JP2024521086A - 血管作動性腸ペプチド（ｖｉｐ）受容体アンタゴニスト - Google Patents

Abstract

がん及びウイルス感染の治療又は予防を管理するのに使用するためのＶＩＰ－Ｒアンタゴニストが開示されている。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるペプチドとしてのＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのキメラバリアント、及びそれを含む薬学的組成物に関する。ある特定の実施形態では、本開示は、がん若しくは感染症を有する対象をＶＩＰ－Ｒアンタゴニストで治療する方法、又は免疫細胞を本明細書に開示されるペプチドとインビトロで混合することによって、がんを標的とする免疫細胞を刺激し、がん治療を必要とする対象に、有効量の刺激免疫細胞を更に投与する方法を企図する。【選択図】図１

Description

Ｉ．関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年５月１７日に出願された米国仮出願第６３／１８９，５０７号の優先利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に明示的に組み込まれる。

ＩＩ．背景技術
血管作動性腸ペプチド（ＶＩＰ）は、中枢神経系における免疫細胞、ニューロン、及び内分泌細胞を含む様々な細胞で産生される。内因性ＶＩＰは、肺内の気道及び肺血管の平滑筋を刺激する神経に存在し、ＶＩＰはこの器官における気管支拡張剤として機能する。ＶＩＰはまた、ＶＩＰ受容体ＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２を介した細胞増殖及び炎症性シグナルの産生を変化させることができる。天然ＶＩＰの６つのＮ末端アミノ酸がニューロテンシンペプチド配列からの６つの高極性Ｎ末端６アミノ酸に置き換えられ、その後にＶＩＰのＣ末端２２アミノ酸配列が続く、ＶＩＰｈｙｂと称されるキメラペプチドが開発された。Ｎ末端アミノ酸の変化により、ＶＩＰｈｙｂは、ＶＩＰと比較して生物学的活性が変化しており、受容体に競合的に結合するがシグナル伝達を行わないことによって、ＶＩＰ受容体（ＶＩＰ－Ｒ）に対するアンタゴニストとして作用する。

がん治療は、典型的には、外科手術、化学療法、及び放射線療法を利用する。しかしながら、がん性細胞を攻撃するために免疫系を強化する代替的な治療方法が報告されている。これらの方法は、免疫系を標的とし、かつ刺激してがん性細胞を積極的に排除するために、Ｔ細胞を収集し、増幅し、変化させることを含む。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法において、単離されたＴ細胞を、キメラタンパク質を発現するように操作し、患者に戻して投与する。しかしながら、Ｔ細胞の機能特性を改善する療法を特定する必要がある。

ＩＩＩ．発明の概要
がん及びウイルス感染症の治療又は予防の管理に使用するための血管作動性腸ペプチド（ＶＩＰ）受容体アンタゴニストに関連する方法及び組成物が開示されている。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるペプチドとしてのＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのキメラバリアント、及びそれを含む薬学的組成物に関する。ある特定の実施形態では、本開示は、免疫細胞を本明細書に開示されるペプチドとインビトロで混合することによって、がんを標的とする免疫細胞を刺激し、がん治療を必要とする対象に、有効量の刺激免疫細胞を更に投与する方法を企図する。

一態様において、本明細書に開示されるのは、アミノ酸配列ＫＰＲＲＰＹＸ^１Ｘ^２Ｘ^３Ｘ^４ＴＸ^５ＬＲＫＱＸ^６ＡＶＸ^７Ｘ^８ＫＹＬＸ^９Ｘ^１０ＩＬＮ（配列番号３）を含む、血管作動性腸ペプチド（ＶＩＰ）受容体アンタゴニストであって、式中、Ｘ^１が、Ｔ又はＡであり、Ｘ^２が、Ｄ、Ｖ、又はＳであり、Ｘ^３が、Ｎ又はＤであり、Ｘ^４が、Ｙ又はＣであり、Ｘ^５が、Ｒ又はＳであり、Ｘ^６が、Ｍ又はＩであり、Ｘ^７が、Ｋ又はＮであり、Ｘ^８が、Ｋであり、Ｘ^９が、Ｎ又はＭであり、Ｘ^１０が、Ｓ又はＬであり、但し、ペプチドは、ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号１）でもなく、Ｘ^１がＴであり、Ｘ^２がＤであり、Ｘ^３がＮであり、Ｘ^４がＹであり、Ｘ^５がＲであり、Ｘ^６がＭであり、Ｘ^７がＫであり、Ｘ^９がＮであり、Ｘ^１０がＳである組み合わせでもない、ＶＩＰ受容体アンタゴニストである。一態様において、本明細書に開示されるのは、アミノ酸配列ＫＰＲＲＰＹＸ^１Ｘ^２Ｘ^３Ｘ^４ＴＸ^５ＬＲＫＱＸ^６ＡＶＸ^７ＫＹＬＸ^８Ｘ^９ＩＬＮ（配列番号２１）を含む、血管作動性腸ペプチド（ＶＩＰ）受容体アンタゴニストであって、式中、Ｘ^１が、Ｔ又はＡであり、Ｘ^２が、Ｄ、Ｖ、又はＳであり、Ｘ^３が、Ｎ又はＤであり、Ｘ^４が、Ｙ又はＣであり、Ｘ^５が、Ｒ又はＳであり、Ｘ^６が、Ｍ又はＩであり、Ｘ^７が、Ｋ又はＮであり、Ｘ^８が、Ｎ又はＭであり、Ｘ^９が、Ｓ又はＬであり、但し、ペプチドは、ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号１）でもなく、Ｘ^１がＴであり、Ｘ^２がＤであり、Ｘ^３がＮであり、Ｘ^４がＹであり、Ｘ^５がＲであり、Ｘ^６がＭであり、Ｘ^７がＫであり、Ｘ^８がＮであり、Ｘ^９がＳである組み合わせでもない、ＶＩＰ受容体アンタゴニストである。例えば、本明細書に開示されるのは、アミノ酸配列：ＫＰＲＲＰＹＡＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＮＫＹＬＮＬＩＬＮ（配列番号６）、ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＹＴＲＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＳＩＬＮ（配列番号７）、ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＮＫＹＬＭＳＩＬＮ（配列番号８）、ＫＰＲＲＰＹＡＤＮＣＴＲＬＲＫＱＩＡＶＮＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号９）、ＫＰＲＲＰＹＴＶＮＹＴＳＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＬＩＬＮ（配列番号１０）、ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＮＫＹＬＮＬＩＬＮ（配列番号１１）、ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＮＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号１２）、ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＳＩＬＮ（配列番号１３）、ＫＰＲＲＰＹＴＶＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＬＩＬＮ（配列番号１４）、ＫＰＲＲＰＹＴＳＤＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号１５）、ＫＰＲＲＰＹＴＳＤＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＬＩＬＮ（配列番号１６）、その断片、又はその類似体を含む、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストである。

また、本明細書に開示されるのは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト内のアミノ、カルボキシル、ヒドロキシル、又はチオール基が、置換されている、任意の先行する態様のＶＩＰ－Ｒアンタゴニストである。

いくつかの態様において、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストは、ナノ粒子にコンジュゲートされている、かつ／又はナノ粒子内にカプセル化されている。

また、本明細書に開示されるのは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストが、例えば、蛍光性又は放射性の標識を更に含む、任意の先行する態様のＶＩＰ－Ｒアンタゴニストである。

一態様において、本明細書に開示されるのは、任意の先行する態様のＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物である。

一態様において、本明細書に開示されるのは、任意の先行する態様のＶＩＰ－Ｒアンタゴニストをコードする核酸である。また、本明細書に開示されるのは、当該核酸を含む、組換えベクターである。一態様において、本明細書に開示されるのは、任意の先行する態様の組換えベクターを含む、発現系又は細胞である。

また、本明細書に開示されるのは、対象におけるがん及び／若しくは転移を治療する、減少させる、阻害する、低減する、改善する、及び／若しくは予防する方法、又は対象におけるがん及び／又は転移に対する免疫応答を増強する方法であって、対象に、治療有効量のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）、又は任意の先行する態様の薬学的組成物を投与することを含む、方法である。ある特定の実施形態では、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト又は薬学的組成物は、別の抗がん剤と組み合わせて投与される。いくつかの態様において、本方法は、対象を放射線に曝露すること、及び／又は同種造血幹細胞を対象に移植すること、及び／又は他の養子細胞療法（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞、ＴＣＲ修飾Ｔ細胞、ＣＡＲ ＮＫ細胞、ＴＩＬ、ＴＩＮＫ、及び／若しくはＭＩＬの投与など）を更に含むことができる。ある特定の実施形態では、本方法は、治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤を含む）を対象に投与することを更に含む。ある特定の実施形態では、本方法は、治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤である。

ある特定の実施形態では、本開示は、Ｔ細胞の活性化及び／又は増殖をエクスビボで増強する方法であって、Ｔ細胞を、任意の先行する態様のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）と混合することを含む、方法に関する。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞を混合することは、抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて行われる。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞を混合することは、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（フィメピノスタット、リゴサチブ、ブパルリシブ、ＣＨ５１３２７９９、ピララリシブ、ＺＳＴＫ４７４、ソノリシブ、ピクチリシブ、コパンリシブ、Ｂ５９１、ＴＧ－１００－１１５、ＲＩＤＲ－ＰＩ－１０３、ダクトリシブ、アピトリシブ、ゲダトリシブ、ＳＦ１１２６、オミパリシブ、サモトリシブ、ビミラリシブ、パクサリシブ、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＺＳＴＫ４７４、同様に、アイソフォーム特異的阻害剤、例えばＰＩ３Ｋα阻害剤（例えば、イナボリシブ、アルペリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＰＷＴ３３５９７、タセリシブ、及び／若しくはセラベリシブなど）、ＰＩ３Ｋβ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８１８６及び／若しくはＧＳＫ２６３６７７１など）、ＰＩ３Ｋδ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８８３５、ＡＺＤ８１８６、ネミラリシブ、セレタリシブ、アカリシブ（ａｃａｌｉｓｉｂ）、ＣＡＬ２６３、ＴＧ１００－１１５、デュベリシブ、イデラリシブ、テナリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、ＡＭＧ３１９、リンペルリシブ（ｌｉｎｐｅｒｌｉｓｉｂ）、パルサクリシブ、ウムブラリシブ、及び／若しくはレニオリシブなど）、並びに／又はＰＩ３Ｋγ阻害剤（例えば、エガネリシブ、テナリシブ、タセリシブ、及び／若しくはデュベリシブなど）を含むが、これらに限定されない）と組み合わせて行われる。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞を混合することは、免疫チェックポイント遮断剤と組み合わせて行われる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤である。

また、本明細書に開示されるのは、任意の先行する態様のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）又は任意の先行する態様の薬学的組成物と、抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体と、を含む、キットである。ある特定の実施形態では、キットは、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（フィメピノスタット、リゴサチブ、ブパルリシブ、ＣＨ５１３２７９９、ピララリシブ、ＺＳＴＫ４７４、ソノリシブ、ピクチリシブ、コパンリシブ、Ｂ５９１、ＴＧ－１００－１１５、ＲＩＤＲ－ＰＩ－１０３、ダクトリシブ、アピトリシブ、ゲダトリシブ、ＳＦ１１２６、オミパリシブ、サモトリシブ、ビミラリシブ、パクサリシブ、ボクスタリシブ、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＺＳＴＫ４７４、同様に、アイソフォーム特異的阻害剤、例えばＰＩ３Ｋα阻害剤（例えば、イナボリシブ、アルペリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＰＷＴ３３５９７、タセリシブ、及び／若しくはセラベリシブなど）、ＰＩ３Ｋβ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８１８６及び／若しくはＧＳＫ２６３６７７１など）、ＰＩ３Ｋδ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８８３５、ＡＺＤ８１８６、ネミラリシブ、セレタリシブ、アカリシブ、ＣＡＬ２６３、ＴＧ１００－１１５、デュベリシブ、イデラリシブ、テナリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、ＡＭＧ３１９、リンペルリシブ、パルサクリシブ、ウムブラリシブ、及び／若しくはレニオリシブなど）、並びに／又はＰＩ３Ｋγ阻害剤（例えば、エガネリシブ、テナリシブ、タセリシブ、及び／若しくはデュベリシブなど）を含むが、これらに限定されない）を更に含む。ある特定の実施形態では、キットは、免疫チェックポイント遮断剤を更に含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤である。

また、本明細書に開示されるのは、１つ以上のＴ細胞と、任意の先行する態様のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）又は任意の先行する態様の薬学的組成物と、を含む、インビトロ細胞培養組成物である。いくつかの実施形態では、インビトロ細胞培養組成物は、抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体を更に含む。ある特定の実施形態では、インビトロ細胞培養組成物は、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（フィメピノスタット、リゴサチブ、ブパルリシブ、ＣＨ５１３２７９９、ピララリシブ、ＺＳＴＫ４７４、ソノリシブ、ピクチリシブ、コパンリシブ、Ｂ５９１、ＴＧ－１００－１１５、ＲＩＤＲ－ＰＩ－１０３、ダクトリシブ、アピトリシブ、ゲダトリシブ、ＳＦ１１２６、オミパリシブ、サモトリシブ、ビミラリシブ、パクサリシブ、ボクスタリシブ、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＺＳＴＫ４７４、同様に、アイソフォーム特異的阻害剤、例えばＰＩ３Ｋα阻害剤（例えば、イナボリシブ、アルペリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＰＷＴ３３５９７、タセリシブ、及び／若しくはセラベリシブなど）、ＰＩ３Ｋβ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８１８６及び／若しくはＧＳＫ２６３６７７１など）、ＰＩ３Ｋδ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８８３５、ＡＺＤ８１８６、ネミラリシブ、セレタリシブ、アカリシブ、ＣＡＬ２６３、ＴＧ１００－１１５、デュベリシブ、イデラリシブ、テナリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、ＡＭＧ３１９、リンペルリシブ、パルサクリシブ、ウムブラリシブ、及び／若しくはレニオリシブなど）、並びに／又はＰＩ３Ｋγ阻害剤（例えば、エガネリシブ、テナリシブ、タセリシブ、及び／若しくはデュベリシブなど）を含むが、これらに限定されない）を更に含む。ある特定の実施形態では、インビトロ細胞培養組成物は、免疫チェックポイント遮断剤を更に含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤である。

ある特定の実施形態では、本開示は、対象における移植片対宿主疾患を治療又は予防する方法であって、有効量の、任意の先行する態様の任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、又はその断片など）を、移植された同種異系組織又は細胞を受容するか、又は受容した対象に投与することを含む、方法に関する。

ある特定の実施形態では、本開示は、微生物感染症（ウイルス、細菌、真菌、及び／若しくは寄生虫感染症を含むが、これらに限定されない）を治療する、低減する、阻害する、減少させる、軽減する、管理する、及び／又は予防する方法であって、微生物に感染した対象、又は微生物感染症の危険性がある対象に、治療有効量の、任意の先行する態様のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）又は任意の先行する態様の薬学的組成物を投与することを含む、方法に関する。

また、本明細書に開示されるのは、がん又は慢性感染症の治療を必要とする対象におけるそれを行う方法であって、１つ以上のＴ細胞を提供することと、１つ以上のＴ細胞を、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）又は任意の先行する態様の薬学的組成物と混合し、それによって１つ以上のＴ細胞を増殖させることと、治療有効量の増殖したＴ細胞を対象に投与することと、を含む、方法である。

いくつかの実施形態では、任意の先行する態様の方法は、１つ以上のＴ細胞を、抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて混合することを含む。いくつかの実施形態では、任意の先行する態様の方法は、１つ以上のＴ細胞を、免疫チェックポイント遮断剤と組み合わせて混合することを含む。いくつかの実施形態では、任意の先行する態様の方法は、１つ以上のＴ細胞を、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（フィメピノスタット、リゴサチブ、ブパルリシブ、ＣＨ５１３２７９９、ピララリシブ、ＺＳＴＫ４７４、ソノリシブ、ピクチリシブ、コパンリシブ、Ｂ５９１、ＴＧ－１００－１１５、ＲＩＤＲ－ＰＩ－１０３、ダクトリシブ、アピトリシブ、ゲダトリシブ、ＳＦ１１２６、オミパリシブ、サモトリシブ、ビミラリシブ、パクサリシブ、ボクスタリシブ、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＺＳＴＫ４７４、同様に、アイソフォーム特異的阻害剤、例えばＰＩ３Ｋα阻害剤（例えば、イナボリシブ、アルペリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＰＷＴ３３５９７、タセリシブ、及び／若しくはセラベリシブなど）、ＰＩ３Ｋβ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８１８６及び／若しくはＧＳＫ２６３６７７１など）、ＰＩ３Ｋδ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８８３５、ＡＺＤ８１８６、ネミラリシブ、セレタリシブ、アカリシブ、ＣＡＬ２６３、ＴＧ１００－１１５、デュベリシブ、イデラリシブ、テナリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、ＡＭＧ３１９、リンペルリシブ、パルサクリシブ、ウムブラリシブ、及び／若しくはレニオリシブなど）、並びに／又はＰＩ３Ｋγ阻害剤（例えば、エガネリシブ、テナリシブ、タセリシブ、及び／若しくはデュベリシブなど）を含むが、これらに限定されない）と組み合わせて混合することを含む。

いくつかの実施形態では、任意の先行する態様の方法は、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＶＩＰ受容体アンタゴニスト、又は免疫チェックポイント遮断剤、又はそれらの組み合わせを、増殖したＴ細胞を投与する前、投与中、又は投与後に、対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のＴ細胞は、対象に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上のＴ細胞は、操作されたＴ細胞である。いくつかの実施形態では、１つ以上の受容体は、キメラ抗原受容体を含む。

ＩＶ．図面の簡単な説明
本明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図面は、一部の実施形態を例示し、説明とともに、開示される組成物及び方法を例示する。

ＶＩＰ由来の新規ペプチドによる治療が、急性骨髄性白血病を生着させたマウスの生存を延長したことを示す。Ｂ６（ＣＤ４５．２、Ｈ－２Ｋ^ｂ）マウスに、Ｃ１４９８を１×１０^６／マウスで尾静脈を通して投与した。ＶＩＰ新規ペプチドを、白血病投与後６日目から、マウス一匹当たり毎日１０マイクログラムで、合計７回皮下注射した。マウスの生存を毎日観察した。３回の複製実験からデータをプールした。 ＶＩＰ由来の新規ペプチドによる治療が、白血病マウスの生存を延長したことを示す。Ｂ６（ＣＤ４５．２、Ｈ－２Ｋ^ｂ）マウスに、Ｃ１４９８を１×１０^６／マウスで尾静脈を通して投与した。ＶＩＰ新規ペプチドを、白血病投与後６日目から、マウス一匹当たり毎日１０マイクログラムで、合計７回皮下注射した。マウスの生存を毎日観察した。マウスの生存を、３回の複製実験からプールし、スクランブルペプチドで処置したマウスの生存と比較して、ログランク試験によって分析した。 （上記の通り。） ＶＩＰ由来の新規ペプチドによる競合結合ＶＰＡＣの予測親和性及び効力が、ＶＩＰ由来の新規ペプチドで処置した白血病保有マウスにおける生存パーセンテージの増加と相関したことを示す。別個のＶＩＰ新規ペプチドの各々について、ヒトＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２に対する予測結合親和性の絶対値の合計の対数を作成し、次いで、それぞれの生存パーセンテージに対する結合親和性の絶対値の対数をプロットする。パネルＡ：ヒトＶＰＡＣ１に対する予測結合親和性の絶対値の対数（ＶＰＡＣ１についての結合親和性の絶対値の対数）［生存パーセンテージ］との生存の相関。ＡＮＴ２９３（ｓｃｒａｍｂ）（１．６４）［０］，ＡＮＴ０８（１．７８）［１６］，ＶＩＰｈｙｂ（１．７８２）［５］，ＡＮＴ１９７（１．８０３）［３５］，ＡＮＴ２１９（１．８４１）［２０］，ＡＮＴ１９５（１．８４８）［４０］，ＡＮＴ１０７（１．８６４）［２０］，ＡＮＴ１１４（１．８６７）［２０］，ＡＮＴ２０３（１．８７７）［２５］．ＡＮＴ５８（１．８８３）［３０），パネルＢ：ヒトＶＰＡＣ２に対する予測結合親和性の絶対値の対数との生存の相関。（ＶＰＡＣ２に対する結合親和性の絶対値の対数）［生存パーセンテージ］。ＡＮＴ２９３（ｓｃｒａｍｂ）（１．５７３）［０］，ＡＮＴ２０３（１．７０７）［２５］，ＶＩＰｈｙｂ（１．７０８）［５］，ＡＮＴ１０７（１．７１９）［２０］，ＡＮＴ０８（１．７３２）［１６］，ＡＮＴ１１４（１．７３４）［２０］，ＡＮＴ５８（１．７８２）［３０］，ＡＮＴ１９７（１．８３９）［３５］，ＡＮＴ２１９（１．８３９）［２０］，ＡＮＴ１９５ １．８５４［４０］パネルＣ：各ＶＩＰ由来の新規ペプチドで処置した白血病マウスにおけるそれぞれの生存パーセンテージに対してプロットした、ＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２に対する結合親和性の合計の絶対値の対数を示す。 ＶＩＰ由来の新規ペプチドによる処置が、白血病マウスの血液中の白血病細胞のレベルを低下させたことを示す。Ｂ６ ＳＪＬ（ＣＤ４５．１、Ｈ－２Ｋ^ｂ）マウスに、Ｃ１４９８（ＣＤ４５．２Ｈ－２Ｋ^ｂ）１×１０^６／マウスを尾静脈を通して投与した。ＶＩＰ新規ペプチドを、白血病投与後６日目から、マウス一匹当たり毎日１０マイクログラムで、合計７回皮下注射した。ペプチドの投与前６日目から開始して、マウスの下顎静脈から毎週採血した。ＣＤ４５．２に対する抗体は、骨髄性白血病細胞を同定し、ＣＤ４５．１に対する抗体は、宿主のマウス白血球を同定した。 ＶＩＰ由来の新規ペプチドで処置したマウスは、骨髄性白血病細胞で再チャレンジしてからの生存が延長したことを示す。Ｂ６マウスに、Ｌｕｃ－Ｃ１９８陽性対照についてはＬｕｃ－１４９８を１×１０^６／マウスで、又はＣ１４９８（ルシフェラーゼ）陰性対照についてはＣ１４９８を１×１０^６／マウスで、尾静脈を通して投与した。６８日目以降の無腫瘍残存生存マウスに、尾静脈を通してＬｕｃ－１４９８を１×１０^６／マウスで再チャレンジした。白血病再チャレンジの１６日後、マウスを隔週で発光イメージングした。画像露光時間は、１６日目及び２３日目の３分を除いて１５秒であった。データは、平均輝度［ｐ／ｓ／ｃｍ^２／ｓｒ］で示した。死んだマウスは、白いＸで示す。 ＶＩＰ由来の新規ペプチドで処置したマウスからの集計データは、急性骨髄性白血病で再チャレンジしてからの生存が延長したことを示す。Ｂ６マウスに、Ｌｕｃ－Ｃ１９８陽性対照についてはＬｕｃ－１４９８を１×１０^６／マウスで、又はＣ１４９８（ルシフェラーゼ陰性）陽性対照についてはＣ１４９８を１×１０^６／マウスで、尾静脈を通して投与した。以前にＣ１４９８を接種し、新規ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストペプチドで処置し、６０日を超えてがんがないままであった無腫瘍マウスを、Ｌｕｃ－Ｃ１４９８で再チャレンジした。マウスの生存を毎日測定した。Ｃ１４９８白血病を最初に接種し、その後ＶＩＰ由来の新規ペプチドで処置した後に生存していた１１匹のマウスを以下のようにプールした：ＡＮＴ０８マウス１匹、ＡＮＴ５８マウス３匹、ＡＮＴ１０７マウス２匹、ＡＮＴ１９５マウス２匹、ＡＮＴ１９７マウス１匹、ＡＮＴ３００マウス２匹。ルシフェラーゼ陽性Ｃ１４９８を、白血病又はＶＩＰ由来の新規ペプチドに以前に曝露されていない８匹の対照マウス（Ｌｕｃ－Ｃ１４９８対照）に投与し、ルシフェラーゼ陰性Ｃ１４９８を、白血病又はＶＩＰ由来の新規ペプチドに以前に曝露されていない７匹の対照マウス（Ｃ１４９８対照）に投与した。 皮下移植されたＫＰＣ腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスのＡＮＴ３０８＋ａＰＤ－１処置時の腫瘍体積の減少を示す。腫瘍移植後２２日目、１０日間の処置を完了した３日後。＊ｐ＜０．０５ ウィルコクソンの符号順位検定 移植後１０日目から１９日目までの、ＡＮＴ３０８又はスクランブルペプチドの毎日の注射及び抗ＰＤ１モノクローナル抗体又はアイソタイプマッチド抗体の３日ごとの注射による１０日間の処置の後の、皮下腫瘍として成長するＰａｎｃ０２腫瘍の体積の移植後１０日目の処置開始時点から移植後２２日目の安楽死までの相対的な変化を示す。マウスを安楽死させ、腫瘍移植後２２日目、及び１０日間の処置を完了した３日後に腫瘍体積を測定した。 移植後１０日目から１９日目までの、ＡＮＴ３０８又はスクランブルペプチドの毎日の注射及び抗ＰＤ１モノクローナル抗体又はアイソタイプマッチド抗体の３日ごとの注射による１０日間の処置後の、皮下に成長したＰａｎｃ０２腫瘍の実際の腫瘍体積を示す。マウスを安楽死させ、腫瘍移植後２２日目、及び１０日間の処置を完了した３日後に剖検を行った。 皮下ＫＰＣ腫瘍移植後３７日における腫瘍サイズ及び成長率を示す。示されるのは、スクランブルペプチド＋ＩｇＧ、Ａｎｔ３０８＋抗ＰＤ１、スクランブルペプチド＋抗ＰＤ－１、Ａｎｔ３０８＋ＩｇＧ、及びＡｎｔ３０８＋ＡＭＤ３１００である。腫瘍体積をキャリパーで測定した。「星」（＊）は、大きな腫瘍体積（＞５００ｍｍ^３）又は腫瘍の上に覆われた皮膚の潰瘍化のいずれかのために安楽死させたマウスを示す。 Ａ、Ｂ、及びＣは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（Ａｎｔ０８、Ａｎｔ３０８、Ａｎｔ１９５）によるヒトＴ細胞の処置が、ＣＤ６９発現によって測定されるＴ細胞活性化を増強することを示す。Ａは、３ｕＭでのそれぞれのペプチド処置による６時間の時点でのＣＤ６９発現陽性のＴ細胞の合計パーセントを示す。Ｂは、それぞれのペプチド処置による２４時間の時点でのＣＤ６９発現陽性のＣＤ４＋及びＣＤ８＋サブセットＴ細胞の合計パーセントを示す。「休息（ｒｅｓｔｉｎｇ）」は、活性化せずに６時間又は２４時間の培養中に維持された群を表す。「活性化」は、対応するペプチド処置を行わずにＣＤ３抗体コーティングされたプレートで活性化されたＴ細胞を反映する。「ＶＳ１」は、ペプチド対照としてＶＩＰスクランブルされた１個のペプチドの存在下で活性化された群を示す。比較のために点線（－－－）で示された「活性化」群からの平均値。同じ健康なドナーからの応答は、同じ色の点で示す。エラーバーは、６つの健康なドナー試料からの平均（ＳＥＭ）の標準誤差として計算される。Ｃは、１人のドナー（青色の点）からの２４時間の時点で、対照群（列１）と比較してアンタゴニスト処置群におけるＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞の割合が高いことを示す代表的なフロープロットを示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） 処置の２４時間後のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＴＩＭ３の発現を示す。 処置の６時間及び２４時間後のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＸＣＲ４の発現を示す。 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥは、マウス膵臓がん細胞（ＫＰＣ）がＶＩＰ受容体を発現するが、その成長は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストによる処置によっては影響を受けないことを示す。Ａは、ヒト及びマウス膵臓がん細胞におけるＶＰＡＣ１、ＶＰＡＣ２、及びＰＡＣ１の発現を示すウエスタンブロットを示す。Ｂ、Ｃ、及びＤは、各細胞株におけるＧＡＰＤＨに対するＶＰＡＣ１（Ｂ）、ＶＰＡＣ２（Ｃ）、及びＰＡＣ１（Ｄ）の発現比率を示す。Ｅは、ＣＩＰアンタゴニストの濃度が増加している対照と比較した細胞の生存能を示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、及びＣは、ＶＩＰ－ＲアンタゴニストＡＮＴ３０８＋抗ＰＤ１抗体処置が、養子移入されたＴ細胞の膵臓腫瘍への浸潤を促進したことを示す。Ａは、実験スキームを示す。Ｂ及びＣは、未処置（Ｂ）及び処置（Ｃ）マウスにおける腫瘍からの免疫組織化学画像を示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） 膵臓がん（ＫＰＣ）腫瘍の移植後の処置を行った場合と行っていない場合のマウスにおける生存曲線を示す。 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、及びＧは、ＶＩＰがＰＤＡＣによって過剰発現されていることを示す。（Ａ）ＴＣＧＡから得た、種々の固形悪性腫瘍におけるＶＩＰ ｍＲＮＡ発現レベル。（Ｂ）ＶＩＰ（緑色）及びＣＫ１９（赤色）に対する抗体で染色されたヒトＰＤＡＣ腫瘍の代表的な画像であって、隣接する正常上皮細胞と比較して、がん上皮細胞ではＶＩＰ発現がより高いことを示すものである。スケールバーは２０μｍを表す。２４時間培養したマウス及びヒトＰＤＡＣ細胞株（細胞株当たりｎ＝３）から採取した培養上清中のＶＩＰのレベルを、Ｂ１６Ｆ１０及びＤ４Ｍ黒色腫細胞由来の培養上清中のＶＩＰのレベルと比較し（Ｃ）、黒色腫又はＰＤＡＣ腫瘍を保有するマウス（ｎ＝５）の血漿中のＶＩＰのレベルを、腫瘍を保有していないマウスの血漿中のＶＩＰのレベルと比較し（Ｄ）、ＰＤＡＣ患者（ｎ＝１９）の血漿中のＶＩＰのレベルを、健康なボランティア（ｎ＝２６）の血漿中のＶＩＰのレベルと比較し（Ｅ）、異なる腫瘍体積で単離された皮下ＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍を保有する１匹のＣ５７ＢＬ／６マウス由来の血漿中のＶＩＰのレベル（Ｆ）、ヒトＰＤＡＣ腫瘍（ｎ＝９）及びＰＳＣＬ－１２細胞株（ｎ＝３）から単離した一次ＣＡＦからの培養上清中のＶＩＰのレベルを比較した（Ｇ）。図１６Ｃ及び１６Ｄのｐ値は、ＡＮＯＶＡ及び健康なボランティアの事後検定を使用して計算した。平均は、Ｂ１６Ｆ１０と比較した。ｅのｐ値は、スチューデントのｔ検定により計算した。エラーバーは平均±ＳＥＭを示す。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、及び＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、及びＩは、ＶＩＰ－Ｒシグナル伝達の阻害が、培養ヒトＴ細胞におけるＴ細胞枯渇マーカーの発現を低下させることを示す。ＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２の（Ａ）代表的なウエスタンブロット及び（Ｂ）定量された発現レベル；並びに（Ｃ）０、３、６、１２、２４、４８及び７２時間プレート結合ヒト抗ＣＤ３抗体で増殖させた健康なヒトＴ細胞の溶解物中のＰＤ－１及びＣＴＬＡ－４。ＶＰＡＣ２ ＫＯモデルから確認されたように、ＶＰＡＣ２特異的発現について示された２５ｋＤのより低い分子量バンド。ペプチドを含まない対照のレベルに正規化されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞における、（Ｄ）活性化後２４時間でのＣＤ６９発現（Ｅ）６時間でのＶＰＡＣ１／２受容体の下流でのＣＲＥＢ（ホスホ－ＣＲＥＢ）のリン酸化のパーセンテージ。ＰＤＡＣ患者の末梢血Ｔ細胞を、プレート結合ヒト抗ＣＤ３抗体＋／－ＡＮＴ００８で９日間増殖させ、（Ｆ）Ｔｒｅｇのパーセンテージを、（Ｇ）示されるゲーティング戦略を使用して定量した。（Ｈ）ＣＤ４＋及び（Ｉ）ＣＤ８＋サブセットにおける、ＰＤ１＋、Ｔｉｍ－３＋、Ｌａｇ３＋、ＰＤ１＋Ｔｉｍ－３＋、ＰＤ１＋Ｌａｇ３＋及びＰＤ１＋Ｔｉｍ－３＋Ｌａｇ－３＋（トリプルポジティブ）のパーセンテージを示した。Ｄ及びＥの統計的差異を、反復測定ＡＮＯＶＡ、続いてダネットの事後検定によって計算し、処置群の各試料を、対照群の一致した試料と比較した（スクランブル処理）。Ｆ、Ｈ、及びＩの統計的差異を、対合スチューデントＴ検定によって計算した。エラーバーは平均±ＳＥＭを示す。＊ｐ＜０．５０、＊＊ｐ＜０．０１、及び＊＊＊ｐ＜０．００１。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１の組み合わせで処置したＰＤＡＣ保有マウスにおける生存の改善を示す。（Ａ）処置によって層別化された、皮下移植されたＫＰＣ．Ｌｕｃ、ＭＴ５又はＰａｎｃ０２腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスのカプラン・マイヤー生存プロット。（Ｂ）４つの異なる処置群における皮下腫瘍移植後のノギスによって測定されたａの結果に対応するＫＰＣ．Ｌｕｃについてのクモプロット。灰色の破線で表される腫瘍体積中央値（－－－－）。ａ及びｂにおいて、腫瘍細胞を、雌又は雄マウスに移植し、雄は、雌マウスと比較して体重が重いために２０μｇのＡＮＴ３０８を受けた。処置によって層別化された、皮下移植されたＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍を有する野生型ＣＤ５７ＢＬ／６マウスと比較した、モノクローナルＣＤ４及び／又はＣＤ８モノクローナル抗体を受けている（Ｃ）Ｃ５７ＢＬ／６マウス、（Ｄ）ＣＤ４ＫＯ、又は（Ｅ）ＣＤ８ＫＯマウスのカプラン・マイヤー生存プロット。カプラン・マイヤー曲線の統計的差異を、Ｌｏｇ－ｒａｎｋ検定によって計算する。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、及び＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、及びＩは、ＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍において、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと抗ＰＤ－１との併用により、Ｔ細胞活性化が増加し、Ｔｒｅｇの頻度が低下したことを示す。ＡＮＴ００８及び／又は抗ＰＤ－１で処置したＣ５７ＢＬ／６マウス（処置群当たりｎ＝５）における皮下ＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍を、処置１０日後にフローサイトメトリーによって、Ｋｉ６７、ＩＦＮガンマ、ＩＬ－４、ＰＤ－１、及びＴｉｍ－３を発現する（Ａ）ＣＤ４＋及び（Ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合について分析した。（Ｃ）ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇを定量するために使用されるゲーティング戦略を示す代表的なフロープロット。（Ｄ）異なる処置群の腫瘍におけるＴｒｅｇのパーセンテージ（処置群当たりｎ＝５）。（Ｅ）ＡＮＴ００８＋アイソタイプＩｇＧ（ＩｇＧ）対スクランブルペプチド（Ｓｃｒａｍ）＋アイソタイプＩｇＧ、（Ｆ）スクランブルペプチド＋抗ＰＤ－１対スクランブルペプチド＋アイソタイプＩｇＧ、及び（Ｇ）ＡＮＴ００８＋抗ＰＤ－１対スクランブルペプチド＋アイソタイプＩｇＧ（処置群当たりｎ＝３匹のマウス）からのＴ細胞における遺伝子の差異的発現を示すボルカノプロット。水平な黒色線は、偽発見率（ＦＤＲ）＜０．１を表す。ＴＣＲ活性化及び共刺激に関連し、Ｓｃｒａｍ＋アイソタイプＩｇＧ（ＦＤＲ＜０．１）と比較した場合に有意に高いレベルにある遺伝子は、赤色で標識される。（Ｈ）ＴＣＲ活性化及び共刺激に関連する遺伝子の遺伝子発現変化を示すヒートマップ。（Ｉ）異なる処置群からのマウスの腫瘍におけるＴ細胞間のＴＣＲ活性化及び共刺激経路スコア。Ａ、１９Ｂ、１９Ｄ及び１９Ｉの統計的差異を、ＡＮＯＶＡによって計算し、続いてダネットの事後検定を行った。エラーバーは、平均±ＳＥＭ ＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊ｐ＜０．０００１を示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、及びＧは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１による併用療法が、腫瘍内の四量体＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を増加させ、腫瘍再チャレンジに対する保護免疫を提供することを示す。（Ａ）各処置群におけるＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍のＴ細胞におけるシャノンのエントロピーを示す箱ひげ図。（Ｂ）各処置群の試料間で共有されるＴＣＲ－βアミノ酸配列、及び（Ｃ）各処置群における共有クローンの頻度を示すリスト。配列は、特定のＴＣＲ－βクローンを共有する群（ｎ＝４）当たりのマウスの数を表すように色分けされる。皮下ＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍におけるＣＤ８＋を、（Ｄ）ゲーティング戦略を使用して、ＡＮＴ３０８及び／又は抗ＰＤ－１（処置群当たりｎ＝３）による処置の１０日後にＭｕＬＶ ｐ１５Ｅ－Ｈ２Ｋｂ四量体で染色し、（Ｅ）定量した。（Ｆ）腫瘍移植後３～１２日目からＡＮＴ００８／ＡＮＴ３０８及び／又は抗ＰＤ－１で処置した皮下ＫＰＣ．Ｌｕｃ保有マウスのカプラン・マイヤー生存曲線（スクランブルペプチド＋アイソタイプＩｇＧ当たりｎ＝１６、ＡＮＴ００８／ＡＮＴ３０８＋アイソタイプＩｇＧ及びスクランブルペプチド＋抗ＰＤ－１処置群でｎ＝２０、ＡＮＴ００８／ＡＮＴ３０８＋抗ＰＤ－１処置群でｎ＝２３）。（Ｇ）反対側脇腹にＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍を再チャレンジした、Ｆからの腫瘍のないマウスのカプラン・マイヤー生存曲線（スクランブルペプチド＋抗ＰＤ－１処置群ではｎ＝６；ＡＮＴ００８／ＡＮＴ３０８＋抗ＰＤ－１処置群ではｎ＝８）。ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスに、再チャレンジと同時に腫瘍細胞を接種した（ｎ＝７）。ａ及びｅの統計的差異を、ＡＮＯＶＡ、続いてダネットの事後検定によって計算し、Ｆ及びＧでは、Ｌｏｇ－ｒａｎｋ検定を使用して計算した。エラーバーは、平均±ＳＥＭ ＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１を示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、及びＩは、ＡＮＴ００８と抗ＰＤ－１との間の相乗作用が、同所性ＫＰＣ．ＬｕｃマウスＰＤＡＣにおけるＴ細胞浸潤及び増殖を増加させ、腫瘍負荷を減少させることを示す。ＫＰＣ．Ｌｕｃ細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの膵臓の尾部に同所的に移植し、スクランブル＋ＩｇＧ、ＡＮＴ００８＋ＩｇＧ、スクランブル＋抗ＰＤ－１、及びＡＮＴ００８＋抗ＰＤ－１において、それぞれｎ＝９、１０、８及び１１で、ＡＮＴ００８及び／又は抗ＰＤ－１で処置した。（Ａ）ＡＮＴ００８及び／又は抗ＰＤ－１によるＫＰＣ．Ｌｕｃ細胞の同所移植及び治療戦略を示す概略図。（Ｂ）処置開始前７日目と比較した２２日目の腫瘍フラックスの変化％を示すウォーターフォールプロット。（Ｃ）異なる処置群において、ＩＶＩＳ生物発光イメージングによって測定した総フラックス。イソフルランを、生物発光イメージングのための麻酔に使用した。フラックスの中央値は、灰色の破線（…）で表す。十字記号（＋）は、腫瘍の潰瘍化に起因して２５日前に安楽死されたマウスを表し、円記号（○）は、図３０に示すＭＲＩイメージングによって２６日目にイメージングされたマウスを表す。（Ｄ）マウスを安楽死させた２５日目の膵臓の重量を示す棒グラフ。「星」形状（★）のデータポイントは、腫瘍のないマウスを示し、点線の水平線（…）は、ナイーブマウスからの健康な膵臓の平均重量を表す。（Ｅ）ＤＡＰＩ（青色）、ＣＤ４（黄色）、ＣＤ８（赤色）及びＫｉ６７（シアン）について染色された膵臓腫瘍を示す代表的な多重ＩＨＣ画像（右）、並びに組織内の青色コラーゲン染色を示す黒色の矢印による三色染色（左）。（Ｆ）ＣＤ４＋又は（２１Ｇ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ｍｍ^２；並びに（Ｈ）Ｋｉ６７＋ＣＤ４＋又は（Ｉ）Ｋｉ６７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ｍｍ^２の数を示すバープロット。ＤのＰ値を、スチューデントＡＮＯＶＡ、続いてダネットの事後検定（各処置群をＳｃｒａｍ＋ＩｇＧと比較）を用いて計算した。エラーバーは平均±ＳＥＭを示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと抗ＰＤ－１との併用療法が、腫瘍内Ｔ細胞浸潤を促進し、腫瘍排出リンパ節におけるＴ細胞上のＣＸＣＲ４発現を減少させることを示す。ＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植した。腫瘍移植後１５日目に、ＧＦＰ＋Ｔ細胞を、ＡＮＴ３０８＋／－ａＰＤ－１で３日間処置して（尾静脈注射を介して）養子移入した。（Ａ）皮下ＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍を有するマウスにおけるＧＦＰ＋Ｔ細胞移植及び治療戦略を示す概略図。（Ｂ）代表的なＨｏｅｓｃｈｔ（核を示す青色）は、各処置群の腫瘍からの腫瘍組織を染色した。ＡＮＴ３０８＋ａＰＤ－で処置したマウスの腫瘍の元の画像において、Ｒ０Ｉ－１及びＲＯＩ－２と標識された２つの目的領域（ＲＯ１）のズームインも示される。Ｔ細胞のＣＤ４＋（左）及びＣＤ８＋（右）サブセットにおける（Ｃ）ＣＸＣＲ４＋ＣＤ６９＋及び（Ｄ）ＣＸＣＲ４＋Ｋｉ６７＋細胞のパーセンテージ。（Ｅ）スクランブルペプチド、ＩｇＧ及びＰＢＳ、又はＡＮＴ３０８及びａＰＤ－１、又はＡＭＤ３１００及びａＰＤ－１、又はＡＮＴ３０８及びＡＭＤ３１００、又はＡＮＴ３０８、ａＰＤ－１及びＡＭＤ３１００の組み合わせで処置した、皮下ＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍を有するマウスから生成された腫瘍成長率及び（Ｆ）生存曲線。灰色の破線で表される腫瘍体積中央値（－－－－）。群当たりｎ＝４～５匹のマウスを用いて、反復測定ＡＮＯＶＡ及びダネットの事後検定によって、ｃ及びｄにおける統計的差異を決定した。２２Ｅの統計的差異を、Ｌｏｇ－ｒａｎｋ検定（群当たりｎ＝９～１０匹のマウス）によって決定した。ｃ及びｄの直線は平均を示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊ｐ＜０．００１、ｐ＜０．０００１。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、ＰＤＡＣ細胞株及びヒトＰＤＡＣ組織が、ＶＩＰ及びＶＩＰ受容体を発現することを示す（Ａ）。がん上皮細胞においてＶＩＰ発現を示す、ＶＩＰ（緑色）、ＣＫ１９（赤色）及びマージ（黄色）に対する抗体で染色された１つのヒトＰＤＡＣ腫瘍の代表的な画像。スケールバーは２００μｍを表す。（Ｂ）マウス黒色腫由来の溶解物；並びに対照としてＶＰＡＣ１、ＶＰＡＣ２及びＧＡＰＤＨをプローブしたマウス及びヒトＰＤＡＣ細胞株の代表的なウエスタンブロット。ウエスタンブロット由来の（Ｃ）ＶＰＡＣ１、（Ｄ）ＶＰＡＣ２タンパク質バンドを、濃度測定解析によって分析し、ＧＡＰＤＨの強度に対して正規化した。結果は、３つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。図２３Ｃのｐ値を、ＡＮＯＶＡ、続いてダネットの事後検定によって決定した。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＨは、ＰＤＡＣ細胞上のＶＰＡＣ２受容体の不在が、インビトロ及びインビボでのがん細胞の成長に限定的な自己分泌効果を与えることを示す。（Ａ）０～５μＭの範囲の異なる濃度のＡＮＴ００８の存在下で７２時間培養したマウス（ＭＴ５、ＫＰＣ．Ｌｕｃ、Ｐａｎｃ０２）及びヒト（Ｃａｐａｎ０２、ＢｘＰＣ３）ＰＤＡＣ細胞株の生存率パーセンテージをプロットする。（Ｂ）ウエスタンブロット、（Ｃ）標的部位の下流のエクソン９～１２を標的とするプライマーを使用したＲＴ－ＰＣＲ、及び（Ｄ）エクソン２におけるイン－デル変異の検証を示すサンガー配列決定による、ＶＩＰＲ２コードＶＰＡＣ２受容体のＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９ ＫＯの確認。インビトロＭＴＴアッセイは、（Ｅ）７２時間にわたるＷＴ及びＫＯ細胞の増殖；（Ｆ）３μＭのＡＮＴ００８及びＡＮＴ３０８で７２時間処置した野生型（ＷＴ）及びＶＰＡＣ２ ＫＯ（ＫＯ）Ｐａｎｃ０２細胞の生存率パーセントを示す。（Ｇ）皮下腫瘍移植後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＷＴ対ＫＯ Ｐａｎｃ０２細胞の腫瘍成長曲線。値は、腫瘍体積の中央値±９５％信頼区間を表す。（Ｈ）Ｇの結果に対応するカプラン・マイヤー生存プロット。生存期間中央値は、ＷＴが２１日、及びＶＰＡＣ２ ＫＯが２８日である。エラーバーは、平均及び標準偏差を表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、及びＣは、健康なヒトＴ細胞のフローサイトメトリー分析のためのゲーティング戦略を示す。（Ａ）前方散乱高（ＦＳＣ－Ｈ）及び側方散乱高（ＳＳＣ－Ｈ）をプロットすることによって、細胞を「Ｐ１」としてゲーティングした。Ｐ１からのシングレットは、前方散乱面積（ＦＳＣ－Ａ）プロットに対する前方散乱高さ（ＦＳＣ－Ｈ）の対角線に沿ってゲーティングすることによって選択した。シングレット由来の生細胞を、生細胞／死細胞対ＦＳＣ－Ａをプロットすることによって選択した。次に、生細胞をＣＤ４対ＣＤ８プロット上にプロットして、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を同定した。次いで、ＣＤ４／ＣＤ８対ＣＤ６９フロープロット上に各サブセットをプロットすることによって、（Ｂ）ＣＤ４＋及び（Ｃ）ＣＤ８＋サブセットにおけるＣＤ６９発現Ｔ細胞を同定した。各サブセット内のＣＤ６９＋Ｔ細胞のパーセンテージは、赤色で示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、Ｔ細胞におけるＣＲＥＢリン酸化のフローサイトメトリー分析のためのゲーティング戦略を示す。（Ａ）ホスホ－ＣＲＥＢ陽性細胞をゲーティングするための陽性対照として使用されるフォルスコリン処置ヒトＴ細胞のプロット。Ｔ細胞を氷上で３０μＭのフォルスコリンで３０分間処理し、ＣＤ４及びＣＤ８の表面発現のために染色し、続いて抗ホスホ－ＣＲＥＢ（Ｓ１３３）抗体による細胞内染色を行った。スクランブルペプチド（Ｓｃｒａｍ）、ＡＮＴ００８、及びＡＮＴ３０８で３μＭで６時間処理した場合の（Ｂ）ＣＤ４＋及び（Ｃ）ＣＤ８＋ヒトＴ細胞におけるホスホ－ＣＲＥＢ発現の代表的なプロット。（Ｄ）図２６Ｃと同様の条件下でのマウスＴ細胞におけるＣＤ３＋ホスホ－ＣＲＥＢ＋のパーセンテージ。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、９日間にわたってエクスビボで増殖させたＰＤＡＣ患者のＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞上でのＰＤ－１、Ｔｉｍ－３又はＬａｇ－３発現のゲーティング戦略を示す。（Ａ）前方散乱領域（ＦＳＣ－Ａ）及び側方散乱領域（ＳＳＣ－Ａ）をプロットすることによって、細胞を「Ｐ１」としてゲーティングした。Ｐ１からのシングレットは、前方散乱面積（ＦＳＣ－Ａ）プロットに対する前方散乱高さ（ＦＳＣ－Ｈ）の対角線に沿ってゲーティングすることによって選択した。シングレット由来の生細胞を、生／死対ＦＳＣ－Ａをプロットすることによって選択した。次に、生細胞を、ＣＤ３対ＦＳＣ－Ａプロット上にプロットし、ＣＤ３に対して陽性である細胞をＴ細胞としてゲーティング化した。次いで、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＣＤ４対ＣＤ８プロット上でＴ細胞をプロットすることによって識別した。（Ｂ）ＰＤ－１＋、（Ｃ）Ｔｉｍ－３＋、及び（Ｄ）Ｌａｇ－３＋細胞を、ＦＭＯ対照に基づいて、ＣＤ４＋（上）又はＣＤ８＋（下）Ｔ細胞上でゲーティングした。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１との併用療法が、ＫＰＣ腫瘍を有する雄及び雌のＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、腫瘍負荷を低減し、生存を改善することを示す。ＭＴ５（Ａ）、ＫＰＣ－Ｌｕｃ（Ｂ）及びＰａｎｃ０２（Ｃ）の腫瘍体積を示すボックスプロットであって、皮下腫瘍移植後、ＭＴ５については２２日目、ＫＰＣ及びＰａｎｃ０２については２２日目にノギスで測定した腫瘍体積を示す。ＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍を皮下移植し、ＡＮＴ３０８（雌：１０μｇ、雄：２０μｇ）及び／又は抗ＰＤ－１で処置した（Ｄ）雌又は（Ｅ）雄のＣ５７ＢＬ／６マウスのカプラン・マイヤー生存曲線。ａ～ｃの統計的差異を、ＡＮＯＶＡ、続いてダネットの事後検定によって計算した。実線は、各処置群における中央値を示す。ｄ及びｅの統計的差異を、Ｌｏｇ－ｒａｎｋ検定によって計算する。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、及び＊＊＊ｐ＜０．００１。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、及びＧは、ＡＮＴ００８又はＡＮＴ３０８の投与が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて有害な毒性を示さなかったことを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、ＡＮＴ００８又はＡＮＴ３０８の毎日の皮下注射を１０日間受け（ｎ＝５／群）、１１日目に毒性の証拠について分析した。（Ａ）薬物投与期間中の体重（グラム）；（Ｂ）フローサイトメトリーによって同定された脾臓中のＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＤＣ、及びＭＤＳＣの全血球数（左）割合による、血液中のＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板の数（右）をプロットする。（Ｃ）結腸（上）、肺（下）、及び（Ｄ）肝臓の代表的なＨ＆Ｅ染色切片が示される。Ｄの矢印は、肝臓における局所肝病変を示す。各群の５匹のマウスのうちの１匹で観察された局所性肝壊死は、これらの病変がジャクソン研究所のいくつかの自家飼育マウス株で一般的に観察されるため、薬物関連毒性とはみなされない。Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、３日ごとの２００ｕｇの抗ＰＤ１（ｎ＝６）とともに、３０ｕｇのＡＮＴ３０８（ｎ＝６）又は３０ｕｇのＡＮＴ３０８の毎日の併用の毎日の皮下注射を４日間受けた。スクランブルペプチド及びアイソタイプＩｇＧを受けたマウスは、対照として機能した（ｎ＝４）。（Ｅ）４日間の治療後のマウスの体重、（Ｆ）全血球数（ＣＢＣ）及び（Ｇ）血清化学反応をプロットする。Ｂ、Ｅ、Ｆ、及びＧのｐ値は、ＡＮＯＶＡ、続いてダネットの事後検定によって計算した。エラーバーは、平均及び標準偏差を表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、及びＧは、同所的に移植されたＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍からの生物発光シグナルが、腫瘍負荷と正の相関を示し、線維形成（ｄｅｓｍｏｐｌａｓｉａ）を示すことを示す。（Ａ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける同所性ＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍移植後２６日目に、図２１Ｃの「円」記号によって示される代表的なマウスにおける腫瘍負荷を、安楽死後に単離されたホルマリン固定膵臓の生物発光イメージング、ＩＶＩＳイメージング、及びＨ＆Ｅ染色を介して比較した。生物発光イメージングのために、イソフルランを麻酔に使用した。（Ｂ）腫瘍移植後２６日目の生体発光イメージングによって測定した総流量（ｐ／ｓ）を、安楽死後の単離された膵臓の重量に対してプロットした。データポイントは、それぞれスクランブル＋ＩｇＧ、ＡＮＴ００８＋ＩｇＧ、スクランブル＋抗ＰＤ－１及びＡＮＴ００８＋抗ＰＤ－１においてｎ＝９、１０、８及び１１の異なる処置群におけるマウスを表すように色分けされる。（Ｃ）トリクロム染色は、全ての処置群において、同所的に移植されたＫＰＣ．Ｌｕｃ腫瘍についての組織内の青いコラーゲン染色を示す。スクランブル＋ＩｇＧ、ＡＮＴ００８＋ＩｇＧ、スクランブル＋抗ＰＤ－１の代表的な画像を示し；ＡＮＴ００８＋抗ＰＤ－１を図２１Ｅに示す。（Ｄ）ＣＤ４＋又は（Ｅ）ＣＤ８＋Ｔ細胞／ｍｍ^２の数と、（Ｆ）Ｋｉ６７＋ＣＤ４＋又は（Ｇ）Ｋｉ６７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞／ｍｍ^２との間の、群当たりｎ＝４～６匹のマウスを有する膵臓の重量との相関を示すＸＹプロット。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） Ａ、Ｂ、及びＣは、フローサイトメトリーによって確認されるように、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１の組み合わせで処置したマウスの腫瘍におけるＧＦＰ＋Ｔ細胞の増加した頻度を示す。（Ａ）図２２Ａのマウスの腫瘍から調製した単細胞懸濁液からのシングレットを、前方散乱面積（ＦＳＣ－Ａ）対前方散乱高さ（ＦＳＣ－Ｈ）をプロットすることによってゲーティングした。生ＣＤ４５＋細胞を、ＣＤ４５陽性を選択することによってゲーティングし、続いてＣＤ３対ＳＳＣ－ＡプロットにおけるＣＤ３陽性細胞のゲーティングを行った。次いで、未染色のＣ５７ＢＬ／６マウス由来の未染色の脾細胞と、ＧＦＰトランスジェニックマウス由来の脾臓試料との混合集団に基づいて、ＧＦＰ陽性細胞をゲーティングすることによってＧＦＰ＋細胞を選択した。（Ｂ）４つの処置群（Ｓｃｒａｍ＋ＩｇＧ、ＡＮＴ３０８＋ＩｇＧ、Ｓｃｒａｍ＋抗ＰＤ１、ＡＮＴ３０８＋ａｎｔ－ＰＤ１）のＣＤ３＋ＧＦＰ＋細胞の代表的なプロット。（Ｃ）生ＣＤ４５＋Ｔ細胞に対するＧＦＰ＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すｂからの要約データ。ＧＦＰ＋Ｔ細胞パーセントを、ＦｌｏｗＪｏから列挙した全ＣＤ３＋ＧＦＰ＋事象を全生ＣＤ４５＋事象で割ったパーセンテージとして計算した。 （上記の通り。） （上記の通り。） 眼内黒色腫マウスモデルにおける肝転移に対する、ＡＮＴ３０８単独の又は抗ＰＤ－１と組み合わせた効果を試験する実験設計を示す。 抗ＰＤ－１と組み合わせたＡＮＴ３０８が、２週間で眼内黒色腫マウスからの肝転移を減少させたことを示す（ｎ＝４）。 ＡＮＴ３０８を単独で、又は抗ＰＤ－１と併用して、３週間で眼内黒色腫マウスからの肝転移を減少させたことを示す（ｎ＝６）。 ＡＮＴ３０８／抗ＰＤ－１（ｎ＝１０）の後の２週間及び３週間における肝転移を示す。 ＡＮＴ３０８は、腫瘍接種後３週間で肝転移の増殖を抑制したことを示す（Ｎ＝６）。 ＡＮＴ３０８が血管新生（矢印）及び肝臓転移の成長を阻害したことを示す（Ｎ＝１０）。 眼内黒色腫のサイズが、ＡＮＴ３０８単独又は抗ＰＤ－１併用のいずれによっても影響を受けなかったことを示す。 ＶＩＰ－ＲアンタゴニストＡＮＴ３０８が、Ｃ１４９８白血病の用量依存的クリアランス及びＡＭＬを有するマウスにおける長期生存を誘導したことを示す。 ＶＩＰ－ＲアンタゴニストＡＮＴ３０８が、マウスにおけるＣ１４９８白血病のスケジュール依存的クリアランス及び長期生存を誘導したことを示す。

Ｖ．発明を実施するための形態
本発明の化合物、組成物、物品、デバイス、及び／又は方法を開示及び説明する前に、それらは、特に明記しない限り、特定の合成方法又は特定の組換えバイオテクノロジー方法に限定されず、特に明記しない限り、特定の試薬（当然、変化し得るため）に限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、限定することを意図するものではないことも理解されたい。

Ａ．定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上別段明らかに指示されない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「薬学的担体」への言及は、２つ以上のそのような担体の混合物などを含む。

本明細書では、範囲は、「約」ある特定の値から、及び／又は「約」別の特定の値まで、のように表現され得る。そのような範囲が表現される場合、別の実施形態は、そのある特定の値から、及び／又はその他の特定の値まで、を含む。同様に、値が近似値として表現される場合、先行詞の「約」を使用することによって、特定の値は別の実施形態を形成することが理解されよう。更に、範囲の各終点は、他の終点と関連して、及び他の終点とは独立して、両方とも重要であることが理解されよう。本明細書に開示されるいくつかの値が存在し、各値は、値自体に加えて、その特定の値を「約」として本明細書に開示されることも理解される。例えば、値「１０」が開示される場合、「約１０」もまた開示される。当業者によって適切に理解されるように、ある値が「その値以下」であることが開示される場合、「その値以上」及びその値の間の可能な範囲も開示されることも理解される。例えば、値「１０」が開示される場合、「１０以下」並びに「１０以上」も開示される。また、本出願全体にわたって、データは、いくつかの異なる形式で提供され、このデータは、終点及び始点、並びにデータポイントの任意の組み合わせの範囲を表すことも理解される。例えば、特定のデータポイント「１０」及び特定のデータポイント「１５」が開示される場合、１０と１５の間に加えて、１０より大きい、１０以上、１０未満、１０以下、及び１０に等しい、１５より大きい、１５以上、１５未満、１５以下、及び１５に等しい値が開示されるとみなされることが理解される。また、２つの特定の単位間の各単位も開示されることも理解されたい。例えば、１０～１５が開示される場合、１１、１２、１３、及び１４も開示される。

本明細書及び添付の特許請求の範囲では、以下の意味を有するべく定義されたいくつかの用語を参照されたい。

対象への「投与」又は「投与すること」には、対象に薬剤を導入又は送達する任意の経路が含まれる。投与は、静脈内、腹腔内などを含む任意の好適な経路によって実施することができる。投与には、自己投与及び他者による投与が含まれる。対象への「投与」には、対象に薬剤を導入又は送達する任意の経路が含まれる。投与は、経口、局所、静脈内、皮下、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、筋肉内、関節内、非経口、動脈内、皮内、心室内、頭蓋内、腹腔内、病巣内、鼻腔内、直腸、膣、吸入による、移植リザーバー経由、又は経皮パッチ経由などを含む、任意の好適な経路によって実施することができる。投与には、自己投与及び他者による投与が含まれる。

「任意選択の」又は「任意選択で」は、後で説明する事象又は状況が生じても生じなくてもよいことを意味し、この記載には、当該事象又は状況が生じる例及び生じない例が含まれる。

アミノ酸配列を有するペプチドに関して「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、追加のＮ末端（アミン末端）又はＣ末端（カルボン酸末端）アミノ酸を含有し得るペプチドを指し、すなわち、この用語は、より大きなペプチド内にアミノ酸配列を含むことが意図される。アミノ酸配列を有するペプチドに関して「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語は、配列内に正確な数のアミノ酸を有し、特許請求の範囲において明示的に特定されるアミノ酸を超えないか、又は超えない範囲（ｒａｇｅ）のアミノ酸を有するペプチドを指す。ある特定の実施形態では、本開示は、「ペプチドのＮ末端は、アミノ酸配列からなり得る」ことを企図しており、これは、配列内に正確な数のアミノ酸を有し、特許請求の範囲において特定されるアミノ酸を超えないか、又は超えない範囲（ｒａｇｅ）のアミノ酸を有するペプチドのＮ末端を指すが、Ｃ末端は、例えば、より大きなペプチドの一部として、追加のアミノ酸に接続され得る。同様に、本開示は、「ペプチドのＣ末端は、アミノ酸配列からなり得る」ことを企図しており、これは、配列内に正確な数のアミノ酸を有し、特許請求の範囲において特定されるアミノ酸を超えないか、又は超えない範囲（ｒａｇｅ）のアミノ酸を有するペプチドのＣ末端を指すが、Ｎ末端は、例えば、より大きなペプチドの一部として、追加のアミノ酸に接続され得る。

「増加」は、より多くの量の症状、疾患、組成物、状態、又は活性をもたらす任意の変化を指し得る。増加は、統計的に有意な量の状態、症状、活性、組成物の任意の個々の値、中央値、又は平均の増加であり得る。したがって、増加は、その増加が統計的に有意である限り、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％の増加であり得る。

「減少」は、より少ない量の症状、疾患、組成物、状態、又は活性をもたらす任意の変化を指し得る。ある物質はまた、その物質を含む遺伝子産物の遺伝的出力が、その物質を含まない遺伝子産物の出力と比較して少ない場合に、遺伝子の遺伝的出力を減少させると理解される。また、例えば、減少は、症状が以前に観察されたよりも少ないような、障害の症状の変化であり得る。減少は、統計的に有意な量の状態、症状、活性、組成物の任意の個々の値、中央値、又は平均の減少であり得る。したがって、減少は、その減少が統計的に有意である限り、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％の減少であり得る。

「阻害する」、「阻害すること」、及び「阻害」は、活性、応答、状態、疾患、又は他の生物学的パラメータを減少させることを意味する。これには、活性、応答、状態、又は疾患の完全な除去が含まれ得るが、これらに限定されない。これには、例えば、天然又は対照レベルと比較して、活性、応答、状態、又は疾患の１０％の低減も含まれ得る。したがって、低減は、天然又は対照レベルと比較して、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％、又はその間の任意の量の低減であり得る。

発現又は活性の「阻害剤」又は「アンタゴニスト」は、それぞれ、記載される標的タンパク質、例えば、リガンド、アンタゴニスト、並びにそれらの相同体及び模倣物の発現又は活性のためのインビトロ及びインビボアッセイを使用して同定される阻害分子を指すために使用される。阻害剤は、例えば、記載される標的タンパク質、例えば、アンタゴニストの発現を阻害するか、又は、それに結合するか、その刺激若しくは酵素活性を部分的に若しくは完全に遮断するか、その活性を減少させるか、予防するか、活性化を遅らせるか、不活性化するか、脱感作するか、若しくは下方調節する薬剤である。対照試料（阻害剤で処理されていない）には、１００％の相対活性値を割り当てる。記載される標的タンパク質の阻害は、対照と比べた活性値が約８０％、任意選択で５０％若しくは２５、１０％、５％、又は１％であるときに達成される。本明細書で使用される場合、「ＶＩＰアンタゴニスト」又は「ＶＩＰ受容体アンタゴニスト」という用語は、互換的に使用される。

「低減する（ｒｅｄｕｃｅ）」又はこの用語の他の形態、例えば、「低減すること（ｒｅｄｕｃｉｎｇ）」若しくは「低減（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」は、事象又は特徴（例えば、腫瘍成長）の低下を意味する。これは典型的には、いくつかの標準値又は期待値に関連しており、換言すれば、それは相対的であるが、標準値又は相対値を参照することが必ずしも必要ではないことが理解される。例えば、「腫瘍成長を低減する」は、標準又は対照と比較して、腫瘍の成長速度を低減することを意味する。

「予防する」又はこの単語の他の形態、例えば「予防すること」又は「予防」とは、特定の事象又は特徴を停止すること、特定の事象又は特徴の発達又は進行を安定化させるか、又は遅らせること、あるいは特定の事象又は特徴が発生する可能性を最小限に抑えることを意味する。予防は、典型的には、例えば、低減よりも絶対的であるため、対照との比較を必要としない。本明細書で使用される場合、何かを低減することができるが、予防することができない場合があるが、低減される何かを予防することができる場合もある。同様に、何かを予防することができるが、低減することができない場合があるが、予防される何かを低減することができる場合もある。低減又は予防が使用される場合、特に具体的に指定しない限り、他の単語の使用も明示的に開示されることを理解されたい。

「対象」という用語は、投与又は治療の標的である任意の個体を指す。対象は、脊椎動物、例えば、哺乳動物であり得る。一態様では、対象は、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ、又はネコであり得る。対象はまた、モルモット、ラット、ハムスター、ウサギ、マウス、又はモグラであってもよい。したがって、対象は、ヒト又は獣医患者であり得る。「患者」という用語は、臨床医、例えば、医師の治療下にある対象を指す。

「治療有効量」という用語は、使用される組成物の量が、疾患又は障害の１つ以上の原因又は症状を軽減するのに十分なものであることを指す。このような軽減は、低減又は改変を必要とするだけであり、排除である必要はない。

「治療」という用語は、疾患、病的な状態、又は障害を治癒し、改善し、安定化し、又は予防する意図を有する患者の医学的管理を指す。この用語は、積極的治療、すなわち、具体的に疾患、病態、又は障害の改善に向けた治療を含み、また、原因治療、すなわち、関連する疾患、病態、又は障害の原因の除去に向けた治療も含む。加えて、この用語は、緩和治療、すなわち、疾患、病態、又は障害の治癒ではなく、症状の軽減のために設計された治療；予防的治療、すなわち、関連する疾患、病態、又は障害の発症を最小限に抑える、又は部分的に若しくは完全に阻害することに向けた治療；並びに支持治療、すなわち、関連する疾患、病態、又は障害の改善に向けた別の特定の治療法を補完するために用いられる治療を含む。

「生体適合性」は、概して、レシピエントにとって概して無毒であり、対象に重大な副作用を引き起こさない材料及び任意の代謝産物又はその分解産物を指す。

「含む」は、組成物、方法などが、列挙される要素を含むが、他の要素を除外しないことを意味することが意図される。組成物及び方法を定義するために使用される場合、「～から本質的になる」は、列挙された要素を含むが、組み合わせに対する任意の本質的な重要性を有する他の要素を除外することを意味するものとする。したがって、本明細書に定義される要素から本質的になる組成物は、単離及び精製方法から微量汚染物質及び薬学的に許容される担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、保存剤などを除外しない。「～からなる」は、本開示で提供される及び／又は特許請求される組成物を投与するための他の成分の微量要素を超えるもの、及び実質的な方法ステップを除外することを意味するものとする。これらの移行語の各々によって定義される実施形態は、本開示の範囲内である。

「組成物」は、有益な生物学的効果を有する任意の薬剤を指す。有益な生物学的効果としては、治療効果、例えば、障害又は他の望ましくない生理学的状態の治療、及び予防効果、例えば、障害又は他の望ましくない生理学的状態の予防の両方が挙げられる。これらの用語はまた、本明細書に具体的に言及される有益な薬剤の薬学的に許容される、薬理学的に活性な誘導体を包含し、限定されないが、ベクター、ポリヌクレオチド、細胞、塩、エステル、アミド、前駆薬剤、活性代謝産物、異性体、断片、類似体などを含む。「組成物」という用語が使用される場合、次いで、又は特定の組成物が具体的に特定される場合、この用語は、組成物自体、並びに薬学的に許容される、薬理学的に活性なベクター、ポリヌクレオチド、塩、エステル、アミド、前駆薬剤、複合体、活性代謝産物、異性体、断片、類似体などを含むことを理解されたい。

「対照」は、比較目的で実験に使用される代替の対象又は試料である。対照は、「陽性」であっても「陰性」であってもよい。

薬剤の「有効量」とは、所望の効果を提供するのに十分な量の薬剤を指す。「有効」である薬剤の量は、対象の年齢及び全身状態、特定の薬剤などの多くの要因に応じて、対象によって異なるであろう。したがって、定量された「有効量」を指定することは必ずしも可能ではない。しかしながら、任意の対象の場合における適切な「有効量」は、日常的な実験を使用して当業者によって決定されてもよい。また、本明細書で使用される場合、特に明記しない限り、薬剤の「有効量」とは、治療有効量及び予防有効量の両方をカバーする量も指すことができる。治療効果を達成するのに必要な薬剤の「有効量」は、対象の年齢、性別、及び体重などの要因に従って変化し得る。投薬レジメンは、最適な治療応答を提供するように調整することができる。例えば、いくつかに分割した用量を毎日投与してもよく、又は治療状況の緊急性によって示されるように、用量を比例して減らしてもよい。

「薬学的に許容される」成分は、生物学的又は他の望ましくないものではない成分、すなわち、著しく望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、又はそれが含まれる製剤の他の成分のいずれかと有害な様式で相互作用することなく、本開示によって提供される薬学的製剤に組み込んで、本明細書に記載のように対象に投与することができる成分を指し得る。ヒトへの投与に関して使用される場合、この用語は、成分が毒性試験及び製造試験の必要な基準を満たしているか、又はそれが米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって準備された不活性成分ガイドに含まれていることを一般的に意味する。

「薬学的に許容される担体」（「担体」と称されることがある）は、一般に安全かつ無毒の薬学的又は治療組成物の調製において有用な担体又は賦形剤を意味し、獣医学的及び／又はヒトの薬学的又は治療的使用が許容される担体を含む。「担体」又は「薬学的に許容される担体」という用語には、リン酸緩衝食塩水、水、エマルジョン（油／水若しくは水／油エマルジョンなど）、及び／又は様々な種類の湿潤剤が含まれ得るが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「担体」という用語は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、脂質、安定剤、又は薬学的製剤で使用するために当該技術分野でよく知られた材料、及び本明細書に更に記載される材料を包含するが、これらに限定されない。

「薬理学的に活性な」（又は単に「活性な」）は、「薬理学的に活性な」誘導体又は類似体において、親化合物と同じ種類の薬理学的活性を有し、程度がほぼ同等な誘導体又は類似体（例えば、塩、エステル、アミド、複合体、代謝産物、異性体、断片など）を指し得る。

「治療剤」は、有益な生物学的効果を有する任意の組成物を指す。有益な生物学的効果としては、治療効果、例えば、障害又は他の望ましくない生理学的状態の治療、及び予防効果、例えば、障害又は他の望ましくない生理学的状態（例えば、非免疫原性がん）の予防の両方が挙げられる。これらの用語はまた、本明細書に具体的に言及される有益な薬剤の薬学的に許容される、薬理学的に活性な誘導体を包含し、限定されないが、塩、エステル、アミド、前駆薬剤、活性代謝産物、異性体、断片、類似体などを含む。「治療剤」という用語が使用される場合、次いで、又は特定の薬剤が具体的に特定される場合、この用語は、薬剤自体、並びに薬学的に許容される、薬理学的に活性な塩、エステル、アミド、前駆薬剤、複合体、活性代謝産物、異性体、断片、類似体などを含むことを理解されたい。

「プロドラッグ」という用語は、インビボで生物学的に活性な形態に変換される薬剤を指す。プロドラッグは、状況によっては、親化合物よりも投与しやすい場合があるため、しばしば有用である。プロドラッグはまた、薬学的組成物中で、親薬物を上回る改善された溶解性を有する場合もある。プロドラッグは、酵素プロセス及び代謝性加水分解を含む様々なメカニズムによって親薬物に変換され得る。典型的なプロドラッグは、薬学的に許容されるエステルである。プロドラッグとしては、ヒドロキシ、アミノ又はメルカプト（チオール）基が、活性化合物のプロドラッグが対象に投与されると、開裂してそれぞれ遊離ヒドロキシ、遊離アミノ又は遊離メルカプト基を形成する任意の基に結合されている化合物が挙げられる。プロドラッグの例としては、アルコールの酢酸塩、ギ酸塩及び安息香酸塩誘導体、又は活性化合物中のアミン官能基のアセトアミド、ホルムアミド及びベンズアミド誘導体などが挙げられるが、これらに限定されない。

組成物（例えば、薬剤を含む組成物）の「治療有効量」又は「治療有効用量」は、所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。いくつかの実施形態では、所望の治療結果は、腫瘍成長の制御である。いくつかの実施形態では、所望の治療結果は、転移の制御である。いくつかの実施形態では、所望の治療結果は、再発の予防である。所与の治療剤の治療有効量は、典型的には、治療される障害又は疾患の種類及び重症度、並びに対象の年齢、性別、及び体重などの要因に関して異なるであろう。この用語はまた、疼痛緩和などの所望の治療効果を促進するのに有効な、治療剤の量、又は治療剤の送達の速度（例えば、経時的な量）を指すこともできる。正確な所望の治療効果は、治療される状態、対象の耐容性、投与される薬剤及び／又は薬剤製剤（例えば、治療剤の効力、製剤中の薬剤の濃度など）、並びに当業者によって理解される様々な他の因子に従って異なるであろう。いくつかの事例では、所望の生物学的応答又は医学的応答は、数日、数週間、又は数年にわたって、組成物を複数回投与した後に達成される。

本明細書で使用される場合、「単離すること」という用語は、生物学的試料、すなわち、血液、血漿、組織、エクソソーム、又は細胞からの単離を指す。本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、例えば、核酸との関連で使用される場合、核酸が精製前に会合している他の成分を少なくとも６０％含まない、少なくとも７５％含まない、少なくとも９０％含まない、少なくとも９５％含まない、少なくとも９８％含まない、及び更には少なくとも９９％含まない目的の核酸を指す。

「コードすること」とは、定義されたヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又は定義されたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマー及び巨大分子の合成のためのテンプレートとして機能する、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなどのポリヌクレオチドにおける特定のヌクレオチド配列の固有の特性、並びにそれから生じる生物学的特性を指す。したがって、遺伝子は、ｍＲＮＡの転写及び翻訳の場合、タンパク質をコードする。

本明細書で使用される「操作された」という用語及びその用語の他の文法的形態は、生物のゲノム内の核酸などの核酸の１つ以上の変化を指し得る。「操作された」という用語は、遺伝子の変化、付加、及び／又は欠失を指し得る。操作された細胞はまた、付加された、欠失された、及び／又は変化した遺伝子を含有する細胞を指すことができる。

「発現ベクター」は、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のための十分なシス作用要素を含み、発現のための他の要素は、宿主細胞によって又はインビトロ発現系において供給され得る。発現ベクターには、コスミド、プラスミド（例えば、ネイキッドであるか又はリポソームに含まれる）、及び組換えポリヌクレオチドを取り込むウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス）など）、当該技術分野で既知の全てのベクターが含まれる。

「断片」は、他の配列に結合しているか否かにかかわらず、特定の領域又は特定のアミノ酸残基の挿入、欠失、置換、又は他の選択された修飾を含むことができ、但し、断片の活性は、非修飾ペプチド又はタンパク質と比較して有意に変化してもおらず、損なわれてもいない。これらの修飾は、例えば、ジスルフィド結合を可能にするアミノ酸を除去又は添加すること、その生物学的寿命を延ばすこと、その分泌特性を変更することなど、いくつかの追加の特性を提供することができる。いずれにせよ、断片は、標的遺伝子の転写を調節するなどの生物活性特性を有する必要がある。

「遺伝子」又は「遺伝子配列」という用語は、コード配列若しくは制御配列、又はそれらの断片を指す。遺伝子は、コード配列及び制御配列、又はそれらの断片の任意の組み合わせを含んでもよい。したがって、本明細書において言及される「遺伝子」は、天然遺伝子の全て又は一部であり得る。本明細書で言及されるポリヌクレオチド配列は、「遺伝子」という用語と互換的に使用され得るか、又は任意のコード配列、非コード配列若しくは制御配列、それらの断片、及びそれらの組み合わせを含み得る。「遺伝子」又は「遺伝子配列」という用語は、例えば、コード配列の上流にある制御配列（例えば、リボソーム結合部位）を含む。

「同一」又は「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列との関連で、以下に記載されるデフォルトのパラメータでのＢＬＡＳＴ又はＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムを使用して測定される場合、又は手動でのアラインメント及び目視検査（例えば、ＮＣＢＩウェブサイトなどを参照されたい）によって測定される場合、同じであるか、又は同じであるアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを特定のパーセンテージ（すなわち、比較の枠若しくは指定領域にわたって最も対応しているものについて比較され、アラインメントされた場合、特定の領域にわたって、約６０％の同一性、好ましくは、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれよりも高い同一性）で含む、２つ以上の配列又はサブ配列を指す。そのため、かかる配列は「実質的に同一」であると言われる。この定義はまた、試験配列の相補体を指すか、又はそれに適用され得る。この定義には、欠失及び／又は付加を有する配列、並びに置換を有する配列も含まれる。以下に説明するように、好ましいアルゴリズムは、ギャップなどを考慮することができる。好ましくは、同一性は、少なくとも約１０アミノ酸又は２０ヌクレオチドの長さである領域にわたって、又はより好ましくは、１０～５０アミノ酸又は２０～５０ヌクレオチドの長さである領域にわたって存在する。本明細書で使用される場合、ヌクレオチド配列同一性パーセント（％）は、最大パーセントの配列同一性を達成するために、配列をアラインメントさせ、必要に応じてギャップを導入した後、参照配列内のヌクレオチドと同一である候補配列内のアミノ酸のパーセンテージとして定義される。ヌクレオチド配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当該技術分野における様々な方式で達成することができる。比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを既知の方法によって決定することができる。

配列比較のために、典型的には、１つの配列は、参照配列として機能し、これに対して試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じてサブ配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。好ましくは、デフォルトプログラムパラメータを使用することができ、又は代替パラメータを指定することができる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列と比較して試験配列について配列同一性パーセントを計算する。

配列同一性パーセント及び配列類似性パーセントを決定するのに適したアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通じて公的に入手可能である。このアルゴリズムは、まず、データベース配列内の同じ長さのワードとアラインメントしたときに、いくつかの正の値の閾値スコアＴと一致するか、又は満たすクエリ配列内の長さＷの短いワードを識別することによって、高いスコアリング配列対（ＨＳＰ）を識別することを伴う。Ｔは、近隣のワードスコア閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０）。これらの最初の近隣ワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰを見つけるための検索を開始するためのシードとして機能する。累積アライメントスコアを増加させることができる限り、ワードヒットを各配列に沿って両方向に拡張する。累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（マッチ残基対のリワードスコア；常に＞０）及びＮ（ミスマッチ残基のペナルティスコア；常に＜０）を使用して計算する。アミノ酸配列の場合、スコアリング行列を使用して累積スコアを計算する。各方向へのワードヒットの拡張は、累積アライメントスコアがその最大達成値から数量Ｘだけ低下するとき、累積スコアがゼロ以下になるとき、１つ以上のネガティブスコアリング残基アライメントの蓄積に起因するとき、又はいずれかの配列の終わりに達するときに停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ及びＸは、アライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、期待値（Ｅ）又は１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列について、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、３のワード長及び１０の期待値（Ｅ）を使用し、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５を参照されたい）は、５０のアラインメント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び両鎖の比較を使用する。

ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計分析を実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が約０．２未満、より好ましくは約０．０１未満である場合、参照配列と類似しているとみなされる。

「核酸」という用語は、本明細書で使用される場合、ヌクレオチド、例えば、デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）又はリボヌクレオチド（ＲＮＡ）から構成されるポリマーを意味する。「リボ核酸」及び「ＲＮＡ」という用語は、本明細書で使用される場合、リボヌクレオチドから構成されるポリマーを意味する。「デオキシリボ核酸」及び「ＤＮＡ」という用語は、本明細書で使用される場合、デオキシリボヌクレオチドから構成されるポリマーを意味する。（「ポリヌクレオチド」及び「ポリペプチド」とともに使用される。）

特に明記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮退バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。また、タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列があるバージョンにおいてイントロンを含み得る程度までイントロンを含んでもよい。

本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」は、コード配列の発現をもたらすように、核酸のコード配列の発現に有用な調節配列が、核酸分子内のコード配列に対して適切な位置に配置されていることを示すことができる。この同じ定義は、場合によっては、コード配列及び／又は転写制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、及び終結要素）、並びに／又は発現ベクターにおける選択可能なマーカーの配置に適用される。「作動可能に連結された」という用語は、単一ポリペプチド鎖内のポリペプチドセグメントの配置も指すことができ、個々のポリペプチドセグメントは、限定されないが、タンパク質、その断片、連結ペプチド、及び／又はシグナルペプチドであり得る。作動可能に連結されたという用語は、異なるセグメント間に介在するアミノ酸が存在しない場合、及び個々のポリペプチドが１つ以上の介在するアミノ酸を介して互いに接続されている場合における、単一のポリペプチド又はそれらの断片内の異なる個々のポリペプチドの直接融合を指すことができる。

「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドモノマーから構成される一本鎖又は二本鎖ポリマーを指す。

「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合によって接合されたＤ－又はＬ－アミノ酸の一本鎖又はＤ－及びＬ－アミノ酸の混合物からなる化合物を指す。

「ペプチド」、「タンパク質」、及び「ポリペプチド」とい用語は、１つのアミノ酸のカルボキシル基によって別のアミノ酸のアルファアミノ基に連結された２つ以上のアミノ酸を含む天然又は合成分子を指すために互換的に使用される。

本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するために必要な、細胞の合成機構、又は導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列として定義される。

本明細書で使用される場合、「プロモーター／調節配列」という用語は、プロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を意味する。いくつかの事例では、この配列は、コアプロモーター配列であってもよく、他の事例では、この配列はまた、遺伝子産物の発現に必要なエンハンサー配列及び他の調節要素を含んでもよい。プロモーター／調節配列は、例えば、組織特異的な方法で遺伝子産物を発現するものであってもよい。

「バリアント」という用語は、本明細書で使用される場合、参照ポリペプチド又はポリヌクレオチドとは異なるが、本質的な特性を保持するポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。ポリペプチドの典型的なバリアントは、アミノ酸配列が別の参照ポリペプチドとは異なる。一般に、差異は、参照ポリペプチドの配列とバリアントの配列が全体的に非常に類似している（相同である）ように、及び多くの領域で同一であるように限定される。バリアント及び参照ポリペプチドは、１つ以上の修飾（例えば、置換、付加、及び／又は欠失）によって、アミノ酸配列が異なり得る。

本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、異常細胞の急速かつ無制御な成長を特徴とする疾患として定義される。がん細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を介して身体の他の部分に拡散することができ、様々ながんの例としては、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病、肺がんなどが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「転移」という用語は、体液による輸送の有無にかかわらず、１つの臓器又は身体の一部に由来するがん細胞が、体の別の部分に再配置され、複製を継続するプロセスを指すことを意味する。転移した細胞は、その後、更に転移し得る腫瘍を形成することができる。したがって、転移は、それが最初に発生した身体の部分から身体の他の部分へのがんの拡散を指す。

本出願全体を通して、様々な刊行物が参照される。これらの刊行物の開示は、その全体が、本出願に関係する技術水準をより完全に説明するために参照により本出願に援用される。開示される参考文献はまた、参考文献による文章で論じられ、それらに含まれる材料について、個別にかつ具体的に参照により本明細書に援用される。

Ｂ．組成物
開示される組成物を調製するために使用される成分、並びに本明細書に開示される方法内で使用される組成物自体が開示される。これら及び他の材料が本明細書に開示され、これらの材料の組み合わせ、サブセット、相互作用、基などが開示されるとき、これらの化合物の各様々な個々の及び集合的な組み合わせ及び入れ替えの具体的な参照が明示的に開示されない場合があるが、各々が本明細書に具体的に企図及び説明されることが理解される。例えば、特定のＶＩＰ－Ｒアンタゴニストが開示され、論じられ、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストを含むいくつかの分子に対して行われ得るいくつかの修飾が論じられる場合、具体的にそうではないと指示されない限り、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのあらゆる組み合わせ及び順列、並びに可能な修飾が明確に企図される。したがって、分子Ａ、Ｂ、及びＣのクラスだけでなく、分子Ｄ、Ｅ、及びＦのクラス、並びに組み合わせ分子の一例として、Ａ－Ｄが開示される場合、各々が個別に列挙されていない場合でも、各々が個別にかつ集合的に企図され、すなわち、Ａ－Ｅ、Ａ－Ｆ、Ｂ－Ｄ、Ｂ－Ｅ、Ｂ－Ｆ、Ｃ－Ｄ、Ｃ－Ｅ、及びＣ－Ｆが開示されているとみなされる。同様に、これらの任意のサブセット又は組み合わせも開示される。したがって、例えば、Ａ－Ｅ、Ｂ－Ｆ、及びＣ－Ｅのサブグループが開示されるとみなされるであろう。この概念は、開示される組成物を作製及び使用する方法におけるステップを含むが、これらに限定されない、本出願の全ての態様に適用される。よって、実施され得る様々な追加ステップが存在する場合、これらの追加ステップのそれぞれが、開示される方法の任意の特定の実施形態又は実施形態の組み合わせで実行され得ることが理解される。

「血管作動性腸ペプチド」及び「ＶＩＰ」という用語は、文脈がそうでないことを示唆しない限り、ＨＳＤＡＶＦＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号２）を指す。ＶＩＰは、免疫細胞の分化及び活性化の複数のレベルで自然及び適応免疫の両方を調節する多機能性内因性ポリペプチドである。ＶＩＰは、典型的には、ニューロン（中枢及び末梢神経系の両方における）Ｂ細胞、Ｔ細胞、並びに補助細胞などの様々な細胞によって分泌される。ＶＩＰ及び密接に関連する神経ペプチド下垂体アデニリルシクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）は、３つの既知の受容体ＶＰＡＣ１、ＶＰＡＣ２、及びＰＡＣ１に結合する。Ｔ細胞及び樹状細胞（ＤＣ）は、ＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２を発現するが、ＰＡＣ１は発現しないと考えられている。ＰＡＣ１は、主に、脳及び下垂体及び副腎におけるニューロン及び内分泌細胞上で発現され、ほとんどの形態において、ＰＡＣＡＰを選択的に結合する。

一部のがんはウイルスによって引き起こされ、ＨＰＶワクチン及びＢ型肝炎ワクチンなどのこれらのウイルスに対する従来のワクチンは、それらのがんを予防するであろう。本明細書に開示されるペプチドは、治療有効性を改善するために、これらのワクチンと組み合わせて投与することができることが企図される。

がん細胞は生じて免疫系によって破壊され、免疫系ががん細胞を破壊できないとがんが形成されると考えられている。がんワクチン接種に対する１つのアプローチは、がん細胞からタンパク質を分離し、がん患者にそれらのタンパク質に対する免疫を与え、がん細胞を死滅させる免疫反応を刺激することである。がんワクチンは、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、リンパ腫、乳がん、肺がん、結腸がん、皮膚がん、腎臓がん、前立腺がん、及び他のがんの治療のために企図される。

ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示される任意の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）をがん抗原と組み合わせて投与することによりがんを治療することに関する。他のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト又はＶＩＰアンタゴニストもまた、米国特許第６，６３０，１２４号及び同第５，２１７，９５３号に報告されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

微生物の活動の予防は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などのうちのいずれかの添加によって制御してもよい。また、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含めることが望ましい場合もある。注射可能な薬学的形態の吸収の延長は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によってもたらされ得る。

本明細書に開示されるペプチドのうちのいずれも、溶解性、バイオアベイラビリティ、及び／又は生物学的分解などの改善された特性を提供するために、炭化水素又はポリエチレングリコール基で修飾され得ることが任意選択で、される。

ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示される任意の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体、並びに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，６３０，１２４号及び同第５，２１７，９５３号に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト／ＶＩＰアンタゴニストなど）、又は本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストをコードする核酸をナノ粒子にカップリングする方法に関する。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト又は本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストをコードする核酸は、ナノ粒子にコンジュゲートされている及び／又はナノ粒子内にカプセル化されている。ある特定の実施形態では、ナノ粒子は、ポロキサマー安定化ポリプロピレンスルフィドからなる。本明細書で使用される場合、「ナノ粒子」という用語は、典型的には、サイズが約１ｎｍ～約１０００ｎｍの範囲の粒子又は構造を指す。ある特定の実施形態では、ナノ粒子は、約１０～約１００ｎｍの直径を有する。ある特定の実施形態では、ナノ粒子は、約２０～約５０ｎｍ、好ましくは約３０ｎｍの直径を有する。ある特定の実施形態では、ナノ粒子は、約５０ｎｍ～約５００ｎｍサイズ、より好ましくは約５０ｎｍ～約３５０ｎｍサイズ、より好ましくは約１００ｎｍ～約２５０ｎｍサイズの直径を有する。

ある特定の実施形態では、本開示は、ナノ粒子にカップリングしたペプチド配列が、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び／又は配列番号１６、並びに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，６３０，１２４号及び同第５，２１７，９５３号に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニストなど）に加えて、Ｃ末端リンカーペプチドＧＧＧＧＳＣ（配列番号２２）を含有する場合に、本明細書に開示される粒子を使用することを企図する。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるペプチドとナノ粒子との間の化学連結は、ジスルフィド結合である。

ある特定の実施形態では、本開示は、アミノ酸配列のアミノ末端又は炭素末端が、任意選択で、異種アミノ酸配列、標識、又はレポーター分子に結合されている、本明細書に開示される配列を含む組換えペプチド又はその融合物に関する。「標識」とは、抗体又はタンパク質などの別の分子に直接的又は間接的にコンジュゲートされて、その分子の検出を容易にする検出可能な化合物又は組成物を指す。標識の具体的かつ非限定的な例としては、蛍光タグ、酵素連結、及び放射性同位体が挙げられる。一例では、「標識受容体」は、受容体中の異種ポリペプチドの組み込みを指す。標識には、放射性標識アミノ酸の組み込み、又はポリペプチドへのビオチニル部分の共有結合が含まれ、これは、マークされたアビジン（例えば、蛍光マーカー又は光学法若しくは比色法によって検出され得る酵素活性を含むストレプトアビジン）によって検出され得る。ポリペプチド及び糖タンパク質を標識する様々な方法が当該技術分野で既知であり、使用され得る。ポリペプチドの標識の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：放射性同位体又は放射性核種（例えば、^３５Ｓ又は^１３１Ｉ）蛍光標識（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミン、ランタニド蛍光体など）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼなど）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグなど）、又はガドリニウムキレートなどの磁性剤。いくつかの実施形態では、標識は、潜在的な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサアームによって取り付けられる。

１．ペプチド
ａ）タンパク質バリアント
本明細書に開示されるように、血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニストの多数のバリアントが知られており、本明細書で企図されている。既知の機能性バリアントに加えて、開示される方法及び組成物においても機能するＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの誘導体が存在する。タンパク質バリアント及び誘導体は、当業者によく理解され、アミノ酸配列改変を含むことができる。例えば、アミノ酸配列修飾は、典型的に、置換バリアント、挿入バリアント、又は欠失バリアントの３つのクラスのうちの１つ以上に分類される。挿入には、アミノ末端及び／又はカルボキシル末端の融合、並びに単一若しくは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。挿入は、通常、例えば、１～４個の残基程度で、アミノ末端又はカルボキシル末端の融合の挿入よりは小さいであろう。欠失は、タンパク質の配列から、１個以上のアミノ酸残基を除去することを特徴とする。典型的には、約２～６個以下の残基が、タンパク質分子内の任意の１つの部位で欠失される。これらのバリアントは、通常、タンパク質をコードするＤＮＡ内のヌクレオチドの部位特異的変異誘発によって調製され、それによって、バリアントをコードするＤＮＡを産生し、その後、組換え細胞培養物中でＤＮＡを発現する。既知の配列を有するＤＮＡ中の所定の部位で置換変異を作製するための技術、例えば、Ｍ１３プライマー変異誘発及びＰＣＲ変異誘発がよく知られている。アミノ酸置換は、典型的には、単一残基のものであるが、一度にいくつかの異なる場所で生じ得、挿入は、通常、約１～１０個のアミノ酸残基程度であり、欠失は約１～３０個の残基の範囲である。欠失又は挿入は、好ましくは、隣接する対、すなわち、２個の残基の欠失又は２個の残基の挿入で行われる。置換、欠失、挿入、又はそれらの任意の組み合わせ、を組み合わせて、最終構築物に到達することができる。変異は、配列をリーディングフレームから外れさせてはならず、好ましくは、二次タンパク質構造を産生し得る相補的領域を生成しない。置換バリアントは、少なくとも１個の残基が除去され、その位置に、異なる残基が挿入されているバリアントである。このような置換は、概して、以下の表１及び２に従って行われ、保存的置換と称される。

機能又は免疫学的同一性の実質的な変化は、表２のものよりも保存性が低い置換を選択することによって、すなわち、（ａ）例えば、シート若しくはヘリックスの立体構造としての置換エリアにおけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷若しくは疎水性、又は（ｃ）側鎖のかさ、を維持することに対するそれらの効果が著しく異なる残基、を選択することによって行われる。タンパク質特性に最も大きな変化をもたらすと一般に予想される置換は、（ａ）親水性残基、例えば、セリル又はスレオニルが、疎水性残基、例えば、ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリル、若しくはアラニルに（又はそれによって）置換される、（ｂ）システイン若しくはプロリンが、任意の他の残基に（又はそれによって）置換される、（ｃ）電気陽性側鎖を有する残基、例えば、リジル、アルギニル、若しくはヒスチジルが、電気陰性残基、例えば、グルタミル若しくはアスパルに（又はそれによって）置換される、又は（ｄ）かさばる側鎖を有する残基、例えば、フェニルアニンが、側鎖を有さない残基、例えば、この場合にはグリシン、（ｅ）スルフィル化及び／若しくはグリコシル化のための部位の数を増加させることによるものであるであろう。

例えば、あるアミノ酸残基を、生物学的及び／又は化学的に類似する別のアミノ酸残基に置き換えることは、保存的置換として当業者には既知である。例えば、保存的置換は、ある疎水性残基を別の疎水性残基に置き換えること、又はある極性残基を別の極性残基に置き換えることである。置換は、例えば、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＰｈｅ、Ｔｙｒなどの組み合わせを含む。このような、各明示的に開示された配列の保存的に置換されたバリエーションは、本明細書に提供されるモザイクポリペプチドに含まれる。

置換又は欠失変異誘発を用いて、Ｎ－グリコシル化（Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ／Ｓｅｒ）又はＯ－グリコシル化（Ｓｅｒ又はＴｈｒ）のための部位を挿入することができる。システイン又は他の不安定な残基の欠失も望ましい場合がある。潜在的なタンパク質分解部位、例えば、Ａｒｇの欠失又は置換は、例えば、塩基性残基のうちの１つを欠失させるか、又はグルタミニル若しくはヒスチジル残基によって１つを置換することによって達成される。

特定の翻訳後の誘導体化は、発現したポリペプチドに対する組換え宿主細胞の作用の結果である。グルタミニル及びアスパラギニル残基は、翻訳後、対応するグルタミル及びアスパルチル残基にしばしば脱アミド化される。代替的に、これらの残基は、弱酸性条件下で脱アミド化される。他の翻訳後修飾としては、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のｏ－アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ ｐｐ７９－８６［１９８３］）、Ｎ末端アミンのアセチル化、並びにいくつかの事例では、Ｃ末端カルボキシルのアミド化が挙げられる。

本明細書に開示されるタンパク質のバリアント及び誘導体を定義する１つの方式は、特定の既知の配列に対する相同性／同一性の観点からバリアント及び誘導体を定義することによるものであることを理解されたい。例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの特定の配列を示す。述べられた配列に対する少なくとも７０％又は７５％又は８０％又は８５％又は９０％又は９５％の相同性を有する、本明細書に開示されるこれら及び他のタンパク質のバリアントが具体的に開示される。当業者であれば、２つのタンパク質の相同性を決定する方法を、容易に理解することができる。例えば、相同性は、相同性が最も高いレベルにあるように、２つの配列を整列した後に計算することができる。

相同性を計算する別の方式は、公開されたアルゴリズムによって実行することができる。比較のための配列の最適なアライメントは、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）のローカル相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．ＭｏＬ Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２４４４（１９８８）の類似検索法によって、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ化された実装によって、又は検査によって、実施され得る。

例えば、Ｚｕｋｅｒ，Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：４８－５２，１９８９、Ｊａｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：７７０６－７７１０，１９８９、Ｊａｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：２８１－３０６，１９８９に開示されたアルゴリズムによって、核酸について同じ種類の相同性を得ることができる。

保存的変異及び相同性の説明は、例えば、バリアントが保存的変異である特定の配列に対して少なくとも７０％の相同性を有する実施形態のように、任意の組み合わせで一緒に組み合わせることができることが理解される。

本明細書は、様々なタンパク質及びタンパク質配列を考察するため、それらのタンパク質配列をコードすることができる核酸もまた開示されることが理解される。これには、特定のタンパク質配列に関連する全ての縮重配列、すなわち、１つの特定のタンパク質配列をコードする配列を有する全ての核酸、並びにタンパク質配列の開示されたバリアント及び誘導体をコードする縮重核酸を含む全ての核酸、が含まれるであろう。したがって、各特定の核酸配列が本明細書に記載されていない場合があるが、各配列及び全ての配列が、開示されたタンパク質配列を介して、実際に本明細書に開示及び記載されていることを理解される。また、開示されたＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの特定のバリアントが本明細書に開示されている生物内のペプチド又はタンパク質をコードする特定のＤＮＡ配列を示すアミノ酸配列はないが、ペプチドをコードする既知の核酸配列は既知であり、本明細書に開示され、記載されていることも理解される。

開示された組成物に組み込まれ得る多数のアミノ酸及びペプチド類似体が存在することが理解される。例えば、表１及び表２に示されるアミノ酸とは異なる機能的置換基を有する多数のＤアミノ酸又はアミノ酸が存在する。天然に存在するペプチドの反対の立体異性体、並びにペプチド類似体の立体異性体が開示される。これらのアミノ酸は、ｔＲＮＡ分子に、選択されるアミノ酸を充填し、例えば、琥珀色のコドンを利用して、アナログアミノ酸を部位特異的な方式でペプチド鎖に挿入する遺伝子構築物を操作することによって、ポリペプチド鎖に容易に組み込むことができる。

ペプチドに似ているが、天然のペプチド結合を介して結合されていない分子を産生することができる。例えば、アミノ酸又はアミノ酸類似体についての結合としては、ＣＨ_２ＮＨ－－、－－ＣＨ_２Ｓ－－、－－ＣＨ_２－－ＣＨ_２－－、－－ＣＨ＝ＣＨ－－（シス及びトランス）、－－ＣＯＣＨ_２－－、－－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２－－、及び－－ＣＨＨ_２ＳＯ－が挙げられる（これら及び他のものは、Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｂ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ，ｅｄｓ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐ．２６７（１９８３）、Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．，Ｖｅｇａ Ｄａｔａ（Ｍａｒｃｈ １９８３），Ｖｏｌ．１，Ｉｓｓｕｅ ３，Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ（ｇｅｎｅｒａｌ ｒｅｖｉｅｗ）、Ｍｏｒｌｅｙ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ（１９８０）ｐｐ．４６３－４６８；Ｈｕｄｓｏｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐｔ Ｐｒｏｔ Ｒｅｓ １４：１７７－１８５（１９７９）（－－ＣＨ_２ＮＨ－－、ＣＨ_２ＣＨ_２－－）、Ｓｐａｔｏｌａ ｅｔ ａｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ３８：１２４３－１２４９（１９８６）（－－ＣＨ Ｈ_２－－Ｓ）、Ｈａｎｎ Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．Ｉ ３０７－３１４（１９８２）（－－ＣＨ－－ＣＨ－－、シス及びトランス）、Ａｌｍｑｕｉｓｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２３：１３９２－１３９８（１９８０）（－－ＣＯＣＨ_２－－）、Ｊｅｎｎｉｎｇｓ－Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２３：２５３３（１９８２）（－－ＣＯＣＨ_２－－）、Ｓｚｅｌｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ａｐｐｌｎ，ＥＰ ４５６６５ ＣＡ（１９８２）：９７：３９４０５（１９８２）（－－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２－－）、Ｈｏｌｌａｄａｙ ｅｔ ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．Ｌｅｔｔ ２４：４４０１－４４０４（１９８３）（－－Ｃ（ＯＨ）ＣＨ_２－－）、及びＨｒｕｂｙ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ３１：１８９－１９９（１９８２）（－－ＣＨ_２－－Ｓ－－）に見ることができ、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる）。特に好ましい非ペプチド結合は、－－ＣＨ_２ＮＨ－－である。ペプチド類似体は、ｂ－アラニン、ｇ－アミノ酪酸などの結合原子間に２つ以上の原子を有し得ることが理解される。

アミノ酸類似体及び類似体並びにペプチド類似体は、しばしば、より経済的な産生、より大きな化学的安定性、より強化された薬理学的特性（半減期、吸収、効力、有効性など）、特異性の変化（例えば、広域の生物学的活性）、抗原性の低減などを有する。

Ｄ－アミノ酸は、ペプチダーゼなどによって認識されないため、Ｄ－アミノ酸は、より安定なペプチドを生成するために使用され得る。コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸を同じ種類のＤ－アミノ酸（例えば、Ｌ－リジンの代わりにＤ－リジン）で系統的に置換することを使用して、より安定なペプチドを生成することができる。システイン残基は、２つ以上のペプチドを一緒に環化する又は結合するために使用され得る。これは、ペプチドを、特定の立体構造に拘束するのに有益であり得る。

ある特定の実施形態では、本開示は、１つ以上のアミノ酸が化学基で置換されて、任意選択でリンカーを介して接続された、溶解性及び血清半減期などの薬物動態特性を改善する、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの誘導体を企図する。ある特定の実施形態では、そのような誘導体は、置換基又はリンカーが生分解性であるか、又は置換基又はリンカーが生分解性でないプロドラッグであってもよい。ある特定の実施形態では、企図される置換基は、糖、多糖、アセチル、脂肪酸、脂質、及び／又はポリエチレングリコールを含む。置換基は、任意選択でリンカーを介して接続されたペプチドのＣ末端又はＮ末端上にアミド結合を形成することによって共有結合されてもよい。ある特定の実施形態では、置換基は、ペプチド内のアミノ酸を通して、例えば、本明細書に開示される配列を含むペプチド内の、リジンなどのアミン側鎖基又はアスパラギン酸若しくはグルタミン酸などのカルボン酸側鎖基を含有するアミノ酸を通して共有結合されてもよいことが企図される。ある特定の実施形態では、置換基は、任意選択でリンカーを介して接続された、本明細書に開示される配列中のシステインを介して共有結合されてもよいことが企図される。ある特定の実施形態では、置換基は、システインアミノ酸側基とジスルフィドを形成するリンカーを介して接続される。

「置換」という用語は、少なくとも１個の水素原子が置換基で置換された分子を指す。置換された場合、基のうちの１つ以上は、「置換基」である。分子は、多重置換されてもよい。オキソ置換基（「＝Ｏ」）の場合、２個の水素原子が置換される。この文脈内の例示的な置換基としては、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノ、オキソ、カルボシクリル、カルボシクロアルキル、ヘテロカルボシクリル、ヘテロカルボシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、－ＮＲａＲｂ、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａＮＲｂ、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ、－ＮＲａＳＯ_２Ｒｂ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、－ＯＲａ、－ＳＲａ、－ＳＯＲａ、－Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒａ、－ＯＳ（＝Ｏ）_２Ｒａ、及び－Ｓ（＝Ｏ）_２ＯＲａが挙げられ得る。この文脈におけるＲａ及びＲｂは、同じであるか、又は異なり、独立して、水素、ハロゲンヒドロキシル、アルキル、アルコキシ、アルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボシクリル、カルボシクロアルキル、ヘテロカルボシクリル、ヘテロカルボシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルであってもよい。置換基は、更に任意選択で置換されてもよい。

本明細書で使用される場合、「脂質」基は、水に非常に不溶である天然に存在する又は天然に存在しない疎水性基を指す。本明細書で使用される場合、脂質基は、脂質上の接続点が水素に置き換えられたときに水に非常に不溶性であるとみなされ、得られた化合物は、０．６３×１０^－４％ｗ／ｗ（２５℃で）未満の水溶性を有し、これは水中のオクタンの重量パーセント溶解度である。Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２^ｎｄ Ｅｄ，Ｓｍａｌｌｗｏｏｄ，２００２，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｐａｇｅ １９５を参照されたい。天然に存在する脂質の例としては、脂肪酸、グリセロ脂質、コレステロール、ステロイド、ポリケチド、及び誘導体に見られる飽和又は不飽和炭化水素鎖が挙げられる。天然に存在しない脂質としては、天然に存在する脂質の誘導体、アクリルポリマー、芳香族、及びアルキル化化合物、並びにそれらの誘導体が挙げられる。

例えば、開示されるペプチド又はペプチドの薬学的に許容される形態がカルボン酸官能基を含有する場合、プロドラッグは、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_２－Ｃ_１２）アルカノイルオキシメチル、４～９個の炭素原子を有する１－（アルカノイルオキシ）エチル、５～１０個の炭素原子を有する１－メチル－１－（アルカノイルオキシ）－エチル、３～６個の炭素原子を有するアルコキシカルボニルオキシメチル、４～７個の炭素原子を有する１－（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、５～８個の炭素原子を有する１－メチル－１－（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、３～９個の炭素原子を有するＮ－（アルコキシカルボニル）アミノメチル、４～１０個の炭素原子を有する１－（Ｎ－（アルコキシカルボニル）アミノ）エチル、３－フタリジル、４－クロトノラクトニル、ガンマ－ブチロラクトン－４－イル、ジ－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１－Ｃ_２）アルキルアミノ（Ｃ_２－Ｃ_３）アルキル（ベータ－ジメチルアミノエチルなど）、カルバモイル－（Ｃ_１－Ｃ_２）アルキル、Ｎ，Ｎ－ジ（Ｃ_１－Ｃ_２）アルキルカルバモイル－（Ｃ_１－Ｃ_２）アルキル及びピペリジノ－、ピロリジノ－又はモルホリノ（Ｃ_２－Ｃ_３）アルキルなどの基で酸基の水素原子を置換することによって形成される薬学的に許容されるエステルを含むことができる。

開示されるペプチド又はペプチドの薬学的に許容される形態がアルコール官能基を含有する場合、プロドラッグは、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシメチル、１－（（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ）エチル、１－メチル－１（（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ）エチル（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニルオキシメチル、－Ｎ－（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニルアミノメチル、スクシノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、アルファ－アミノ（Ｃ_１－Ｃ_４）アルカノイル、アリールアシル、及びアルファ－アミノアシル、又はアルファ－アミノアシル－アルファ－アミノアシルなどの基でアルコール基の水素原子を置換することによって形成することができ、式中、各アルファ－アミノアシル基は、天然に存在するＬ－アミノ酸Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｐ（Ｏ）（Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル）_２、及びグリコシル（炭水化物のヘミアセタール形態のヒドロキシル基の除去から得られるラジカル）から独立して選択される。

開示されるペプチド又はペプチドの薬学的に許容される形態がアミン官能基を組み込む場合、プロドラッグは、Ｒ－カルボニル、ＲＯ－カルボニル、ＮＲＲ’－カルボニルなどの基でアミン基中の水素原子を置き換えることによって形成することができ、式中、Ｒ及びＲ’はそれぞれ独立して（Ｃ_１－Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_３－Ｃ_７）シクロアルキル、ベンジル、天然アルファ－アミノアシル、－Ｃ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＯＹ_１であり、式中、Ｙ^１はＨ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル又はベンジル、Ｃ（ＯＹ_２）Ｙ_３であり、式中、Ｙ_２は（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキルであり、Ｙ_３は（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル、カルボキシ（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル、アミノル（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、又はモノ－Ｎ若しくはジ－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルアミノアルキル、－Ｃ（Ｙ_４）Ｙ_５であり、式中、Ｙ_４はＨ又はメチルであり、Ｙ_５はモノ－Ｎ－若しくはジ－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルアミノ、モルフィノリノ、ピペリジン－１－イル、又はピロリジン－１－イルである。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容されるエステル」は、カルボン酸、リン酸、ホスフィン酸、スルホン酸、スルフィン酸、及びボロン酸を含むがこれらに限定されない酸性基のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、及びシクロアルキルエステルを含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容されるエノールエーテル」は、式－Ｃ＝Ｃ（ＯＲ）の誘導体を含むが、これらに限定されず、式中、Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、及びシクロアルキルから選択することができる。薬学的に許容されるエノールエステルとしては、式－Ｃ＝Ｃ（ＯＣ（Ｏ）Ｒ）の誘導体を含むが、これらに限定されず、式中、Ｒは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、及びシクロアルキルから選択することができる。

「連結基」は、一緒に分子部分に架橋するために使用することができる任意の多様な分子配置を指す。例示的な式は、－Ｒ_ｍ－であってよく、式中、Ｒは、以下のように、各出現時に個別にかつ独立して選択される：－ＣＲ_ｍＲ_ｍ－、－ＣＨＲ_ｍ－、－ＣＨ－、－Ｃ－、－ＣＨ_２－、－Ｃ（ＯＨ）Ｒ_ｍ、－Ｃ（ＯＨ）（ＯＨ）－、－Ｃ（ＯＨ）Ｈ、－Ｃ（Ｈａｌ）Ｒ_ｍ－、－Ｃ（Ｈａｌ）（Ｈａｌ）－、－Ｃ（Ｈａｌ）Ｈ－、－Ｃ（Ｎ_３）Ｒ_ｍ－、－Ｃ（ＣＮ）Ｒ_ｍ－、－Ｃ（ＣＮ）（ＣＮ）－、－Ｃ（ＣＮ）Ｈ－、－Ｃ（Ｎ_３）（Ｎ_３）－、－Ｃ（Ｎ_３）Ｈ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ－、－ＮＨ－、－ＮＲ_ｍ－、－（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝ＮＨ）－、－（Ｃ＝Ｓ）－、－（Ｃ＝ＣＨ_２）－（Ｒ基間に単結合、二重結合、又は三重結合を個別にかつ独立して含み得る）。ＲがＲ_ｍで分岐している場合、－ＣＨ_３、－Ｈ、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－ＣＣＨ、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨ_２、－Ｎ_３、－ＣＮ、又は－Ｈａｌなどの基で終端されてもよく、又は２つの分岐Ｒが環状構造を形成してもよい。ある特定の事例では、合計Ｒｓ又は「ｍ」は、１００未満、５０未満、２５未満、又は１０未満であってもよいことが企図される。連結基の例としては、架橋アルキル基及びアルコキシアルキル基が挙げられる。連結基は、１つ以上の置換基で置換されてもよい。

２．相同性／同一性
本明細書に開示される遺伝子及びタンパク質の任意の既知のバリアント及び誘導体又は現れ得るものを定義する１つの方式は、特定の既知の配列に対する相同性の観点からバリアント及び誘導体を定義することによるものであることを理解されたい。例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６のうちのいずれかは、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの特定の配列を示す。具体的には、述べられた配列に対する少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９パーセントの相同性を有する、本明細書に開示されるこれら及び他の遺伝子及びタンパク質のバリアントが開示される。当業者であれば、２つのタンパク質又は核酸、例えば、遺伝子の相同性を決定する方法を、容易に理解する。例えば、相同性は、相同性が最も高いレベルにあるように、２つの配列を整列した後に計算することができる。

相同性を計算する別の方式は、公開されたアルゴリズムによって実行することができる。比較のための配列の最適なアライメントは、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）のローカル相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．ＭｏＬ Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：８５：２４４４（１９８８）の類似検索法によって、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ化された実装によって、又は検査によって、実施され得る。

例えば、少なくとも核酸アラインメントに関連する材料に関して、参照により本明細書に組み込まれるＺｕｋｅｒ，Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：４８－５２，１９８９、Ｊａｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：７７０６－７７１０，１９８９、Ｊａｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：２８１－３０６，１９８９に開示されたアルゴリズムによって、核酸について同じ種類の相同性を得ることができる。

３．薬学的担体／薬学的製品の送達
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるペプチド、又はそのナノ粒子、又は任意選択で他の薬学的薬剤、又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物を企図する。

ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるペプチドを含む薬学的組成物及び細胞成長培地などの組成物に関する。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示される任意の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体、並びに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，６３０，１２４号及び同第５，２１７，９５３に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト）と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物に関する。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、カプセル剤、錠剤、ピル剤、散剤、又は顆粒剤の形態である。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、滅菌ｐＨ緩衝水溶液の形態である。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、液体又は密封された容器に推進剤を噴霧するように構成された容器の形態である。

上記のように、組成物はまた、薬学的に許容される担体内で、インビボで投与され得る。「薬学的に許容される」は、いかなる望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、又はそれと接触する薬学的組成物の他の成分のいずれとも有害な様式で相互作用することなく、生物学的に又は別途望ましくないものではない材料、すなわち、核酸又はベクターとともに、対象に投与され得る材料、を意味する。担体は、当業者には周知のとおり、活性成分のあらゆる分解を最小限に抑え、対象におけるあらゆる有害な副作用を最小限に抑えるように、必然的に選択され得る。

組成物は、経口、非経口（例えば、静脈内）、筋肉内注射、腹腔内注射、経皮、体外、局所（局所鼻腔内投与又は吸入剤による投与を含む）などで、投与され得る。本明細書で使用される場合、「局所鼻腔内投与」は、鼻孔の一方又は両方を介して組成物を鼻及び鼻道に送達することを意味し、噴霧機構若しくは液滴機構による、又は核酸若しくはベクターのエアロゾル化による送達を含むことができる。吸入剤による組成物の投与は、噴霧又は液滴機構による送達を介して鼻又は口を通して行うことができる。送達は、挿管を介して呼吸器系の任意の領域（例えば、肺）に直接送達することもできる。必要とされる組成物の正確な量は、対象の種、年齢、体重、及び全身状態、治療されるアレルギー障害の重症度、使用される特定の核酸又はベクター、その投与様式などに応じて、対象によって異なることになる。したがって、全ての組成物に対して正確な量を指定することは不可能である。しかしながら、適切な量は、本明細書の教示を与える日常的な実験のみを使用して、当業者によって決定され得る。

組成物の非経口投与は、使用される場合、概して、注射を特徴とする。注射剤は、液体溶液又は懸濁液、注射前の液体中の懸濁液の溶液に好適な固体形態、あるいはエマルジョンのいずれかとして、従来の形態で調製され得る。最近改訂された非経口投与のアプローチには、一定の投薬量が維持されるような徐放又は持続放出の使用を伴う。例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第３，６１０，７９５号を参照されたい。

材料は、溶液、懸濁液（例えば、微小粒子、リポソーム、又は細胞に組み込まれる）中であってもよい。これらは、抗体、受容体、又は受容体リガンドを介して、特定の細胞型を標的にし得る。以下の参考文献は、腫瘍組織に特定のタンパク質を標的とするための本技術の使用例である（Ｓｅｎｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２：４４７－４５１，（１９９１）、Ｂａｇｓｈａｗｅ，Ｋ．Ｄ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６０：２７５－２８１，（１９８９）、Ｂａｇｓｈａｗｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５８：７００－７０３，（１９８８）、Ｓｅｎｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，４：３－９，（１９９３）、Ｂａｔｔｅｌｌｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３５：４２１－４２５，（１９９２）、Ｐｉｅｔｅｒｓｚ ａｎｄ ＭｃＫｅｎｚｉｅ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｖｉｅｗｓ，１２９：５７－８０，（１９９２）、及びＲｏｆｆｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，４２：２０６２－２０６５，（１９９１））。「ステルス」及び他の抗体共役リポソーム（結腸がんを標的とする脂質媒介性薬物を含む）などのビヒクル、細胞特異的リガンドを介したＤＮＡの受容体媒介性標的化、リンパ球指向性腫瘍標的化、及びインビボでのマウス神経膠腫細胞の高度に特異的な治療的レトロウイルス標的化。以下の参考文献は、腫瘍組織に特定のタンパク質を標的化するための本技術の使用例である（Ｈｕｇｈｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４９：６２１４－６２２０，（１９８９）、及びＬｉｔｚｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕａｎｇ，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１１０４：１７９－１８７，（１９９２））。概して、受容体は、構成的又はリガンド誘導のいずれかのエンドサイトーシスの経路に関与する。これらの受容体は、クラスリン被覆ピット内でクラスター化し、クラスリン被覆小胞を介して細胞内に入り、受容体が選別される酸性化エンドソームを通過し、次いで細胞表面にリサイクルされるか、細胞内に貯蔵されるか、又はリソソーム中で分解されるかのいずれかである。内部移行経路は、栄養素の取り込み、活性化タンパク質の除去、巨大分子のクリアランス、ウイルス及び毒素の日和見進入、リガンドの解離及び分解、並びに受容体レベルの調節などの様々な機能を果たす。多くの受容体は、細胞型、受容体濃度、リガンドの種類、リガンド価、及びリガンド濃度に応じて、２つ以上の細胞内経路に従う。受容体媒介性エンドサイトーシスの分子機構及び細胞機構は、概説されている（Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｇｒｅｅｎｅ，ＤＮＡ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １０：６，３９９－４０９（１９９１））。

ａ）薬学的に許容される担体
抗体を含む本組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わせて治療に使用することができる。

好適な担体及びそれらの配合物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（１９ｔｈ ｅｄ．）ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １９９５に記載されている。典型的には、製剤を等張性にするために、製剤に適切な量の薬学的に許容される塩が使用される。薬学的に許容される担体の例としては、生理食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液が挙げられるが、これらに限定されない。溶液のｐＨは、好ましくは、約５～約８であり、より好ましくは、約７～約７．５である。更なる担体としては、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスなどの徐放性調製物が挙げられ、このマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、リポソーム、又は微粒子の形態である。ある特定の担体が、例えば、投与経路及び投与される組成物の濃度に応じて、より好ましくてもよいことは、当業者には明らかであろう。

薬学的担体は当業者に既知である。これらは、最も典型的には、生理的ｐＨの滅菌水、生理食塩水、及び緩衝液などの溶液を含む、ヒトへの薬物投与のための標準的な担体である。これらの組成物は、筋肉内又は皮下に投与することができる。他の化合物は、当業者が使用する標準的な手順に従って投与されることになる。

薬学的組成物は、選択される分子に加えて、担体、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤、表面活性剤などを含んでもよい。薬学的組成物はまた、１つ以上の活性成分、例えば、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔薬などを含んでもよい。

本薬学的組成物は、局所治療又は全身治療が所望されるかどうか、及び治療される領域に応じて、ある数の方式で投与され得る。投与は、局所（眼、膣、直腸、鼻腔内を含む）、経口、吸入、又は非経口、例えば、静脈内点滴、皮下、腹腔内、又は筋肉内注射によって行われてもよい。開示される抗体は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、腔内、又は経皮的に投与され得る。

非経口投与のための調製物には、滅菌水溶液又は非水溶液、懸濁液、及びエマルジョンが含まれる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体には、生理食塩水及び緩衝媒体を含む、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョン、又は懸濁液が含まれる。非経口ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液、又は固定油が含まれる。静脈内ビヒクルには、流体及び栄養補充剤、電解質補充剤（リンゲルデキストロースに基づくものなど）などが含まれる。保存剤及び他の添加剤、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガスなども存在し得る。

局所投与用の製剤には、軟膏、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、点滴剤、座薬、噴霧剤、液剤、及び粉剤が含まれてもよい。従来の薬学的担体、水性、粉末又は油性基剤、増粘剤などが、必要な場合、又は望ましい場合がある。

経口投与のための組成物には、粉剤又は顆粒剤、水又は非水媒体中の懸濁液又は溶液、カプセル剤、サシェ剤、又は錠剤が含まれる。増粘剤、香料、希釈剤、乳化剤、分散助剤、又は結合剤が望ましくあり得る。

本組成物のうちのいくつかは、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、及びリン酸などの無機酸、並びにギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、及びフマル酸などの有機酸との反応によって、又は水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウムなどの無機塩基、並びにモノ、ジ、トリアルキル、及びアリールアミン、及び置換エタノールアミンなどの有機塩基との反応によって形成される薬学的に許容される酸又は塩基付加塩として潜在的に投与され得る。

ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるペプチド又はそのナノ粒子と、本明細書に開示される薬剤と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物を企図する。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるペプチド若しくはそのナノ粒子、又は本明細書に開示される薬剤を含む医薬の製造、及び本明細書に開示される方法のための使用を企図する。

ｂ）治療的使用
本組成物を投与するための有効な投薬量及びスケジュールは、経験的に決定され得るため、そのような決定を行うことは、当業者の技術の範囲内である。組成物の投与のための投与量範囲は、障害の症状が影響を受ける所望の効果をもたらすのに十分な大きさのものである。投薬量は、有害な副作用、例えば、望ましくない交差反応、アナフィラキシー反応などを引き起こすほどに大きいものであってはならない。概して、投薬量は、患者の年齢、状態、性別、及び疾患の程度、投与経路、又は他の薬物がレジメンに含まれるかどうかによって変動することになり、当業者により決定され得る。投薬量は、いずれかの禁忌の場合に、個々の医師によって調整することができる。投与量は、異なってもよく、１日又は数日間、１日１回以上の用量投与で投与することができる。ガイダンスは、所与のクラスの医薬品の適切な投与量についての文献に見出すことができる。例えば、抗体のための適切な用量を選択する際のガイダンスは、抗体の治療的使用に関する文献、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｆｅｒｒｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｎｏｇｅｓ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｒｋ Ｒｉｄｇｅ，Ｎ．Ｊ．，（１９８５）ｃｈ．２２ ａｎｄ ｐｐ．３０３－３５７、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｈａｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７７）ｐｐ．３６５－３８９において見出すことができる。単独で使用される抗体の典型的な１日の投与量は、上記の要因に応じて、１日当たり約１μｇ／ｋｇ体重～最大１００ｍｇ／ｋｇ体重以上の範囲であってもよい。本明細書に開示されるペプチド若しくはそのナノ粒子、又は他の薬剤について、患者に投与される投薬量は、典型的には、患者の体重の０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、患者に投与される投薬量は、患者の体重の０．０００１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～２ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１～０．２５ｍｇ／ｋｇ、又は０．０１～０．１０ｍｇ／ｋｇである。更に、本明細書に開示されるペプチド若しくはそのナノ粒子、又は薬剤の投与の投薬量及び頻度は、例えば、脂質化及び天然又は人工肺サーファクタントの包含などの修飾によって、取り込み及び組織浸透を増強することによって低減され得る。

４．核酸
「核酸」という用語は、ヌクレオチドのポリマー、又はポリヌクレオチドを指す。この用語は、単一の分子、又は分子の集合を指定するために使用される。核酸は、一本鎖であっても二本鎖であってもよく、以下に記載されるように、コード領域及び様々な制御要素の領域を含んでもよい。

例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６に示される血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）、その断片、又はその類似体のうちのいずれかをコードする核酸、並びに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，６３０，１２４号及び同第５，２１７，９５３号に開示される様々な機能的核酸又は任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト／ＶＩＰアンタゴニストを含む、核酸ベースの、本明細書で開示される様々な分子が存在する。開示される核酸は、例えば、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、又はヌクレオチド代替物から構成される。これら及び他の分子の非限定的な例が、本明細書で論じられる。例えば、ベクターが細胞内で発現される場合、発現したｍＲＮＡは典型的にはＡ、Ｃ、Ｇ、及びＵから構成されることが理解される。同様に、例えば、アンチセンス分子が、例えば外因性送達を通して細胞又は細胞環境に導入される場合、アンチセンス分子が、細胞環境中のアンチセンス分子の分解を低減するヌクレオチド類似体から構成されることが有利であることが理解される。

ａ）ヌクレオチド及び関連分子
ヌクレオチドは、塩基部分、糖部分、及びリン酸部分を含有する分子である。ヌクレオチドは、それらのリン酸部分及び糖部分を通して、一緒に連結され、ヌクレオシド間結合を生成することができる。ヌクレオチドの塩基部分は、アデニン－９－イル（Ａ）、シトシン－１－イル（Ｃ）、グアニン－９－イル（Ｇ）、ウラシル－１－イル（Ｕ）、及びチミン－１－イル（Ｔ）であり得る。ヌクレオチドの糖部分は、リボース又はデオキシリボースである。ヌクレオチドのリン酸部分は、五価リン酸である。ヌクレオチドの非限定的な例は、３’－ＡＭＰ（３’－アデノシン一リン酸）又は５’－ＧＭＰ（５’－グアノシン一リン酸）であろう。当該技術分野で入手可能であり、本明細書で入手可能である、多種多様なこれらの種類の分子が存在する。

特定のペプチドを「コードする核酸配列」という用語は、ペプチドのコード領域を含む核酸配列、又は言い換えれば、ペプチド産物をコードする核酸配列を指す。コード領域は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、又はＲＮＡのいずれかの形態で存在してもよい。ＤＮＡ形態で存在する場合、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、又は核酸は、一本鎖（すなわち、センス鎖）又は二本鎖であってもよい。エンハンサー／プロモーター、スプライス接合部、ポリアデニル化シグナルなどの好適な制御要素を、必要に応じてコード領域に近接して配置して、転写の適切な開始及び／又は一次ＲＮＡ転写産物の正しいプロセシングを可能にすることができる。あるいは、発現ベクターにおいて利用されるコード領域は、内因性エンハンサー／プロモーター、スプライス接合部、介在配列、ポリアデニル化シグナルなど、又は内因性及び外因性制御要素の両方の組み合わせを含み得る。

ヌクレオチド類似体は、塩基、糖、又はリン酸部分のいずれかに、何らかの種類の改変を含有するヌクレオチドである。ヌクレオチドに対する改変は、当該技術分野で既知であり、例えば、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、及び２－アミノアデニン、並びに糖又はリン酸部分における改変を含むであろう。当該技術分野で入手可能であり、本明細書で入手可能である、多種多様なこれらの種類の分子が存在する。

ヌクレオチド代替物は、ヌクレオチドと同様の機能特性を有するが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）などのリン酸部分を含有しない分子である。ヌクレオチド代替物は、ワトソン－クリック又はフーグスティーン様式で核酸を認識するが、リン酸部分以外の部分を通して一緒に連結される分子である。ヌクレオチド代替物は、適切な標的核酸と相互作用するときに、二重らせん型構造に適合することができる。当該技術分野で入手可能であり、本明細書で入手可能である、多種多様なこれらの種類の分子が存在する。

他の種類の分子（複合体）をヌクレオチド又はヌクレオチド類似体に連結して、例えば、細胞取り込みを増強することも可能である。複合体は、ヌクレオチド又はヌクレオチド類似体に化学的に連結され得る。そのような複合体としては、限定されないが、脂質部分、例えば、コレステロール部分が挙げられる。（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３－６５５６）。当該技術分野で入手可能であり、本明細書で入手可能である、多種多様なこれらの種類の分子が存在する。

ワトソン－クリック相互作用は、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、又はヌクレオチド代替物のワトソン－クリック面との少なくとも１つの相互作用である。ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、又はヌクレオチド代替物のワトソン－クリック面は、プリン系のヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、又はヌクレオチド代替物のＣ２、Ｎ１、及びＣ６位、並びにピリミジン系のヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、又はヌクレオチド代替物のＣ２、Ｎ３、Ｃ４位を含む。

フーグスティーン相互作用は、二重鎖ＤＮＡの主溝に曝されるヌクレオチド又はヌクレオチド類似体のフーグスティーン面上で起こる相互作用である。フーグスティーン面は、プリンヌクレオチドのＮ７位及びＣ６位の反応性基（ＮＨ２又はＯ）を含む。

ｂ）配列
本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストに関連する様々な配列が存在し、これらの全ては、核酸によってコードされるか、又は核酸である。これらの遺伝子のヒト類似体、並びに他の類似体、及びこれらの遺伝子のアレル、並びにスプライスバリアント及び他の種類のバリアントの配列は、Ｇｅｎｂａｎｋを含む様々なタンパク質及び遺伝子データベースで入手可能である。当業者は、配列の不一致及び相違を解析する方法、並びに特定の配列に関連する組成物及び方法を、他の関連配列に調整する方法を理解している。プライマー及び／又はプローブは、本明細書に開示され当該技術分野で既知の情報を与える任意の所与の配列について設計され得る。

５．核酸の送達
対象の細胞への外因性ＤＮＡの投与及び取り込み（すなわち、遺伝子導入又はトランスフェクション）を含む上記の方法では、開示される核酸は、裸のＤＮＡ又はＲＮＡの形態であり得るか、又は核酸は、核酸を細胞に送達するためのベクター内にあり得、それによって、抗体をコードするＤＮＡ断片は、当業者によく理解されるように、プロモーターの転写調節下にある。ベクターは、アデノウイルスベクター（Ｑｕａｎｔｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｌａｖａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）などの市販の調製物であり得る。核酸又はベクターの細胞への送達は、多様な機序を介して行うことができる。一例として、送達は、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（ＧＩＢＣＯ－ＢＲＬ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）、ＳＵＰＥＲＦＥＣＴ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、及びＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、並びに当該技術分野で標準的な手順に従って開発された他のリポソームなどの市販のリポソーム調製物を使用して、リポソームを介して行うことができる。更に、開示される核酸又はベクターは、エレクトロポレーションによってインビボで送達することができ、そのための技術は、Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から、並びにＳＯＮＯＰＯＲＡＴＩＯＮマシン（ＩｍａＲｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．、Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）によって入手可能である。

一例として、ベクターの送達は、組換えレトロウイルスゲノムをパッケージングすることができるレトロウイルスベクター系などのウイルス系を介して行うことができる（例えば、Ｐａｓｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：４４８６，１９８８、Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：２８９５，１９８６を参照されたい）。次に、組換えレトロウイルスを使用して、感染させ、それによって、広く中和する抗体（又はその活性断片）をコードする核酸を感染細胞に送達することができる。変化させた核酸を哺乳類細胞に導入する正確な方法は、もちろん、レトロウイルスベクターの使用に限定されない。アデノウイルスベクター（Ｍｉｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．５：９４１－９４８，１９９４）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（Ｇｏｏｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８４：１４９２－１５００，１９９４）、レンチウイルスベクター（Ｎａｉｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：２６３－２６７，１９９６）、偽型レトロウイルスベクター（Ａｇｒａｗａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２４：７３８－７４７，１９９６）の使用を含む、この手順のための他の技術が広く利用可能である。リポソーム送達、並びに受容体媒介性エンドサイトーシス機構及び他のエンドサイトーシス機構などの物理的形質導入技術も使用することができる（例えば、Ｓｃｈｗａｒｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８７：４７２－４７８，１９９６を参照されたい）。本開示の組成物及び方法は、これらの又は他の一般的に使用される遺伝子移入方法のうちのいずれかと併用することができる。

一例として、抗体コード核酸がアデノウイルスベクター中の対象の細胞に送達される場合、アデノウイルスをヒトに投与するための投薬量は、注射当たり約１０^７～１０^９プラーク形成単位（ｐｆｕ）の範囲であり得るが、注射当たり１０^１２ｐｆｕに達し得る（Ｃｒｙｓｔａｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８：９８５－１００１，１９９７、Ａｌｖａｒｅｚ ａｎｄ Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８：５９７－６１３，１９９７）。対象は、単一の注射を受けることができるか、又は追加の注射が必要な場合、それらを６ヶ月間隔（又は当業者によって決定される他の適切な時間間隔）で無期限及び／又は治療の有効性が確立されるまで繰り返すことができる。

核酸又はベクターの非経口投与は、使用される場合、概して、注射を特徴とする。注射剤は、液体溶液又は懸濁液、注射前の液体中の懸濁液の溶液に好適な固体形態、あるいはエマルジョンのいずれかとして、従来の形態で調製され得る。最近改訂された非経口投与のアプローチには、一定の投薬量が維持されるような徐放又は持続放出の使用を伴う。治療用化合物の好適な製剤及び様々な投与経路の更なる議論については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（１９ｔｈ ｅｄ．）ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １９９５を参照されたい。

６．発現系
細胞に送達される核酸は、典型的には、発現制御系を含有する。例えば、ウイルス及びレトロウイルス系における挿入遺伝子は、通常、所望の遺伝子産物の発現を制御するのに役立つプロモーター、及び／又はエンハンサーを含有する。プロモーターは、一般に、転写開始部位に関して相対的に固定された位置にあるときに機能するＤＮＡの配列である。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼ及び転写因子の基本的な相互作用に必要なコア要素を含有し、上流要素及び応答要素を含有し得る。

タンパク質「発現系」は、インビボ及びインビトロ（無細胞）系を指す。組換えタンパク質発現のための系は、典型的には、鋳型を含有するＤＮＡ発現ベクターをトランスフェクトする細胞を利用する。細胞を、所望のタンパク質を翻訳するような条件下で培養する。発現したタンパク質を、その後の精製のために抽出する。原核細胞及び真核細胞を使用するインビボタンパク質発現系は周知である。また、一部のタンパク質は、変性剤及びタンパク質再折り畳み手順を使用して回収される。インビトロ（無細胞）タンパク質発現系は、典型的には、ＲＮＡポリメラーゼ、調節タンパク質因子、転写因子、リボソーム、ｔＲＮＡ補因子、アミノ酸及びヌクレオチドなどの転写、翻訳、及び任意選択で翻訳後修飾に十分な成分を含有する全細胞又は組成物の翻訳適合性抽出物を使用する。発現ベクターの存在下で、これらの抽出物及び成分は、目的のタンパク質を合成することができる。無細胞系は、典型的には、プロテアーゼを含有せず、修飾アミノ酸によるタンパク質の標識を可能にする。いくつかの無細胞系は、発現ベクターへの翻訳のためにコードされた成分を組み込んだ。例えば、いずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＳｈｉｍｉｚｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ－ｆｒｅｅ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，２００１，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９，７５１－７５５及びＡｓａｈａｒａ ＆ Ｃｈｏｎｇ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１０，３８（１３）：ｅ１４１を参照されたい。

ａ）ウイルスプロモーター及びエンハンサー
哺乳類宿主細胞内のベクターからの転写を制御する好ましいプロモーターは、様々な供給源、例えば、ポリオーマ、サルウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、最も好ましくはサイトメガロウイルスなどのウイルスのゲノムから、又は異種哺乳類プロモーター、例えばベータアクチンプロモーターから得ることができる。ＳＶ４０ウイルスの初期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有するＳＶ４０制限断片として好都合に得られる（Ｆｉｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７３：１１３（１９７８））。ヒトサイトメガロウイルスの即時初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として好都合に得られる（Ｇｒｅｅｎｗａｙ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １８：３５５－３６０（１９８２））。もちろん、宿主細胞又は関連種由来のプロモーターも、本明細書で有用である。

エンハンサーは、一般に、転写開始部位から固定距離なしで機能し、５’（Ｌａｉｍｉｎｓ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７８：９９３（１９８１））又は３’側（Ｌｕｓｋｙ，Ｍ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．３：１１０８（１９８３））のいずれかであり得るＤＮＡの配列を指す。更に、エンハンサーは、イントロンの内部（Ｂａｎｅｒｊｉ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ３３：７２９（１９８３））、及びコード配列自体の内部（Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｔ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．４：１２９３（１９８４））に存在し得る。これらは、通常、１０～３００ｂｐの長さで、シスで機能する。エンハンサーは、近くのプロモーターからの転写を増加させるように機能する。エンハンサーはまた、しばしば、転写の調節を媒介する応答要素を含有する。プロモーターは、転写の調節を媒介する応答要素も含有し得る。エンハンサーは、しばしば、遺伝子の発現の調節を決定する。多くのエンハンサー配列は、現在、哺乳類遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、フェトプロテイン、及びインスリン）から知られているが、典型的には、遺伝子発現については、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーを一般発現に使用するであろう。好ましい例は、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００～２７０）、サイトメガロウイルス早期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーである。

プロモーター及び／又はエンハンサーは、それらの機能を引き起こす光又は特定の化学的事象のいずれかによって特異的に活性化され得る。系は、テトラサイクリン及びデキサメタゾンなどの試薬によって、調節することができる。また、ガンマ線照射などの照射への曝露、又はアルキル化の化学療法薬によって、ウイルスベクターの遺伝子発現を増強する方式も存在する。

特定の実施形態では、プロモーター及び／又はエンハンサー領域は、転写される転写単位の領域の発現を最大化するための構成的プロモーター及び／又はエンハンサーとして作用することができる。特定の構築物では、プロモーター及び／又はエンハンサー領域は、特定の時間に特定の種類の細胞でのみ発現する場合であっても、全ての真核生物の細胞型において活性である。この種類の好ましいプロモーターは、ＣＭＶプロモーター（６５０塩基）である。他の好ましいプロモーターは、ＳＶ４０プロモーター、サイトメガロウイルス（全長プロモーター）、及びレトロウイルスベクターのＬＴＲである。

全ての特定の調節要素は、クローニングされ、黒色腫細胞などの特定の細胞型において選択的に発現される発現ベクターを構築するために使用され得ることが示されてきた。グリア線維酢酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターは、グリア起源の細胞で、遺伝子を選択的に発現するために使用されてきた。

また、真核生物宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は有核細胞）で使用される発現ベクターは、ｍＲＮＡの発現に影響を及ぼし得る転写の終結に必要な配列を含有してもよい。これらの領域は、組織因子タンパク質をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分において、ポリアデニル化セグメントとして転写される。３’非翻訳領域には、転写終結部位も含まれる。転写単位は、ポリアデニル化領域も含有することが好ましい。この領域の利点の１つは、転写単位が、ｍＲＮＡのようにプロセシング及び輸送される可能性を増加させることである。発現構築物におけるポリアデニル化シグナルの同定及び使用は、十分に確立されている。相同的なポリアデニル化シグナルが、導入遺伝子構築物に使用されることが好ましい。特定の転写単位において、ポリアデニル化領域は、ＳＶ４０初期ポリアデニル化シグナルに由来し、約４００塩基からなる。また、転写単位は、単独で、又は上記配列と組み合わせて、構築物からの発現又は安定性を改善する、他の標準的な配列を含有することも好ましい。

ｂ）マーカー
ウイルスベクターは、マーカー産物をコードする核酸配列を含むことができる。このマーカー産物を使用して、遺伝子が細胞に送達され、送達されると発現されているかどうかを決定する。好ましいマーカー遺伝子は、β－ガラクトシダーゼをコードするＥ．Ｃｏｌｉ ｌａｃＺ遺伝子、及び緑色蛍光タンパク質である。

いくつかの実施形態では、マーカーは、選択可能なマーカーであってもよい。哺乳類細胞に好適な選択可能なマーカーの例は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）、チミジンキナーゼ、ネオマイシン、ネオマイシン類似体Ｇ４１８、ヒドロマイシン、及びピューロマイシンである。このような選択可能なマーカーが哺乳動物宿主細胞に成功裏に移行されると、形質転換された哺乳動物宿主細胞は、選択圧下に置かれた場合、生存することができる。選択的レジームには、広く使用される２つの異なるカテゴリが存在する。第１のカテゴリは、細胞の代謝、及び補充培地から独立して成長する能力を欠く変異細胞株の使用、に基づく。２つの例としては、ＣＨＯ ＤＨＦＲ－細胞及びマウスＬＴＫ－細胞がある。これらの細胞は、チミジン又はヒポキサンチンなどの栄養素を添加せずに成長する能力を欠いている。これらの細胞は、完全なヌクレオチド合成経路に必要な特定の遺伝子を欠いているため、欠損したヌクレオチドが補充培地に提供されない限り、生存することはできない。培地を補充する代替手段は、それぞれの遺伝子を欠く細胞に、無傷のＤＨＦＲ又はＴＫ遺伝子を導入することで、それらの成長要件を変化させることである。ＤＨＦＲ又はＴＫ遺伝子で形質転換されなかった個々の細胞は、補充されていない培地で生存することができないであろう。

第２のカテゴリは、任意の細胞型で使用される選択スキームを指し、変異細胞株の使用を必要としない優性選択である。これらのスキームは、典型的には、宿主細胞の成長を停止するために薬物を使用する。新規遺伝子を有するそれらの細胞は、薬剤耐性を伝達するタンパク質を発現し、選択で生き残るであろう。かかるドミナント選択の例は、薬物ネオマイシン（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｐ．ａｎｄ Ｂｅｒｇ，Ｐ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．１：３２７（１９８２））、ミコフェノール酸、（Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｒ．Ｃ．ａｎｄ Ｂｅｒｇ，Ｐ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０９：１４２２（１９８０））、又はヒグロマイシン（Ｓｕｇｄｅｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４１０－４１３（１９８５））を使用する。３つの実施例は、真核細胞の制御下の細菌遺伝子を用いて、それぞれ適切な薬物Ｇ４１８又はネオマイシン（ジェネティシン）、ｘｇｐｔ（ミコフェノール酸）又はハイグロマイシン、への耐性を伝達する。他には、ネオマイシン類似体Ｇ４１８及びピュラマイシンが含まれる。

Ｃ．キット
いくつかの態様において、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６に示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのうちのいずれか、その断片、又はその類似体、並びに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，６３０，１２４号及び同第５，２１７，９５３号に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト／ＶＩＰアンタゴニスト）を含むキットが本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、キットは、抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体を更に含む。いくつかの実施形態では、キットは、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を更に含む。

ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＡＫＴ／ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）シグナル伝達は、細胞成長、運動性、生存、代謝、及び血管新生を調節する最も重要な細胞内経路のうちの１つである。ＰＩ３Ｋは、ｐ８５調節サブユニット、ｐ５５調節サブユニット、及びｐ１１０触媒サブユニットの３つのサブユニットからなる、形質膜関連脂質キナーゼの群である。ＰＩ３Ｋは、クラスＩ、ＩＩ、及びＩＩＩの３つのクラスに分けることができる。クラスＩ ＰＩ３Ｋは、クラスＩＡ及びクラスＩＢ ＰＩ３Ｋからなる。クラスＩＡ ＰＩ３Ｋは、ｐ５８調節サブユニット及びｐ１１０触媒サブユニットのヘテロ二量体である。クラスＩＡ ＰＩ３Ｋは、異なる遺伝子ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、及びＰＩＫ３ＣＤそれぞれから産生されるｐ１１０α、ｐ１１０β、及びｐ１１０δ触媒サブユニットを含む。ＰＩＫ３ＣＧによって産生されるサブユニットｐ１１０γは、クラスＩＢ ＰＩ３Ｋにおける触媒サブユニットを表す。ＰＩ３Ｋ阻害剤は、クラスＩ ＰＩ３Ｋの１つ以上のｐ１１０アイソフォームを阻害することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤は、Ｐａｎ－ＰＩ３Ｋ阻害剤、アイソフォーム特異的阻害剤、又は二重ＰＩ３Ｋ阻害剤である。本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤の例としては、フィメピノスタット、リゴサチブ、ブパルリシブ、ＣＨ５１３２７９９、ピララリシブ、ＺＳＴＫ４７４、ソノリシブ、ピクチリシブ、コパンリシブ、Ｂ５９１、ＴＧ－１００－１１５、ＲＩＤＲ－ＰＩ－１０３、ダクトリシブ、アピトリシブ、ゲダトリシブ、ＳＦ１１２６、オミパリシブ、サモトリシブ、ビミラリシブ、パクサリシブ、ボクスタリシブ、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＺＳＴＫ４７４、同様に、アイソフォーム特異的阻害剤、例えばＰＩ３Ｋα阻害剤（例えば、イナボリシブ、アルペリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＰＷＴ３３５９７、タセリシブ、及び／若しくはセラベリシブなど）、ＰＩ３Ｋβ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８１８６及び／若しくはＧＳＫ２６３６７７１など）、ＰＩ３Ｋδ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８８３５、ＡＺＤ８１８６、ネミラリシブ、セレタリシブ、アカリシブ、ＣＡＬ２６３、ＴＧ１００－１１５、デュベリシブ、イデラリシブ、テナリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、ＡＭＧ３１９、リンペルリシブ、パルサクリシブ、ウムブラリシブ、及び／若しくはレニオリシブなど）、並びに／又はＰＩ３Ｋγ阻害剤（例えば、エガネリシブ、テナリシブ、タセリシブ、及び／若しくはデュベリシブなど）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤（例えば、イデラリシブ）である。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６に示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのうちのいずれか、その断片、又はその類似体）を含む本明細書に開示されるキットは、免疫チェックポイント遮断剤を更に含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤である。

本明細書で使用される場合、「ＰＤ－１阻害剤」という用語は、ＰＤ－１に結合し、結合したＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を低減又は阻害する組成物を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１に特異的であり、結合したＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を低減又は阻害するモノクローナル抗体である。ＰＤ－１阻害剤の非限定的な例は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、及びセミプリマブである。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＫＥＹＴＲＵＤＡ又は生物学的等価物である。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、いずれも参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８９５２１３６号、米国特許第８３５４５０９号、又は米国特許第８９００５８７号に記載されるものである。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＤＰＴ０Ｏ３Ｔ４６Ｐの米国食品医薬品局の独自の成分識別子（Ｕｎｉｑｕｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ、ＵＮＩＩ）を有する。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、ＯＰＤＩＶＯ又は生物学的等価物である。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、３１ＹＯ６３ＬＢＳＮの米国食品医薬品局の独自の成分識別子（ＵＮＩＩ）を有する。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、いずれも参照によりその全体が組み込まれる、米国特許第７５９５０４８号、米国特許第８７３８４７４号、米国特許第９０７３９９４号、米国特許第９０６７９９９号、米国特許第８００８４４９号、又は米国特許第８７７９１０５号に記載されるものである。いくつかの実施形態では、セミプリマブは、ＬＩＢＴＡＹＯ又は生物学的等価物である。いくつかの実施形態では、セミプリマブは、米国食品医薬品局の６ＱＶＬ０５７ＩＮＴの独自の成分識別子（ＵＮＩＩ）を有する。いくつかの実施形態では、セミプリマブは、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第１０８４４１３７号に記載されるものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ－１阻害剤は、スパルタリズマブ、ＪＴＸ－４０１４、カムレリズマブ、シンチリマブ、ペムブロリズマブ、トリパリマブ、ＩＮＣＭＧＡ０００１２（ＭＧＡ０１２）、ＡＭＰ－２２４、又はＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ０６８０）である。

「ＰＤ－Ｌ１阻害剤」という用語は、ＰＤＬ－１に結合し、結合したＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との間の相互作用を低減又は阻害する組成物を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に特異的であり、結合したＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との間の相互作用を低減又は阻害するモノクローナル抗体である。ＰＤ－Ｌ１阻害剤の例としては、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブが挙げられる。いくつかの実施形態では、アテゾリズマブは、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ又は生物学的等価物である。いくつかの実施形態では、アテゾリズマブは、米国食品医薬品局の５２ＣＭＩ０ＷＣ３Ｙの独自の成分識別子（ＵＮＩＩ）を有する。いくつかの実施形態では、アテゾリズマブは、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８２１７１４９号に記載されるものである。いくつかの実施形態では、アベルマブはＢＡＶＥＮＣＩＯ又は生物学的等価物である。いくつかの実施形態では、アベルマブは、ＫＸＧ２ＰＪ５５１Ｉの米国食品医薬品局の独自の成分識別子（ＵＮＩＩ）を有する。いくつかの実施形態では、アベルマブは、参照によりその全体が組み込まれる米国特許出願公開第２０１４３２１９１７号に記載されるものである。いくつかの実施形態では、デュルバルマブは、ＩＭＦＩＮＺＩ又は生物学的等価物である。いくつかの実施形態では、デュルバルマブは、米国食品医薬品局の２８Ｘ２８Ｘ９ＯＫＶの独自の成分識別子（ＵＮＩＩ）を有する。いくつかの実施形態では、デュルバルマブは、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第８７７９１０８号に記載されるものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＣＫ－３０１、又はＢＭＳ－９８６１８９である。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、スパルタリズマブ、ＪＴＸ－４０１４、カムレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、ＩＮＣＭＧＡ０００１２（ＭＧＡ０１２）、ＡＭＰ－２２４、若しくはＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ０６８０））、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＣＫ－３０１、若しくはＢＭＳ－９８６１８９）、又はＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ又はトレメリムマブ）を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるのは、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６に示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのうちのいずれか、その断片、又はその類似体）、免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、若しくはイピリムマブ）、並びに／又はＰＩ３Ｋ阻害剤（フィメピノスタット、リゴサチブ、ブパルリシブ、ＣＨ５１３２７９９、ピララリシブ、ＺＳＴＫ４７４、ソノリシブ、ピクチリシブ、コパンリシブ、Ｂ５９１、ＴＧ－１００－１１５、ＲＩＤＲ－ＰＩ－１０３、ダクトリシブ、アピトリシブ、ゲダトリシブ、ＳＦ１１２６、オミパリシブ、サモトリシブ、ビミラリシブ、パクサリシブ、ボクスタリシブ、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＺＳＴＫ４７４、同様に、アイソフォーム特異的阻害剤、例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤（例えば、イナボリシブ、アルペリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＰＷＴ３３５９７、タセリシブ、及び／若しくはセラベリシブなど）、ＰＩ３Ｋβ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８１８６及び／若しくはＧＳＫ２６３６７７１など）、ＰＩ３Ｋδ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８８３５、ＡＺＤ８１８６、ネミラリシブ、セレタリシブ、アカリシブ、ＣＡＬ２６３、ＴＧ１００－１１５、デュベリシブ、イデラリシブ、テナリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、ＡＭＧ３１９、リンペルリシブ、パルサクリシブ、ウムブラリシブ、及び／若しくはレニオリシブなど）、並びに／又はＰＩ３Ｋγ阻害剤（例えば、エガネリシブ、テナリシブ、タセリシブ、及び／若しくはデュベリシブなど）を含むが、これらに限定されない）を含むキットである。

Ｄ．使用方法
特定の実施形態では、本開示は、Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞の活性化、Ｔ細胞における老化の拡大若しくは逆転、又はがんに対する自然発生反応性を有するＴ細胞における消耗の逆転が、対象の腫瘍に浸潤されていることが見出され得ることに関する。腫瘍を採取することができ、これらの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を腫瘍から単離し、次いで、本明細書に開示される方法を使用して増殖させることができる。

特定の実施形態では、本開示は、血管作動性腸ペプチド（ＶＩＰ）シグナル伝達を中断すること及び／又はホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ＰＩ３キナーゼ）阻害剤シグナル伝達を阻害することによって、Ｔ細胞における老化を逆転させるか、又はＴ細胞における消耗を逆転させる組成物及び方法、並びにがん及び慢性ウイルス感染症の管理における使用に関する。ある特定の実施形態では、本開示は、Ｔ細胞をインビトロで、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）、又はＶＩＰがＶＩＰ受容体と相互作用することを防止する、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニストを含むナノ粒子と混合すること、並びに／又はＰＩ３キナーゼ阻害剤を添加することによって、Ｔ細胞の老化を逆転させるか、又はＴ細胞の消耗を逆転させる方法を企図する。いくつかの実施形態では、この方法は、Ｔ細胞を免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）と混合することを更に含む。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるＰＩ３キナーゼ阻害剤、ナノ粒子、又はポリペプチド、ＶＩＰ分解酵素、免疫チェックポイント遮断剤、及びこれらの組み合わせと混合することによる老化Ｔ細胞の増殖を企図する。

ある特定の実施形態では、本開示は、ＰＩ３キナーゼ阻害剤（例えば、イデラリシブ）、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体）、又は本明細書に開示されるナノ粒子、ＶＩＰ分解酵素、及びそれらの組み合わせと組み合わせて、ＣＤ３及び／又はＣＤ２８を結合する抗体にＴ細胞をインビトロで曝露することによって単離Ｔ細胞を刺激するか、又は老化Ｔ細胞を増殖させる方法を企図する。ある特定の実施形態では、本開示は、任意選択で磁気ビーズなどの固体基質に連結された抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体又は結合剤を使用することを企図する。

ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるインビトロ細胞培養物を使用してＣＤ２８及び／又はＣＤ２７に対して陰性であるＴ細胞を増殖させる方法であって、複製前のレベルと比較してＣＤ２８及び／又はＣＤ２７の発現が増加した複製Ｔ細胞を提供する、方法を企図する。

ある特定の実施形態では、本開示は、Ｔ細胞を増殖させる前、増殖中、又は増殖後に、Ｔ細胞を、キメラ抗原受容体をコードする核酸配列を有するベクターと混合する、Ｔ細胞を増殖させる方法であって、キメラ抗原受容体が、細胞がキメラ抗原受容体を細胞の表面上に発現するような条件下で、Ｔ細胞抗原受容体ドメインのがん標的化配列、膜貫通ドメイン、Ｔ細胞共刺激分子ドメイン、及びシグナル伝達成分を含む、方法を企図する。

ある特定の実施形態では、本開示は、最小必須培地及びＴ細胞、及び本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）、又は本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのうちのいずれかを含むナノ粒子、及びホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ阻害剤、ＶＩＰ分解酵素、並びにそれらの組み合わせを含み、かつ、任意選択でビーズなどの固体基質上に固定化された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を任意選択で更に含む、インビトロ細胞培養組成物に関する。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、骨髄細胞又は血液細胞、末梢血から精製される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤は、Ｐａｎ－ＰＩ３Ｋ阻害剤、アイソフォーム特異的阻害剤、又は二重ＰＩ３Ｋ阻害剤である。本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤の例としては、フィメピノスタット、リゴサチブ、ブパルリシブ、ＣＨ５１３２７９９、ピララリシブ、ＺＳＴＫ４７４、ソノリシブ、ピクチリシブ、コパンリシブ、Ｂ５９１、ＴＧ－１００－１１５、ＲＩＤＲ－ＰＩ－１０３、ダクトリシブ、アピトリシブ、ゲダトリシブ、ＳＦ１１２６、オミパリシブ、サモトリシブ、ビミラリシブ、パクサリシブ、ボクスタリシブ、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＺＳＴＫ４７４、同様に、アイソフォーム特異的阻害剤、例えばＰＩ３Ｋα阻害剤（例えば、イナボリシブ、アルペリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＰＷＴ３３５９７、タセリシブ、及び／若しくはセラベリシブなど）、ＰＩ３Ｋβ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８１８６及び／若しくはＧＳＫ２６３６７７１など）、ＰＩ３Ｋδ阻害剤（例えば、ＡＺＤ８８３５、ＡＺＤ８１８６、ネミラリシブ、セレタリシブ、アカリシブ、ＣＡＬ２６３、ＴＧ１００－１１５、デュベリシブ、イデラリシブ、テナリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、ＡＭＧ３１９、リンペルリシブ、パルサクリシブ、ウムブラリシブ、及び／若しくはレニオリシブなど）、並びに／又はＰＩ３Ｋγ阻害剤（例えば、エガネリシブ、テナリシブ、タセリシブ、及び／若しくはデュベリシブなど）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ阻害剤は、イデラリシブ、ウォルトマンニン、デメトキシビリジン、ペリフォシン、ブパルリシブ、デュベリシブ、コパンリシブ、及びアルペリシブから選択される。ある特定の実施形態では、ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ阻害剤は、約０．００１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、又は約１０ｎＭ～約１０マイクロモル、又は約１０ｎＭ～約５００ｎＭ、又は約１０ｎＭ～約１マイクロモルの濃度で、培養物中に存在する。ある特定の実施形態では、ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ阻害剤は、約０．００１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、又は約１０ｎＭ～約１０マイクロモル、又は約１０ｎＭ～約５００ｎＭ、又は約１０ｎＭ～約１マイクロモルの濃度で、培養物中のイデラリシブから選択される。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む。

ある特定の実施形態では、培養物は、ＶＩＰを加水分解する酵素を含む。ある特定の実施形態では、培養物は、ペプチダーゼ、セリンペプチダーゼ、トリプターゼ、キマーゼ、又はヒトキマーゼ１（ＣＭＡ１）などのＶＩＰ分解酵素を含む。ある特定の実施形態では、培養物は、少なくとも約０．００１マイクログラム／ｍＬ、約０．０１マイクログラム／ｍＬ、約０．１マイクログラム／ｍＬ、又は約１マイクログラム／ｍＬのＶＩＰ分解酵素、例えば、肥満細胞キマーゼを有する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ３及び／又はＣＤ４及び／又はＣＤ８を発現し、ＣＤ２７及び／又はＣＤ２８に対して陰性である最小必須培地及び単離された細胞、並びにＰＩ３キナーゼ阻害剤、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体）、又は本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのうちのいずれかを含むナノ粒子、並びにそれらの組み合わせを含むＴ細胞培養物を企図する。細胞は、ビーズ、磁気ビーズ、又は蛍光結合剤の粒子などの固体支持体に結合する結合剤を使用して、陰性又は陽性選択によって単離されてもよい。

ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体は、ビーズ、磁気ビーズ、又は固体表面上に固定化される。ある特定の実施形態では、培養物中の全細胞の５．０％又は１０％又は１５％を超える細胞が、ＣＤ３及び／又はＣＤ４及び／又はＣＤ８を発現する。ある特定の実施形態では、全細胞の２０％、２５％又は５０％を超える細胞が、ＣＤ３及び／又はＣＤ４及び／又はＣＤ８を発現する。ある特定の実施形態では、培養物中のＴ細胞の１５％又は２０％又は３０％超が、ＣＤ２８及び／又はＣＤ２７に対して陰性である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞の２０％、２５％、又は５０％超が、ＣＤ２８及び／又はＣＤ２７に対して陰性である。

ある特定の実施形態では、精製されたＴ細胞は、血漿と赤血球とが分離するような条件下で血液を遠心分離することにより得られ、血漿と赤血球との間の白血球の混合物中に精製されたＴ細胞が提供される。ある特定の実施形態では、精製されたＴ細胞は、骨髄穿刺液又は骨髄生検によって得られる。

ある特定の実施形態では、精製されたＴ細胞は、ＣＤ３を結合する蛍光マーカーと細胞を混合し、蛍光活性化細胞選別によって細胞を精製することによって得られる。ある特定の実施形態では、精製されたＴ細胞は、ＣＤ３を結合する磁化マーカーと細胞を混合し、磁気選別によって細胞を精製することによって得られる。ある特定の実施形態では、精製されたＴ細胞は、ＣＤ３及び／又はＣＤ４及び／又はＣＤ８を結合する蛍光マーカーと細胞を混合し、蛍光活性化細胞選別によって細胞を精製することによって得られる。ある特定の実施形態では、精製されたＴ細胞は、ＣＤ３及び／又はＣＤ４及び／又はＣＤ８を結合する磁化マーカーと細胞を混合し、磁気選別によって細胞を精製することによって得られる。

ある特定の実施形態では、本開示は、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体を有し、表面にカップリングされたＶＩＰ分解酵素を有する、ビーズなどの固体基質を企図する。ある特定の実施形態では、ビーズが培地中に配置され、Ｔ細胞が、ビーズが細胞内にあるように、培地の上で増殖されることが企図される。

ある特定の実施形態では、ＶＩＰ分解酵素は、ヒトＣＭＡ１受託番号ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＩ０３９７５．１：ＭＬＬＫＬＫＥＫＡＳＬＴＬＡＶＧＴＬＰＦＰＳＱＦＮＦＶＰＰＧＲＭＣＲＶＡＧＷＧＲＴＧＶＬＫＰＧＳＤＴＬＱＥＶＫＬＲＬＭＤＰＱＡＣＳＨＦＲＤＦＤＨＮＬＱＬＣＶＧＮＰＲＫＴＫＳＡＦＫＧＤＳＧＧＰＬＬＣＡＧＶＡＱＧＩＶＳＹＧＲＳＤＡＫＰＰＡＶＦＴＲＩＳＨＹＲＰＷＩＮＱＩＬＱＡＮ（配列番号１９）を含む。

ある特定の実施形態では、ＶＩＰ分解酵素は、以下の配列を有するヒト組換えエンケファリナーゼ（中性エンドペプチダーゼ、ＥＣ ３．４．２４．１１）である：ＤＧＩＣＫＳＳＤＣＩＫＳＡＡＲＬＩＱＮＭＤＡＴＴＥＰＣＴＤＦＦＫＹＡＣＧＧＷＬＫＲＮＶＩＰＥＴＳＳＲＹＧＮＦＤＩＬＲＤＥＬＥＶＶＬＫＤＶＬＱＥＰＫＴＥＤＩＶＡＶＱＫＡＫＡＬＹＲＳＣＩＮＥＳＡＩＤＳＲＧＧＥＰＬＬＫＬＬＰＤＩＹＧＷＰＶＡＴＥＮＷＥＱＫＹＧＡＳＷＴＡＥＫＡＩＡＱＬＮＳＫＹＧＫＫＶＬＩＮＬＦＶＧＴＤＤＫＮＳＶＮＨＶＩＨＩＤＱＰＲＬＧＬＰＳＲＤＹＹＥＣＴＧＩＹＫＥＡＣＴＡＹＶＤＦＭＩＳＶＡＲＬＩＲＱＥＥＲＬＰＩＤＥＮＱＬＡＬＥＭＮＫＶＭＥＬＥＫＥＩＡＮＡＴＡＫＰＥＤＲＮＤＰＭＬＬＹＮＫＭＴＬＡＱＩＱＮＮＦＳＬＥＩＮＧＫＰＦＳＷＬＮＦＴＮＥＩＭＳＴＶＮＩＳＩＴＮＥＥＤＶＶＶＹＡＰＥＹＬＴＫＬＫＰＩＬＴＫＹＳＡＲＤＬＱＮＬＭＳＷＲＦＩＭＤＬＶＳＳＬＳＲＴＹＫＥＳＲＮＡＦＲＫＡＬＹＧＴＴＳＥＴＡＴＷＲＲＣＡＮＹＶＮＧＮＭＥＮＡＶＧＲＬＹＶＥＡＡＦＡＧＥＳＫＨＶＶＥＤＬＩＡＱＩＲＥＶＦＩＱＴＬＤＤＬＴＷＭＤＡＥＴＫＫＲＡＥＥＫＡＬＡＩＫＥＲＩＧＹＰＤＤＩＶＳＮＤＮＫＬＮＮＥＹＬＥＬＮＹＫＥＤＥＹＦＥＮＩＩＱＮＬＫＦＳＱＳＫＱＬＫＫＬＲＥＫＶＤＫＤＥＷＩＳＧＡＡＶＶＮＡＦＹＳＳＧＲＮＱＩＶＦＰＡＧＩＬＱＰＰＦＦＳＡＱＱＳＮＳＬＮＹＧＧＩＧＭＶＩＧＨＥＩＴＨＧＦＤＤＮＧＲＮＦＮＫＤＧＤＬＶＤＷＷＴＱＱＳＡＳＮＦＫＥＱＳＱＣＭＶＹＱＹＧＮＦＳＷＤＬＡＧＧＱＨＬＮＧＩＮＴＬＧＥＮＩＡＤＮＧＧＬＧＱＡＹＲＡＹＱＮＹＩＫＫＮＧＥＥＫＬＬＰＧＬＤＬＮＨＫＱＬＦＦＬＮＦＡＱＶＷＣＧＴＹＲＰＥＹＡＶＮＳＩＫＴＤＶＥＳＰＧＮＦＲＩＩＧＴＬＱＮＳＡＥＦＳＥＡＦＨＣＲＫＮＳＹＭＮＰＥＫＫＣＲＶＷ（配列番号２０）。

ある特定の実施形態では、本明細書に記載の細胞培養物及び方法は、ＩＬ－１２を更に含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－１２は、ＣＤ３及びＣＤ２８に対する抗体でインビトロで刺激されたＴ細胞増殖に対する本明細書に開示されるペプチド又はそのナノ粒子の効果を増強することが企図される。

ある特定の実施形態では、本開示は、細胞療法に対する免疫応答を増強する方法であって、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体）を、細胞と組み合わせて対象に投与することを含む、方法に関する。特定の実施形態では、対象は、白血病又はリンパ腫と診断されている。ある特定の実施形態では、細胞は、血液細胞、骨髄細胞、白血球、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、造血幹細胞、Ｇ－ＣＳＦ動員型又は非動員型血液単核細胞である。

ある特定の実施形態では、細胞は、自己Ｔ細胞、ＨＬＡマッチドドナー由来の同種異系細胞、又はＨＬＡミスマッチドドナー由来の同種異系細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、顆粒球コロニー刺激因子を含む／発現する血液単核細胞である。細胞療法は、非動員型血液単核細胞を用いて行ってもよい。

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）は、レシピエント又はドナーを含む細胞ベースの免疫療法の前、最中、又は後に対象に投与されてもよいことが企図される。免疫療法は、化学療法及び／又は放射線療法と組み合わせて実行してもよい。ペプチドは、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロン、インターロイキン－１２、インターロイキン－２、及びペグフィルグラスチムを含むがこれらに限定されない他の免疫刺激剤と組み合わせて使用され得ることが企図される。

ある特定の実施形態では、本開示は、対象における移植片対宿主疾患を治療又は予防する方法であって、有効量の、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）を、造血幹細胞移植後の対象、又は移植された同種異系組織若しくは細胞を受容するか、若しくは受容した対象に投与することを含む、方法に関する。ある特定の実施形態では、対象は、移植された同種異系造血幹細胞を受けた。ある特定の実施形態では、対象は、末梢血から分離された、移植された同種異系造血幹細胞を受けた。ある特定の実施形態では、対象は、移植された同種異系造血幹細胞を受ける前に、放射線治療に対する化学療法を受けた。

１．感染症を治療する方法
開示されたＶＩＰ－Ｒアンタゴニストは、感染症の治療に使用することができる。一態様では、本明細書に開示されるのは、微生物感染症を治療する、減少させる、阻害する、低減する、軽減する、及び／又は予防する方法であって、微生物感染症が、ウイルス感染症であり、ウイルス感染症が、単純ヘルペスウイルス－１、単純ヘルペスウイルス－２、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン－バールウイルス、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス－６、ヘルペスリンパ好性ウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ）、ロゼオロウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、痘瘡ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス（鳥類コロナウイルス（ＩＢＶ）、ブタコロナウイルスＨＫＵ１５（ＰｏｒＣｏＶ ＨＫＵ１５）、ブタ流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、又はＭＥＲＳ－ＣｏＶを含むが、これらに限定されない）、インフルエンザＡウイルス（Ｈ１Ｎ１を含むがこれらに限定されない）、インフルエンザＢウイルス、インフルエンザＣウイルス、麻疹ウイルス、ポリオーマウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）１６、１８、３１、３３、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９型、パルボウイルスＢ１９、伝染性軟属腫ウイルス、ＪＣウイルス（ＪＣＶ）、ＢＫウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、コキサッキーウイルス、チクングニアウイルス、デングウイルス、ムンプスウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、レオウイルス、黄熱病ウイルス、ヒトアデノウイルス型（ＨＡｄＶ－１～５５）、ノロウイルス、牛疫ウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、フレンド（Ｆｒｉｅｎｄ）脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）又は異種指向性ＭｕＬＶ関連ウイルス（ＸＭＲＶ）、エボラウイルス、マールブルグウイルス、ラッサ熱ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マリーバレー熱ウイルス、ウエストナイルウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルスＡ、ロタウイルスＢ、ロタウイルスＣ、ロタウイルスＤ、ロタウイルスＥ、シンドビスウイルス、サル免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１型、ハンタウイルス、風疹ウイルス、サル免疫不全ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス１型、及びヒト免疫不全ウイルス２型からなる群から選択されるウイルスによる感染症である。いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）を更に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、ウイルス感染症の治療のための抗ウイルス薬の製造における、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）の使用に関する。いくつかの実施形態では、抗ウイルス薬は、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を更に含む。いくつかの実施形態では、抗ウイルス薬は、免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）を更に含む。いくつかの実施形態では、対象は、慢性ウイルス感染症と診断されている。ある特定の実施形態では、対象は、血清学的モニタリングを受ける。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症がもはや検出されないような条件下で投与が行われる。いくつかの実施形態では、対象は、ＲＮＡウイルス、ＤＮＡウイルス、又はレトロウイルス感染症と診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、ウイルス、すなわち、二本鎖ＤＮＡウイルス、センス一本鎖ＤＮＡウイルス、二本鎖ＲＮＡウイルス、センス一本鎖ＲＮＡウイルス、アンチセンス一本鎖ＲＮＡウイルス、センス一本鎖ＲＮＡレトロウイルス、又は二本鎖ＤＮＡレトロウイルス、と診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルス、又はレンチウイルスを有すると診断される。いくつかの実施形態では、対象におけるウイルスの力価は、治療前と比較して、治療後に低下する。

ある特定の実施形態では、本開示は、ウイルス感染症を治療する、減少させる、阻害する、低減する、軽減する、及び／又は予防する方法であって、ウイルス感染症の危険性がある、その症状を示す、又はウイルス感染症と診断されている対象に、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び／又は配列番号１６など）のうちのいずれかを投与することを含む、方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）を更に投与することを含む。ある特定の実施形態では、対象は、免疫不全であるか、又は対象は、同種異系骨髄移植ドナー又はレシピエントである。典型的な実施形態では、対象は、臓器移植レシピエントであるか、血液透析を受けているか、がんと診断されているか、免疫抑制薬を受けているか、及び／又はＨＩＶ感染と診断されている。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのうちのいずれか、及び任意選択で１つ以上の抗ウイルス剤を投与することによって、感染症の危険性がある免疫不全の対象におけるウイルス感染症を予防することに関する。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む。

開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び／又は配列番号１６など）は、ウイルス感染症の治療に限定されないが、細菌感染症、真菌感染症、及び寄生虫感染症を含むが、これらに限定されない他の微生物感染症の治療にも有用である。したがって、また本明細書に開示されるのは、微生物感染症を治療する、減少させる、阻害する、低減する、軽減する、及び／又は予防する方法であって、微生物感染症が、細菌感染症であり、細菌感染症が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ株ＢＣＧ、ＢＣＧ亜系、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅ、他のＮｏｃａｒｄｉａ種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、他のＬｅｇｉｏｎｅｌｌａ種、Ａｃｅｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｉｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ、他のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ、他のＳｈｉｇｅｌｌａ種、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、他のＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａ種、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ、他のＢｒｕｃｅｌｌａ種、Ｃｏｗｄｒｉａ ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ａｖｉｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｔｒｅｍａｔｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｈｉｎｚｉｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｔｅｒｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ａｎｓｏｒｐｉｉ他のＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ種、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｕｅｄｏｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａｎ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｌ種、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、他のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、他のＨｅｍｏｐｈｉｌｕｓ種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、他のＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｌｉｔｉｃａ、及び他のＹｅｒｓｉｎｉａ種からなる群から選択される細菌による感染症である、方法である。

一態様では、本明細書に開示されるのは、微生物感染症を治療する、減少させる、阻害する、低減する、軽減する、及び／又は予防する方法であって、微生物感染症が、真菌感染症であり、真菌感染症が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍｉｔｉｄｉｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｎｉｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｉ、及びＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａからなる群から選択される真菌による感染症である、方法である。

また、本明細書に開示されるのは、微生物感染症を治療する、減少させる、阻害する、低減する、軽減する、及び／又は予防する方法であって、微生物感染症が、寄生虫感染症であり、寄生虫感染症が、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅ、他のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ、Ｒｈｉｎｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｅｅｂｅｒｉ、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｇｒｅｇｏｒｉｉ、Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍａｊｏｒ、他のＬｅｉｓｈｍａｎｉａ種、Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ ｌａｔｕｍ、Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ ｎａｎａ、Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ ｄｉｍｉｎｕｔａ、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｖｏｇｅｌｉ、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｏｌｉｇａｒｔｈｒｕｓ、Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ ｌａｔｕｍ、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ； Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ ｖｉｖｅｒｒｉｎｉ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｇｉｇａｎｔｉｃａ、Ｄｉｃｒｏｃｏｅｌｉｕｍ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｕｍ、Ｆａｓｃｉｏｌｏｐｓｉｓ ｂｕｓｋｉ、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ ｙｏｋｏｇａｗａｉ、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ ｖｉｖｅｒｒｉｎｉ、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ ｆｅｌｉｎｅｕｓ、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ種、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ、他のＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ種、Ｔｒｉｃｈｏｂｉｌｈａｒｚｉａ ｒｅｇｅｎｔｉ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｂｒｉｔｏｖｉ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｎｅｌｓｏｎｉ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｎａｔｉｖａ、ａｎｄ Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａからなる群から選択される寄生虫による感染症である、方法である。開示されたＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）が、抗菌剤を添加することなく、組織内で微生物の毒性を阻害し、微生物のクリアランスを達成する能力にもかかわらず、抗菌剤の添加（組成物自体に、又は別個の投与として）が望ましい場合があり得ることが、本明細書において理解され、企図される。したがって、本明細書に開示されるのは、微生物感染症、自己免疫疾患、自己炎症性疾患、又はがんを治療する、減少させる、阻害する、低減する、軽減する、及び／又は予防する方法であって、対象に抗菌剤を投与することを更に含む、方法である。抗菌剤は、感染微生物を直接攻撃するか、又は宿主系を微生物に不適応にする宿主状態を変化させる任意の抗生物質、抗体、小分子、及び機能的核酸（ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、アンチセンスオリゴヌクレオチド）を含むことができる。このような薬剤には、アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アマンタジン、アンプレナビル、アンプリゲン、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、バラビル、ベータ－Ｄ－Ｎ４－ヒドロキシシチジン（ＮＨＣ、ＥＩＤＤ－１９３１）、シドフォビル、コンビビル、ドルテグラビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、エコリエビル（Ｅｃｏｌｉｅｖｅｒ）、ファムシクロビル、フォミビルセン、ホスアンプレナビル、ホスカルネット、ホスホネット、ガンシクロビル、ヒドロキシ－クロロキン、イバシタビン、イムノビル、イドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、ラミブジン、ロピナビル、ロビリド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサビル、ニタゾキサニド、ノルビル、オセルタミビル、ペグインターフェロンアルファ－２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、ラルテグラビル、レムデシビル、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、ピラミジン、サキナビル、ソホスブビル、スタブジン、テラプレビル、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、ザナミビル、ジドブジン、クロファジミン；ダプソン；カプレオマイシン；シクロセリン；エタンブトール（Ｂｓ）；エチオナミド；イソニアジド；ピラジナミド；リファンピシン；リファブチン；リファペンチン；ストレプトマイシン；アルスフェナミン；クロラムフェニコール（Ｂｓ）；ホスホマイシン；フシジン酸；メトロニダゾール；ムピロシン；プラテンシマイシン；キヌプリスチン／ダルホプリスチン；チアンフェニコール；チゲサイクリン（Ｂｓ）；チニダゾール；トリメトプリム（Ｂｓ）；アミノグリコシド、例えば、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、メロペネム、ネオマイシン、ネチルミシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、スペクチノマイシン、ニタゾキサニド、メラルソプロールエフロルニチン、メトロニダゾール、チニダゾール、ミルテホシン、メベンダゾール、パモ酸ピランテル、チアベンダゾール、ジエチルカルバマジン、イベルメクチン、ニクロサミド、プラジクアンテル、アルベンダゾール、プラジクアンテル、リファンピン、アムホテリシンＢ、フマギリン、アンホテリシンＢ、カンジシジン、フィリピン、ハマイシン、ナタマイシン、ナイスタチン、リモシジン、ビフォナゾール、ブトコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ルリコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール、アルバコナゾール、エフィナコナゾール、エポキシコナゾール、フルコナゾール、イサブコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、プロピコナゾール、ラブコナゾール、テルコナゾール、ボリコナゾール、アバファンギン、アニデュラファンギン、カスポファンギン、ミカファンギン、オーロン、安息香酸、シクロピロクス、フルシトシン、グリセオフルビン、ハロプロジン、トルナフテート、ウンデシレン酸、クリスタルバイオレット、ペルーバルサム、オロトミド、ミルテホシンなど；アンサマイシン、例えば、ゲルダナマイシン、リファキシミン、ハービマイシンなど；カルバペネム、例えば、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、及びメロペネムなど；セファロスポリン、例えば、セファドロキシル、セファゾリン、セフラジン、セファピリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフォテタン、セファマンドール、セフメタゾール、セフォニシド、ロラカルベフ、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、モキサラクタム、セフトリアキソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル、及びセフトビプロールなど；糖ペプチド、例えば、テイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、及びオリタバンシンなど；リンコサミド（Ｂｓ）、例えば、クリンダマイシン及びリンコマイシンなど；リポペプチド、例えば、ダプトマイシンなど；マクロライド（Ｂｓ）、例えば、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、及びスピラマイシンなど；モノバクタム、例えばアズトレオナムなど；ニトロフラン、例えばフラゾリドン及びニトロフラントイン（Ｂｓ）など；オキサゾリジノン（Ｂｓ）、例えば、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド、及びトレゾリドなど；ペニシリン、例えば、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、及びチカルシリンなど；ポリペプチド、例えば、バシトラシン、コリスチン、及びポリミキシンＢなど；キノロン／フルオロキノロン、例えば、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン及びテマフロキサシンなど；スルホンアミド（Ｂｓ）、例えば、マフェニド、スルファセトアミド、スルファジアジン、銀スルファジアジン、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルアミド（原型（ａｒｃｈａｉｃ））、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリム－スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ－ＳＭＸ）、及びスルホンアミドクリソイジン（原型）など；テトラサイクリン（Ｂｓ）、例えば、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、及びテトラサイクリンなど；モノクローナル抗体、例えば、アクトクスマブ、アチドルクスマブ、ベルリマトクスマブ、ベズロクスマブ、コスフロビキシマブ、エドバコマブ、フェルビズマブ、フィリブマブ、フォラビルマブ、ラルカビキシマブ、モタビズマブ、ナビブマブ、パノバクマブ、パリビズマブ、ポルガビキシマブ、ＣＲ６２６１、ラフィビルマブ、パギバクシマブ、オオビルトキサキシマブ、イバリズマブ、レガビルマブ、Ｒｍａｂ、セビルマブ、リババズマブペゴル、テフィバズマブ、スブラトクスマブ、及びツビルマブなど；並びにチェックポイント阻害剤；ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、ＰＤＲ００１、セミプリマブ、及びイピリムマブが含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、対象は、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）と、第２の抗ウイルス剤と、を含む薬学的組成物を投与される。

ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体）及び免疫グロブリンを投与することによって、感染後のウイルス感染症を有する対象を治療することに関する。

ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）及びウイルスワクチンを投与することによって、又はウイルスワクチンの非存在下で、ウイルス感染症を治療又は予防することに関する。

ある特定の実施形態では、本開示は、ワクチンに対する免疫応答を増強することであって、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び／又は配列番号１６、その断片、又はその類似体など）を、それを必要とする対象に投与することを含む、増強することに関する。通常、ワクチンは、帯状疱疹ワクチン、天然痘ワクチン、ポリオワクチン、百日咳ワクチン、インフルエンザワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、髄膜炎菌ワクチン、サブタイプＨ１Ｎ１ワクチンを含むインフルエンザＡワクチン、インフルエンザＢワクチン、インフルエンザＣワクチン、ロタウイルスＡワクチン、ロタウイルスＢワクチン、ロタウイルスＣワクチン、ロタウイルスＤワクチン、ロタウイルスＥワクチン、ＳＡＲＳコロナウイルスワクチン、ヒトアデノウイルス型（ＨＡｄＶ－１～５５）ワクチン、ヒトパピローマピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチン、パルボウイルスＢ１９ワクチン、伝染性軟属腫ワクチン、ＪＣワクチン、ＢＫワクチン、メルケル細胞ポリオーマウイルスワクチン、コクサッキーＡワクチン、ノロウイルスワクチン、風疹ワクチン、リンパ球性脈絡髄膜炎ワクチン、黄熱ワクチン、麻疹ワクチン、ムンプスワクチン、呼吸器合胞体ワクチン、牛疫ワクチン、カリフォルニア脳炎ワクチン、ハンタウイルスワクチン、狂犬病ワクチン、エボラワクチン、マールブルグワクチン、単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ－１）ワクチン、単純ヘルペスウイルス－２（ＨＳＶ－２）ワクチン、水痘帯状疱疹ワクチン、エプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ）ワクチン、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ワクチン、ヘルペスリンパ好性ワクチン、ロゼオロウイルスワクチン、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスワクチン、Ａ型肝炎（ＨＡＶ）ワクチン、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）ワクチン、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）ワクチン、Ｄ型肝炎（ＨＤＶ）ワクチン、Ｅ型肝炎（ＨＥＶ）ワクチン、ヒト免疫不全性ウイルス（ＨＩＶ）ワクチン、ヒトＴリンパ好性ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ－１）ワクチン、フレンド脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）ワクチン、及び異種指向性ＭｕＬＶ関連ウイルス（ＸＭＲＶ）ワクチンからなるワクチンの群から選択される。特定の実施形態では、対象は、慢性ウイルス感染症と診断されている。

ある特定の実施形態では、ワクチンは、タンパク質又はペプチド、炭水化物、糖、多糖、又は核酸を含む。典型的には、ワクチンは、弱毒化複製能のあるウイルス（ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｖｉｒｕｓ）又は不活性化されたウイルスである。ある特定の実施形態では、ワクチンは、生きた又は死滅した若しくは不活性化された原核細胞又は真核細胞を含む。

ある特定の実施形態では、ヒトＴ細胞は、ウイルス抗原との共インキュベーションによってインビトロで活性化される。ある特定の実施形態では、ウイルス抗原は、マイクロベシクル上に提示される。ある特定の実施形態では、ウイルス抗原は、樹状細胞上に提示される。

核酸ワクチン、典型的にはＤＮＡプラスミド又はＲＮＡワクチンは、病原体から１つ以上の抗原をコード及び／又は産生するように遺伝子操作される。核酸を宿主細胞にトランスフェクト又は感染させ、そこで細胞の内部機構がタンパク質を発現する。これらのタンパク質は、外来物として認識されるため、宿主細胞によって処理され、それらの表面上に免疫応答が表示されると、トリガーされる。細胞傷害性Ｔリンパ球応答は、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、又はＢ７－２などの共刺激分子との共接種によっても増強することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）は、核酸ワクチン又は他の共刺激分子と組み合わせて投与されてもよい。

ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）を含むワクチン組成物、並びに本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストをワクチンと組み合わせて投与する方法に関する。ある特定の実施形態では、ワクチンは、病原体由来の抗原を含有し、弱体化又は死滅された形態の微生物又はその毒素から免疫系に提示される。抗原は、免疫系を刺激する。ワクチンは、予防的（例えば、任意の病原体による将来の感染症の影響を予防若しくは軽減するために）、又は感染症若しくは疾患の診断後に投与されることによって治療的であり得る。

一部のワクチンには、化学物質又は熱で破壊された、死滅しているが以前は毒性があった微生物が含まれる。インフルエンザワクチン、コレラワクチン、腺ペストワクチン、ポリオワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、及び狂犬病ワクチンは、本開示によって企図される死菌ワクチンの例である。

一部のワクチンには、弱毒化した生きた微生物が含まれる。典型的には、これらは、ある特定の毒性特性を無効にする条件下で培養された生ウイルス、又は密接に関連するが危険性の低い生物を使用して広範な免疫応答を生成する生ウイルスである。しかしながら、本質的に細菌性のものもある。

特定の実施形態では、細胞は、タンパク質サブユニットである。不活性化又は弱毒化された微生物を免疫系に導入するのではなく、その断片を使用して免疫応答を生成することができる。例としては、ウイルスの表面タンパク質のみから構成されるＢ型肝炎ウイルスに対するサブユニットワクチン、ウイルス主要カプシドタンパク質から構成されるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に対するウイルス様粒子（ＶＬＰ）ワクチン、並びにインフルエンザウイルスのヘマグルチニン及びノイラミニダーゼサブユニットが挙げられる。

ある特定の実施形態では、ワクチンは、多糖を含む。ある特定の細菌は、典型的には免疫原性である多糖外皮を有する。これらの多糖をタンパク質（例えば、毒素）に連結することによって、免疫系は、タンパク質抗原であるかのように多糖を認識するように導くことができる。

毒素ワクチンは、不活性化された毒性化合物から作製される。トキソイドベースのワクチンの例としては、ジフテリア及び破傷風トキソイドが挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）は、ＤＰＴと組み合わせて投与される。ＤＰＴ（ＤＴＰ及びＤＴｗＰも含む）は、ヒトにおける３つの感染症、すなわち、ジフテリア、百日咳、及び破傷風に対する組み合わせワクチンのクラスを指す。ワクチン成分には、ジフテリア、破傷風トキソイド、及び百日咳（ｗＰ）を引き起こす生物の死滅全細胞が含まれる。ＤＴａＰ（Ｔｄａｐ、ＤＴＰａ、及びＴＤａＰとしても知られる）は、百日咳成分が無細胞である同様の組み合わせワクチンを指す。また、百日咳成分を欠くＤＴ又はＴＤワクチンも企図される。

本開示によって企図される他の特定のワクチンには、炭疽ワクチン、例えば、Ｖ７７０－ＮＰ１－Ｒとして知られる無毒性の非カプセル化株、Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）、例えば、弱毒化した生ウシｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｂａｃｉｌｌｕｓの株、ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型ワクチン、例えば、Ｈｉｂ多糖－タンパク質コンジュゲートワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、例えば、不活性化Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ワクチン、例えば、Ｂ型肝炎表面抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチン、例えば、ＨＰＶ６、１１、１６及び１８型のＬ１タンパク質から組み立てられた非感染性ウイルス様粒子、髄膜炎菌ワクチン、例えば、ジフテリアトキソイドタンパク質に個別にコンジュゲートされたＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ血清群Ａ、Ｃ、Ｙ及びＷ－１３５株の莢膜多糖類抗原が含まれる。

ある特定の実施形態では、本開示は、活性型サイトメガロウイルス感染症を治療する方法であって、活性型サイトメガロウイルス感染症と診断され、徴候又は症状を示す対象に、有効量の、本明細書に開示される血管作動性腸ペプチドアンタゴニストを投与することを含み、血管作動性腸ペプチドアンタゴニストが、Ｃ末端アミドを有するペプチドを含み、任意選択で、炭化水素又はポリエチレングリコール基で修飾されている、方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）を更に投与することを含む。

ある特定の実施形態では、本開示は、活性型サイトメガロウイルス感染症を低減する方法であって、活性型サイトメガロウイルス感染症に罹患している対象に、有効量の、本明細書に開示される血管作動性腸ペプチドアンタゴニストを投与することを含み、血管作動性腸ペプチドアンタゴニストが、Ｃ末端アミドを有するペプチドを含み、任意選択で、炭化水素又はポリエチレングリコール基で修飾されている、方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）を更に投与することを含む。ある特定の実施形態では、対象におけるサイトメガロウイルスの力価は、前処置と比較して、血管作動性腸ペプチドアンタゴニストを投与した後に低下する。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む。

２．がんを治療する方法
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）は、リンパ球注入又は同種骨髄移植などのがんの治療に有効なある特定の細胞免疫療法において使用されることが企図される。ドナー免疫細胞、特にＮＫ細胞及びＴ細胞は、抗がん細胞傷害活性を有する。ペプチドのＶＩＰ拮抗作用は、インビボでの細胞免疫応答を増強する。ＶＩＰ拮抗作用は、抗原特異的Ｔ細胞及びＮＫ細胞の細胞傷害活性を増加させる。ＶＩＰ拮抗作用は、ＮＫ細胞又は抗原特異的Ｔ細胞の抗がん活性を増加させると予測される。細胞免疫療法と併用したＶＩＰ拮抗作用は、当該療法の有効性を増加させると予測される。ＶＩＰが存在しないと、同種骨髄移植のレシピエントにおけるドナーリンパ球の「オフターゲット」移植片対宿主病活性が増加しないと考えられる。したがって、細胞療法、例えば、ドナーリンパ球注入又は同種骨髄移植を受けているがんを有する対象にＶＩＰ－Ｒアンタゴニストを投与すると、当該療法の抗がん活性が増加するであろう。いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）を更に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント遮断剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む。

「がん」とは、細胞の増殖を特徴とする悪性腫瘍を有する様々な細胞疾患のうちのいずれかを指す。罹病細胞が実際に周囲の組織に侵入し、新しい身体部位に転移する必要があることは意図されていない。がんは、身体の任意の組織に関与する可能性があり、各身体領域において多くの異なる形態を有する。特定の実施形態の文脈において、「がんが減少しているかどうか」は、当業者に知られている様々な診断方法によって識別され得る。これには、腫瘍塊のサイズ若しくは数の減少の観察、又はがん細胞のアポトーシスの増加が観察された場合、例えば、化合物を含まない対照と比較して試料化合物のがん細胞のアポトーシスの５％超の増加が観察された場合が含まれるが、これらに限定されない。それはまた、前立腺がんに対するＰＳＡ、乳がんに対するＨＥＲ２、膵臓がんを有する患者におけるＶＩＰの血清レベルなどの関連するバイオマーカー又は遺伝子発現プロファイルの変化によって識別され得る。

開示される組成物を使用して、がんなどの未制御な細胞増殖が生じる任意の疾患を治療、阻害、減少、低減、軽減、及び／又は防止することができる。開示された組成物を使用して治療することができるがんの代表的であるが非限定的なリストは、以下のとおりである：結腸、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頚部、神経系（中枢及び末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部及び泌尿器に位置する悪性腫瘍、より具体的には、小児急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、成人（原発）肝細胞がん、成人（原発性）肝がん、成人急性リンパ性白血病、成人急性骨髄性白血病、成人ホジキン病、成人ホジキンリンパ腫、成人リンパ性白血病、成人非ホジキンリンパ腫、成人原発性肝がん、成人軟部組織肉腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＩＤＳ関連悪性腫瘍、肛門がん、星状細胞腫、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、乳がん、腎盂及び尿管がん、原発性中枢神経系リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫、子宮頸がん、小児（原発性）肝細胞がん、小児（原発性）肝がん、小児急性リンパ芽球性白血病、小児急性骨髄性白血病、小児脳幹グリオーマ、小児小脳星状細胞腫、小児脳星状細胞腫、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、小児ホジキン病、小児ホジキンリンパ腫、小児視神経視床下部神経膠腫、小児リンパ芽球性白血病、小児髄芽腫、小児非ホジキンリンパ腫、小児テント上原始神経外胚葉腫瘍及び松果体腫瘍、小児原発性肝がん、小児横紋筋肉腫、小児軟部組織肉腫、小児視神経視床下部神経膠腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、内分泌膵島細胞がん、子宮内膜がん、上衣腫、上皮がん、食道がん、ユーイング肉腫及び関連腫瘍、外分泌膵臓がん、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼がん、女性の乳がん、ゴーシェ病、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、胃腸腫瘍、胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、頭頚部がん、肝細胞がん、ホジキン病、ホジキンリンパ腫、高ガンマグロブリン血症、低咽頭がん、腸がん、眼内黒色腫、膵島細胞がん、島細胞膵がん（ｉｓｌｅｔ ｃｅｌｌ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、カポジ肉腫、腎臓がん、喉頭がん、口唇がん、肝臓がん、肺がん、リンパ増殖性疾患、マクログロブリン血症、男性の乳がん、悪性中皮腫、悪性胸腺腫、髄芽腫、黒色腫、中皮腫、メルケル細胞がん、原発不明転移性扁平上皮頚部がん（ｏｃｃｕｌｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ）、原発転移性扁平上皮頚部がん（ｐｒｉｍａｒｙ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ）、転移性扁平上皮頚部がん、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄性白血病、骨髄増殖性障害、副鼻腔がん及び鼻腔がん、上咽頭がん、神経芽腫、妊娠中の非ホジキンリンパ腫、非黒色腫皮膚がん、非小細胞肺がん、原発不明の転移性扁平上皮頚部がん、頬咽頭がん、悪性繊維性組織球腫、骨の悪性繊維性骨肉腫／組織球腫、上皮性卵巣がん、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓がん、パラプロテイン血症、紫斑病、副甲状腺がん、陰茎がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、中枢神経原発悪性リンパ腫、原発性肝がん、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、腎盂及び尿管がん、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、サルコイドーシス、肉腫、皮膚がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、扁平上皮頚部がん、胃がん、松果体及びテント上原始神経外胚葉腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、胸腺腫、甲状腺がん、腎盂及び尿管の移行細胞がん、腎盂尿管移行がん（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ ｒｅｎａｌ ｐｅｌｖｉｓ ａｎｄ ｕｒｅｔｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、栄養膜腫瘍、腎盂及び尿管の細胞がん、尿道がん、子宮がん、子宮肉腫、膣がん、視神経視床下部神経膠腫、外陰部がん、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、ウィルムス腫瘍及び任意の他の高増殖性疾患、並びに前述の器官の系に位置する新生物。

一態様では、がんの治療は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの投与に限定される必要はないが、がん又は転移を治療、阻害、低減、減少、軽減、及び／又は予防するための抗がん剤の更なる投与を含むことができることが理解される。がん及び／又は転移を治療する、阻害する、低減する、減少する、軽減する、及び／又は予防する方法において、開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのうちのいずれかと組み合わせて使用することができる抗がん治療剤（チェックポイント阻害剤、化学療法剤、免疫毒素、ペプチド、及び抗体など）は、当技術分野で知られている任意の抗がん治療薬を含むことができ、これには、アベマシクリブ、酢酸アビラテロン、Ａｂｉｔｒｅｘａｔｅ（メトトレキサート）、Ａｂｒａｘａｎｅ（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ－ＰＣ、ＡＣ、ＡＣ－Ｔ、Ａｄｃｅｔｒｉｓ（ブレンツキシマブベドチン）、ＡＤＥ、Ａｄｏ－トラスツズマブエムタンシン、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（塩酸ドキソルビシン）、ジマレイン酸アファチニブ、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（エベロリムス）、Ａｋｙｎｚｅｏ（ネツピタント・パロノセトロン塩酸塩（Ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ ａｎｄ Ｐａｌｏｎｏｓｅｔｒｏｎ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ））、Ａｌｄａｒａ（イミキモド）、アルデスロイキン、Ａｌｅｃｅｎｓａ（アレクチニブ）、アレクチニブ、アレムツズマブ、Ａｌｉｍｔａ（ペメトレキセド二ナトリウム）、Ａｌｉｑｏｐａ（コパンリシブ塩酸塩）、注射用Ａｌｋｅｒａｎ（メルファラン塩酸塩）、Ａｌｋｅｒａｎ錠（メルファラン）、Ａｌｏｘｉ（パロノセトロン塩酸塩）、Ａｌｕｎｂｒｉｇ（ブリガチニブ）、Ａｍｂｏｃｈｌｏｒｉｎ（クロラムブシル）、Ａｍｂｏｃｌｏｒｉｎクロラムブシル）、アミフォスチン、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、Ａｒｅｄｉａ（パミドロン酸二ナトリウム）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（アナストロゾール）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（エキセメスタン）、Ａｒｒａｎｏｎ（ネララビン）、三酸化ヒ素、Ａｒｚｅｒｒａ（オファツムマブ）、アスパラギナーゼＥｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ、アテゾリズマブ、Ａｖａｓｔｉｎ（ベバシズマブ）、アベルマブ、アキシチニブ、アザシチジン、Ｂａｖｅｎｃｉｏ（アベルマブ）、ＢＥＡＣＯＰＰ、Ｂｅｃｅｎｕｍ（カルムスチン）、Ｂｅｌｅｏｄａｑ（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、Ｂｅｓｐｏｎｓａ（イノツズマブ・オゾガマイシン）、ベバシズマブ、ベキサロテン、Ｂｅｘｘａｒ（トシツモマブ及びヨウ素Ｉ １３１トシツモマブ）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、Ｂｌｉｎｃｙｔｏ（ブリナツモマブ）、ボルテゾミブ、Ｂｏｓｕｌｉｆ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリガチニブ、ブメル、ブスルファン、Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（ブスルファン）、カバジタキセル、Ｃａｂｏｍｅｔｙｘ（カボザンチニブ－Ｓ－リンゴ酸）、カボザンチニブ－Ｓ－リンゴ酸、ＣＡＦ、Ｃａｍｐａｔｈ（アレムツズマブ）、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、Ｃａｒａｃ（フルオロウラシル－局所用）、カルボプラチン、カルボプラチン－タキソール、カルフィルゾミブ、Ｃａｒｍｕｂｒｉｓ（カルムスチン）、カルムスチン、カルムスチン・インプラント、Ｃａｓｏｄｅｘ（ビカルタミド）、ＣＥＭ、セリチニブ、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（ダウノルビシン塩酸塩）、Ｃｅｒｖａｒｉｘ（組換えＨＰＶ二価ワクチン）、セツキシマブ、ＣＥＶ、クロラムブシル、クロラムブシル－プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラドリビン、Ｃｌａｆｅｎ（シクロホスファミド）、クロファラビン、Ｃｌｏｆａｒｅｘ（クロファラビン）、Ｃｌｏｌａｒ（クロファラビン）、ＣＭＦ、コビメチニブ、Ｃｏｍｅｔｒｉｑ（カボザンチニブ－Ｓ－リンゴ酸）、コパンリシブ塩酸塩、ＣＯＰＤＡＣ、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ－ＡＢＶ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（ダクチノマイシン）、Ｃｏｔｅｌｌｉｃ（コビメチニブ）、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、Ｃｙｆｏｓ（イホスファミド）、Ｃｙｒａｍｚａ（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビンリポソーム、Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（シタラビン）、Ｃｙｔｏｘａｎ（シクロホスファミド）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、Ｄａｃｏｇｅｎ（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダラツムマブ、Ｄａｒｚａｌｅｘ（ダラツムマブ）、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシン塩酸塩及びシタラビンリポソーム、デシタビン、デフィブロチドナトリウム、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（デフィブロチドナトリウム）、デガレリクス、デニロイキン・ジフチトクス、デノスマブ、ＤｅｐｏＣｙｔ（シタラビンリポソーム）、デキサメタゾン、デクスラゾキサン塩酸塩、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、Ｄｏｘｉｌ（塩酸ドキソルビシンリポソーム））、塩酸ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシンリポソーム、Ｄｏｘ－ＳＬ（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、デュルバルマブ、デュベリシブ、Ｅｆｕｄｅｘ（フルオロウラシル－局所用）、Ｅｌｉｔｅｋ（ラスブリカーゼ）、Ｅｌｌｅｎｃｅ（エピルビシン塩酸塩）、エロツズマブ、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（オキサリプラチン）、エルトロンボパグ・オラミン、Ｅｍｅｎｄ（アプレピタント）、Ｅｍｐｌｉｃｉｔｉ（エロツズマブ）、メシル酸エナシデニブ、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）、メシル酸エリブリン、Ｅｒｉｖｅｄｇｅ（ビスモデギブ）、エルロチニブ酸塩、Ｅｒｗｉｎａｚｅ（アスパラギナーゼＥｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、Ｅｔｈｙｏｌ（アミフォスチン）、Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（リン酸エトポシド）、エトポシド、リン酸エトポシド、Ｅｖａｃｅｔ（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、エベロリムス、Ｅｖｉｓｔａ、（ラロキシフェン塩酸塩）、Ｅｖｏｍｅｌａ（メルファラン塩酸塩）、エキセメスタン、５－ＦＵ（フルオロウラシル注射剤）、５－ＦＵ（フルオロウラシル－局所用）、Ｆａｒｅｓｔｏｎ（トレミフェン）、Ｆａｒｙｄａｋ（パノビノスタット）、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（フルベストラント）、ＦＥＣ、Ｆｅｍａｒａ（レトロゾール）、フィルグラスチム、Ｆｌｕｄａｒａ（リン酸フルダラビン）、リン酸フルダラビン、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（フルオロウラシル－局所用）、フルオロウラシル注射剤、フルオロウラシル－局所用、フルタミド、Ｆｏｌｅｘ（メトトレキサート）、Ｆｏｌｅｘ ＰＦＳ（メトトレキサート）、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＩＲＩ－ベバシズマブ、ＦＯＬＦＩＲＩ－セツキシマブ、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ、Ｆｏｌｏｔｙｎ（プララトレキサート）、ＦＵ－ＬＶ、フルベストラント、Ｇａｒｄａｓｉｌ（組換えＨＰＶ四価ワクチン）、Ｇａｒｄａｓｉｌ ９（組換えＨＰＶ九価ワクチン）、Ｇａｚｙｖａ（オビヌツズマブ）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムシタビン－シスプラチン、ゲムシタビン－オキサリプラチン、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、Ｇｅｍｚａｒ（ゲムシタビン塩酸塩）、Ｇｉｌｏｔｒｉｆ（ジマレイン酸アファチニブ）、Ｇｌｅｅｖｅｃ（メシル酸イマチニブ）、Ｇｌｉａｄｅｌ（カルムスチン・インプラント）、Ｇｌｉａｄｅｌ ｗａｆｅｒ（カルムスチン・インプラント）、グルカルピダーゼ、酢酸ゴセレリン、Ｈａｌａｖｅｎ（メシル酸エリブリン）、Ｈｅｍａｎｇｅｏｌ（プロプラノロール塩酸塩）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、ＨＰＶ二価ワクチン、組換え、ＨＰＶ一価ワクチン、組換え、ＨＰＶ四価ワクチン、組換え、Ｈｙｃａｍｔｉｎ（トポテカン塩酸塩）、Ｈｙｄｒｅａ（ヒドロキシ尿素）、ヒドロキシ尿素、ハイパーＣＶＡＤ、Ｉｂｒａｎｃｅ（パルボシクリブ）、イブリツモマブ・チウセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、Ｉｃｌｕｓｉｇ（ポナチニブ塩酸塩）、Ｉｄａｍｙｃｉｎ（イダルビシン塩酸塩）、イダルビシン塩酸塩、イデラリシブ、Ｉｄｈｉｆａ（メシル酸エナシデニブ）、Ｉｆｅｘ（イホスファミド）、イホスファミド、Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｕｍ（イホスファミド）、ＩＬ－２（アルデスロイキン）、メシル酸イマチニブ、Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（イブルチニブ）、Ｉｍｆｉｎｚｉ（デュルバルマブ）、イミキモド、Ｉｍｌｙｇｉｃ（タリモジーン・ラハーパレプベック）、Ｉｎｌｙｔａ（アキシチニブ）、イノツズマブ・オゾガマイシン、インターフェロンアルファ－２ｂ、組換え、インターロイキン－２（アルデスロイキン）、イントロンＡ（組換えインターフェロンアルファ－２ｂ）、ヨウ素Ｉ １３１トシツモマブ及びトシツモマブ、イピリムマブ、Ｉｒｅｓｓａ（ゲフィチニブ）、イリノテカン塩酸塩、塩酸イリノテカンリポソーム、Ｉｓｔｏｄａｘ（ロミデプシン）、イクサベピロン、クエン酸イクサゾミブ、Ｉｘｅｍｐｒａ（イクサベピロン）、Ｊａｋａｆｉ（リン酸ルキソリチニブ）、ＪＥＢ、Ｊｅｖｔａｎａ（カバジタキセル）、Ｋａｄｃｙｌａ（Ａｄｏ－トラスツズマブエムタンシン）、Ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ（ラロキシフェン塩酸塩）、Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（パリフェルミン）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（ペムブロリズマブ）、Ｋｉｓｑａｌｉ（リボシクリブ）、Ｋｙｍｒｉａｈ（チサゲンレクルユーセル）、Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（カーフィルゾミブ）、酢酸ランレオチド、ジトシル酸ラパチニブ、Ｌａｒｔｒｕｖｏ（オララツマブ）、レナリドミド、メシル酸レンバチニブ、Ｌｅｎｖｉｍａ（メシル酸レンバチニブ）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、Ｌｅｕｋｅｒａｎ（クロラムブシル）、酢酸ロイプロリド、Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（クラドリビン）、Ｌｅｖｕｌａｎ（アミノレブリン酸）、Ｌｉｎｆｏｌｉｚｉｎ（クロラムブシル）、ＬｉｐｏＤｏｘ（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、ロムスチン、Ｌｏｎｓｕｒｆ（トリフルリジン及びチピラシル塩酸塩）、Ｌｕｐｒｏｎ（酢酸ロイプロリド）、Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ（酢酸ロイプロリド）、Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ－Ｐｅｄ（酢酸ロイプロリド）、Ｌｙｎｐａｒｚａ（オラパリブ）、Ｍａｒｑｉｂｏ（硫酸ビンクリスチンリポソーム）、Ｍａｔｕｌａｎｅ（プロカルバジン塩酸塩）、メクロレタミン塩酸塩、酢酸メゲストロール、Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（トラメチニブ）、メルファラン、メルファラン塩酸塩、メルカプトプリン、メスナ、Ｍｅｓｎｅｘ（メスナ）、Ｍｅｔｈａｚｏｌａｓｔｏｎｅ（テモゾロミド）、メトトレキサート、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ ＬＰＦ（メトトレキサート）、臭化メチルナルトレキソン、Ｍｅｘａｔｅ（メトトレキサート）、Ｍｅｘａｔｅ－ＡＱ（メトトレキサート）、ミドスタウリン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン塩酸塩、Ｍｉｔｏｚｙｔｒｅｘ（マイトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、Ｍｏｚｏｂｉｌ（プレリキサホル）、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（メクロレタミン塩酸塩）、Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（マイトマイシンＣ）、Ｍｙｌｅｒａｎ（ブスルファン）、Ｍｙｌｏｓａｒ（アザシチジン）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（ゲムツズマブ・オゾガマイシン）、Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（酒石酸ビノレルビン）、ネシツムマブ、ネララビン、Ｎｅｏｓａｒ（シクロホスファミド）、マレイン酸ネラチニブ、Ｎｅｒｌｙｎｘ（マレイン酸ネラチニブ）、ネツピタント・パロノセトロン塩酸塩、Ｎｅｕｌａｓｔａ（ペグフィルグラスチム）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（フィルグラスチム）、Ｎｅｘａｖａｒ（トシル酸ソラフェニブ）、Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（ニルタミド）、ニロチニブ、ニルタミド、Ｎｉｎｌａｒｏ（クエン酸イクサゾミブ）、ニラパリブトシル酸一水和物、ニボルマブ、Ｎｏｌｖａｄｅｘ（クエン酸タモキシフェン）、Ｎｐｌａｔｅ（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、Ｏｄｏｍｚｏ（ソニデギブ）、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オララツマブ、オマセタキシンメペスクシナート、Ｏｎｃａｓｐａｒ（ペガスパルガーゼ）、オンダンセトロン塩酸塩、Ｏｎｉｖｙｄｅ（塩酸イリノテカンリポソーム）、Ｏｎｔａｋ（デニロイキン・ジフチトクス）、Ｏｐｄｉｖｏ（ニボルマ








ブ）、ＯＰＰＡ、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パロノセトロン塩酸塩・ネツピタント、パミドロン酸二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、Ｐａｒａｐｌａｔ（カルボプラチン）、Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ＰＣＶ、ＰＥＢ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンアルファ－２ｂ、ＰＥＧ－イントロン（ペグインターフェロンアルファ－２ｂ）、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド二ナトリウム、Ｐｅｒｊｅｔａ（ペルツズマブ）、ペルツズマブ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（シスプラチン）、Ｐｌａｔｉｎｏｌ－ＡＱ（シスプラチン）、プレリキサホル、ポマリドマイド、Ｐｏｍａｌｙｓｔ（ポマリドマイド）、ポナチニブ塩酸塩、Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（ネシツムマブ）、プララトレキサート、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（アルデスロイキン）、Ｐｒｏｌｉａ（デノスマブ）、Ｐｒｏｍａｃｔａ（エルトロンボパグ・オラミン）、プロプラノロール塩酸塩、Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（シプリューセル－Ｔ）、Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（メルカプトプリン）、Ｐｕｒｉｘａｎ（メルカプトプリン）、二塩化ラジウム２２３、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ－ＣＨＯＰ、Ｒ－ＣＶＰ、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）九価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）四価ワクチン、組換えインターフェロンアルファ－２ｂ、レゴラフェニブ、Ｒｅｌｉｓｔｏｒ（臭化メチルナルトレキソン）、Ｒ－ＥＰＯＣＨ、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（レナリドミド）、Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（メトトレキサート）、リボシクリブ、Ｒ－ＩＣＥ、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｒｉｔｕｘａｎ Ｈｙｃｅｌａ（リツキシマブ及びヒアルロニダーゼヒト）、リツキシマブ、リツキシマブ及び、ヒアルロニダーゼヒト、、ロラピタント塩酸塩、ロミデプシン、ロミプロスチム、Ｒｕｂｉｄｏｍｙｃｉｎ（ダウノルビシン塩酸塩）、Ｒｕｂｒａｃａ（カンシル酸ルカパリブ）、カンシル酸ルカパリブ、リン酸ルキソリチニブ、Ｒｙｄａｐｔ（ミドスタウリン）、Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ胸腔内エアロゾル（タルク）、シルツキシマブ、シプリューセル－Ｔ、Ｓｏｍａｔｕｌｉｎｅ Ｄｅｐｏｔ（酢酸ランレオチド）、ソニデギブ、トシル酸ソラフェニブ、Ｓｐｒｙｃｅｌ（ダサチニブ）、ＳＴＡＮＦＯＲＤ Ｖ、滅菌タルク粉末（タルク）、Ｓｔｅｒｉｔａｌｃ（タルク）、Ｓｔｉｖａｒｇａ（レゴラフェニブ）、リンゴ酸スニチニブ、Ｓｕｔｅｎｔ（リンゴ酸スニチニブ）、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（ペグインターフェロンアルファ－２ｂ）、Ｓｙｌｖａｎｔ（シルツキシマブ）、Ｓｙｎｒｉｂｏ（オマセタキシンメペスクシナート）、Ｔａｂｌｏｉｄ（チオグアニン）、ＴＡＣ、Ｔａｆｉｎｌａｒ（ダブラフェニブ）、Ｔａｇｒｉｓｓｏ（オシメルチニブ）、タルク、タリモジーン・ラハーパレプベック、クエン酸タモキシフェン、Ｔａｒａｂｉｎｅ ＰＦＳ（シタラビン）、Ｔａｒｃｅｖａ（エルロチニブ塩酸塩）、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（ベキサロテン）、Ｔａｓｉｇｎａ（ニロチニブ）、Ｔａｘｏｌ（パクリタキセル）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（ドセタキセル）、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ、（アテゾリズマブ）、Ｔｅｍｏｄａｒ（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（サリドマイド）、チオグアニン、チオテパ、チサゲンレクルユーセル、Ｔｏｌａｋ（フルオロウラシル－局所用）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、Ｔｏｒｉｓｅｌ（テムシロリムス）、トシツモマブ及びヨウ素Ｉ １３１トシツモマブ、Ｔｏｔｅｃｔ（デクスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラベクテジン、トラメチニブ、トラスツズマブ、Ｔｒｅａｎｄａ（ベンダムスチン塩酸塩））、トリフルリジン及びチピラシル塩酸塩、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（三酸化ヒ素）、Ｔｙｋｅｒｂ（ジトシル酸ラパチニブ）、Ｕｎｉｔｕｘｉｎ（ジヌツキシマブ）、三酢酸ウリジン、ＶＡＣ、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、Ｖａｒｕｂｉ（ロラピタント塩酸塩）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（パニツムマブ）、ＶｅＩＰ、Ｖｅｌｂａｎ（硫酸ビンブラスチン）、Ｖｅｌｃａｄｅ（ボルテゾミブ）、Ｖｅｌｓａｒ（硫酸ビンブラスチン）、ベムラフェニブ、Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（ベネトクラクス）、ベネトクラクス、Ｖｅｒｚｅｎｉｏ（アベマシクリブ）、Ｖｉａｄｕｒ（酢酸ロイプロリド）、Ｖｉｄａｚａ（アザシチジン）、硫酸ビンブラスチン、Ｖｉｎｃａｓａｒ ＰＦＳ（硫酸ビンクリスチン）、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンクリスチンリポソーム、酒石酸ビノレルビン、ＶＩＰ、ビスモデギブ、Ｖｉｓｔｏｇａｒｄ（三酢酸ウリジン）、Ｖｏｒａｘａｚｅ（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（パゾパニブ塩酸塩）、Ｖｙｘｅｏｓ（ダウノルビシン塩酸塩及びシタラビンリポソーム）、Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（ロイコボリンカルシウム）、Ｘａｌｋｏｒｉ（クリゾチニブ）、Ｘｅｌｏｄａ（カペシタビン）、ＸＥＬＩＲＩ、ＸＥＬＯＸ、Ｘｇｅｖａ（デノスマブ）、Ｘｏｆｉｇｏ（二塩化ラジウム２２３）、Ｘｔａｎｄｉ（エンザルタミド）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｙｏｎｄｅｌｉｓ（トラベクテジン）、Ｚａｌｔｒａｐ（Ｚｉｖ－アフリベルセプト）、Ｚａｒｘｉｏ（フィルグラスチム）、Ｚｅｊｕｌａ（トシル酸ニラパリブ一水和物）、Ｚｅｌｂｏｒａｆ（ベムラフェニブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（イブリツモマブ・チウキセタン）、Ｚｉｎｅｃａｒｄ（デクスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ－アフリベルセプト、Ｚｏｆｒａｎ（オンダンセトロン塩酸塩）、Ｚｏｌａｄｅｘ（酢酸ゴセレリン）、ゾレドロン酸、Ｚｏｌｉｎｚａ（ボリノスタット）、Ｚｏｍｅｔａ（ゾレドロン酸）、Ｚｙｄｅｌｉｇ（イデラリブ）、Ｚｙｋａｄｉａ（セリチニブ）、並びに／又はＺｙｔｉｇａ（酢酸アビラテロン）が含まれるが、これらに限定されない。抗がん剤及び免疫調節剤はまた、チェックポイント阻害剤を含むことができる。チェックポイント阻害剤には、ＰＤ－１（ＪＴＸ－４０１４、セミプリマブ、カムレリズマブ、ドスタルリマブ、トリパリマブ、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、シンチリマブ、ニボルマブ（ＢＭＳ－９３６５５８又はＭＤＸ１１０６）、ＣＴ－０１１、ペムブロリズマブ（ＭＫ－３４７５））、ＰＤ－Ｌ１（アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＣＫ－３０１、ＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＰＤ－Ｌ２（ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７）、ＣＴＬＡ－４（イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０）及びトレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６））、ＩＤＯ、Ｂ７－Ｈ３（ＭＧＡ２７１）、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ－３（レラチマブ、ＢＭＳ－９８６０１６）を遮断する抗体が含まれるが、これらに限定されない。

ある特定の実施形態では、投与方法は、リンパ枯渇した環境を有する対象にある。ある特定の実施形態では、リンパ枯渇剤は、シクロホスファミド及びフルダラビンである。

本明細書で使用される場合、「イデラリシブ」という用語は、化合物（Ｓ）－２－（１－（９Ｈ－プリン－６－イルアミノ）プロピル）－５－フルオロ－３－フェニルキナゾリン－４（３Ｈ）－オン又はその代替塩を指す。

本開示のＶＩＰ－Ｒアンタゴニストは、増殖した、修飾した、又は培養した腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の投与、増殖した、修飾した、若しくは培養した骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）の投与、増殖した、修飾した、若しくは培養した腫瘍浸潤ナチュラルキラー細胞（ＴＩＮＫ）の投与、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の投与、ＴＣＲ修飾Ｔ細胞の投与、及び／又はＣＡＲ ＮＫ細胞の投与を含むがこれらに限定されない、放射線療法及び／又は養生細胞移植療法と更に組み合わせることができる。ある特定の実施形態では、本開示は、がんと診断された対象を治療する方法であって、細胞を、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのうちのいずれかと組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。ある特定の実施形態では、対象は、白血病と診断されている。ある特定の実施形態では、対象は、リンパ腫と診断されている。ある特定の実施形態では、細胞は、血液単核細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、白血球である。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、造血幹細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｇ－ＣＳＦ動員型血液単核細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、ＨＬＡマッチド又はミスマッチド同種異系細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、同系細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、自己細胞である。ある特定の実施形態では、ペプチドは、Ｃ末端アミドを有する、及び／又は任意選択で炭化水素若しくはポリエチレングリコール基で修飾されている。一態様では、本明細書に開示されるのは、白血病を治療する、阻害する、低減する、減少させる、軽減する、及び／又は予防する方法であって、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体）のうちのいずれかを、造血幹細胞移植の移植と組み合わせて対象に投与することを含む、方法に関する。ある特定の実施形態では、本開示は、インビトロでリンパ球を増殖させ、増殖した細胞を提供することと、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのうちのいずれかを用いて増殖した細胞を曝露することと、を含む方法に関する。

ある特定の実施形態では、本開示は、幹細胞移植を実行することによりがんを治療する方法であって、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体）を、対象（自己）又はドナー由来の多能性造血幹細胞の移植と組み合わせて対象に投与することを含む、方法に関する。幹細胞は、臍帯血又は胎盤由来幹細胞などの末梢血から、又は骨髄から採取されてもよい。移植された幹細胞拒絶反応又は重度の移植片対宿主病の危険性を制限するために、ドナーは、典型的には、レシピエントと実質的に同じヒト白血球抗原（ＨＬＡ）を有するであろう。しかしながら、ドナーは、ある特定の抗原についてミスマッチを有し得る。いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）を更に投与することを含む。

ある特定の実施形態では、本開示は、血液悪性腫瘍（例えば、白血病又はリンパ腫などの血液又は骨髄のがん）を治療するために、造血前駆細胞移植後にリンパ球注入を提供する方法に関する。移植レシピエントは、典型的には、元の同種異系幹細胞（造血前駆細胞）ドナーからの白血球置換処置において得られたリンパ球を注入される。

ある特定の実施形態では、本開示は、血液からのリンパ球の抽出、並びに腫瘍抗原に対するインビトロでの増殖、並びに任意選択で、適切な刺激サイトカイン及び／又は本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）を用いて細胞を曝露することに関する。

ある特定の実施形態では、本開示は、局所免疫療法を増強する方法であって、Ｔ細胞の活性化を引き起こすインターフェロン産生薬物を含むイミキモドなどの免疫増強クリームの提供と組み合わせて、本明細書に開示される任意のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体など）を投与することを含む、方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）を更に投与することを含む。

ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるペプチドは、養子細胞療法と併用され得ることが企図される。例えば、がんに対して天然に生じる反応性を有するＴ細胞が、対象の腫瘍に浸潤していることが見出され得る。腫瘍を採取することができ、これらの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、抗ＣＤ３及び同種反応性フィーダーを使用してインビトロで増殖させることができるか、又はより効果的にすることができる。次いで、これらのＴ細胞を、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの投与とともに対象に戻すことができる。再注入の前に、レシピエントのリンパ枯渇は、典型的には、調節Ｔ細胞並びに移植された細胞と競合する正常な内因性リンパ球を除去するために行われる。また、リンパ球の養子細胞移入は、がん抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするベクターで形質導入され得ることも企図される。いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤）を更に投与することを含む。

ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＴ細胞と、ＶＩＰシグナル伝達の小分子アンタゴニストを含有するナノ粒子との共インキュベーションによるＴ細胞活性化及びエクスビボ増殖を増強する方法に関する。ある特定の実施形態では、ヒトＴ細胞は、プレートに結合した抗ＣＤ３抗体で活性化される。ある特定の実施形態では、ヒトＴ細胞は、混合リンパ球反応において活性化される。ある特定の実施形態では、ヒトＴ細胞は、腫瘍関連抗原との共インキュベーションによってインビトロで活性化される。ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、腫瘍微小胞上に提示される。ある特定の実施形態では、活性化ヒトＴ細胞は、がんを有するヒト患者に注入される。

ある特定の実施形態では、活性化ヒトＴ細胞は、がんを有するヒト患者に注入される。ある特定の実施形態では、がんを有するヒト患者は、白血病を有する。ある特定の実施形態では、がんを有するヒト患者は、リンパ腫を有する。ある特定の実施形態では、がんを有するヒト患者は、多発性骨髄腫を有する。ある特定の実施形態では、がんを有するヒト患者は、上皮がんを有する。ある特定の実施形態では、ヒト患者は、肺がんを有する。ある特定の実施形態では、ヒト患者は、乳がんを有する。ある特定の実施形態では、ヒト患者は、結腸がんを有する。ある特定の実施形態では、ヒト患者は、前立腺がんを有する。ある特定の実施形態では、ヒト患者は、悪性黒色腫を有する。ある特定の実施形態では、ヒト患者は、脳がんを有する。

ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（例えば、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び／若しくは配列番号１６、その断片、又はその類似体）のうちのいずれか、又は本明細書に開示されるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストを発現するナノ粒子の注入によって抗がん免疫応答を増強する方法に関する。ある特定の実施形態では、活性化Ｔ細胞は、慢性ＣＭＶ感染症を有する患者に注入される。ある特定の実施形態では、活性化Ｔ細胞は、慢性ＥＢＶ感染症を有する患者に注入される。ある特定の実施形態では、活性化Ｔ細胞は、慢性ＢＫウイルス感染症を有する患者に注入される。ある特定の実施形態では、活性化Ｔ細胞は、慢性アデノウイルス感染症を有する患者に注入される。

ＶＩ．実施例
以下の実施例は、当業者に、本明細書で特許請求される化合物、組成物、物品、デバイス、及び／又は方法の作製方法及び評価方法の完全な開示及び説明を提供するために示されるものであり、純粋に例示的であることを意図するものであって、本開示を限定するものではない。数値（例えば、量、温度など）に関して精度を保証するように努力がなされてはいるが、いくらかの誤差及び偏差が考慮されるべきである。特に指定しない限り、部（ｐａｒｔｓ）は重量部であり、温度は℃、又は周囲温度であり、圧力は、大気圧又はその付近である。

１．実施例１
血管作動性腸ポリペプチドの腫瘍特異的発現が、腫瘍媒介性免疫逃避のメカニズムを表すかどうかを評価した。膵臓外分泌がんに最も高い発現が見られ、黒色腫に最も低い発現が見られる、腫瘍にわたるＶＩＰ発現のスペクトルがある。概して、腫瘍によるＶＩＰ発現のレベルは、ＰＤＬ１などの他の共阻害経路分子の発現に反比例する。ＶＩＰを発現及び分泌するいくつかの腫瘍は、ＶＩＰコード配列に変異を有し得、その結果、がんによって分泌されるペプチド分子は、腫瘍微小環境における薬物動態又は薬力学を改善した。がん細胞分泌ＶＩＰに対する薬物動態学的利点は、変異が変異型ＶＩＰをプロテアーゼに対する感受性を低下させ、その半減期を改善することであり得る。抗がん免疫をより強力に阻害することにおけるがんに対する薬力学的利点は、受容体への結合親和性を増強し、したがって、ＶＡＰＣ１及び／又はＶＰＡＣ２を発現するＴ細胞上の阻害シグナル伝達を増強するＶＩＰにおける変異の結果であり得る。

腫瘍によって産生される変異したＶＩＰが、腫瘍微小環境における抗がんＴ細胞のより持続的な抑制をもたらすかどうかを決定するために実験を実行した。堆積した腫瘍配列からキュレーションされた特定の遺伝子の変異を分析すると、ＶＩＰのコード配列に変異を有する複数のがんが存在する。特に、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓに列挙されたＶＩＰ遺伝子クラスター内に１４０個のミスセンス変異及び１７個の切断変異が存在した。２８アミノ酸ＶＩＰペプチドのコード配列内で、乳がん、前立腺腺がん、食道腺がん、皮膚黒色腫、小細胞肺がん、胃腺がん、子宮内膜がん、皮膚黒色腫、食道腺がん、結腸直腸腺がん、子宮がん肉腫、肝細胞腺腫、肺腺がん、胃腺がんに存在するＶＩＰコード配列における変異が同定された。受容体に結合するＶＩＰのアルファらせんを含むＣ末端アミノ酸に存在した８つの特異的変異。

ヒトＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ）への予測結合親和性についてインシリコで試験したＶＩＰ関連ペプチド。ドッキングスコアは、ペプチド結合に関連する予測される自由エネルギー変化を示す。より大きな陰性スコアは、より高い結合親和性に関連すると予測されることに留意されたい。ＶＰＡＣ１への結合親和性について３００個のペプチドの初期スクリーニング及びＶＰＡＣ２への結合親和性について１００個のペプチドのサブセットをスクリーニングすることに基づいて、ペプチドの選択された群を合成し、インビトロでルシフェラーゼ＋マウスＴ細胞の増殖を刺激する能力について試験した。最大発光をもたらしたペプチドの最低濃度を示した。増殖データは、プレート結合抗ＣＤ３抗体で９６時間刺激した９６ウェル組織培養プレート中の１×１０Ｅ５ Ｔ細胞／ウェルを含有する４重ウェルからの発光の相対レベルを表す。次いで、選択されたペプチドの確認的インビボ試験を、以前に１×１０Ｅ６のＣ１４９８急性骨髄性白血病細胞を注射したＣ５７Ｂｌ／６マウスにおける自己抗白血病応答を誘導するそれらの能力に基づいて実行した。白血病細胞を０日目に注射し、１０ｕｇのペプチドを６～１２日目に毎日ｓ．ｃ．注射した。ＶＰＡＣ１及び／又はＶＰＡＣ２に対する予測結合親和性は、マウスにおけるマウスＴ細胞増殖及び抗白血病活性を刺激する活性の増強と関連付けられた。ＶＩＰペプチドと試験ペプチドとの間の配列差を赤色のフォントで示す（表３）。

開示したＶＩＰ－Ｒアンタゴニストが急性骨髄性白血病生存に生存をもたらす能力を試験するために、Ｂ６（ＣＤ４５．２、Ｈ－２Ｋ^ｂ）マウスに、Ｃ１４９８を１×１０^６／マウスで尾静脈を通して投与した。ＶＩＰ新規ペプチドを、白血病投与後６日目から、マウス一匹当たり毎日１０マイクログラムで、合計７回皮下注射した。マウスの生存を毎日観察した。図１及び２に示されるように、それぞれの場合において、生存は、陰性対照及びＶＩＰ（配列番号１）と比較して増加した。

次に、各ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストによる競合結合ＶＰＡＣの親和性及び効力との生存の増加の相関を調べた。図３に示すように、ヒトＶＰＡＣ１（パネルＡ）とＶＰＡＣ２（パネルＢ）の両方に対する競合結合の親和性と効力と、ＶＰＡＣ１とＶＰＡＣ２に対する結合親和性の合計（パネルＣ）との間に直接的な相関関係がある。

図４は、Ｃ１４９８を１×１０^６／マウスで尾静脈を通して投与した後、白血病マウスの血液中の白血病細胞のレベルを最大２０日間低下させたＶＩＰ由来の新規ペプチドによる処置を示す。ＶＩＰ新規ペプチドを、白血病投与後６日目から、マウス一匹当たり毎日１０マイクログラムで、合計７回皮下注射した。

白血病の再チャレンジモデルでは、ＶＩＰ由来の新規ペプチドで処置した後に白血病の完全なクリアランスを達成し、検出可能な白血病なしで生存を延長したＣ１４９８白血病細胞を以前に接種したマウスを、尾静脈を通してＬｕｃ－１４９８（１×１０^６／マウス）で再チャレンジした。白血病再チャレンジの１６日後、マウスを毎週発光イメージングした（図５）。更に、図６に示すように、以前にＶＩＰ由来の新規ペプチドで処置したマウスは、急性骨髄性白血病で再チャレンジすると、生存が延長され、ＶＩＰ由来の新規ペプチドによる以前の処置により、マウスが新たに注射した白血病細胞を拒絶することを可能にする免疫記憶が発達したことを示す。

更に、単剤として、及び抗ＰＤ１ ＭｏＡｂと併用して、膵臓がんの２つのモデルにおいて、ＡＮＴ３０８ペプチドを試験したところ、ＡＮＴ３０８が、抗ＰＤ１療法と併用されると、腫瘍成長の制御において単剤活性を有し、かつ相乗効果を有することを見出した。図７に示すように、ＡＮＴ３０８処置は、皮下移植されたＫＰＣ腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスの腫瘍体積を減少させた。この腫瘍体積の減少は、抗ＰＤ１処置と組み合わせてより顕著であった。また、Ｉｓｏ ＩｇＧ又は抗ＰＤ１抗体と併用したＡＮＴ３０８が、体積（図８Ａ）及び測定体積（図８Ｂ）の変化パーセントとして測定したときに、腫瘍体積に及ぼした効果も調べた。興味深いことに、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと抗ＰＤ１との併用による治療は、マウスにおける腫瘍体積の測定値の減少、及び皮下膵臓腫瘍の成長の制御に対する相乗効果を有した（図８Ｃ）。この効果をより完全に調査すると、抗ＰＤ１及びＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの両方による併用治療は、スクランブルペプチド及びイソ型マッチドＩｇＧで処置した対照マウスと比較して腫瘍成長を遅らせることができることが観察され、併用により、腫瘍成長率が統計的に有意に改善したことが示された（図８Ｄ）。様々な処置群のそれぞれの生存率及び退縮を更に調べたところ、ＡＮＴ３０８及び抗ＰＤ１で処置したマウスの２０％は腫瘍がなく、更に５０％の腫瘍が退縮を示すことが観察された。比較して、抗ＰＤ１処置マウスの１０％のみが腫瘍を有しておらず、２０％が腫瘍退縮を示し、残りの３０％が進行腫瘍を有し、４０％のマウスが大腫瘍の成長のために安楽死した。ＡＮＴ３０８単独で処置されたマウスにおける腫瘍の成長は、スクランブルペプチド及びアイソタイプマッチドＩｇＧを受けた対照マウスにおける腫瘍の成長と統計的に差はなかった（図９）。

２．実施例２：ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト（Ａｎｔ０８、Ａｎｔ３０８、Ａｎｔ１９５）によるヒトＴ細胞の処置
この研究は、新規のＶＩＰ－Ｒアンタゴニストペプチドをスクリーニングするために、健康なドナーから単離されたヒトＴ細胞を使用するエクスビボシステムを採用した。ヒトＴ細胞を、ペプチドの存在下又は非存在下で活性化させた状態で６又は２４時間にわたって培養し、フローサイトメトリーによってＣＤ６９表面発現パーセントについて評価して、Ｔ細胞活性化の状態を測定した。ペプチドの活性は、非ペプチド対照と比較したＣＤ６９発現のパーセント増加によって決定した。ＶＩＰスクランブル１（ＶＳ１）をペプチド対照として使用した。Ａｎｔ３０８とＡｎｔ１９５という２つの新しいペプチドの活性を、Ａｎｔ０８と比較して試験した。Ａｎｔ０８は、以前のスクリーニングで高い活性を示した。これまでのところ、全てのスクリーニングは、マウスＴ細胞を使用して実行されたが、本研究は、ヒトＴ細胞を使用する代替スクリーニング方法を報告し、これは、異なるヒトＴ細胞亜型に対するペプチドの活性を知らせる、２４時間以内の堅牢な結果を可能にする。この方法を使用して、この研究は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト、Ａｎｔ０８、Ａｎｔ３０８、及びＡｎｔ１９５の存在下でインビトロで活性化されたヒトＴ細胞の処置が、非ペプチド対照培養物（－－－）でＴ細胞と比較して平均ＣＤ６９発現が約１０～１５％増加して、早ければ処置後６時間で活性化が増加することを実証することを示している（図１０Ａ）。同じ色の点で表される全てのドナーは、ドナー対ドナーの変動性にもかかわらず、アンタゴニスト処置群において６時間でＣＤ６９発現の増加を示す。３つのアンタゴニストのうち、Ａｎｔ１９５は、複数のドナーにわたって最も高い活性を示す。Ｔ細胞を刺激するアンタゴニストの活性は、２４時間で維持されることが更に示され、この効果は、ＣＤ８＋Ｔ細胞と比較してＣＤ４＋Ｔ細胞でより顕著である（図１０Ｂ）。しかしながら、結果はまた、ＶＳ１ペプチドが非ペプチド対照と比較してＴ細胞を約３％刺激するが、問題の３つのアンタゴニストよりも低いことを示す。また、ドナーの間で、ほとんどが平均応答者として分類され、ＣＤ６９発現の測定値はエラーバー内にあり、他の２つの測定値がエラーバー外にあり、１つの試料はスーパー応答者（紫色の点）を反映し、１つの試料はスロー応答者（緑色の点）を反映したことが観察された（図１０Ａ及び１０Ｂ）。ゲーティングされた集団における赤色シグナルの強度の増加によって示されるように、２４時間でＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの存在下でのＣＤ４＋ＣＤ６９＋のパーセンテージが対照と比較して高いことを示す、１つの平均応答者（青い点）からの代表的なフロープロット（図１０Ｃ）。全体的に、この研究は、全てのＶＩＰ－ＲアンタゴニストがヒトＴ細胞の活性化を増強することができることを示し、データは、Ａｎｔ１９５がＡｎｔ０８及びＡｎｔ３０８と比較して最高の活性を有したことを裏付けている。

同じＴ細胞を使用して、ＴＩＭ３発現によって示されるように、Ｔ細胞活性化に対する処置の効果を評価した（図１１）。ＣＤ６９と同様に、ＣＤ４＋ＴＩＭ３＋及びＣＤ８＋ＴＩＭ３＋細胞のパーセンテージは、処置群において２４時間で増加した。対照的に、ＣＸＣＲ４発現は、処置されたマウスにおいて２４時間で減少した（図１２）。

本研究はまた、様々な膵臓がん細胞（ＫＰＣ、Ｐａｎｃ０２、ＰＡＮＣ０１、Ｃａｐａｎ０２、ＢｘＰＣ３、及びＭＴ５）を使用して、膵臓がんモデルにおけるＶＩＰ受容体の発現を調べた。ウエスタンブロットによって測定したように、ＶＰＡＣ１、ＶＰＡＣ２、及びＰＡＣ１は全て、がん細胞において発現した（図１３Ａ～１３Ｄ）。加えて、細胞の生存能及び成長は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストによる処置によって影響を受けなかった。

次の実験は、ＡＮＴ３０８及び抗ＰＤ－１処置が養子移入Ｔ細胞ホーミング及び確立された膵臓腫瘍への浸潤をもたらす能力を評価した。マウスに５×１０^５個のＫＰＣ細胞を皮下注射し、接種後１５日目に、ＡＮＴ３０８及び抗ＰＤ－１抗体とともに免疫学的にナイーブなＧＦＰ＋Ｔ細胞を注入して処置した。モック処置した対照マウスでは、ＧＦＰ＋Ｔ細胞の浸潤が最小限であったが、ＡＮＴ３０８及び抗ＰＤ－１で処置したマウスでは、ＧＦＰ＋Ｔ細胞の顕著な浸潤が示された（図１４Ａ～１４Ｃ）。最後に、この研究は、生存に対するＡＮＴ３０８と抗ＰＤ－１の併用の効果を測定した。膵臓がん細胞を全て接種したモック処置動物は３０日までに死亡したが、処置群は、接種後少なくとも３５日まで９０％の生存を有した（図１５）。多くの固形悪性腫瘍とは異なり、膵管腺がん（ＰＤＡＣ）は、一般に、プログラム死－１（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、又は細胞傷害性Ｔリンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ－４）などの分子を標的とする免疫チェックポイント遮断（ＩＣＢ）療法に応答しない。ＩＣＢに対するＰＤＡＣの治療的耐性は、マイクロサテライト不安定性が高い腫瘍を有するＰＤＣＡ患者のごく一部を除いて、部分的に腫瘍変異負荷が低いことに起因すると考えられる。加えて、ＰＤＡＣにおける腫瘍微小環境（ＴＭＥ）は、免疫抑制タンパク質及び代謝産物を分泌するがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）、豊富な調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、免疫抑制腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び樹状細胞、並びに限られた数の機能Ｔ細胞を特徴とする。いくつかの臨床戦略は、いくつかのがんにおける免疫抑制細胞を標的としているが、過去数年にわたってＰＤＡＣの臨床管理の改善は限られている。最近では、前臨床及び翻訳臨床研究では、不可知論的ＣＤ４０抗体及びゲムシタビン／ｎａｂ－パクリタキセルによる処置の組み合わせが、ＰＤＡＣの強力な免疫媒介性制御を誘導することができることが示されたが、これらの有望な前臨床結果は、初期段階の臨床試験では再現されなかった。本研究は、ＰＤＡＣにおける免疫チェックポイント療法の新規標的として、免疫抑制性ニューロペプチドであるＶＩＰの過剰発現を同定した。

ＶＩＰは、脳、膵臓、結腸及び肺に存在する２８アミノ酸長の神経ペプチドである。ＶＩＰ及びその受容体の過剰発現は、乳房、前立腺、及び肺がんで以前に報告されており、腫瘍の成長及び転移を促進することが注目されている。Ｔ細胞を含む免疫細胞は、Ｔ細胞活性化時に上方調節されるＶＩＰ受容体を有し、活性化及び増殖を阻害すること、並びにＴｒｅｇ及びＴｈ２細胞の生成を促進することによってＶＩＰ受容体シグナル伝達に応答する。ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストでマウスを処置することによるＶＩＰ－Ｒシグナル伝達の阻害は、急性白血病の前臨床モデルにおけるＴ細胞依存性抗腫瘍応答を改善し、適応性抗ウイルス免疫を増強した。本研究は、固形腫瘍がんモデルにおけるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストを探索する。

この研究は、ＶＩＰが、他のほとんどの固形悪性腫瘍と比較して、マウス及びヒトＰＤＡＣにおいて堅牢に発現することを示す。ＰＤＡＣ ＴＭＥ内の腫瘍細胞によるＶＩＰ産生のパラクリン産生は、ＶＩＰ受容体発現Ｔ細胞の抗腫瘍活性を制限する免疫チェックポイント経路を構成する。ＶＩＰ受容体シグナル伝達の阻害は、チェックポイント療法に対するＴ細胞依存性応答を改善し、ＰＤＡＣの前臨床モデルにおける生存を改善することができる。この研究は、ＶＩＰｈｙｂと比較してＶＩＰ受容体へのより高い結合親和性を有するように設計されたより強力なＶＩＰ－Ｒアンタゴニストで腫瘍保有マウスを治療することによって、これらの概念を調査した。本明細書で示されるのは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと抗ＰＤ－１との組み合わせが、マウスＰＤＡＣ（ＴＩＬ）における活性化を著しく増強し、消耗を減少させ、腫瘍浸潤性Ｔ細胞を動員することである。更に、併用薬物療法は、腫瘍増殖率を低下させ、腫瘍の退縮をもたらす。

ＶＩＰは、ヒト及びマウス膵臓がんにおいて過剰発現される。異なるヒト腫瘍にわたるＶＩＰ ｍＲＮＡの発現レベルを、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）を使用して比較した。膵臓がん及び胃腸がんが、他の固形悪性腫瘍と比較して最も高いＶＩＰ ｍＲＮＡ発現を有した（図１６ａ）。ヒトＰＤＡＣ腫瘍の免疫蛍光（ＩＦ）染色は、隣接する正常組織と比較して、サイトケラチン－１９（ＣＫ１９）の共発現を伴う膵管がん細胞におけるＶＩＰの発現の増加を示した（図１６ｂ及び２３ａ）。更に、ヒト及びマウスＰＤＡＣ細胞株から得られた培養上清の分析は、ほとんどのＰＤＡＣ細胞株がＶＩＰを分泌することを示した（図１６ｃ）。他方では、マウス黒色腫細胞株Ｂ１６Ｆ１０及びＤ４Ｍからの上清は、低いＶＩＰ～検出できないＶＩＰを有した（図１６ｃ）。腫瘍分泌ＶＩＰが免疫系に全身効果を有する可能性は、マウスＰＤＡＣ腫瘍を移植した免疫能のあるＣ５７ＢＬ／６マウスが、同等の腫瘍体積のＢ１６Ｆ１０黒色腫を有するマウスと比較して、血漿ＶＩＰのレベルが有意に上昇したという観察によって支持される（図１６ｄ）。これらの所見は、黒色腫がＶＩＰの低発現を有し、ＰＤＡＣがＶＩＰ ｍＲＮＡの高レベルを有したヒトＶＩＰ ｍＲＮＡ発現データと一致する。同様に、膵臓がんを有するヒトＰＤＡＣ患者は、健康なボランティアよりも有意に高い血漿ＶＩＰレベルを有し（図１６ｅ）、血漿ＶＩＰがＰＤＡＣのバイオマーカーであることを示す。この概念を裏付けるものとして、血漿ＶＩＰは、マウスにおけるＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍の体積の増加に伴って直線的に増加した（図１６ｆ）。

ＫＰＣ－Ｌｕｃ細胞の同所性移植は、ＫＰＣ－Ｌｕｃの培養上清及び皮下ＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍を有するマウスからの血漿の両方よりも高い血漿ＶＩＰレベルをもたらし、同所性モデルで作製された線維形成性ＴＭＥがより高い血中ＶＩＰレベルに寄与することを示唆した（図１６ｄ）。これを支持するために、ＰＤＡＣ患者からの一次ＣＡＦ及びヒト膵臓ＣＡＦ細胞株であるｈ－ｉＰＳＣ－ＰＤＡＣ－１からの上清は、高レベルのＶＩＰを分泌した（図１６ｇ）。これらのデータは、ヒト及びマウスＰＤＡＣのＴＭＥ内の腫瘍細胞及び間質細胞による高レベルのＶＩＰの発現を確認する。

ＶＩＰ－Ｒシグナル伝達を阻害することは、インビトロで消耗を減少させながら、Ｔ細胞活性化を促進した。ＰＤＡＣ及びＴＭＥによるＶＩＰの発現は、ＶＩＰががん細胞生存のためのパラクリン及び／又は自己分泌因子として機能し得ることを示した。ヒトＰＤＡＣ組織は、免疫細胞上のＶＩＰ－Ｒシグナル伝達に最も関連するように見える２つのＶＩＰ受容体であるＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２の両方を発現する。更に、ＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２の発現は、ウエスタンブロットによってマウス及びヒトＰＤＡＣ細胞株の両方で確認される（図２３ｂ～２３ｄ）。したがって、ＶＩＰ受容体発現腫瘍細胞に対する腫瘍細胞によって作製されるＶＩＰの自己分泌効果を試験するために、まず、ＶＩＰ－Ｒシグナル伝達を阻害することがインビトロでＰＤＡＣ細胞の成長に影響を及ぼすかどうかを評価した。これら及びその後の研究は、インシリコモデリングに基づいて、ＶＩＰｈｙｂよりもヒトＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２に対するより高い受容体親和性を有すると予測されるペプチドＶＩＰ－Ｒアンタゴニストを使用した。漸増濃度のＡＮＴ００８によるＰＤＡＣ細胞の処置は、ＭＴ５における一過性の効果を除いて、インビトロでのＰＤＡＣ細胞株の生存率に影響を与えなかった（図２４ａ）。特に、ＫＰＣ－Ｌｕｃ、Ｐａｎｃ０２、Ｃａｐａｎ０２及びＢｘＰＣ３の成長は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの添加の影響を受けなかった（図２４ａ）。ＰＤＡＣによって産生されるＶＩＰが、ＶＩＰ－Ｒを介してＰＤＡＣの成長に自己分泌効果を有することができるかどうかを試験するために、ＶＰＡＣ２をＰＤＡＣ細胞株Ｐａｎｃ０２からノックアウトした（図２４ｂ～２４ｄ）。ＶＰＡＣ２ノックアウトＰａｎｃ０２細胞は、野生型非経口細胞株と比較して、インビトロで同様の成長速度を有した（図２４ｅ）。ＶＩＰ－ＲアンタゴニストＡＮＴ３０８によるＶＰＡＣ２ノックアウト又は野生型Ｐａｎｃ０２細胞の処置は、インビトロ増殖を阻害しなかった（図２４ｆ）。ＶＰＡＣ２ ＫＯ細胞は、野生型細胞と比較してわずかなインビボ成長遅延（図２４ｇ）及び改善された生存（図２４ｈ）を有し、Ｐａｎｃ０２細胞株におけるＶＰＡＣ２受容体によって媒介される腫瘍成長に対するＶＩＰ－Ｒシグナル伝達の適度な直接効果を示唆する。

ＶＩＰｈｙｂでＶＩＰ－Ｒシグナル伝達を阻害することは、ＣＲＥＢ（ホスホＣＲＥＢ）のリン酸化を減少させ、Ｔ細胞増殖を増強することが以前に報告されている。この研究は、より高いＴ細胞活性化及び増殖をもたらす下流のホスホＣＲＥＢシグナル伝達に対するＡＮＴ００８又はＡＮＴ３０８の効果を評価した。２つの標的化可能な免疫チェックポイント分子であるＰＤ－１及びＣＴＬＡ－４（図１７ａ及び１７ｃ）の動態と比較してわずかに遅れている動態を有する、活性化の４８時間以内に抗ＣＤ３抗体で上方調節されたＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２発現で活性化されたヒトＴ細胞（図１７ａ及び１７ｂ）。Ｔ細胞活性化に対するＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの効果を決定するために、本研究は、図２５に示されるゲーティング戦略を使用して、スクランブルＶＩＰ配列制御ペプチド（Ｓｃｒａｍ）、ＡＮＴ００８、又はＡＮＴ３０８で処置後のＣＤ６９発現を測定した。ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの追加によるＶＩＰ－Ｒシグナル伝達の阻害は、ＣＤ６９の発現を有意に増加させた（図１７ｄ）。特に、ＡＮＴ００８と比較してＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２に対するより高い予測結合親和性を有するＡＮＴ３０８は、ＣＤ４及びＣＤ８ヒトＴ細胞の両方においてＣＤ６９のレベルを有意に増加させた（図１７ｄ）。同様に、培養物へのＡＮＴ３０８の添加は、対照スクランブルペプチド配列による処置と比較して、ＣＲＥＢの活性化誘導リン酸化をより強力に阻害し、Ｔ細胞活性化を増加させた（図１７ｅ、図２６）。

この研究は次に、ＰＤＡＣ患者の末梢血から単離されたヒトＴ細胞のエクスビボ増殖に対するＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの効果を調査した。ＡＮＴ００８によるインビトロ処置は、Ｔ細胞増殖の９日後に評価されるヒトＴｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋）の割合を有意に減少させた（図１７ｆ及び１７ｇ）。更に、ＡＮＴ００８はまた、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットの両方においてＰＤ１及びＴｉｍ－３、又はＰＤ１及びＬａｇ－３、又はＰＤ１、Ｔｉｍ－３及びＬａｇ－３を共発現するＴ細胞の割合によって測定して、「消耗した」表現型を有するＴ細胞を有意に減少させた（図１７ｈ及び１７ｉ、図２７）。

抗ＰＤ－１阻害を伴うＶＩＰ受容体の併用遮断の抗腫瘍効果は、マウスＰＤＡＣにおいてＴ細胞依存性である。インビボでのＰＤＡＣ腫瘍の成長に対するＶＩＰ－Ｒ媒介シグナル伝達阻害の効果を評価するために、３つの異なるマウスＰＤＡＣ腫瘍（ＫＰＣ－Ｌｕｃ、ＭＴ５及びＰａｎｃ０２）を同系免疫能のあるＣ５７ＢＬ／６マウスに移植した。腫瘍が触知可能であった後、マウスを、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び／又は抗ＰＤ－１モノクローナル抗体での処置、又はスクランブルペプチド若しくはアイソタイプマッチドＩｇＧを受けた対照群に無作為に割り当てた。ＭＴ５細胞における単剤ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト処置は、インビトロでの成長の適度な減少をもたらし（図２８ａ）、ＭＴ５腫瘍を保有するマウスは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストによる単独療法後の生存を有意に改善し、腫瘍負荷を減少させ（図１８ａ及び図２８ａ）、ＭＴ５におけるＶＩＰ－Ｒを介したＶＩＰの自己分泌シグナル伝達の直接的な阻害を示した。ＭＴ５、ＫＰＣ－Ｌｕｃ、又はＰａｎｃ０２腫瘍のいずれかを保有する全てのマウスにおいて、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと抗ＰＤ－１との組み合わせは、スクランブルペプチド及びアイソタイプマッチドＩｇＧで処置されたマウスと比較して、腫瘍負荷を有意に減少させ（図２８ａ～２８ｃ）、生存を改善した（図１８ａ及び１８ｂ）。特に、３つの腫瘍モデル全てにおいて、併用療法は、かなりの割合のマウス（ＫＰＣ及びＭＴ５腫瘍保有マウスで４０％、Ｐａｎｃ０２腫瘍を有するマウスで３０％）において腫瘍根絶をもたらし、マウスの性別による転帰に差はなかった（図２８ｄ及び２８ｅ）。抗腫瘍効果に加えて、免疫学的にナイーブなマウスにおけるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの安全性が確認された（図２９ａ～２９ｇ）。具体的には、抗がん治療プロトコルで使用されるのと同じ用量及び頻度でのＡＮＴ００８又はＡＮＴ３０８の毎日の皮下投与は、マウスの全生存期間、活性レベル又は体重に影響を与えなかった（図２９ａ）。血液試料の分析は、処置による全白血球の適度な減少を示した（図２９ｂ）が、脾細胞の分析は、Ｔ、Ｂ、ＮＫ、樹状細胞（ＤＣ）、又は骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の頻度における有意差を示さなかった（図２９ｂ）。更に、ＡＮＴ００８及びＡＮＴ３０８処置マウスにおける結腸及び肺組織の切片のＨ＆Ｅ染色は、自己免疫を示唆するリンパ球浸潤又は組織病理を示さなかった（図２９ｃ～２９ｄ）。

この研究は次に、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１で処置したＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍における生存の増強がＴ細胞依存性であるかどうかを試験した。ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１併用療法で見られた増強された生存は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、又はＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの枯渇によって阻止された（図１８ｃ）。併用療法は、ＣＤ４－／－及びＣＤ８－／－腫瘍保有マウス（それぞれ、図１８ｄ及び１８ｅ）の両方において生存を改善することができず、併用療法で見られる増強された抗腫瘍応答は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞依存性の両方であることを示した。

ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１の組み合わせで処置したマウスの腫瘍におけるＴ細胞活性化の増加。ＶＩＰ－Ｒシグナル伝達を阻害することがインビボでＴ細胞活性化を促進するかどうかを調べるために、本研究は、活性化マーカーの差異について、皮下ＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍における腫瘍浸潤Ｔ細胞を分析した。Ｋｉ６７－、ＩＦＮ－γ又はＩＬ－４発現ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の割合に差はなかったが、ＡＮＴ００８又は抗ＰＤ－１による単独療法は、ＰＤ－１及び／又はＴｉｍ－３発現Ｔ細胞のレベルを有意に変化させた。ＡＮＴ００８単独療法は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットにおけるＰＤ－１＋Ｔｉｍ－３－Ｔ細胞のレベルを上昇させ、Ｔ細胞活性化の増強を示した（図１９ａ及び１９ｂ）。他方では、抗ＰＤ－１単独療法は、Ｔ細胞の消耗と一致して、ＰＤ－１＋Ｔｉｍ－３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度を増加させた（図１９ａ及び１９ｂ）。更に、ＡＮＴ００８又は抗ＰＤ－１単独療法、並びに併用療法は、ＰＤＡＣ腫瘍内のＴｒｅｇの頻度を有意に減少させた（図１９ｃ及び１９ｄ）。これらの所見は、インビトロでのＴｒｅｇに対するＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの効果と一致する（図１７ｆ）。本実験は更に、ＴＩＬにおけるｍＲＮＡ発現をナノストリングで解析することにより、ＡＮＴ００８及び抗ＰＤ－１がＴ細胞活性化に及ぼす効果を確認した。単剤ＡＮＴ００８（図１９ｅ）又は抗ＰＤ－１（図１９ｆ）で処置したマウスからＴＩＬで有意に上方調節された遺伝子はなかったが、併用療法は、ＴＣＲ活性化及び共刺激に関連する遺伝子の発現を有意に上方調節した（４倍超の変化、ＦＤＲ＜０．１）（図１９ｇ）。特に、併用群では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２４７、ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、及びＣＴＬＡ４などのＴ細胞活性化及び共刺激のいくつかのマーカーが上方調節された。活性化されたＴ細胞によって発現されるＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＩＬ２などのサイトカインも、併用群からＴＩＬにおいて有意に高いレベルで発現された（図１９ｈ）。全体として、ＴＣＲ活性化及び共刺激経路スコアは、スクランブルペプチド＋アイソタイプＩｇＧで処置した対照マウスと比較して、併用療法で処置したマウスの腫瘍におけるＴ細胞において有意に高かった（図１９ｉ）。

ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１との併用療法は、腫瘍特異的Ｔ細胞応答を誘導し、腫瘍再チャレンジに対する保護免疫を付与する。次の実験では、併用療法が腫瘍内の特異的Ｔ細胞クローン及び／又は抗原特異的Ｔ細胞の頻度を増加させるかどうかを評価した。ＤＮＡを腫瘍から抽出し、続いてＴＣＲβ遺伝子を増幅した。ＴＣＲβ遺伝子のディープシーケンシングは、シャノンのエントロピー（図２０ａ）によって示されるように、対照処置マウス（スクランブルペプチド及びアイソタイプＩｇＧ；ｎ＝４）と比較して、ＡＮＴ００８及び抗ＰＤ－１処置群（ｎ＝４）からの腫瘍において増加したＴＣＲ多様性を示し、併用群においてより独自のＴＣＲ応答を示した。各群の上位５０個の最も高い頻度のクローンを分析すると、併用処置群は、他の全ての処置群と比較して、少なくとも２個の試料によって共有されたクローン数が最大であった（ＡＮＴ００８及び抗ＰＤ－１：１２、対照ペプチド及び抗ＰＤ－１：８、ＡＮＴ００８及びアイソタイプＩｇＧ：６、対照ペプチド及びアイソタイプＩｇＧ：６）（図２０ｂ）。各処置群における共有クローンの頻度に顕著な差異は見られなかった（図２０ｃ）。

次に、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１との併用療法が腫瘍特異的Ｔ細胞応答を促進するかどうかを調べた。ＭｕＬＶ ｐ１５Ｅは、ＫＰＣ－Ｌｕｃ、Ｐａｎｃ０２及びＭＣ３８腫瘍上に発現する抗原であり、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＭｕＬＶｐ１５Ｅの発現の欠如により、腫瘍特異的抗原とみなされる。抗原特異的ＣＤ８＋ＴＩＬを、フローサイトメトリーにより、ＭｕＬＶ ｐ１５Ｅ－Ｈ２Ｋｂ四量体試薬を用いて数えた。腫瘍を１０日間の処置後に分析したところ、ＡＮＴ３０８及び抗ＰＤ－１処置マウスからの腫瘍は、対照処置腫瘍と比較して腫瘍抗原特異的四量体＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度が有意に増加した（２．８５％対０．７２％、ｐ＜０．０１；図２０ｄ及び図２０ｅ）。まとめると、これらのデータは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストとの併用療法がＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞応答を促進することを示す。

ＫＰＣ－Ｌｕｃモデルは、単剤抗ＰＤ１抗体に部分的に応答することが示されており、一部のマウスは、単剤抗ＰＤ１処置後に明らかなＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍なしで観察された（図１８ａ）。抗ＰＤ１抗体とのＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの併用による処置が、抗ＰＤ１抗体単独での処置よりも抗がん免疫記憶を強化したかどうかを試験するために、抗ＰＤ１単独療法又は抗ＰＤ１とＡＮＴ００８又はＡｎｔ３０８との併用による処置後に触診又はＢＬＩによって検出可能な腫瘍を有しなかった腫瘍のないマウスを、ＫＰＣ－Ｌｕｃの第２の接種で再チャレンジした。これらのマウスは、抗ＰＤ１単独（ｎ＝６）又は抗ＰＤ１抗体とＡＮＴ００８（ｎ＝５）又はＡＮＴ３０８（ｎ＝３）のいずれかとの組み合わせによる初期処置後８０～１００日であった（図２０ｆ）。以前にＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと抗ＰＤ１の組み合わせで処置したマウスは、腫瘍再チャレンジ後の生存が１００％であったのに対し、最初に単剤抗ＰＤ１抗体で処置したマウスでは長期生存が０％であった（図２０ｇ）。これらの結果は、抗ＰＤ１単独療法ではなく、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストペプチドと抗ＰＤ－１の組み合わせのみで処置した後に、保護的な抗がん免疫記憶が長期的に生成されたことを実証する。ＡＮＴ００８／ＡＮＴ３０８と抗ＰＤ－１との間の相乗作用は、同所性マウスＰＤＡＣにおける腫瘍負荷を低減し、腫瘍内Ｔ細胞頻度を増加させた。

次の実験は、ＰＤＡＣ細胞を膵臓に直接移植し、臨床ＰＤＡＣにおけるＴＭＥのいくつかの要素を再現する、より臨床的に関連性の高い同所性ＫＰＣ－ＬｕｃモデルにおけるＡＮＴ００８と抗ＰＤ－１療法の組み合わせの有効性を試験した。生物発光イメージング（ＢＬＩ）は、移植から６～７日後の野生型マウスにおける膵臓の尾部へのＫＰＣ－Ｌｕｃ細胞の生着に成功したことを確認した。同位体移植後７日目で、腫瘍保有マウスを、対照ペプチド、アイソタイプ対照抗体、ＡＮＴ００８、又は抗ＰＤ－１ ＭｏＡｂの組み合わせによる処置に無作為に割り当てた（図２１ａ）。抗腫瘍応答は、ＡＮＴ００８＋抗ＰＤ－１群の組み合わせで最大であり、その結果、抗ＰＤ－１単独療法（５５％）を受けている群では５／９匹のマウス（５５％）及びＡＮＴ００８単独療法群では４／１０匹のマウス（４０％）で腫瘍が退縮したのに対し、１１匹中７匹のマウス（６３％）で腫瘍が退縮した（図２１ｂ）。加えて、ＡＮＴ００８と抗ＰＤ－１の組み合わせは、対照マウスと比較して、相乗効果（表４）を有し、腫瘍の成長が遅くなり、腫瘍負荷が最も低くなった（２５日目の膵臓の重量によって測定）（図２１ｃ及び２１ｄ）。また、抗ＰＤ－１単独療法群及びＡＮＴ００８／抗ＰＤ－１併用処置群におけるそれぞれ１０匹のマウスのうちの１匹は、連続Ｈ＆Ｅ染色組織切片の組織学的解析によって判断されるように、腫瘍のないものであった。腫瘍からの生体発光シグナル（腫瘍フラックス）の正確性は、剖検時に得られたＨ＆Ｅ染色パラフィン包埋膵臓組織の断面画像とＩＶＩＳ及びＭＲＩ画像を比較すること（図３０ａ）、並びに腫瘍ＢＬＩフラックスを膵臓の重量と相関させること（図３０ｂ）によって検証した。

最後に、治療２５日目の膵臓の免疫組織化学分析は、異なる処置群のマウスからの腫瘍にわたるコラーゲン及び浸潤Ｔ細胞を評価した（図２１ｅ）。コラーゲンのバンドを、ヒトＰＤＡＣの特徴的な線維形成性ＴＭＥの証拠と一致して、全ての腫瘍において可視化した（図２１ｅ、図３０ｃ）。併用療法を受けたマウスからの腫瘍は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の有意に高い腫瘍内レベル（図２１ｆ及び２１ｇ）、並びにＫｉ６７＋ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のより高い割合を有した（図２１ｈ及び２１ｉ）。更に、Ｔ細胞密度と膵臓重量との間には逆相関があり、その結果、併用群の最小腫瘍は増殖したＴ細胞の数が多かった（図３０ｄ～３０ｇ）。これらの知見は、ＡＮＴ００８及び抗ＰＤ－１との併用療法が、Ｔ細胞活性化の増強をもたらすだけでなく、同所性マウスＰＤＡＣ腫瘍のコラーゲンリッチＴＭＥにおけるＴ細胞浸潤を促進することを示した。

ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１との併用療法は、腫瘍内にホーミングするＴ細胞を促進し、腫瘍排出リンパ節におけるＴ細胞上のＣＸＣＲ４発現を低下させる。併用療法による増強された抗腫瘍応答が、ＴＭＥへのＴ細胞の浸潤の増加に起因するかどうかを試験するために、免疫学的にナイーブなＧＦＰ＋Ｔ細胞を、Ｃ５７Ｂｌ／６ ＥＧＦＰトランスジェニックマウスから、皮下移植ＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍を保有する野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスに養子移植し、ＧＦＰ＋Ｔ細胞の腫瘍への浸潤を測定した（図２２ａ）。ＡＮＴ３０８及び／又は抗ＰＤ１ ＭｏＡｂでの３日間の処置の後、併用療法で処置されたマウスは、他の全ての処置群と比較して、腫瘍内のＧＦＰ＋Ｔ細胞の数が増加した（図３１ａ～３１ｃ）。ＤＡＰＩ染色凍結腫瘍切片の蛍光顕微鏡検査により、腫瘍全体に浸潤した併用療法によるＧＦＰ＋Ｔ細胞浸潤の有意な増加が更に確認された（図２２ｂ）。

前臨床及び臨床研究は、ＣＸＣＲ４の下方調節が動員を促進し、ヒト及びマウスＰＤＡＣ腫瘍における腫瘍内Ｔ細胞浸潤を増加させることを以前に示している。次の実験は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ１との併用療法がＴ細胞上のＣＸＣＲ４の発現レベルを調節するかどうかを試験した。抗ＰＤ－１単独療法は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を発現するＫｉ６７又はＣＤ６９の割合を増加させたが、活性化又は増殖する細胞のかなりの割合もまた、ＣＸＣＲ４を発現した（図２２ｃ及び２２ｄ）。他方では、抗ＰＤ－１とＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの組み合わせによる処置は、ＣＸＣＲ４発現の減少を伴う活性化ＣＤ６９＋ＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞の割合を増加させた（図２２ｃ及び２２ｄ）。ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＡＭＤ３１００として、ＣＤ８＋Ｔ細胞をＰＤＡＣ腫瘍に動員する戦略として臨床的に評価されており、次の実験は、抗ＰＤ－１及び／又はＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと組み合わせたＡＭＤ３１００による処置を試験した。ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１との併用療法は、ＡＭＤ３１００及び抗ＰＤ－１の併用療法よりも優れており（図２２ｅ）、それぞれマウスの２０％及び１０％において腫瘍の完全な退縮をもたらした（ｐ＝ＮＳ）（図２２ｆ）。３つの薬物（ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト、抗ＰＤ－１、及びＡＭＤ３１００）を全て組み合わせて使用した場合、スクランブルペプチド、アイソタイプマッチドＩｇＧ、及びＰＢＳを受けた対照マウスよりも生存が有意に良好ではなかった（図２２ｅ）。これらの知見は、完全なＣＸＣＲ４遮断ではないが、ＣＸＣＲ４の下方調節が、ＰＤＡＣ ＴＭＥ内でＴ細胞輸送及び細胞傷害性を促進するための優れた治療戦略であり得ることを示している。

ＰＤ－１及びＣＴＬＡ－４を標的とする膵臓がんにおける免疫チェックポイント遮断の臨床的有効性は、他の固形悪性腫瘍を有する患者の治療におけるＩＣＢの顕著な成功にもかかわらず、あまり高くはなかった。臨床及び前臨床研究は、ＩＣＢに対するＰＤＡＣの応答性の低さは、主に、腫瘍実質における限られた数のＴ細胞、及び腫瘍内Ｔ細胞活性化を制限する複数のメカニズムを特徴とする免疫学的に冷たい（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｃｏｌｄ）ＴＭＥに起因することを示した。したがって、Ｔ細胞のプライミング又は活性化を「促進」する戦略は、Ｔ細胞媒介性抗腫瘍応答の増強を促進し、抗ＰＤ－１又は抗ＣＴＬＡ－４ ＩＣＢに対する応答性を改善することができる。マウスＰＤＡＣの前臨床モデルを使用して、研究は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストによる治療が抗腫瘍Ｔ細胞の活性化及び増殖を促進するかどうか、並びにこれらの薬物が抗ＰＤ－１と相乗作用するかどうかを試験した。

ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の選択的枯渇（図１８ｃ～１８ｅ）及びがん抗原特異的免疫記憶の生成（図１９ｅ及び１９ｇ）を伴う本明細書の結果は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの優位な効果が、ＶＩＰ－Ｒを発現するＴ細胞上で腫瘍細胞によって産生されるＶＩＰのパラクリンシグナル伝達の阻害を介して発揮されることを示す。Ｐａｎｃ０２細胞におけるＶＰＡＣ２のノックアウトは、インビボでのがん細胞の成長に対するＶＩＰシグナル伝達の適度な直接的な効果を示したが、ＶＰＡＣ２ノックアウトＰａｎｃ０２腫瘍を注射されたマウスは、ＶＰＡＣ２野生型腫瘍を与えられたマウスと比較して７日間の生存利益中央値（ｍｅｄｉａｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｂｅｎｅｆｉｔ）を有する（図２４ｈ）。対照的に、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１の組み合わせは、ＰＤＡＣを有するマウスにおけるＴ細胞依存性抗腫瘍応答を相乗的に改善し、処置された腫瘍保有マウスの最大４０％において腫瘍除去をもたらした。更に、腫瘍のないマウスを再チャレンジすると、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと抗ＰＤ－１の併用を受けたマウスで完全な腫瘍拒絶が生じたため、ＶＩＰ－Ｒシグナル伝達の阻害に応答して生成された、増強された適応性のある長期的な抗腫瘍免疫の役割が更に強調された。ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストペプチド／抗ＰＤ－１併用療法のレシピエントは、腫瘍内ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のホーミング、活性化及び増殖の増加、並びにＴＭＥ内の腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の顕著な増加を有した。ＣＤ４０シグナル伝達を介した堅牢なＴ細胞応答の誘導は、ＩＣＢに対するＰＤＡＣ腫瘍の難治性を克服する。

ＴＭＥからＴ細胞を除外することは、ＰＤＡＣ腫瘍の重要な特徴であり、これは、堅牢な免疫抑制細胞及びＴ細胞活性化を制限する可溶性因子を含有する高密度の線維形成性間質（ｄｅｓｍｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｔｒｏｍａ）の結果であると考えられる。複数の研究において、がん関連線維芽細胞（及びそれらが分泌するサイトカイン及びケモカイン）などの間質の成分は、Ｔ細胞のエフェクター機能を抑制し、免疫学的に「冷たい」腫瘍をもたらす。ＰＤＡＣ腫瘍におけるＴ細胞浸潤におけるＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２軸の役割は複雑である。ＣＸＣＲ４発現は、腫瘍抗原へのプライミングが起こり得る高いＣＸＣＬ１２レベルを有するリンパ節へのナイーブＴ細胞のホーミングを促進する。しかしながら、ＣＸＣＲ４＋Ｔ細胞は、ＣＡＦによって発現され、ＫＲＴ１９に連結されるＣＸＣＬ１２に結合することによって、腫瘍周囲細胞外マトリックス内に「捕捉」され得る。したがって、ＣＸＣＲ４の高発現は、ＰＤＡＣ患者における生存不良の予測マーカーであり、ＣＸＣＲ４アンタゴニストによる処置は、ＴＭＥにおけるＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を増加させる。これらのデータと一致して、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと抗ＰＤ１との間の相乗作用の現在の所見は、ＣＸＣＲ４レベルの調節と一致している。抗ＰＤ－１による処置は、腫瘍内Ｔ細胞上でのＣＸＣＲ４の発現を増加させる一方で、抗ＰＤ－１へのＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの添加は、Ｔ細胞上でのＣＸＣＲ４の発現を有意に減少させ、潜在的に、Ｔ細胞が細胞外マトリックス内に「捕捉される」ことを防止する。ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト、抗ＰＤ－１、及びＣＸＣＲ４アンタゴニストの３つを併用することによる処置により、薬物を受けていない対照マウスと同様の腫瘍成長率及び生存が得られ（図２２ｅ）、ＣＸＣＲ４の下方調節が、完全な遮断ではないが、ＴＭＥ内でＴ細胞輸送及び細胞傷害性を促進するための優れた治療戦略であり得ることを示した。

併用薬物療法を受けたマウスにおいて、ＴＩＬは、ＴＣＲシグナル伝達及び活性化に関連する転写物の有意に高いレベルを発現し、Ｔｈ１サイトカインＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－２のｍＲＮＡレベルの増加を示した。更に、Ｔ細胞及びケモカイン受容体ＣＸＣＲ６におけるケモカインＣＣＬ２、ＣＣＬ４及びＣＣＬ５のｍＲＮＡレベルの上方調節は、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト／抗ＰＤ１療法の組み合わせによって活性化された腫瘍内Ｔ細胞が、血液からＴＭＥへの追加のＴ細胞の動員を促進することができることを示す。これは、併用療法で治療したマウスの腫瘍への免疫学的にナイーブなＧＦＰ＋Ｔ細胞の蓄積の増加によって裏付けられる。

これらのデータは、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストが、免疫細胞の活性化、増殖、及び生存を制限する阻害シグナル伝達経路を遮断することによって作用することを示す。ＶＩＰ－ＲアンタゴニストによるヒトＴ細胞のインビトロ処理後のＣＲＥＢリン酸化の減少は、増強されたＮＦ－κＢシグナル伝達が、マウスＰＤＡＣモデルに見られる増強されたＴ細胞活性化に関与することを示唆する。任意のＩＣＢの使用における安全性の懸念のうちの１つは、自己免疫の誘導である。特に、ＡＮＴ００８又はＡＮＴ３０８ ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの１０日間の毎日の皮下注射による野生型マウスの処置は、自己免疫の組織病理学的証拠とは関連しておらず、ＶＩＰノックアウトマウスにおける自己免疫疾患の欠如と一致し、行動に明らかな影響はなかった。したがって、ＰＤＡＣモデルにおける抗がん免疫に対するＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト処置の有益な効果は、ＶＩＰが病理学的に過剰発現されるＴＭＥにおけるＶＩＰの局所的効果に起因する可能性が高い。

この研究は、マウスＴ細胞が、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストと抗ＰＤ１の組み合わせで治療された同所的に埋め込まれた腫瘍に深く浸透し、明らかにコラーゲンの高密度間質バンドを交差することを示す。現在の研究はＰＤＡＣの治療に焦点を当てているが、他のいくつかのがんもＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの潜在的な標的となり得る。公開された研究により、骨髄性白血病及びリンパ腫、並びにＶＩＰを過剰発現する他のがんのマウスモデルにおけるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの抗腫瘍活性が示されている。現在の研究の焦点と結論は、天然ＶＩＰによる自己免疫の抑制を調べた以前の研究、又は腫瘍細胞抑制薬としてのＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの活性を調べた研究と直交している。

最後に、ＶＩＰシグナル伝達が以前に標的化可能なＩＣＢ経路として同定されていないのはなぜなのか。ＶＩＰ受容体の薬理学的拮抗作用は、腫瘍成長を刺激する腫瘍細胞によって発現されるＶＩＰの自己分泌シグナル伝達を遮断する戦略として探索された。ヒト膵臓がん細胞株ＣＡＰＡＮ－２はＶＩＰ受容体を発現し、成長はＶＩＰによって刺激される。ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストは、ＶＩＰによるｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡの誘導を阻害し、ヌードマウスにおけるＣＡＰＡＮ－２細胞の成長を遅延させ、ＶＩＰ受容体アンタゴニストが腫瘍固有の細胞抑制効果を有することを示す。前臨床試験では、細胞抑制性抗がん薬としてＶＩＰ－Ｒアンタゴニストが探索されたが、ヒトにおけるＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの臨床試験、又は適応免疫を増強するＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの可能性を試験する研究には至らなかった。ＶＩＰが同定されたのは４０年以上前であるが、ＶＩＰが免疫に与える影響が研究された。現在の研究の焦点は、抗腫瘍Ｔ細胞に対する抗ＰＤ１抗体及びＶＩＰ－Ｒアンタゴニストの効果であるが、この療法はまた、ＴＭＥにおける免疫抑制性骨髄細胞に影響を及ぼし、寛容原性樹状細胞の生成を遮断し、腫瘍内の三次リンパ構造における腫瘍浸潤性マクロファージ及び樹状細胞による抗原提示に影響を及ぼす可能性がある。

現在の研究は、ＶＩＰ－ＲアンタゴニストがＰＤＡＣの治療における新規かつ扱いやすいアプローチを表すことを示している。注目すべきことに、ＶＩＰアミノ酸配列は、ヒトとマウスとで同一であり、ＶＩＰ－Ｒ配列は、高度に保存されており、腫瘍保有マウスにおける免疫学的活性を有するＶＩＰ－Ｒアンタゴニストが、ヒト患者において同等の特性を有し得ることを示す。この概念を支持するために、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストを有するＰＤＡＣ患者の血液から単離されたヒトＴ細胞のエクスビボ治療は、Ｔ細胞活性化、免疫学的老化に関連するＰＤ－１、Ｔｉｍ－３、及びＬａｇ－３免疫チェックポイント分子の下方調節を促進し、調節Ｔ細胞の頻度を低下させた（図１７ｆ）。更に、ＶＩＰの過剰発現は、抗ＰＤ１ ＩＣＢに対する応答のための予測バイオマーカーとしてのがんのＰＤ－Ｌ１染色の使用に類似して、ＰＤＡＣ及びＶＩＰ－ＲアンタゴニストのＩＣＢ活性に感受性のある他のがんを有する患者を同定するのに有用なバイオマーカーとなり得る（図１６ｂ及び１６ｅ）。

３．実施例３：材料及び方法
細胞株及び試薬。ＭＴ５及びＫＰＣ－Ｌｕｃ細胞は、それぞれ、Ｄｒ．Ｔｕｖｅｓｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）及びＤｒ．Ｌｏｇｓｄｏｎ（ＭＤ Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘａｓ）から寛大にも贈呈され、Ｐａｎｃ０２細胞は、Ｄｒ．Ｐｉｌｏｎ－Ｔｈｏｍａｓ（Ｈ．Ｌｅｅ Ｍｏｆｆｉｔｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｔａｍｐａ，ＦＬ）によって提供された。ＢＸＰＣ３、Ｐａｎｃ１及びＢ１５Ｆ１０は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓｓ，ＶＡ）からのものであり、ＳＭ１は、Ｄｒ．Ａｎｔｏｎｉ Ｒｉｂａｓ（ＵＣＬＡ、Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）からのものであった。ＭＴ５及びＢＸＰＣ３細胞を、１０ｍＭのＬ－グルタミン及び抗生物質に加えて、それぞれ５％及び１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加したＲｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）培地で培養した。ＫＰＣ－Ｌｕｃ、Ｐａｎｃ０２、及びＰａｎｃ１細胞を、１０％のＦＢＳ、１０ｍＭのＬ－グルタミン、及び抗生物質を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。Ｓｙｎｔｈｅｇｏ（Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）は、Ｐａｎｃ０２細胞株のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ ＶＰＡＣ２ノックアウトプールを提供した。ＶＰＡＣ２ ＫＯ Ｐａｎｃ０２細胞の単一クローンを限界希釈によって選択し、野生型Ｐａｎｃ０２細胞と同じ培地中で増殖させた。Ｂ１６Ｆ１０細胞を、１０％のＦＢＳ、１００ｕｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び１５００ｍｇ／Ｌの重炭酸ナトリウムを補充したＬ－グルタミン及びピルビン酸ナトリウムを含むＤＭＥＭ中で培養した。ヒト膵がん関連星状（ＰＳＣ）細胞株ｈ－ｉＰＳＣ－ＰＤＡＣ－１を生成し、前述のように維持した。

ＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４）又はアイソタイプ対照（クローン２Ａ３）に対する医薬グレードのマウス抗体をＢｉｏＸｃｅｌｌ（Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）から購入した。医薬グレードのＡＭＤ３１００は、Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＬＬＣ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘａｓ）から購入した。スクランブルペプチド、ＡＮＴ００８及びＡＮＴ３０８は、ＲＳ合成（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）から９５％超の純度で購入した。ＩＢＩ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｄｕｂｕｑｕｅ，ＩＡ）からＤＥＰＣ処理した発熱原を含まない水中で２００μＭのストック溶液を調製し、使用まで－８０℃で保管した。Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｓｈｉｒｌｅｙ，ＮＹ）は、インシリコモデリングを実行して、ＡＮＴ００８及びＡＮＴ３０８のＶＰＡＣ１及びＶＰＡＣ２受容体への結合親和性を予測した。

患者及び試料。原発性ヒトＰＳＣ／ＣＡＦは、同定されていない腫瘍組織に関するＷｉｎｓｈｉｐ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｅｍｏｒｙ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙにおけるＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄ（ＩＲＢ）が承認したプロトコルに従って、切除された膵臓腫瘍から単離した。簡潔に述べると、切除したばかりの膵臓組織を１ｍｍ３の切片に解剖し、培養皿に配置し、結合が観察されるまで２～３週間、ＤＭＥＭ＋１０％ ＦＢＳ＋抗生物質でインキュベートした。次いで、細胞を含まない上清を回収して、ＶＩＰ特異的酵素イムノアッセイを介してＶＩＰのレベルを定量した。同意した膵臓がん患者及び健康なボランティアからの血液試料を、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）のＥＤＴＡコーティングされたバキュテナーチューブに採取した。血漿を前述のように単離し、ＥＤＴＡバキュテナーチューブを２０００×ｇで１５分間遠心分離し、ＶＩＰレベルの分析に使用するまで－８０℃で保管した。患者の人口統計を表３に示す。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＰＤＡＣ又は健康なボランティア（それぞれ、ＩＲＢ ０００８７３９７及びＩＲＢ ０００４６０６３）を有する同意した患者から、前述のようなフィコール・ハイパック濃度勾配遠心分離によって単離し、Ｔ細胞単離及び生体外増殖に必要とされるまで、ＣｒｙｏＳｔｏｒ細胞凍結保存媒体ＣＳ１０（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）で凍結保存した。

抗体。ＶＰＡＣ１、ＶＰＡＣ２、ＰＤ１及びＣＴＬＡ４発現のウエスタンブロット分析のために、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）由来の抗ＶＰＡＣ１（１：５００）、抗ＶＰＡＣ２（１：５００）モノクローナル抗体、並びにＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）由来の抗ＰＤ１（１：１０００）及び抗ＣＴＬＡ－４（１：５００）モノクローナル抗体を使用した。ＩＦについては、ＯｒｉＧｅｎｅ（クローンＯＴ１５Ｂ５）からの１：５０の抗ＶＩＰモノクローナル抗体及びＡｂｃａｍ（クローンＥＰ１５８０Ｙ）からの１：４００の抗ＣＫ１８モノクローナル抗体を使用した。フローサイトメトリー分析のための蛍光色素コンジュゲート抗体の詳細を表４に提供する。フローサイトメトリー分析を介して分析された全ての試料中の生細胞を検出し、ゲーティングするために、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）からの固定可能なアクアライブ／デッド染色を使用した。腫瘍特異的Ｔ細胞を同定するために、ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）からのＡＰＣコンジュゲートＭＨＣ Ｔｅｔｒａｍｅｒ Ｈ－２ｋｂ ＭｕＬＶ ｐ１５Ｅを使用した。

マウス。実験手順は全て、Ｅｍｏｒｙ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。雌又は雄のＣ５７ＢＬ／６、ＣＤ４ＫＯ（Ｂ６．１２９Ｓ２－Ｃｄ４^{ｔｍ１Ｍａｋ}／Ｊ）及びＣＤ８ＫＯ（Ｂ６．１２９Ｓ２－Ｃｄ８ａ^{ｔｍ１Ｍａｋ}／Ｊ）は、６～８週齢でＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から入手し、マイクロアイソレーターケージに収容した。Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンド上から増強緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）を発現するトランスジェニックマウス（株名称：Ｃ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（Ａｃｔ－ＥＧＦＰ）Ｃ１４－Ｙ０１－ＦＭ１３１ Ｏｓｂ）は、Ｄｒ．Ｍａｓａｒｕ Ｏｋａｂｅ（Ｏｓａｋａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）から贈呈され、Ｅｍｏｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙ（Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ）で飼育及び維持した。マウスが８～１０週齢のときに実験を実行し、Ｔｈｅ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ）に従って動物のケア及び維持を行った。ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞枯渇研究のために、ＢｉｏＸｃｅｌｌ（Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）からＣＤ４＋Ｔ細胞（クローンＧＫ１．５）又はＣＤ８＋Ｔ細胞（クローン２．４３）を枯渇させる抗体を、腫瘍移植に関して－３、－１、＋１、＋３、＋７日目に、実験の完了まで週に２回、マウス当たり２００μｇで腹腔内に注射した。

単一細胞懸濁液の調製。マウスＫＰＣ－Ｌｕｃ又はＰａｎｃ０２を有するマウスから採取した腫瘍組織又は腫瘍排出リンパ節（ＴＤＬＮ）を、メスを使用して小片に切断し、ＨＢＳＳ中に１０ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼ、１ｍｇ／ｍｌのヒアルロニダーゼ、及び２００ｍｇ／ｍｌのＤＮａｓｅを含む処理されたトリプル酵素消化カクテルを、３７℃で２０分間（ＴＤＬＮ）又は１時間（腫瘍）、１５分ごとにボルテックスした。次いで、組織片を機械的に解離し、洗浄し、遠心分離し、７０μｍのナイロンメッシュフィルターを通過させて、フローサイトメトリーによる染色及び分析のための単一細胞懸濁液を得た。脾臓試料については、機械的解離により得られた単一細胞懸濁液を７０μｍのナイロンメッシュフィルターに通し、塩化アンモニウム溶解緩衝液を用いて赤血球を枯渇させ、２回洗浄した。血液試料を、０．１ｍｌ希釈ヘパリン（５００ＵＳＰ単位／ｍｌ）を含むチューブに採取し、続いて塩化アンモニウム溶解緩衝液を使用して赤血球枯渇を行い、２回洗浄した。

ＶＩＰ特異的酵素イムノアッセイ。３×１０^５個のＢ１６Ｆ１０、ＫＰＣ－Ｌｕｃ、ＭＴ５、Ｐａｎｃ０２、ＢＸＰＣ３、及びＰａｎｃ１細胞を、それぞれ３ｍｌの培地を有する６ウェルプレート中で培養した。無細胞培地は、培養の２４時間後に収集し、ＶＩＰレベルについて試験するまで－８０℃で保管した。同意したＰＤＡＣ患者及びＥＤＴＡチューブ中の健康なボランティアから採取した末梢血を２０００ｇで１０分間遠心分離して血漿を単離し、分析まで－８０℃で保管した。無細胞上清及び血漿中のＶＩＰレベルを、製造業者のプロトコル（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ、Ｐｅａｃｈｔｒｅｅ Ｃｏｒｎｅｒｓ，Ｇｅｏｒｇｉａ）に従ってＶＩＰ特異的酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）キットによって定量した。吸光度を、シナジープレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，Ｖｅｒｍｏｎｔ）を使用して、４５０ｎｍにて測定し、標準曲線を生成し、試料中のＶＩＰの濃度を決定するために使用した。

細胞生存率アッセイ。ＰＤＡＣ細胞株の増殖に対するＡｎｔ－０８の効果をインビトロで決定するために、ＭＴ５、ＫＰＣ－Ｌｕｃ、Ｐａｎｃ０２、ＢＸＰＣ３、Ｃａｐａｎ－０２及び細胞を９６ウェルプレート上にプレートし、それぞれの培地中の様々な濃度のＡｎｔ－０８（０～５μＭ）で２４～７２時間処理した。細胞生存率を、Ｒｏｃｈｅ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）からの細胞増殖キットＩを製造業者の指示に従って使用して評価した。簡潔に述べると、インキュベーション時間の終了時に、１０ｕｌの０．５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ標識試薬を添加し、プレートを加湿ＣＯ２インキュベーター内で４時間インキュベーションした。これに続いて、可溶化緩衝液で一晩インキュベートし、５７０ｎｍで吸光度を読み取った。対照（０μＭ ＡＮＴ００８）に対する細胞生存率のパーセンテージをプロットした。Ａｎｔ－０８又はＡｎｔ－３０８（３μｍ）で７２時間処理した後、野生型及びＶＰＡＣ２ ＫＯ Ｐａｎｃ０２細胞について同様のアッセイを実行した。

インビボ有効性研究。皮下モデルについて、５×１０^５個のＫＰＣ－Ｌｕｃ細胞を、雌又は雄のＣ５７ＢＬ／６マウスの右脇腹の近くに皮下注入した。ＭＴ５又はＰａｎｃ０２モデルについて、５×１０^５個を、雌のＣ５７ＢＬ／６マウスの右脇腹の近くに皮下注入した。同所性ＫＰＣ－Ｌｕｃモデルについては、マウスを麻酔し、ＫＰＣ－Ｌｕｃ細胞をＭａｔｒｉｇｅｌ中に懸濁し、開腹術後に膵臓の尾部に注入した。腫瘍移植の６～７日後、マウスを４つの処置群に無作為化し、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び／又は抗ＰＤ－１で処置した。ｓｃｒａｍ＋ＩｇＧ対照マウスは、スクランブルペプチド及びアイソタイプＩｇＧを受けたが、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト群、抗ＰＤ－１及びＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト群、並びに抗ＰＤ－１群は、それぞれ、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及びＩｇＧ、スクランブルペプチド及び抗ＰＤ－１、並びにＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト及び抗ＰＤ－１を受けた。治療レジメンは、１０μｇのスクランブル又はＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト：ＡＮＴ００８又はＡＮＴ３０８を毎日皮下投与し、２００μｇのＩｇＧ又は抗ＰＤ－１を３日に１回腹腔内投与し、合計１０日間投与した。雄マウスを用いた実験では、雌マウスと比較して体重が高いため、２０μｇのＶＩＰ－Ｒアンタゴニストを使用した。実験では、ＡＭＤ ３１００を受けたマウスに、ＰＢＳ中の５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００を１０日間毎日皮下投与した。ＫＰＣ－Ｌｕｃモデルにおいて、腫瘍増殖率は、ＩＶＩＳ生物発光イメージングを使用して定量された腫瘍流量測定値を使用してプロットした。同所性ＫＰＣ－Ｌｕｃモデルでは、最大の非潰瘍性腫瘍を有する群当たり１匹のマウスを２８日目に屠殺し、カスタム構築されたクレードル内に仰臥位に置き、９．４ Ｔｅｓｌａ ＭＲＩスキャナーで画像化した。スライス厚０．４ｍｍ、マウス当たり合計４０スライス（ＲＡＲＥ係数＝８、平均＝２５、視野＝３０．７×３０．７ｍｍ^２）で、緩和促進を伴う迅速収集（ｒａｐｉｄ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ、ＲＡＲＥ）イメージング配列を使用した。皮下腫瘍を用いた実験では、ノギスを使用して腫瘍寸法を測定し、腫瘍体積＝１／２（長さ×幅×高さ）の式を使用して腫瘍体積を計算した。

腫瘍浸潤Ｔ細胞のナノストリング分析。腫瘍の単細胞浮遊液を、ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）のＥａｓｙＳｅｐ（商標）マウスＣＤ９０．２陽性選択キットＩＩを使用して磁気Ｔ細胞単離に供した。Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏキットを使用してＲＮＡを抽出し、量及び質をＮａｎｏｄｒｏｐ及びＡｇｉｌｅｎｔ ２１００を使用して評価した。ｎＣｏｕｎｔｅｒ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｐａｔｈｗａｙｓ Ｐａｎｅｌ（Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を使用して分析したＲＮＡ。

ＴＣＲディープシーケンシング ＡＮＴ００８及び／又は抗ＰＤ－１で処置した皮下移植ＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍を、腫瘍移植後２１日目に採取した。Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏキットを使用してＲＮＡを抽出し、量及び質をＮａｎｏｄｒｏｐ及びＡｇｉｌｅｎｔ ２１００を使用して評価した。Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）によって実行されるＴＣＲ－β ＣＤＲ３ Ｖ及びＪ配列の配列決定。

ヒトＴ細胞の活性化及び増殖。インビトロＴ細胞増殖の１日前に、凍結保存されたＰＢＭＣを、１０％のＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００ｕｇ／ｍＬのストレプトマイシン、ＭＥＭ非必須アミノ酸、２０ｍＭのＮ－２－ヒドロキシエチルピペラジン－Ｎ－２－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、及び５０ｕＭの２－メルカプトエタノールを補充した完全なＲＰＭＩ培地中で、５％ＣＯ_２加湿インキュベーターで３７℃で一晩培養することによって解凍し、休息させた。ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）のＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キットを用いて、負の磁気単離によってＴ細胞を単離した。５０，０００～１００万個のＴ細胞を、１０ｕｇ／ｍｌの、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）からのＵｌｔｒａ－ＬＥＡＦ精製抗ヒトＣＤ３抗体（クローン：ＵＣＨＴ１）Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）でコーティングし、３μＭのスクランブルペプチド、ＡＮＴ００８又はＡＮＴ３０８の存在下又は非存在下で、３０Ｕ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｃｒａｎｂｕｒｙ，ＮＪ）とともに培養した。細胞をＴｒｙｐａｎブルー染料を使用してカウントし、９日目にフローサイトメトリーにより表現型決定した。３又は４日ごとに、細胞を６又は４８ウェル又は抗ヒトＣＤ３でコーティングしたプレートに分割した。

ペプチド。ＡＮＴ００８は、アミノ酸位置２５のセリンをロイシンに置き換えることによって修飾されたＶＩＰｈｙｂのペプチド配列を有する。ＡＮＴ３０８は、８位及び９位のアスパラギン酸及びアスパラギン残基を、それぞれ、セリン及びアスパラギン酸に置き換える、ＡＮＴ００８配列の更なる修飾である。（インシリコ解析によると、ＡＮＴ００８：ＶＰＡＣ１については－６０．１７ｋｃａｌ／ｍｏｌの自由結合エネルギー、ＶＰＡＣ２については－５１．０７、ＡＮＴ３０８：ＶＰＡＣ１については－７１．５６、及びＶＰＡＣ２については－５６．２７）。

ＧＦＰ＋Ｔ細胞の養子移入 １００万個のＫＰＣ－Ｌｕｃ細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植した。腫瘍移植後１５日目に、ＥＧＦＰトランスジェニックマウスから脾臓を採取し、上記のように処理し、Ｔ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）からのＰａｎ Ｔ細胞単離キットＩＩを使用して磁気的に単離した。次に、１０００万個のＧＦＰ＋Ｔ細胞を、ＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍を保有するＣ５７ＢＬ／６マウスに静脈内に注射した。マウスを、ｓｃｒａｍ＋ＩｇＧ、ＡＮＴ３０８＋ＩｇＧ、ｓｃｒａｍ＋ａＰＤ－１、ＡＮＴ３０８＋ａＰＤ－１の４つの処置群に無作為に分け、Ｔ細胞移入後１、２及び３日目に１０ｕｇのスクランブルペプチド／ＡＮＴ３０８、並びに／又は１日目に２００ｕｇのＩｇＧ若しくは抗ＰＤ－１で皮下処置した。腫瘍移植後１８日目にマウスを屠殺し、採取した腫瘍をＯＣＴ化合物（Ｓａｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）中でフラッシュ凍結して包埋及び凍結切除した。次いで、組織スライドを２ｕｇ／ｍｌのＨｏｅｓｃｈｔ ３３３４２（Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）で染色し、ＤＡＰＩ（３５９ｎｍ／４６１ｎｍ）及びＧＦＰ（４８８ｎｍ／５１０ｎｍ）フィルターセット（Ｃｈｒｏｍａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐ、Ｂｅｌｌｏｗｓ Ｆａｌｌｓ，ＶＴ）を使用してＢＺ－Ｘ８１０落射蛍光顕微鏡（Ｋｅｙｅｎｃｅ Ｃｏｒｐ，Ｉｔａｓｃａ，ＩＬ）で画像化した。Ｎｉｋｏｎ Ｉｎｃ．（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）のＰｌａｎ Ｆｌｕｏｒ ４０×１．３ＮＡオイル浸漬対物レンズを、励起源からの光の１００％が試料に到達し、１／１．２秒のカメラ露光、及び１９２０×１４４０の画像アスペクト比で使用した。複数の画像を組織切片全体にまたがって取得し、次いでＫｅｙｅｎｃｅの画像ステッチャー機能を使用してステッチし、フィジー画像分析ソフトウェアを使用して合成画像にマージした。

免疫蛍光。パラフィン包埋ＰＤＡＣ組織及び隣接する正常組織を脱パラフィン化し、水和させ、１×Ｔｒｉｌｏｇｙで１５分間沸騰させ（Ｃｅｌｌ Ｍａｒｑｕｅ－Ｔｒｉｌｏｇｙ Ｂｕｆｆｅｒ）、その後蒸留水で洗浄することによって抗原を回収した。透過化を、０．３％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００を使用して実行し、続いて、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）低タンパク質遮断緩衝液を用いて、室温で１時間遮断ステップを行った。１：５０で希釈したマウス抗ＶＩＰ（ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、及び１：４００で希釈したウサギ抗サイトケラチン－１９（Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を適用し、４℃で一晩インキュベートした。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７とコンジュゲートされた抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）及びＴＲＩＴＣとコンジュゲートされた抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）の二次抗体を適用し、室温で１時間インキュベートした。次いで、組織スライドを２ｕｇ／ｍｌのＨｏｅｓｃｈｔ ３３３４２（Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）で染色し、ＤＡＰＩ（３５９ｎｍ／４６１ｎｍ）及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（５９４ｎｍ／６３３ｎｍ）及びＴＲＩＴＣ（５７９ｎｍ／５９９ｎｍ）フィルターセット（Ｃｈｒｏｍａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐ、Ｂｅｌｌｏｗｓ Ｆａｌｌｓ，ＶＴ）を使用してＢＺ－Ｘ８１０落射蛍光顕微鏡（Ｋｅｙｅｎｃｅ Ｃｏｒｐ、Ｉｔａｓｃａ，ＩＬ）で画像化した。Ｎｉｋｏｎ Ｉｎｃ．（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）のＰｌａｎ Ｆｌｕｏｒ ４０×１．３ＮＡオイル浸漬対物レンズを、励起源からの光の１００％が試料に到達し、１／１．７秒のカメラ露光、及び１９２０×１４４０の画像アスペクト比で使用した。複数の画像を組織切片全体にまたがって取得し、次いでＫｅｙｅｎｃｅの画像ステッチャー機能を使用してステッチし、フィジー画像分析ソフトウェアを使用して合成画像にマージした。

組織学。組織学のための全ての組織を、４℃で２～３日間、ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒド中に固定し、パラフィン中に埋め込み、５μｍの厚さの切片に切断した。スライドをＥＺ－Ｐｒｅｐ（＃０５２７９７７１００１、Ｖｅｎｔａｎａ、Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）で脱パラフィン化し、次いでＣＣ１試薬（＃９５０－５００、Ｖｅｎｔａｎａ、Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）で６４分間抗原を回収した。１：５００で希釈したＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）からのマウス抗ＶＰＡＣ１及び抗ＶＰＡＣ２、又は１：５００で希釈したウサギ抗サイトケラチン－１９（Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を適用し、４０分間インキュベートした。ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ ＯｍｎｉＭａｐ抗マウス又は抗ウサギＨＲＰを適用し、１２分間インキュベートした。検出は、製造業者の推奨に従って、ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ ＣｈｒｏｍｏＭａｐ ＤＡＢキットと組み合わせて完了した。Ｈ＆Ｅ（Ｌｅｉｃａ ５６０ＭＸ、Ｗｅｔｚｌａｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）又はＭａｓｓｏｎ’ｓ Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ｂａｙ Ｓｈｏｒｅ，ＮＹ）で染色される前に、ＡＮＴ００８又はＡＮＴ３０８を受けているナイーブなＣ５７ＢＬ／６マウスから採取された、同所的に移植されたＫＰＣ－Ｌｕｃ腫瘍又は結腸、肝臓及び膨張した肺を有するマウスから採取した膵臓を、ホルマリン固定し、パラフィン包埋した。全てのスライドを脱水し、カバースリップし、Ｈａｍａｍａｔｓｕ Ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒ ２．０ ＨＴで４０倍でスキャンし、病理学者がレビューした。

多重免疫組織化学多重ＩＨＣ染色を、Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）のＲｏｃｈｅ Ｖｅｎｔａｎａ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ自動免疫染色装置上で実行した。Ｖｅｎｔａｎａ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹは、各染色配列の間に変性ステップを伴う逐次染色手順を使用する。スライドをＥＺ－Ｐｒｅｐ（＃０５２７９７７１００１、Ｖｅｎｔａｎａ）で脱パラフィン化し、次いでＣＣ１試薬（＃９５０－５００、Ｖｅｎｔａｎａ）で６４分間抗原を回収した。細胞コンディショニング２緩衝液（ＣＣ２、＃９５０－１２３、Ｖｅｎｔａｎａ）を、各染色配列間の結合した一次抗体及び二次抗西洋ワサビペルオキシダーゼの不活性化に使用した。４つの予め希釈された一次抗体を、指示された発色検出を使用して、それぞれ１：３００、１：５００、１：５００、及び１：２５０の希釈で、以下の順序で順次適用した：Ｏｐａｌ ５７０を含むウサギ抗Ｋｉ６７（＃ａｂ８３３、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）、Ｏｐａｌ ４８０を含むウサギ抗Ｆｏｘｐ３（＃ＮＢ１００－３９００２、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ，ＣＯ）、Ｏｐａｌ ６２０を含むウサギモノクローナルＣＤ４（＃ａｂ１３３６１６、Ａｂｃａｍ）、及びＯｐａｌ ６９０を有するウサギ抗ＣＤ８（＃ａｂ４０５５、Ａｂｃａｍ）。スライドをＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ Ａｎｔｉｆａｄｅ取り付け媒体（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）でスライドカバーし、染色したスライドを４℃で保管した。ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、Ｋｉ６７＋ＣＤ４＋及びＫｉ６７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の数を、デジタル病理画像解析のためのオープンソースソフトウェアであるＱｕＰａｔｈを用いて定量した。

統計。生存データについては、対数ランク検定を用いたカプラン・マイヤー法を実行して、処置群間の統計的差異を決定した。４つの処置群を比較した腫瘍体積及び免疫細胞サブセットの差異の比較のために、一元配置分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）、続いてダネットの多重比較事後検定を使用した。健康なボランティアからのＴ細胞のエクスビボ増殖からのデータについて、繰り返し測定ＡＮＯＶＡを使用し、続いてダネットの事後検定を行った。ＰＤＡＣ患者からのＴ細胞の増殖からのデータについては、Ｔ細胞表現型であり、スクランブルされたものと処置されたＡＮＴ００８との間の特徴を比較し、ペアワイズスチューデントｔ検定を利用した。図３０ｄ～３０ｇにおいて、Ｒ－２乗値は、線形回帰モデルから生成された。０．０５未満のＰ値を有意とみなした。統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアバージョン８．２（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して実施した。

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３９．Ｒｏｙａｌ，Ｒ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｓｅ ２ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ａｇｅｎｔ Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ（ａｎｔｉ－ＣＴＬＡ－４）ｆｏｒ ｌｏｃａｌｌｙ ａｄｖａｎｃｅｄ ｏｒ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２０１０．３３（８）：ｐ．８２８－３３．
４０．Ｓａｋａ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ ｉｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒｓ（Ｂａｓｅｌ），２０２０．１２（８）．
４１．Ｂａｌａｃｈａｎｄｒａｎ，Ｖ．Ｐ．，Ｇ．Ｌ．Ｂｅａｔｔｙ，ａｎｄ Ｓ．Ｋ．Ｄｏｕｇａｎ，Ｂｒｏａｄｅｎｉｎｇ ｔｈｅ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｔｏ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｃａｎｃｅｒ：Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ａｎｄ Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１９．１５６（７）：ｐ．２０５６－２０７２．
４２．Ｍａｒｔｉｎｅｚ－Ｂｏｓｃｈ，Ｎ．，Ｊ．Ｖｉｎａｉｘａ，ａｎｄ Ｐ．Ｎａｖａｒｒｏ，Ｉｍｍｕｎｅ Ｅｖａｓｉｏｎ ｉｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｃａｎｃｅｒ：Ｆｒｏｍ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒｓ（Ｂａｓｅｌ），２０１８．１０（１）．
４３．Ｗａｔｔ，Ｊ．ａｎｄ Ｈ．Ｍ．Ｋｏｃｈｅｒ，Ｔｈｅ ｄｅｓｍｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｔｒｏｍａ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｉｓ ａ ｂａｒｒｉｅｒ ｔｏ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３．２（１２）．
４４．Ｇｏｒｃｈｓ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ Ｐｒｏｍｏｔｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｏ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｍａｒｋｅｒｓ ｏｎ ＣＤ４（＋）ａｎｄ ＣＤ８（＋）Ｔ－Ｃｅｌｌｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１９．１０：ｐ．８４７．
４５．Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｒ．Ｌ．ａｎｄ Ｅ．Ｐｕｒｅ，Ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｎ ｔｈｅｉｒ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｅｌｉｆｅ，２０２０．９．
４６．Ｗａｒｅ，Ｍ．Ｂ．，Ｂ．Ｆ．Ｅｌ－Ｒａｙｅｓ，ａｎｄ Ｇ．Ｂ．Ｌｅｓｉｎｓｋｉ，Ｍｉｒａｇｅ ｏｒ ｌｏｎｇ－ａｗａｉｔｅｄ ｏａｓｉｓ：ｒｅｉｎｖｉｇｏｒａｔｉｎｇ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ，２０２０．８（２）．
４７．Ｓａｃｋｓｔｅｉｎ，Ｒ．，Ｔ．Ｓｃｈａｔｔｏｎ，ａｎｄ Ｓ．Ｒ．Ｂａｒｔｈｅｌ，Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｈｏｍｉｎｇ：ａｎ ｕｎｄｅｒａｐｐｒｅｃｉａｔｅｄ ｙｅｔ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｈｕｒｄｌｅ ｆｏｒ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ，２０１７．９７（６）：ｐ．６６９－６９７．
４８．Ｆｅａｒｏｎ，Ｄ．Ｔ．ａｎｄ Ｔ．Ｊａｎｏｗｉｔｚ，ＡＭＤ３１００／Ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ ｉｍｍｕｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ＣＸＣＬ１２－ＫＲＴ１９ ｃｏａｔｉｎｇ ｏｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｎｄ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２０２１．
４９．Ｍａｒｅｃｈａｌ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＸＣＲ４ ｍａｙ ｐｒｅｄｉｃｔ ｐｏｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｒｅｓｅｃｔｅｄ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，２００９．１００（９）：ｐ．１４４４－１４５１．
５０．Ｚｈａｎｇ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｂｙ ｗｈｉｃｈ ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２ ｃａｕｓｅ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１８．１５（２）：ｐ．１７７１－１７７６．
５１．Ｗｅｉ，Ｓ．Ｃ．，Ｃ．Ｒ．Ｄｕｆｆｙ，ａｎｄ Ｊ．Ｐ．Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ，２０１８．８（９）：ｐ．１０６９－１０８６．
５２．Ｈｅ，Ｘ．ａｎｄ Ｃ．Ｘｕ，Ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，２０２０．３０（８）：ｐ．６６０－６６９．
５３．Ｗｅｎ，Ａ．Ｙ．，Ｋ．Ｍ．Ｓａｋａｍｏｔｏ，ａｎｄ Ｌ．Ｓ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＣＲＥＢ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１０．１８５（１１）：ｐ．６４１３－９．
５４．ｖｏｎ Ｅｕｗ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，ＣＴＬＡ４ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ Ｔｈ１７ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ，２００９．７：ｐ．３５．
５５．Ａｂａｄ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｌｏｓｓ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｉｍｐａｉｒｅｄ ＣＮＳ ｐａｒｅｎｃｈｙｍａｌ Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ，２０１０．１０７（４５）：ｐ．１９５５５－６０．
５６．Ｃｏｌｗｅｌｌ，Ｃ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ ｃｉｒｃａｄｉａｎ ｒｈｙｔｈｍｓ ｉｎ ＶＩＰ－ａｎｄ ＰＨＩ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｇｕｌ Ｉｎｔｅｇｒ Ｃｏｍｐ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００３．２８５（５）：ｐ．Ｒ９３９－４９．
５７．Ｃｈａｕｄｈｕｒｙ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｅｃｔ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｄｅｆｉｃｉｔｓ ｉｎ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．ＢＭＣ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００８．９：ｐ．６３．
５８．Ｐｈａｍ，Ｔ．Ｎ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｄｕｃｔａｌ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｔｉｌｉｔｙ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ Ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒｓ（Ｂａｓｅｌ），２０２１．１３（３）．
５９．Ｄｏｗ，Ｓ．，Ａ Ｒｏｌｅ ｆｏｒ Ｄｏｇｓ ｉｎ Ａｄｖａｎｃｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１９．１０：ｐ．２９３５．
６０．Ａｂａｄ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，ＶＰＡＣ１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（Ｖｉｐｒ１）－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ ｅｘｈｉｂｉｔ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ，ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅｆｉｃｉｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｓｔａｇｅ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１６．１３（１）：ｐ．１６９．
６１．Ｍｏｏｄｙ，Ｔ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ａ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｇｒｏｗｔｈ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ，１９９３．９０（１０）：ｐ．４３４５－９．
６２．Ｓｈａｒｍａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ａ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００１．１７（３）：ｐ．３３１－９．
６３．Ｍｏｏｄｙ，Ｔ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，ＶＩＰ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｍａｍｍａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｃ３（１）ＳＶ４０Ｔ ａｎｔｉｇｅｎ ｍｉｃｅ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２００４．７４（１１）：ｐ．１３４５－５７．
６４．Ｍｏｏｄｙ，Ｔ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ－ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，２００７．２８（９）：ｐ．１８８３－９０．
６５．Ｐｌｏｎｏｗｓｋｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＰＣ－３ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒｓ ｂｙ ａｎａｌｏｇｓ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ－ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ（ＧＨ－ＲＨ）ｅｎｄｏｗｅｄ ｗｉｔｈ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ（ＶＩＰ）ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００２．９８（４）：ｐ．６２４－９．
６６．Ｚｉａ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，（Ｎ－ｓｔｅａｒｙｌ，ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ１７）ＶＩＰ ｈｙｂｒｉｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２０００．６６（５）：ｐ．３７９－８７．
６７．Ｊｉａｎｇ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ（ＶＩＰ）ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＶＩＰ－１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９７．５７（８）：ｐ．１４７５－８０．
６８．Ｓａｉｄ，Ｓ．Ｉ．ａｎｄ Ｖ．Ｍｕｔｔ，Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｗｉｔｈ ｂｒｏａｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ：ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７０．１６９（３９５１）：ｐ．１２１７－８．
６９．Ｄｅｌｇａｄｏ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，ＶＩＰ ａｎｄ ＰＡＣＡＰ ｉｎｈｉｂｉｔ ＩＬ－１２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ＬＰＳ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ＩＦＮ ｇａｍｍａ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９９．９６（２）：ｐ．１６７－１８１．
７０．Ｄｅｌｇａｄｏ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ（ＶＩＰ）ａｎｄ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ ａｄｅｎｙｌａｔｅ ｃｙｃｌａｓｅ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＰＡＣＡＰ）ｉｎｈｉｂｉｔ ＩＬ－１２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ＬＰＳ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｆａｓｅｂ Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９９．１３（４）：ｐ．Ａ３２０－Ａ３２０．
７１．Ｓｍａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｇ．，Ｐ．Ａ．Ｂａｒｒｏｗ，ａｎｄ Ｎ．Ｆｏｓｔｅｒ，Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ（ＶＩＰ）：ｉｔｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００９．１５７（２）：ｐ．２２５－３４．
７２．Ｃｈｏｒｎｙ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｐｒｅｖｅｎｔ ａｃｕｔｅ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｗｈｉｌｅ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｂｌｏｏｄ，２００６．１０７（９）：ｐ．３７８７－３７９４．
７３．Ｄｅｌｇａｄｏ，Ｍ．，Ｅ．Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｒｅｙ，ａｎｄ Ｄ．Ｇａｎｅａ，Ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｇｅｎｅｒａｔｅｓ ｔｏｌｅｒｏｇｅｎｉｃ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００５．１７５（１１）：ｐ．７３１１－２４．
７４．Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，ＰＤ－Ｌ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｂｙ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｐｏｏｒ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ，２０１９．１１０（１）：ｐ．３１０－３２０．
７５．Ｊａｎｓｅｎ，Ｃ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎ ｉｎｔｒａ－ｔｕｍｏｒａｌ ｎｉｃｈｅ ｍａｉｎｔａｉｎｓ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｓ ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ ＣＤ８ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ，２０１９．５７６（７７８７）：ｐ．４６５－４７０．
７６．Ａｄａｍｓ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ－ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｌｏｃａｌｌｙ ａｄｖａｎｃｅｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ：ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｆｉｖｅ－ｙｅａｒ ｏｖｅｒａｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ，２０１０．１２４（３）：ｐ．７２３－３２．
７７．Ｓｅｎａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｇｈ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｐｓｔｒｅａｍ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｏｕｓｅ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ（ＶＩＰ）ｇｅｎｅｓ．ＤＮＡ Ｓｅｑ，１９９４．５（１）：ｐ．２５－９．
７８．Ｋｏｍａｒ，Ｈ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｊａｋ／ＳＴＡＴ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｌｉｍｉｔｓ ｃａｅｒｕｌｅｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ，２０１７．７（１）：ｐ．１７８７．
７９．Ｍａｃｅ，Ｔ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｍｏｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ ＳＴＡＴ３－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１３．７３（１０）：ｐ．３００７－１８．
８０．Ｔｈａｖａｓｕ，Ｐ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｂｌｏｏｄ．Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔｓ，ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，ａｎｄ ｓｔｏｒａｇｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９２．１５３（１－２）：ｐ．１１５－２４．
８１．Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｃ．Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ａｄｏｐｔｉｖｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｕｓｉｎｇ ｅｘ ｖｉｖｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ＰＩ３Ｋｄｅｌｔａ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｎｄ ＶＩＰ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖ，２０１８．２（３）：ｐ．２１０－２２３．
８２．Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，ＦＩＳＨ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ １４２ ＥＧＦＰ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｇｅｎｏｍｅ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２００２．８０（６）：ｐ．５６４－７４．

Ｂ．配列
配列番号１：ＶＩＰｈｙｂのアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ
配列番号２：天然血管作動性腸ペプチド（ＶＩＰ）のアミノ酸配列
ＨＳＤＡＶＦＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ
配列番号３：アミノ酸ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストのコンセンサス配列
ＫＰＲＲＰＹＸ^１Ｘ^２Ｘ^３Ｘ^４ＴＸ^５ＬＲＫＱＸ^６ＡＶＸ^７Ｘ^８ＫＹＬＸ^９Ｘ^１０ＩＬＮ
配列番号４：拮抗ペプチドＡＮＴ００５のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＣＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ
配列番号５：拮抗ペプチドＡＮＴ００８のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＬＩＬＮ
配列番号６：拮抗ペプチドＡＮＴ０５８のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＡＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＮＫＹＬＮＬＩＬＮ
配列番号７：拮抗ペプチドＡＮＴ１０５のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＹＴＲＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＳＩＬＮ
配列番号８：拮抗ペプチドＡＮＴ１０７のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＮＫＹＬＭＳＩＬＮ
配列番号９：拮抗ペプチドＡＮＴ１１４のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＡＤＮＣＴＲＬＲＫＱＩＡＶＮＫＫＹＬＮＳＩＬＮ
配列番号１０：拮抗ペプチドＡＮＴ１９５のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＴＶＮＹＴＳＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＬＩＬＮ
配列番号１１：拮抗ペプチドＡＮＴ１９７のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＮＫＹＬＮＬＩＬＮ
配列番号１２：拮抗ペプチドＡＮＴ２０２のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＮＫＹＬＮＳＩＬＮ
配列番号１３：拮抗ペプチドＡＮＴ２０３のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＳＩＬＮ
配列番号１４：拮抗ペプチドＡＮＴ２１９のアミノ酸配列
ＫＫＰＲＲＰＹＴＶＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＬＩＬＮ
配列番号１５：拮抗ペプチドＡＮＴ３００のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＴＳＤＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ
配列番号１６：拮抗ペプチドＡＮＴ３０８のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＴＳＤＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＬＩＬＮ
配列番号１７：スクランブルペプチドＳＣＲＡＭ１のアミノ酸配列
ＨＳＤＡＶＦＩＮＴＫＬＤＫＬＮＴＲＬＶＳＡＱＮＹＭＫＹＲ
配列番号１８：スクランブルペプチドＳＣＲＡＭ２のアミノ酸配列
ＫＰＲＲＰＹＩＮＴＫＬＤＫＬＮＴＲＬＶＳＡＱＮＹＭＫＹＲ
配列番号１９ヒトＣＭＡ１ 受託番号ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＩ０３９７５．１：
ＭＬＬＫＬＫＥＫＡＳＬＴＬＡＶＧＴＬＰＦＰＳＱＦＮＦＶＰＰＧＲＭＣＲＶＡＧＷＧＲＴＧＶＬＫＰＧＳＤＴＬＱＥＶＫＬＲＬＭＤＰＱＡＣＳＨＦＲＤＦＤＨＮＬＱＬＣＶＧＮＰＲＫＴＫＳＡＦＫＧＤＳＧＧＰＬＬＣＡＧＶＡＱＧＩＶＳＹＧＲＳＤＡＫＰＰＡＶＦＴＲＩＳＨＹＲＰＷＩＮＱＩＬＱＡＮ
配列番号２０：ヒト組換えエンケファリナーゼのアミノ酸配列（中性エンドペプチダーゼ、ＥＣ ３．４．２４．１１）
ＤＧＩＣＫＳＳＤＣＩＫＳＡＡＲＬＩＱＮＭＤＡＴＴＥＰＣＴＤＦＦＫＹＡＣＧＧＷＬＫＲＮＶＩＰＥＴＳＳＲＹＧＮＦＤＩＬＲＤＥＬＥＶＶＬＫＤＶＬＱＥＰＫＴＥＤＩＶＡＶＱＫＡＫＡＬＹＲＳＣＩＮＥＳＡＩＤＳＲＧＧＥＰＬＬＫＬＬＰＤＩＹＧＷＰＶＡＴＥＮＷＥＱＫＹＧＡＳＷＴＡＥＫＡＩＡＱＬＮＳＫＹＧＫＫＶＬＩＮＬＦＶＧＴＤＤＫＮＳＶＮＨＶＩＨＩＤＱＰＲＬＧＬＰＳＲＤＹＹＥＣＴＧＩＹＫＥＡＣＴＡＹＶＤＦＭＩＳＶＡＲＬＩＲＱＥＥＲＬＰＩＤＥＮＱＬＡＬＥＭＮＫＶＭＥＬＥＫＥＩＡＮＡＴＡＫＰＥＤＲＮＤＰＭＬＬＹＮＫＭＴＬＡＱＩＱＮＮＦＳＬＥＩＮＧＫＰＦＳＷＬＮＦＴＮＥＩＭＳＴＶＮＩＳＩＴＮＥＥＤＶＶＶＹＡＰＥＹＬＴＫＬＫＰＩＬＴＫＹＳＡＲＤＬＱＮＬＭＳＷＲＦＩＭＤＬＶＳＳＬＳＲＴＹＫＥＳＲＮＡＦＲＫＡＬＹＧＴＴＳＥＴＡＴＷＲＲＣＡＮＹＶＮＧＮＭＥＮＡＶＧＲＬＹＶＥＡＡＦＡＧＥＳＫＨＶＶＥＤＬＩＡＱＩＲＥＶＦＩＱＴＬＤＤＬＴＷＭＤＡＥＴＫＫＲＡＥＥＫＡＬＡＩＫＥＲＩＧＹＰＤＤＩＶＳＮＤＮＫＬＮＮＥＹＬＥＬＮＹＫＥＤＥＹＦＥＮＩＩＱＮＬＫＦＳＱＳＫＱＬＫＫＬＲＥＫＶＤＫＤＥＷＩＳＧＡＡＶＶＮＡＦＹＳＳＧＲＮＱＩＶＦＰＡＧＩＬＱＰＰＦＦＳＡＱＱＳＮＳＬＮＹＧＧＩＧＭＶＩＧＨＥＩＴＨＧＦＤＤＮＧＲＮＦＮＫＤＧＤＬＶＤＷＷＴＱＱＳＡＳＮＦＫＥＱＳＱＣＭＶＹＱＹＧＮＦＳＷＤＬＡＧＧＱＨＬＮＧＩＮＴＬＧＥＮＩＡＤＮＧＧＬＧＱＡＹＲＡＹＱＮＹＩＫＫＮＧＥＥＫＬＬＰＧＬＤＬＮＨＫＱＬＦＦＬＮＦＡＱＶＷＣＧＴＹＲＰＥＹＡＶＮＳＩＫＴＤＶＥＳＰＧＮＦＲＩＩＧＴＬＱＮＳＡＥＦＳＥＡＦＨＣＲＫＮＳＹＭＮＰＥＫＫＣＲＶＷ
配列番号２１
ＫＰＲＲＰＹＸ^１Ｘ^２Ｘ^３Ｘ^４ＴＸ^５ＬＲＫＱＸ^６ＡＶＸ^７ＫＹＬＸ^８Ｘ^９ＩＬＮ
配列番号２２
ＧＧＧＧＳＣ

Claims (76)

1. ＫＰＲＲＰＹＸ^１Ｘ^２Ｘ^３Ｘ^４ＴＸ^５ＬＲＫＱＸ^６ＡＶＸ^７Ｘ^８ＫＹＬＸ^９Ｘ^１０ＩＬＮ（配列番号３）又はその断片を含む、血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニストであって、式中、
   Ｘ^１が、Ｔ又はＡであり、
   Ｘ^２が、Ｄ、Ｖ、又はＳであり、
   Ｘ^３が、Ｎ又はＤであり、
   Ｘ^４が、Ｙ又はＣであり、
   Ｘ^５が、Ｒ又はＳであり、
   Ｘ^６が、Ｍ又はＩであり、
   Ｘ^７が、Ｋ又はＮであり、
   Ｘ^８が、Ｋであり、
   Ｘ^９が、Ｎ又はＭであり、
   Ｘ^１０が、Ｓ又はＬであり、
   但し、前記ペプチドは、ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号１）でもなく、Ｘ^１がＴであり、Ｘ^２がＤであり、Ｘ^３がＮであり、Ｘ^４がＹであり、Ｘ^５がＲであり、Ｘ^６がＭであり、Ｘ^７がＫであり、Ｘ^９がＮであり、Ｘ^１０がＳである組み合わせでもない、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト。
2. ＫＰＲＲＰＹＸ^１Ｘ^２Ｘ^３Ｘ^４ＴＸ^５ＬＲＫＱＸ^６ＡＶＸ^７ＫＹＬＸ^８Ｘ^９ＩＬＮ（配列番号２１）又はその断片を含む、血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニストであって、式中、
   Ｘ^１が、Ｔ又はＡであり、
   Ｘ^２が、Ｄ、Ｖ、又はＳであり、
   Ｘ^３が、Ｎ又はＤであり、
   Ｘ^４が、Ｙ又はＣであり、
   Ｘ^５が、Ｒ又はＳであり、
   Ｘ^６が、Ｍ又はＩであり、
   Ｘ^７が、Ｋ又はＮであり、
   Ｘ^８が、Ｎ又はＭであり、
   Ｘ^９が、Ｓ又はＬであり、
   但し、前記ペプチドは、ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号１）でもなく、Ｘ^１がＴであり、Ｘ^２がＤであり、Ｘ^３がＮであり、Ｘ^４がＹであり、Ｘ^５がＲであり、Ｘ^６がＭであり、Ｘ^７がＫであり、Ｘ^８がＮであり、Ｘ^９がＳである組み合わせでもない、ＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト。
3. 前記ＶＩＰ－Ｒアンタゴニストが、アミノ酸配列：
   ＫＰＲＲＰＹＡＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＮＫＹＬＮＬＩＬＮ（配列番号６）、
   ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＹＴＲＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＳＩＬＮ（配列番号７）、
   ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＮＫＹＬＭＳＩＬＮ（配列番号８）、
   ＫＰＲＲＰＹＡＤＮＣＴＲＬＲＫＱＩＡＶＮＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号９）、
   ＫＰＲＲＰＹＴＶＮＹＴＳＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＬＩＬＮ（配列番号１０）、
   ＫＰＲＲＰＹＴＤＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＮＫＹＬＮＬＩＬＮ（配列番号１１）、
   ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＮＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号１２）、
   ＫＰＲＲＰＹＡＶＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＳＩＬＮ（配列番号１３）、
   ＫＰＲＲＰＹＴＶＮＣＴＳＬＲＫＱＩＡＶＫＫＹＬＭＬＩＬＮ（配列番号１４）、
   ＫＰＲＲＰＹＴＳＤＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号１５）、
   ＫＰＲＲＰＹＴＳＤＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＬＩＬＮ（配列番号１６）又はその断片を含む、請求項１又は２に記載のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト。
4. 前記ペプチド内のアミノ、カルボキシル、ヒドロキシル、又はチオール基が、置換されている、請求項１～３のいずれか一項に記載のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト。
5. 前記ペプチドが、ナノ粒子にコンジュゲートされている、かつ／又はナノ粒子内にカプセル化されている、請求項１～４のいずれか一項に記載のＶＩＰ－Ｒアンタゴニスト。
6. 請求項１～５のいずれか一項に記載の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニストと、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
7. カプセル剤、錠剤、ピル剤、散剤、又は顆粒剤の形態である、請求項６に記載の薬学的組成物。
8. 滅菌されたｐＨ緩衝塩水溶液の形態である、請求項６に記載の薬学的組成物。
9. 請求項１～５のいずれか一項に記載の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニストのアミノ酸配列をコードする、核酸。
10. 前記核酸が、プロモーターと作動可能に組み合わせられている、請求項９に記載のアミノ酸配列をコードする核酸。
11. 請求項９又は１０に記載の核酸を含む、発現ベクター。
12. 請求項１１に記載の発現ベクターを含む、細胞。
13. Ｔ細胞の活性化及び／又は増殖をエクスビボで増強する方法であって、１つ以上のＴ細胞を、請求項１～５のいずれか一項に記載の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニスト又は請求項６～８のいずれか一項に記載の薬学的組成物と混合することを含む、方法。
14. 前記１つ以上のＴ細胞を混合することが、抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて行われる、請求項１３に記載の方法。
15. 前記１つ以上のＴ細胞を混合することが、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤と組み合わせて行われる、請求項１３又は１４に記載の方法。
16. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤である、請求項１５に記載の方法。
17. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、アルペリシブ、ウムブラリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ダクトリシブ、レニオリシブ、パルサクリシブ、パクサリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、イナボリシブ、アピトリシブ、ビミラリシブ、エガネリシブ、フィメピノスタット、ゲダトリシブ、リンペルリシブ、ネミラリシブ、ピララリシブ、サモトリシブ、セレタリシブ、セラベリシブ、ソノリシブ、テナリシブ、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、ＡＭＧ３１９、ＡＺＤ８１８６、ＧＳＫ２６３６７７１、ＳＦ１１２６、アカリシブ（ａｃａｌｉｓｉｂ）、オミパリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＣＡＬ２６３、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＰＷＴ３３５９７、ＴＧ１００－１１５、又はＺＳＴＫ４７４を含む、請求項１５又は１６に記載の方法。
18. 前記１つ以上のＴ細胞を混合することが、免疫チェックポイント遮断剤と組み合わせて行われる、請求項１３～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む、請求項１８に記載の方法。
20. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤を含む、請求項１９に記載の方法。
21. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む、請求項２０に記載の方法。
22. 請求項１～５のいずれか一項に記載の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニスト、又は請求項６～８のいずれか一項に記載の薬学的組成物を含む、キット。
23. 抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体を更に含む、請求項２２に記載のキット。
24. ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤を更に含む、請求項２２又は２３に記載のキット。
25. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤である、請求項２４に記載のキット。
26. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、アルペリシブ、ウムブラリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ダクトリシブ、レニオリシブ、パルサクリシブ、パクサリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、イナボリシブ、アピトリシブ、ビミラリシブ、エガネリシブ、フィメピノスタット、ゲダトリシブ、リンペルリシブ、ネミラリシブ、ピララリシブ、サモトリシブ、セレタリシブ、セラベリシブ、ソノリシブ、テナリシブ、ボクスタリシブ、ＡＭＧ３１９、ＡＺＤ８１８６、ＧＳＫ２６３６７７１、ＳＦ１１２６、アカリシブ、オミパリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＣＡＬ２６３、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＰＷＴ３３５９７、ＴＧ１００－１１５、又はＺＳＴＫ４７４を含む、請求項２４又は２５に記載のキット。
27. 免疫チェックポイント遮断剤を更に含む、請求項２０～２６のいずれか一項に記載のキット。
28. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む、請求項２７に記載のキット。
29. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤を含む、請求項２８に記載のキット。
30. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む、請求項２９に記載のキット。
31. １つ以上のＴ細胞と、
    請求項１～５のいずれか一項に記載の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニスト、又は請求項６～８のいずれか一項に記載の薬学的組成物と、を含む、インビトロ細胞培養組成物。
32. 抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体を更に含む、請求項３１に記載のインビトロ細胞培養組成物。
33. ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤を更に含む、請求項３１又は３２に記載のインビトロ細胞培養組成物。
34. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤である、請求項３３に記載のインビトロ細胞培養組成物。
35. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、アルペリシブ、ウムブラリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ダクトリシブ、レニオリシブ、パルサクリシブ、パクサリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、イナボリシブ、アピトリシブ、ビミラリシブ、エガネリシブ、フィメピノスタット、ゲダトリシブ、リンペルリシブ、ネミラリシブ、ピララリシブ、サモトリシブ、セレタリシブ、セラベリシブ、ソノリシブ、テナリシブ、ボクスタリシブ、ＡＭＧ３１９、ＡＺＤ８１８６、ＧＳＫ２６３６７７１、ＳＦ１１２６、アカリシブ、オミパリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＣＡＬ２６３、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＰＷＴ３３５９７、ＴＧ１００－１１５、又はＺＳＴＫ４７４を含む、請求項３３又は３４に記載のインビトロ細胞培養組成物。
36. 免疫チェックポイント遮断剤を更に含む、請求項３１～３５のいずれか一項に記載のインビトロ細胞培養組成物。
37. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む、請求項３６に記載のインビトロ細胞培養組成物。
38. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤を含む、請求項３６又は３７に記載のインビトロ細胞培養組成物。
39. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む、請求項３８に記載のインビトロ細胞培養組成物。
40. 微生物感染症の治療を必要とする対象におけるそれを行う方法であって、微生物に感染したか、又は微生物感染症の危険性がある前記対象に、治療有効量の請求項１～５のいずれか一項に記載の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニスト又は請求項６～８のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
41. 前記微生物感染症が、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、及び／又は寄生虫感染症である、請求項４０に記載の方法。
42. 治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項４０又は４１に記載の方法。
43. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤である、請求項４２に記載の方法。
44. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、アルペリシブ、ウムブラリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ダクトリシブ、レニオリシブ、パルサクリシブ、パクサリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、イナボリシブ、アピトリシブ、ビミラリシブ、エガネリシブ、フィメピノスタット、ゲダトリシブ、リンペルリシブ、ネミラリシブ、ピララリシブ、サモトリシブ、セレタリシブ、セラベリシブ、ソノリシブ、テナリシブ、ボクスタリシブ、ＡＭＧ３１９、ＡＺＤ８１８６、ＧＳＫ２６３６７７１、ＳＦ１１２６、アカリシブ、オミパリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＣＡＬ２６３、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＰＷＴ３３５９７、ＴＧ１００－１１５、又はＺＳＴＫ４７４を含む、請求項４２又は４３に記載の方法。
45. 治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項４０～４４のいずれか一項に記載の方法。
46. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む、請求項４５に記載の方法。
47. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤を含む、請求項４５又は４６に記載の方法。
48. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む、請求項４７に記載の方法。
49. がん及び／又は転移の治療を必要とする対象におけるそれを行う方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～５のいずれか一項に記載の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニスト又は請求項６～８のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
50. 前記がんが、膵臓がん、結腸がん、白血病、肝臓がん、肺がん、又は黒色腫を含む、請求項４９に記載の方法。
51. 治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項４９又は５０に記載の方法。
52. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤である、請求項５１に記載の方法。
53. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、アルペリシブ、ウムブラリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ダクトリシブ、レニオリシブ、パルサクリシブ、パクサリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、イナボリシブ、アピトリシブ、ビミラリシブ、エガネリシブ、フィメピノスタット、ゲダトリシブ、リンペルリシブ、ネミラリシブ、ピララリシブ、サモトリシブ、セレタリシブ、セラベリシブ、ソノリシブ、テナリシブ、ボクスタリシブ、ＡＭＧ３１９、ＡＺＤ８１８６、ＧＳＫ２６３６７７１、ＳＦ１１２６、アカリシブ、オミパリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＣＡＬ２６３、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＰＷＴ３３５９７、ＴＧ１００－１１５、又はＺＳＴＫ４７４を含む、請求項５１又は５２に記載の方法。
54. 治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項４９～５３のいずれか一項に記載の方法。
55. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む、請求項５４に記載の方法。
56. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤を含む、請求項５４又は５５に記載の方法。
57. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む、請求項５６に記載の方法。
58. 対象におけるがん及び／又は転移に対する免疫応答を増強する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～５のいずれか一項に記載の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニスト又は請求項６～８のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
59. 前記がんが、膵臓がん、結腸がん、白血病、肝臓がん、肺がん、又は黒色腫を含む、請求項５８に記載の方法。
60. 治療有効量のホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項５８又は５９に記載の方法。
61. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤である、請求項６０に記載の方法。
62. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、イデラリシブ、コパンリシブ、デュベリシブ、アルペリシブ、ウムブラリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ダクトリシブ、レニオリシブ、パルサクリシブ、パクサリシブ、タセリシブ、ザンデリシブ、イナボリシブ、アピトリシブ、ビミラリシブ、エガネリシブ、フィメピノスタット、ゲダトリシブ、リンペルリシブ、ネミラリシブ、ピララリシブ、サモトリシブ、セレタリシブ、セラベリシブ、ソノリシブ、テナリシブ、ボクスタリシブ、ＡＭＧ３１９、ＡＺＤ８１８６、ＧＳＫ２６３６７７１、ＳＦ１１２６、アカリシブ、オミパリシブ、ＡＺＤ８８３５、ＣＡＬ２６３、ＧＳＫ１０５９６１５、ＭＥＮ１６１１、ＰＷＴ３３５９７、ＴＧ１００－１１５、又はＺＳＴＫ４７４を含む、請求項６０又は６１に記載の方法。
63. 治療有効量の免疫チェックポイント遮断剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項５８～６２のいずれか一項に記載の方法。
64. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、抗ＴＩＭ３阻害剤、抗ＬＡＧ３阻害剤、抗ＣＤ４７阻害剤、イミキモド、ポリイノシン－ポリシチジル酸－ポリ－１－リジンカルボキシメチルセルロース（ｐｏｌｙ－ＩＣＬＣ）、ペキシダルチニブ、抗ＴＩＧＩＴ阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ３阻害剤、抗Ｂ７－Ｈ４阻害剤、抗Ａ２ａＲ阻害剤、抗ＣＤ７３阻害剤、抗ＮＫＧ２Ａ阻害剤、抗ＰＶＲＩＧ／ＰＶＲＬ２阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ５阻害剤、抗ＣＥＡＣＡＭ６阻害剤、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２阻害剤、抗白血病阻害因子（ＬＩＦ）阻害剤、抗ＣＤ４７／ＳＩＲＰα阻害剤、抗コロニー刺激因子（ＣＳＦ）－１阻害剤、抗ＩＬ－１阻害剤、抗ＩＬ－１Ｒ３阻害剤、抗ＩＬ－８阻害剤、抗セマフォリン４Ｄ（Ｓｅｍａ４Ｄ）阻害剤、アンジオポエチン（Ａｎｇ）－２阻害剤、ＣＬＥＶＥＲ－１阻害剤、Ａｘｌ標的エナポタマブベドチン（ＥｎａＶ）、又は抗ホスファチジルセリン阻害剤を含む、請求項６３に記載の方法。
65. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、又はＣＴＬＡ－４阻害剤を含む、請求項６３又は６４に記載の方法。
66. 前記免疫チェックポイント遮断剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、又はイピリムマブを含む、請求項６５に記載の方法。
67. がん又は慢性感染症の治療を必要とする対象におけるそれを行う方法であって、
    １つ以上のＴ細胞を提供することと、
    前記１つ以上のＴ細胞を、請求項１～５のいずれか一項に記載の血管作動性腸ペプチド受容体（ＶＩＰ－Ｒ）アンタゴニスト又は請求項６～８のいずれか一項に記載の薬学的組成物と混合し、それによって前記１つ以上のＴ細胞を増殖させることと、
    治療有効量の前記増殖したＴ細胞を前記対象に投与することと、を含む、方法。
68. 前記１つ以上のＴ細胞を混合することが、抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて行われる、請求項６７に記載の方法。
69. 前記１つ以上のＴ細胞を混合することが、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤と組み合わせて行われる、請求項６７又は６８に記載の方法。
70. 前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、ＰＩ３Ｋα阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、又はＰＩ３Ｋγ阻害剤である、請求項６９に記載の方法。
71. 前記１つ以上のＴ細胞を混合することが、免疫チェックポイント遮断剤と組み合わせて行われる、請求項６７～７０のいずれか一項に記載の方法。
72. 前記１つ以上のＴ細胞が、前記対象に由来する、請求項６７～７１のいずれか一項に記載の方法。
73. 前記１つ以上のＴ細胞が、キメラ抗原受容体を含む、請求項６７～７２のいずれか一項に記載の方法。
74. 前記増殖したＴ細胞が、増殖前のレベルと比較して増加したレベルのＣＤ２８及び／又はＣＤ２７を有する、請求項６７～７３のいずれか一項に記載の方法。
75. 増殖したＴ細胞が、増殖前のレベルと比較して低下したレベルのＰＤ－１、ＴＩＭ－３、及び／又はＬａｇ３を有する、請求項６７～７４のいずれか一項に記載の方法。
76. ＰＩ３キナーゼ阻害剤又はＶＩＰ受容体アンタゴニスト、若しくは免疫チェックポイント遮断剤、又はそれらの組み合わせを、前記増殖したＴ細胞を投与する前、投与中、又は投与後に、前記対象に投与することを更に含む、請求項６７～７５のいずれか一項に記載の方法。