーゼ－８に対するＰ２基質スクリーニング。ｘ軸は、ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｐ２－Ａｓｐ－ＡＣＣにおけるＰ２位でのＬ－アミノ酸の略称を表し、一方、ｙ軸は、特定の活性または「活性部位滴定」カスパーゼの１０ｎＭあたりの基質加水分解速度（ＲＦＵ／ｓ）を表す。活性カスパーゼの濃度を活性部位滴定によって決定した。 カスパーゼ－２に対するＮＨ－２３－Ｃ２合成阻害剤のｋｏｂｓ／Ｉ阻害パラメーターの計算のための生データ。ｋｏｂｓ／Ｉパラメーターは、擬一次速度論的条件下で測定した（［Ｉ］＞＞［Ｅ］）。ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＣＣを基質として使用した。ＡＣＣ蛍光を、３５５ｎｍ（励起）および４６０ｎｍ（発光）の波長を使用してモニターした。二次阻害率（ｋｏｂｓ／Ｉ）を少なくとも３回の独立した実験で決定し、平均値として示した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ソフトウェアを計算に使用した。 カスパーゼ－２に対するＮＨ－２３－Ｃ２阻害剤のＫｉおよびＩＣ５０パラメーターを決定するための生データ。Ｋｉパラメーターは、Ｍｏｒｒｉｓｏｎの式（Ｃｏｐｅｌａｎｄ、２０００）を使用して測定した。ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＣＣをカスパーゼ－２のＡＣＣ蛍光発生基質として使用した。ＡＣＣ蛍光を、３５５ｎｍ（励起）および４６０ｎｍ（発光）の波長を使用してモニターした。ＫｉパラメーターはＭｏｒｒｉｓｏｎの式から計算し、ＩＣ５０パラメーターは式：ＩＣ５０＝Ｋｉ×（１＋［Ｓ］／Ｋｍ］を使用して計算し、式中、［Ｓ］はアッセイで使用される基質濃度であり、Ｋｍは基質のミカエリス・メンテン定数である。全ての測定を少なくとも３回行い、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ソフトウェアを使用してデータを分析した。 ＨｅｐＧ２細胞における脂質蓄積。細胞内脂質蓄積を相対蛍光（蛍光４９３、ＢＯＤＩＰＹ／蛍光５０３、ＤＡＰＩ）として測定した。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０）として表す。＊ｐ＜０．０００１ ｖｓ対照＊＊ｐ＜０，０５、＊＊＊ ｐ＜０．００１ ｖｓ ＮＡＳＨ ＨｅｐＧ２細胞における脂質蓄積。ＮＨ－２３－Ｃ２および化合物１を、１０、２０および２５ｍＭで使用した。細胞内脂質蓄積を相対蛍光（蛍光４９３、ＢＯＤＩＰＹ／蛍光５０３、ＤＡＰＩ）として測定した。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０）として表す。＊ｐ＜０．０００１ ｖｓ対照、＊＊ｐ＜０、０５、＊＊＊ ｐ＜０．００１ ｖｓ ＮＡＳＨ。 ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｐ３－Ｄａｂ－Ａｓｐ－ＡＣＣ［式中、Ｐ３は、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）、Ｇｌｕ、またはＶａｌである］の一般式を有する５つの蛍光発生基質に対して試験した組換えカスパーゼ－２の基質選択性。最良の基質（ＲＦＵ／秒として表される、相対蛍光単位／秒）の開裂速度を１００％に設定し、それに応じて他の基質の開裂速度を調整した。基質濃度は１０μＭであり、カスパーゼ２濃度は１０ｎＭであった。 ＮＨ－Ｉｄｃ－Ｐ４－Ｐ３－Ｄａｂ－Ａｓｐ－ＡＣＣ［式中、Ｐ４は、Ａｓｐ、ｈＧｌｕ、Ｉｌｅ、ＬｅｕまたはｈＬｅｕであり、Ｐ３は、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）、Ｇｌｕ、Ｖａｌ、またはＡｂｕである］の一般式を有する２５の蛍光基質に対して試験した組換えカスパーゼ－２の基質選択性。結果は、棒グラフ（変形例１）またはヒープマップ（変形例２）として提示される。最良の基質（ＲＦＵ／秒として表される、相対蛍光単位／秒）の開裂速度を１００％に設定し、それに応じて他の基質の開裂速度を調整した。基質濃度は１０μＭであり、カスパーゼ２濃度は１０ｎＭであった。 Ｐ３位に天然アミノ酸の等モル混合物を有する５つのコンビナトリアル蛍光発生基質（ＮＨ－Ｉｄｃ－Ｐ４－Ｍｉｘ－Ｄａｂ－Ａｓｐ－ＡＣＣ、左）およびＰ３位に定義されたアミノ酸を有する１０個の個々の蛍光発生基質：グルタミン酸－Ｇｌｕ（ＮＨ－Ｉｄｃ－Ｐ４－Ｇｌｕ－Ｄａｂ－Ａｓｐ－ＡＣＣ、中央）またはグルタミン酸シクロヘキシルエステル－Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）（ＮＨ－Ｉｄｃ－Ｐ４－Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）－Ｄａｂ－Ａｓｐ－ＡＣＣ、右）を使用した、Ｐ４およびＰ３位におけるカスパーゼ－２のサブサイト協同性の分析。各シリーズからの最良の基質（ＲＦＵ／秒として表される、相対蛍光単位／秒）の開裂速度を１００％に設定し、それに応じてシリーズ内の他の基質の開裂速度を調整した。個々の基質の濃度は１０μＭであり、コンビナトリアル基質の濃度は１００μＭであった。カスパーゼ２濃度は１０ｎＭであった。

発明の詳細な説明

本発明の文脈において、以下の用語は以下に詳述する意味を有する。

「Ｃ_１－６アルキル」という用語は、不飽和を含まず、１～６個、好ましくは１～３個（「Ｃ_１－３アルキル」）、より好ましくは１または２個（「Ｃ_１－２アルキル」）の炭素原子を有し、例えば非限定的な意味で、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチルなどを含む単結合によって分子の残りに結合している、炭素原子および水素原子からなる直鎖または分岐鎖の炭化水素鎖残基を指す。好ましくは、「アルキル」は、メチルまたはエチルを指す。

「Ｃ_３－７シクロアルキル」という用語は、例えば、非限定的な意味で、シクロプロピル、シクロヘキシルまたはシクロペンチルを含む単結合によって分子の残りに結合している、３～７個、好ましくは３～６個の炭素原子を有する飽和または部分飽和単環式または二環式脂肪族基を指す。

「Ｃ_６－１０アリール」という用語は、例えば非限定的な意味で、フェニル、ナフチルなどを含む１個または２個の芳香族核を含む、６～１０個、好ましくは６個または１０個の炭素原子を有する芳香族基を指す。好ましくは、「アリール」はフェニルを指す。

「ハロゲン」という用語は、ブロモ、クロロ、ヨードまたはフルオロを指す。

「Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル」という用語は、水素原子の少なくとも１個がハロゲン原子、例えばＣＦ_３、ＣＣｌ_３、ＣＨＦ_２、ＣＨ_２Ｆ、ＣＦ_２ＣＦ_３で置き換えられている上記に定義されるアルキル基を指す。

「Ｃ_１－６アルコキシル」という用語は、Ｃ_１－６アルキルが上記に定義されるアルキル基、好ましくはＣ_１－３アルキルである式－Ｏ－Ｃ_１－６アルキルの基を指す。Ｃ_１－６アルコキシルの例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソ－プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、イソ－ブトキシおよびｓｅｃ－ブトキシ、好ましくはメトキシが挙げられる。

「（Ｃ_６－Ｃ_１０）アリール（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル」という用語は、上記に定義されるアルキル基を介して分子の残りに結合している上記に定義されるアリール基を指す。好ましくは、（Ｃ_６－Ｃ_１０）アリール（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルは、（Ｃ_６）アリール（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、例えばベンジルである。

「５～１０員ヘテロシクリル」とは、安定な５～１０員環基、好ましくは５または６員環を指し、これは炭素原子と、窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される１～５個、好ましくは１～４個のヘテロ原子とからなり、部分的または完全に飽和されることができる。本発明の目的のために、複素環は、モノシクリルまたはビシクリル環系であり得る。そのような複素環の例としては、ピロリジン、ピペリジン、テトラヒドロピリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、ジアゼパン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、オクタヒドロ－ピロロピラジンが挙げられるが、これらに限定されない。

「５～１０員ヘテロアリール」は、炭素原子と、窒素、酸素および硫黄からなる群より選択される１～５個、好ましくは１～４個のヘテロ原子とからなる、安定な５～１０員芳香環基、好ましくは５または６員芳香環を指す。本発明の目的のために、ヘテロアリールは、モノシクリルまたはビシクリル環系であり得る。そのようなヘテロアリールの例としては、チオフェン、フラン、ピロール、チアゾール、オキサゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、テトラゾール、テトラゾールオキシド、オキサジアゾロン、ピリジン、ピリミジン、ジヒドロインドロン、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾフラン、インドール、プリン、キノリンが挙げられるが、これらに限定されない。

この技術分野で理解されるように、先に定義された残基に対してある程度の置換が存在し得る。したがって、本発明の任意の基に置換が存在し得る。本文書における本発明の基の置換基への言及は、特定の残基が１つ以上の置換基によって１つ以上の利用可能な位置で置換され得ることを示す。前述の置換基としては、例えば、非限定的な意味で、ハロゲン、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－ＯＲ、－ＳＲ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ_２、－ＮＲ_２および－ＳＯ_２Ｒが挙げられ、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。

本発明の化合物は、塩、溶媒和物または立体異性体、好ましくは薬学的に許容され得る塩、溶媒和物または立体異性体の形態であり得る。

既に示したように、本発明はまた、本明細書に記載の化合物の「塩」を提供する。例示として、前述の塩は、酸付加塩、塩基付加塩または金属塩であり得、当業者に公知の従来の化学プロセスによって、塩基性部分または酸部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、Ｇ．Ｓ．Ｐａｕｌｅｋｕｈｎら、「Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ａｃｔｉｖｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｏｒａｎｇｅ Ｂｏｏｋ Ｄａｔａｂａｓｅ」、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００７，５０：６６６５－７２、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．，１９７７，６６：１－１９、およびＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｗｅｒｍｕｔｈ，Ｅｄｓ．Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨおよびＶＨＣＡ Ｚｕｒｉｃｈ，２００２を参照されたい。そのような塩は、一般に、例えば、水中または有機溶媒中またはこれら２つの混合物中で、前述の化合物の遊離酸または塩基形態を化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製される。エーテル、酢酸エチル、エタノール、アセトン、イソプロパノールまたはアセトニトリルなどの非水性媒体が一般に好ましい。酸付加塩の実例としては、無機酸付加塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩など、有機酸付加塩、例えば、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオル酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、ブチン－１、４－ジオエート、ヘキシン－１，６－ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、乳酸塩、ｙ－ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩などが挙げられる。塩基付加塩の実例としては、無機塩基塩、例えば、アンモニウム塩および有機塩基塩、例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、Ｎ，Ｎ－ジアルキレンエタノールアミン、トリエタノールアミン、グルタミン、アミノ酸塩基塩などが挙げられる。金属塩の実例としては、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウムおよびリチウム塩が挙げられる。

本発明による「溶媒和物」という用語は、非共有結合を介して別の分子（おそらく極性溶媒）が結合している本発明による活性化合物の任意の形態を意味すると理解されるべきである。溶媒和物の例としては、水和物およびアルコラートが挙げられる。溶媒和方法は、最新技術において一般に公知である。

本明細書で使用される場合、「立体異性体」という用語は、空間における原子の配向のみが異なる個々の分子の全ての異性体の一般用語である。したがって、立体異性体化合物は、互いに重ね合わせることができない鏡像であり、エナンチオマーおよびジアステレオマーを含む分子である。

「キラル中心」という用語は、４つの異なる基が結合している炭素原子を指す。

「エナンチオマー」および「鏡像異性体」という用語は、重ね合わせることができない互いの鏡像である化合物の２つの立体異性体のうちの１つを指す。エナンチオマー化合物は光学活性であり、一方のエナンチオマーは偏光面を一方向に回転させ、他方のエナンチオマーは偏光面を反対方向に回転させ、等量で存在する場合、ラセミ化合物を形成する。

「ラセミ体」または「ラセミ化合物」という用語は、等量のエナンチオマーを有し、混合物が光学的に不活性である混合物を指す。

「ジアステレオマー」および「ジアステレオマー形態」という用語は、互いに鏡像ではない２つ以上のキラル中心を有する化合物の立体異性体を指す。

理解されるように、エナンチオマー的に濃縮されたまたはジアステレオマー的に濃縮されたという用語は、一方のエナンチオマーまたはジアステレオマーが他方のエナンチオマーまたはジアステレオマーよりも多量に存在する２つのエナンチオマーの混合物またはジアステレオマーの混合物を記載する。

本発明の化合物はキラル中心を有するので、エナンチオマーまたはジアステレオマー形態などの異なる立体異性形態で存在することができる。したがって、本明細書で言及される任意の所与の化合物は、ラセミ化合物、１つ以上のエナンチオマー形態および１つ以上のジアステレオマー形態のいずれか１つを表すことを意図している。本明細書で言及される化合物のエナンチオマーおよびジアステレオ異性体、ならびにそれらの混合物（ラセミ混合物、エナンチオマー的に濃縮された混合物およびジアステレオマー的に濃縮された混合物を含む）を含む全ての立体異性体は、本発明の範囲内であると考えられる。

「薬学的に許容され得る」という用語は、生理学的に忍容性であり、ヒトに投与された場合にアレルギー反応または同様の有害反応、例えば胃の不快感、めまいなどを通常引き起こさない分子実体および組成物に関する。好ましくは、本明細書で使用される場合、「薬学的に許容され得る」という用語は、政府規制機関によって承認されていること、または動物、より具体的にはヒトでの使用のために米国薬局方もしくは別の一般的に認識されている薬局方に列挙されていることを意味する。

本明細書で使用される「フルオロフォア」とは、光励起時に光を再放出することができる分子または部分を指す。

本明細書で使用される場合、「弾頭」という用語は、標的酵素（カスパーゼ－２）の活性部位と共有結合し、それによって不可逆的阻害効果を達成することができる本発明の化合物上に存在する部分を指す。当業者は、特定の反応性官能基が弾頭として作用し得ることを認識するであろう。「共有結合」は「不可逆的阻害」に等しくないことに留意されたい。例えば、アルデヒドは共有結合的であるが可逆的に結合する。さらにいくつかのＡＯＭＫは、可逆的阻害剤として作用することができる。
１）Ｂｒａｄｙ ＫＤ．Ｂｉｍｏｄａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｓｐａｓｅ－１ ｂｙ ａｒｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ａｎｄ ａｃｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｋｅｔｏｎｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９９８；３７：８５０８－１５。
２）Ｂｒａｄｙ ＫＤ，Ｇｉｅｇｅｌ ＤＡ，Ｇｒｉｎｎｅｌｌ Ｃ，Ｌｕｎｎｅｙ Ｅ，Ｔａｌａｎｉａｎ ＲＶ，Ｗｏｎｇ Ｗら、Ａ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｃａｓｐａｓｅ－１ ａｎｄ ｆｏｒ ｂｉｍｏｄａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｓｐａｓｅ－１ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ａｓｐａｒｔｉｃ ｋｅｔｏｎｅｓ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．１９９９；７：６２１－３１。

Ｐｏｒｅｂａら、Ｃａｓｐａｓｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ＣＤＤ ２０１９。

本発明の化合物
第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）：
Ｐ_５－Ｐ_４－Ｐ_３－ＡＡ－Ｐ_１－Ｒ_１
（Ｉ）
の化合物に関する。

要素Ｐ５、Ｐ４、Ｐ３、ＡＡ、Ｐ１およびＲ１の各々は、本発明を通して詳細に説明される。本発明は、上記式Ｉ内のこれらの６つの要素（サブユニット）のいずれかの任意の組み合わせを包含し、これらの要素の各々は本明細書全体を通して定義されることに留意されたい。

各サブユニットＰ５～Ｐ１は、１つのアミノ酸サブユニットのａ－アミノ基と、隣接するアミノ酸のａ－カルボキシル基との間の共有ペプチド結合を介して、その隣接するサブユニットに連結されていることに留意されたい。基質の場合、Ｒ１は、Ｒ１サブユニットのアミノ基とＰ１アミノ酸のａ－カルボキシル基との間の共有ペプチド結合を介してＰ１に連結されている。阻害剤の場合、Ｐ１は、Ｐ１アミノ酸のａ－カルボキシル基とＲ１部分との間の共有結合を介してＲ１に連結され、Ｒ１は、本明細書全体を通して示されるように、アシルオキシメチルケトン（ＡＯＭＫ）または単純な水素原子（アルデヒド中）などの多数の部分であり得る。

１．ＡＡ
本発明の式のいずれかで、特に式Ｉで表されるＡＡは、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから選択される少なくとも１つの基で場合によりＮ－置換されている塩基性アミノ酸であり、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。

好ましい実施形態では、ＡＡ上の任意選択の置換基は、ハロゲン、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリールおよび（Ｃ６－１０）アリール（Ｃ１－６）アルキル、例えば、ハロゲン、メチル、シクロヘキシル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＰｈおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＢｎまたは－Ｃ（Ｏ）ＯＢｚｌなどから独立して選択される。

本明細書で使用される「塩基性アミノ酸」という用語は、生理学的条件下で、プロトンを受け取ることができ、正に帯電することができる側鎖を有する天然または合成アミノ酸を意味する。

本発明による塩基性アミノ酸の例としては、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アルギニンホモログ、リジン（Ｌｙｓ）、アセチルリジン（Ｌｙｓ（Ａｃ））、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、４－アミノシクロヘキシル－アラニン（Ａｃａ）、４－アミノ－フェニルアラニン（Ａｐａ）、アミノメチルシクロヘキシル－アラニン（Ａｍａ）、４－アミノメチル－フェニルアラニン（Ａｍｐ）、４－グアニジン－フェニルアラニン（Ｇｐａ）、４－グアニジン－シクロヘキシルアラニン（Ｇｃａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、４－ピペリジニル－アラニン（Ｐｉａ）、３－（２－ピリジル）アラニン（２－Ｐａｌ）、３－（３－Ｐａｌ）アラニン（３－Ｐａｌ）、３－（４－ピリジル）アラニン（４－Ｐａｌ）、またはそのホモログおよび／もしくはベータ誘導体であって、酸性基が存在する場合、それは脱プロトン化されて負に帯電した実体として存在することができる。

上記にもかかわらず、ＡＡはまた、以下からなる式のいずれかから選択されるプロリン誘導体の形態のアミノ酸によって表され得る。

本発明の特定の態様では、酸性または塩基性残基が化合物中に存在し得る。当業者は、塩基性残基が非プロトン化形態または正に帯電したプロトン化形態のいずれかで存在してもよく、酸性残基が脱プロトン化された形態または脱プロトン化されていない形態のいずれかで存在してもよく、脱プロトン化形態が負電荷を有することを理解するであろう。

本明細書で使用される「ホモログ」という用語は、好ましくは、メチレン基（－ＣＨ_２－）が側鎖に付加または欠失されているアミノ酸を指す。

β誘導体は、アミノ基が、カルボキシル基に隣接する炭素の代わりに、カルボキシル基に対する炭素βに結合しているアミノ酸を指す。

好ましい実施形態では、ＡＡは、式（ＩＩ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体：

であり、
式中、
ｎは、０、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｍは、０、１、２および３から選択され、
ｐは、０および１から選択され、
Ｘは、存在しないか、またはＣ_３－７シクロアルキルおよびＣ_６－１０アリールから選択され、
Ｙは、－ＮＲ_ａＲ_ｂ、

から選択され、ここで、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。

本発明の好ましい実施形態によれば、ｐは０であり、ＡＡは、式：

の基であり、
式中、ｎ、ｍ、ＸおよびＹは、上記に定義した通りである。

本発明の一実施形態によれば、ｎは、１、２および３から選択される。

好ましい実施形態では、ｍ＋ｎは、１、２、３、４、５または６であり、より好ましくは、１、２、３、４および５である。

好ましくは、Ｘは存在しないか、またはシクロヘキシルおよびフェニルから選択される。

別の実施形態によれば、ＡＡは、式

の基であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｐは、０および１から選択され、
Ｙは、－ＮＲ_ａＲ_ｂ、

から選択され、ここで、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。

本発明の一実施形態によれば、ｎは、１、２、３、４および５から選択される。

好ましい実施形態では、ｐは０である。

本発明の一実施形態によれば、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＲから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリールおよび（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキルから独立して選択される。特定の実施形態では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、メチル、シクロヘキシル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＰｈまたは－Ｃ（Ｏ）ＯＢｎから独立して選択される。更なる実施形態では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈである。

一実施形態では、ＡＡは、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、４－アミノシクロヘキシル－アラニン（Ａｃａ）、４－アミノ－フェニルアラニン（Ａｐａ）、アミノメチルシクロヘキシル－アラニン（Ａｍａ）、４－アミノメチル－フェニルアラニン（Ａｍｐ）、４－グアニジン－フェニルアラニン（Ｇｐａ）、４－グアニジン－シクロヘキシルアラニン（Ｇｃａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、４－ピペリジニル－アラニン（Ｐｉａ）、３－（２－ピリジル）アラニン（２－Ｐａｌ）、３－（３－ピリジル）アラニン（３－Ｐａｌ）、３－（４－ピリジル）アラニン（４－Ｐａｌ）、またはそのホモログおよび／もしくはベータ誘導体から選択される場合により置換されているアミノ酸である。

以下のセクション「Ｐ５」で説明するように、ＡＡはＳｅｒであってもよいことにさらに留意されたい。

好ましい実施形態では、ＡＡは、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、４－アミノシクロヘキシル－アラニン（Ａｃａ）、４－アミノ－フェニルアラニン（Ａｐａ）、アミノメチルシクロヘキシル－アラニン（Ａｍａ）、４－アミノメチル－フェニルアラニン（Ａｍｐ）、４－グアニジン－フェニルアラニン（Ｇｐａ）、４－グアニジン－シクロヘキシルアラニン（Ｇｃａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、４－ピペリジニル－アラニン（Ｐｉａ）、３－（２－ピリジル）アラニン（２－Ｐａｌ）、３－（３－ピリジル）アラニン（３－Ｐａｌ）、３－（４－ピリジル）アラニン（４－Ｐａｌ）、またはそれらのホモログおよび／もしくはベータ誘導体から選択されるアミノ酸であり、これは、ハロゲン、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－ＯＲ、－ＳＲ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ_２、－ＮＲ_２および－ＳＯ_２Ｒから選択される少なくとも１つの基で場合により置換されていてもよく、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。好ましくは、ハロゲン、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＲであり、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキルから独立して選択される。より好ましくは、ハロゲン、メチル、シクロヘキシル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＰｈおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＢｎである。

ＡＡは、上記に定義したような１つ以上の基、好ましくは１つ、２つまたは３つの基、より好ましくは１つまたは２つの基、さらにより好ましくは１つの基で置換することができる。

好ましくは、ＡＡが置換される場合、それはＮ－置換される。すなわち、アミノ酸の側鎖に存在する窒素原子の１つ以上で置換される。

一実施形態では、ＡＡは、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから選択される少なくとも１つの基で場合により置換されており、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。好ましくは、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＲであり、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキルから独立して選択される。より好ましくは、ハロゲン、メチル、シクロヘキシル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＰｈおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＢｎである。

２．Ｐ５
Ｐ５は、好ましくは、以下の式（ＩＩＩ）の式Ｉ内の化合物：

であり、
式中、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ’、ＮＨＲ’、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、－ＯＲ’、－ＳＲ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’および－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’_２から独立して選択され、ここで、各Ｒ’は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキルから独立して選択され、Ａ、Ｂ、ＣまたはＤのうちの１つは、式（Ｉ）に示されるように、Ｐ５を最終分子の残りの部分（位置Ｐ４）に連結するペプチド結合の形態のカルボキサミド基を表し、
式中、Ｈ、Ｉ、ＪおよびＫは、独立して、炭素または窒素、好ましくは炭素原子である。

（本明細書では点線とも呼ばれる）は、存在してもしなくてもよい結合を表す。存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成する。既に存在する単結合と組み合わせた二重結合が形成される場合、ＡＡは、上記のセクション「ＡＡ」に記載されている他の任意の更なる選択肢の中でも、Ｓｅｒ（セリン）であり得ることに留意されたい。
Ｐ５の更なる例は、以下からなる群より選択される以下のＩｄｃ誘導体のいずれかに由来することに留意されたい：

そのような誘導体は、Ｐ５の各誘導体に存在するカルボン酸からＰ４のａ－アミン基へのペプチド結合の形成によってＰ４に結合する。

３．Ｐ４
Ｐ４は、以下の式（ＩＶ）：

の式Ｉ内の化合物であり、
式中、ａは、０、１、２、３、４、５および６から選択され、
ＹおよびＸは、Ｈ、フッ素、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、－ＯＲ’、－ＳＲ’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’および－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’２から独立して選択され、ここで、各Ｒ’は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキルから独立して選択され、
Ｒ２およびＲ３は、Ｈ、Ｃ_１－３アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキルまたは－ＣＯ（ＯＲ９）から独立して選択され、
ＷはＳであるか、または存在せず、Ｗが存在しない場合、－ＣＨ_２（Ｒ２Ｒ３）基は－ＣＨ_２（ＸＹ）基に直接連結され、
Ｚは、ＮＨまたはＣＨ_２であり、
ｂは、０または１であり、
Ｃは、０または１であり、
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルまたはＣ_３－７シクロアルキルである。Ｒ９はまた、Ｒ_２およびＲ３が脱プロトン化形態ＣＯ（Ｏ－）であるように存在しなくてもよい。

４．Ｐ１
Ｐ１は、式（Ｖ）：

の式Ｉ内の化合物であり、
式中、ａは、０、１、２、３、４、５および６から選択され、
ＸおよびＹは、Ｈ、フッ素Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、－ＯＲ’、－ＳＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’および－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’２から独立して選択され、ここで、各Ｒ’は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキルから独立して選択され、
ｂは、０または１であり、
Ｒ_２は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキルから独立して選択される。Ｒ２はまた、－ＣＯ（ＯＲ２）が脱プロトン化形態ＣＯ（Ｏ－）であるように存在しなくてもよい。

他方では、また、代替的な実施形態では、本発明者らは、Ａｓｐ（アスパラギン酸）マスク化阻害剤の合成のスキームを本明細書でさらに示す。

したがって、Ｐ１は、以下のような代替式（Ｖ）の式Ｉ内の化合物：

であってもよく、
ＸおよびＹは、Ｈ、フッ素Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、－ＯＲ’、－ＳＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’および－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’２から独立して選択され、ここで、各Ｒ’は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキルから独立して選択され、
ｂは、０または１であり、
Ｒ＊は、水素、メチル、エチルから選択される化学基であり、これは、加水分解と呼ばれる水との化学反応でエステルを酸とアルコールとに分解する加水分解酵素であるエステラーゼの標的となる。この特定の代替形では、この構造がＲ＊で置き換えられているので、式（Ｉ）に記載されているようなＲ１サブユニットは存在しないことに留意されたい。

５．Ｐ３
Ｐ３は、グルタミン酸シクロヘキシルエステル、Ｇｌｕ（特にＬ－Ｇｌｕ）、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）（トレオニンベンジルエーテル）またはＧｌｕアナログ、例えばＬ－Ｇｌｕ（ｏ－Ｍｅ）、Ｌ－Ｇｌｕ（ｏ－ＣＨＸ）もしくはＬ－Ｇｌｕ（ｏ－Ｂｚｌ）または式（ＶＩ）：

の化合物から選択される誘導体から選択され、
式中、Ｒ_４～Ｒ_６は、Ｈ、フッ素、ヒドロキシル（－ＯＨ）、－ＳＨまたはＣ_１－６アルキル、好ましくはメチルから独立して選択することができ、Ｒ_７およびＲ_８は、Ｈ、フッ素およびメチル基からなる群より独立して選択される。

特に、Ｐ３は、グルタミン酸シクロヘキシルエステル（Ｇｌｕ（Ｃｈｘ））、Ｌ－グルタミン酸メチルエステル（Ｇｌｕ（ｍｅ））、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）（トレオニンベンジルエーテル）、またはＡｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、Ｇｌｎ（グルタミン）、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）およびＶａｌ（バリン）からなる群より選択される任意の天然アミノ酸から選択される。

６．Ｒ１
Ｒ１は、好ましくは化学反応性基である。Ｇｅｈｒｉｎｇｅｒら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１９，６２，（１２）５６７３－５７２４）に記載されているように、化学反応性基を薬物分子に組み込むことで、特に基が薬物と酵素との間に共有結合を形成し、それによって阻害プロファイルを増強することができる酵素阻害の分野において、特定の利点を付与することができる。Ｒ１は、フルオロフォア（基質との関連で使用される）、または弾頭（阻害剤との関連で使用される）であり得る。

以下に例示される基質（フルオロフォアを含む基質など）の場合、Ｒ１は、Ｒ１サブユニットのアミノ基（またはＷとして示される任意の他の基）とＰ１アミノ酸のａ－カルボキシル基との間の共有ペプチド結合を介してＰ１サブユニットに連結されることに留意されたい。好ましくは、Ｒ１は、式：

のＡＣＣのようなフルオロフォアなどの部分である。

より具体的には、Ｒ_１は、式：

の基から選択されるフルオロフォア（基質との関連で使用される）などの部分であり得、
式中、
Ｗは、－ＮＨ－および－Ｏ－から選択され、
Ｒ１０～Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＮＨＲ１４、およびＣＨ_２ＯＲ１４から独立して選択され、
Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキルおよびＣ３－７シクロアルキルから選択される。

フルオロフォアとしてのＲ１部分の例は、以下のリストのいずれかから選択することができる：

フルオロフォアとして潜在的に有用な部分の他の例は、以下からなる群より選択することができる：

本発明の文脈において、フルオロフォア（または蛍光色素、発色団と同様）は、光励起時に光を再放出することができる蛍光化学化合物である。フルオロフォアまたは基質は、典型的には、いくつかの結合した芳香族基、またはいくつかのπ結合を有する平面または環状分子を含む。蛍光体は、様々な分析方法、すなわち蛍光イメージングおよび分光法において組織、細胞または材料を染色するために特に使用され、ここで、上記式のＷは、ＡＣＣなどの－ＮＨ－を表すことになる。Ｒ_１中の更なるフルオロフォアは、Ｉｎｄｏ－１、Ｃａ飽和Ｉｎｄｏ－１ Ｃａ２＋カスケードブルーＢＳＡ ｐＨ７．０ カスケードブルー ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒブルー Ａｌｅｘａ ４０５ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒブルー ｐＨ５．０ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒブルー ＤｙＬｉｇｈｔ ４０５ ＤｙＬｉｇｈｔ ３５０ ＢＦＰ（青色蛍光タンパク質）Ａｌｅｘａ ３５０ ７－アミノ－４－メチルクマリン ｐＨ７．０、アミノクマリン ＡＭＣＡコンジュゲートクマリン ７－ヒドロキシ－４－メチルクマリン ７－ヒドロキシ－４メチルクマリン ｐＨ９．０ ６，８－ジフルオロ－７－ヒドロキシ－４－メチルクマリン ｐＨ９．０ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８－ＤＮＡ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ抗体コンジュゲート ｐＨ８．０ ＰＯ－ＰＲＯ－１ＰＯ－ＰＲＯ－１－ＤＮＡ ＰＯＰＯ－１ ４３３ｎｍ ＰＯＰＯ－１－ＤＮＡ ＤＡＰＩ－ＤＮＡ ＤＡＰＩ Ｍａｒｉｎａ Ｂｌｕｅ ＳＹＴＯＸ Ｂｌｕｅ－ＤＮＡ ＣＦＰ（シアン蛍光タンパク質）ｅＣＦＰ（増強シアン蛍光タンパク質）１－アニリノナフタレン－８－スルホン酸（１，８－ＡＮＳ）Ｉｎｄｏ－１、Ｃａ不含 １，８－ＡＮＳ（１－アニリノナフタレン－８－スルホン酸）ＢＯ－ＰＲＯ－１－ＤＮＡ ＢＯＰＲＯ－１ ＢＯＢＯ－１－ＤＮＡ ＳＹＴＯ ４５－ＤＮＡ ｅｖｏｇｌｏｗ－Ｐｐ１ ｅｖｏｇｌｏｗ－Ｂｓ１ ｅｖｏｇｌｏｗ－Ｂｓ２ オーラミンＯ ＤｉＯ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒグリーン ｐＨ５．０ Ｃｙ２ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒ Ｇｒｅｅｎ Ｆｕｒａ－２、高Ｃａ Ｆｕｒａ－２ Ｃａ２ ＳＹＴＯ １３－ＤＮＡ ＹＯ－ＰＲＯ－１－ＤＮＡ ＹＯＹＯ－１－ＤＮＡ ｅＧＦＰ（増強緑色蛍光タンパク質）ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒグリーン ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ）ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ、ＭｅＯＨ サファイア ＢＯＤＩＰＹ ＦＬコンジュゲート ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒグリーン ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒグリーンＦＭフルオレセイン ０．１Ｍ ＮａＯＨ カルセイン ｐＨ９．０ フルオレセイン ｐＨ９．０ カルセイン Ｆｕｒａ－２、Ｃａなし Ｆｌｕｏ－４ ＦＤＡ ＤＴＡＦ フルオレセイン
フルオレセイン抗体コンジュゲート ｐＨ８．０ ＣＦＤＡ ＦＩＴＣ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ヒドラジド－水 ＤｙＬｉｇｈｔ ４８８ ５－ＦＡＭ ｐＨ９．０ ＦＩＴＣ抗体コンジュゲート ｐＨ８．０ Ａｌｅｘａ ４８８ ローダミン１１０ ローダミン１１０ ｐＨ７．０ アクリジンオレンジ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８抗体コンジュゲート ｐＨ８．０ ＢＣＥＣＦ ｐＨ ５．５ ＰｉｃｏＧｒｅｅｎｄｓＤＮＡ定量試薬 ＳＹＢＲグリーンＩ ローダミングリーン ｐＨ７．０ ＣｙＱＵＡＮＴ ＧＲ－ＤＮＡ ＮｅｕｒｏＴｒａｃｅ ５００／５２５、緑色蛍光ニッスル染色ＲＮＡ ＤａｎｓｙｌＣａｄａｖｅｒｉｎｅ Ｒｈｏｄｏｌグリーン抗体コンジュゲート ｐＨ８．０ Ｆｌｕｏｒｏ－Ｅｍｅｒａｌ ニッスル フルオレセインデキストラン ｐＨ８．０ ローダミングリーン ５－（および－６）－カルボキシ－２’，７’ジクロロフルオレセイン ｐＨ９．０ ＤａｎｓｙｌＣａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＭｅＯＨ ｅＹＦＰ（増強緑色蛍光タンパク質）オレゴングリーン４８８ オレゴングリーン４８８抗体コンジュゲート ｐＨ８．０ Ｆｌｕｏ－３ ＢＣＥＣＦ ｐＨ９．０ ＳＢＦＩ－Ｎａ＋
Ｉｎｄｏ－１、Ｃａ飽和 Ｉｎｄｏ－１ Ｃａ２＋カスケードブルーＢＳＡ ｐＨ７．０ カスケードブルー ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒブルー Ａｌｅｘａ ４０５ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒブルー ｐＨ５．０ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒブルー ＤｙＬｉｇｈｔ ４０５ ＤｙＬｉｇｈｔ ３５０ ＢＦＰ（青色蛍光タンパク質）Ａｌｅｘａ ３５０ ７－アミノ－４－メチルクマリン ｐＨ７．０、アミノクマリン ＡＭＣＡコンジュゲートクマリン ７－ヒドロキシ－４－メチルクマリン ７－ヒドロキシ－４メチルクマリン ｐＨ９．０ ６，８－ジフルオロ－７－ヒドロキシ－４－メチルクマリン ｐＨ９．０ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８－ＤＮＡ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ抗体コンジュゲート ｐＨ８．０ ＰＯ－ＰＲＯ－１ＰＯ－ＰＲＯ－１－ＤＮＡ ＰＯＰＯ－１ ４３３ｎｍ ＰＯＰＯ－１－ＤＮＡ ＤＡＰＩ－ＤＮＡ ＤＡＰＩ Ｍａｒｉｎａ Ｂｌｕｅ ＳＹＴＯＸ Ｂｌｕｅ－ＤＮＡ ＣＦＰ（シアン蛍光タンパク質）ｅＣＦＰ（増強シアン蛍光タンパク質）１－アニリノナフタレン－８－スルホン酸（１，８－ＡＮＳ）Ｉｎｄｏ－１、Ｃａ不含 １，８－ＡＮＳ（１－アニリノナフタレン－８－スルホン酸）ＢＯ－ＰＲＯ－１－ＤＮＡ ＢＯＰＲＯ－１ ＢＯＢＯ－１－ＤＮＡ ＳＹＴＯ ４５－ＤＮＡ ｅｖｏｇｌｏｗ－Ｐｐ１ ｅｖｏｇｌｏｗ－Ｂｓ１ ｅｖｏｇｌｏｗ－Ｂｓ２ オーラミンＯ ＤｉＯ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒグリーン ｐＨ５．０ Ｃｙ２ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒグリーンＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒイエロー ｐＨ９．０
Ｉｎｄｏ－１、Ｃａ飽和 Ｉｎｄｏ－１ Ｃａ２＋カスケードブルーＢＳＡ ｐＨ７．０ カスケードブルー ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒブルー Ａｌｅｘａ ４０５ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒブルー ｐＨ５．０ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒブルー ＤｙＬｉｇｈｔ ４０５ ＤｙＬｉｇｈｔ ３５０ ＢＦＰ（青色蛍光タンパク質）Ａｌｅｘａ ３５０ ７－アミノ－４－メチルクマリン ｐＨ７．０、アミノクマリン ＡＭＣＡコンジュゲートクマリン ７－ヒドロキシ－４－メチルクマリン ７－ヒドロキシ－４メチルクマリン ｐＨ９．０ ６，８－ジフルオロ－７－ヒドロキシ－４－メチルクマリン ｐＨ９．０ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８－ＤＮＡ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ抗体コンジュゲート ｐＨ８．０ ＰＯ－ＰＲＯ－１ＰＯ－ＰＲＯ－１－ＤＮＡ ＰＯＰＯ－１ ４３３ｎｍ ＰＯＰＯ－１－ＤＮＡ ＤＡＰＩ－ＤＮＡ ＤＡＰＩ Ｍａｒｉｎａ Ｂｌｕｅ ＳＹＴＯＸ Ｂｌｕｅ－ＤＮＡ ＣＦＰ（シアン蛍光タンパク質）ｅＣＦＰ（増強シアン蛍光タンパク質）１－アニリノナフタレン－８－スルホン酸（１，８－ＡＮＳ）Ｉｎｄｏ－１、Ｃａ不含 １，８－ＡＮＳ（１－アニリノナフタレン－８－スルホン酸）ＢＯ－ＰＲＯ－１－ＤＮＡ ＢＯＰＲＯ－１ ＢＯＢＯ－１－ＤＮＡ ＳＹＴＯ ４５－ＤＮＡ ｅｖｏｇｌｏｗ－Ｐｐ１ ｅｖｏｇｌｏｗ－Ｂｓ１ ｅｖｏｇｌｏｗ－Ｂｓ２ オーラミンＯ ＤｉＯ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒグリーン ｐＨ５．０ Ｃｙ２ ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒグリーンを含む一般的なフルオロフォアから選択することができる。

一方、阻害剤の場合、Ｐ１は、Ｐ１アミノ酸のａ－カルボキシル基とＲ１部分との間の共有結合を介してＲ１に連結され、Ｒ１は、アシルオキシメチルケトン（ＡＯＭＫ）または単純な水素原子（アルデヒド中）などの多数の部分であり得る。

したがって、別の実施形態では、Ｒ１は弾頭であり得、特に、Ｒ１は、

からなる群より選択される（阻害剤と関連して使用される）弾頭またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり得、
式中、
ｑは、０、１、２、３、４または５であり、
各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２およびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択され、
Ｚ_２はハロゲンであり、
Ｚ_３は、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_６－１０アリールおよび（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキルから選択される。

本発明において有用な弾頭の具体例は、以下のいずれかから選択することができる（以下の化合物の全てがＰ１サブユニットのａ－ＣＯＯＨ基に直接結合している）：

好ましくは、Ｒ１は、式：

の弾頭であり、
式中、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択される。

一実施形態では、Ｚ_１は、ハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、好ましくはＦ、ＣｌおよびＭｅ（メチル）から独立して選択される。

更なる実施形態では、Ｒ_１は、式

の基から選択され、
式中、各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから、好ましくはハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、より好ましくは、Ｆ、ＣｌおよびＭｅ（メチル）から独立して選択される。

好ましい実施形態では、Ｒ_１は式

を有する。

以下では、式（Ｉ）：
Ｐ_５－Ｐ_４－Ｐ_３－ＡＡ－Ｐ_１－Ｒ_１
の化合物
またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体
を包含する本発明の特定の実施形態をここで参照する。

好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、ＡＡが上記に定義した通りであることを特徴とし、好ましくはＡＡは式（ＩＩ）：

の化合物を指し、
式中、
ｎは、０、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｍは、０、１、２および３から選択され、
ｐは、０および１から選択され、
Ｘは、存在しないか、またはＣ_３－７シクロアルキルおよびＣ_６－１０アリールから選択され、
Ｙは、－ＮＲ_ａＲ_ｂ、

から選択され、ここで、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。

本発明の好ましい実施形態によれば、ｐは０であり、ＡＡは、式：

の基であり、
式中、ｎ、ｍ、ＸおよびＹは、上記に定義した通りである。

本発明の一実施形態によれば、ｎは、１、２および３から選択される。

好ましい実施形態では、ｍ＋ｎは、１、２、３、４、５または６であり、より好ましくは、１、２、３、４および５である。

好ましくは、Ｘは存在しないか、またはシクロヘキシルおよびフェニルから選択される。

別の実施形態によれば、ＡＡは、式

の基であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｐは、０および１から選択され、
Ｙは、－ＮＲ_ａＲ_ｂ、

から選択され、ここで、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。

本発明の一実施形態によれば、ｎは、１、２、３、４および５から選択される。

好ましい実施形態では、ｐは０である。

本発明の一実施形態によれば、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＲから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリールおよび（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキルから独立して選択される。特定の実施形態では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、メチル、シクロヘキシル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＰｈまたは－Ｃ（Ｏ）ＯＢｎから独立して選択される。更なる実施形態では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈである。

一実施形態では、ＡＡは、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アルギニンホモログ、リジン（Ｌｙｓ）、アセチルリジン、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、４－アミノシクロヘキシル－アラニン（Ａｃａ）、４－アミノ－フェニルアラニン（Ａｐａ）、アミノメチルシクロヘキシル－アラニン（Ａｍａ）、４－アミノメチル－フェニルアラニン（Ａｍｐ）、４－グアニジン－フェニルアラニン（Ｇｐａ）、４－グアニジン－シクロヘキシルアラニン（Ｇｃａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、４－ピペリジニル－アラニン（Ｐｉａ）、３－（２－ピリジル）アラニン（２－Ｐａｌ）、３－（３－ピリジル）アラニン（３－Ｐａｌ）、３－（４－ピリジル）アラニン（４－Ｐａｌ）、またはそのホモログおよび／もしくはベータ誘導体から選択される場合により置換されているアミノ酸である。

より好ましい実施形態では、ＡＡは、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、４－アミノシクロヘキシル－アラニン（Ａｃａ）、４－アミノ－フェニルアラニン（Ａｐａ）、アミノメチルシクロヘキシル－アラニン（Ａｍａ）、４－アミノメチル－フェニルアラニン（Ａｍｐ）、４－グアニジン－フェニルアラニン（Ｇｐａ）、４－グアニジン－シクロヘキシルアラニン（Ｇｃａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、４－ピペリジニル－アラニン（Ｐｉａ）、３－（２－ピリジル）アラニン（２－Ｐａｌ）、３－（３－ピリジル）アラニン（３－Ｐａｌ）、３－（４－ピリジル）アラニン（４－Ｐａｌ）、またはそれらのホモログおよび／もしくはベータ誘導体から選択されるアミノ酸であり、これは、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ６－１０アリール、（Ｃ６－１０）アリール（Ｃ１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＣＮ、－ＮＯ２、－ＯＲ、－ＳＲ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ２、－ＮＲ２および－ＳＯ２Ｒから選択される少なくとも１つの基で場合により置換されていてもよく、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ３－７シクロアルキル、Ｃ６－１０アリール、（Ｃ６－１０）アリール（Ｃ１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。好ましくは、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ６－１０アリール、（Ｃ６－１０）アリール（Ｃ１－６）アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＲであり、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ６－１０アリール、（Ｃ６－１０）アリール（Ｃ１－６）アルキルから独立して選択される。より好ましくは、ハロゲン、メチル、シクロヘキシル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＰｈおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＢｎである。

より好ましくは、ＡＡは、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、またはジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）から選択されるアミノ酸であり、
Ｐ５は、式（ＩＩＩ）：

の化合物であり、
式中、ＡおよびＢは水素原子であり、Ｈ、Ｉ、ＪおよびＫは炭素原子であり、

（本明細書では点線とも呼ばれる）は、存在してもしなくてもよい結合を表す。存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成する。
Ｐ４は、イソロイシン、ロイシン、ホモロイシン、Ｇｌｕ、ｈＧｌｕ（ホモグルタミン酸）およびＡｓｐからなる群より選択され、いくつかの場合、アミノ酸は、側鎖に酸性基を有し、この場合、これらのアミノ酸残基のいずれかは、脱プロトン化形態またはプロトン化形態であってもよく、
Ｐ１は、Ａｓｐまたはアスパラギン酸であり、このアミノ酸残基は脱プロトン化またはプロトン化形態であってもよく、
Ｐ３は、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）（トレオニンベンジルエーテル）または式（ＶＩ）の化合物：

から選択されるその誘導体から選択され、
式中、Ｒ_４～Ｒ_６は、Ｈ、Ｆまたはメチルから独立して選択することができ、Ｒ_７およびＲ_８は、Ｈ、Ｆおよびメチル基からなる群より独立して選択される。代替的に、Ｐ３は、グルタミン酸シクロヘキシルエステル（Ｇｌｕ（Ｃｈｘ））、Ｌ－グルタミン酸メチルエステル（Ｇｌｕ（ｍｅ））、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、またはＡｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、Ｇｌｎ（グルタミン）、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）およびＶａｌ（バリン）からなる群より選択される任意の天然アミノ酸から選択することもでき、
Ｒ１は、以下：

からなる群より選択される弾頭（阻害剤用）またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり得、
式中、
ｑは、０、１、２、３、４または５であり、
各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２およびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択され、
Ｚ_２はハロゲンであり、
Ｚ_３は、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_６－１０アリールおよび（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキルから選択される。
好ましくは、Ｒ１は、式：

の弾頭であり、
式中、
ｑは０、１、２、３または４であり、
各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択される。

一実施形態では、Ｚ_１は、ハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、好ましくはＦ、ＣｌおよびＭｅから独立して選択される。

更なる実施形態では、Ｒ_１は、式

の基から選択され、
式中、各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから、好ましくはハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、より好ましくは、Ｆ、ＣｌおよびＭｅから独立して選択される。

好ましい実施形態では、Ｒ_１は式

（Ｍｅはメチル基である）を有する。

より具体的には、Ｒ_１は、式：

の基から選択されるフルオロフォア（基質との関連で使用される）などの部分であり得、
式中、
Ｗは、－ＮＨ－および－Ｏ－から選択され、
Ｒ１０～Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＮＨＲ１４、およびＣＨ_２ＯＲ１４から独立して選択され、
Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキルから選択される。

別の好ましい実施形態では、Ｒ１はＡＣＣである。

好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式ＶＩＩ：

の化合物
またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり、
式中、
－ｎは、１、２、３または４であり、
－Ａは、－ＮＲ_ａＲ_ｂ、

から選択され、ここで、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択され、好ましくは、Ａは、－ＣＯＯＨ基または－ＮＨ２基からなる群より選択され、
－Ｐ１、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５およびＲ１は、上記の実施形態のいずれかで定義される通りであり、好ましくはこれらの化合物の各々、以下のように特徴付けられる：
Ｐ５は、式（ＩＩＩ）：

の化合物であり、
式中、ＡおよびＢは、水素原子であり、Ｈ、Ｉ、ＪおよびＫは、独立して炭素原子または窒素原子であり、

（本明細書では点線とも呼ばれる）は、存在してもしなくてもよい結合を表し、存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成し、
Ｐ４は、イソロイシン、ロイシン、ホモロイシン、ｈＧｌｕ（ホモグルタミン酸）、Ｇｌｕ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、チロシン（Ｔｙｒ）、バリン（Ｖａｌ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、ｔｅｒｔ－ロイシン（Ｔｌｅ）、およびアスパラギン酸またはＡｓｐからなる群より選択され、いくつかの場合、アミノ酸は側鎖に酸性基を有し、この場合、これらのアミノ酸残基のいずれかは脱プロトン化形態またはプロトン化形態であってもよく、
Ｐ１は、Ａｓｐまたはアスパラギン酸であり、このアミノ酸残基は脱プロトン化形態またはプロトン化形態であってもよく、
Ｐ３は、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）（トレオニンベンジルエーテル）または式（ＶＩ）：

の化合物から選択されるその誘導体から選択され、
式中、Ｒ_４～Ｒ_６は、Ｈ、Ｆまたはメチルから独立して選択することができ、Ｒ_７およびＲ_８は、Ｈ、Ｆおよびメチル基からなる群より独立して選択される。代替的に、Ｐ３は、グルタミン酸シクロヘキシルエステル（Ｇｌｕ（Ｃｈｘ））、Ｌ－グルタミン酸メチルエステル（Ｇｌｕ（ｍｅ））、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、またはＡｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、Ｇｌｎ（グルタミン）、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）およびＶａｌ（バリン）からなる群より選択される任意の天然アミノ酸から選択され、
Ｒ１は、以下：

からなる群より選択される弾頭（阻害剤用）またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり得、
式中、
ｑは、０、１、２、３、４または５であり、
各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２およびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択され、
Ｚ_２はハロゲンであり、
Ｚ_３は、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_６－１０アリールおよび（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキルから選択される。
好ましくは、Ｒ１は、式：

の弾頭であり、
式中、
ｑは０、１、２、３または４であり、
各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択される。

一実施形態では、Ｚ_１は、ハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、好ましくはＦ、ＣｌおよびＭｅから独立して選択される。

更なる実施形態では、Ｒ_１は、式

の基から選択され、
式中、各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから、好ましくはハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、より好ましくは、Ｆ、ＣｌおよびＭｅから独立して選択される。

好ましい実施形態では、Ｒ_１は式

を有するか、またはそれのみからなる。

より具体的には、Ｒ_１は、式：

の基から選択されるフルオロフォア（基質との関連で使用される）などの部分であり得、
式中、
Ｗは、－ＮＨ－および－Ｏ－から選択され、
Ｒ１０～Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＮＨＲ１４、およびＣＨ_２ＯＲ１４から独立して選択され、
Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ_１－６アルキルおよびＣ_３－７シクロアルキルから選択される。

別の好ましい実施形態では、Ｒ１はＡＣＣである。

好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式ＶＩＩ：

の化合物
またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり、
式中、
－ｎは、２、３または４であり、
－Ａは、上記に定義した－ＮＲ_ａＲ_ｂ基、好ましくはアミン基であり、
Ｐ５は、式（ＩＩＩ）：

の化合物であり、
式中、ＡおよびＢは水素原子であり、Ｈ、Ｉ、ＪおよびＫは独立して炭素原子であり、

は、存在してもしなくてもよい結合を表し、存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成し、
Ｐ４は、イソロイシン、ロイシン、ホモロイシン、ｈＧｌｕ（ホモグルタミン酸）、ＧｌｕおよびＡｓｐまたはアスパラギン酸からなる群より選択され、いくつかの場合、アミノ酸は側鎖に酸性基を有し、この場合、これらのアミノ酸残基のいずれかは脱プロトン化形態またはプロトン化形態であってもよく、
Ｐ１は、Ａｓｐまたはアスパラギン酸であり、このアミノ酸残基はプロトン化形態または脱プロトン化形態であることができ、
Ｐ３は、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）（トレオニンベンジルエーテル）または式（ＶＩ）：

の化合物から選択されるその誘導体から選択され、
式中、Ｒ_４～Ｒ_６は、Ｈ、Ｆまたはメチルから独立して選択することができ、Ｒ_７およびＲ_８は、Ｈ、Ｆおよびメチル基からなる群より独立して選択される。代替的に、Ｐ３は、グルタミン酸シクロヘキシルエステル（Ｇｌｕ（Ｃｈｘ））、Ｌ－グルタミン酸メチルエステル（Ｇｌｕ（ｍｅ））、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、またはＡｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、Ｇｌｎ（グルタミン）、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）およびＶａｌ（バリン）からなる群より選択される任意の天然アミノ酸から選択され、
Ｒ１は、式

の基から選択され、
式中、各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから、好ましくはハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、より好ましくは、Ｆ、ＣｌおよびＭｅから独立して選択される。

一実施形態では、Ｒ_１は、式

またはＡＣＣを有する。

好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式ＶＩＩＩ：

の化合物
またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり、
式中、
Ｒ２およびＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－６アルキルまたはＣ３－７シクロアルキルであり、ここで、Ｒ２および／またはＲ_３は、脱プロトン化形態ＣＯ（Ｏ－）をもたらすように存在しなくてもよく、

（点線）は、存在してもしなくてもよい結合を表し、存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成し、
式中、ＡＡは、上記に定義した場合によりＮ置換された塩基性アミノ酸であり、特に、ＡＡは、式（ＩＩ）：

の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体を指し、
式中、
ｎは、０、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｍは、０、１、２および３から選択され、
ｐは、０および１から選択され、
Ｘは存在しないか、またはＣ_３－７シクロアルキルおよびＣ_６－１０アリールから選択され、
Ｙは、－ＮＲ_ａＲ_ｂ、

から選択され、ここで、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。

本発明の好ましい実施形態によれば、ｐは０であり、ＡＡは、式：

の基であり、
式中、ｎ、ｍ、ＸおよびＹは、上記に定義した通りである。

本発明の一実施形態によれば、ｎは、１、２および３から選択される。

好ましい実施形態では、ｍ＋ｎは、１、２、３、４、５または６であり、より好ましくは、１、２、３、４および５である。

好ましくは、Ｘは存在しないか、またはシクロヘキシルおよびフェニルから選択される。

別の実施形態によれば、ＡＡは、式

の基であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｐは、０および１から選択され、
Ｙは、－ＮＲ_ａＲ_ｂ、

から選択され、ここで、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。

本発明の一実施形態によれば、ｎは、１、２、３、４および５から選択される。

好ましい実施形態では、ｐは０である。

本発明の一実施形態によれば、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＲから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリールおよび（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキルから独立して選択される。特定の実施形態では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、メチル、シクロヘキシル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＰｈまたは－Ｃ（Ｏ）ＯＢｎから独立して選択される。更なる実施形態では、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈである。

一実施形態では、ＡＡは、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アルギニンホモログ、リジン（Ｌｙｓ）、アセチルリジン、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、４－アミノシクロヘキシル－アラニン（Ａｃａ）、４－アミノ－フェニルアラニン（Ａｐａ）、アミノメチルシクロヘキシル－アラニン（Ａｍａ）、４－アミノメチル－フェニルアラニン（Ａｍｐ）、４－グアニジン－フェニルアラニン（Ｇｐａ）、４－グアニジン－シクロヘキシルアラニン（Ｇｃａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、４－ピペリジニル－アラニン（Ｐｉａ）、３－（２－ピリジル）アラニン（２－Ｐａｌ）、３－（３－ピリジル）アラニン（３－Ｐａｌ）、３－（４－ピリジル）アラニン（４－Ｐａｌ）、またはそのホモログおよび／もしくはベータ誘導体から選択される場合により置換されているアミノ酸である。

より好ましい実施形態では、ＡＡは、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、４－アミノシクロヘキシル－アラニン（Ａｃａ）、４－アミノ－フェニルアラニン（Ａｐａ）、アミノメチルシクロヘキシル－アラニン（Ａｍａ）、４－アミノメチル－フェニルアラニン（Ａｍｐ）、４－グアニジン－フェニルアラニン（Ｇｐａ）、４－グアニジン－シクロヘキシルアラニン（Ｇｃａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、４－ピペリジニル－アラニン（Ｐｉａ）、３－（２－ピリジル）アラニン（２－Ｐａｌ）、３－（３－ピリジル）アラニン（３－Ｐａｌ）、３－（４－ピリジル）アラニン（４－Ｐａｌ）、またはそれらのホモログおよび／もしくはベータ誘導体から選択されるアミノ酸であり、これは、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ６－１０アリール、（Ｃ６－１０）アリール（Ｃ１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＣＮ、－ＮＯ２、－ＯＲ、－ＳＲ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ２、－ＮＲ２および－ＳＯ２Ｒから選択される少なくとも１つの基で場合により置換されていてもよく、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ３－７シクロアルキル、Ｃ６－１０アリール、（Ｃ６－１０）アリール（Ｃ１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択される。好ましくは、ハロゲン、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ６－１０アリール、（Ｃ６－１０）アリール（Ｃ１－６）アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＲであり、式中、各Ｒは、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ６－１０アリール、（Ｃ６－１０）アリール（Ｃ１－６）アルキルから独立して選択される。より好ましくは、ハロゲン、メチル、シクロヘキシル、ベンジル、－Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、－Ｃ（Ｏ）ＯＰｈおよび－Ｃ（Ｏ）ＯＢｎである。

より好ましくは、ＡＡは、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、またはジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）から選択されるアミノ酸であり、
Ｒ１は、

からなる群より選択される弾頭（阻害剤用）またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり得、
式中、
ｑは、０、１、２、３、４または５であり、
各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２およびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択され、
Ｚ_２はハロゲンであり、
Ｚ_３は、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_６－１０アリールおよび（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキルから選択される。

好ましくは、Ｒ１は、式：

の弾頭であり、
式中、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択される。

一実施形態では、Ｚ_１は、ハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、好ましくはＦ、ＣｌおよびＭｅから独立して選択される。

更なる実施形態では、Ｒ_１は、式

の基から選択され、
式中、各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから、好ましくはハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、より好ましくは、Ｆ、ＣｌおよびＭｅから独立して選択される。
好ましい実施形態では、Ｒ_１は式

を有する。
別の実施形態では、Ｒ_１は、式：

の基から選択され基質の部分であり得、
式中、
Ｗは、－ＮＨ－および－Ｏ－から選択され、
Ｒ１０～Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ１－６アルキルおよびＣ３－７シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＮＨＲ１４、およびＣＨ_２ＯＲ１４から独立して選択され、
Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキルおよびＣ３－７シクロアルキルから選択される。

別の好ましい実施形態では、Ｒ１はＡＣＣである。

好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式ＩＸ：

の化合物
またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり、
式中、
Ｒ２およびＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－６アルキルまたはＣ３－７シクロアルキルであり、ここで、Ｒ２およびＲ_３は、脱プロトン化形態ＣＯ（Ｏ^－）を達成するために存在しなくてもよく、

は、存在してもしなくてもよい結合を表し、存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成し、
式中、
Ｒ１は、上記の実施形態のいずれかで定義される通りであり、好ましくは、Ｒ１は、式：

の基から選択され、
式中、各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから、好ましくはハロゲン、メチルおよび－ＯＭｅから、より好ましくは、Ｆ、ＣｌおよびＭｅから独立して選択される。

好ましい実施形態では、Ｒ_１は、式

またはＡＣＣを有し、
－ｎは、１、２、３または４であり、
－Ａは、－ＮＲ_ａＲ_ｂ、

から選択され、ここで、Ｒ_ａ、Ｒ_ｂおよびＲ_ｃは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、５～１０員ヘテロアリール、－ＮＯ_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび－ＳＯ_２Ｒから独立して選択され、ここで、各Ｒは、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_６－１０アリール、（Ｃ_６－１０）アリール（Ｃ_１－６）アルキル、５～１０員ヘテロシクリル、および５～１０員ヘテロアリールから独立して選択され、好ましくは、Ａは、－ＣＯＯＨ基、またはＮＨ２基からなる群より選択される。

好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式ＩＸ：

の化合物
またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体
であり、
Ｒ２およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１－６アルキルまたはＣ３－７シクロアルキルであり、ここで、Ｒ２およびＲ_３は、存在しなくてもよく、その結果、脱プロトン化形態ＣＯ（Ｏ^－）が生じ、

（点線）は、存在してもしなくてもよい結合を表し、存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成し、
式中、
－ｎは、２、３または４であり、
－Ａは、－ＣＯＯＨ基または－ＮＲ_ａＲ_ｂ基、好ましくはアミン基からなる群より選択され、Ｒ１は上記に定義される通りであり、好ましくはＲ_１は、式

またはＡＣＣを有する。

上記式ＩＸは、全ての可能な形態（例えば、１つの酸が脱プロトン化されたもの、２つの酸が一緒に脱プロトン化したもの、アミンが両方の状態にあるもの）を網羅することに留意されたい。すなわち、式ＩＸは、全ての塩および溶媒和物を包含する。これらの形態のうちの１つの非限定的な例は、次のものとなる：

特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、

からなる群より選択される化合物（プロトン化もしくは脱プロトン化）またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体から選択され、
式中、Ｒ_１は、本明細書を通して定義される通りであり、
好ましくは、Ｒ_１は、

から選択される。

上記の６つの構造は全ての可能な形態（例えば、１つの酸が脱プロトン化されたもの、２つの酸が一緒に脱プロトン化したもの、アミンが両方の状態にあるもの）を網羅し、位置Ｐ５は、延伸されたまま存在してもよく、または追加の二重結合が存在する以下の式ＩＩＩに示されるようなオキシダーゼ誘導体であってもよいことに留意されたい：

式中、ＡおよびＢは水素原子であり、Ｈ、Ｉ、ＪおよびＫは独立して炭素原子であり、

（点線）は、（オキシダーゼ誘導体の場合のように）存在しても、または存在しなくてもよい結合を表す。

特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、

からなる群より選択される化合物（プロトン化もしくは脱プロトン化）またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体から選択され、
式中、好ましくは、上記３つの構造中のＲ１は

（ＡＯＭＫとも呼ばれる、アシルオキシメチルケトン）である。

上記の全ての３つの構造は全ての可能な形態（例えば、１つの酸が脱プロトン化されたもの、２つの酸が一緒に脱プロトン化したもの、アミンが両方の状態にあるもの）を網羅し、位置Ｐ５は、以下の構造に従って、オキシダーゼ酸化誘導体であってもなくてもよく、

式中、ＡおよびＢは水素原子であり、Ｈ、Ｉ、ＪおよびＫは独立して炭素原子であり、

（点線）は存在しても（オキシダーゼ誘導体）しなくてもよい結合を表す。

さらに別の好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
ａ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１；
ｂ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１；
ｃ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ（ｍｅ）－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１；および／または
ｄ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１
からなる群より選択される化合物（プロトン化もしくは脱プロトン化）またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体から選択され、
式中、Ｐ２は、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）またはジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）から選択され、好ましくは、Ｒ１は

（ＡＯＭＫとも呼ばれる、アシルオキシメチルケトン）である。

さらに別の好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｍｉｘ－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１（プロトン化もしくは脱プロトン化）の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり、式中、Ｐ２は、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、またはジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）から選択され、ここで、Ｍｉｘは、Ａｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｇｌｎ（グルタミン）、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｎｌｅ（ロイシン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）およびＶａｌ（バリン）からなる群より選択される任意の天然アミノ酸であり、好ましくは、Ｒ１は

（ＡＯＭＫとも呼ばれる、アシルオキシメチルケトン）である。

医薬組成物
Ｒ１がＡＯＭＫなどの弾頭である本発明の上記式のいずれかの化合物は、カスパーゼ－２の不可逆的阻害剤であり、したがって、この酵素によって媒介される障害または疾患の予防または処置に使用することができる。

したがって、更なる態様では、本発明は、Ｒ_１がＡＯＭＫなどの弾頭またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体である、本明細書で定義される上記式のいずれかの化合物と、少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬組成物に関する。

「賦形剤」という用語は、有効成分と共に投与されるビヒクル、希釈剤、またはアジュバントを指す。そのような医薬品賦形剤は、滅菌液体、例えば水、および石油、動物、植物、または合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む油であり得る。水または生理食塩水および水性デキストロースおよびグリセロール溶液、特に注射用溶液がビヒクルとして好ましく使用される。適切な医薬品ビヒクルは、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５、または「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ」Ｒｏｗｅ Ｃ．Ｒ．；Ｐａｕｌ Ｊ．Ｓ．；Ｍａｒｉａｎ Ｅ．Ｑ．，ｓｉｘｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００９に記載されている。

本発明の医薬組成物の所望の医薬投与形態を製造するのに必要な賦形剤および補助物質は、他の要因の中でも、選択された投与医薬形態に依存する。医薬組成物の前述の医薬投与形態は、当業者に公知の従来の方法に従って製造される。

医薬組成物の例としては、経口、局所または非経口投与用の任意の固体（錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤など）または液体（溶液、懸濁液またはエマルジョン）組成物が挙げられる。

一実施形態では、医薬組成物は経口送達形態である。経口投与に適した剤形は、錠剤およびカプセル剤であり得、結合剤、例えばシロップ、アラビアガム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、またはポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、糖、コーンスターチ、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤を調製するための潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム；崩壊剤、例えばデンプン、ポリビニルピロリドン、デンプングリコール酸ナトリウムまたは微結晶セルロース；またはラウリル硫酸ナトリウムなどの薬学的に許容され得る湿潤剤などの当該技術分野で公知の従来の賦形剤を含有し得る。固体経口組成物は、ブレンド、充填または打錠の従来の方法によって調製することができる。そのような操作は、当該技術分野において従来のものである。錠剤は、例えば、乾式または湿式造粒によって調製することができ、任意選択的に、通常の製薬実務において周知の方法に従って、特に腸溶コーティングでコーティングすることができる。

医薬組成物は、適切な単位剤形の滅菌溶液、懸濁液または凍結乾燥製品などの非経口投与に適合させることもできる。適切な賦形剤、例えば増量剤、緩衝剤または界面活性剤を使用することができる。

言及される製剤は、欧州薬局方および米国薬局方ならびに同様の参照テキストに記載または言及されているものなどの標準的な方法を使用して調製することができる。

本発明の化合物または組成物は、経口、舌下、鼻腔内、眼内、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、または経皮投与などの任意の適切な方法によって投与され得る。

一般に、投与される本発明の化合物の有効量は、選択される化合物の相対的な有効性、処置および／または予防される障害の重症度、ならびに患者の体重に依存する。活性化合物は、１日に１回または複数回、例えば１日に１、２、３または４回投与することができ、典型的な１日の総用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日～約１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である。別の実施形態では、本発明の化合物の有効投与量は、約５００ｍｇ／ｋｇ体重／日以下である。別の実施形態では、本発明の化合物の有効投与量は、約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日以下である。別の実施形態では、有効投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日～約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲の本発明の化合物である。別の実施形態では、約０．０２ｍｇ／ｋｇ体重／日～約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、別の実施形態では、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ体重／日～約２０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である。

本発明の化合物の使用
Ｒ_１がフルオロフォア部分を含む基である本発明の化合物は、カスパーゼ－２活性を決定するための活性ベースのプローブとして使用することができる。

したがって、別の態様では、本発明は、カスパーゼ－２活性を決定するための、Ｒ_１がフルオロフォア部分を含む基である、本明細書で定義される本発明の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体のインビトロ使用に言及する。

特定の実施形態では、細胞または組織におけるカスパーゼ－２活性は、Ｒ_１がフルオロフォア部分を含む基である、本明細書で定義される本発明の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体を、前述の細胞または組織を含む試料と接触させ、光励起時に放出される蛍光シグナルを測定することによって決定することができる。

Ｒ１がＡＯＭＫなどの弾頭である本発明の上記式のいずれかの化合物は、標的酵素（カスパーゼ－２）の活性部位と反応し、それによって不可逆的阻害効果を提供する基を含む。したがって、Ｒ_１が基である本発明の化合物は、カスパーゼ－２活性が関与する疾患または障害の予防または処置に使用することができる。

したがって、別の態様では、本発明は、医薬品として使用するための、Ｒ_１がＡＯＭＫなどの弾頭である本発明の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体に関する。

別の態様では、本発明は、変性疾患、例えばアルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、軽度認知障害、筋萎縮性側索硬化症およびクロイツフェルト・ヤコブ病、副腎白質ジストロフィー；新生児脳損傷、特に新生児脳虚血；外傷性脳損傷；腎臓虚血；低酸素虚血損傷；脳卒中様状況脳損傷（ｓｔｒｏｋｅ－ｌｉｋｅ ｓｉｔｕａｔｉｏｎｓ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｉｅｓ）；心臓虚血；心筋梗塞；筋萎縮性側索硬化症；網膜損傷；眼疾患、例えば加齢黄斑変性症、糖尿病性網膜症、網膜色素変性症、鈍的眼損傷、虚血性視神経症、緑内障；細胞毒性の予防（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、放射線および音響外傷などの物理的要因による細胞毒性、特に化学物質によって媒介される細胞毒性防止；皮膚損傷；無菌性炎症性疾患、例えば糖尿病、アテローム性動脈硬化症、痛風、偽痛風、関節弛緩、アテローム性動脈硬化症、アルミニウム塩によってトリガーされる症候群、非動脈炎性虚血性視神経症、緑内障および代謝性疾患；非無菌性炎症性疾患、例えば細菌感染、特に細孔形成毒素を産生する細菌による感染、インフルエンザウイルス感染および一本鎖ＲＮＡラブドウイルス科感染、例えばマラバウイルスまたは水疱性口内炎ウイルス；病原性細菌によって引き起こされる疾患、例えばブルセラ菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）およびサルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）；脂質異常症；肥満；メタボリックシンドローム；および非アルコール性脂肪性肝疾患、例えば非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）および非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）から選択されるカスパーゼ－２活性化の増加に関連する疾患または障害の予防および／または処置に使用するための、Ｒ１がＡＯＭＫなどの弾頭である本発明の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体に関する。

好ましい実施形態では、本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防および／または処置に使用するための、Ｒ１が弾頭、例えばＡＯＭＫである本発明の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体に関する。

本明細書の文脈における「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置する（ｔｒｅａｔ）」という用語は、疾患または前述の疾患に関連する１つ以上の症候を改善または排除するための本発明による化合物または組成物の投与を意味する。「処置（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」はまた、疾患の生理学的続発症を改善または排除することを包含する。

本発明の文脈における「改善する」という用語は、処置される患者の状況に対する任意の改善を意味すると理解される。

本明細書の文脈における「防止」または「防止する」という用語は、疾患または前述の疾患に関連する１つ以上の症候を獲得または発症するリスクを低下させるための本発明による化合物または組成物の投与を意味する。

一実施形態では、本明細書に記載の任意の方法または使用は、少なくとも１つの他の治療薬を患者に投与することをさらに含むことができる。

以下、実施例により本発明をさらに説明する。この説明は、特許請求の範囲に定義される本発明の範囲の限定として決して解釈されるべきではない。

生物学的アッセイ
実施例１．基質を用いた酵素動力学研究
材料および方法
試薬
Ｆｍｏｃ保護アミノ酸は、Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ（Ｍａｒｋｔｒｅｄｗｉｔｚ、ドイツ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（ポーランド、ポズナン）、Ｂａｃｈｅｍ（米国カリフォルニア州トーランス）、Ｃｒｅｏｓａｌｕｓ（米国ケンタッキー州ルーズビル）、ＰＥ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（中国、香港）およびＣｏｍｂｉ－Ｂｌｏｃｋ（米国サンディエゴ）から購入した。Ｆｍｏｃ－ＡＣＣ蛍光色素は、Ｍａｌｙらによって以前に公開された手順に従って合成した。Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ樹脂（２００～３００メッシュ、負荷０．４８ｍｍｏｌ／ｇ）、（２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、ピペリジン（ＰＩＰ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣＩ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）は、Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨから購入した。無水ＨＯＢｔは、Ｃｒｅｏｓａｌｕｓから購入した。２，４，６－トリメチルピリジン（２，４，６－コリジン）、アセトニトリル（ＡＣＮ、ＨＰＬＣグラジエントグレード）、トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、分析用に純粋）、メタノール（ＭｅＯＨ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ＡｃＯＨ、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、および五酸化リン（Ｐ２Ｏ５）はＰＯＣｈ（ポーランド、グリヴィツェ）から入手した。全てのＡＣＣ標識蛍光基質を、半分取Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｃ８カラム（粒径１０μｍ）を使用して、Ｗａｔｅｒｓシステム（Ｗａｔｅｒｓ Ｍ６００溶媒送達モジュールおよびＷａｔｅｒｓ Ｍ２４８９検出器システム）での逆相ＨＰＬＣによって精製した。基質精製およびＬＣ－ＭＳ分析のための溶媒組成は以下の通りであった：相Ａ（水／０．１％ＴＦＡ）、相Ｂ（ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）。精製のために、アッセイを線形勾配（９５％相Ａから５％相Ａ）で３０分間実行した。純度および分子量［ｍ／ｚ＋Ｈ］^＋は、ＬＣ－ＭＳ Ｗａｔｅｒｓ装置を使用し、分析Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｃ８カラム（粒径１０μｍ）を使用して決定した。ＬＣ－ＭＳアッセイを９５％相Ａから５％相Ａまで２０分間実行した。全ての化合物は少なくとも９５％純粋であった。

基質の合成
ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｐ２－Ａｓｐ－ＡＣＣの一般式を有する基質を、前述の一般的な方法に従って固体支持体上で合成した。特に明記しない限り、全てのアミノ酸はＬ配置を有する。

合成した全ての基質について、約１０ｇ（１当量、４．８ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ樹脂（０．４８ｍｏｌ／ｇ）を固相合成のために２５０ｍＬガラスカートリッジに入れ、ＤＣＭ中で３０分間膨潤させた。次いで、ＤＣＭを排水し、樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。次に、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して、Ｆｍｏｃ－保護基を３サイクルで除去し（５分、５分、および２５分）、樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。約２．５当量のＦｍｏｃ－ＡＣＣ－ＯＨ（１２ｍｍｏｌ、５．３ｇ）を、最小量のＤＭＦ中２．５当量のＨＯＢｔ（１２ｍｍｏｌ、１．８ｇ）および２．５当量のＤＩＣＩ（１２ｍｍｏｌ、１．６ｍＬ）で３分間予備活性化し、樹脂に注いだ。カートリッジを３０分間穏やかに撹拌し、混合物が高密度になりすぎたら、より多くのＤＭＦを添加した。反応を２４時間行い、続けて濾過し、樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。Ｆｍｏｃ－ＡＣＣ－ＯＨカップリングを繰り返して、１．５当量の上記の試薬を使用してカップリング収率を改善した。２４時間後、樹脂をＤＭＦで３回洗浄し、ニンヒドリン試験を行って完全なＦｍｏｃ－ＡＣＣ－ＯＨカップリングを確認した。次いで、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用してＡＣＣからＦｍｏｃ基を除去し、続けて樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。次に、２．５当量のＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ（１２ｍｍｏｌ、５．３ｇ）を、ＤＭＦ中２．５当量のＨＡＴＵ（１２ｍｍｏｌ、４．６ｇ）および２．５当量の２，４，６－コリジン（１２ｍｍｏｌ、１．６ｍＬ）で３分間予備インキュベートし、Ｈ２Ｎ－ＡＣＣ樹脂に注いだ。反応を２４時間実施し、１．５当量のＦｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ／ＨＡＴＵ／２，４，６－コリジン試薬を使用してさらに２４時間繰り返した。次いで、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＡＣＣ樹脂をＤＭＦで３回洗浄し、続けてＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ脱保護し、樹脂をＤＭＦで６回、ＤＣＭで３回、ＭｅＯＨで３回洗浄し、デシケーター中でＰ_２Ｏ_５上で一晩乾燥させた。得られた樹脂（約１２ｇ）を１００ｍｇ部分に分割し、個々のカスパーゼ－２基質の合成に使用した。

Ｐ２基質合成
一般式ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｐ２－Ａｓｐ－ＡＣＣのＡＣＣ標識蛍光基質を、ＭｕｌｔｉＣｈｅｍ ４８ウェル合成装置（米国カリフォルニア州ＳｃｉＧｅｎｅのＦｌｅｘＣｈｅｍ）を使用して合成した。各基質について、各々１００ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌのＮＨ_２－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＡＣＣ樹脂をマルチウェルカートリッジの分離したウェルに入れ、ＤＣＭを添加して樹脂を膨潤させた。次に、ＤＣＭを濾別し、樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。３０本の１．５ｍＬチューブにおいて、３当量の種々のアミノ酸（０．１５ｍｍｏｌ）を、３当量のＨＡＴＵ（０．１５ｍｍｏｌ、６０ｍｇ）および３当量の２，４，６－コリジン（０．１５ｍｍｏｌ、２０ｍＬ）を含有する１ｍＬのＤＭＦと混合し、樹脂に注いだ。Ｐ２カップリング反応を３時間行い、続けてニンヒドリン試験を行った。次いで、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いて各基質からＦｍｏｃ基を除去し、各ウェル中の樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。次に、３当量（ｘ３０）のＦｍｏｃ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－ＯＨ（４．５ｍｍｏｌ、１．９５ｇ）を、最小量のＤＭＦ中３当量（ｘ３０）のＨＡＴＵ（４．５ｍｍｏｌ、１．７２ｇ）および２，４，６－コリジン（４．５ｍｍｏｌ、６００ｕＬ）で１分間予備インキュベートし、樹脂に注いだ。Ｐ３カップリング反応を３時間行い、続けてニンヒドリン試験を行った。次いで、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いて各基質からＦｍｏｃ基を除去し、各ウェル中の樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。次に、３当量（ｘ３０）のＦｍｏｃ－ｈＧｌｕ（ｔＢｕ）－ＯＨ（４．５ｍｍｏｌ、２．０ｇ）を、最小量のＤＭＦ中３当量（ｘ３０）のＨＡＴＵ（４．５ｍｍｏｌ、１．７２ｇ）および２，４，６－コリジン（４．５ｍｍｏｌ、６００ｍＬ）で１分間予備インキュベートし、樹脂に注いだ。Ｐ４カップリング反応を３時間行い、続けてニンヒドリン試験を行った。次いで、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いて各基質からＦｍｏｃ基を除去し、各ウェル中の樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。次に、３当量（ｘ３０）のＦｍｏｃ－Ｉｄｃ－ＯＨ（４．５ｍｍｏｌ、１．７５ｇ）を、最小量のＤＭＦ中３当量（ｘ３０）のＨＡＴＵ（４．５ｍｍｏｌ、１．７２ｇ）および２，４，６－コリジン（４．５ｍｍｏｌ、６００ｍＬ）で１分間予備インキュベートし、樹脂に注いだ。Ｐ５カップリング反応を３時間行い、続けてニンヒドリン試験を行った。次いで、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いて各基質からＦｍｏｃ基を除去し、各ウェル中の樹脂をＤＭＦで６回、ＤＣＭで３回、ＭｅＯＨで３回洗浄し、デシケーター中でＰ_２Ｏ_５上で一晩乾燥させた。氷冷ＴＦＡ／ＴＰＳ／水（％ｖ／ｖ／ｖ、９５／２．５／２．５）混合物を２時間使用して（１５分に１回振盪）、全ての基質を樹脂から切断した。各ウェルからの溶液を別々に回収し、残りの樹脂をＴＦＡで洗浄した。次いで、基板を氷冷Ｅｔ_２Ｏで３０分間沈殿させ、遠心分離した。次に、上清を廃棄し、ペレットを氷冷Ｅｔ_２Ｏに再懸濁し、再度遠心分離した。次いで、上清を廃棄し、ペレットを乾燥させ、粗生成物を１ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、ＨＰＬＣで精製した。純粋な基質を回収し、－８０℃で凍結し、凍結乾燥した。次いで、最終生成物（白色粉末）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に最終濃度２０ｍＭまで溶解し、使用するまで－８０℃で保存した。

組換えカスパーゼの調製
ヒトアポトーシスカスパーゼの発現および精製のための詳細なプロトコルは、他の場所（Ｓｔｅｎｎｉｃｋｅ、１９９９）で見出すことができる。

酵素動力学研究
９６ウェルコーニング（コーニング、米国ニューヨーク州）プレートにおいて蛍光動態モードで操作するｆＭａｘ分光蛍光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、米国カリフォルニア州サニーベール）を使用してカスパーゼ－２、－３および－８に対するＰ２基質のスクリーニングを行った。ＡＣＣ蛍光を、３５５ｎｍ（励起）および４６０ｎｍ（発光）の波長を使用してモニターした。動態解析の前に、全てのカスパーゼを、ｚＶＡＤ－ｆｍｋ阻害剤（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、カタログ番号１４４６７）を使用して活性部位滴定した。カスパーゼアッセイ緩衝液は、１０％ｗ／ｖスクロース、１Ｍクエン酸ナトリウム、２０ｍＭ Ｐｉｐｅｓ、１０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、および１０ｍＭ ＤＴＴ（ｐＨ＝７．３）であった。緩衝液を室温で調製し、全ての動態アッセイを３７℃で行った。全ての酵素を、任意の活性アッセイの前に１５分間予備インキュベートした。基質を１０ｍＭの濃度でスクリーニングし、カスパーゼ濃度は以下の通りであった：カスパーゼ－２５ｎＭ、カスパーゼ－３ １５ｎＭおよびカスパーゼ－８ ４０ｎＭ。単一ウェル内の総体積は１００ｍＬであった。総アッセイ時間は３０分であったが、分析のために蛍光進行曲線の線形部分のみを取った。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して動態データを分析した。データは、カスパーゼ１０ｎＭあたりの蛍光遊離／産生速度（ＲＦＵ／秒相対蛍光単位／秒）として提示される。

結果
本発明者らは、Ｐ２（本発明全体を通してＡＡとも呼ばれる）位置でのその触媒選択性を再検討することによって、非常に特異的かつ選択的なカスパーゼ－２基質を開発することを目的とした。一般に認められていることによれば、「特異的」とは、高い動態パラメーター（例えば、基質の場合は高ｋｃａｔ／ＫＭ、阻害剤の場合は高ｋｏｂｓ／Ｉ）を意味し、「選択的」とは、いくつかの試薬（基質／阻害剤）がただ１つの酵素を標的とすることを意味する。本発明のこの部分の主な目的は、カスパーゼ－２に最も選択的な基質であることが以前に発表されたＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＣＣ（ＷＲＭＰ２３）式（Ｐｏｒｅｂａら、Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ＆Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ２０１９，２６，２６９５－２７０９）に基づいて設計された一連のペンタペプチド蛍光基質を合成し、生化学的に評価することであった。上述のＷＲＭＰ２３式から、本発明の高度に特異的かつ選択的なカスパーゼ－２基質および阻害剤を新たに開発するための基剤を形成する以下のスキャフォールド１（以下のスキャフォールド１を参照）を設計した：

スキャフォールド１．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－ＡＡ－Ａｓｐ－Ｒ_１。Ｒ１：－ＡＣＣ（基質）または－ＡＯＭＫ（阻害剤）。Ｒ３：Ｈ。Ｒ２：Ｈ。ＡＡ：Ｐ２。

結果は、ＲＦＵ／ｓとして表される基質加水分解速度として本明細書で提示され、ここで、ＲＦＵは、カスパーゼ１０ｎＭあたりの相対蛍光単位である（図１および表１を参照）。

上記の表に示すように、本発明の発明者らは、以下の式の化合物を見出した：

式中、セリンの代わりにＡＡ位にあるＬｙｓは、カスパーゼ－３またはカスパーゼ－８よりも高いカスパーゼ－２活性および顕著な選択性を示し、したがって改善されたカスパーゼ－２基質阻害剤をもたらす。本発明者らはさらに、セリンの代わりにＡＡ位にＨｉｓを有する上記式の化合物が強いカスパーゼ－２活性を示すことを見出した。

実施例２．阻害剤を用いた酵素動態研究
材料および方法
試薬
Ｆｍｏｃ保護アミノ酸は、Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ（Ｍａｒｋｔｒｅｄｗｉｔｚ、ドイツ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（ポーランド、ポズナン）、Ｂａｃｈｅｍ（米国カリフォルニア州トーランス）、Ｃｒｅｏｓａｌｕｓ（米国ケンタッキー州ルーズビル）、ＰＥ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（中国、香港）およびＣｏｍｂｉ－Ｂｌｏｃｋ（米国サンディエゴ）から購入した。２－クロロトリチルクロリド樹脂（１００～２００メッシュ、負荷１．５９ｍｍｏｌ／ｇ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、ピペリジン（ＰＩＰ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣＩ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）は、Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨから購入した。２，４，６－トリメチルピリジン（２，４，６－コリジン）、アセトニトリル（ＡＣＮ、ＨＰＬＣグラジエントグレード）、トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）、臭化水素酸溶液（酢酸（ＡｃＯＨ）中３０重量％ＨＢｒ）、Ｎ－メチルモルホリン（ＮＭＭ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ無水物）、クロロギ酸イソブチル（ＩＢＣＦ）、および２，６－ジメチル安息香酸（２，６－ＤＭＢＡ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、分析用に純粋）、メタノール（ＭｅＯＨ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ＡｃＯＨ、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、および五酸化リン（Ｐ２Ｏ５）はＰＯＣｈ（ポーランド、グリヴィツェ）から入手した。アシルオキシメチルケトン（ＡＯＭＫ）阻害剤合成のためのジアゾメタンを、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ（ＡＬ－１８０）プロトコルに従って生成した。全てのＡＯＭＫ阻害剤を、半分取Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｃ８カラム（粒径１０μｍ）を使用して、Ｗａｔｅｒｓシステム（Ｗａｔｅｒｓ Ｍ６００溶媒送達モジュールおよびＷａｔｅｒｓ Ｍ２４８９検出器システム）での逆相ＨＰＬＣによって精製した。阻害剤精製およびＬＣ－ＭＳ分析のための溶媒組成は以下の通りであった：相Ａ（水／０．１％ＴＦＡ）、相Ｂ（ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）。精製のために、アッセイを線形勾配（９５％相Ａから５％相Ａ）で３０分間実行した。純度および分子量［ｍ／ｚ＋Ｈ］^＋は、ＬＣ－ＭＳ Ｗａｔｅｒｓ装置を使用し、分析Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｃ８カラム（粒径１０μｍ）を使用して決定した。ＬＣ－ＭＳアッセイを９５％相Ａから５％相Ａまで２０分間実行した。全ての化合物は少なくとも９５％純粋であった。

Ｐ２阻害剤の合成
Ｐ２位のアポトーシスカスパーゼの蛍光発生基質の詳細な動態分析により、本発明者らはカスパーゼ－２選択的テトラペプチドモチーフを選択し、それらを使用して不可逆的ＡＯＭＫタグ付き阻害剤を設計することができた。ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－ＡＡ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫの一般式を有する阻害剤を、以前に記載された一般的方法（Ｐｏｒｅｂａ ２０１９、Ｐｏｒｅｂａ ２０１６）に従って合成した。対照阻害剤として、Ａｃ－ＶＤＶＡＤ－ＡＯＭＫを合成した。ＡＯＭＫベースの阻害剤合成の詳細な手順は、ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫ（ＮＨ－２３－Ｃ２、Ｐｏｒｅｂａら、Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ＆Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ２０１９，２６，２６９５－２７０９）の合成で例示される。他の全ての阻害剤を同様に合成および精製した。特に明記しない限り、全てのアミノ酸はＬ配置を有する。

ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫ（ＮＨ－２３－Ｃ２）の合成 Ｂｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＯＨアミノ酸（５ｍｍｏｌ、１．４５ ｇ）の無水ＴＨＦ中０．２Ｍ溶液を氷／アセトン浴中、－１０℃で１０分間撹拌した。次いで、４－メチルモルホリン（６．２５ｍｍｏｌ、１．２５当量）およびクロロギ酸イソブチル（５．７５ｍｍｏｌ、１．１５当量）を添加した。反応を－１０℃で４５分間行った。並行実験では、ジアゾメタンをＡｌｄｒｉｃｈ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ（ＡＬ－１８０）プロトコルに従って生成した。次に、混合無水物の溶液を０℃でエーテル性ジアゾメタン（１６．６～２１．４ｍｍｏｌ）に滴加した。混合物を１０分間撹拌し、この時間の後、氷浴を除去し、反応を室温で２時間行った。Ｂｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＣＨ_２Ｂｒを得るために、ＨＢｒ（３０％重量ＣＨ_３ＣＯＯＨ中）および水の１：２溶液１５ｍＬを混合物に１０分間かけて滴加した。直後に、混合物を酢酸エチルで希釈し、分液漏斗に移し、水（１回）、飽和水性ＮａＨＣＯ_３（２回）およびブライン（２回）で抽出した。有機画分をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。生成物を淡黄色油として得て、さらに精製することなく合成に使用した。ＨＰＬＣによって決定された生成物純度は＞９５％であり、全体の収率は＞９０％であった。次の反応では、１当量のＢｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＣＨ_２Ｂｒを少量のＤＭＦに溶解し、続けてＫＦ（３当量）および２，６－ジメチルベノジン酸（２，６－ＤＭＢＡ）（１．２当量）を添加した。混合物をアルゴンの不活性雰囲気中で２５分間撹拌した。反応が完了した後（ＨＰＬＣ分析）、溶液を酢酸エチルで希釈し、分液漏斗に移し、５％のクエン酸（２回）、５％のＮａＨＣＯ_３水溶液（２回）およびブライン（２回）で抽出した。次に、有機画分をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。生成物を黄色油状物として得て（収率＞９５％）、さらに精製することなくプローブ合成に使用した。Ｂｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＡＯＭＫ（１００ｍｇ／０．２１３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中２５％ＴＦＡの溶液に添加した。Ｂｏｃ基およびｔＢｕ基の脱保護を３０分間行った。次いで、ＴＦＡおよびＤＣＭを減圧下で蒸発させ、最終生成物（ＮＨ_２－Ａｓｐ－ＡＯＭＫ）を黄色油状物として得て、さらに精製することなく使用した（ＨＰＬＣによる収率９８％）（ブロックＢ、合成スキーム１）。別の合成では、ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ（ｔＢｕ）－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨペプチド断片を、２－クロロトリチルクロリド樹脂（２００ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ／ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を使用して合成した。Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ（３当量、１ｍｍｏｌ、３８３ｍｇ）を最小体積の無水ＤＣＭに溶解した後、４．５当量のＤＩＰＥＡ（１．５ｍｍｏｌ、２６０ｕＬ）を添加し、混合物を１分間活性化し、樹脂に注いだ。反応混合物を３時間撹拌した。次いで、ＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ基を除去し、樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－ＯＨ（３当量１ｍｍｏｌ、４３１ｍｇ）およびＨＡＴＵ（３当量１ｍｍｏｌ、３８０ｍｇ）を最小体積のＤＭＦに溶解し、３当量の２，４，６－コリジン（１ｍｍｏｌ、１３０ｕＬ）を添加した。混合物を樹脂上に注ぎ、反応を３時間行った。この後、ＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ基を除去し、樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。次に、Ｆｍｏｃ－ｈＧｌｕ（ｔＢｕ）－ＯＨ（３当量、１ｍｍｏｌ、４４０ｍｇ）およびＨＡＴＵ（３当量、１ｍｍｏｌ、３８０ｍｇ）を最小体積のＤＭＦに溶解し、３当量の２，４，６－コリジン（１ｍｍｏｌ、１３０ｕＬ）を添加した。混合物を樹脂上に注ぎ、反応を３時間行った。この後、ＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ基を除去し、樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。次に、Ｆｍｏｃ－Ｉｄｃ－ＯＨ（３当量１ｍｍｏｌ、３８６ｍｇ）およびＨＡＴＵ（３当量１ｍｍｏｌ、３８０ｍｇ）を最小体積のＤＭＦに溶解し、３当量の２，４，６－コリジン（１ｍｍｏｌ、１３０ｕＬ）を添加した。混合物を樹脂上に注ぎ、反応を３時間行った。この後、ＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ基を除去し、樹脂をＤＭＦで６回、ＤＣＭで３回およびＭｅＯＨで３回洗浄した。次いで、樹脂をデシケーター中でＰ２Ｏ５上で一晩乾燥させた。次に、ＤＣＭ／ＴＦＥ／ＡｃＯＨ（ｖ／ｖ／ｖ、８：１：１）の混合物中での４５分間のインキュベーションの間に、ペプチドを樹脂から切断した。次いで、溶液を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。粗ペプチドをアセトニトリル：Ｈ_２Ｏ（ｖ／ｖ、７：３）に溶解し、凍結乾燥することにより、ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ（ｔＢｕ）－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨを白色粉末として得た（ブロックＡ、合成スキーム１）。ペプチド純度は＞９５％であり、更なる精製を行わずにＮＨ－２３－Ｃ２阻害剤の合成に使用した。次に、ペプチド断片（１当量）をＤＭＦ中で、カップリング試薬としてＨＡＴＵ（１当量）および２，４，６－コリジン（５当量）を使用してＮＨ２－Ａｓｐ－ＡＯＭＫ（１当量）とカップリングさせた。反応は室温で２時間行い、この後、混合物をＨＰＬＣに注入し、ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ（ｔＢｕ）－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ａｓｐ－ＡＯＭＫを精製し、凍結乾燥した。次いで、生成物をＤＣＭ：ＴＦＡ １：２の混合物に溶解して、保護基を除去した。反応を室温で１時間行い、ＤＣＭ：ＴＦＡ混合物をアルゴンで除去した。粗生成物をＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥させて、最終化合物：ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫ（ブロックＣ、合成スキーム１）を得た。分子量［ｍ／ｚ＋Ｈ］^＋および純度をＬＣ－ＭＳ分析によって確認した。同様の様式で、他の阻害剤を合成した。また、参照阻害剤Ａｃ－ＶＤＶＡＤ－ＡＯＭＫ（Ａｃ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫ）をこの手順で合成したが、この場合、ペプチド断片をさらにアセチル基でＮキャップした。酢酸（５当量）およびＨＢＴＵ（５当量）を最小量のＤＭＦに溶解し、ＮＨ２－Ｖａｌ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－Ｖａｌ－Ａｌａ－樹脂（１当量）上に注ぎ、アセチル化反応を３０分間行った。次いで、Ｎ－アセチル化ペプチドを上記の手順で進めた。

ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｌｙｓ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫの合成には、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨの代わりにＦｍｏｃ－Ｌ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨを使用した。ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｏｒｎ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫの合成には、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨの代わりにＦｍｏｃ－Ｌ－Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）－ＯＨを使用した。ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｄａｂ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫの合成には、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨの代わりにＦｍｏｃ－Ｌ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－ＯＨを使用した。ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｄａｐ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫの合成には、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨの代わりにＦｍｏｃ－Ｌ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－ＯＨを使用した。ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ａｒｇ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫの合成には、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨの代わりにＦｍｏｃ－Ｌ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨを使用した。

酵素動態研究－ｋｏｂｓ／Ｉ阻害パラメーターの決定
９６ウェルＣｏｒｎｉｎｇ（米国ニューヨーク州コーニング）プレートにおいて蛍光動態モードで動作するｆＭａｘ分光蛍光計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、米国カリフォルニア州サニーベール）を使用して、カスパーゼ－２、－３、および－８に対する合成阻害剤のｋ_ｏｂｓ／Ｉ阻害パラメーター（酵素阻害の二次速度）の測定を行った。動態解析の前に、全てのカスパーゼを、ｚＶＡＤ－ｆｍｋ阻害剤（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、カタログ番号１４４６７）を使用して活性部位滴定した。カスパーゼアッセイ緩衝液は、１０％ｗ／ｖスクロース、１Ｍクエン酸ナトリウム、２０ｍＭ Ｐｉｐｅｓ、１０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、および１０ｍＭ ＤＴＴ（ｐＨ＝７．３）であった。緩衝液を室温で調製し、全ての動態アッセイを３７℃で行った。ｋ_ｏｂｓ／Ｉパラメーターは、擬一次速度論的条件下で測定した（［Ｉ］＞＞［Ｅ］）。阻害剤（２０ｕＬ）を９６ウェルプレートで希釈し、適切な基質（２０ｕＬ）と混合した。カスパーゼ－２についてはＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＣＣ（５０ｕＭ）、カスパーゼ－３についてはＡｃ－ＤＥＶＤ－ＡＣＣ（１００ｕＭ）およびカスパーゼ－８についてはＡｃ－ＬＥＨＤ－ＡＣＣ（１００ｕＭ）。ＡＣＣ蛍光を、３５５ｎｍ（励起）および４６０ｎｍ（発光）の波長を使用してモニターした。基質－阻害剤混合物（合計４０ｕＬ）を３７℃で１５分間予備インキュベートした。同時に、別のチューブ中で、カスパーゼを３７℃のアッセイ緩衝液中で予備インキュベートし、１５分後、酵素をウェルに添加し（ウェルあたり６０ｕＬ、総反応体積１００ｕＬ）、蛍光を直ちに開始して３０分間モニターした。二次阻害率（ｋ_ｏｂｓ／Ｉ）を少なくとも３回の独立した実験で決定し、平均値として示した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ソフトウェアを計算に使用した（図２を参照）。

組換えカスパーゼの調製
ヒトアポトーシスカスパーゼの発現および精製のための詳細なプロトコルは、他の場所（Ｓｔｅｎｎｉｃｋｅ、１９９９）で見出すことができる。

酵素動態研究－Ｋ _ｉ およびＩＣ _５０ 阻害パラメーターの決定
９６ウェルＣｏｒｎｉｎｇ（米国ニューヨーク州コーニング）プレートにおいて蛍光動態モードで動作するｆＭａｘ分光蛍光計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、米国カリフォルニア州サニーベール）を使用して、カスパーゼ－２、－３、および－８に対する合成阻害剤のＫ_ｉおよびＩＣ_５０阻害パラメーターの測定を行った。動態解析の前に、全てのカスパーゼを、ｚＶＡＤ－ｆｍｋ阻害剤（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、カタログ番号１４４６７）を使用して活性部位滴定した。カスパーゼアッセイ緩衝液は、１０％ｗ／ｖスクロース、１Ｍクエン酸ナトリウム、２０ｍＭ Ｐｉｐｅｓ、１０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、および１０ｍＭ ＤＴＴ（ｐＨ＝７．３）であった。緩衝液を室温で調製し、全ての動態アッセイを３７℃で行った。Ｋ_ｉパラメーターは、Ｍｏｒｒｉｓｏｎの式（Ｃｏｐｅｌａｎｄ、２０００）を使用して測定した。各カスパーゼについて、適切なＡＣＣ蛍光発生基質を使用して、基質加水分解をモニターした：カスパーゼ－２についてはＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＣＣ（５０ｕＭ）、カスパーゼ－３についてはＡｃ－ＤＥＶＤ－ＡＣＣ（１００ｕＭ）およびカスパーゼ－８についてはＡｃ－ＬＥＨＤ－ＡＣＣ（１００ｕＭ）。ＡＣＣ蛍光を、３５５ｎｍ（励起）および４６０ｎｍ（発光）の波長を使用してモニターした。可逆的阻害剤動態の基準を満たすために、最低阻害剤濃度は、アッセイにおけるカスパーゼ濃度の少なくとも４倍高かった。カスパーゼ（６０ｕＬ）を最初に９６ウェルプレート中のアッセイ緩衝液中で３７℃で１５分間予熱し、次いで阻害剤（２０ｕＬ）と３７℃でさらに１５分間予備インキュベートした。次に、基質（２０ｕＬ）を酵素－阻害剤混合物に添加し、反応の進行（ＡＣＣ放出）を経時的にモニターした。Ｋ_ｉパラメーターはＭｏｒｒｉｓｏｎの式から計算し、ＩＣ_５０パラメーターは式：ＩＣ_５０＝Ｋ_ｉ×（１＋［Ｓ］／Ｋ_ｍ］を使用して計算し、式中、［Ｓ］はアッセイで使用される基質濃度であり、Ｋｍは基質のミカエリス・メンテン定数である。全ての測定を少なくとも３回行い、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ソフトウェアを使用してデータを分析した。

ＫｉおよびＩＣ５０（カスパーゼ－２について）のデータを図３に示す。

結果をｋｏｂｓ／Ｉとして示し、ＫｉおよびＩＣ５０値を以下の表３～５に示す。

選択性の結果は、ｋｏｂｓ／Ｉ、ＫｉおよびＩＣ５０値の分割値としても提示される（以下の表６および７を参照）。

既に示されているように、化合物ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＣＣおよびＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫは、Ｐｏｒｅｂａら、Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ＆Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ２０１９，２６，２６９５－２７０９にカスパーゼ－２基質および阻害剤として開示されている。上記の表に示されるように、本発明の発明者らは、例えば、セリンの代わりにＡＡの位置にＬｙｓ、Ｏｒｎ、ＤａｂまたはＤａｐ基を有する式ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）－ＡＡ－Ａｓｐ－ＡＯＭＫの化合物が、カスパーゼ－３またはカスパーゼ－８に対して高いカスパーゼ－２阻害活性および顕著な選択性を示し、したがって改善されたカスパーゼ－２阻害剤をもたらすことを見出した。

実施例３．細胞内脂質蓄積
－材料および方法
ＨｅｐＧ２細胞（５０．０００細胞／ウェル）を、コラーゲン（３７℃で３０分間インキュベートしたＰＢＳ中の２ｍｇ／ｍＬコラーゲン溶液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））で予めコーティングしたカバーガラス上の１２マルチウェル培養皿に播種した。

細胞を「ＮＡＳＨカクテル」で処理した：１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１％（ｖ／ｖ）ＰｅｎＳｔｒｅｐおよび２ｍＭ Ｌ－グルタミン＋脂肪酸（１００μＭオレイン酸ナトリウムおよび１００μＭパルミチン酸）、１００ｎＭインスリン（全てＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）および炎症性サイトカイン（５０ｎｇ／ｍＬの腫瘍壊死因子、ＴＮＦ－α（Ｐｒｏｓｐｅｃ）、２５ ｎｇ／ｍＬのインターロイキンＩＬ－１β（Ｐｅｔｒｏｔｅｃｋ）および８ｎｇ／ｍＬの形質転換成長因子、ＴＧＦ－β（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ））を補充した４．５ｍｇ／ｍＬグルコースを含有するＤＭＥＭ。細胞をこの「ＮＡＳＨカクテル」に２４時間曝露し、ＫＩＮ化合物を異なる濃度で同時に添加した。

処理終了時に、細胞をＰＢＳで洗浄し、染色溶液（ＢＯＤＩＰＹ ４９３／５０３（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と共に３７℃で１５分間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、室温で３０分間、４％ＰＦＡ中で固定した。ＰＢＳでさらに３回洗浄した後、ＤＡＰＩを含むＰｒｏｌｏｎｇ（登録商標）Ｇｏｌｄ退色防止試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）１滴を使用して室温で一晩、カバーガラスをガラススライドに取り付けた。Ａｘｏｉｍａｇｅｎ Ｍ１顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ、ドイツ、オーバーコッヘン）を使用して蛍光顕微鏡写真を撮影し、ＩｍａｇｅＪ（ｎ＝１０）を使用して蛍光シグナル（ＤＡＰＩおよびＢＯＤＩＰＹ）を定量化した。細胞内脂質負荷をＢＯＤＩＰＹ（商標）４９３／５０３脂質色素面積の関数として計算した。

－結果
ＮＡＳＨを開始すると考えられる１つの代謝プロセスは、ｄｅ ｎｏｖｏ脂質生成（ＤＮＬ）であり、その速度は患者において最大３倍高い（Ｌａｍｂｅｒｔら、２０１４）。ＤＮＬは、肝細胞における細胞内リポトキシン遊離脂肪酸（ＦＦＡ）を増加させることによってＮＡＳＨの進行に寄与すると推測された。カスパーゼ－２は、ＨＭＧＣＲ（３－ヒドロキシ－３－メチルグルタリル－ＣｏＡレダクターゼ）およびＨＭＧＣＳ（ヒドロキシメチルグルタリル－ＣｏＡシンターゼ）などの脂質生成促進性酵素の転写を調節することが記載されている（Ｋｉｍ、２０１８）。したがって、カスパーゼ２阻害は、肝細胞の細胞内脂質濃度を低下させることによってＮＡＳＨへの進行を防ぐことができた。

ＮＡＳＨのインビトロ細胞モデルを使用して、脂質の細胞内蓄積を防止するカスパーゼ－２阻害剤の有効性を試験した。このモデルでは、ＨｅｐＧ２細胞を、脂質生成（グルコース、インスリン、脂肪酸）ならびに炎症性およびアポトーシス促進性（ＴＮＦ－α、ＩＬ－１βおよびＴＧＦ－β）トリガーを含む「ＮＡＳＨ条件」に２４時間曝露する。細胞は、非トリガー対照と比較して少なくとも２倍の細胞内脂質負荷の有意な増加を示す。このモデルは、ヒトＮＡＳＨ病理と相関することが示されている（Ｂｏｅｃｋｍａｎｓら、２０１９）。

ＮＡＳＨ誘発ＨｅｐＧ２培養物を１０μＭのＫＩＮ阻害剤で２４時間処理し、細胞内脂質蓄積の阻害を材料および方法に記載されているように定量化した。図４に示すように、試験した全てのカスパーゼ－２阻害剤は、ＮＡＳＨ条件下で脂質蓄積を阻害することができた。化合物１、２および３は、ＮＨ－２３－Ｃ２化合物よりも有意に高い阻害率を示した。

細胞内脂質蓄積の防止におけるカスパーゼ－２阻害剤の有効性を使用して、ＮＨ－２３－Ｃ２および化合物１の有効性を比較した。細胞をＮＡＳＨ条件および１０、２０および２５μＭのカスパーゼ－２阻害剤と共にインキュベートして、脂質蓄積に対するその保護を分析した。図５に示すように、化合物１は、ＮＡＳＨ条件下で細胞内脂質蓄積を阻害するＮＨ－２３－Ｃ２よりも良好な有効性を示した。

これらの実験結果は、カスパーゼ－２の活性を調節することができる本発明の化合物が肝細胞における脂質蓄積を効率的に阻害することであるという実験的証拠を提供する。

実施例４．動態アッセイ
－材料および方法
カスパーゼ－２基質を標準的なＳＰＰＳ手順に従って合成し、ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥し、ＤＭＳＯに溶解して２０ｍＭの最終濃度にした（Ｐｏｒｅｂａら、２０１４，ＣＤＤ）。特に、以下のカスパーゼ－２基質を合成して、本実施例を実施した：

動態アッセイの前に、基質（数μＬ）をＤＭＳＯ中で１μＭ（作業濃度）に希釈した。次に、そのような基質１μＬを９６ウェルプレートのウェルにスポットし、続けて緩衝液中のカスパーゼ－２ ９９ｍＬを添加した。酵素を添加した直後に、プレートを蛍光プレートリーダーに入れ、動的モード（励起３５５ｎｍ、発光４６０ｎｍ）で蛍光を経時的に測定した。蛍光の遊離を３０分間行い、プロットの直線部分のみを解析に取り、反応速度を算出した。最良の切断基質の割合を１００％に設定し、それに応じて他の全ての基質を調整した（切断率、％）。基質の最終濃度は１０μＭであり、カスパーゼ－２の最終濃度は１０ｎＭであった。カスパーゼ－２アッセイ緩衝液は、２０ｍＭ Ｐｉｐｅｓ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、スクロース１０％（ｗ／ｖ）、１０ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．２～７．４であった。カスパーゼ－２を緩衝液中３７℃で１５分間予備インキュベートした後、基質に添加した。

結果
結果を図６に要約し、以下の表に詳細に示す：

データの信頼性を保証するために、全てのカスパーゼ２基質を独立して作製した（合成、精製、ＤＭＳＯでの希釈）。参照比較値は、この特定の一連の基質、すなわちＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）－Ｄａｂ－Ａｓｐ－ＡＣＣからの最良の基質の加水分解速度である。この実施例から、以下のスキャフォールドＮＨ－Ｉｄｃ－Ｐ４－Ｐ３－Ｄａｂ－Ａｓｐ－ＡＣＣを有するペンタペプチドを使用する場合、位置Ｐ４は非常に好ましくはｈＧｌｕであり、Ｐ３は、化合物Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）、Ｇｌｕ（ｍｅ）、ＧｌｕまたはＶａｌ（Ａｂｕも同様）の少なくともいずれかに対して開いたままにすることができることが明らかである。これは、図７にさらに示されている。

実施例５．
－材料および方法
一般式ＮＨ－Ｉｄｃ－Ｐ４－Ｍｉｘ－Ｄａｂ－Ａｓｐ－ＡＣＣ［式中、Ｐ４は、Ａｓｐ、ｈＧｌｕ、Ｉｌｅ、ＬｅｕまたはｈＬｅｕのいずれかであった］を有する一連のカスパーゼ－２基質；Ｍｉｘは天然アミノ酸の等モル混合物であり、ＡＣＣは蛍光タグであり、Ｐｏｒｅｂａら、ＣＤＤ，２０１４に記載されている一般的な方法に従って固体支持体上で合成した。５００ｍｇ（１当量、０．２４ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ樹脂（０．４８ｍｏｌ／ｇ）を固相合成のためにガラスカートリッジに入れ、ＤＣＭ中で３０分間膨潤させた。次いで、ＤＣＭを排水し、樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。次に、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して、Ｆｍｏｃ－保護基を３サイクルで除去し（５分、５分、および２５分）、樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。約２．５当量のＦｍｏｃ－ＡＣＣ－ＯＨ（０．６ｍｍｏｌ、２６５ｍｇ）を、最小量のＤＭＦ中２．５当量のＨＡＴＵ（０．６ｍｍｏｌ、２２８ｍｇ）および２．５当量の２，４，６－コリジン（０．６ｍｍｏｌ、８０μＬ）で３分間予備活性化し、樹脂に注いだ。反応を４時間行い、続けて濾過し、樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。この後、樹脂をＤＭＦで３回洗浄し、ニンヒドリン試験を行って完全なＦｍｏｃ－ＡＣＣ－ＯＨカップリングを確認した。次いで、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用してＡＣＣからＦｍｏｃ基を除去し、続けて樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。次に、２．５当量のＦｍｏｃ－Ｌ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ（０．６ｍｍｏｌ、２４７ｍｇ）を、ＤＭＦ中２．５当量のＨＡＴＵ（０．６ｍｍｏｌ、２２８ｍｇ）および２．５当量の２，４，６－コリジン（０．６ｍｍｏｌ、８０ｍＬ）で３分間予備インキュベートし、Ｈ２Ｎ－ＡＣＣ樹脂に注いだ。反応を２４時間実施し、１．５当量のＦｍｏｃ－Ｌ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ／ＨＡＴＵ／２，４，６－コリジン試薬を使用してさらに２４時間繰り返した。次いで、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＡＣＣ樹脂をＤＭＦで３回洗浄し、続けてＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ脱保護し、樹脂をＤＭＦで６回、洗浄した。次に、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－ＯＨをＰ２位にカップリングした。２．５当量のこのアミノ酸（０．６ｍｍｏｌ、２６４ｍｇ）、２．５当量のＨＡＴＵ（０．６ｍｍｏｌ、２２９ｍｇ）、および２．５当量の２，４，６－コリジン（０．６ｍｍｏｌ、８０ｍＬ）をＤＭＦに希釈し、Ｈ２Ｎ－ｍｉｘ－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＡＣＣ樹脂に注いだ。反応を３時間行い、続けてスラリーをＤＭＦで洗浄し（６回）、ニンヒドリン試験を行って完全なカップリングを確認した。ＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ基を除去し、樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。１９個の天然アミノ酸（システインを除外し、メチオニンを模倣するノルロイシンを含む）の等速混合物をＰ３位にカップリングした。これを行うために、５当量の等速混合物（１．２ｍｍｏｌ）、５当量のＨＯＢｔ（１．２ｍｍｏｌ、１８０ｍｇ）、および５当量のＤＩＣＩ（１．２ｍｍｏｌ、１６０μＬ）をＤＭＦで希釈し、３分間予備活性化した。次いで、混合物を樹脂上に注ぎ、カートリッジを３時間撹拌した。スラリーを濾過し、ＤＭＦで３回洗浄した。Ｐ３の完全なカップリングをニンヒドリン試験によって確認した。次に、ＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ基を除去し、Ｈ２Ｎ－Ｍｉｘ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＡＣＣ樹脂を５つの部分（各々０．０５ｍｍｏｌ）に分割した。ＭｕｌｔｉＣｈｅｍ ４８ウェル合成装置（ＳｃｉＧｅｎｅのＦｌｅｘＣｈｅｍ、米国カリフォルニア州）を使用してＰ４カップリングを行った。樹脂の５つの部分を４８ウェルカートリッジに入れ、ＤＣＭで３０分間膨潤させた。次いで、ＤＣＭを濾過し、樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。５本の１．５ｍＬチューブにおいて、２．５当量の種々のアミノ酸（０．１２ｍｍｏｌ）を、２．５当量のＨＡＴＵ（０．１２ｍｍｏｌ、４６ｍｇ）および２．５当量の２，４，６－コリジン（０．１２ｍｍｏｌ、１６μＬ）を含有する１ｍＬのＤＭＦと混合し、樹脂に注いだ。Ｐ４カップリング反応を４時間行い、続けてニンヒドリン試験を行った。最後に、ＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ基を除去し、樹脂をＤＭＦで６回洗浄した。次に、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｉｄｃ－ＯＨをＰ５位にカップリングした。２．５当量のこのアミノ酸（０．６ｍｍｏｌ、２３１ｍｇ）、２．５当量のＨＡＴＵ（０．６ｍｍｏｌ、２２９ｍｇ）、および２．５当量の２，４，６－コリジン（０．６ｍｍｏｌ、８０ｍＬ）をＤＭＦに希釈し、Ｈ２Ｎ－Ｐ４－Ｍｉｘ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－Ａｓｐ（ｔＢｕ）－ＡＣＣ樹脂の各部分に注いだ。反応を３時間行い、続けてスラリーをＤＭＦで洗浄し（６回）、ニンヒドリン試験を行って完全なカップリングを確認した。ＤＭＦ中２０％ピペリジンでＦｍｏｃ基を除去し、樹脂をＤＭＦで６回、ＤＣＭで３回、ＭｅＯＨで３回洗浄した。樹脂をデシケーター中でＰ２Ｏ５上で一晩乾燥させた。氷冷ＴＦＡ／ＴＰＳ／水（％ｖ／ｖ／ｖ、９５／２．５／２．５）混合物を２時間使用して（１５分に１回振盪）、全ての基質を樹脂から切断した。各ウェルからの溶液を別々に回収し、残りの樹脂をＴＦＡで洗浄した。次いで、基板を氷冷Ｅｔ２Ｏで３０分間沈殿させ、遠心分離した。次に、上清を廃棄し、ペレットを氷冷Ｅｔ２Ｏに再懸濁し、再度遠心分離した。次いで、上清を廃棄し、ペレットを乾燥させ、５ｍＬの１：１ 水：ＡＣＮ混合物に溶解し、－８０℃で凍結し、凍結乾燥した。次いで、最終生成物（白色粉末）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に最終濃度１０ｍＭまで溶解し、使用するまで－８０℃で保存した。

１μＬの基質（１０ｍＭ）を９６ウェルプレートのウェルにスポットし、続けて緩衝液中のカスパーゼ－２ ９９ｍＬを添加した。酵素を添加した直後に、プレートを蛍光プレートリーダーに入れ、動的モード（励起３５５ｎｍ、発光４６０ｎｍ）で蛍光を経時的に測定した。蛍光の遊離を３０分間行い、プロットの直線部分のみを解析に取り、反応速度を算出した。最良の切断基質の割合を１００％に設定し、それに応じて他の全ての基質を調整した（切断率、％）。
この特定の合成で使用される等速混合物の組成（総量－１．２ｍｍｏｌ）

基質の最終濃度は１０μＭであり、カスパーゼ－２の最終濃度は１０ｎＭであった。カスパーゼ－２アッセイ緩衝液は、２０ｍＭ Ｐｉｐｅｓ、１００ｍＭ ＮａＣｌ、スクロース１０％（ｗ／ｖ）、１０ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．２～７．４であった。カスパーゼ－２を緩衝液中３７℃で１５分間予備インキュベートした後、基質に添加した。
結果を図８（左パネル）および以下の表に示す：

上記の表から、Ｐ４は、Ａｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｇｌｎ（グルタミン）、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）およびＶａｌ（バリン）からなる群より選択される任意の天然アミノ酸であり得るＰ３で使用される天然アミノ酸とは無関係にｈＧｌｕでなければならないことが明らかである。

最後に、実施例４および５に示される各シリーズの最良の基質の加水分解速度をよりよく表すために、１００％に設定し、それに応じて他の基質を調整した結果を図８に示す。

Claims (26)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   の化合物
   またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であって、
   式中、
   －ｎは、１、２、３または４であり、
   －Ａはアミン基であり、
   式中、
   Ｐ５は、式（ＩＩＩ）：
   

   

   の化合物であり、
   式中、ＡおよびＢは水素原子であり、Ｈ、ＪおよびＫは炭素原子であり、点線は存在してもしなくてもよい結合を表し、存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成し、
   Ｐ４はｈＧｌｕ（ホモグルタミン酸）であり、ここで、このアミノ酸残基は脱プロトン化またはプロトン化形態であってもよく、
   Ｐ１はＡｓｐまたはアスパラギン酸であり、このアミノ酸残基はプロトン化または脱プロトン化形態であってもよく、
   Ｐ３は、グルタミン酸シクロヘキシルエステル（Ｇｌｕ（Ｃｈｘ））、Ｌ－グルタミン酸メチルエステル（Ｇｌｕ（ｍｅ））、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）（トレオニンベンジルエーテル）、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、またはＡｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｇｌｕ（グルタミン酸）、Ｇｌｎ（グルタミン）、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）およびＶａｌ（バリン）からなる群より選択される任意の天然アミノ酸から選択され、
   式中、
   Ｒ１は、
   

   

   からなる群より選択され、
   式中、
   ｑは、０、１、２、３、４または５であり、
   各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２およびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択され、
   Ｚ_２はハロゲンであり、
   Ｚ_３は、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_６－１０アリールおよび（Ｃ_６－１０）アリールまたは（Ｃ_１－６）アルキルから選択されるか、
   または式：
   

   

   の化合物からのものであり、
   式中、
   Ｗは、－ＮＨ－および－Ｏ－から選択され、
   Ｒ１０～Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ１～６アルキルおよびＣ３－７シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＯＯＨ、－ＣＨ_２ＣＯＮＨＲ１４、およびＣＨ_２ＯＲ１４から独立して選択され、
   Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ１－６アルキルおよびＣ３－７シクロアルキルから選択される、化合物。
2. Ｒ１が、式：
   

   

   の化合物を有し、
   式中、
   ｑは、０、１、２、３または４であり、
   各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから選択されるか、または
   代替的に、Ｒ１は、式：
   

   

   の化合物である、請求項１に記載の化合物。
3. Ｐ３が、グルタミン酸シクロヘキシルエステル（Ｇｌｕ（Ｃｈｘ））、Ｌ－グルタミン酸メチルエステル（Ｇｌｕ（ｍｅ））、ＧｌｕまたはＴｈｒ（Ｂｚｌ）（トレオニンベンジルエーテル）から選択される、請求項１または２に記載の化合物。
4. Ｐ３が、Ａｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｇｌｎ（グルタミン）、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）およびＶａｌ（バリン）からなる群より選択される任意の天然アミノ酸から選択される、請求項１または２に記載の化合物。
5. ｎが、２、３または４である、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
6. 前記化合物が、式（ＩＸ）：
   

   

   の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であって、
   式中、
   Ｒ２およびＲ３は、独立してＨであり、Ｒ２およびＲ_３は、存在しなくてもよく、その結果、脱プロトン化形態ＣＯ（Ｏ－）が生じ、
   式中、
   ｎは、１、２、３または４であり、
   Ａはアミン基であり、
   Ｒ１は、式
   

   

   の基から選択され、
   式中、各Ｚ_１は、Ｃ_１－６アルキル、ハロゲン、－ＣＮおよびＣ_１－６アルコキシルから独立して選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
7. 前記化合物が、以下の化合物
   ａ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１
   ｂ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１
   ｃ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ（ｍｅ）－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１
   ｄ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｖａｌ－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１
   のいずれかまたはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体から選択され、
   式中、Ｐ２は、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、またはジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
8. 前記化合物が、以下の化合物
   ａ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１
   ｂ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１
   ｃ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ（ｍｅ）－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１
   のいずれかまたはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体から選択され、
   式中、Ｐ２は、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、またはジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
9. 前記化合物が、以下の化合物
   ａ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ（Ｃｈｘ）－Ｄａｂ－Ａｓｐ－Ｒ１；
   ｂ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ－Ｄａｂ－Ａｓｐ－Ｒ１；および／または
   ｃ．ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｇｌｕ（ｍｅ）－Ｄａｂ－Ａｓｐ－Ｒ１
   のいずれかまたはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
10. 前記化合物が、ＮＨ－Ｉｄｃ－ｈＧｌｕ－Ｍｉｘ－Ｐ２－Ａｓｐ－Ｒ１またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり、式中、Ｐ２は、リジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、またはジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）から選択され、Ｍｉｘは、Ａｌａ（アラニン）、Ａｒｇ（アルギニン）、Ａｓｎ（アスパラギン）、Ａｓｐ（アスパラギン酸）、Ｇｌｎ（グルタミン）、Ｇｌｙ（グリシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｉｌｅ（イソロイシン）、Ｌｅｕ（ロイシン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、Ｐｈｅ（フェニルアラニン）、Ｐｒｏ（プロリン）、Ｓｅｒ（セリン）、Ｔｈｒ（トレオニン）、Ｔｒｐ（トリプトファン）、Ｔｙｒ（チロシン）およびＶａｌ（バリン）からなる群より選択される任意の天然アミノ酸である、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
11. Ｐ２がリジン（Ｌｙｓ）、オルニチン（Ｏｒｎ）またはジアミノ酪酸（Ｄａｂ）である、請求項６から８または１０のいずれか一項に記載の化合物。
12. Ｒ１が式
    

    

    を有し、Ｍｅがメチル（ＣＨ_３）基である、請求項７から１１のいずれか一項に記載の化合物。
13. 前記化合物が、式
    

    

    の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり、
    式中、点線は、存在してもしなくてもよい結合を表し、存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成する、請求項６に記載の化合物。
14. 前記化合物が、式
    

    

    の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり、
    式中、点線は、存在してもしなくてもよい結合を表し、存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成する、請求項６に記載の化合物。
15. 前記化合物が、式
    

    

    の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは立体異性体であり、
    式中、点線は、存在してもしなくてもよい結合を表し、存在する場合、それは既に存在する単結合と組み合わせて二重結合を形成する、請求項６に記載の化合物。
16. Ｒ１が式
    

    

    のみからなる、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の化合物。
17. 前記化合物中の全てのアミノ酸がＬ配置である、先行する請求項のいずれかに記載の化合物。
18. 請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物と、場合により薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬組成物。
19. 請求項１６に記載の化合物と薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬組成物。
20. 医薬品として使用するための、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
21. 医薬品として使用するための、請求項１６に記載の化合物。
22. 変性疾患、例えばアルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、軽度認知障害、筋萎縮性側索硬化症およびクロイツフェルト・ヤコブ病；新生児脳損傷、特に新生児脳虚血；外傷性脳損傷；腎臓虚血；低酸素虚血損傷；脳卒中様状況脳損傷；心臓虚血；心筋梗塞；筋萎縮性側索硬化症；網膜損傷；眼疾患、例えば鈍的眼損傷、虚血性視神経症および緑内障；皮膚損傷；無菌性炎症性疾患、例えば糖尿病、アテローム性動脈硬化症、心筋虚血、痛風、偽痛風、関節弛緩、アテローム性動脈硬化症、アルミニウム塩によってトリガーされる症候群、非動脈炎性虚血性視神経症、緑内障および代謝性疾患；非無菌性炎症性疾患、例えば細菌感染、特に細孔形成毒素を産生する細菌による感染、インフルエンザウイルス感染および一本鎖ＲＮＡラブドウイルス科感染、例えばマラバウイルスまたは水疱性口内炎ウイルス；病原性細菌によって引き起こされる疾患、例えばブルセラ菌、黄色ブドウ球菌およびサルモネラ菌；脂質異常症；肥満；メタボリックシンドローム；および非アルコール性脂肪性肝疾患、例えば非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）および非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝硬変、原発性硬化性胆管炎および肝細胞癌の予防および／または処置に使用するための、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
23. 脂質異常症、肥満、メタボリックシンドローム、肝硬変、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防および／または処置に使用するための、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
24. 脂質異常症、肥満、メタボリックシンドローム、肝硬変、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防および／または処置に使用するための、請求項１６に記載の化合物。
25. 非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防および／または処置に使用するための、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
26. 非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の予防および／または処置に使用するための、請求項１６に記載の化合物。
    

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