JP2024521598A - 粘膜免疫応答のためのワクチン組成物 - Google Patents

Abstract

凍結乾燥されたアデノウイルスベースの発現ベクターと、アラゴナイトなどの安定化化合物とを含むワクチン組成物が提供される。ワクチン組成物の担持及び送達のための、アラゴナイトから作製された固体剤形を含む組成物がさらに提供される。【選択図】 図３－１

Description

関連出願の相互参照
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下、２０２０年１０月２３日に出願された米国仮特許出願第６３／１０４，７７０号明細書及び２０２０年９月２４日に出願された米国仮特許出願第６３／０８２，９０７号明細書に対する優先権の利益を主張し、その各々は、参照により本明細書に援用される。

本開示は、概して、ワクチン組成物の分野に関する。特に、本開示は、安定性及び投与の容易性が改善されたワクチン組成物並びに効率的な投与及び製造のためのワクチンの固体剤形に関する。

配列表の参照
本願は、２０２１年１０月２２日に作成された配列表テキストファイル「８７７４－１６－ＰＣＴ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」、ファイルサイズ３０，０００バイト（Ｂ）として、本明細書とともに同時に提出されたアミノ酸配列及び／又は核酸配列への参照を含む。前述の配列表は、米国特許法施行規則第１．５２条（ｅ）（５）に従い、その全体が参照により本明細書に援用される。

ワクチンは、培養物を放置し、それにより感染性微生物の毒性を弱毒化することによって作製することができる。しかし、最近では、抗原タンパク質を産生し、且つ種々の感染性微生物に対して抗原タンパク質を発現することができるウイルスベクターを産生するために現代の組換え技術が使用されている。

ワクチンを製造するために使用される方法又は技術に関係なく、持続的な課題は、有効性を保持しながらワクチンを保管する能力である。現在、ワクチンの有効性の維持の重要な部分は、高額の冷蔵システムのチェーンに依存している。そのような高額のサプライチェーンの必要性を減らすために、製造業者は、試みとしてワクチンに化学安定化剤を添加した。しかし、そのような賦形剤は、毒性を有し、アレルギー反応を誘発することが多い。

ワクチン接種のプロトコルは、安定性に加えて、送達経路に関する問題を抱えている。多くのワクチンが注射によって投与されるが、これは、多くの人々に好まれていない。

ワクチンは、従来、筋肉内、皮内又は皮下注射によって送達される。これらの注射は、強力な全身免疫応答を生じさせることができるが、粘膜免疫応答を誘発するための有効性が様々であり、特にサブユニットワクチンについては、弱いか又は検出不能であることが多い。抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）及びＢ細胞によって産生される抗体は、注射されたワクチンを処理した流入領域リンパ節から身体の様々な器官に遊走することができるが、様々な（例えば、生殖器、腸、呼吸器の）粘膜組織へのそれらの遊走は、不適切なホーミング粘膜受容体及び走化性が原因で制限されるか又は不可能であることが多い。しかしながら、非経口の免疫化経路ともみなされる鼻腔内経路は、幾つかの相互連絡を共有する呼吸路、生殖路及び腸管で良好な粘膜免疫応答を誘発することができ、これは、ワクチンが粘膜部位で送達される場合、より達成可能である。したがって、そのような非経口ワクチンは、場合により、粘膜病原体に対抗して防御を提供することができる。

ほとんどの病原体（例えば、ＣＯＶＩＤ１９）は、粘膜組織（口腔、呼吸器、生殖器及び関心が粘膜組織を通して身体に入る（口道、呼吸路、生殖路及び腸管）を通して身体に入り、病原体の多くは、粘膜組織中でのみ複製するため、粘膜ワクチン接種は、局所及び遠位の粘膜部位で自然免疫応答（例えば、ＮＫ細胞）及び適応免疫応答（Ｔ細胞及びＢ細胞）の両方を誘発することにより、第一線の防護を最適に誘導することができる。

現在承認されている新型コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）のワクチンを考えても、迅速且つ世界規模のワクチンの配布及び投与は、依然として困難である。世界規模の免疫化は、製造及び／又は保管のコスト並びに必要条件を含む多くの要因のため、現在承認されているワクチンでは依然として達成されていない。

粘膜ワクチン送達（頬側粘膜、舌下粘膜、鼻粘膜、口腔粘膜又は腟粘膜を介する）は、局所及び遠位の抗体免疫応答並びに全身免疫応答を誘発する手段として関心が高まっている。加えて、固体剤形による粘膜ワクチン送達（例えば、頬側／舌下錠、経口錠又はカプセル剤、腟挿入剤）は、集団免疫化の可能性、患者コンプライアンス、使いやすさ、製品保存期間の安定性、コールドチェーンに依存しない性能など、複数の利点を提供することができる。さらに、粘膜ワクチン送達は、針注射恐怖を有する患者に適切であり得、患者は、適切な説明を受けてワクチンを自己投与することができる。頬側／舌下経路は、薬物及び低分子を血流に送達するために長年にわたって使用されてきたが、ワクチンの粘膜送達の手段としてのその適用は、従来法として開発されていない。

粉末剤、錠剤又はカプセル剤を含む薬物送達のための固体剤形は、投与時に崩壊及び活性成分（例えば、ワクチン）の放出を必要とする。同時に、活性成分を担持した剤形は、製造時から投与までの輸送及び保管中に安定していなければならない。このため、固体剤形の使用は、固体剤形に担持され、その後、水性溶液（例えば、水、唾液又は粘液）中に容易に崩壊する活性成分の安定性を必要とする。

したがって、安定性が改善され、且つ投与の容易性が改善され、それによりワクチン接種率の有効性を増強するワクチン組成物が必要とされている。さらに、ワクチン担持に適合するプラットフォームとなり、崩壊（投与）前に安定であり、容易に崩壊し、製造コストが低く、有効な世界規模の免疫化のために投与が容易な改善された固体ワクチン剤形が必要とされている。本開示は、これらの必要性に対処し、さらなる有益性も提供する。

一実施形態は、凍結乾燥されたアデノウイルスベクターと、カーボナイト鉱物を含む賦形剤とを含む組成物であって、アデノウイルスベクターは、異種タンパク質の少なくとも一部分をコードする核酸分子を含む、組成物に関する。

一態様において、アデノウイルスベクターは、アデノウイルス５型に由来し、アデノウイルスは、Ｅ１、Ｅ２ｂ及びＥ３領域に欠失を有する。

様々な態様において、異種タンパク質は、ウイルスに由来する。

様々な態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＫＵ１及びインフルエンザウイルスからなる群から選択されるウイルスに由来する。

様々な態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に由来する。一部の態様において、異種タンパク質は、スパイク（Ｓ）タンパク質、ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質又は膜（Ｍ）タンパク質である。さらに別の態様において、異種タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４と少なくとも８０％、任意選択により少なくとも８５％、任意選択により少なくとも９０％、任意選択により少なくとも９５％、任意選択により少なくとも９７％又はさらに１００％同一である。

様々な態様において、アデノウイルスベクターは、０．５％～５％の残留水分量を有する。一態様において、アデノウイルスベクターは、５％未満の残留水分を有する。さらに別の態様において、アデノウイルスベクターは、３％未満の残留水分を有する。

様々な態様において、カーボナイト鉱物は、斜方格子を有する。一態様において、カーボナイト鉱物は、アラゴナイト、セルサイト、ストロンチアナイト、ウィゼライト及びラサフォーディーンからなる群から選択される。一態様において、カーボナイト鉱物は、アラゴナイトである。

様々な態様において、賦形剤は、ラクトース、スクロース、ステアリン酸マグネシウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、デキストロース、マルトデキストリン、マルチトール及び植物セルロースからなる群から選択される１つ又は複数の化合物を含む。

様々な態様において、賦形剤は、ラクトース、スクロース、ステアリン酸マグネシウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、デキストロース、マルトデキストリン、マルチトール及び植物セルロースからなる群から選択される１つ又は複数の化合物を欠く。

様々な態様において、組成物は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、スクロース、ジメチルグリシン、グリシン、メチルスルホニルメタン及び酵母溶解物からなる群から選択される１つ又は複数の化合物を含む。

別の実施形態は、本明細書に開示されている組成物を含むカプセル剤に関する。一態様において、カプセル剤は、腸溶性コーティングされる。さらに別の態様において、カプセル剤は、アルギネートを含む。

別の実施形態は、ワクチン組成物の経口、舌下又は頬側投与によるワクチン組成物の送達のための固体剤形であって、二酸化炭素（ＣＯ２）を含浸されている複数のアラゴナイト粒子を含むアラゴナイト組成物と、アラゴナイト組成物と混合されている生体適合性ポリマー及び崩壊剤とを含み、ワクチン組成物をさらに含み、及び粉末剤、錠剤又はカプセル剤である、固体剤形に関する。

一態様において、固体剤形は、少なくとも１つの添加剤をさらに含み、且つ製剤化されてトローチ剤を形成する。

固体剤形の別の態様において、複数のアラゴナイト粒子は、１００ｎｍ～１ｍｍの平均粒径を有する。

固体剤形の様々な態様において、生体適合性ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド６６（ナイロン）、ポリカプロラクタム、ポリカプロラクトン、アクリルポリマー、アクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリベンゾイミダゾール、ポリカーボネート、ポリフェニレンオキシド／スルフィド、ポリプロピレン、テフロン(登録商標)、ポリ乳酸、脂肪族ポリエステル、例えばポリヒドロキシブチレート、ポリ－３－ヒドロキシブチレート（Ｐ３ＨＢ）、ポリヒドロキシバレレート、ポリヒドロキシブチレート－ポリヒドロキシバレレートコポリマー、ポリ（３－ヒドロキシブチレート－ｃｏ－３－ヒドロキシバレレート）、ポリグリコネート、ポリ（ジオキサノン）及びそれらの混合物から選択される。

固体剤形の一態様において、生体適合性ポリマーは、ＰＬＡである。固体剤形の一態様において、生体適合性ポリマーは、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０ Ｄ－５５（Ｅｖｏｎｉｋ）である。

固体剤形の様々な態様において、崩壊剤は、デンプン、変性セルロースガム、不溶性架橋ポリビニルピロリドン、デンプングリコレート、微結晶セルロース、アルファ化デンプン、カルボキシメチルデンプンナトリウム、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、Ｎ－ビニル－２－ピロリドンのホモポリマー、アルキル－、ヒドロキシアルキル－、カルボキシアルキル－セルロースエステル、アルギネート及び微結晶セルロース並びにその多形から選択される。

固体剤形の一態様において、崩壊剤は、エンドウマメデンプンである。

固体剤形の一態様において、ワクチン組成物は、ウイルスタンパク質又はその断片をコードする組換えウイルス発現コンストラクトを含む。一態様において、ウイルスタンパク質又はその断片は、コロナウイルスタンパク質又はその断片に対応する。さらに別の態様において、コロナウイルスタンパク質又はその断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ウイルス結合タンパク質である。一態様において、組換えＡＣＥ２タンパク質は、配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を有する。さらに別の態様において、組換えＡＣＥ２タンパク質は、配列番号６の配列を含む。さらに別の態様において、組換えＡＣＥ２タンパク質は、Ｔ２７Ｆ、Ｔ２７Ｗ、Ｔ２７Ｙ、Ｄ３０Ｅ、Ｈ３４Ｅ、Ｈ３４Ｆ、Ｈ３４Ｋ、Ｈ３４Ｍ、Ｈ３４Ｗ、Ｈ３４Ｙ、Ｄ３８Ｅ、Ｄ３８Ｍ、Ｄ３８Ｗ、Ｑ２４Ｌ、Ｄ３０Ｌ、Ｈ３４Ａ及びＤ３５５Ｌから選択される少なくとも１つの変異を含む。

固体剤形の一態様において、ワクチン組成物は、アデノウイルス発現コンストラクトを含む。

別の実施形態は、ワクチンを担持するための固体剤形を作製する方法であって、二酸化炭素（ＣＯ２）を含浸されている複数のアラゴナイト粒子を含むアラゴナイト組成物を提供するステップ、アラゴナイト組成物を生体適合性ポリマー及び崩壊剤と混合して、固体剤形を形成するステップ及びワクチン組成物を固体剤形に添加するステップを含む方法に関する。

固体剤形を作製する方法の一態様において、アラゴナイト組成物を生体適合性ポリマー及び崩壊剤と混合するステップは、ホットメルト押出を含む。

固体剤形を作製する方法の別の態様において、固体剤形は、粉末剤、錠剤又はカプセル剤である。

固体剤形を作製する方法のさらに別の態様において、固体剤形は、錠剤であり、方法は、固体剤形を圧密化するステップをさらに含む。

固体剤形を作製する方法の別の態様において、アラゴナイト組成物及び生体適合性ポリマーは、９５：５～５：９５の重量比である。

固体剤形を作製する方法のさらに別の態様において、複数のアラゴナイト粒子は、１００ｎｍ～１ｍｍの平均粒径を有する。

固体剤形を作製する方法の別の態様において、生体適合性ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド６６（ナイロン）、ポリカプロラクタム、ポリカプロラクトン、アクリルポリマー、アクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリベンゾイミダゾール、ポリカーボネート、ポリフェニレンオキシド／スルフィド、ポリプロピレン、テフロン(登録商標)、ポリ乳酸、脂肪族ポリエステル、例えばポリヒドロキシブチレート、ポリ－３－ヒドロキシブチレート（Ｐ３ＨＢ）、ポリヒドロキシバレレート、ポリヒドロキシブチレート－ポリヒドロキシバレレートコポリマー、ポリ（３－ヒドロキシブチレート－ｃｏ－３－ヒドロキシバレレート）、ポリグリコネート、ポリ（ジオキサノン）及びそれらの混合物から選択される。

固体剤形を作製する方法のさらに別の態様において、生体適合性ポリマーは、ＰＬＡである。固体剤形のさらに別の態様において、生体適合性ポリマーは、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０ Ｄ－５５（Ｅｖｏｎｉｋ）である。

固体剤形を作製する方法のさらに別の態様において、崩壊剤は、デンプン、変性セルロースガム、不溶性架橋ポリビニルピロリドン、デンプングリコレート、微結晶セルロース、アルファ化デンプン、カルボキシメチルデンプンナトリウム、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、Ｎ－ビニル－２－ピロリドンのホモポリマー、アルキル－、ヒドロキシアルキル－、カルボキシアルキル－セルロースエステル、アルギネート及び微結晶セルロース並びにその多形から選択される。

固体剤形を作製する方法のさらに別の態様において、崩壊剤は、エンドウマメデンプンである。

固体剤形を作製する方法の一態様において、ワクチン組成物は、ウイルスタンパク質又はその断片をコードする組換えウイルス発現コンストラクトを含む。一態様において、ウイルスタンパク質又はその断片は、コロナウイルスタンパク質又はその断片に対応する。さらに別の態様において、コロナウイルスタンパク質又はその断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ウイルス結合タンパク質である。一態様において、組換えＡＣＥ２タンパク質は、配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を有する。さらに別の態様において、組換えＡＣＥ２タンパク質は、配列番号６の配列を含む。さらに別の態様において、組換えＡＣＥ２タンパク質は、Ｔ２７Ｆ、Ｔ２７Ｗ、Ｔ２７Ｙ、Ｄ３０Ｅ、Ｈ３４Ｅ、Ｈ３４Ｆ、Ｈ３４Ｋ、Ｈ３４Ｍ、Ｈ３４Ｗ、Ｈ３４Ｙ、Ｄ３８Ｅ、Ｄ３８Ｍ、Ｄ３８Ｗ、Ｑ２４Ｌ、Ｄ３０Ｌ、Ｈ３４Ａ及びＤ３５５Ｌから選択される少なくとも１つの変異を含む。

固体剤形を作製する方法の一態様において、ワクチン組成物は、アデノウイルス発現コンストラクトを含む。

本明細書に記載される方法及び／又は組成物との関連で論じられる実施形態は、本明細書に記載される任意の他の方法又は組成物に関して使用され得る。したがって、１つの方法又は組成物に関連する実施形態は、他の方法及び組成物にも適用することができる。

他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、当然のことながら、その詳細な説明及び具体的な例は、特定の実施形態を示しながら、例としてのみ与えられ、なぜなら、本発明の趣旨及び範囲内の様々な変更形態及び変形形態がこの詳細な説明から当業者に明らかになるためである。

示されているように、カルサイト、アラゴナイト及びヴァテライトの各々についてＣａＣＯ_３の化学構造及び対称性を示す。 本開示の実施形態に従い、押出フィラメントの三次元（３Ｄ）プリンティングによって形成された、４０％アラゴナイトを含有する生体適合性バイオプラスチックアラゴナイト組成物の写真である。 本開示の実施形態に従い、押出フィラメントの三次元（３Ｄ）プリンティングによって形成された、４０％アラゴナイトを含有する生体適合性バイオプラスチックアラゴナイト組成物の写真である。 アラゴナイト又はラクトースのいずれかとともにカプセル剤中に充填した、既知のウイルス力価の凍結乾燥されたアデノウイルスベクター（Ａｄ５）の結果を示す。以下のアラゴナイト又はラクトースの配合剤を使用した、感染単位／グラム（酸なし（図３Ａ）若しくは酸あり（図３Ｃ））又はウイルス回収のパーセンテージ（酸なし（図３Ｂ）若しくは酸あり（図３Ｄ）が示されている。アラゴナイト、コーティング（Ｃ）１（０．３５７ｇ乾燥、粉末、ｐＨ８．８１）、アラゴナイト（Ｃ）５（０．４２５ｇ乾燥、粉末、ｐＨ８．８４）、ラクトース、非コーティング（ＮＣ）４（０．８０２３ｇ、液体、ｐＨ２．１４）、アラゴナイト（ＮＣ）６（０．５４５ｇ、ペースト、ｐＨ７．７８）、アラゴナイト（ＮＣ）７（０．６２９ｇ、ペースト、ｐＨ７．７９）及びアラゴナイト（ＮＣ）８（０．８０１ｇ、ペースト、ｐＨ７．００）。アラゴナイトとともに配合された試料は、酸に曝露された場合に＞／＝７ｐＨに維持された。各棒は、１つのカプセル剤である。 図３－１の続き。 図３－２の続き。 図３－３の続き。

以下の節では、様々な態様をより詳細に記載する。明らかに否定されていない限り、各態様は、任意の他の１つ又は複数の態様と組み合わせることができる。特に、好ましい又は有利であると示されている特徴のいずれも、好ましい又は有利であると示されている特徴の任意の他の特徴と組み合わせることができる。

本開示のある特定の特徴は、別々の実施形態の内容において記載されるが、単一の実施形態に組み合わされて提供されることもある。逆に、単一の実施形態の内容において記載される本開示の様々な特徴は、別々に又は任意の適切な部分組み合わせで提供されることもある。開示されている実施形態の全ての組み合わせは、明確に本開示によって包含され、あらゆる組み合わせが個別に且つ明示的に開示されているかのように本明細書に開示される。加えて、全ての部分組み合わせも明確に本開示によって包含され、あらゆるそのような部分組み合わせが個別に且つ明示的に開示されているかのように本明細書に開示される。

本開示は、本明細書に記載される特定の実施形態に限定されない。特定の実施形態を説明するためにのみ本明細書に使用される専門用語は、限定を意図するものではない。本明細書に記載される刊行物は、単に本願の出願日以前のそれらの開示についてのみ提示される。本明細書は、事前の開示を理由として本開示がそのような刊行物に先行する権利がないと認めるものではない。さらに、提示された刊行日は、実際の刊行日と異なる場合があり、それは、個別に確認される必要があり得る。本明細書に記載される全ての刊行物は、刊行物がそれに関して引用されている方法及び／又は材料を開示し、記載するために、参照により本明細書に援用される。

別段の定めがない限り、本明細書に使用される全ての技術用語及び科学用語は、通常のワクチン科学者に共通に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似の又は等しい任意の方法及び材料も、本明細書に開示されているワクチンの実施又は試験に使用することができるが、好ましい方法及び材料が以下に記載される。

本明細書に開示されているように、ワクチン組成物は、安定しており、投与が容易な形態で提供される。より具体的には、組換えウイルス由来のワクチンを凍結乾燥させ、且つワクチンを適切な安定化化合物と組み合わせることにより、安定であり、安定した保管、輸送及び容易な投与のためにパッケージすることができる組成物を生成する。このため、本開示の組成物は、アデノウイルスベクターを凍結乾燥させ、且つアデノウイルスベクターをアラゴナイトなどのカーボナイト鉱物と組み合わせることによって生成することができる。したがって、本開示の組成物は一般に、凍結乾燥されたアデノウイルスベクター及びアラゴナイトなどのカーボナイト鉱物を含む。

主題は、保管中に安定であり、容易に投与され（例えば、自己投与され）、且つ粘膜投与（例えば、舌下又は頬側投与）時又は摂取のための水性溶液において、容易に崩壊する固体剤形（例えば、粉末剤、錠剤又はカプセル剤）を形成するために、アラゴナイトを使用してワクチンの剤形を生成するための組成物及び方法をさらに含む。

特に、発明の主題は、複数のアラゴナイト粒子で作製されたアラゴナイト組成物を対象とし、アラゴナイト粒子は、ワクチン組成物を担持させることが可能であり、粉末剤、錠剤又はカプセル剤の形態の固体製剤ワクチンをもたらす。例示的な実施形態では、ワクチン組成物は、コロナウイルスに対して免疫を与える。より具体的には、ワクチン組成物は、関連する感染症／疾患に対応する抗原を発現するための組換えウイルス発現コンストラクトである。好ましくは、組換えコンストラクトは、コロナウイルスの抗原タンパク質又は抗原タンパク質断片を発現するアデノウイルスコンストラクトである。

とりわけ、本明細書にさらに詳述されるように、現在企図されている固体剤形中にアラゴナイトを使用すると、安定なワクチン組成物のコスト効率の良い製造及び容易な投与が可能になる。このため、現在企図されている粉末剤、錠剤又はカプセル剤の形態のワクチンは、大量生産し、且つ容易に輸送することができる。さらに、固体剤形の迅速な崩壊（例えば、３０秒以下）は、自己投与を可能にする。例えば、粉末剤形態のワクチンは、個別投与量包装にパッケージすることができる。投与量形態の粉末剤の例示的な包装は、ＴＷＩＮＩＮＧＳ（登録商標）ティーバッグのような包装に類似している。ワクチン粉末剤は、開封され、摂取のために、水又は適切な液体飲料（例えば、飲料容器又はスポイトから）に溶解され、それにより液体中に放出されたワクチンを経口投与することができる。加えて、粉末剤、錠剤又はカプセル剤のいずれかの形態のワクチンについては、水性流体と接触したとき、舌下投与又は頬側投与したとき、剤形が崩壊することを考慮すると、人の唾液が剤形を崩壊させ、それによりワクチン組成物を経口粘膜中に放出して吸収させることになる。さらなる実施形態では、錠剤は、圧縮されたワクチン粉末剤から形成することができる。錠剤は、圧縮して任意の適切な形状、例えば、丸型又は立方体型にすることができる。錠剤形態は、追加の添加剤（例えば、風味剤及びゼラチン）とともに作製して、トローチ剤を形成することもできる。

アラゴナイト（例えば、魚卵状アラゴナイト）は、天然に沈降した炭酸カルシウムの最も純粋な形態の１つである。図１に関して、アラゴナイトは、斜方晶、両錐結晶、特徴的な針状結晶の結晶形態を有し、このため、カルサイト及びヴァテライトと異なる。アラゴナイトは、加工して再結晶させること及び／又は様々な形状に再形成することができ、そのため、炭酸カルシウム鉱物の機械的性質及び化学的性質を活用する様々な目的に使用することができる。本明細書に開示されているアラゴナイト粒子は、規則的な形状（例えば、球形又は卵形）又は不規則な形状を有する固形物である。本明細書で使用する場合、アラゴナイト粒子は、１００ｎｍ～１ｍｍの平均粒径を有する。アラゴナイト粒子を粉砕する方法は、米国特許出願公開第１６／８５８，５４８号明細書、国際出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／２９９４９号明細書に記載されており、これらの内容全体が参照により本明細書に援用される。例えば、クリーンな最大サイズ（ｃｌｅａｎ ｔｏｐ ｓｉｚｅ）で、２．５～３．５ミクロンのサイズのアラゴナイト粒子に粉砕する方法が開示されている。クリーンな最大サイズとは、開示されている粉砕方法を使用して、２．５～３．５ミクロンのサイズ範囲に設定した分級器で生成した場合、３．５ミクロンのサイズより大きい粒子がほとんどないことを意味する。したがって、米国特許出願公開第１６／８５８，５４８号明細書、国際出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／２９９４９号明細書の方法を使用する本明細書に開示されているアラゴナイト粒子は、従来のＧＣＣよりクリーンな最大サイズを有する。

アラゴナイトの吸着能は、３つのパラメーターの機能：（１）表面電荷（別名「ζ（ゼータ）電位」）、（２）表面積／空隙比、及び（３）粒子溶解性である。これらの３つのパラメーターを正確に測定することにより、所定の条件下でどの材料がアラゴナイト粒子の表面に吸着するかを判定することができる。とりわけ、アラゴナイトのゼータ電位は、グリセロール及びソルビトールなどの界面活性剤の安定性を高める。

さらに、アラゴナイトは、粒子中において、天然で多数の直径２ｎｍ未満の測定可能な孔を有する（即ち高度な「微孔構造」）。例えば、欧州特許第２７１９３７３号明細書を参照されたい。このため、アラゴナイトのプラットフォームは活性成分粒子を強力に掴み、同時に担持させたアラゴナイトが固体剤形 － 例えば、粉末剤、錠剤又はカプセル剤に製剤化されるのを可能にする。

有利には、未処理のアラゴナイトは、中性ｐＨ（７．８～８．２）、天然の親水性、電子電荷（ゼータ電位）及び既に作られた窒素とアミノ酸及びタンパク質との対形成を有する。いかなる理論にも拘束されるものではないが、これらのアラゴナイトの有利な性質は、周囲条件下でアラゴナイトを準安定性にする。より具体的には、アラゴナイト粒子は、およそ２～３％のアミノ酸量を天然に含み、その大部分は、アスパラギン酸（およそ２５～３０％）及びグルタミン酸（およそ８～１０％）であり、これらがアラゴナイトの表面を親水性にしている。例えば、Ｍｉｔｔｅｒｅｒ，１９７２，Ｇｅｏｃｈｉｍｉｃ ｅｔ Ｃｏｓｍｏｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，３６：１４０７－１４２２を参照されたい。したがって、一部の実施形態では、ワクチン組成物（例えば、組換えアデノウイルス）は、天然の未処理のアラゴナイト粒子の表面に直接連結される。

現在、市場で利用されている炭酸カルシウムは、重質炭酸カルシウム（ＧＣＣ）、沈降炭酸カルシウム（ＰＣＣ）（合成）及び／又は石灰石製品として又はこれらから加工される。生産される製品は、特性の異なる商品グレードのものである。粒径分布（ＰＳＤ）のクリーンな最大サイズを得て、残留を低く抑えるために、ほとんどの会社は高固体又は低固体のいずれかによる湿式粉砕プロセスを利用する。しかし、その製品及びこれらのプロセスは、生物起源でもなく、環境に優しくもない。本明細書で使用する場合、アラゴナイトは、ＧＣＣ、ＰＣＣ及び石灰石と異なる、斜方晶、両錐結晶及び特徴的な針状結晶の結晶形態を有する天然のアラゴナイトを指す。

一実施形態は、凍結乾燥されたアデノウイルスベクターと、カーボナイト鉱物を含むか又はカーボナイト鉱物からなる賦形剤と、を含むか又はそれらからなる組成物であって、アデノウイルスベクターは、異種タンパク質の少なくとも一部分をコードする核酸分子を含む、組成物である。「アデノウイルスベクター」とは、そのゲノムが、未改変の哺乳動物細胞中でのアデノウイルス複製に必要な１つ又は複数の遺伝子を欠くアデノウイルスである。「アデノウイルス」（略して「Ａｄ」）は、アデノウイルス科（ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）に属する直径およそ６０～１１０ｎｍの無エンベロープの二本鎖ＤＮＡウイルスの群を指す。本明細書に開示されているアデノウイルスベクターは、アデノウイルス科（ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）の４つの属（例えば、アビアデノウイルス（ａｖｉａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、マストアデノウイルス（ｍａｓｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、アタデノウイルス（ａｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）及びシアデノウイルス（ｓｉａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ））のいずれか、加えてそれぞれの種の血清型のいずれかのアデノウイルスに由来するものであり得る。ヒトにおいて、ほとんどのアデノウイルス感染症は無症候性であり、腫瘍性疾患と関連していない。最も詳細に特徴が明らかになっているＡｄ血清型は、血清型２（Ａｄ２）及び血清型５（Ａｄ５）である。一態様において、本明細書で使用されるアデノウイルスベクターはＡｄ２ベクターである。別の態様において、アデノウイルスベクターはＡｄ５ベクターである。

アデノウイルスのｄｓＤＮＡゲノムは、およそ３６ｋｂの長さである。そのゲノムは２セットの遺伝子、即ちＤＮＡ複製前に転写される初期領域遺伝子Ｅ１Ａ、Ｅ１Ｂ、Ｅ２、Ｅ３及びＥ４並びにＤＮＡ複製の開始後に転写され、高レベルで発現する後期領域遺伝子Ｌ１－Ｌ５を含む。初期領域遺伝子は、ウイルスの他の領域の転写を活性化するため、宿主細胞環境を変えてウイルス複製を増強するため及びウイルスのＤＮＡの複製のために必要である。Ｅ１Ａ転写単位は、ウイルスの転写調節に関与する２つの主要なＥ１ａをコードする。２つの主要なＥ１ｂは、ウイルスのｍＲＮＡ輸送の刺激、Ｅ１Ａが誘導するアポトーシスの遮断及び宿主ｍＲＮＡ輸送の遮断に関与する。Ｅ２ｂ遺伝子は、ウイルスのポリメラーゼ及び末端タンパク質前駆体をコードする。

本明細書で使用する場合、「活性」及び「機能」などは、分子が何かを行う能力を指す。例えば、アデノウイルスＥ２ａは、多数の細胞性因子に結合し、それらの活性を調節し、それにより宿主細胞をＳ期に導く。細胞性因子への結合、その活性の調節及び細胞をＳ期に導くことの各々は、Ｅ１ａ活性と考えられ得る。１つ又は複数の活性の欠如の結果として、アデノウイルスベクターは、未改変の哺乳動物細胞中で複製することができない（「複製欠損性」）。本明細書で使用する場合、「未改変の」哺乳動物細胞は、アデノウイルスタンパク質をコードするＤＮＡが欠如している。複製欠損性アデノウイルスベクターは、ヘルパー細胞中で複製することができる。ヘルパー細胞は、アデノウイルスベクターからは果たせないアデノウイルス複製に必要な１つ又は複数の活性を－トランスに－提供するタンパク質をコードするＤＮＡを有する哺乳動物細胞である。

アデノウイルスベクターの生成をもたらすアデノウイルスゲノムの改変（変異ともいう）は、改変が、未改変の細胞中での複製に必要な少なくとも１つの機能を排除する限り、ゲノム中のいずれの位置でなされ得る。好ましい改変は、結果としてヘルパー細胞中にトランスに提供され得る機能の排除となる。アデノウイルスゲノムの有用な改変は、得られたアデノウイルスベクターが、複製に必要な活性を有する機能タンパク質を産生することができないように、アデノウイルス遺伝子の少なくとも一部又は全部の欠失をもたらす改変を含む。タンパク質に関連する活性を欠くアデノウイルスベクターは、そのタンパク質又は活性について「ヌル」であると呼ばれ、［タンパク質－］（例えば、［Ｅ２ｂ－］）と表すことができる。

未改変の哺乳動物細胞中での複製に必要な例示的なアデノウイルスタンパク質としては、以下に限定されないが、Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ２ａ及びＥ２ｂが挙げられる。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１ａをコードする配列中に改変を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１ｂをコードする配列中に改変を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ２ａをコードする配列中に改変を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ２ｂをコードする配列中に改変を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１遺伝子領域中に欠失を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１ａ遺伝子領域中に欠失を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１ｂ遺伝子領域中に欠失を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ２遺伝子領域中に欠失を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ２ａ遺伝子領域中に欠失を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ２ｂ遺伝子領域中に欠失を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１遺伝子領域中及びＥ２遺伝子領域中に欠失を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１ａ遺伝子領域、Ｅ１ｂ遺伝子領域、Ｅ２ａ遺伝子領域及びＥ２ｂ遺伝子領域からなる群から選択される１つ又は複数の遺伝子領域中に欠失を含む。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１ａに関連する１つ又は複数の活性を欠く。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１ｂに関連する１つ又は複数の活性を欠く。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ２ａに関連する１つ又は複数の活性を欠く。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ２ｂに関連する１つ又は複数を欠く。一態様において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ２ａ及びＥ２ｂからなる群から選択される１つ又は複数のタンパク質に関連する１つ又は複数の活性を欠く。一態様において、アデノウイルスベクターは、［Ｅ１ａ－］及び／又は［Ｅ１ｂ－］及び／又は［Ｅ２ａ－］及び／又は［Ｅ２ｂ－］である。

本明細書で使用する場合、「異種」とは、参照されている生物と異なる生物に由来する分子又は内部でタンパク質が発現される生物と同じ種類の生物に由来するタンパク質を指すが、その場合、異種タンパク質は、それが発現されている組織の状況には通常でない程度まで発現される。分子は、タンパク質又は核酸配列（即ちＲＮＡ又はＤＮＡ）であり得る。例えば、組換えウイルスベクターにおける異種核酸配列は、その異種核酸配列が、組換えウイルスベクターを構築するために使用されるベースとなるウイルス以外の生物に由来するという事実を表す。さらなる例として、アデノウイルスベクターにおける異種核酸配列は、その異種核酸配列が、アデノウイルス以外の生物に由来するという事実を表す。同様に、アデノウイルスベクターと異種であるタンパク質は、その異種タンパク質が、アデノウイルス以外の生物に由来するという事実を表す。

一態様において、異種タンパク質の少なくとも一部分は免疫原性の部分である。本明細書で使用する場合、「免疫原性」とは、特定のタンパク質部分が、特定のタンパク質又は異種タンパク質と高度な同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質に対して、免疫応答を誘発する能力を指す。本開示によれば、高度な同一性を有するアミノ酸配列は、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８７％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９３％同一、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一又は少なくとも９９％同一である連続したアミノ酸配列を含む。異種タンパク質は、ネオエピトープ、ウイルスタンパク質及び細菌タンパク質からなる群から選択することができる。異種タンパク質は、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、ポリオーマウイルス、ヘパドナウイルス、パルボウイルス、アストロウイルス、カリシウイルス、ピコルナウイルス、コロナウイルス、フラビウイルス、トガウイルス、ヘペウイルス、レトロウイルス、オルソミクソウイルス、アレナウイルス、ブニヤウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、レオウイルス、インフルエンザ及びポックスウイルスからなる群から選択されるウイルスに由来するものであり得る。

ある特定の実施形態では、タンパク質は、コロナウイルスタンパク質である。アルファコロナウイルス及びベータコロナウイルスは、哺乳動物にのみ感染する。ガンマコロナウイルス及びデルタコロナウイルスは、鳥類に感染するが、その一部は哺乳動物にも感染することができる。アルファコロナウイルス及びベータコロナウイルスは、通常、ヒトにおいて呼吸器疾病を、且つ動物において胃腸炎を引き起こす。高病原性ウイルスである、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ヒトにおいて重度の呼吸器症候群を引き起こし、他の４種のヒトコロナウイルス（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３及びＨＫＵ１）は、免疫能の正常な宿主において軽度の上部呼吸器疾患を誘発するが、それらの一部は、乳児、低年齢小児及び高齢者において重症感染症を引き起こす。

コロナウイルスは、２７～３２ｋｂのゲノムを有する最大の一本鎖プラス鎖ＲＮＡウイルスである。ゲノムは、ヌクレオカプシドタンパク質（Ｎ）によって形成されるらせん状カプシドの内部に詰め込まれており、エンベロープによってさらに囲まれている。ウイルスエンベロープに関連するのは、少なくとも３つの構造タンパク質、即ちウイルス構築に関与する膜タンパク質（Ｍ）及びエンベロープタンパク質（Ｅ）並びに宿主細胞へのウイルス侵入を媒介するスパイクタンパク質（Ｓ）である。エンベロープ関連の血球凝集素－エステラーゼタンパク質（ＨＥ）もコードするコロナウイルスもある。これらの構造タンパク質の中でも、Ｓは、ウイルス表面から大きい突起を形成し、王冠を有する外観をコロナウイルスに付与する。Ｓは、ウイルス侵入を媒介することに加えて、宿主域及び組織向性を決定する。Ｓは、宿主免疫応答も誘発する。

Ｎ、Ｍ、Ｅ及びＳの各タンパク質は、ウイルス粒子の外側にあるため、抗コロナウイルスワクチンを開発するための良好な候補である。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＫＵ１からなる群から選択されるコロナウイルスに由来する。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に由来する。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳに由来する。一態様において、異種タンパク質は、ＭＥＲＳに由来する。

一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＫＵ１からなる群から選択されるコロナウイルスに由来するＮである。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎである。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳに由来するＮである。一態様において、異種タンパク質は、ＭＥＲＳに由来するＮである。

一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＫＵ１からなる群から選択されるコロナウイルスに由来するＭである。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に由来するＭである。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳに由来するＭである。一態様において、異種タンパク質は、ＭＥＲＳに由来するＭである。

一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＫＵ１からなる群から選択されるコロナウイルスに由来するＥである。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に由来するＥである。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳに由来するＥである。一態様において、異種タンパク質は、ＭＥＲＳに由来するＥである。

一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＫＵ１からなる群から選択されるコロナウイルスに由来するＳである。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に由来するＳである。一態様において、異種タンパク質は、ＳＡＲＳに由来するＳである。一態様において、異種タンパク質は、ＭＥＲＳに由来するＳである。

一態様において、異種タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４からなる群から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。一態様において、少なくとも１つの異種タンパク質は、配列番号１～４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一態様において、異種タンパク質の少なくとも一部分は、配列番号１～４からなる群から選択されるアミノ酸配列からの少なくとも６連続のアミノ酸残基を含む。

異種タンパク質を得ることができるウイルスの別の例は、インフルエンザウイルスである。インフルエンザウイルスに対する防御免疫応答は、ウイルス血球凝集素（ＨＡ）タンパク質（宿主細胞受容体との相互作用を担うウイルス表面の糖タンパク質）を主に対象とする。インフルエンザウイルスＨＡタンパク質は、ワクチン接種による免疫応答を誘発するための格好の標的となる。異種タンパク質は、以下に限定されないが、ヒトインフルエンザウイルス及びトリインフルエンザウイルスなどのインフルエンザウイルスに由来するものであり得る。異種タンパク質は、インフルエンザＨＡ、そのエピトープ、その免疫原性の部分又はそのバリアントであり得る。任意のＨＡタンパク質、そのエピトープ、その部分又はそのバリアントが免疫応答、好ましくはインフルエンザウイルスに対する防御免疫応答を誘発する限り、そのインフルエンザＨＡ、そのエピトープ、その部分又はそのバリアントを本開示のアデノウイルスベクターに使用することができる。有用なインフルエンザＨＡタンパク質、そのエピトープ、その断片及びそのバリアントの例は、米国特許出願公開第２０１０／００７４９１６号明細書、米国特許出願公開第２０１１／０１７１２６０号明細書、米国特許出願公開第２０１１／０１７７１２２号明細書及び米国特許出願公開第２０１４／０３０２０７９号明細書に開示されており、それらの内容全体が参照により本明細書に援用される。

一態様において、異種タンパク質は、治療用タンパク質である。治療用タンパク質の例としては、以下に限定されないが、抗体、Ｆｃ融合タンパク質、抗凝固剤、血液因子、骨形成タンパク質、酵素、成長因子、ホルモン、インターフェロン、インターロイキン及び血栓溶解タンパク質が挙げられる。

凍結乾燥は、凍結温度及び低圧を使用して、物質（例えば、アデノウイルスベクター）から水が除去されるプロセスである。例示的な凍結乾燥において、凍結乾燥される材料は、その三重点未満、通常－５０℃～－８０℃に冷却される。材料が凍結されると、周囲空気圧は減圧され、十分な熱が加えられて氷を昇華させる。第２の乾燥段階において、追加の熱が加えられて、未凍結の水分子を除去する。完了すると、凍結乾燥された材料は、５％未満、通常、３％未満及び典型的には約０．５％～約３％の範囲の残留水分量を有する。凍結乾燥の方法は、米国特許第７，８８８，０９７号明細書に記載されており、その開示は参照により本明細書に援用される。一態様において、本開示の凍結乾燥された組成物は、５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満又は約１％未満の残留水分を有する。一態様において、本開示の凍結乾燥された組成物は、約０．５％～約５％の残留水分を有する。一態様において、本開示の凍結乾燥された組成物は、約０．５％～約３％の残留水分を有する。一態様において、本開示の凍結乾燥された組成物は、約０．５％～約１％の残留水分を有する。残留水分量に関して本明細書で使用する場合、「約」は、言及された数字の１０％以下のばらつきを表す。

本明細書で使用する場合、「賦形剤」は、組成物の質量又はかさを増加させるために組成物に添加される１つ又は複数の化合物である。ヒト及び動物への投与のために通常使用される例示的な賦形剤としては、以下に限定されないが、ラクトース、スクロース、ステアリン酸マグネシウム、グルコース、マンニトール、デンプン、デキストロース、マルトデキストリン、マルチトール及び植物セルロースなどが挙げられる。ある特定の化合物に感受性がある個体もいるため、本開示の組成物中に存在する賦形剤は、ラクトース、スクロース、ステアリン酸マグネシウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、デキストロース、マルトデキストリン、マルチトール及び植物セルロースからなる群から選択される１つ又は複数の化合物を欠く場合がある。一態様において、組成物は、ラクトースを欠く。一態様において、組成物は、マンニトールを欠く。一態様において、組成物は、ソルビトールを欠く。一態様において、組成物は、デンプンを欠く。

上記の感受性の問題を考慮すると、カーボナイト鉱物は、望ましい性質を有し、このため、優れた賦形剤になる。カーボナイト鉱物は、炭酸イオン、ＣＯ_３ ^２－を含有する。カーボナイト賦形剤の例としては、以下に限定されないが、カルサイト、ヴァテライト、アラゴナイト、セルサイト、ストロンチアナイト、ウィゼライト及びラサフォーディーンが挙げられる。一態様において、賦形剤は、カルサイト、ヴァテライト、アラゴナイト、セルサイト、ストロンチアナイト、ウィゼライト及びラサフォーディーンからなる群から選択される化合物を含むか又はこれらからなる。一態様において、賦形剤は、斜方格子を有するカーボナイト鉱物を含む。一態様において、賦形剤は、アラゴナイト、セルサイト、ストロンチアナイト、ウィゼライト及びラサフォーディーンからなる群から選択される化合物を含むか又はこれらからなる。一態様において、賦形剤は、アラゴナイトを含むか又はこれからなる。一態様において、賦形剤は、セルサイトを含むか又はこれからなる。一態様において、賦形剤は、ストロンチアナイトを含むか又はこれからなる。一態様において、賦形剤は、ラサフォーディーンを含むか又はこれからなる。

上記の成分に加えて、本開示の組成物は、例えば、安定化剤、甘味剤、緩衝剤、結合剤、担体、希釈剤、補助剤及び薬学的に活性な化合物として作用する追加の成分を含み得るが、必要というわけではない。追加の成分の例としては、以下に限定されないが、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、スクロース、ジメチルグリシン、メチルスルホニルメタン及び酵母溶解物が挙げられる。一態様において、組成物は、安定化剤、甘味剤、緩衝剤、結合剤、担体、希釈剤、補助剤及び薬学的に活性な化合物の１つ又は複数を含む。一態様において、組成物は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、スクロース、ジメチルグリシン、メチルスルホニルメタン、クエン酸トリエチル（ＴＥＣ）及び酵母溶解物からなる群から選択される１つ又は複数の化合物を含む。

本開示は、個体への容易な投与のために製剤化された組成物を包含する。したがって、本開示の一実施形態は、本明細書に開示されている組成物を含むカプセル剤である。一実施形態では、カプセル剤は、凍結乾燥されたアデノウイルスベクターを含むか又はそれからなる組成物と、カーボナイト鉱物を含むか又はそれからなる賦形剤とを含有し、アデノウイルスベクターは、異種タンパク質の少なくとも一部分をコードする核酸配列を含む。カプセル剤は、以下に限定されないが、セルロース、ゼラチン、アルギネートを含む１つ又は複数の材料から作製され得る。一態様において、カプセル剤は、セルロースを含む。一態様において、カプセル剤は、アルギネートを含む。一態様において、カプセル剤は、ゼラチンを含む。一態様において、カプセル剤は、腸溶性コーティングされる。

一実施形態は、凍結乾燥されたアデノウイルスベクターと、アラゴナイトを含む賦形剤とを含む組成物であって、アデノウイルスベクターは、Ｅ１及びＥ２ｂの活性を欠き、そのため複製欠損性であり、アデノウイルスベクターは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＫＵ１からなる群から選択されるコロナウイルスに由来するタンパク質の少なくとも一部分をコードする核酸分子を含み、コロナウイルスタンパク質は、コロナウイルスＮタンパク質、コロナウイルスＭタンパク質、コロナウイルスＥタンパク質及びコロナウイルスＳタンパク質からなる群から選択される、組成物である。

一実施形態は、本明細書に開示されている組成物を作製する方法である。一態様において、本方法は、異種タンパク質の少なくとも一部分をコードする核酸分子を含むアデノウイルスベクターを凍結乾燥するステップ及びアデノウイルスベクターを、カーボナイト鉱物を含むか又はそれからなる賦形剤と組み合わせるステップを含む。

さらなる実施形態では、組成物は、個体への投与に適したカプセル剤内にカプセル化される。一態様において、アデノウイルスベクターは、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）の４つの属（例えば、アビアデノウイルス（Ａｖｉａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、マストアデノウイルス（Ｍａｓｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、アタデノウイルス（Ａｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）及びシアデノウイルス（Ｓｉａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ））のいずれか、加えてそれぞれの種の血清型のいずれかのアデノウイルスに由来する。一態様において、アデノウイルスベクターは、血清型２アデノウイルスに由来する。一態様において、アデノウイルスベクターは、血清型５アデノウイルスに由来する。

一態様において、凍結乾燥されたアデノウイルスベクターは、５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満又は約１％未満の残留水分を有する。一態様において、凍結乾燥されたアデノウイルスベクターは、約０．５％～約５％の残留水分を有する。一態様において、凍結乾燥されたアデノウイルスベクターは、約０．５％～約３％の残留水分を有する。

一態様において、賦形剤は、ラクトース、スクロース、ステアリン酸マグネシウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、デキストロース、マルトデキストリン、マルチトール及び植物セルロースからなる群から選択される１つ又は複数の化合物を含む。一態様において、賦形剤は、ラクトース、スクロース、ステアリン酸マグネシウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、デキストロース、マルトデキストリン、マルチトール及び植物セルロースからなる群から選択される１つ又は複数の化合物を欠く。一態様において、賦形剤は、ラクトースを欠く。一態様において、賦形剤は、マンニトールを欠く。一態様において、賦形剤は、ソルビトールを欠く。一態様において、賦形剤は、デンプンを欠く。

一態様において、組成物は、安定化剤、甘味剤、緩衝剤、結合剤、担体、希釈剤、補助剤及び薬学的に活性な化合物の１つ又は複数を含む。一態様において、組成物は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、スクロース、ジメチルグリシン、メチルスルホニルメタン及び酵母溶解物からなる群から選択される１つ又は複数の化合物を含む。

一態様において、カプセル剤は、セルロース、ゼラチン及びアルギネートからなる群から選択される１つ又は複数の材料を含む。一態様において、カプセル剤は、セルロースを含む。一態様において、カプセル剤は、アルギネートを含む。一態様において、カプセル剤は、ゼラチンを含む。一態様において、カプセル剤は、腸溶性コーティングされる。

個体に感染性微生物に対してワクチン接種する方法が、本明細書に開示される。この方法は、本明細書に開示されている組成物又は本明細書に開示されている組成物を含むカプセル剤を個体に１回又は複数回投与するステップを含む。一態様において、組成物は、凍結乾燥されたアデノウイルスベクターと、カーボナイト鉱物を含むか又はそれからなる賦形剤とを含み、アデノウイルスベクターは、感染性微生物に由来する異種タンパク質の少なくとも一部分をコードする核酸配列を含む。一態様において、個体は、感染性微生物に曝露されるリスクがある。そのような個体は、いずれ感染因子に曝露される可能性があるか、又は以前に曝露された可能性があるが、依然として感染症の症状を有していない個体であり得る。

本明細書に記載される組成物及び組成物を含むカプセル剤の投与の、経路及び頻度並びに投与量は、個体毎及び疾患毎に変化し、標準的な技術を使用して容易に確立することができる。一般に、組成物は、静脈内、経口、非経口、動脈内、経皮、皮下、筋肉内、局所、頭蓋内、眼窩内、経眼、硝子体内、脳室内、関節包内、脊髄内、大槽内、腹腔内、鼻腔内、エアゾール、中枢神経系（ＣＮＳ）投与及び坐剤による投与（腟又は直腸送達用）を含む投与経路によって投与することができる。一般に、本明細書に開示されている組成物を含むカプセル剤は、経口投与される。

本開示の組成物を投与する方法は、処置される患者の年齢、体重及び健康状態並びに処置される疾患又は状態などの要因に依存することになる。したがって、当業者は、個別に患者に最適な投与の方法を選択することができる。

一実施形態はキットである。キットには、例えば、本開示のアデノウイルスベクター、本開示のアデノウイルスベクターを構築するための核酸分子、本開示の賦形剤、本開示の組成物及び／又は本開示のカプセル剤を含めることができる。キットには、関連する構成要素、例えば、以下に限定されないが、媒体、緩衝剤、ラベル、容器、バイアル、シリンジ及びキットを使用するための説明書などを含めることもできる。

ワクチン組成物の固体剤形：
本明細書に開示されているように、剤形（固体剤形とも呼ぶ）は、ワクチン組成物と直接連結され得る、本質的に安定な性質を有するアラゴナイトを含む。例示的な実施形態では、企図される剤形は、ワクチン組成物を添加する前に二酸化炭素（ＣＯ２）を含浸させた（即ち連結させた）アラゴナイトを含む。例えば、欧州特許第２７１９３７３号明細書及び米国特許出願公開第２０２０／０１５５４５８号明細書を参照されたい。さらなる実施形態では、企図される剤形は、ワクチン組成物を添加する前にアラゴナイトと混合され、処理された生体適合性ポリマー及び／又は崩壊剤を伴うアラゴナイトを含む。典型的には、アラゴナイトは、ワクチン組成物を添加する前に、ＣＯ２を含浸され、生体適合性ポリマー及び崩壊剤の両方と混合される。より典型的には、アラゴナイトは、ワクチン組成物を添加する前に、ＣＯ２を含浸され、生体適合性ポリマー及び崩壊剤と混合され、固体形態に形成される（例えば、圧縮される）。例えば、欧州特許第２７１９３７３号明細書及び米国特許出願公開第２０２０／０１５５４５８号明細書を参照されたい。

ワクチン組成物は、本明細書に開示されているアラゴナイト（例えば、任意選択によりＣＯ２、生体適合性ポリマー及び／又は崩壊剤を含浸されている）の企図される固体剤形に担持される（例えば、混合される）。企図される固体剤形は、ワクチン組成物の担持の前又は後に圧縮することができる。典型的には、固体剤形は、ワクチン組成物が担持される前に圧縮される（例えば、圧密化される）。例示的な実施形態では、圧縮され（即ち圧密化され）、ワクチン組成物が担持された固体剤形は、粉砕されて、粉末剤、錠剤又はカプセル剤を形成する。

ワクチン組成物の担持の前又は後に固体剤形を圧密化することに関して、５～５００ｋＮの圧縮力を使用して行われる。好ましくは、ワクチン組成物の担持の前又は後の固体剤形の圧密化は、６～３００ｋＮ、最も好ましくは８～２００ｋＮの圧縮力を使用して行われる。より好ましくは、ワクチン組成物の担持の前又は後の固体剤形の圧密化は、８～１００ｋＮ、８～５０ｋＮ又は８～２８ｋＮの圧縮力を使用して行われる。

例示的な実施形態では、ＣＯ２を連結したアラゴナイトは、少なくとも１つの生体適合性ポリマーと混合される。典型的には、ＣＯ２を連結したアラゴナイト対生体適合性ポリマーの重量比は、約９５：５～５：９５である。さらなる実施形態では、生体適合性ポリマーは、ホットメルト押出された生体適合性ポリマーである。例示的な生体適合性ポリマーとしては、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド６６（ナイロン）、ポリカプロラクタム、ポリカプロラクトン、アクリルポリマー、アクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリベンゾイミダゾール、ポリカーボネート、ポリフェニレンオキシド／スルフィド、ポリプロピレン、テフロン(登録商標)、ポリ乳酸、脂肪族ポリエステル、例えばポリヒドロキシブチレート、ポリ－３－ヒドロキシブチレート（Ｐ３ＨＢ）、ポリヒドロキシバレレート、ポリヒドロキシブチレート－ポリヒドロキシバレレートコポリマー、ポリ（３－ヒドロキシブチレート－ｃｏ－３－ヒドロキシバレレート）、ポリグリコネート、ポリ（ジオキサノン）及びそれらの混合物が挙げられる。好ましくは、生体適合性ポリマー樹脂はＰＬＡである。好ましくは、生体適合性ポリマーは、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０ Ｄ－５５（Ｅｖｏｎｉｋ）である。

特定の実施形態では、複数のアラゴナイト粒子（即ち二酸化炭素を含む又は含まないアラゴナイト組成物）対生体適合性ポリマーの重量比は、約９５：５～５：９５である。好ましくは、複数のアラゴナイト粒子対生体適合性ポリマーの重量比は、約８０：２０～２０：８０、より好ましくは７０：３０～３０：７０、最も好ましくは６０：４０～４０：６０である。例えば、複数のアラゴナイト粒子対生体適合性ポリマーの重量比は、約５０：５０である。

さらなる実施形態では、ＣＯ２を連結したアラゴナイト及び生体適合性ポリマーは、それらに混合された（例えば、処理された）崩壊剤も含む。適切な崩壊剤の例としては、デンプン（例えば、エンドウマメデンプン）、変性セルロースガム、不溶性架橋ポリビニルピロリドン、デンプングリコレート、微結晶セルロース、アルファ化デンプン、カルボキシメチルデンプンナトリウム、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、Ｎ－ビニル－２－ピロリドンのホモポリマー、アルキル－、ヒドロキシアルキル－、カルボキシアルキル－セルロースエステル、アルギネート及び微結晶セルロース並びにその多形が挙げられる。

複数のアラゴナイト粒子と、生体適合性ポリマーと、任意選択により崩壊剤との混合は、任意の従来のホットメルト押出法を使用して行われる。例えば、ホットメルト押出は、有孔ダイを備えた二軸ホットメルト押出機（例えば、Ｔｈｒｅｅ－Ｔｅｃ、ＺＥ９ ２０６０２、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で行うことができる。フィラメント製造を含む、アラゴナイト及びバイオプラスチック組成物の配合方法及び押出方法は、例えば、国際出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／４５４５１号明細書に記載されており、その内容全体が参照により本明細書に援用される。さらに、バイオプラスチック、アラゴナイト及び任意選択により崩壊剤で作製された押出フィラメント組成物は、３Ｄプリンティングを使用して、有用な又は適切な形状に形成することができる。図２Ａ及び２Ｂに関して、例示的なバイオプラスチックアラゴナイト（４０％アラゴナイトを含む）組成物が配合され、押出されてフィラメントが作られ、次に３Ｄプリンティングを使用してこれが加工されて、示されているようなアラゴナイト構造体が形成された。

製造及び包装の必要性によって決定された場合、追加の添加剤も固体剤形に添加することができる。追加の添加剤としては、イオン交換樹脂、ガム、キチン、キトサン、クレイ、ジェランガム、架橋ポラクリリンコポリマー、カンテン、ゼラチン、デキストリン、アクリル酸ポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム／カルシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、セラック又はそれらの混合物、滑沢剤、内相滑沢剤、外相滑沢剤、耐衝撃性改良剤、可塑剤、ワックス、安定化剤、顔料、着色剤、芳香剤、矯味剤、香味剤、甘味剤、口当たり改良剤、結合剤、希釈剤、皮膜形成剤、接着剤、緩衝剤、吸着剤、臭気マスキング剤及びそれらの混合物を挙げることができる。

とりわけ、企図される固体剤形は、経口、舌下又は頬側投与のためにワクチン組成物を担持される。ワクチン組成物を固体剤形（例えば、生体適合性ポリマー及び崩壊剤と既に混合されている、ＣＯ２を連結したアラゴナイト）に担持又は混合することは、任意の従来の方法によって行われる。例えば、ワクチン組成物は、ミキサー（例えば、タンブルミキサー）又はブレンダー中で固体剤形に担持させることができる。

例示的な実施形態では、企図される固体剤形は、ウイルスに対して免疫を誘発するためのワクチン組成物を担持される。当業者によって容易に理解されるように、免疫化される疾患／感染症（例えば、ウイルス）に応じて多種多様なワクチンの種類がある。例えば、病原性ウイルスがコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及びヒトコロナウイルスＮＬ６３／ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）である場合、ワクチンは、コロナウイルスＡＣＥ２タンパク質の全部又は一部をコードする組換え発現ベクターであり得る。一方で、病原性ウイルスがポリオウイルスである場合、ワクチンは、ＣＥＡタンパク質の全部又は一部をコードする組換え発現ベクターであり得る。さらに別の例において、病原性ウイルスがＨＩＶウイルスである場合、ワクチンは、ｇｐ１２０の全部又は一部をコードする組換え発現ベクターであり得る。同様の判断は、当然のことながら、他の種類の全ての病原性ウイルス（例えば、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、エンテロウイルス、エコーウイルス、ヘルペスウイルスなど）に適用される。

例示的な実施形態では、ワクチン組成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ワクチン（例えば、アデノウイルスコンストラクト）であり、免疫グロブリンのＦｃ部分に連結された可溶性ＡＣＥ２タンパク質を含み、Ｊ鎖部分も含み得るＡＣＥ２－Ｆｃハイブリッドコンストラクトを形成する。これは、米国特許出願公開第１６／８８０，８０４号明細書及び米国特許出願第６３／０１６，０４８号明細書に開示されており、その両方の内容全体が参照により本明細書に援用される。他の例示的な実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ワクチン（例えば、アデノウイルスコンストラクト）は、組換え可溶性ＡＣＥ２タンパク質の変異バリアント（例えば、配列番号６）を含み、その変異バリアントは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２スパイクタンパク質のＲＢＤタンパク質ドメインへのＡＣＥ２タンパク質の結合親和性を高める、少なくとも１つの変異アミノ酸残基（例えば置換による）を有する。これは米国特許出願第６３／０２２，１４６号明細書に開示されており、その内容全体が参照により本明細書に援用される。別の例示的な実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ワクチン（例えば、アデノウイルスコンストラクト）は、エンドソームの標的配列に融合したＣｏＶ２ヌクレオカプシドタンパク質又はＣｏＶ２スパイクタンパク質（Ｎ－ＥＴＳＤ）を含む。これは米国特許出願公開第１６／８８３，２６３号明細書及び米国特許出願第６３／００９，９６０号明細書に開示されており、その両方の内容全体が参照により本明細書に援用される。

好ましくは、企図される剤形は、例えば、米国特許出願公開第１６／８８０，８０４号明細書（その内容全体が参照により本明細書に援用される）に開示されているような組換えＡＣＥ２タンパク質をコードする組換え発現ベクター（例えば、アデノウイルス）を含むワクチン組成物を担持される。典型的な実施形態では、ワクチン組成物は、配列番号５と少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する組換えヒトＡＣＥ２タンパク質である。

追加の又は代替の実施形態では、企図される剤形は、組換え可溶性ＡＣＥ２タンパク質（例えば、配列番号６）をコードするか、又は配列番号２に関してＴ２７Ｆ、Ｔ２７Ｗ、Ｔ２７Ｙ、Ｄ３０Ｅ、Ｈ３４Ｅ、Ｈ３４Ｆ、Ｈ３４Ｋ、Ｈ３４Ｍ、Ｈ３４Ｗ、Ｈ３４Ｙ、Ｄ３８Ｅ、Ｄ３８Ｍ、Ｄ３８Ｗ、Ｑ２４Ｌ、Ｄ３０Ｌ、Ｈ３４Ａ及び／又はＤ３５５Ｌを含む組換えＡＣＥ２バリアントの変異体をコードする、組換え発現ベクター（例えば、アデノウイルス）を含むワクチン組成物を担持される。

別の実施形態では、アラゴナイト粒子表面は、結合表面を改変するように処理され得る。例えば、米国特許出願公開第１６／８５８，５４８号明細書及び国際出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／２９９４９号明細書に開示されているように、ステアリン酸（即ちオクタデカン酸）で処理すると、疎水性表面をもたらす。タンパク質の担持については、アラゴナイトをリン酸で処理すると、層状組織を形成する。反応基をアラゴナイトのアミノ酸表面にカップリングするための追加の結合技術は、例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｒｅｇ Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２０１３に開示されているように、当技術分野において公知である。

本明細書で使用する場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」は、文脈が明らかに否定しない限り、複数の指示対象を含む。例えば、ある（ａ）核酸分子は、１つ又は複数の核酸分子を指す。このため、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「１つ又は複数の」及び「少なくとも１つ」という用語は、互換的に使用することができる。同様に、「含む」、「包含する」及び「有する」という用語は、互換的に使用することができる。特許請求の範囲は、任意選択の要素をいずれも除外するように立案されている場合がある。このため、この記述は、請求項の要素の列挙に関して「専ら」、「単に」などの排他的な用語の使用又は「ネガティブな」限定の使用のための先行記載の役目をするものである。

本発明は、以下の実験例を参照することによって詳細にさらに説明される。これらの実施例は、説明する目的でのみ提供され、特に定めのない限り、限定を意図するものではない。したがって、本発明は、決して以下の実施例に限定されると解釈されてはならず、むしろ本明細書において提供される教示の結果として明らかになるあらゆる変形形態を包含するものと解釈されるべきである。

［実施例１］
この実施例は、非コーティングアラゴナイト製剤は、良好なウイルス回収（ｐＨ安定性及び硬さの保持（即ちペースト））をもたらすが、非コーティングラクトース製剤は、ウイルス回収がそれより少なく、このため液体に変わり、酸性になることを示す。

カプセル製剤：
既知のウイルス力価の凍結乾燥されたアデノウイルスベクター（Ａｄ５）をカプセル剤に１×１０^９感染単位（ＩＵ）／カプセル剤で充填した。ラクトース又はアラゴナイトのいずれかを充填して、最終総重量を５５０ｍｇ／カプセル剤にした。カプセル剤を水分制御条件下で密封し、任意選択により陰イオン性コポリマーＬ３０ Ｄ－５５及びクエン酸トリエチル（ＴＥＣ）でコーティングした。

ヘキソンアッセイによる感染力価の決定：
Ｅ．Ｃ７細胞を１２ウェルプレートにおよそ５．０×１０^５細胞／ウェルで播種し、３７±２℃で少なくとも２時間インキュベートする。ｈＡｄ５コンストラクトを１×ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）中に段階希釈する。播種から２～４時間後、１００μＬ／ウェルの希釈した試験物を三重反復で接種する。Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から供給されたアデノウイルス５型（Ａｄ５）の参照物質を陽性対照とし、同じように処理する。陰性対照を１００μＬの希釈剤単独とし、４つのウェルに接種する。プレートを３７℃±２℃で４２時間インキュベートする。

ヘキソンの免疫染色：
次に、プレートを冷メタノールで１０分間固定し、１×ＤＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝食塩水）ですすぎ、次いで、ヘキソンの免疫染色によってアッセイする。マウス抗ヘキソン抗体溶液（０．５ｍＬ）を各ウェルに添加し、３７℃±２℃で６０±６分間インキュベートする。プレートを洗浄し、次いで、０．５ｍＬのラット抗マウス抗体溶液をウェルに添加し、３７℃±２℃で６０±６分間インキュベートする。洗浄した後、新たに調製したＤＡＢ（ジアミノベンジジン）の作業用溶液を添加し、室温で１０分間インキュベートする。ＤＡＢを吸引し、１．０ｍＬの１×ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を各ウェルに添加する。

染色した細胞を、基質の発色の４時間後に光学顕微鏡を１０×対物レンズで使用して可視化し、ウェル全体の画像を取得し、カウントする。ウェル当たりの陽性細胞／コロニーの平均数を計算し、感染力価を以下の式：
感染単位／ｍＬ＝（平均陽性細胞／ウェル）×希釈係数×１０
により決定する。

結果は、図３Ａ～３Ｄに示されている。データは、アラゴナイト配合剤又はラクトース配合剤のいずれかを使用した、感染単位／グラム（酸なし（図３Ａ）又は酸あり（図３Ｃ））又はウイルス回収のパーセンテージ（カプセル化後酸処理なし（図３Ｂ）又はカプセル化後酸処理あり（図３Ｄ）のいずれかを示す。アラゴナイトを配合した試料は、酸に曝露した場合、＞／＝７ｐＨを維持した。回収された試料質量（ｇ）は、下の表１に示されている。最終結果は、粉末、液体又はペーストのいずれかであった。ｐＨを再懸濁の２分後に決定し、３回読み取った。

種々の特許、出願及び刊行物の概念を採用してさらに別の実施形態を提供するために、必要に応じて実施形態の態様を変更することができる。

上記に詳述された説明に照らして、実施形態に対するこれら及び他の変更形態がなされ得る。総じて、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、特許請求の範囲を、本明細書に開示されている特定の実施形態及び特許請求の範囲に限定すると解釈されてはならず、あり得る全ての実施形態を、そのような特許請求の範囲が権利を与えられる均等物の全範囲とともに含むものと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。

本明細書に引用されている各刊行物又は特許は、その全体が参照により本明細書に援用される。

Claims (53)

1. 凍結乾燥されたアデノウイルスベクターと、カーボナイト鉱物を含む賦形剤とを含む組成物であって、前記アデノウイルスベクターは、異種タンパク質の少なくとも一部分をコードする核酸分子を含む、組成物。
2. 前記アデノウイルスベクターは、アデノウイルス５型に由来し、前記アデノウイルスは、Ｅ１、Ｅ２ｂ及びＥ３領域に欠失を有する、請求項１に記載の組成物。
3. 前記異種タンパク質は、ウイルスに由来する、請求項１又は２に記載の組成物。
4. 前記異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＫＵ１及びインフルエンザウイルスからなる群から選択されるウイルスに由来する、請求項３に記載の組成物。
5. 前記異種タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に由来する、請求項４に記載の組成物。
6. 前記異種タンパク質は、スパイク（Ｓ）タンパク質、ヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質又は膜（Ｍ）タンパク質である、請求項５に記載の組成物。
7. 前記異種タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３又は配列番号４と少なくとも８０％、任意選択により少なくとも８５％、任意選択により少なくとも９０％、任意選択により少なくとも９５％、任意選択により少なくとも９７％又はさらに１００％同一である、請求項６に記載の組成物。
8. 前記アデノウイルスベクターは、０．５％～５％の残留水分量を有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
9. 前記アデノウイルスベクターは、５％未満の残留水分を有する、請求項８に記載の組成物。
10. 前記アデノウイルスベクターは、３％未満の残留水分を有する、請求項９に記載の組成物。
11. 前記カーボナイト鉱物は、斜方格子を有する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
12. 前記カーボナイト鉱物は、アラゴナイト、セルサイト、ストロンチアナイト、ウィゼライト及びラサフォーディーンからなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
13. 前記カーボナイト鉱物は、アラゴナイトである、請求項１２に記載の組成物。
14. 前記賦形剤は、ラクトース、スクロース、ステアリン酸マグネシウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、デキストロース、マルトデキストリン、マルチトール及び植物セルロースからなる群から選択される１つ又は複数の化合物を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組成物。
15. 前記賦形剤は、ラクトース、スクロース、ステアリン酸マグネシウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、デキストロース、マルトデキストリン、マルチトール及び植物セルロースからなる群から選択される１つ又は複数の化合物を欠く、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
16. 塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、スクロース、ジメチルグリシン、グリシン、メチルスルホニルメタン及び酵母溶解物からなる群から選択される１つ又は複数の化合物を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。
17. 請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物を含むカプセル剤。
18. 腸溶性コーティングされる、請求項１７に記載のカプセル剤。
19. アルギネートを含む、請求項１７又は１８に記載のカプセル剤。
20. ワクチン組成物の経口、舌下又は頬側投与による前記ワクチン組成物の送達のための固体剤形であって、
    二酸化炭素（ＣＯ２）を含浸されている複数のアラゴナイト粒子を含むアラゴナイト組成物と、
    前記アラゴナイト組成物と混合されている生体適合性ポリマー及び崩壊剤と
    を含み、
    前記ワクチン組成物をさらに含み、及び
    粉末剤、錠剤又はカプセル剤である、固体剤形。
21. 少なくとも１つの添加剤をさらに含み、且つ製剤化されてトローチ剤を形成する、請求項２０に記載の固体剤形。
22. 前記複数のアラゴナイト粒子は、１００ｎｍ～１ｍｍの平均粒径を有する、請求項２０に記載の固体剤形。
23. 前記生体適合性ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド６６（ナイロン）、ポリカプロラクタム、ポリカプロラクトン、アクリルポリマー、アクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリベンゾイミダゾール、ポリカーボネート、ポリフェニレンオキシド／スルフィド、ポリプロピレン、テフロン(登録商標)、ポリ乳酸、脂肪族ポリエステル、例えばポリヒドロキシブチレート、ポリ－３－ヒドロキシブチレート（Ｐ３ＨＢ）、ポリヒドロキシバレレート、ポリヒドロキシブチレート－ポリヒドロキシバレレートコポリマー、ポリ（３－ヒドロキシブチレート－ｃｏ－３－ヒドロキシバレレート）、ポリグリコネート、ポリ（ジオキサノン）及びそれらの混合物から選択される、請求項２０～２２のいずれか一項に記載の固体剤形。
24. 前記生体適合性ポリマーは、ＰＬＡである、請求項２３に記載の固体剤形。
25. 前記崩壊剤は、デンプン、変性セルロースガム、不溶性架橋ポリビニルピロリドン、デンプングリコレート、微結晶セルロース、アルファ化デンプン、カルボキシメチルデンプンナトリウム、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、Ｎ－ビニル－２－ピロリドンのホモポリマー、アルキル－、ヒドロキシアルキル－、カルボキシアルキル－セルロースエステル、アルギネート及び微結晶セルロース並びにその多形から選択される、請求項２０～２４のいずれか一項に記載の固体剤形。
26. 前記崩壊剤は、エンドウマメデンプンである、請求項２５に記載の固体剤形。
27. 前記粉末剤、前記錠剤及び前記カプセル剤は、３０秒未満で水性溶液中に崩壊する、請求項２０～２６のいずれか一項に記載の固体剤形。
28. 前記ワクチン組成物は、ウイルスタンパク質又はその断片をコードする組換えウイルス発現コンストラクトを含む、請求項２０～２７のいずれか一項に記載の固体剤形。
29. 前記ウイルスタンパク質又はその断片は、コロナウイルスタンパク質又はその断片に対応する、請求項２８に記載の固体剤形。
30. 前記コロナウイルスタンパク質又はその断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ウイルス結合タンパク質である、請求項２９に記載の固体剤形。
31. 前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ウイルス結合タンパク質は、組換えＡＣＥ２タンパク質を含む、請求項３０に記載の固体剤形。
32. 前記組換えＡＣＥ２タンパク質は、配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項３１に記載の固体剤形。
33. 前記組換えＡＣＥ２タンパク質は、配列番号６の配列を含む、請求項３２に記載の固体剤形。
34. 前記組換えＡＣＥ２タンパク質は、Ｔ２７Ｆ、Ｔ２７Ｗ、Ｔ２７Ｙ、Ｄ３０Ｅ、Ｈ３４Ｅ、Ｈ３４Ｆ、Ｈ３４Ｋ、Ｈ３４Ｍ、Ｈ３４Ｗ、Ｈ３４Ｙ、Ｄ３８Ｅ、Ｄ３８Ｍ、Ｄ３８Ｗ、Ｑ２４Ｌ、Ｄ３０Ｌ、Ｈ３４Ａ及びＤ３５５Ｌから選択される少なくとも１つの変異を含む、請求項３３に記載の固体剤形。
35. 前記ワクチン組成物は、アデノウイルス発現コンストラクトを含む、請求項２０～３４のいずれか一項に記載の固体剤形。
36. ワクチンを担持するための固体剤形を作製する方法であって、
    二酸化炭素（ＣＯ２）を含浸されている複数のアラゴナイト粒子を含むアラゴナイト組成物を提供するステップ、
    前記アラゴナイト組成物を生体適合性ポリマー及び崩壊剤と混合して、前記固体剤形を形成するステップ、及び
    前記ワクチン組成物を前記固体剤形に添加するステップ
    を含む方法。
37. 前記アラゴナイト組成物を前記生体適合性ポリマー及び崩壊剤と混合する前記ステップは、ホットメルト押出を含む、請求項３６に記載の方法。
38. 前記固体剤形は、粉末剤、錠剤又はカプセル剤である、請求項３６又は３７に記載の方法。
39. 前記固体剤形は、錠剤であり、前記方法は、前記固体剤形を圧密化するステップをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
40. 前記アラゴナイト組成物及び前記生体適合性ポリマーは、９５：５～５：９５の重量比である、請求項３６～３９のいずれか一項に記載の方法。
41. 前記複数のアラゴナイト粒子は、１００ｎｍ～１ｍｍの平均粒径を有する、請求項３６～４０のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記生体適合性ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド６６（ナイロン）、ポリカプロラクタム、ポリカプロラクトン、アクリルポリマー、アクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリベンゾイミダゾール、ポリカーボネート、ポリフェニレンオキシド／スルフィド、ポリプロピレン、テフロン(登録商標)、ポリ乳酸、脂肪族ポリエステル、例えばポリヒドロキシブチレート、ポリ－３－ヒドロキシブチレート（Ｐ３ＨＢ）、ポリヒドロキシバレレート、ポリヒドロキシブチレート－ポリヒドロキシバレレートコポリマー、ポリ（３－ヒドロキシブチレート－ｃｏ－３－ヒドロキシバレレート）、ポリグリコネート、ポリ（ジオキサノン）及びそれらの混合物から選択される、請求項３６～４１のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記生体適合性ポリマーは、ＰＬＡである、請求項３６～４２のいずれか一項に記載の方法。
44. 前記崩壊剤は、デンプン、変性セルロースガム、不溶性架橋ポリビニルピロリドン、デンプングリコレート、微結晶セルロース、アルファ化デンプン、カルボキシメチルデンプンナトリウム、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、Ｎ－ビニル－２－ピロリドンのホモポリマー、アルキル－、ヒドロキシアルキル－、カルボキシアルキル－セルロースエステル、アルギネート及び微結晶セルロース並びにその多形から選択される、請求項３６～４３のいずれか一項に記載の方法。
45. 前記崩壊剤は、エンドウマメデンプンである、請求項３６～４４のいずれか一項に記載の方法。
46. 前記ワクチン組成物は、ウイルスタンパク質又はその断片をコードする組換えウイルス発現コンストラクトを含む、請求項３６～４５のいずれか一項に記載の方法。
47. 前記ウイルスタンパク質又はその断片は、コロナウイルスタンパク質又はその断片に対応する、請求項４６に記載の方法。
48. 前記コロナウイルスタンパク質又はその断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ウイルス結合タンパク質である、請求項４７に記載の方法。
49. 前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ウイルス結合タンパク質は、組換えＡＣＥ２タンパク質を含む、請求項４８に記載の方法。
50. 前記組換えＡＣＥ２タンパク質は、配列番号５と少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項４９に記載の方法。
51. 前記組換えＡＣＥ２タンパク質は、配列番号６の配列を含む、請求項５０に記載の方法。
52. 前記組換えＡＣＥ２タンパク質は、Ｔ２７Ｆ、Ｔ２７Ｗ、Ｔ２７Ｙ、Ｄ３０Ｅ、Ｈ３４Ｅ、Ｈ３４Ｆ、Ｈ３４Ｋ、Ｈ３４Ｍ、Ｈ３４Ｗ、Ｈ３４Ｙ、Ｄ３８Ｅ、Ｄ３８Ｍ、Ｄ３８Ｗ、Ｑ２４Ｌ、Ｄ３０Ｌ、Ｈ３４Ａ及びＤ３５５Ｌから選択される少なくとも１つの変異を含む、請求項５１に記載の方法。
53. 前記ワクチン組成物は、アデノウイルス発現コンストラクトを含む、請求項３６～５２のいずれか一項に記載の方法。

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